TECNICAS DE SIEMBRA

PROCEDIMIENTO
1- Esterilizar el rea donde se va a hacer la siembra.
2- Utilizar el mechero en cada paso de la siembra.
En esta prctica se llevaron a cabo en total 8 cultivos, todos con la cepa de E. coli
MEDIOS SOLIDOS:
AGAR EMB (Eosina Azul de Metileno): este medio es utilizado para el aislamiento
selectivo de bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias
nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae.
- Caractersticas: color rojo escarlata
- Proceso: Se hace en superficie del agar, por estriado a partir de un inculo poco denso,
para obtener colonias aisladas. Con la asa esterilizada en el mechero.
El rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos
Gram negativos. La diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o
sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y
azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram
positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un
caracterstico brillo metlico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con
periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras.
- Nota: la literatura dice que este agra identifica la E. coli como de color verdosas con
brillo metlico y centro negro azulado, lo que lastimosamente no se dio en la prctica.
Sabiendo con anterioridad la cepa con q se hacia el cultivo.
A.N (Agar Nutritivo): Es un Medio de cultivo utilizado para propsitos generales,
para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a
requerimientos
nutritivos.
Su uso est descrito en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y
otros materiales de importancia sanitaria.
- Caractersticas: Incoloro, transparente
- Proceso: Se hace en superficie del agar, por estriado a partir de un inculo poco denso,
para obtener colonias aisladas. Con la asa esterilizada en el mechero.
Por las caractersticas de sus componentes es un medio usado para el cultivo de

microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. No contiene

inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y
nitrgeno para el desarrollo bacteriano.
M.H (Agar Meuller Hinton): Medio de cultivo recomendado universalmente para la
realizacin de la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos.
- Caractersticas: color mbar claro.
- Proceso: Se coloca mediante estriado la bacteria en el agar, luego con un depilador de
adhieren diferentes antibiticos en el agar, para ver la reaccin de la bacteria a estos, se
aplicaron 3 antibiticos distintos.
Es utilizado como antibiograma en medio slido, debido a que presenta buena
reproducibilidad en las pruebas de sensibilidad.
MEDIOS SEMISOLIDOS
SIM (sulfuro indol movilidad): Medio semislido destinado a verificar la movilidad,
produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno por los microorganismos. Es til para
diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.
Caractersticas: color beige claro
- Proceso: El cultivo se realiza por puncin profunda utilizando un asa recta previamente
esterilizada de inoculacin recta. inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar
has la mitad del tuvo.
A partir del bisulfato de sodio los microorganismos pueden generar acido sulfhdrico
que reacciona con el hierro presente formndose un compuesto de color negro. El agar
es el agente solidificante y esta concentracin le otorga al medio la propiedad de ser
semislido, condicin necesaria para detectar movilidad que se evidencia por el
enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde ms de la lnea de siembra del
organismo d estudio.
Nota: En cuanto al movimiento el resultado fue positivo, porque la bacteria se movilizo
ms all de la puncin, pero en cuanto al color negro que indica presencia de hierro fue
negativa por que no se evidencio.
CS (Citrato Simmons): Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias en
base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa.

- Caractersticas: color verde

- Proceso: Con la asa recta previamente esterilizada en el mechero, y junto a este Estriar
la superficie del medio de cultivo.

El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de citrato

como nica fuente de carbono usan sales de amonio como fuente de nitrgeno con la
consiguiente produccin de alcalinidad.
Nota: el resultado es negativo debido a que no se observo un color azul en el cultivo,
esto confirma lo que dice la teora de que la E. coli en este tipo de cultivo presenta
ausencia de crecimiento.
TSI (Agar Hierro - Triple Azcar): Medio universalmente empleado para la
diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa,
sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico.
- Caractersticas: Color rojo
- Proceso: El cultivo en TSI se realiza, picando el fondo con el asa recta previamente
esterilizada en el mecheroy extendiendo sobre la superficie del tubo.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del
indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido. El bisulfato de
sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro
proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Nota: se obtuvieron burbujas fuera del cultivo lo que indica presencia de gas, y al
mantenerse rojo en su totalidad indica que el microorganismo no es fermentador de
azucares.
MEDIO LQUIDO
C.N (Caldo Nutritivo): medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el
desarrollo de microorganismos en escasos requerimientos nutricionales.
- Caractersticas: color mbar
- Proceso: con un hisopo me unta de muestra del cultivo puro y se introduce en el tubo,
exprimindolo en el tubo lo ms posible, este hisopo se lo pasa por el mechero y se lo
destruye para despus desecharlo.
CONCLUSIONES.
-

Dependiendo del agar donde se cultive la bacteria esta se reproducir, si sus

nutrientes y ambientes son propicios para esto.
Cada agar puede ser utilizado en condiciones como en salud, con pacientes con
infecciones o en sanidad para ver las aguas y presencia de microorganismos en
ellas, tambin en la industria lctea, con los procesos de fermentacin

BIBLIOGRAFIA

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Recuperado (13 de sep. 2013 11. 20 horas)
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