Tema 7: Electrolitos, equilibrio cido-base y gases en sangre

1. Anlisis cuantitativo de electrolitos.

2. Medida analtica del pH en sangre y orina.
3. Determinacin de gases en sangre.

1. Anlisis cuantitativo de electrolitos

Los principales electrolitos que aparecen en el organismo son:
Cationes: Ca+2 , Mg+2 , Na+, K +
Aniones: Cl- , HCO3- , H2 PO4- , HPO4-2
Los mtodos analticos ms utilizados para su determinacin son:
1.1. Mtodos enzimticos
1.2. Espectrofotometra de absorcin atmica
1.3. Espectrofotometera de emisin de llama
1.4. Potenciometra, concretamente electrodos ion-selectivos
1.1.

Mtodos enzimticos: basados en la determinacin de

determinadas actividades enzimticas que necesitan electrolitos
concretos para ser activas.

1.2.

Espectrofotometra de absorcin atmica:

Esta tcnica es muy empleada para determinar la concentracin de Ca+2 y

Mg+2 .
El fundamento de la espectrofotemetra de absorcin atmica es la
absorcin de radiacin electromagntica por los tomos neutros
(no
excitados) en la llama.
El espectrofotmetro de absorcin atmica posee un atomizador de la
muestra que la dispersa hacia la llama. En la llama, los gases reductores
transforman los iones metlicos en tomos neutros.
M++

2 e-

Mo (estado basal)

A continuacin la llama se ilumina con radiacin electromagntica de una

longitud de onda muy especfica, procedente de una lmpara de ctodo
hueco. Los tomos en estado basal absorben la energa electromagntica de
la lmpara y efectan transiciones electrnicas del estado basal al excitado.
Mo

energa-

Mo* (estado excitado )

Las radiaciones electromagnticas que se transmiten y que no son

absorbidas llegan al monocromador. Por ltimo, el detector determina la
reduccin de intensidad luminosa del haz que procede de la lmpara de

ctodo hueco. La disminucin de intensidad ser proporcional a la

concentracin del metal en la muestra.
La espectrofotometra de absorcin de atmica es una tcnica muy sensible
(ms que la espectrofotometra de emisin de llama) puesto que a la
temperatura de la llama el 99.99% de los tomos se encuentra en estado
basal.

Espectrofotmetro de absorcin atmica

1.3.

Espectrofotometra de emisin de llama:

Esta tcnica es muy empleada para determinar la concentracin de Na +, K+

y Li+.
En la fotometra de emisin de llama se mide la radiacin electromagntica
que emite una pequea fraccin de los tomos excitados de la muestra en
la llama.
Al igual que en el caso anterior, un atomizador dispersa la muestra hacia la
llama.en la que los iones experimentan las siguientes reacciones:
M+

e-

Mo (estado basal)

llama

Mo* (estado excitado)

Mo (estado basal) + h? (emisin luminosa)

En la espectrofotometra de emisin de llama la llama cumple dos
funciones:
1. Sus gases reductores transforman iones metlicos (M +) en tomos
neutros (M o).
2. Proporciona la energa trmica necesaria para la transicin de los
electrones de unos orbitales a otros de energa superior (ej. de s a p)
favoreciendo por tanto los estados excitados (Mo* ).
El paso del estado excitado al estado basal conlleva una emisin luminosa
de una longitud de onda caracterstica para cada elemento.

Para calcular la concentracin del in se compara la intensidad de luz

emitida con la intensidad de luz emitida por una solucin de concentracin
conocida de electrolito (estndar externo). Adems existe tambin un
estndar interno que se aspira a velocidad fija y que sirve para minimizar
las alteraciones que pueden tener lugar por ejemplo por fluctuaciones en la
temperatura de la llama. As:
Respuesta relativa del problema

[problema] =

x [estndar] =
Respuesta relativa del estndar

I emisin del problema/I emisin del estndar interno

I emisin del estndar/I emisin del estndar interno

Fotmetro de llama

1.4

Potenciometra, electrodos ion-selectivos

La electroqumica utiliza la capacidad de algunas reacciones qumicas para

generar electricidad mediante la transferencia de electrones.
Una clula electroqumica est formada por:
dos conductores llamados electrodos, cada uno sumergido en una
disolucin adecuada de electrolito
un puente salino inerte para que circule la corriente elctrica
un potencimetro que mide la diferencia de potencial generada
Cuando un metal se sumerge en una disolucin de sus propios iones los
tomos del metal tienden a pasar a la disolucin como iones liberando
electrones (reaccin de oxidacin). La lmina de metal introducida en la
solucin se llama electrodo y concretamente nodo, el sistema completo se
llama semiclula.
Mo

M+ + e-

Mo
M+

M+

Con algunos metales ocurre el proceso contrario, los iones metlicos de la

disolucin toman electrones (reaccin de reduccin) y pasan a tomos
neutros que se depositan en el electrodo que recibe el nmbre de ctodo.
M+ + e

Mo

Mo
M+

M+

En ambos casos el potencial generado se encuentra en relacin directa con

la concentracin de los iones metlicos en solucin.
Una clula electroqumica est formada por dos semiclulas, una con el
ctodo y otra con el nodo. As, en la clula electroqumica el exceso de
electrones del nodo se dirige y es consumido en el ctodo. En definitiva, se
est generando una corriente elctrica. En el dibujo inferior se puede ver un
ejemplo de clula electroqumica.
ePotencimetro

Cl-

K+
Cu

Zn

Zn+

ZnSO4

O4

Cu+
2

CuSO4

En los mtodos electroqumicos se compone una clula electroqumica con

dos semiclulas denominadas electrodo indicador y electrodo de referencia.

El electrodo de referencia es una semiclula de potencial conocido y

constante, generalmente el ctodo, que se utiliza para componer una
clula con otra semiclula y obtener una diferencia de potencial
proporcional a la concentracin del electrolito al que es sensible el
electrodo indicador.
El voltaje del electrodo indicador responde proporcionalmente a la
concentracin del electrolito de inters.

La diferencia de potencial entre ambos es proporcional a la concentracin

del electrolito a la que es sensible el electrodo de referencia.
Los principales electrodos de referencia son:

El electrodo de hidrgeno/in hidrgeno: electrodo de platino en una

solucin de HCl con hidrgeno a presin atmosfrica que borbotea
sobre la superficie de platino. Es de difcil mantenimiento y por lo
tanto poco usado.
Electrodo de calomelanos: mercurio metlico en contacto con una
solucin de cloruro mercurioso (calomelanos) la cual a su vez est en
contacto con una solucin de cloruro potsico (generalmente
saturada).
Electrodo de plata/cloruro de plata: varilla de plata, recubierta de
cloruro de plata y sumergida en una disolucin de iones cloruro.

Electrodos in-selectivos (ISE)

Los electrodos in selectivos son electrodos indicadores con un mecanismo
de seleccin asociado a la membrana que los hace sensibles slo a
variaciones de potencial debidas a la concentracin de un determinado in.
Aunque no es preciso, podramos decir que el ISE es permeable frente a
un in concreto (realmente se encuentra entre dos disoluciones de diferente
concentracin: una de las disoluciones es una solucin interna con una
concentracin fija del in a medir y la otra solucin es la muestra problema.
El in se une a la cara de la membrana en la que la concentracin es menor
y se libera en la cara contraria generando un potencial).
Los principales tipos de ISE son:
Electrodos de vidrio: contienen puntos aninicos que atraen y fijan
determinados cationes, cambiando la composicin del vidrio se
consigue variar la selectividad. Ej. el utilizado para medir el pH.
Electrodos de membranas cristalinas: existen materiales que
contienen huecos catinicos para acomodar aniones de tamao y
carga adecuados. Ej. electrodo con membrana de fluoruro de lantano
para la determinacin del in fluoruro.
Electrodos de membrana lquida: membrana con un soporte slido
inerte al que se sobre el que se sita un intercambiador inico que
penetra en los poros y es responsable de la selectividad. Ej. electrodo
de potasio con membrana de valinomicina (fija potasio).
Los analizadores automticos de electrolitos suelen tener ISE y las
mediciones con stos pueden ser directas (sin dilucin previa de la muestra)
o indirectas (con dilucin previa de la muestra).
Aspectos prcticos
1. Recoger las muestras en material exento de contaminacin y de un
solo uso.
2. Salvo urgencia, las muestras se recogen en ayunas.
3. El anlisis de electrolitos en orina se hace orina de 24 horas. En el
caso de ser una muestra aislada es necesario conocer el volumen y
tiempo en que se ha producido.
4. Se prefiere suero a plasma.
5. En el caso de utilizar plasma es importante elegir bien el
anticoagulante ej. no utilizar oxalato ni EDTA en muestras en las que
se vaya a cuantificar Ca+2 .

6. Se deben rechazar muestras hemolizadas ej. aumenta la

concentracin de K+ por liberacin del in intracelular. En general se
deben procesar las muestras antes de 3h para evitar desplazamientos
del in entre el interior y el exterior de la clula.
7. Si se va a cuantificar la concentracin de K+ no se debe aplicar
torniquete al realizar la extraccin.
8. El pH sanguneo y la concentracin de determinados iones est
relacionada ej. si existe alguna alteracin del equilibrio cido-base
debe solicitarse paralelamente la determinacin del pH y Ca+2 .
2. Medida analtica del pH en sangre y orina.
El anlisis cuantitativo del pH se realiza con una clula electroqumica
constituida por un electrodo de vidrio sensible al pH y un electrodo de
referencia (ej. de calomelanos). El electrodo de vidrio para medir el
pH consta de una delgada membrana de vidrio en forma de bulbo
permeable a los H+, en cuyo interior se encuentra una solucin de
pH fijo ej. HCl 0.1M y un electrodo de plata cloruro de plata. El bulbo
est soldado a un tubo de vidrio grueso en cuyo interior est el hilo
de plata y el AgCl. El pH se determina midiendo la diferencia de
potencial a travs de la membrana de vidrio que separa la disolucin
problema de la disolucin de referencia de concentracin de H+
conocida (generalmente 0.1M). La diferencia de potencial es
proporcional a la concentracin de H+ en la disolucin. Es decir, el
pH-metro mide la diferencia de potencial y la representa en unidades
de pH. Para establecer la relacin concreta entre la diferencia de
potencial y el pH es necesario calibrar el pH-metro con dos
disoluciones de pH conocido ej. 7 y 4.

En muestras de orina es muy frecuente llevar a cabo un anlisis

semicuantitativo aproximado con un papel indicador (tiras reactivas): cido
cuya base conjugada presenta diferente coloracin, la variacin cromtica
es indicativa del pH (se compara con una escala colorimtrica de
referencia).
Las muestras deben ser frescas, conservadas en fro (no congeladas).
Con el tiempo aumenta el pH por prdida de CO2 y crecimiento bacteriano
(formacin de NH3 a partir de urea).

3. Determinacin de gases en sangre

El anlisis de gases en sangre (gasometra) tiene como finalidad evaluar el
estado cido-base y el estado de oxigenacin respiratoria del paciente.
Este anlisis incluye la determinacin del
pH: mediante un electrodo de vidrio
PO 2 : mediante el electrodo de Clark
PC O 2: mediante el electrodo de Severinghaus
Determinacin de PO 2 en sangre
La PO 2 en sangre es la presin ejercida por el O2 disuelto en el plasma y no
debe confundirse con la cantidad de O2 unido a la hemoglobina o la cantidad
total de O2 . El resultado de la determinacin se expresa en mm Hg.
Para esta determinacin se utiliza el electrodo de Clark: el oxgeno de la
muestra difunde a travs de una solucin electroltica hacia el ctodo donde
se reduce originando un cambio de intensidad de corriente entre nodo y
ctodo directamente proporcional a la PO2 .

Electrodo de Clark

Determinacin de PC O 2 en sangre
La PC O 2 es la presin ejercida por el CO2 libre en plasma. Para su
determinacin se utiliza el electrodo de Severinghaus, aplicacin especial
del electrodo para pH. El CO2 de la muestra difunde a travs de una
membrana (que slo permite el paso de CO2 ) hasta una solucin tamponada
de bicarbonato sdico originando en sta un cambio de pH que es detectado
por el electrodo de vidrio.
CO2 + H2 O

HCO3- + H+
Cambio de pH

Analizadores automticos de pH y gases

Los analizadores automticos de pH y gases son aparatos que miden el pH,
pCO2 y pO2 mediante electrodos especficos y a partir de estas medidas
calculan diversas magnitudes derivadas relacionadas con el equilibrio cidobsico en sangre. Para evitar errores en la determinacin debidos a
fluctuaciones de la temperatura la muestra se termostatiza a 37C . En estos
analizadores es necesario calibrar tanto el pH como la PO 2 y PC O 2 utilizando
disoluciones tampn de pH conocido y gases con PO 2 y PC O 2 concretas. Las
principales causas de error son:

entrada de aire en la muestra

demora al realizar el anlisis.

Monitorizacin transcutnea
Los gases sanguneos se pueden cuantificar de forma continua mediante
monitorizacin transcutnea con minielectrodos: la piel se arterioliza
utilizando calor para dilatar la microvasculatura y aumentar el flujo capilar
(sus valores de PO 2 y PC O 2 son muy similares a los de la sangre arterial)
permitiendo que el O2 y el CO2 difundan a travs de la piel.
Aspectos prcticos para la determinacin de gases y pH:
1. El paciente debe estar tranquilo y en reposo: la hiperventilacin
provoca alcalosis. Se deben evitar los torniquetes por que aumenta la
PC O 2 y disminuye la PO 2 .
2. El resultado del pH depende del tipo de muestra (capilar, arterial o
venosa). La muestra ms adecuada es la sangre arterial.
3. La muestra debe introducirse en hielo y procesarse con inmediatez
(30 minutos en determinaciones de pH y 15 minutos en
determinaciones de gases). Con el tiempo disminuye el pH y la PO 2 y
aumenta la PC O 2 . El metabolismo intraeritrocitario se puede inhibir
durante 3 horas si se conserva la muestra a 4C.
4. El anticoagulante debe ser heparina sdica.
5. Para la extraccin de la muestra se pueden utilizar jeringas de cristal
heparinizadas o jeringas de polipropileno (las de poliestireno dejan

escapar gases) y los torniquetes deben ser suaves (el torniquete

disminuye la PO 2 y el pH y aumenta la PC O 2. En la extraccin de la
muestra se debe evita la formacin de burbujas y los escapes de gas
doblando la aguja o sellndola.
Preguntas de revisin
1.
Qu muestra, suero o plasma, se suele utilizar
concentracin de un determinado electrolito? por qu?

para

analizar

la

2.
Qu electrolito vera ms afectada su concentracin en una muestra
hemolizada?
3.
El anlisis de electrolitos en orina se lleva a cabo habitualmente en una
muestra aislada?
4.
El fundamento de la espectrofotometra de absorcin atmica es:
a) absorcin de radiacin electromagntica por los tomos neutros en la llama
b) absorcin de radiacin electromagntica por los tomos excitados en la llama
c) emisin de radiacin electromagntica por los tomos neutros en la llama
d) emisin de radiacin electromagntica por los tomos excitados en la llama
5.
El fundamento de la fotometra de emisin de llama es:
a) absorcin de radiacin electromagntica por los tomos neutros en la llama
b) absorcin de radiacin electromagntica por los tomos excitados en la llama
c) emisin de radiacin electromagntica por los tomos neutros en la llama
d) emisin de radiacin electromagntica por los tomos excitados en la llama
6. En la fotometra de emisin de llama, la luz que se detecta:
a) es directamente proporcional al nmero de tomos en la llama
b) es directamente proporcional a la concentracin del in en la muestra
c) corresponde a una pequea proporcin de tomos excitados
d) a, b y c son correctas
e) a y b son correctas.
7. La llama de un fotmetro de llama:
a) equivale a la lmpara de un fotmetro de absorcin
b) equivale a la lmapara y el monocromador de un fotmetro de absorcin
c) necesita una temperatura suficiente para excitar los tomos
d) se consigue con distintos gases segn la temperatura deseada.
e) a, c y d son correctas
8. En la fotometra de llama el estndar interno se emplea:
a) introducindolo en las diluciones de estndares y problemas
b) como seal de referencia frente a la que se va a medir
c) cualquier elemento es til como estndar interno
d) a y b son correctas
e) para intensificar la seal
9.Qu mtodo es ms sensible la espectrofotometra de absorcin atmica o la
fotometra de emisin de llama? Por qu?
10. En un espectrofotmetro de absorcin atmica la lmpara de ctodo hueco:
a) es la fuente de luz en las medidas por absorcin atmica
b) est basada en la emisin de luz de longitud de onda caracterstica por un
elemento que se quiere medir

c) est construda con el elemento que se quiere medir

d) emite el espectro de lneas del elemento a medir
e) todas son ciertas
11.
Oscilaciones en la temperatura de la llama afectan principalmente a los
valores obtenidos en la:
a)
espectrofotometra de emisin de llama
b)
espectrofotometra de absorcin atmica
12.

Cmo se minimiza el efecto de dichas oscilaciones?

13.
Qu funciones cumple la llama en la espectrofotometra de emisin de
llama?
14.

Qu es un electrodo indicador?

15.

Qu es un electrodo de referencia?

16.

Cite dos electrodos de referencia

17.

Qu es un electrodo in-selectivo?

18.

Qu tipo de electrodo in-selectivo se utiliza en un pH- metro?

19.

Para qu es necesario calibrar un pH- metro?

20.
Si se quiere realizar un anlisis de gases en sangre Por qu no se puede
tomar la muestra de sangre con una jeringa de poliestireno? por qu es necesario
procesar la muestra con inmediatez?
21.
En caso de que entrara una burbuja de aire en la muestra cmo afectara al
resultado de la PO 2 y PCO2 ?
22.
Si el paciente hiperventila durante la extraccin de sangre cmo se vera
afectado el pH de la muestra? Justifique su respuesta.
23.

Cmo se determina la PC O 2? Describa el fundamento del aparato utilizado

24.

Con qu electrodo se determina la PO 2?

10