1.

PRINCIPIOS GENERALES DE LA innata antiviral

RESPUESTA INMUNE
Los virus son parsitos intracelulares obligados y por lo tanto dependen
estrictamente
la maquinaria biosinttica del husped para replicarse y
propagarse. Como un
En consecuencia, la explotacin impulsada virus de las vas metablicas
de la clula husped y
Avances en Inmunologa, Volumen 117
#
2013 Elsevier Inc.
ISSN 0065-2776
Todos los derechos reservados.
http://dx.doi.org/10.1016/B978-0-12-410524-9.00004-9
99
Pgina 2
reprogramacin de procesos celulares a menudo conducen a la muerte
celular. La lucha por la
la supervivencia entre virus y husped es antiguo y, como consecuencia
ambos tienen
desarrollado mltiples estrategias para antagonizan entre s. mientras
que los mamferos
anfitriones desarrollado sofisticados mecanismos de la inmunidad
antiviral, virus
las estrategias adquiridas para evadir la respuesta inmune. Por lo tanto,
es crtico
para el anfitrin para montar una respuesta inmune innata y adaptativa
eficaz
inmediatamente despus de la infeccin con el fin de luchar con xito
contra el patgeno.
La respuesta inmune innata constituye la fase ms temprana de la
acogida de
defensa contra patgenos y estimular y modular el inicio ms tardo
respuesta adaptativa ( Palm & Medzhitov de 2009 ). Opera a travs de
un conjunto de
receptores germinales lnea con codificacin de reconocimiento de
patrones (PRRS) que reconocen
patrones moleculares asociados a patgenos (PAMPs) de virus, bacterias,
hongos,
y protozoos. PAMP se conservan dentro de amplias clases de
patgenos. Ellos
son tpicamente productos de rutas biosintticas que son esenciales
para la superficie
supervivencia del patgeno y por lo tanto carecen de la posibilidad de
evasin inmune

a travs de la variabilidad gentica ( Medzhitov de 2007 ). Debido al

panel de
PAMPs que es reconocido por PRRS, el sistema inmune innato logra
una cobertura impresionante completa de patgenos a pesar de la
genticamente lmites
ITED nmero de receptores disponibles. El acoplamiento de los RRP
antivirales por su
cognado PAMPs activa vas de sealizacin que conducen a la
produccin de
factores de defensa como las citocinas proinflamatorias, interferones de
tipo I (IFN-a
y IFN-b), o genes de interfern-estimulado (ISGs). ISGs inducida por IFN
o la secrecin de clulas de manera autnoma a la infeccin viral
establecer colectivamente
un estado antiviral que limita la replicacin viral y evita la propagacin
de
la infeccin ( Katze, l, y Gale, 2002 ).
La deteccin de virus plantea un desafo particular para el husped, ya
que carecen
caractersticas en funcin de las caractersticas postuladas de PAMP, es
decir, invariante
estructuras de hormigas necesarios para la supervivencia. Con pocas
excepciones, las protenas virales son
muy variable sin ser funcionalmente comprometida por la mutacin.
Por otra parte, los virus son parsitos obligados que confan en el
metabolismo del husped
para su replicacin. La solucin evolutiva a este problema es recocidos nucleicos virales Niza, ya sea genomas de virus o intermediarios
de replicacin.
Sin lugar a dudas, el cido nucleico no es un PAMP que es nico a los
virus y por lo tanto
la deteccin de virus se produce a costa de la posibilidad de que la
autoinmunidad ( Barton
Y Kagan, 2009 ). Deteccin de cidos nucleicos se logra mediante una
lista cada vez mayor de
Los PRR, a saber, los receptores citoslicos RIG-I-como (RLRs) RIG-I y
MDA5 ( Yoneyama et al., 2005, 2004 ); los receptores Toll-like endosomal
TLR3, TLR7 / 8, TLR9 y TLR13 ( Kawai y Akira de 2010 ); la IFI16 /
eje CGA / Sting ( Ishikawa, Ma, y Barber, 2009; Sun, Wu, Du, Chen, y
100
Evelyn Dixit y Jonathan C. Kagan
Pgina 3
Chen, 2012; Unterholzner et al., 2010; . Wu et al, 2012 ); y la AIM2
inflamasoma ( Brckstmmer et al., 2009; Fernandes-Alnemri, Yu, Datta,
Wu, y Alnemri, 2009; Hornung et al., 2009; Roberts et al., 2009 ). Esta

revisin se centrar en la sealizacin inducida por el virus de

RLRs; detector de cido nucleico
por otras familias de receptores se revisa en otro lugar ( Barbalat, Ewald,
Mouchess, y Barton, 2011 ).
2. RLRs son sensores de ARN
2.1. Las caractersticas comunes y distintas de RLRs y su
capacidades de sealizacin
RLRs detectan ARN derivado de virus de ARN y en algunos casos DNA
virus. En trminos de especificidad y la salida de sealizacin, RLRs son
ms similares a
TLR3, ya que tanto detectar el ARN viral e inducir ISGs, IFN de tipo I, y
citoquinas proinflamatorias ( Alexopoulou, Holt, Medzhitov, y Flavell,
2001; Matsumoto et al., 2003; Schulz et al., 2005 ). Sin embargo, hay
una fundiferencia conceptual damental en la deteccin de cidos nucleicos
entre TLRs y
RLRs. El nucleico endosomal cido-especfica TLRs TLR3, TLR7 / 8, y
TLR9 reconocer cidos nucleicos extracelulares habiendo alcanzado los
endosomas
a travs de endocitosis ( Takeda y Akira, 2005 ), Mientras que RLRs son
citoslicas
receptores necesarios para la deteccin de ARN viral intracelular de
activamente
(reproduccin de los virus Kawai y Akira, 2006 ). Como tal, RLRs
representan una indispensable medios para determinar si una clula dada es infectado o
no. En lnea con
Este papel clave en la inmunidad antiviral, la sealizacin de RLR opera
en la mayora de clulas
tipos. En contraste, la expresin de TLR est restringida a las clulas
inmunes especializadas
tales como macrfagos y clulas dendrticas. A pesar de que se
expresan en RLRs
clulas dendrticas plasmacitoides, TLR, pero no estn obligados RLRs
para IFN-a
produccin en este tipo celular ( Kato et al., 2005 ).
Tres protenas altamente relacionadas constituyen la familia de RLRs: la
el miembro fundador RIG-I, MDA5, y LGP2. Se caracterizan por
una ATPasa central que contiene DExD / H cuadro de dominio
helicasa. RIG-I y
MDA5 contienen dominios CARD tndem N-terminales que median abajo
transmitir sealizacin, mientras que LGP2 carece de una tarjeta
( Yoneyama et al., 2005,
2004 ). RIG-I y LGP2 tambin albergan un dominio represor (RD) en su
Dominios reguladores C-terminal (CTD) ( Higo. 4.1 ). Debido a la
presencia de

la RD en RIG-I, su sobreexpresin en ausencia de un ligando de

activacin
no da lugar a la sealizacin, mientras que la sobreexpresin MDA5 es
suficiente para
activar la va. De acuerdo con su arquitectura de dominio, RLRs
que carecen de las tarjetas tienen un fenotipo dominante negativo. RIG-I
desprovista de
101
RIG-I-like receptor de sealizacin
pgina 4
el CCD o el fragmento N-terminal que comprende nicamente la seal
las tarjetas
constitutivamente ( Cui et al, 2008;.. Saito et al, 2007; Takahasi et al.,
2008 ). Todas
RLRs estn presentes en niveles bajos en las clulas en reposo, pero su
expresin es fuertemente
inducida por IFN de tipo I creacin de un circuito de alimentacin hacia
adelante para una robusta antiviral
respuesta ( Kang et al., 2004; Yoneyama et al., 2005, 2004 ).
A pesar de las diferentes especificidades de ligandos de ARN viral, tanto
RIG-I y
MDA5 dependen de la misma cascada de sealizacin para activar la
expresin de tipo
I IFNs, ISGs, y citoquinas proinflamatorias ( Yoneyama et al., 2005 ). los
MAVS protena adaptadora (tambin conocido como IPS-1, VISA, y Cardif)
( Kawai
et al., 2005; Meylan et al., 2005; Seth, Sol, Ea, y Chen, 2005; Xu et al.,
2005 ) Acta inmediatamente aguas abajo de los receptores y
representa un nodo
a partir del cual RLR sealizacin sucursales en varias direcciones con el
fin de promote la activacin de NF-kB a travs de las IKK cannicas, IKK-a,
IKK-b, y IKK-g, de ATF2 / c-jun a travs de la activacin de MAPK y la
mayora
importante de los miembros del factor regulador de interfern (IRF) de la
familia
de factores de transcripcin ( Kawai et al., 2005; Meylan et al., 2005;
Mikkelsen et al., 2009; Poeck et al., 2010; Seth et al., 2005; Xu et al.,
2005 ). IRF3 y IRF7 son los factores de transcripcin esencial para IFN-b
gen
la transcripcin, como la activacin de NF-kB y ATF-2 / c-Jun s sola no es
suficienteciente para IFN-b induccin. Curiosamente, en clulas dendrticas, IRF5
tambin puede
funcin para promover IFN-b expresin ( Lazear et al., 2013 ). residen

en el citosol en sus formas latentes hasta que la infeccin viral activa el

no
IKK cannicas, TBK1 y IKK-i. La fosforilacin de IRF3 y IRF7
por estas quinasas causa o homodimerizacin hetero y transporte
nuclear
ubicacin. IRF3 y / o IRF7, NF-kB, y ATF-2 / c-Jun, junto con
RIG-I
1
7
11
10
77 103 153
514 534 540
476
678
97 110
190
316
882
1025
87 92
172
251
735
925
TARJETA
TARJETA
TARJETA
Pro
TARJETA
RD / CTD
RD-como
RD / CTD
TM
ATPasa / helicasa
ATPasa / helicasa
ATPasa / helicasa
MDA5
LGP2
MAVS
Figura 4.1 Arquitectura de dominio de RLRs y MAVS. Los lmites de
dominio se indican
para el consumo humano RIG-I, MDA5, LGP2, y las protenas MAVS
acuerdo con www.uniprot.org . Nota
MDA5 que alberga un dominio RD-como en el C-terminal que no
participa en

autorregulacin.
102
Evelyn Dixit y Jonathan C. Kagan
pgina 5
el coactivador transcripcional CBP / p300 y la protena de arquitectura
HMG I (Y) se renen en un enhanceosome para dirigir la transcripcin de
IFN-b
( Hiscott, 2007; Honda, Takaoka, y Taniguchi 2006 ) ( Fig. 4.2 ).
Una vez que se secreta IFN-b, se une a la IFN-a / b receptor (IFNAR) en
una
de manera autocrina y paracrina que resulta en la sealizacin JAK-STAT
y por lo tanto
expresin de varios cientos de ISGs por el factor de transcripcin ISGF3,
que
consta de STAT1, STAT2, y irf9 ( Platanias, 2005 ). Sin embargo, a pesar
de
su homnimo, ISGs puede tambin ser inducida independiente de una
secrecin que precede
tionoftypeIIFN ( Collins, Noyce, y Mossman, 2004;. Mossmanetal de
2001 ).
Virus de la gripe
Virus del Nilo Occidental
El virus del dengue
EMCV
El virus de Theiler
reovirus
NDV
SEV
VSV
VHC
JEV
RIG-I
MDA-5
PPP
TRIM25
Riplet
Citoplasma
RNF125
PKC-a / b
NLRX1
MAVS
IKK-i
TBK1
IKK-a
IKK-b

IKK-g
Las MAPK
ATF2 / c-Jun
Ncleo
ISGs
Las citoquinas
IFN de tipo I
NF-kB
IRF3 / 7
?
Figura 4.2 sealizacin en una vista RLR. El repertorio de los virus
detectados por RIG-I y
MDA5, respectivamente, refleja sus diferentes especificidades de
ligando. Ambos receptores utilizan comcomponentes de sealizacin comunes para activar tres conjuntos de
factores de transcripcin necesarios para
expresin de IFN de tipo I, las citocinas proinflamatorias, y ISGs.
103
RIG-I-like receptor de sealizacin
Pgina 6
Muchos ISGs funcionan como efectores antivirales directos, actuando
para evitar viral
la replicacin del genoma, ensamblaje de partculas virales, o la
liberacin de viriones de infectados
Clulas. Otros codifican componentes de las vas de sealizacin tales
como los receptores
para patgenos de reconocimiento o factores de transcripcin que
resulta en un ms fuerte
Respuesta de IFN y creando de ese modo un bucle de retroalimentacin
positiva.
El papel de LGP2 en la inmunidad antiviral es menos claro. LGP2 carece
de una
Dominio CARD ( Fig. 4.1 ). Carente de un dominio de sealizacin, LGP2
era proplanteado para ser un regulador negativo de la sealizacin de RLR. La
sobreexpresin de
LGP2 no activa IFN-b induccin. Por el contrario, la reduccin de
Se observ la activacin IRF3 cuando las clulas que sobreexpresan
LGP2 eran
infectado con virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) ( Rothenfusser
et al., 2005;
Yoneyama et al., 2005 ). En experimentos in vivo con diferentes lneas
de
Los ratones deficientes en LGP2 contradicen fuertemente los datos
generados por los anteriores

Los estudios in vitro e implicar LGP2 como un regulador positivo ( Satoh

et al.,
2010; Venkataraman et al., 2007 ). En ausencia de LGP2, tanto RIG-I
y las respuestas particularmente MDA5 dependientes a la infeccin por
virus de ARN son
deteriorado, mientras que las respuestas a ligandos sintticos de estos
RLRs son
no afectado ( Satoh et al., 2010 ). Presumiblemente, LGP2 facilita la
unin de viral
RNA-potencialmente en el complejo con la protena a su receptor
cognado,
mientras que la afinidad de RIG-I y MDA5 es suficientemente fuerte
como para unirse a
Agonistas sintticos "desnudos". El anlisis estructural de la interfaz de
unin de
ARN con el CTD de RIG-I es compatible con este modelo, ya que predice
ms dbil
afinidad de MDA5 de RIG-I a su ligando ( Takahasi et al., 2009 ). En
Adems de confirmar el papel de LGP2 como REG-positivo, pero no
esencial
lador de la sealizacin de RLR, un informe reciente implica LGP2 como
una clula-intrnseca
regulador de CD8 especfica del virus

Supervivencia de las clulas efectoras y funciones T.

CD8

Las clulas T son cruciales para el control de la patologa del virus del
Nilo Occidental (VNO)
en el cerebro. Los ratones deficientes en LGP2 muestra mayor carga
viral y signifvamente menor CD8-WNV especfica

Clulas T en el cerebro que conduce a una mayor

la mortalidad en comparacin con animales de tipo salvaje ( Suthar et
al., 2012 ). Nonethemenos, se requiere mayor aclaracin para determinar el papel de LGP2
en RLR
sealizacin.
2.2. Caractersticas estructurales de los ligandos sintticos RLR
Los dos mejores RLRs caracterizados, RIG-I y MDA5, reconocen
estructuralmente
especies de ARN aliado distintas que han llegado al citosol por infeccin
o por
los medios de transfeccin. Siendo los receptores citoslicos, RIG-I y
hago MDA5

No responder a cido nucleico extracelular.

104
Evelyn Dixit y Jonathan C. Kagan
pgina 7
El ligando RIG-I comprende una molcula de ARN con dos
caractersticas: (i) una
5
0
trifosfato ( Hornung et al., 2006; Pichlmair et al., 2006 ) Y (ii) base de
el emparejamiento en el 5
0
-fin debido a las estructuras secundarias de ARN tales como la horquilla
o
conformaciones panhandle ( Schlee et al, 2009;. Schmidt et al.,
2009 ). Estudios
dirigida a la caracterizacin de las caractersticas moleculares de la RIG-I
ligando de gran parte
depender de las transcripciones in vitro. En el ARN vitro transcritas por
todos conocido poli- RNA
merasesleavesatriphosphateatthe5
0
endofthetranscript (pppRNA) ( Schlee y
Hartmann 2010 ) .TransfectionofpppRNAintomonocytesresultedinrobust
IFN-asecretion, whereasRNAlackingatriphosphatedidnot ( Hornungetal.,
2006 ) Infectados por el
highlyimmunogenicRNAextractedfrominfluenza .Similarly,
cellswasrenderednonstimulatoryafterphosphatasetreatment
( Pichlmairetal.,
2006 ). Sin embargo, un 5
0
trifosfato por s sola no es suficiente para marcar una sola
hebra (ss) molcula de ARN como no propio y para que sea
inmunognica. En
apoyo de esta idea, sinttica 5
0
trifosfato-ARN de cadena simple no se active
RIG-I de sealizacin. En contraste, cuando se gener la misma molcula
de ARN de cadena simple
por transcripcin in vitro, fue estimulante. Clonacin y secuenciacin
inversa de
las especies de ARN ltimos revelaron la presencia de secuencias
generado por auto
intramolecular de codificacin 3
0
-Ampliacin lder ARN de extremos romos con com-

complementario 5
0
-Y3
0
-finaliza. Por lo tanto, aberrantes productos de transcripcin in vitro son
responsable de las propiedades inmunoestimulantes de estas
preparaciones. los
longitud mnima de la 5
0
-base se encontr regin emparejado ser de 19 pb. Promoverms, un 3
0
-overhang de 2 nt redujo la actividad estimuladora de 70%, mientras
numero 5
0
-overhang se toleraba ( Schlee et al., 2009 ). Alternativa a 5
0
-base
emparejamiento, composicin de la secuencia puede contribuir a la
potencial estimulador
de pppRNA. Virus de la hepatitis C (HCV) ssRNA genmico se caracteriza
por
motivos polyuridine con nucletidos intercalados C (referidos como poliU/
UCmotifs) anda5
0
-triphosphate.Deletionofthepoly-U / UCmotifabrogated
la actividad estimuladora de ARN genmico del VHC ( Saito, Owen, Jiang,
Marcotrigiano, y Gale, 2008; Uzri y Gehrke 2009 ). De este modo, tanto
panhandle
estructuras y poli-U / UC pueden servir como un PAMP secundario para
pppRNA.
Sin embargo, (ds) ARN de doble cadena sinttico corto sin 5
0
trifosfato se inform para activar RIG-I tambin ( Kato et al., 2008;
Takahasietal., 2008 ) .Notably,
TheantiviralproteinRNaseLcancleavessRNA
de virus u origen de acogida y de este modo generar corto (200 nt)
ligandos carente de una
5
0
trifosfato de RIG-I y MDA5 ( Malathi, Dong, Gale, y Silverman,
2007 ). Las caractersticas estructurales responsables de la
inmunogenicidad de
Ligandos generado RNASEL-no han sido identificados.

La naturaleza molecular del ligando MDA5 sigue siendo mal

caracterizado
racterizado. El agonista MDA5 estereotpico es polyI: C ( . Gitlin et al,
2006;
105
RIG-I-like receptor de sealizacin
pgina 8
Kato et al., 2006 ), Una molcula de ARN sinttico que carece de 5
0
-triphosphates que es
generada por la hibridacin de hebras de poli-inosina a cadenas de policitidina
de diferentes longitudes. Por lo tanto, polyI: C contiene una mezcla mal
definida de ds ramificadas
y ARN de cadena simple. Tamao de fraccionamiento de polyI: C revel
que responde a MDA5
de alto peso molecular (HMW) polyI: C, mientras que polyI: C ms corto
que
1000 nucletidos acta como un agonista de RIG-I ( Kato et al.,
2008 ). tamao de fraccionamiento
acin de ARN total aislado de virus de la encefalomiocarditis (EMCV) clulas infectadas produjeron una fraccin dsRNA prominente de 11 kb y
un incluso
de mayor peso molecular del ARN total con ss variable y con- dsRNA
tienda. Es de destacar que slo el agregado de ARN, pero no el ARN de
doble cadena, estimulado
MDA5 actividad. Por otra parte, esta fraccin requiere su intacta
secundaria
y estructura terciaria permanezca completamente activo ( Pichlmair et
al., 2009 ). As,
MDA5 se une preferentemente a HMW dsRNA que, presumiblemente,
adopta una
conformacin en forma de banda al igual que los polyI ARN sintticos
anlogos: C.
2.3. Los virus
Las caractersticas estructurales de RNA viral que se muestran por un
virus dado
depender de su ciclo de replicacin. Como consecuencia de ello, los
diferentes ligando
especificidades de RIG-I y MDA5 se reflejan en gran medida por la no
patrn de superposicin de la susceptibilidad virus de ratones
deficientes en cualquiera de
los dos RLRs. RIG-I se requiere para las respuestas innatas a muchos
ARN de cadena simple

virus. Los ejemplos mejor estudiados entre estos son los de cadena
negativa,
virus de la Orthomyxoviridae, por ejemplo, influenza A y virus B,
Paramyxoviridae, por ejemplo, NDV, virus Sendai (SEV), respiratorio
virus sincitial y el virus del sarampin, y Rhabdoviridae, por ejemplo,
vesicvirus de la estomatitis ular (VSV) y el virus de la rabia ( Hornung et al.,
2006; Kato
et al., 2006; Loo et al., 2008; Plumet et al., 2007 ). Por otra parte, la
deteccin de
flavivirus de cadena positiva incluyendo HCV y la encefalitis japonesa
virus es RIG-I dependiente ( Kato et al., 2006; Saito et al., 2007;
Sumpter et al., 2005 ). Adems, el reconocimiento de ADN citoplsmico
Tambin puede alimentar en la va RIG-I. RIG-I no detecta ADN
directamente, sino que puede hacerlo despus de la transcripcin
mediada por la ARN polimerasa-III
de ADN ricas en AT. La induccin de IFN en respuesta a la infeccin con
el ADN
virus tales como el virus-1 adenovirus, herpes simplex y el virus de
Epstein-Barr
se basa en esta va ( Ablasser et al., 2009; Chiu, Macmillan, y Chen,
2009; Samanta, Iwakiri, Kanda, Imaizumi, y Takada 2006 ). MDA5 es
requerido para la proteccin contra los picornavirus tales como EMCV,
Theiler de
virus, Mengovirus, norovirus murino, y virus de la hepatitis murina
( Gitlin
106
Evelyn Dixit y Jonathan C. Kagan
pgina 9
et al., 2006; Kato et al., 2006; McCartney et al., 2008; Roth-Cruz,
Bender, y Weiss, 2008 ). Al igual que en RIG-I, MDA5 tambin ha sido
implicaindica en la deteccin de virus de ADN. El virus vaccinia, un virus de
ADN de doble cadena de la
familia de los poxvirus, activa MDA5 travs de un mecanismo todava-aser-caracterizado
( Pichlmairetal., 2009 ) .SomevirusessuchasWNV, Denguevirus, reovirus,
y el virus de la coriomeningitis linfoctica ( Fredericksen, Keller, Fornek,
Katze, y Gale, 2008; Loo et al., 2008; Zhou et al., 2010 ) activan tanto
RIG-I y la respuesta inmune innata MDA5-dependiente. dependencia RLR
dencia de los virus mencionados se determin mediante la infeccin de
diferentes tipos de clulas RLR deficientes o ratones con viriones
purificados y es
se resume en la Tabla 4.1 .
Tabla 4.1 RIG-I y MDA5 detectar diferentes tipos de virus

Los virus detectados por RIG-I

Orthomyxoviridae
(A) ARN de cadena simple, NS
Virus Influenza A
Kato et al. (2006)
Virus de la gripe B
Loo et al. (2008)
Paramyxoviridae
(A) ARN de cadena simple, NS
virus Sendai
Kato et al. (2006)
Virus de la enfermedad Newcastle Kato et al. (2006)
sincitial respiratorio
virus
Loo et al. (2008)
El virus del sarampin
Plumet et al. (2007)
Rhabdoviridae (A)
ARN de cadena simple, NS
La estomatitis vesicular
virus
Kato et al. (2006)
virus de la rabia
Hornung et al. (2006)
Flaviviridae (TH)
ARN de cadena simple NS
Virus de la hepatitis C
Saito et al. (2007) y Sumpter et al.
(2005)
La encefalitis japonesa
virus
Kato et al. (2006)
dsDNA virus
Virus de Epstein Barr
Ablasser et al. (2009) , Chiu et al.
(2009) , y Samanta et al. (2006)
Virus-1 del Herpes simplex Chiu et al. (2009)
adenovirus
Chiu et al. (2009)
Continuado
107
RIG-I-like receptor de sealizacin
pgina 10
2.4. Las bacterias

Varias bacterias incluyendo Francisella tularensis, la tuberculosis

micobacterias, Brucella
abortis, estreptococos del grupo B (GBS), Listeria monocytogenes y
Legionella
pneumophila se ha demostrado que induce IFN de tipo I en un TLRindependiente
forma ( Charrel-Dennis et al., 2008; Henry, Brotcke, Weiss, Thompson,
Y Monack, 2007; O'Riordan, Yi, Gonzales, Lee, y Portnoy, 2002; Opitz
et al., 2006; Roux et al., 2007; Stanley, Johndrow, Manzanillo, y Cox,
2007; Stetson y Medzhitov de 2006 ). Aunque es bien apreciado que
repre- viral
publica- es inhibida por IFN de tipo I, el papel del IFN en las infecciones
bacterianas es menor
claro; por ejemplo, un IFNhas protectiveeffect durante la infeccin por
EGB ( Mancuso
et al., 2007 ), mientras que es desventajosa durante la infeccin por
Listeria ( Auerbuch,
Brockstedt, Meyer-Morse, O'Riordan, y Portnoy, 2004; Carrero, Caldern,
Y Unanue, 2004; O'Connell et al., 2004 ). An menos clara es la que
bacteriana
ligandos y receptores de acogida desencadenan la secrecin de IFN.
Tabla 4.1 RIG-I y MDA5 detectar diferentes tipos de virus-cont
Los virus detectado por MDA5
Picornaviridae (TH)
ARN de cadena simple, NS
encefalomiocarditis
virus
Gitlin et al. (2006 ) y Kato et al.
(2006)
El virus de Theiler
Kato et al. (2006)
Mengovirus
Kato et al. (2006)
Caliciviridae (TH)
ARN de cadena simple, NS
Murino norovirus-1
McCartney et al. (2008)
Coronaviridae (TH)
ARN de cadena simple NS
Virus de la hepatitis murina Roth-Cruz et al. (2008)
Los virus detectados por RIG-I y MDA5
Flaviviridae (TH)
ARN de cadena simple, NS
El virus del dengue
Loo et al. (2008)
vrus del oeste del Nilo

Fredericksen et al. (2008) y

Loo et al. (2008)
Reoviridae
S dsRNA
reovirus
Loo et al. (2008)
Arenaviridae (A)
ARN de cadena simple, S
linfoctica
virus de la coriomeningitis
Zhou et al. (2010)
RLR dependencia de varios virus est en la lista de acuerdo con las
familias de virus. El respectivo tipo de genoma es
indicado como de cadena sencilla (ss) o (ds) ARN o ADN de doble cadena
con negativo (A) o positivo (TH)
orientacin genoma que ofrece la segmentacin (S) o nonsegmentation
(NS).
108
Evelyn Dixit y Jonathan C. Kagan
pgina 11
El gram-negativa intracelular bacteria L. pneumophila infecta macro
fagos y causa la enfermedad del legionario. IFN-b de induccin en
epitelial de pulmn
clulas y macrfagos depende de MAVS ( Monroe, McWhirter, y Vance,
2009; Opitz et al., 2006 ). Sin embargo, los eventos de sealizacin
aguas arriba de MAVS
la activacin son un tema de debate. Chiu et al. proponer que el ADN
ricas en AT
alcanza el citosol de acogida y se transcribe en un ligando de ARN de
RIG-I
de una manera RNA polimerasa III-dependiente ( Chiu et al., 2009 ). en
concontraste, Monroe et al. argumentar que la respuesta de IFN de ADN
genmico de Legionella
no requiere MAVS en macrfagos de ratn como MAVS deficientes y
de tipo salvaje macrfagos muestran niveles comparables de IFN. En
lugar de ello, sus datos
apoyar un modelo en el que Legionella ARN se detecta directamente por
tanto RIG-I
y MDA5 como macrfagos deficientes en cualquier receptor mostrar una
parcial
fenotipo ( Monroe et al., 2009 ).
Shigella flexneri, el agente causante de la disentera bacilar, infecta
macrofagos del epitelio del colon y rpidamente induce la muerte celular por

pyroptosis. Bacterias Escapar invaden las clulas epiteliales del colon en

el que reprelicate en el citosol. Tipo II IFN-g es crtica para la inhibicin de S. flexneri
citoel crecimiento Solic. Es en esta etapa que el IFN-g ejerce su efecto
antimicrobiano
a travs de RIG-I de sealizacin en las clulas mieloides. Tanto RIG-I y
MAVSratones deficientes fibroblastos embrionarios (MEFs) fallaron para
restringir IFN-gdependiente de la replicacin de S. flexneri. La inhibicin de la ARN
polimerasa III tambin
reducido el efecto antimicrobiano de IFN-g lo que sugiere que la
sealizacin RIG-I
se desencadena por medie de ARN generados-III de ARN
polimerasa. Interesarcon ello, IFN de tipo I no es necesaria para la induccin de este efecto
como IFNAR-deficientes
MEFs que son completamente insensibles a los IFN tipo I no vayan en
menoscabo de IFN-gla inhibicin del crecimiento mediada por S. flexneri. En contraste, en
macro- primaria
fagos, la sealizacin de RIG-I es prescindible para la detencin del
crecimiento mediada por IFN-g
( Jehl, Nogueira Zhang, y Starnbach 2012 ). Estos resultados ponen de
relieve
la importancia de la interaccin de las distintas vas de la inmunidad
innata en
Para luchar con xito contra los patgenos.
3. RIG-I ACTIVACIN Y RECEPTOR DE SEAL PROXIMALES
PROPAGACIN
RLR de activacin es un proceso de varias etapas que requiere una
buena coordinacin
interaccin de receptor, ligando, y varias protenas accesorias. En
contraste con
RIG-I, los requisitos especficos para la activacin MDA5 eficiente no
estn claros,
pero es lgico pensar que ambos RLRs proinflamatorias siguen un
similares
mecanismo. Como lo demuestra el RIG-I, nuestra actual comprensin de
esta
109
RIG-I-like receptor de sealizacin
pgina 12

proceso consiste en la siguiente secuencia de eventos: (1) En las clulas

en reposo, RIG-I
adopta una conformacin cerrada que resulta en un autoinhibited
(nonsignaling)
estado. (2) pppRNA unin a RIG-I induce cambios conformacionales que
conducir a la dimerizacin y la exposicin de las tarjetas en la
conformacin abierta.
(3) La desfosforilacin de RIG-I y TRIM25 dependiente de ubiquitinacin
eventos activan plenamente la capacidad de sealizacin de RIG-I. (4)
asociados RIG-I
con MAVS de una manera dependiente de la TARJETA. (5). MAVS acumula
en
sealizacin agregados por un mecanismo de prin.
En ausencia de infeccin, RIG-I se mantiene en un estado de
autoinhibited
interacciones intramoleculares entre las tarjetas y el dominio helicasa,
que impide estricamente la unin a ARN del dominio helicasa y evita
Las tarjetas de sealizacin ( Kowalinski et al, 2011;.. Saito et al, 2007 ).
En consecuencia, el N-terminal de RIG-I que comprende las dos cartas
tiene
un fenotipo constitutivamente activa cuando se sobreexpresa
( Yoneyama et al.,
2004 ). Adems, la fosforilacin de la treonina 170 (serina y 8 en priortlogos mate) por PKC-a y b-PKC suprime la actividad de RIG-I en
constante
estado ( Gack, Nistal-Villan, Posada, Garca-Sastre, y Jung,
2010; Maharaj, Wies,
Stoll, y Gack, 2012; Nistal-Villan et al., 2010 ).
Slo a ligando de unin no abrir la conformacin cerrada hasta
facilitar la sealizacin corriente abajo por las tarjetas. Los estudios
bioqumicos tienen
identificado el CTD como el sensor de pppRNA. Receptor-ligando
interaccin
ciones se examinaron midiendo la actividad de ATPasa de eliminacin
purificada
mutantes de RIG-I que carece de las tarjetas (DCARD), el CCD (DCTD), o
ambos (helicasa) en respuesta al tratamiento con un panel de ligandos
de ARN derivada
de la secuencia lder del virus de la rabia (RVL), es decir, pppRNA
(pppRVL),
no fosforilado ssRNA (ssRVL), as como ARN de doble cadena
(dsRVL). ssRVL hizo
no activar la actividad ATPasa en cualquiera de las variantes RIGI. pppRVL fuertemente
actividad ATPasa estimulada de tipo salvaje RIG-I. Supresin de las
tarjetas hizo

no interferir con la actividad ATPasa estimulada por pppRVL. Ni la

helicasa
dominio por s solo, ni RIG-I que carecen de la CTD exhibidas en la
actividad ATPasa
respuesta a pppRVL. dsRNA dbilmente estimulada de tipo salvaje RIG-I
y
el dominio helicasa aislado. Es de destacar que dsRNA activa DCARD
ms eficiencia
cientemente que pppRVL el logro de los niveles de actividad de ATPasa
comparable a la de tipo salvaje
escriba RIG-I en el complejo con pppRVL. Estos hallazgos sugieren que la
CARDs inhiben la unin de dsRNA en una conformacin inactiva,
mientras CTD
promueve pppRVL unin en una conformacin activa. adems de unin
estudios demostraron claramente que el sitio de unin pppRNA reside
dentro de
el CCD. La cristalografa de rayos X de la CTD revela dos caractersticas
que
son necesarios para pppRNA de unin: (1) Un sitio de coordinacin que
comprende zinc
110
Evelyn Dixit y Jonathan C. Kagan
pgina 13
cuatro residuos de citidina altamente conservadas (C810, C813, C864,
C869). Estas
cytidines se conservan de manera parlogos y ortlogos dentro
la familia de RLRs. (2) Una ranura conservado con una carga positiva
parche en el centro del cual se encuentra una lisina invariante RIG-I
(K888)
( Cui et al., 2008 ).
Estructuras cristalogrficas de RIG-I dan una visin detallada de la concambios formativas desencadenadas por la unin del ligando y
requeridas para la seal de iniciacin. Los datos estructurales sugieren un modelo en el que en el
estado autorepressed
el CCD est desprovisto de las interacciones intramoleculares y por lo
tanto puede dedicarse libremente
en pppRNA unin. Este evento inicial aumenta la concentracin local de
ARN
cin y conduce a la unin cooperativa de ARN y ATP a la helicasa
dominio que resulta en reordenamientos dramticos dentro del dominio
helicasa
que se orquestada por el dominio del pincher que conecta la helicasa
dominio con el CTD. El dominio helicasa y el CTD completamente
superficie

alrededor de la RNA juntando a la hlice por numerosos interintermolecular

comportamiento. Este canal cubre 9-10 pb a lo largo del ARN. ARN ms
largo
molculas permiten la unin de dos monmeros RIG-I de forma
simultnea.
Sin embargo, esta aparente dimerizacin est desprovista de una
interfaz de protena-protena
sino que ms bien refleja un oligomerizacin ARN-guiada ( Kowalinski et
al.,
2011; Luo et al., 2011 ). En lnea con los datos estructurales de ARNbound
RIG-I, de cuerpo entero RIG-I, pero no el mutante DCTD o MDA5 eluy
como
dmeros despus de la filtracin en gel cuando se incubaron con pppRNA
( Cui et al., 2008 ).
De sealizacin corriente abajo por el ligando-activado RIG-I se consigue
mediante la
CARDs tndem N-terminal. Supresin de las tarjetas se traduce en un
dominante
fenotipo negativo de RIG-I ( Yoneyama et al., 2004 ). clulas Huh7.5, un
subpoblacin de la lnea celular de hepatocitos Huh7 que se caracteriza por
un threonine a la mutacin de isoleucina en la posicin 55 (T55I) en la primera
tarjeta de
RIG-I, no responden a la infeccin por el VHC. Como consecuencia de
ello, la ausencia
de una respuesta antiviral funcional crea condiciones permisivas para la
repre- VHC
pu- en Huh7.5 ( Sumpter et al., 2005 ). El mutante T55I interfiere con
la unin de la ubiquitina ligasa E3 TRIM25 que se requiere para la
activacin
de la sealizacin de RIG-I. Gack et al. demostr que TRIM25 se une a la
primera
Dominio CARD travs de su dominio SPRY. Requisito previo para la unin
es TRIM25
desfosforilacin de RIG-I en T170 (y S8 en primates) por un no
identificado
fosfatasa. La mutacin T170E phosphomimetic abrogada unin de
TRIM25 de RIG-I e interfiri con los eventos de sealizacin y
la actividad antiviral de RIG-I ( Gack et al., 2010 ). transferencias TRIM25
K63 ligada
restos de ubiquitina al resto de lisina 172 (K172) dentro de la segunda
TARJETA usando su anillo de dominio. Oligomerizacin de RIG-I con el
adaptador

111
RIG-I-like receptor de sealizacin
pgina 14
MAVS protena depende crticamente de esta modificacin. En
consecuencia,
MEFs TRIM25 deficientes no secretan IFN-b despus de la infeccin
SEV. los
ausencia de defensas antivirales se refleja en los ttulos virales
marcadamente superiores, bajo
La infeccin por VEV ( Gack et al., 2007 ). Aunque no se fija TRIM25
restos de ubiquitina a MDA5, poliubiquitina vinculante por MDA5 se
requiere
por sus funciones de sealizacin ( Jiang et al., 2012 ).
El requisito para la ubiquitinacin de RIG-I para la iniciacin de aguas
abajo
signalingwaschallengedbyastudyusingacell-freesystemtoidentifythe
minera
iMAL componentes de RIG-I transduccin de seales. La va de RIG-I era
reconstituido en una mezcla que contiene purificado por afinidad RIG-I,
mito- crudo
condrias y peroxisomas (que contienen los Mavs adaptador), extractos
citoslicos
(que contiene TBK1), factor de transcripcin sintetizado in vitro en IRF3,
y ATP.
Activacin RIG-I se cuantific mediante la medicin de la dimerizacin de
IRF3, una lectura
por su activacin. Con este ensayo in vitro en su lugar, los autores
recapitulan
keyaspectsofRIG-Isignalingandrevealednewregulatorymechanisms.IRF3
requiere activacin MAVS y TRIM25 como el agotamiento de estas
protenas por
RNAi interfiri con la dimerizacin IRF3. RIG-I tena que ser aislado de
clulas infectadas por virus, ser activados por ligando de ARN in vitro, o
estar presentes como una
N-terminalCARDfragmentforIRF3activationtooccur.Theubiquitination
maquinaria responsable de la activacin RIG-I era la que se comprende
E1,
la E2 Ubc5 y UBC13, y el E3 TRIM25, como la fraccin mitocondrial
de las clulas infectadas por virus empobrecido de Ubc5 (isoforma b y c)
y no UBC13
longerelicitedIRF3dimerization.InlinewiththenotionthatUbc13isspecific
para la sntesis de lisina 63 (K63) -vinculada ubiquitina y los hallazgos
anteriores sobre la
importancia de poliubiquitina ligado a K63 para la activacin RIG-I, la
ubiquitina

protenas con un nico residuo de lisina en la posicin 63 eran capaces

de activar el
va en el sistema in vitro libre de clulas ( Zeng et al., 2010 ).
Por lo tanto, un requisito tanto para TRIM25 y ubiquitina K63-vinculada a
IFN-b induccin por RIG-I se confirmaron en este sistema experimental.
La principal discrepancia entre los estudios de Gack et al. y Zeng et al.
es la unin de poliubiquitina. Mientras que en el anterior estudio
covalente varillaje
edad al residuo K172 de RIG-I fue propuesto, este ltimo estudio sugiere
que las cadenas de poliubiquitina no ancladas sirven como cofactores
esenciales para la RIG-I
activacin. Dos grandes lneas de evidencia apoyan esta proposicin: (1)
RIG-I
Tarjetas aisladas de E. coli que carecen de un sistema activado por
ubiquitinacin
IRF3 cuando se aadieron los polmeros de ubiquitina al sistema libre de
clulas. (2)
poliubiquitina endgena se coprecipitated con RIG-I cartas de
clulas de mamferos y, posteriormente, recuperado de la compleja por
selectiva
desnaturalizacin por calor. Esta preparacin promovido dimerizacin
IRF3, pero perdi
112
Evelyn Dixit y Jonathan C. Kagan
pgina 15
su actividad cuando se trata con la enzima deubiquitination IsoT. Incluso
aunque el residuo K172 no se requiere como un aceptor para la
ubiquitinacin
en esta situacin, su relevancia para la sealizacin de RIG-I permanece
indiscutible como
es fundamental para la afinidad de unin a poliubiquitina ( Zeng et al.,
2010 ).
Tanto la sealizacin de RIG-I y MDA5 depende de los Mavs protena
adaptadora
vincular la actividad del receptor a las quinasas aguas abajo TBK1 y IKK-i
( Higo. 4.2 ). MAVS es una protena de 540 aa que comprende una tarjeta
N-terminal
dominio, una regin central rica en prolina (Pro), y un transmembrana Cterminal
dominio ( Seth et al., 2005 ) ( Fig. 4.1 ). Whilethe objetivos dominio
transmembrana
la adapterto sus subcellularlocations adecuados (mitocondrias, los
peroxisomas, y
membranas de las mitocondrias-asociado (MAM); vase la seccin 4.2 ),
la tarjeta

Se requiere dominio de sealizacin ( Dixit et al., 2010; Horner, Liu,

Parque,
Briley, y Gale, 2011; Seth et al., 2005 ). Cuando fue inicialmente
caracterizado MAVS
zado como un adaptador de sealizacin RLR, los autores observaron
que los resultados de la infeccin viral
en la formacin de agregados de detergente-resistentes ( Seth et al.,
2005 ). Reciente
los estudios realizados por el mismo grupo definido estos agregados
como altamente organizada, auto
la propagacin de priones fibrillas similares. Utilizando el sistema libre
de clulas in vitro para reconstitucin
tucin de la sealizacin de RLR como se ha descrito anteriormente, los
complejos de MAVS ms grande que
Se detect el proteosoma 26S 9 h despus de la infeccin con SeV que
coincidi
con la dimerizacin IRF3. Estos complejos muestran varias
caractersticas caracteres
carac- por priones: (1) La TARJETA MAVS es necesaria y suficiente para
formacin de las estructuras similares a la fibra como se determina por
microscopa electrnica. (2)
Estas fibrillas son resistentes a la proteasa K tratamiento y solubilizacin
de detergente.
(3) resistente a la proteasa fibrillas convierten MAVS en mitocondrias
que eran
extrado de clulas no infectadas en agregados funcionales que llevan a
IRF3
activacin. Curiosamente, sin embargo, estos agregados MAVS no
manchar con
Rojo Congo, un colorante que tie las estructuras tpicamente prinicas
"clsicos" (Chen prin
papel). Por el contrario, las mitocondrias agotan de MAVS por RNAi antes
de
extraccin no result en IRF3 dimerizacin. Es importante destacar que,
MAVS agregado
forma puertas en cuestin de minutos tras la activacin de RLR de
sealizacin en la clula de pago
ensayo de reconstitucin que indica que MAVS priones como fibrillas son
una bona fide
determinante de el estado de activacin MAVS ( Hou et al., 2011 ).
4. Los mecanismos de regulacin de RIG-I SEALIZACIN
4.1. Los reguladores de la sealizacin de RLR
Varias protenas regulan RLR sealizacin a lo largo de la va con el fin
de adaptar

la respuesta. Varios ligasas E3 ubiquitina regulan la actividad de RIGI. TRIM25

como se discute en la Seccin 3 y Riplet (tambin conocido como
RNF135 o REUL)
113
RIG-I-like receptor de sealizacin
pgina 16
regular positivamente la actividad RIG-I a travs de ubiquitinacin ligado
a K63 en su
N- o C-terminal, respectivamente ( Gack et al, 2007;. Gao et al., 2009;
Oshiumi, Matsumoto, Hatakeyama, y Seya, 2009; Oshiumi et al., 2010 ).
Por el contrario, RNF125 media la ubiquitinacin K48-vinculada que los
objetivos
RIG-I para la degradacin y por lo tanto acta como un regulador
negativo ( Arimoto
et al., 2007 ). Recientemente, ZAPS fue identificado como un cofactor
para RIG-I sealizacin
En g. ZAPS es un miembro de la poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP) de
la familia
pero carece del dominio de PARP-como presente en ZAPS debido a
splicing alternativo.
ZAPS se demostr que asociar directamente con RIG-I en un
dependiente de ligando
forma y para amplificar los acontecimientos de sealizacin corriente
abajo tales como la activacin
de los factores de transcripcin IRF3 y NF-kB y la induccin de tipo I
IFN. Como resultado, Zaps replicacin viral despus de la infeccin
inhibida con
Virus RIG-I-dependientes tales como virus de la influenza o la
enfermedad de Newcastle ( Hayakawa
et al., 2011 ). Mientras que un nmero cada vez mayor de protenas
accesorias
que la actividad de sealizacin modificar RIG-I emerge, la interaccin
entre stos
protenas, el orden en el que actan sobre RIG-I, y su relacin signifsig- para la salida de sealizacin sigue siendo difcil hasta que nuevos
estudios sistemticos
hecho para abordar estas cuestiones.
Se propuso NLRX1 (tambin conocido como Nod9) para controlar la
seal de RLR
transduccin a nivel de MAVS; Sin embargo, su papel es una cuestin de
debate.
NLRX1 se inform a residir en la membrana mitocondrial externa a partir
de
donde se interrumpe la interaccin fsica RLR-MAVS inducida por el virus

( Moore et al., 2008 ) ( Higo. 4.2 ). Alternativamente, NLRX1 se encontr

que se localzado dentro de la matriz mitocondrial que considera imposible la
propuesta
funcin como un elemento interactuante directa de MAVS para modular
su actividad. Ms bien, se
se mostr que NLRX1 promueve la generacin de especies reactivas de
oxgeno
(ROS) ( Arnoult et al., 2009; Tattoli et al., 2008 ). Curiosamente, varias
lneas
de evidencia implican ROS como moduladores de la sealizacin de
RLR. Las clulas deficientes
en la autofagia acumular las mitocondrias disfuncionales que implica
el aumento de los niveles de ROS y mostrar sealizacin RLR
mejorada. El tratamiento con
antioxidante invierte el efecto ( Tal et al., 2009 ). A la inversa,
mitocondrial
desacoplamiento, un proceso por el cual se redujo-disminuido la
generacin de ROS
RLR de sealizacin ( Koshiba, Yasukawa, Yanagi, y Kawabata,
2011 ). Adems
Se requiere investigacin cional para delinear el mecanismo por el cual
ROS REG
respuestas antivirales Ulate RLR-dependientes.
Sting (tambin conocido como MITA, MPYS, o ERIS) ( Ishikawa y Barber,
2008; Jin et al., 2011; Sun et al., 2009; Zhong et al., 2008 ) fue original
identificado como un regulador de la RIG-I de sealizacin debido a su
capacidad para directamente
unirse a RIG-I, MAVS, y TBK1 ya su fenotipo knockout.
114
Evelyn Dixit y Jonathan C. Kagan
pgina 17
La sobreexpresin del fragmento constitutivamente activa de RIG-no
pude
inducir IFN en MEFs Sting-deficientes. Por otra parte, la infeccin por VEV
de
STING ratones deficientes resultaron en tasas de supervivencia
significativamente ms pobres y
Tipo I IFN baja los niveles sricos relacin con el control de camada. Es
de notar que
la respuesta a polyI transfectadas: C se mantuvo sin cambios en
ausencia de
Sting ( Ishikawa et al., 2009 ). Mientras STING ha demostrado
desempear un
papel indiscutible en el IFN respuesta al ADN citoslica de virus o sin-

agonistas tticos, su implicacin en la sealizacin de RLR no pueden

ser esenciales.
4.2. La regulacin de la transduccin de seales por RLR subcelular
compartimentacin
AllthreereceptorsoftheRLRfamilyarecytosolicproteins, andtheyhavenot
sido encontrado para ser asociado con cualquier estructura subcelular
en estado estacionario.
Sin embargo, varios componentes de sealizacin corriente abajo de los
receptores son
protenas de la membrana cuyos dominios funcionales de proyecto en el
citosol de
thesurfaceoftherespectiveorganelles.Moreimportantly, properlocalization
de estas protenas es un prerrequisito para su actividad biolgica. La
mejor caracterizan ejemplo es que los Mavs protenas adaptador. MAVS reside en el
exterior
membrana mitocondrial ( Seth et al., 2005 ), Peroxisomas ( Dixit et al.,
2010 )
andMAMs ( Horneretal., 2011 ), aspecializedsubdomainoftheERthatconnecta mitocondrias y peroxisomas ( Hayashi, Rizzuto, Hajnoczky, y Su,
2009; Vance, 1990 ). Ambos MAVS peroxisomal y mitocondrial seal a
inducir la expresin de ISG en MEFs. Mientras MAVS mitocondrial induce
tipo
I IFN y como consecuencia la expresin de ISG en respuesta a reovirus e
influyen
infeccin por el virus enza, MAVS peroxisomal directamente induce la
expresin de ISG
lo cual crea un estado antiviral transitoria y funcional. La falta de tipo I
IFN induccin por MAVS peroxisomal tambin se observ en macrfagos.
A diferencia de MEFs, macrfagos upregulate no slo la expresin de
ISGs sino tambin
citoquinas proinflamatorias despus de la infeccin con reovirus ( Dixit
et al., 2010 ). Una direntes estudio confirma la localizacin de MAVS sobre las mitocondrias y
peroxidasa
Ismes, y aade MAM a la lista de agrupaciones subcelulares de
MAVS. Adems,
los autores proponen el MAM como una sinapsis inmune innato para
antiviral
respuestas que coordina la sealizacin MAVS dependiente de la
mitocondria
y peroxisomas ( Horner et al., 2011 ). Hepatocitos Huh7 infectados por el
VHC
no son capaces de inducir la expresin de IFN debido a la escisin por la
MAVS viral

proteasa NS3 / 4A ( Loo et al., 2006; Meylan et al., 2005 ). Los dems y
nos
han demostrado que MAVS citoslica es incapaz de seal ( Dixit et al.,
2010;
Seth et al., 2005 ). Dado que escinde NS3 / 4A MAVS MAM-localizada,
pero
No MAVS mitocondriales, los autores concluyen que, al menos por el VHC
115
RIG-I-like receptor de sealizacin
pgina 18
MAVS infecciones-mitocondriales es prescindible para la sealizacin de
RIG-I.
Esta idea es apoyada por el hallazgo de que la RIG-I se recluta
especficamente a MAVS MAM residente sobre la infeccin por VHC
( Horner et al.,
2011 ). De hecho, un complejo ternario que consiste en activoconformacin abierta
RIG-I, TRIM25, y el 14-3-3e chaperona se redistribuye a MAM
despus de la infeccin ( Liu et al., 2012 ). MFN2 ata la sala de
emergencia a las mitocondrias
y por lo tanto mantiene los contactos MAM mitocondriales ( de Brito y
Scorrano de 2008 ). El agotamiento de MFN2 por RNAi desestabiliza el
antiviral
sinapsis, que desplaza Mavs peroxisomas y por lo tanto aumenta Rig
I-sealizacin mediada en respuesta a la de SeV, VSV, y HCV (en el
momento temprano
puntos antes de la escisin por MAVS infeccin NS3 / 4A) ( Horner et al.,
2011 ).
Sera interesante para probar el efecto de MFN2 en el orgnulo
especfico
resultado de la sealizacin de RLR usando clulas con MAVS orgnulos
restringida
expresin.
Adems de MFN2, MFN1 ha sido implicado en la regulacin de RIG-I
de sealizacin, as. La activacin de RLRs por la infeccin con SEV,
NDV, influencia
virus enza, VSV, virus Sindbis, o EMCV y por transfeccin con pppRNA
dado lugar a la redistribucin de MAVS mitocondriales. Mientras que
algunos mitocondrias
dra acumular MAVS, otros se vuelven carentes de ella durante un
proceso que
depende de MFN1. RIG-I se distribuye uniformemente por todo el citosol
en las clulas no infectadas, pero se concentra en los focos despus de
la infeccin. Sin embargo,
no se observ colocalizacin entre RIG-I y MAVS. En la con-

contrario, RIG-I colocalized con nucleocpside viral. Como consecuencia,

el tipo de
I IFN induccin despus de la infeccin NDV fue completamente abolida
en
MEFs MFN1 deficientes. Estos hallazgos llevaron a los autores a proponer
un modelo
donde RIG-I ha sido contratado para fbricas de virus para maximizar las
posibilidades de recoeptor-ligando interaccin. Las mitocondrias son un vehculo que lo
posicionan
MAVS. Algunos mitocondrias enriquecen MAVS a travs de la fisin y
repetida
eventos de fusin y rodear los focos de replicacin viral activa con el fin
de
permitir la induccin de IFN ( Onoguchi et al., 2010 ). Si bien este
modelo se esbozan
la forma mitocondrial de sealizacin est optimizado para perpetuar la
induccin de IFN
para la duracin de la infeccin y para establecer un sostenido antiviral
inmune
respuesta, deja dos preguntas importantes sin respuesta. En primer
lugar, cules son
la cintica de este proceso? El momento ms temprano presentado en el
estudio
es de 9 h despus de la infeccin. En segundo lugar, lo que desencadena
la remodelacin y mitocondrial
acumulacin de MAVS? Independientemente de si la activacin de la
sealizacin de RLR
o un estmulo diferente inicia la reordenacin, este modelo no lo hace
explicar la deteccin de ARN en la primera instancia de encuentro de
virus. Mucho
sino que exige medios adicionales y dispares de sealizacin RLR que
116
Evelyn Dixit y Jonathan C. Kagan
pgina 19
garantizar una respuesta antiviral inmediata hasta que las mitocondrias
MAVS enriquecida
son reclutados a la periferia de fbricas de virus.
5. Conclusiones y orientacin futura
la sealizacin de RLR es una va fundamental para la deteccin de
intracelular
virus y montaje defensas antivirales de proteccin. Desde la
identificacin
de RIG-I y sus protenas relacionadas MDA5 y LGP2, tiene un enorme
progreso

ha hecho en trminos de los componentes centrales de esta va y la

regulacin
mecanismos ridades. Sin embargo, muchas preguntas abiertas
permanecen en el patgeno
as como el lado del anfitrin. Cules son los ligandos biolgicos que
surgen durante un determinado
infeccin viral? Los genomas virales, transcripciones virales, o
intermediarios de replicacin
son posibles candidatos. Estos ligandos naturales coinciden con el
postulado
RELAClONADAS caractersticas estructurales que fueron identificados in
vitro? Baum, Sachidanandam,
y Garca-Sastre (2010) busc caracterizar tales ligandos por
inmunoprecipitacin
la precipitacin de complejos de RIG-I / ARN endgenos de SEV y la gripe
clulas infectadas por virus y secuenciacin profunda
subsiguientes. Copia de devolucin defectuosa
partculas interferentes se identificaron como el ligando natural de
ambos de SeV y
virus de la gripe. RIG-I tambin se une a los segmentos
(preferentemente cortos de genotipo)
RNA mic de virus de la gripe. Este estudio confirma la necesidad de
tanto una
5
0
trifosfato y una estructura panhandle para la activacin RIG-I durante
SEV
y la infeccin por virus de la gripe ( Baum et al., 2010 ). Qu tan
accesible es esto
ligandos durante la infeccin? A la luz de la coevolucin del virus y el
husped, se
lgico que PAMP virales son espacialmente segregados de los
respectivos
Los PRR. Es la deteccin de virus RLR mediada meramente posible por
medios accidentales
de escape de PAMP o se dispone de mecanismos que activamente los
puntos de muestreo de virus
replicacin?
En cuanto a los factores del husped requeridos para una respuesta
antiviral eficaz,
nuestra comprensin del control espacio-temporal de esta va es muy
limitado. A pesar de la designacin de RLRs como receptores citoslicos,
la seal
cascada de transduccin de iniciada tras el acoplamiento ligando es
ciertamente no cito-

Solic, pero estrictamente dependiente de la localizacin subcelular

adecuada de muchos
componentes de esta va. Los Mavs protena adaptadora y reside en
distintivamente seales de peroxisomas, MAM, y las mitocondrias ( Dixit
et al., 2010; Horner et al., 2011; Seth et al., 2005 ). El regulador
negativo
NLRX1 tambin se localiza en las mitocondrias ( Moore et al., 2008 ). En
el curso
de la infeccin, las mitocondrias se reorganizan para rodear los sitios de
replicacin viral
cin de una manera MFN1-dependiente. Si no lo hace gravemente
abroga una
respuesta antiviral ( Onoguchi et al., 2010 ). Cul es el beneficio para el
anfitrin de
117
RIG-I-like receptor de sealizacin
pgina 20
una disposicin subcelular elaborado tales de una va de transduccin de
seales?
Tal vez, el reclutamiento de molculas concentrado en un orgnulo
podra
ser ms rpido y ms eficiente energticamente que la contratacin de
cada molcula
independently.Consideringthedifferentresponsesmediatedbyperoxisomal
y mitocondrial MAVS, la distribucin de esta va en dos orgnulos
podra facilitar la orientacin de los factores requeridos especficamente
para cada una de las
respuestas. Una situacin similar se puede encontrar con TLR4, el
receptor de la
prototpico lipopolisacrido PAMP. Tal vez, un regulador positivo de la
directa
ISGinductionisonlytargetedtoperoxisomesoraninhibitorofsuchasignaling
va es locatedonmitochondria. El exemplifieshowthe va TLR4
distribucin espacial de los componentes de sealizacin regula la salida
de sealizacin.
Si bien unido a membrana plasmtica TLR4 induce la expresin de
citoquinas en una
Dependiente de MyD88 forma ( Medzhitov, Preston-Hurlburt, y Janeway,
1997;. Medzhitovetal, 1998 ), endocytosisofTLR4inducestypeIIFNinductioninaTRIF-dependentmanner ( Kaganetal, 2008;.. Yamamotoetal de
2002 ).
Para la sealizacin de TLR4, se propuso TRAF3 a ser limitados en su
movilidad. los
incapacidad de TRAF3 a ser reclutado para TLR4 en el rio membrana
plasmtica

TLR4 esfera hacen que se endocitosis. Es en el endosoma que el TRAMTRIF

adaptador de par es reclutado para participar TRAF 3, y con objeto de
tipo I IFN sealizacin
( Kagan et al., 2008 ). Del mismo modo, un factor esencial para la
induccin directa puede ISG
estar disponible exclusivamente en los peroxisomas. La evidencia
experimental para la
presencia orgnulos especficos de los reguladores de la sealizacin
viene de RLR
NLRX1. La sobreexpresin de NLRX1 inhibe la sealizacin mediada por
mitoMAVS mitocon-, pero no por MAVS peroxisomal ( Dixit et al., 2010 ). los
regulacin espacial tambin puede ser indicativo de la sealizacin de
RLR ser un multietapa
proceso, en el que en una ola inicial de una infeccin naciente se
detecta, y en un ms tarde
phasetheprocessisoptimized forarobustresponseduringinfectionandfinally
est desactivado. Para hacer frente a esta posibilidad, los estudios
cinticos en lugar de tarde
puntos finales despus de la infeccin sera de gran ayuda.
EXPRESIONES DE GRATITUD
ED es apoyado por el Erwin Schrdinger Fellowship (J3295-B22) de la
Ciencia de Austria
Fondo (FMF). Los Institutos Nacionales de Salud subvenciones de apoyo
AI093589 y DK34854 P30
el trabajo realizado en el laboratorio del Dr. JK JK tiene una
Investigadores en el
Patognesis de la concesin de Enfermedades Infecciosas del Fondo
Burroughs Wellcome.
Referencias
Ablasser, A., Bauernfeind, F., Hartmann, G., Latz, E., Fitzgerald, KA, y
Hornung, V.
(2009). deteccin RIG-I-dependiente de poli (dA: dT) a travs de la
induccin de una RNA
polimerasa III-transcrito de ARN intermedio. Nature Immunology, 10,
1065