Enzimas Inhibicin y mecanismos de regulacin

Son biomolculas, la gran mayora son protenas y estn compuestas de aa.existen un pequeo grupo de enzimas que estn compuestas por ARN
Funcin: acelerar la velocidad de una reaccin especfica. Pero no modifica el
equilibrio qumico. Se define como un catalizador .
Especifica: son capaces de discriminar molculas para interaccionar con ellas.
Efectividad: con una pequea cantidad de enzima hay efecto cataltico.
Cambia solo durante el proceso quimico
Temperaturas y ph extremos las denaturan, cuando se denaturan no funcionan, no
cumple con su actividad cataltica. Afectamos la funcin cataltica.
Las enzimas son reguladas.
Actividad enzimtica: parmetro medible
Rapidez con la cual la enzima transforma sustrato en un determinado tiempo.
Unidad internacional o la actividad especifica.
UI: cantidad de enzima que cataliza la conversin
mientras mayo el valor de UI mayor es la velocidad que alcanza la enzima.
AC: un micromol de sustrato transf a producto x minuto x miligramo de enzima.
La cantidad de enzima que se utiliza para el proceso.

Reaccion no catalizada: sin enzima.

Al inicio de la reaccin tengo 2 reactantes, A y B, se relacionan entre si.
Lo mas complejo es formar el intermediario. Necesito una determinada cantidad
de energa.
Siempre se debe formar el intermediario que es?? Es algo que no es producto ni
reactante.
Para formarlo estos reactantes interacciones hasta que se forme el intermediario y
ese es el pick. Para que una reaccin suceda necesito formar este intermediario y
necesito siempre energa. Energa necesaria para formar un intermediario de
reaccin. Se denomina energa de activacin. Luz si lees esto es pq estas
estudiando, te felicito sigue asi.
Si tengo la energa necesaria lo formare. Si no alcanza se devuelve y se forma
reactante.

Reaccion catalizada: con enzima

Sustratos tienen que formar el estado de transicin y se transforman en productos.
Al agregar la enzima disminuye la energa de activacin para crear los productos.
La enzima toma el sustrato, lo transforma y lo libera como producto.
Actividad enzimtica tiene 4 etapas:
1)formacin del complejo enzima-sustrato
2)encaje inducido
3)Catalisis (reaccin qumica)
4)Liberacion de productos
La enzima en estado libre tiene una estructura tridimensional (nativa) cuando
comienza el proceso, la enzima sufre cambios estructurales. Pero cuando libera el
producto vuelve a su estado original. (manera estructural)
1) Formacin del complejo enzima-sustrato:
En el sitio activo de la estructura proteica (globular) se va a unir el sustrato
y posterior mente va a transformarse en producto. La unin entre el sustrato
y el sitio activo de la enzima es muy especifica, cada uno de los
componentes estn echos el uno para el otro, tienen una complementaridad
que se da de manera geomtrica y otra por cargas, por ende la enzima no
una cualquier molecula, solo la que es complementaria por geometra o por
carga (los R). Si esto no sucede, se separan y no hay proceso.
2) Proceso de Unin: existen dos tipos: encaje inducido y llave cerradura.
llave cerradura: mas antiguo. La enzima y el sustrato tienen una estructura
rigida que tienen una forma particular que calzan de manera perfecta entre
ellos; si el calze es perfecto comienza el proceso de catalizis. Si no, no hay
catlisis.
Encaje inducido: ambas estrcuturas, enzima y sustrato al unirse comienzan
ambos a sufrir cambios conformacionales (estructurales), y se comienzan a
acomodaar minimizando la energa. ESTE SE OCUPA MAS.
3) Catalisis: reaccin qumica.
Las enzimas hacen dos cosas, cortar y pegar. Rompen enlaces, forman
productos. En el sitio activo esta compuestos por 2 tipos de residuos;
escenciales y no escenciales. No escenciales los que puedo modificar por
otros, al cambialos no afecta en nada a la estructura y a la funcin.
Escenciales: aquellos que cuando cambio se genera un problema, en la

estructura del sitio. Existen tres:

Estructurales: el que da la forma al sitio activo
Union: une sustrato con el sitio
Cataliticos: realiza la funcin de la enzima. En el R actividad qumica.los
que aparecen en la diapo.
Existen 3 tipos de catlisis:
Catalisis acido base, covalente y covalente ion-metal
Catalisis acido base: reaccin con trasnferencia de electrones. Alguien se
comporta como acido, y otro como base. Romper o formar
Catelisis covalente: cuando rompo o formo un enlace covalente.Depende
de electrones.
Catalisis covalente ion-metal; deriba de la anterior, pero para que el proceso
funcione necesita un metal como parte del proceso.
4) Liberacion de productos
Se forma el producto (aun esta en el sitio activo), y debo liberarlo y tengo
que romper esas uniones.
La enzima una vez que forma el producto, rompe los enlaces para liberarlo.
La enzima al liberarlo vuelve a su estado original y es capaz de volver a unir
sustrato y el proceso se vuelve un ciclo.
Por eso las enzimas son catalizadores cclicos, pero con el tiempo se
desnaturan, no tienen actividad cataltica infinita.
Clasificacion internacional de las enzimas
Son 6 grandes grupos:
1)Oxido reductasas: aquellas que transfieren electrones o protones por ende son
enzimas que estn en reacciones redox.
2)Transferasas; transfieren grupos entre molculas diferentes
3)Hidrolasas: realizas hidrolisis, ruptura de un enlace utilizando agua. Cuando
rompo el enlace a una molecula le agrego H y a la otra OH.
4)Liasas: adicionan o remueven grupos donde hay dobles enlaces.
5)Isomerasas: generan ismeros, transfieren grupos dentro de una misma

molecula.
6)Ligasas: forman enlaces pero la formacin de enlaces normalmente es con
gasto de energa, preferentemente trifosforilado ATP, GTP UTP. Si lo formo gasto
energa y si lo rompo formo energa.

Las enzimas pueden generar actividad en estado nativo y en algunos casos para
realizar esta actividad requiere de la unin de otra molecula que participa en el
proceso. Cofactor y Coenzima.
Cofactor: molecula o atomo de origen inorgnico
Coenzima: molecula o atomo de origen organico.
Apoenzima: cuando la enzima no tiene ni el cofactor ni la coenzima. (pero los
necesita, solo que no esta unido a ella) No es activa.
Holoenzima: cuando la enzima esta unida a su cofactor o coenzima o ambos. Es
activa, recin puede unir sustrato y puede haber actividad cataltica.
Grupo prosttico: el cofactor o la coenzima, estn unidos a los dos se les llama
de manera genrica. Si esta libre se llama cofactor o coenzima.
Muchas vitaminas son cofactores o precursores de cofactores.

Isoenzimas
Grupo partculas
Enzimas con la misma actividad cataltica pero con diferente estructura qumica o
composicin aminocidica.
En tres condiciones:
Tipo de Tejido: para hgado, corazn y musculo. Lactato deshidrogenasa.
Compartimiento subcelular: forma citoplasmtica de la enzima y mitocondrial.
Grado de desarrollo del individuo: algunas enzimas de glicolisis del feto no son las
mismas para un adulto.
La lactato deshidrogenasa tiene distintas isoformas para distintas partes del
cuerpo, existen 5.

La activdad enzimtica se ve afectada por la estructura de la enzima, si la enzima

mantiene su estrcutra nativa es funcional, pero si la pierde para a ser una enzima
desnaturada y pasa a ser una enzima con una menos actividad cataltica.
Factores:
Temperatura
Presion
PH
Fuerza ionica
Sustratos cuando se une la actividad aumenta
Cofactores, la actividad aumenta.
Inhibidores, la enzima se bloquea y no trabaja.
Por ejemplo
Ph: la molecula se ioniza, toma carga. Se generan cambios de carga, pueden ser
favorables o desfavorables. A medida que el pH aumenta, la actividad aumenta
hasta que llega a un mximo de actividad. Ph optimo, donde la actividad
enzimtica es la mxima pq la enzima se encuentra total mente estabilizada, pero
si sigo aumentando el ph la actividad empieza a disminuir pq la enzima se va
desnaturando.
Temperatura: si la enzima esta estabilizada mayor actividad y si esta desnaturada
no hay actividad. Afecta las uniones no covalentes, cuando agrego calor las
molculas comienzan a moverse por lo cual las interacciones comienzan a
romperse. La regla del Q10 por cada 10 grados Celsius que la temperatura
aumente la velocidad de accin se duplica. Esto hasta que las enzimas se
desnaturan. Tambien tienen temperatura optima.

12/04/16
Cinetica enzimtica
Estudia los factores que afectan la velocidad de las reacciones enzimticas.
Los factores mas importantes son:
-Concentracion de enzima
-Concentracion de ligandos (sustratos, productos)
-PH
-Fuerza ionica
-Temperatura

Enzimas isosterica o micaelianas: (un sitio activo a la vez) cuando la

concentracin de sustrato es baja las enzimas unen el sustrato y aumentan su
velocidad de reaccin.
Saturacion: todos los sitios activos estn ocupados por sustratos. El valor se
mantiene alto y constante.
-A muy bajas concentraciones de sustrato la velocidad aumenta casi linealmente
en funcin de la concentracin de sustrato.
-A concentracin de sustrato mayores, el aumento de la velocidad disminuye y
tiende a alcanzar un valor limite llamado Vmax.
Presentan dos valores que son constantes: Km (constante de micaelis y menten)
y Vmax (velocidad mxima). Constantes cineticas
La ecuacin de micaelis y menten
Vmax: mxima velocidad tericamente alcanzable por la enzima. Cuando la
concentracin de sustrato es muy alta, o sea cuando esta saturada.
Km: concentracin de sustrato en la cual ya he alcanzado la mitad de Vmax.

Las enzimas presentan 3 propiedades que se pueden cuantificar, medir:

Afinidad grado de la enzima para unirse rpidamente o no a un sustrato.
A menos Km, mayor afinidad. PQ? El Km representa el Vmax/2 que representa
un 50% de la saturacin, por ende, entre mas pequeo el Km mas rpido la
enzima se satura, que una muy rpido sustrato comparado con otra.
Esto nos permite comparar diferentes sustratos para una misma enzima.
Eficiencia Constante cataltica (Kcat). Cantidad de sustrato que se transforma a
producto en una determinada unidad de tiempo.
A mayor valor de Kcat, mayor es la eficiencia. Kcat= Vmax/[E] total
La Kcat siempre tiene unidad de tiempo a la menos 1, segundos, minutos u horas.
Especificidad Caracteristica que tiene la enzima para reconocer su sustrato,
elegir el sustrato.
Kobs=Kcat/Km
A mayor Kobs, mayor especifidad.

Velocidad de una reaccin

Disminuye con el tiempo, depende de tres factores
1)Disminuye la concentracin de sustrato, ya que este pasa a producto, Hay
menos sustrato para saturar.
2)La enzima se inhibe por producto. Cuando el producto se comienza a acumular
se puede unir a la enzima e inhibirla. (inhibicin por producto)
3)A medida que el tiempo transcurre la enzima se empieza a desnaturar.

Matematicamente se puede calcular la Km y Vmax, esto nos sirve para determinar

la afinidad, especificidad y eficiencia de una enzima. La Km y Vmax se puede
conocer mediante una transformacin lineal de Lineweaver-Burk, los datos se
transformar por un mtodo de los dobles reciprocos; los datos se transformar en
1/el valor.
De este grafico lineal, siempre sabre los valores de la pendiente (m) y del
intercepto (b)

Reacciones Bisustrato
Son enzimas que pueden unir ms de un sustrato a la vez. Hay de dos tipos:
-Secuenciales o desplazamiento simple:
Hay formacin de complejo ternario (gran molcula con 3 componentes), la
enzima puede unir el sustrato 1 o el sustrato 2, pero siempre va a formar el
complejo enzima + sustrato 1+ sustrato2.
-Ping-Pong o desplazamiento doble:
No hay formacin de complejo ternario.
La enzima une el sustrato 1, lo transforma a producto 1 y lo libera, luego une el
sustrato 2, lo transforma a producto 2 y lo libera.

Inhibicin enzimtica
Las enzimas pueden ver afectados sus parmetros cinticos (Km y Vmax), cuando
pasa esto y la velocidad de la reaccin disminuye, se llama inhibicin.

Inhibicin: La velocidad o actividad cataltica se ve afectada de manera negativa.

-El inhibidor se une a la enzima.
Existen dos tipos de inhibidores:
-Reversibles unin dbil y el inhibidor en algunos casos se puede eliminar.
-Irreversibles se une de manera covalente a la enzima y la inhibe
permanentemente
Ejemplos de inhibidores irreversibles:
-Venenos metablicos.
Difp se une a la acetilcolinesterasa, esta es una enzima que media respuestas de
segundo mensajero para impulsos nerviosos, esta se inhibe, no hay impulsos
nerviosos y la persona termina con un paro cardio respiratorio.
Aspirina es un inhibidor a la ciclooxigenasa (genera respuesta inflamatoria),
entonces la aspirina evita la inflamacin.
Penicilina: es un antibitico pero que actua sobre enzimas bacteriana e inhibe a
las transpeptidasas. Las transpeptidasas ayudan a crear la pared celular de las
bacterias. Por ende si inhibo las transpeptidasas la pared celular de estas
bacterias forman agujeros y la celula se lisa, muere y la carga bacteriana
disminuye.

Inhibicion reversible:
Se une de manera NO covalente a la enzima.
En presencia de inhibidores de este tipo, los parmetros cinticos varian.
Cuando se dice que un parmetro cintico esta en precensia de inhibidor se le
coloca la presencia de AP (aparente). Entonces se compara el valor del parmetro
cintico sin AP y con AP, asi sabremos si el valor aumenta o disminuye.
Competitiva Km aumenta
Acompetitiva Km disminuye Vmax disminuye
Mixta Km aumenta Vmax disminuye
Competitiva:
El inhibidor se une al sitio activo donde se debera unir el sustrato, por lo que
existe una competencia para unirse al mismo sitio activo.
Es excluyente, o se uno el sustrato o el inhibidor.
Se ve afectado Km pq representa la Afinidad, por ende si el inhibidor se une al sitio
activo no lo puede hacer el sustrato, entonces la Km no se va a hacer mas chica,
se va a hacer mas grande pq ahora los sitios de unin no estn llenos con

sustrato, los sitios de unin estn llenos con inhibidores por ende la afinidad
disminuye.
La Vmax no se ve afectada pq formo la misma cantidad de productos, quizs en
un tiempo mayor, pero formo la misma cantidad de producto.
-Grafico: alfa 1 es sin inhibidor.
Todas cortan en el eje y en el mismo valor (mismo Vmax), pero son diferentes las
pendientes (Km).
Acompetitiva:
No hay competencia.
Los inhibidores se unen a un sitio diferente al sitio activo. Pero No se une a la
enzima sola, solo se une al complejo enzima sustrato. Espera que el sustrato se
una a la enzima y luego el inhibidor se une al complejo. Forma un complejo
ternario.
Km disminuye pq la enzima al unir el inhibidor se hace ms afin, lo une ms
fuertemente, pq no va a dejar que ese sustrato se libere.
Vmax disminuye pq el sustrato no se transforma a producto (eficiencia)
-Grafico: todas lneas paralelas, Km y Vmax diferentes.
Mixto:
Tengo el inhibidor competitivo y acompetitivo juntos.
El inhibidor se une a un sitio diferente al sitio activo.
El inhibidor Se puede unir a la enzima libre o al complejo enzima sustrato.
Se puede formar el complejo ternario.
Km aumenta se hace menos afin, disminuye la afinidad. Competitivo
Vmax disminuye disminuye la eficiencia cataltica, Acompetitivo.
-Grafico: Interceptos distintos, pendientes distintos, pero se forma un intercepto
fuera de la y.
Enzimas Alostricas
Tengo dos sitios de unin. Un sitio de unin para el sustrato (cataltico), y otro sitio
de unin donde se va unir un modulador (alosterico). El modulador puede ser
positivo (activa) o negativo (inhibe a la enzima).
Siempre la unin del regulador o modulador cambia la estructura 3D de la enzima,
puede ser favorable o desfavorable (positivo/negativo).
-Las enzimas alostericas tbn tienen un grafico de velocidad; Cinetica sigmoidal.
dos parmetros cinticos, Vmax y K0,5. (misma definicin de las micaelianas)
Dos tipos de enzimas alostericas:

-Homotrpicas: sustrato alostrico y cataltico misma molcula. El sustrato que se

va a unir al sitio cataltico y el sustrato que se va a inhibir al sitio alostrico son la
misma molcula.
-Dos comportamientos:
Cooperativismo positivo el primer sustrato que llega a la enzima modula de
manera positiva, se une genera un cambio conformacional favorable y la enzima
posteriormente une ms rpido y mejor a los otros sustratos. Ayuda a los otros
sustratos a que entren mejor.
Cooperativismo negativo el primer sustrato que llega genera un cambio
conformacional desfavorable pq va a generar un cambio en la estructura que va a
provocar que les sea ms difcil a los siguientes sustratos encontrar el sitio activo.
-Heterotrpicas: el modulador y el sustrato cataltico son molculas distintas.
Dos tipos:
-Cuando el modulador afecta la K0,5 pero no Vmax mas comn en enzimas
alostericas.
Si la molcula que se une hace que la K0,5 disminuya, se llama activador pq
provoca que la afinidad sea ms grande y la velocidad de reaccin sea mayor.
Si la K0,5 aumenta la afinidad disminuye (malo), se llama modulador inhibidor.
Vmax se mantiene.
-Cuando el modulador afecta Vmax pero no K0,5

Regulacin enzimtica
Las enzimas llevan a cabo una serie de reacciones secuenciales rutas
metablicas.
Mecanismos de regulacin
1) Control a nivel de sustrato: supone que el propio producto de la reaccin inhibe
a la enzima. Una sola reaccin. Pq inhibo? Para evitar gastar todo el sustrato y
evitar acumular demasiado producto.
2) Inhibicin reversible por producto (retroalimentacin negativa): cuando el
producto de otra reaccin inhibe una enzima previa a la reaccin.

Evitar agotar todo el sustrato, evitar acumular el producto, y evitar acumulacin de

intermediarios.
3) Activacin/inhibicin alostrica: con enzimas alostricas. Explicado
anteriormente.
4) Modificacin covalente: Adicin o remocin de un grupo que est unido
covalentemente a la enzima, este grupo puede simplemente activar o inhibir a la
enzima.
La unin puede activar o desactivar, remocin puede activar o desactivar,
dependiendo de la molcula.
-Reversible: el grupo se une por un rato, lo separo, lo vuelvo a unir, lo separo. Lo
hace por un corto periodo de tiempo y genera un ciclo de activacin/inhibicin
Ejemplo: fosforilacin
-Irreversible: cuando la remocin o adicin genera una activacin o inhibicin
permanente. Generalmente tienen que ver con cortes o rupturas de enlaces.
Ejemplo: Proteasas pancreticas; se secretan como simogenos y son inactivas,
pero cuando llega al estmago es tomado por otras enzimas y se rompe y se
obtienen 2 porciones mayor y menor, la ms grande es la enzima activa y la
pequea no sirve y se bota, no se pueden volver a unir.

HASTA AQU LA PRIMERA PRUEBA