[LABORATORIO No 7 AISLAMIENTO DE

MICROORGANISMOS CON POTENCIAL

BIOFERTILIZANTE]

LABORATORIO No 7 AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS CON

POTENCIAL BIOFERTILIZANTE
1

Porras Mailyn, 2Jaimes Paula, 3Diaz Mayar.

1610815, 21610811,

RESUMEN
En esta prctica de laboratorio se realiz el aislamiento de microorganismo con potencial
biofertilizante utilizando medios de cultivo especficos para cada grupo microbiano. Se
determin la presencia de microorganismo en suelo de maz y la planta de cimarrn. Del
suelo se tomaron 10g del suelo rizosfrico y se realiz dilucin hasta
diluciones

107

106

107 , con las

se sembraron en cajas de Petri que contenan agar Ashby,

SRSM y King B. previamente se realiz el protocolo de desinfeccin de races del cimarrn

se cortaron de una medida de 1 cm aproximadamente y se hizo siembre directa en los viales
que contenan medios semislidos de JNFb, JMV, NFb y LGI-P. Luego con los tallos y
hojas del cimarrn de igual manera fueron desinfectados, y se maceraron en un mortero con
9ml de solucin salina a partir de esto se tom una asada y se inoculo en los viales con los
medios semislidos de NFb, JNFb y LGI-P.
Palabras clave: Biofertilizante, Aislamiento, suelo rizosfrico.

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INTRODUCCION
Durante los ltimos aos la agricultura se ha caracterizado por el uso intensivo de
fertilizantes qumicos y plaguicidas para mantener altas producciones, sin tener en cuenta
que se ocasiona destruccin de los agroecosistemas, evidenciado principalmente en la
prdida de productividad de los suelos, alteracin de la calidad de los productos agrcolas,
contaminacin del ambiente y problemas de salud en la poblacin (Snchez, J. (Ed.).
(2007).
Este impacto negativo gener el desarrollo de tecnologas que involucran microorganismos
benficos y efectivos, los cuales tiene la capacidad de favorecer procesos esenciales para la
nutricin de las plantas (Vessey, 2003).
A pesar de que en la actualidad se ofrecen productos biolgicos que han mostrado
beneficios en los rendimientos de produccin, es necesario realizar estudios dirigidos hacia
el desarrollo de nuevas formulaciones que permitan que los productos tengan una mejor
estabilidad en almacenamiento y mantengan la actividad al ser aplicados en campo
(Echeverri y Castilla, 2008; Moreno et l., 2004).
La produccin de biofertilizantes requiere la obtencin de compuestos que proporcionen
nutrientes para las plantas, tales como nitrgeno, fsforo y potasio entre otros. (Sebiot y
Eumedia (Eds.), 2000).El objetivo de los biofertilizante es complementar y, en su caso,
sustituir a los abonos qumicos convencionales de forma que se pueda reducir su empleo,
con el consiguiente beneficio econmico y medioambiental. En este sentido, las bacterias
empleadas en formulaciones biofertilizantes favorecen que las plantas absorban por s
mismas una mayor cantidad de nutrientes que si bien se encuentran de forma natural en la
tierra, en ocasiones no pueden ser asimilados por las plantas al estar en formas insolubles.
Por contra, los abonos qumicos convencionales aportan al suelo elementos qumicos que,
si bien sirven como fertilizante, pueden acabar contaminando los acuferos si no son
aportados en las dosis y momentos oportunos. Por otra parte, las bacterias que contienen las

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formulaciones biofertilizantes compiten con otros microorganismos del suelo, pudiendo
hacer ms difcil la aparicin de plagas para los cultivos, minimizando as el uso de
pesticidas. (Rodas, 2006)
La produccin de los cultivos y el crecimiento de las plantas estn ntimamente
relacionados en muchos aspectos con las actividades microbianas. Considerando estas
asociaciones se han diseado estrategias para identificar y comprender los microorganismos
y mecanismos involucrados en cultivos de inters agrcola. La microbiologa ha jugado un
papel importante en la mejora de la agricultura. Dentro de la gran diversidad y complejidad
de los microorganismos microbianos del suelo, existen mltiples campos de investigacin,
en especial en la zona rizosfrica y los microorganismos que en ella interaccionan,
produciendo consecuencias a favor o en contra de los cultivos. Las investigaciones en este
campo pretenden mejorar el desarrollo y crecimiento vegetal y por ende incrementar la
productividad agrcola a partir de aquellos microorganismos que presentan los mecanismos
y capacidades requeridas para lograrlo (Rodas, 2006).
MARTERIALES

Agar Ashby.
Agar SMRS.
Viales de medio semislido JNFb, JMV, NFb y LGI-P.
Micropipeta y puntas estriles.
Rastrillos.
Material para diluciones seriadas.
Material para desinfeccin de races y tallos.
Incubadoras.
Muestra de suelo de maz y planta de cimarrn.

METODOLOGIA

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Diluciones seriadas en suelo rizosfrico.

Siembra directa de races.

Macerado de hojas y tallos.

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RESULTADOS
Diluciones seriadas en suelo rizosfrico.
Agar Ashby

unidas de formacin de colonias en el

7
duplicados de 10 .

107 UFC/ml.

0 unidas de formacin de colonias en el duplicados de 10

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0

106 UFC/ml.
Agar King B

Caja 1: 7 colonias
Caja 2: 17 colonias
6
12x 10 UFC/ml

Agar SRSM

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Caja 1: 6colonia
Caja 2: 2 colonias
7
4x 10 UFC/ml

Caja 1: 2 colonias
Caja 2: 2 colonias
6

2x 10

UFC/ml

Siembra directa de races.

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En los viales de los diferentes medios se observo en todos en la siembra directa de races
formacin de biopelcula y turbidez es decir un cambio de color en los viales JNFb, LGI-p,
NFb y JMV, esto quiere decir que hay presencia de microorganismos diazotrficos en la
raz de la planta tomada en este caso cimarrn.

Macerado de hojas y tallos.

Al igual que en las races, en el macerado de tallo y hojas hubo formacin de biopelcula y
turbidez es decir un cambio de color en los viales LGI-P, JNFb y NFb, esto quiere decir que
hay presencia de microorganismos diazotrficos en la raz de la planta tomada en este caso
cimarrn.
CONCLUSIONES
Pseudomonas fluorescens, Bacillus circulans y Burkholderia cepacia son bacterias capaces
de solubilizar fosfato clcico. Estas bacterias han sido descritas por varios autores con alta
capacidad solubilizadora de fosfatos (Curl y Truelove, 1986; Kucey et al., 1989; Kloepper y
Beauchamp, 1992) y de eficiente interaccin con las MA (Andrade, 1999; Toro et al.,
1997). Su presencia en los suelos estudiados indicara la idoneidad de su utilizacin como
biofertilizantes en los agroecosistemas tropicales de suelos.
Una estrategia para la sostenibilidad de los cultivos es el uso de diazotrficos ya que estos
inoculantes pueden complementar la fertilizacin de N, aumentar la asimilacin de N,
promover el crecimiento y, por lo tanto, disminuir los costos de produccin y la

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contaminacin asociada (Ladha y Reddy, 2003; Choudhury y Kennedy, 2004; Seck et al.,
2012). Encontrados en los viales tanto de las races como del macerado de tallo y hojas,
donde hubo tanto formacin de pelcula y variacin de color la cual nos identificaba que
haba microorganismo diazotrficos en el cimarrn, igualmente se encontraban
endgenamente

de la planta entre posibles microorganismo estaba A.brasilense,

A.irakense, Bulkholderia sp, Gluconacetobacter sp.

DISCUSIONES
Los resultados obtenidos en las diluciones seriadas de suelo rizosfrico en medio Agar
Ashby nos demostraron que no hay presencia de las bacterias del genero Azotobacter sp.
Que poseen un complejo enzimtico capaz de reducir el nitrgeno del aire a amonio y que
puede ser asimilado por las plantas, (Bhattacharya y Chaudhuri 1993).
El fsforo despus del nitrgeno, es el nutriente inorgnico ms requerido por plantas y
microorganismos y adems, en el suelo es el factor limitante del desarrollo vegetal a pesar
de ser abundante tanto en formas inorgnicas como orgnicas (Alexander 1980). En este
caso al observas que en suelo que se tena que era de maz hubo colonias esto quiere decir
que haba solubilizadores de potasio y probablemente la planta est en buenas condiciones
a dems que pueden obtener ese fosforo. En este caso aparente hubo crecimiento mnimo
en las dos diluciones sembradas la cual Por lo general, bajos contenidos de fsforo en el
suelo favorecen el establecimiento de la simbiosis micorrzica incrementando la
colonizacin de las races de las plantas y favoreciendo la reproduccin de las esporas; por
el contrario, un alto contenido de fsforo en el suelo incide en la disminucin de la
simbiosis en las races de las plantas (Bowen y Rovira, 1999; Barea, 2001).
En el caso del agar Ashby sembrado no hubo crecimiento de microorganismo que fueran
diazotrficos en ninguna de las dos diluciones sembradas probablemente el suelo no
contenan nitrgeno esta muestra provena de suelo de maz.
En estos resultados hubo cierto crecimiento en el agar King B la cual nos puede indicar la
presencia de Pseudomonas sp. Y Bulkholderia sp, esto podra indicar que relacionados con
la produccin de metabolitos de naturaleza antibitica. De hecho, Velzquez et al.

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Demostraron que la cepa de Burkholderia sp, puede producir alcaloides quinolisidnicos de
naturaleza antibitica. Tambin se ha sealado la capacidad que tienen las cepas
de Pseudomonas sp de suprimir patgenos presentes en la rizosfera, a travs de la
produccin de 2,4 dimetyl-phloroglucinol y pirrolnitrina. En este caso, tambin podran
haber influido los siderforos, si se tiene en cuenta que el medio de cultivo utilizado para el
desarrollo de los bioensayos posee bajo contenido de hierro, lo que favorece la produccin
de este tipo de metabolito. sealaron que cepas autctonas cubanas pertenecientes a las
especies en estudio al crecer en medios de cultivo con concentraciones limitadas de hierro,
tales como el King B y el Sirope fructosa (Sp.), producan siderforos a partir de las 10
horas de crecimiento de la bacteria.

BIBLIOGRAFIA
Rodas P., A. (2006). La Agricultura y Microorganismos: Una Visin Sustentable para el
Manejo

de

los

Suelos.

Extrado

el

14

de

Septiembre,

2008

http://www.engormix.com/s_articles_view.asp?art=1129&AREA=AGR-417
Sebiot y Eumedia (Eds.) (2000). La Biotecnologa Aplicada a la Agricultura. Madrid:
Grupo Mundi-Prensa.
Snchez, J. (Ed.). (2007). Potencial Biotecnolgico de Microorganismos en Ecosistemas
Naturales y Agroecosistemas. Bogot: Universidad Nacional de Colombia.
Vessey JK. Plant growth promoting rhizobacteria as biofertilizers. Plant Soil. 2003

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alidov S, Mavrodi O, De La Fuente L, Boronin A, Weller D, Thomashow L, Mavrodi D.
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fluorescent Pseudomonas spp. FEMS Microb. Letters. 2005

Baldani, V.L., Baldani, J.I., Dbereiner, J., 2000. Inoculation of rice plants with the
endophytic diazotrophs Herbaspirillum seropedicae and Burkholderia spp. Biology and
Fertility of Soils.
Llunch, C. 1992. Biologa del nitrgeno. Interaccin planta-microorganismo. Ed Madrid:
Rueda.