Guías Bioquimica II Enviar

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA EDUCACIN
DEPARTAMENTO DE QUMICA
REA BIOQUIMICA
Prcticas de Laboratorio de Bioqumica
UNIVERSIDAD
DEL CAUCA
Prctica: EXTRACCIN DE PIGMENTOS

MEDIANTE DISOLVENTES QUMICOS.
Gua No: 04
Pginas: 6
FOTOSINTTICOS
1. FUNDAMENTO TERICO
Se podra asegurar sin miedo a equivocarse que los pigmentos fotosintticos son la base de la vida sobre el
planeta Tierra. Son sustancias capaces de captar energa lumnica y transformarla en energa qumica mediante
la fotosntesis. Pero la captacin de energa para la funcin fotosinttica no es la nica funcin de los pigmentos
fotosintticos en las plantas. La gran variedad de sustancias que responden al concepto de pigmentos se
diferencia en su biognesis, composicin y estructura molecular, diferencias que son la causa de sus distintas
propiedades.
Los diferentes tipos de clorofilas, por ejemplo, que se dan en los distintos organismos fotosintticos presentan
pequeas diferencias que marcaron ya desde su aparicin su adaptabilidad para aprovechar la energa lumnica
en ambientes muy diferenciados.
Los pigmentos cloroflicos son los pigmentos biolgicos ms abundantes en la tierra y deben su color verde a su
capacidad de absorber las fracciones roja y azul de la luz solar, transmitiendo los dems colores cuya mezcla
2
apreciamos en diversos tonos de verde. Las hojas pueden llegar a contener hasta 1 g de clorofila m , aunque
esta concentracin es muy variable entre especies y sobre todo depende, entre otros factores, del estado
nutricional, la edad o la historia lumnica previa de la planta.
En las plantas superiores, la fotosntesis es posible debido a la presencia en el cloroplasto, concretamente en
las membranas tilacoidales, de una serie de pigmentos que tienen capacidad para captar a luz. Existen dos
tipos bsicos de pigmentos fotosintticos, (figura 1).
1.1 Clorofilas:
Compuestas por una porfirina que lleva incorporado un tomo de magnesio en el centro del ncleo tetrapirrlico.
El in Mg2+ est coordinado con los cuatro tomos de nitrgeno centrales, lo que hace de la clorofila un
complejo extraordinariamente estable. La "cabeza" que acabamos de describir, est unida a una "cola", el fitol,
que es un alcohol de 20 tomos de carbono.
Cabeza y cola se unen a travs de un enlace ster en el que intervienen el grupo alcohlico del fitol y el grupo
carboxilo de un cido propinico que est unido al anillo IV del ncleo tetrapirrlico. Existen varios tipos de
clorofilas, las ms importantes son la "a", y la "b". La clorofila a tiene un grupo -CH3 en el anillo II mientras que
la clorofila b tiene un grupo -CHO en esa misma posicin.
1.2 Carotenoides:
Actan como pigmentos accesorios en el proceso de la fotosntesis. Existen dos tipos de pigmentos
carotenoides: carotenos y xantofilas.
Los carotenos son hidrocarburos isoprenoides que no contienen oxgeno y estn formados por largas
molculas con un sistema de enlaces conjugados alternantes, dobles y sencillos, rematados en cada extremo
por un anillo de ciclohexano insaturado- tienen color amarillo-anaranjado.
Las xantofilas, son de color amarillo, tienen una estructura muy similar a la de los carotenos y su diferencia
estriba en la incorporacin de oxgeno en los extremos de la molcula. Segn el grupo que se incorpore existen
variedades dentro de las xantofilas.
Figura 1. Estructura qumica de los pigmentos fotosintticos.

En el presente laboratorio se utilizar una tcnica muy sencilla como la extraccin con solventes orgnicos de
diferente grado de polaridad para extraer los pigmentos fotosintticos presentes en diferentes materiales
biolgicos como: hojas de espinaca o acelga.
Prctica: Extraccin de pigmentos fotosintticos mediante disolventes qumicos. 2/6
2. OBJETIVOS
Extraer pigmentos fotosintticos presentes en las hojas de espinaca y acelga.
Separar clorofilas a y b, carotenos y xantofilas basndose en sus diferencias de solubilidad, que a su vez,
son una consecuencia de sus diferencias estructurales.
3. CONSULTAS PRELIMINARES
3.1 Investigue la diferencia entre pigmentos primarios y secundarios.
3.2 Cul es la estructura qumica de las ficobilinas y lutenas?
3.3 Cmo funciona un complejo antena?
3.4 Consulte otras formas para extraer pigmentos fotosintticos que sean ms eficientes que las desarrolladas
durante la prctica.
4. MATERIALES (Para 1 grupo)
MATERIALES
Mortero con mazo
Erlenmeyer de 125 mL
Probeta de 100 mL
Pro-pipeta
Pipeta graduada de 5, 10 y 20 mL
Embudo de decantacin de 250 mL
Equipo de filtracin al vaco
Gradilla
Tubos de ensayo
Esptula
Vaso de precipitados de 50 mL
CANTIDAD
1
2
1
1
1
1
1
1
5
1
1
Varilla de Vidrio
Vidrio de reloj
Frasco lavador
Embudo
1
1
1
5. REACTIVOS
REACTIVOS
Hojas frescas de espinaca o acelga
Acetona
o
o
ter de Petrleo de 60 80
Etanol al 96%
ter Etlico
Metanol acuoso al 92% v/v
Solucin de KOH al 30% en Metanol
Carbonato de Calcio
Agua destilada
CANTIDAD
50 g
50 mL
25 mL
50 mL
30 mL
25 mL
25 mL
5g
15 mL
*Remitir al manual de protocolo de riesgo/ seguridad y fichas tcnicas de seguridad.

6. EQUIPOS
EQUIPOS
Balanza Analtica
Centrfuga
CANTIDAD
1
1
* Remitir al manual de protocolo de calibracin de equipos.
7. PROCEDIMIENTO:
7.1 Extraccin
A 15 g de hojas frescas desnervadas y troceadas, se les aaden 25 ml de acetona al 100%
(preferiblemente con una pizca de Carbonato clcico para neutralizar los tejidos cidos y prevenir una
prdida parcial de Magnesio de las clorofilas) y se machaca la mezcla en el mortero.
7.2 Filtracin centrifugacin
Una vez obtenido el extracto, se filtra a travs de papel filtro Wathman # 10 o bien se centrifuga durante 3
minutos a 7000 r.p.m con objeto de eliminar los restos celulares. La solucin resultante contiene clorofilas a
y b, carotenoides y molculas incoloras solubles en acetona.
7.3 Cambio de disolvente
El siguiente paso consiste en cambiar el disolvente, acetona, por ter de petrleo. Para ello, se toman 30 ml
de ter de petrleo y se llevan a un embudo de decantacin asegrese de que este cerrada la salida! ,
se aaden 20 ml del extracto. A continuacin, y con objeto de eliminar la acetona, se aaden 35 ml de agua
destilada a la mezcla, lentamente y dejndola resbalar por las paredes. Se agita suavemente y se espera
hasta que se separen dos capas, en la superior estarn los pigmentos que se pretenden separar y en la
inferior la mezcla de acetona y agua. Se abre la llave del embudo, se recoge esta ltima capa y se
desecha. Se repite el lavado con agua dos veces ms, y en la ltima, y para asegurarse que se haya
eliminado toda la acetona, se deja escapar un pequeo volumen de la capa que contiene los pigmentos.
7.4 Adicin de Metanol
A continuacin, se aaden 25 ml de metanol acuoso del 92% y se mezcla enrgicamente, teniendo la
precaucin de destapar de vez en cuando para dejar escapar los gases acumulados. La solucin de
metanol es ms polar y densa que el ter de petrleo y ambos son inmiscibles, por lo que se formarn dos
capas:
La superior, de ter de petrleo, lleva disueltos los pigmentos ms apolares, clorofila a y Carotenos.
La inferior, de metanol, lleva disueltos los ms polares, clorofila b y xantofilas. Separa ambas capas en
dos recipientes distintos e identifica claramente cada uno de ellos.
7.5 Adicin de ter Etlico

El siguiente paso es una nueva operacin de cambio de disolvente, en este caso metanol por ter etlico.
Colocar 25 ml de la solucin de metanol que contiene la clorofila b y las xantofilas, en el embudo de
decantacin y mzclalos con 25 ml de ter etlico. Aade 15 ml de agua destilada de 5 en 5 ml, lentamente
y dejando resbalar por las paredes. Agita cuidadosamente en cada fraccin de 5 ml de agua.
7.6
Obtencin de pigmentos
Eliminar la capa acuosa inferior en la que hay metanol y agua pero no lleva ningn pigmento ya que es
demasiado polar. Al final de este proceso, todos los pigmentos disueltos en el metanol pasarn a estar
en ter etlico. Llegados a este punto, hay dos disoluciones diferentes:
7.7 Separacin de Clorofilas

El siguiente paso consiste en separar cada una de las clorofilas de su pigmento acompaante.
Esto se consigue rompiendo, mediante hidrlisis con KOH, el enlace ster que une la cola de fitol
(hidrofbica) con la cabeza porfirnica (hidrfila). De este modo, las clorofilas pasan a estar en forma de
cloroflidas.
Para la hidrlisis, se toman 15 ml de cada una de las dos soluciones y se disponen en sendos erlenmeyer.
A cada una de ellas se aaden 7.5 ml de KOH del 30% en metanol y se agita durante 10 minutos.
7.8 Obtencin de Carotenoides
Posteriormente se aaden 15 ml de agua destilada a cada erlenmeyer y de nuevo se agita durante 1
minuto.
Vierta cada una de las soluciones en sendos tubos de ensayo anchos y permite que se separen las fases.
Cada solucin de carotenoides formar una capa por encima de la de las cloroflidas en cada uno de los
tubos.
Los pigmentos obtenidos se almacenarn para la siguiente prctica.
8. OBSERVACIONES, CLCULOS Y RESULTADOS
Consigne en su cuaderno de laboratorio todas las observaciones realizadas en sta prctica. Tome nota
del color de cada uno de los pigmentos y del disolvente en el que se encuentran.
Cul es la funcin de la Acetona durante el proceso de extraccin?
9. RECUPERACIN, DESACTIVACIN Y/ ALMACENAMIENTO DE RESIDUOS

9.1 Los residuos de hojas producidos en 7.2 son biodegradables, sern depositados en la caneca destinada a
la basura.
9.2 Los residuos producidos en 7.3 correspondientes a una mezcla de Acetona: Agua sern depositados en un
frasco para posterior desactivacin mediante proceso de destilacin simple para recuperar la Acetona.
9.3 Los residuos producidos en 7.6 correspondientes a una mezcla de Metanol: Agua sern depositados en un
frasco para posterior desactivacin mediante proceso de destilacin simple para recuperar el Metanol.
10. BIBLIOGRAFA
PLUMMER, D. Bioqumica Prctica. Editorial McGraw-Hill Latinoamericana S.A. Segunda Edicin,

1988. p 335.
LAMANA, M. Prcticas de Bioqumica . Editorial Alambra. Primera Edicin, 1983. p 335.
Prctica: Extraccin de pigmentos fotosintticos mediante disolventes qumicos.6/6
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Gua No: 05
Prctica 2 : SEPARACIN DE PIGMENTOS DE HOJAS
Pginas: 4
POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA (CCF)
1. FUNDAMENTO TERICO:
La separacin de molculas a partir de materiales biolgicos es una parte importante del trabajo bioqumico,
que frecuentemente implica el aislamiento de especies moleculares de una mezcla de compuestos que tienen
propiedades muy similares.
Por lo tanto, los mtodos usualmente empleados en Qumica Orgnica no son adecuados y es necesario utilizar
tcnicas fsicas que separen molculas sobre la base de diferencias muy pequeas en sus propiedades.
Las tcnicas comunes de separacin utilizadas con mayor frecuencia son:

Dilisis.
Cromatografa de adsorcin, de particin, de intercambio inico.
Electroforesis.
Para el desarrollo de esta prctica utilizaremos la cromatografa en capa fina (CCF) la cual es una forma de
cromatografa de adsorcin slido-lquido que constituye una tcnica importante en Bioqumica para el anlisis
rpido de muestras que en algunos casos puede estar en el rango de los 9-10 g.
Frecuentemente se usa para el seguimiento de la evolucin del progreso de una reaccin, o para el control y
seguimiento de las separaciones que se producen mediante una cromatografa en columna preparativa.
Para realizar el anlisis de una muestra por CCF se utiliza un adsorbente slido como gel de slice (SiO2. H2O) o
almina (Al2O3), unido a una placa rectangular de de vidrio o plstico. El adsorbente sirve de fase estacionaria.
La CCF es una tcnica sencilla; se denomina as porque la fase estacionaria es una capa fina de una sustancia
hidroflica (slice, almina o acetato de celulosa) colocada sobre un soporte inerte. La fase mvil es una mezcla
de disolventes en diferentes proporciones que migra por la fase estacionaria en base a capilaridad dentro de un
frasco de vidrio cerrado y que se encuentra saturado de vapor de la fase mvil.
La muestra se aplica en disolucin con un capilar de vidrio en un extremo de la placa, pero no sobre el mismo
borde. A continuacin se introduce la placa en un frasco de vidrio conteniendo un disolvente o mezcla de
disolventes (fase mvil), de manera que la placa quede apoyada sobre el fondo y el punto con la muestra, por
encima del nivel del lquido, (ver figura 1).
En este tipo de cromatografa se utiliza un parmetro relacionado con el coeficiente de reparto, que se
denomina Rf. Se define como la relacin entre la distancia recorrida por la sustancia y la distancia recorrida por
la fase mvil. En el caso de esta prctica, es directamente proporcional con la solubilidad de la sustancia en la
fase mvil. Sus valores oscilan entre 0, para las sustancias insolubles, y 1 para las sustancias muy solubles en
la fase mvil y que no interacciona con la fase estacionaria.
Figura 1. Montaje de Cromatografa en Capa Fina CCF.
2. OBJETIVOS

Separar pigmentos fotosintticos por Cromatografa en Capa Fina (CCF) utilizando diferentes Fases
Mviles.
Calcular los valores de Rf obtenidos con cada Fase Mvil y compararlos con los valores reportados en la
literatura, para identificar cada pigmento.
3. MATERIALES (por grupo)

MATERIALES
Placas cromatogrficas (5 cm. x 15 cm.)
Hojas de espinacas frescas
Pro pipeta
Embudo de decantacin
Pipetas de 2 y 5 mL
Gradilla
Tubos de ensayo
Vidrio de reloj
Esptula
Cmara de revelado
Mortero con mazo
CANTIDAD
5
2
1
1
2
1
5
1
1
2
1
4. REACTIVOS
REACTIVOS
Hexano
Cloroformo
Etanol
Sulfato de Sodio anhidro
ter de petrleo (p.e. 60 - 80 oC)
Agua destilada
Acetona
Benceno
CANTIDAD
4 mL
10 mL
2 mL
5g
15 mL
15 mL
10 mL
10 mL
Prctica: Separacin de pigmentos de hojas por Cromatografa en capa fina (CCF). 2/4
5. EQUIPOS
EQUIPOS
Licuadora
Balanza Analtica
Vortex
CANTIDAD
1
1
1
1
6. PROCEDIMIENTO:
6.1 Preparacin de la muestra
En un mortero, machacar una hoja de espinaca con una mezcla de 4 ml de hexano y 2 ml de etanol. Con
una pipeta de 5 mL transferir el extracto a un tubo de ensayo y agitar suavemente con una cantidad igual de
agua, evitando la formacin de emulsiones.
Eliminar la fase acuosa con ayuda de una pipeta 5 mL, y lavar sucesivamente dos veces con 2 ml de agua
para eliminar el etanol. Transferir la fase orgnica a un tubo de ensayo y aadir con una esptula sulfato
sdico anhidro para eliminar el agua.
6.2 Preparacin de la placa de cromatografa
Marcar la placa, con ayuda de un lpiz el punto en donde se va depositar la muestra. Con un capilar, tomar
un poco de la disolucin orgnica conteniendo los pigmentos y pinchar la placa de cromatografa. Para
evitar que la mezcla difunda por la placa, vaciar el contenido del capilar poco a poco sobre el punto, y soplar
suavemente cada vez, para secar el disolvente.
6.3 Desarrollo de las placas
Preparar varias mezclas de disolventes como: Hexano, Cloroformo, Acetona, Etanol, y desarrollar las
placas. Preparar unos 10 ml de eluyente cada vez, empezando por una mezcla de Hexano/Acetona 7:3.
Una buena separacin revela la presencia de al menos 4 puntos coloreados:
Pigmento
Carotenos
Clorofila a
Xantofilas
Clorofila b
Color
Naranja
Verde Azulado
Amarillo
Verde

Consigne en su cuaderno de laboratorio todas las observaciones realizadas en sta prctica.

Dibujar en cada caso la placa con los resultados obtenidos.
Calcular el Rf de cada uno de los puntos obtenidos.
Indicar cual sera la mezcla de disolventes ms adecuada para realizar la separacin.

8.1 La fase acuosa producida en 6.1 podr ser derramada por el vertedero.
8.2 Los residuos de solventes utilizados como fases mviles en 6.2 pueden ser reutilizados nuevamente.
9. BIBLIOGRAFA
HARCOURT, GILBERT & MARTIN. Experimental Biochemistry, 3th Edition, 1989. p 171.
PLUMMER, D. Bioqumica Prctica . Editorial McGraw-Hill Latinoamericana S.A. Segunda

Edicin, 1988. p 335.
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Gua No: 06
Prctica: SEPARACIN DE PIGMENTOS DE HOJAS POR
Pginas: 3
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
6. INTRODUCCION
En 1906, el botnico ruso Mikhail Tswett (1872-1919) formaliz el uso de la cromatografa en estudios
cientficos, aplicndola a la separacin de los pigmentos naturales que se encuentran en las plantas (conocidos
como carotenoides y clorofilas). Adems le dio ese nombre a la tcnica.
Tswett empac una columna de vidrio vertical (de unos cuantos centmetros de dimetro) con material
adsorbente. Luego, por la columna vertical verti una solucin que contena la mezcla de pigmentos
provenientes de las hojas molidas de una planta. Pasados unos minutos, el material empacado en la columna
haba adquirido una coloracin diferente por segmentos. Es decir, haba logrado la separacin de los pigmentos
naturales de la planta. En cada segmento de color definido haba un pigmento diferente.
La cromatografa es una tcnica muy empleada para separar e identificar los componentes de una mezcla. La
separacin se basa en la diferente interaccin de cualquier soluto con dos fases, una conocida como fase
estacionaria, generalmente slida, y otra denominada fase mvil, que puede ser lquida o gaseosa. Debido a
procesos como adsorcin en la fase slida, solubilizacin y arrastre por la fase mvil etc., cada soluto se
distribuye entre las dos fases con un coeficiente de reparto caracterstico. Este coeficiente depende de la
naturaleza de las fases y de los solutos, o componentes de la mezcla a separar.
Una muestra que se introduce en la fase mvil es transportada a lo largo de la columna que contiene una fase
estacionaria distribuida.
Las especies de la muestra experimentan interacciones repetidas (repartos) entre la fase mvil y la fase
estacionaria. Cuando ambas fases se han seleccionado en forma apropiada los componentes de la muestra se
separan gradualmente en forma de bandas en la fase mvil. Al final del proceso los componentes separados
emergen en orden creciente de interaccin con la fase estacionaria. El componente menos retenido emerge
primero, el retenido ms fuertemente eluye al ltimo. El reparto entre las fases aprovecha las diferencias entre
las propiedades fsicas y/o qumicas de los componentes de la muestra. Los componentes adyacentes (picos)
se separan cuando el pico que sale despus es retenido lo suficiente para impedir la sobreposicin con el pico
que emergi antes.
Una amplia gama de seleccin de materiales para las fases mvil y estacionaria, permite separar molculas que
difieren muy poco en sus propiedades fsicas y qumicas. En un sentido amplio, la distribucin de un soluto
entre dos fases es el resultado del balance de fuerzas entre las molculas del soluto y las molculas de cada
fase. Refleja la atraccin o repulsin relativas que presentan las molculas o iones de las fases competidoras
por el soluto y entre s. Estas fuerzas pueden ser de naturaleza polar, proviniendo de momentos dipolares
permanentes o inducidos, o pueden deberse a fuerzas de dispersin del tipo London.
En el presente experimento se efectuar una separacin de pigmentos vegetales a partir de hojas de espinaca
con el fin de evaluar el contenido en clorofilas y carotenos.
7. OBJETIVOS
Separar pigmentos fotosintticos por Cromatografa en columna de Almina: Carbonato de Calcio:

Sacarosa; utilizando como fase mvil una mezcla de Benceno y ter de petrleo (1: 4).
11
1.1

MATERIALES
Columnas cromatogrficas (20 cm x 1 cm)
Hojas de espinacas frescas
Embudo en V
Embudo de separacin
Erlenmeyer de 100 mL
Erlenmeyer de 20 mL
CANTIDAD
1
3
1
1
1
5
9. REACTIVOS
REACTIVOS
Almina
Carbonato de Calcio
Sacarosa, puede usarse tambin azcar refinada
Sulfato de Sodio anhidro
o
ter de petrleo (p.e. 60 - 80 C)
Metanol
Benceno
CANTIDAD
50 g
20 g
20 g
10 g
100 mL
30 mL
20 mL
10.
EQUIPOS
EQUIPOS
Licuadora
Plancha de calentamiento
CANTIDAD
1
1
1
11.
11.1
PROCEDIMIENTO
Extraccin
Homogenice las hojas en la licuadora, aadiendo 5 mL de agua destilada.
11.1.2 Extraiga luego el homogenizado agitndolo con 13 mL de una mezcla de ter de petrleo, metanol y
benceno (9: 3: 1).
11.1.3 Filtre la suspensin para separar los restos vegetales y recoja el filtrado en un embudo de separacin de
100 mL.
11.1.4 Remocin del Metanol
Adicionar al filtrado 13 mL de agua destilada agitando suavemente con el fin de remover el Metanol. Se
forman 2 capas. Remueva la capa acuosa (Metanol: Agua) y recoja la capa orgnica en un erlenmeyer
de 100 mL. Repita ste procedimiento 2 veces ms. Remueva los remanentes de agua aadiendo
Sulfato de Sodio anhidro. Concentre el extracto mediante evaporacin cuidadosa en un extractor de
gases, hasta reducir el volumen a unos pocos mL.
Prctica: Separacin de pigmentos de hojas por cromatografa en columna. 2/3
12
11.2
Preparacin de la columna
11.2.1 Empaque la columna con Almina (5 cm.), Carbonato de Calcio (7 cm), y Sacarosa (7 cm) colocando un
disco de papel filtro entre cada adsorbente. Se puede aplicar succin en el extremo inferior de la columna
para aligerar el empacado.
11.2.2 Humedezca el material de la columna en ter de petrleo.
11.2.3 Lave la columna con varios volmenes del amortiguador usado para la elucin: una mezcla de benceno y
ter de petrleo (1: 4).
11.3
Separacin y elucin de los pigmentos

Cuando el amortiguador haya salido de la columna y la parte superior de la resina se halle completamente
seca, agregue el extracto y elyalo con el solvente. Si el flujo es muy lento, aplique ligera presin sobre la
columna. Recoja las fracciones.
Identifique las fracciones recogidas mediante color y asigne de sta manera a qu tipo de pigmento
corresponde.
Compare las estructuras qumicas de los Carotenoides y las clorofilas, prediga el grado de polaridad y el
orden de elucin segn la fase mvil utilizada.

8.1 Los residuos de hojas producidos en 6.1.3 son biodegradables, sern depositados en la caneca destinada a
la basura.
8.2 La fase acuosa generada en 6.1.4 se puede eliminar por el vertedero.
8.3 El material utilizado para el empaquetamiento de la columna (Almina, Carbonato de Calcio y Sacarosa se
lavarn con la mezcla de solventes usados en la cromatografa de forma tal que se recuperen y puedan
utilizarse posteriormente.
8.4 Las fracciones recogidas en 6.3 una vez identificadas sern depositadas en el frasco 4.
9. BIBLIOGRAFA
WILLARD, H, H., Instrumental Methods of Analysis, Wadsworth, Inc., U.S.A., 1988.
Handbooks of Amersham Pharmacia Biotech: Ion Exchange Chromatography, Affinity

Chromatography, Hydrophobic Interaction Chromatography, Reversed Phase Chromatography,
Sweden, 2002.
Prctica: Separacin de pigmentos de hojas por cromatografa en columna.3/3
13
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REA BIOQUIMICA
Gua No: 7
Prctica: PRODUCCIN DE ALMIDN DURANTE LA
Pginas: 4
FOTOSNTESIS
12. INTRODUCCION
Una de las caractersticas esenciales de la vida es el consumo de energa, ya que todos los procesos vitales
slo se producen si disponen de ella. Todos los vegetales obtienen esa energa de la luz solar.
En ellos, el proceso de captacin y transformacin de dicha energa en compuestos biolgicamente
aprovechables (alimento-energa) se denomina fotosntesis.
Las plantas poseen pigmentos fotosintticos, los cuales tienen la capacidad de absorber energa de la luz solar
y cederla para la elaboracin (sntesis) de hidratos de carbono (almidn) a partir de dos compuestos disponibles
en el medio: agua (H2O) y dixido de carbono (CO2).
Este proceso fotoqumico produce adems, oxgeno (02) que es liberado a la atmsfera y tiene fundamental
importancia para la vida en general, ya que permite cumplir el proceso respiratorio.
La fotosntesis es un proceso que se desarrolla en dos etapas (ver figura 1):
Fase Lumnica:
La primera etapa de la fotosntesis es la absorcin de luz por los pigmentos. La clorofila es el ms
importante de stos, y es esencial para el proceso. Captura la luz de las regiones violeta y roja del
espectro y la transforma en energa qumica mediante una serie de reacciones.
Los distintos tipos de clorofila y otros pigmentos, llamados carotenoides y ficobilinas, absorben longitudes
de onda luminosas algo distintas y transfieren la energa a la clorofila A, que termina el proceso de
transformacin. Estos pigmentos accesorios amplan el espectro de energa luminosa que aprovecha la
fotosntesis.
De manera general en este proceso se utiliza la energa lumnica para fabricar ATP y molculas
portadoras de energa NADPH reducido, a usarse en la segunda etapa.
Fase Oscura Ciclo de Calvin- Benson:

La reaccin en la oscuridad tiene lugar en el estroma o matriz de los cloroplastos, donde la energa
almacenada en forma de ATP y NADPH se usa para reducir el dixido de carbono a carbono orgnico.
Esta funcin se lleva a cabo mediante una serie de reacciones llamada ciclo de Calvin, activadas por la
energa de ATP y NADPH. Cada vez que se recorre el ciclo entra una molcula de dixido de carbono,
que inicialmente se combina con un azcar de cinco carbonos llamado ribulosa 1,5-difosfato para formar
dos molculas de un compuesto de tres carbonos llamado 3-fosfoglicerato. Tres recorridos del ciclo, en
cada uno de los cuales se consume una molcula de dixido de carbono, dos de NADPH2 y tres de ATP,
rinden una molcula con tres carbonos llamada gliceraldehdo 3-fosfato; dos de estas molculas se
combinan para formar el azcar de seis carbonos glucosa. En cada recorrido del ciclo, se regenera la
ribulosa 1,5-difosfato.
14
Por tanto, el efecto neto de la fotosntesis es la captura temporal de energa luminosa en los enlaces
qumicos de ATP y NADPH por medio de la reaccin en presencia de luz, y la captura permanente de esa
energa en forma de glucosa mediante la reaccin en la oscuridad.
En el curso de la reaccin en presencia de luz se escinde la molcula de agua para obtener los electrones
que transfieren la energa luminosa con la que se forman ATP y NADPH. El dixido de carbono se reduce
en el curso de la reaccin en la oscuridad para convertirse en base de la molcula de azcar. La ecuacin
completa y equilibrada de la fotosntesis en la que el agua acta como donante de electrones y en
presencia de luz es:
6 CO2 + 6 H2O + Luz solar
clorofila
Glucosa + 6 O2
El producto final de la fotosntesis depende la especie de la planta, pero la mayora de las hojas
almacenan los carbohidratos en forma de grnulos de almidn.
La luz visible es esencial para que se produzca la fotosntesis y en ausencia de radiacin no se sintetiza
almidn, esto puede demostrarse en el experimento siguiente, cubriendo la mitad de la hoja con papel
aluminio y tiendo con yodo para demostrar la presencia de almidn despus de que se haya extrado
la clorofila.
Figura 1. Fase lumnica y oscura de la fotosntesis.
Prctica: Produccin de almidn durante la fotosntesis. 2/4
15
13. OBJETIVOS
Reconocer la importancia de la luz durante el proceso fotosinttico.
Evaluar la cantidad de almidn producido en hojas sometidas a la presencia y ausencia de luz, utilizando
como indicador solucin de yodo/yoduro.
14.
MATERIALES (por grupo)

MATERIALES
Papel de aluminio
Planta de hojas verdes cultivada a la sombra
Caja de petri
Perforador de corchos
15.
CANTIDAD
1 hoja
2 hojas
4
1
REACTIVOS
REACTIVOS
Solucin de Yodo (0.1 mol/L en KI, 30 g/L).
Solucin diluida de Yodo (5mmol/L en KI 30 g/L).
Agua destilada
Etanol (tipo industrial).
CANTIDAD
5 mL
5mL
50 mL
50 mL
16.
EQUIPOS
EQUIPOS
Lmparas de mesa con bombillo de 100 W
17.
CANTIDAD
1
1
PROCEDIMIENTO
6.1 Cubra la mitad de la hoja de la planta con papel de aluminio y expngala a la luz solar con un bombillo de
100 W a una distancia de 60-90 cm durante 24 horas.
6.2
Al da siguiente descubra la hoja usando un perforador de corcho, corte discos de 1-2 cm de dimetro de
las 2 partes de la hoja. Coloque los discos en una caja de petri con agua caliente hasta que se ablanden
las paredes celulares, descarte el agua por el vertedero y transfiera los discos a otra caja de petri que
contiene Etanol caliente. Extraiga la clorofila de los discos sobre la plancha de calentamiento (sea
cuidadoso, posibilidad de incendio).
6.3 Si el Etanol presenta una fuerte coloracin, repita la operacin anterior hasta que se haya extrado toda la
clorofila.
6.4 Transfiera el disco a una caja de petri que contenga solucin diluida de yodo. Compare la forma en que se
han coloreado los discos tomados de cada una de las dos partes de la hoja.
6.5 Otra forma de realizar ste experimento consiste en teir la hoja de una planta jaspeada (tal como el coleo)
con Yodo. En ste caso, el almidn debe estar presente solo en las porciones verdes, demostrando la
necesidad de la clorofila para la fotosntesis.
16
Compare la produccin de almidn en la hoja expuesta y la hoja no expuesta a la luz. De qu forma

puede deducirlo?

8.1 Los residuos de Etanol producidos en 6.3, sern depositados en el frasco 4.
8.2 La solucin de Yodo/ Yoduro utilizada en 6.4, puede reutilizarse en una prctica posterior.
9. BIBLIOGRAFA
HARCOURT, GILBERT & MARTIN. Experimental Biochemistry, 3th Edition. p 171.

Edicin, 1988. p 335.
17
UNIVERSIDAD
DEL CAUCA

REA BIOQUIMICA
Gua No: 8-9
Prctica: CAPACIDAD REDUCTORA DE LOS
Pginas: 6
CLOROPLASTOS AISLADOS. BIOSNTESIS
FOTOSINTTICA DE ALMIDN
18. INTRODUCCION
Los cloroplastos son componentes celulares que contienen los pigmentos verdes clorofila a y b, as como
carotenoides de color anaranjado y xantofilas amarillas, son caractersticos de los seres auttrofos (los que
producen su propio alimento mediante fotosntesis), que poseen la maquinaria enzimtica para transformar la
energa solar en energa qumica, a travs de la fotosntesis.
Estos orgnulos son caractersticos de las clulas del mesfilo foliar (parte de la hoja donde suele dar la luz),
poseen una doble membrana que los asemeja a las mitocondrias por tener una membrana externa y otra
interna pero esta es lisa; el espacio delimitado por la membrana interna est ocupado por un material amorfo
(sin forma), parecido a un gel, rico en enzimas, denominado estroma. Ver figura 1.
Figura 1. Estructura general de los cloroplastos.
Los estromas contienen las enzimas que realizan la fijacin o reduccin del CO2, convirtindolo en
carbohidratos, como el almidn. La membrana interna de los cloroplastos tambin engloba un tercer sistema de
membranas, que consta de sacos planos llamados tilacoides, en los cuales la energa luminosa se utiliza para
oxidar el agua y formar ATP (compuesto rico en energa) y NADPH (poder reductor), usados en el estroma para
convertir el CO2 en carbohidratos. En ciertas partes de los cloroplastos, los tilacoides se disponen como
monedas apiladas, denominados grana, pero en el estroma permanecen aislados.
Los cloroplastos tienen forma elptica, con un dimetro de 5 a 10 mm y su nmero puede variar de 20 a 100 por
clula vegetal. Ellos responden directamente a la energa solar, para llevar a cabo la fotosntesis, orientndose
perpendicularmente a los rayos de luz; sin embargo s la energa lumnica es muy fuerte, se disponen de tal
forma que la radiacin incida oblicuamente, recibiendo menos luz.
18
En las plantas, los cloroplastos se desarrollan a partir de unos orgnulos pequeos e incoloros que se llaman
proplastos, esta reaccin es disparada por la presencia de luz, que provoca la diferenciacin del plastidio,
apareciendo los pigmentos y la proliferacin de membranas, que origina los tilacoides y grana. A medida que las
clulas se dividen en las zonas en que la planta est creciendo, los proplastos que estn en su interior tambin
se dividen por fisin.
De este modo, las clulas hijas tienen la capacidad de producir cloroplastos. En el estroma del cloroplasto se
encuentran pequeos pedazos circulares de ADN, dispuestos en doble hlice (parecidos al ADN de las
mitocondrias y bacterias). El ADN del cloroplasto regula la sntesis del ARN ribosomal, del ARN de transferencia
y de la Ribulosa 1,5 difosfato carboxilasa-oxigenasa, enzima que cataliza la fijacin del CO2 en la fotosntesis.
Sin embargo, la mayora de las protenas del cloroplasto, son sintetizadas en el citosol y transportadas al
cloroplasto.
Esta capacidad que tienen los cloroplastos para reproducirse a s mismos, y su estrecha similitud, con
independencia del tipo de clula en que se encuentren, sugieren que estos orgnulos fueron alguna vez
organismos autnomos que establecieron una simbiosis en la que la clula vegetal era el husped.
En la siguiente prctica, se utiliza un lisado de cloroplastos, obtenido por rotura osmtica de los mismos, para
estudiar el efecto de la luz sobre su capacidad reductora observadas por los cambios en el color del indicador
de oxidorreduccin: 2,6-diclorofenol-indofenol sdico, al tiempo que se produce oxgeno.
Se puede comprobar tanto el efecto de la intensidad de la luz sobre la velocidad de reduccin del pigmento
como la diferente eficiencia observada en el sistema frente a la utilizacin de luz de distintas longitudes de
onda.
El estudiante debe correlacionar los resultados con ste experimento y sus conocimientos acerca del
funcionamiento de la fotosntesis en cuanto a la influencia de la longitud de onda de la luz captada. Estos datos
de eficiencia de reduccin del 2,6-diclorofenol-indofenol sdico se pueden tambin relacionar con los espectros
de absorcin de las clorofilas y de los pigmentos accesorios.
En el mismo sentido, se observa la influencia de la luz sobre la capacidad fotosintetizadora de la planta
completa y cloroplastos aislados, el experimento, efectuado con el vegetal completo, revelndose con Yodo la
acumulacin de almidn en las zonas ms verdes de las plantas.
Puede ser interesante repetirlo con hojas de plantas variegadas es decir, plantas que presentan en sus hojas
diversos colores (ver figura 2), debido a una falta de clorofila y son mucho ms delicadas que cualquier otro tipo
de ejemplar, ya que son ms propensas a contraer plagas y enfermedades que las plantas de hoja verde.
Figura 2. Hojas variegadas
Prctica: Capacidad reductora de los cloroplastos aislados. Biosntesis fotosinttica de almidn. 2/6
19
El almidn se sintetiza temporalmente en el interior del cloroplasto cuando se produce una iluminacin intensa
de la planta en presencia de suficiente anhdrido carbnico y cofactores; las reacciones del ciclo de Calvin son
directamente dependientes para su funcionamiento de la disponibilidad de material reductor (NADPH) y ATP
reducidos en el cloroplasto por efecto de la luz; de este modo la oscuridad impide la sntesis de cantidades
suficientes de almidn como para que puedan ser detectadas con el mtodo sugerido aqu.
19. OBJETIVOS
Comprobar el efecto de la intensidad de la luz sobre el proceso de la fotosntesis en un vegetal completo

y en cloroplastos aislados.
Comprobar la diferente eficiencia observada en el sistema frente a la utilizacin de luz de distintas

longitudes de onda.
Estudiar la importancia de la longitud de onda de la luz percibida como modo de comprobacin del escaso
margen de utilizacin de la luz solar por las plantas.
MATERIALES
Hojas de espinaca
Arena de mar fina lavada al cido
Papel Celofn: amarillo, verde, rojo, azul
Papel aluminio
Mortero y mazo
Gradilla
Pro pipeta
Pipetas de 5 y 10 mL
Tubos para centrfuga
Tubos de ensayo
Varilla de agitacin
CANTIDAD
2 hojas
150 g
1 hoja
1 hoja
1
1
1
2
5
5
1
21. REACTIVOS
REACTIVOS
NaCl al 2% en un tampn de TRIS- HCl 0.01 M, pH 7.3.
NaCl al 0.15 %
HCl 6 N
Solucin de 2,6-diclorofenol-indofenol sdico al 0.02%
Tampn de TRIS- HCl 0.01 M, pH 7.3. Preparado a partir de una solucin
0.01 M de TRIS a la que se aade suficiente HCl 6 N gota a gota hasta
alcanzar el pH adecuado)
CANTIDAD
50mL
50 mL
10 mL
10 mL
Tampn de fosfatos: Fosfato disdico / Fosfato monosdico, 0.1 M, pH 7.3

Solucin de bicarbonato de sodio 0.05 M.
Etanol al 96%
Solucin de yodo/yoduro
Solucin Sulfato de amonio 0.03 M.
50 mL
10 mL
30mL
10 mL
10 mL
50 mL

Prctica: Capacidad reductora de los cloroplastos aislados. Biosntesis fotosinttica de almidn. 3/6
20
22.
EQUIPOS
EQUIPOS
Centrfuga
Colormetro
CANTIDAD
1
1
23.
PROCEDIMIENTO
6.1 Capacidad reductora de los cloroplastos aislados

6.1.1 Todo el procedimiento debe llevarse a cabo en fro, por lo que las operaciones se realizarn con los
o
tubos en un bao de hielo en una cmara fra a 4 C. Se tomarn unos 10-15 g de espinacas
frescas (la calidad del material es esencial; deben ser frescas y no presentar enfermedades,
sequedad, etc.) y se quitan con tijeras los tallos y nervaduras, dejando solo el tejido verde oscuro y
tierno de las hojas.
6.1.2 En un mortero (dejado previamente en el congelador para que se enfri hasta justo este momento) se
vierten 2 ml del medio de disgregacin (compuesto por NaCl al 2% en un tampn de TRIS- HCl 0.01
M, pH 7.3. El tampn es preparado a partir de una solucin 0.01 M de TRIS a la que se aade
suficiente HCl 6 N gota a gota hasta alcanzar el pH adecuado), tambin fro; los trozos de hoja de
espinaca finamente cortados y una cucharadita de arena de mar fina lavada al cido.
6.1.3 Con el mazo se van machacando las hojas con cuidado hasta que quede solo una pasta verdosa
homognea; se filtra el conjunto a travs de una doble capa de media de nylon para separa la arena y
los trozos de tejido intacto.
6.1.4 El filtrado se centrifuga en tubos anchos a muy baja velocidad (2-3 minutos a no ms de 250 r.p.m),
descartndose el precipitado pastoso constituido fundamentalmente por arena, clulas enteras y
fragmentos celulares.
6.1.5 Con una pipeta Pasteur se recogen los sobrenadantes, descartndose el lquido situado unos 5 mm
por encima del precipitado.
6.1.6 El sobrenadante se pasa a otros tubos fros en los que se centrifugan 5 minutos a unas 1000-1500
r.p.m, con el fin de sedimenten los cloroplastos.
6.1.7 El sobrenadante se descarta y el precipitado se resuspende en el medio utilizado para la disgregacin.
Con una pipeta Pasteur pueden tomarse muestras y observarse al microscopio.
6.1.8 La suspensin de cloroplastos puede utilizarse en la misma sesin en la que son preparados para la
determinacin de la produccin de almidn por efecto de la luz.
6.1.9 Una parte de la suspensin de cloroplastos es lisada por choque hipoosmtico con NaCl al 0.15%,
utilizando unos 20 volmenes de solucin salina por cada uno de los cloroplastos sedimentados, se
acelera la rotura mediante el suave agitado con una varilla de vidrio.
6.1.10 En un tubo de lectura de colormetro se introducen 0.25 mL de 2,6-diclorofenol-indofenol sdico al
0.02%, 4.5 mL de tampn de fosfatos 0.1 m, pH 7.3 (preparado con 7.365 g de fosfato monosdico
y 27,368 g de fosfato disdico cristalizado en 1 L de disolucin) y 0.1 ml de la suspensin de
cloroplastos, mezclando el conjunto suavemente por inversin; es aconsejable introducir el 2,6diclorofenol-indofenol sdico al final, para una ms efectiva sensibilidad del mtodo.
Prctica: Capacidad reductora de los cloroplastos aislados. Biosntesis fotosinttica de almidn.4/6
21
6.1.11 Los tubos as preparados se dejan a unos 24 cm de una bombilla de 100 W y se va leyendo las
densidades pticas en el colormetro a intervalos de 1 minutos cada 30 segundos a 650 nm,
frente aun blanco que contenga todos los componentes excepto el 2,6-diclorofenol-indofenol sdico.
6.1.12 Otro tubo de la serie es recubierto mientras se mantiene frente a la bombilla con 2 capas de papel
celofn de color amarillo; otro tubo con celofn rojo; otro, verde; otro, azul; y por ltimo, otro tubo se
mantiene cubierto con papel aluminio.
6.1.12 Comprobar las diferencias en la velocidad de reduccin del indicador de oxidorreduccin por efecto
de la longitud de onda de la luz.
6.1.13 Repetir el experimento bsico, pero incluyendo ahora 0.1 ml de Bicarbonato de Sodio 0.05 M
(3.51g/L), 0.1 mL de Sulfato Amnico 0.03 M (3.96g/L) al contenido de los tubos.
Comprubese si los resultados en cuando a la velocidad de reduccin del 2,6-diclorofenol-indofenol.
6.2 Produccin de almidn en las plantas verdes por efecto de la luz

6.2.1 En vegetal completo:
A una planta verde, de hojas no demasiado elpticas, se le recubre cuidadosamente 1 hoja con papel
aluminio, de modo que no reciba luz se sujeta en su lugar con cinta adhesiva; al da siguiente, se sita la
planta a luz directa del sol durante unas pocas horas (2-5), pasadas las cuales se corta la hoja cubierta de
aluminio y a otra hoja iluminada por el sol, introducindose ambas durante 1 2-3 minutos en etanol
hirviendo en un bao de agua caliente- si las hojas son demasiado voluminosas pueden utilizarse trozos
pequeos cortados con tijeras.
Una vez muerto el tejido, lavada la clorofila y fijado el almidn por la ebullicin en etanol, se sacan las hojas
y se sumergen en poco agua fra que contenga unas gotas de solucin yodo/yoduro.
La hoja expuesta a la luz ha podido sintetizar almidn, mientras que la que ha permanecido en la oscuridad
carece prcticamente de l.
La experiencia puede repetirse recubriendo las hojas con papel de celofn de diversos colores (2 gruesos
de papel en cada caso), comprobando el efecto de la longitud de onda de luz incidente sobre la produccin
de almidn por la planta.
6.2.2 En cloroplastos aislados:

6.2.2.1 Se toma 1 mL de la solucin de cloroplastos en tampn de TRIS- HCl 0.01 M, pH 7.3. y se diluye
con el mismo tampn a 4.5 mL; se aaden a continuacin 0.5 mL de bicarbonato de Sodio 0.05 M y
se dejan 2.5 mL en un tubo envuelto en papel aluminio durante 2-5 horas frente a una luz intensa
(luz solar directa o un foco potente a poca distancia).
6.2.2.2 Pasado el tiempo de iluminacin, tomar 2 mL del contenido de cada tubo y verterlo sobre 5 mL de
Etanol hirviendo (en bao de agua caliente), agitando bien para un eficaz mezclado; el conjunto se
filtra a travs de papel filtro.
6.2.2.3 Los filtros hmedos conteniendo los precipitados son tratados con gotas de solucin de yodo/yoduro
para investigar la presencia de almidn.
22
6.2.2.4 Tambin en este caso puede investigarse la accin del In amonio, aadiendo 2 gotas de Sulfato de
Amonio 0.03 M (3.96 g/L) a cada tubo, as como el efecto de la distinta longitud de onda sobre la
actividad del cloroplasto como la experiencia con hojas enteras.


Determine el efecto de la utilizacin de diferentes longitudes de onda sobre la eficacia del proceso
fotosinttico.
Cul es la diferencia de utilizar cloroplastos aislados en vez de la planta entera?

8.1 Los residuos de tallos y nervaduras producidos en 6.1.1 son biodegradables, sern depositados en la
caneca destinada a la basura.
8.2 La arena y los trozos de tejido intacto generados en 6.1.3 y 6.1.4 pueden ser eliminados en la caneca
destinada para la basura.
8.3 Los sobrenadantes generados en 6.1.4, 6.1.6 y 6.1.7 se diluyen en agua destilada y eliminan por el
vertedero.
8.4 Las soluciones utilizadas en 6.1.10 sern depositadas en el frasco de residuos 9.
8.5 Las soluciones utilizadas en 6.1.11 a 6.1.15 se depositarn en el frasco 1.
8.6 Los residuos de Etanol generados en 6.2.1 sern depositados en el frasco 4; mientras que la solucin de
Yodo/Yoduro ser depositada en el frasco 1.
8.7 Los residuos generados en 6.2.2.2 sern depositados en el frasco 4.
8.8 Los residuos generados en 6.2.2.4 sern depositados en el frasco 9.
8.9 El papel filtro en el cual se realiz el ensayo 6.2.2.3 puede depositarse en la caneca destinada para la
basura.
9. BIBLIOGRAFA

Edicin, 1988. p 335.
23
UNIVERSIDAD
DEL CAUCA

REA BIOQUMICA
Gua No: 10
Prctica: METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
Pginas: 5
FERMENTACIN DE LA GLUCOSA POR LEVADURA DE
PANIFICACIN
24. INTRODUCCION
La levadura de panificacin (habitualmente, Sacharomyces cerevisiae) es capaz de glucolisar la glucosa hasta
Etanol en condiciones anaerobias y hasta dixido de carbono en condiciones aerobias. En nuestro caso, se
estudiar el transcurso de la Gluclisis en condiciones Anaerobias, observando la produccin de una cantidad
considerable de gas, lo que nos permite seguir la reaccin con respecto al tiempo, una vez transcurridos los
momentos inIciales de falta de produccin de gas, en los que la levadura consume poco oxigeno disuelto en el
medio para Glucosilar aerbicamente.
El ambiente reductor en el interior del recipiente de fermentacin se puede comprobar por los cambios de color
en el indicador de oxidorreduccin incorporado a este fin (2,6- diclorofenol-indofenol).
Con el sencillo dispositivo de fermentacin que se describe se estudia el efecto que sobre la produccin de gas
tiene la adicin de trazas de cobre (toxico para la levadura), de un cambio importante en el pH y del acido
ascrbico, un potente agente reductor (el efecto sobre el 2,6- diclorofenol-indofenol en este caso es obviamente
inmediato).
Tambin se observara el efecto de otros agentes txicos como el Tolueno, el cual facilita la autolisis por la
rotura de las membranas.
Tambin se estudiara la capacidad fermentativa del planteamiento bsico de suspensin de levaduras sobre
diferentes azucares, comprobando la formacin del gas y, en su caso, la velocidad de formacin del gas, as
como los cambios en el ambiente de oxidorreduccin. Tambin en todos los casos se identificara la presencia
de Etanol mediante la reaccin del yodoformo.
Este estudio de la fermentacin alcohlica se compara con la fermentacin lctica por Lactobacillus del yogurt,
fermentacin en la que no se desprende gas debido a que el producto final de la misma es Acido Lctico
(molcula de 3 Carbonos) cuya presencia se comprobara en el extracto fermentado.
25. OBJETIVOS
Estudiar la gluclisis va anaerobia y los productos generados por esta como lo son: Etanol en el caso de
la levadura y cido lctico en el caso del Lactobacillus.
Utilizando varios sustratos (glucosa, sacarosa, almidn, entre otros), demostrar cul de estos es ms fcil
de asimilar por el microorganismo utilizado en cada caso.
Utilizar diferentes medios de cultivo y determinar la influencia de cada uno de estos en el proceso de
fermentacin.
24
26. MATERIALES
MATERIALES
Levadura de panificacin
Yogurt libre de azcar
Jeringas de 10 mL
Vasos de precipitados de 20 mL
Vaso de precipitados de 250 mL
Pipetas de 2 y 5 mL
Pro pipeta
Pipetas de 5 y 10 mL
Tapn de caucho
Gradilla
Tubos de ensayo
Varilla de agitacin
CANTIDAD
1 sobre
1 vaso
10
8
1
3
1
2
1
1
5
1
27. REACTIVOS
REACTIVOS
Acetato de Cobre 0.5 N
Hidrxido de Sodio 0.5 M
Agua destilada
cido Ascrbico al 1%
Suspensin de 0.1 mL de Tolueno en 0.9 mL de agua destilada
Solucin de fructosa al 5%
Solucin de galactosa al 5%
Solucin de sacarosa al 5%
Solucin de almidn al 5%
Solucin de glucosa al 5%
Carbonato de sodio
Etanol al 96%
ter Etlico
Solucin de Cloruro Frrico
Tampn de Acetato 0.2 M, pH 5.5 (hervido recientemente con el fin de reducir al
mnimo el contenido de oxigeno disuelto y preparado con 12.112 g de Acetato
de Sodio Cristalizado y 0.78 mL de acido Actico glacial en 500 mL de agua
destilada, a los que se aade 1 mL de solucin de 2,6-diclorofenol-indofenol al
0.2%
Solucin de Yodo/ Yoduro
CANTIDAD
50 mL
50 mL
50 mL
50 mL
50 mL
50 mL
50mL
50 mL
50 mL
50 mL
10 g
10 mL
10 mL
20 mL
100 mL
20 mL
28.
EQUIPOS
EQUIPOS
Balanza analtica
CANTIDAD
1
1
25
Prctica: Fermentacin de glucosa por levadura de panificacin. 2/5
29.
PROCEDIMIENTO
6.1 Fermentacin de la Glucosa por levadura de Panificacin

6.1.1 Preparar una suspensin de 0.5 de levadura de panificacin fresca en 10 mL de glucosa al 5% (recin
preparada) en tampn de Acetato 0.2 M, pH 5.5. y adicione 1 mL de agua destilada.
La suspensin se prepara agitando con una varilla de vidrio hasta que se homogenice, procurando que no
entre aire en la solucin.
6.1.2 Inmediatamente despus de preparada, se toman 3 mL de la suspensin con una jeringa de plstico
transparente de 5 o 10 mL provista de una aguja gruesa. Se enrasa exactamente con el embolo hasta 3
mL y se clava el conjunto como lo indica la figura 1.
Figura 1. Incubacin de levadura de panificacin con glucosa en jeringuillas de plstico. La produccin

de gas mueve el mbolo; los cambios de volumen se leen directamente en la escala de la jeringuilla.
6.1.3 A intervalos de tiempo (recomendable cada 15 minutos), se va tomando nota del volumen de aire de la
jeringa (la diferencia con respecto a los 3 mL es el volumen de gas producido) y del color de la
suspensin. Es importante utilizar jeringas cuyo embolo cierre hermticamente y sea de fcil
desplazamiento, ya que, de lo contrario, las lectura de gas producido pueden resultar alteradas debido a
la sobrepresin en el interior de la jeringa.
La produccin de gas no es inmediata, ya que la levadura consume el poco oxigeno disponible, primero
mediante la oxidacin aerbica de la glucosa. El color del indicador de oxidorreduccin indica el ambiente
redox del interior de la jeringa (azul= alcalino, rosado= acido; coloreado= oxidado, incoloro= reducido).
6.1.4 Hgase un grafico de los mililitros de gas producido (eje de las ordenadas), frente al tiempo (eje de las
abscisas), indicando en el mismo los cambios de color observados.
6.1.5 Repita la operacin utilizando el mismo planteamiento experimental pero sustituyendo el agua destilada de
la mezcla inicial por:
1.
2.
3.
4.
1 mL de Acetato de Cobre, 0.5 M (92,77 g/L).

1 mL de Hidroxido de Sodio 0.5 N (20 g/L).
1 mL de Acido Ascrbico al 1%.
Suspensin de 0.1 mL de Tolueno en 0.9 mL de agua destilada.
6.1.6 Repetir el procedimiento bsico sealado anteriormente (6.1.1 a 6.1.5), pero sustituyendo la solucin de
glucosa por diversos azucares: a) fructosa, b) galactosa, c) sacarosa, d) almidn, y observe los
resultados.
26
Prctica: Fermentacin de glucosa por levadura de panificacin. 3/5
6.1.7 Repetir el procedimiento utilizando otra cepa de microorganismos como Lactobacillus en lugar de
Sacharomyces. Para ello se sustituye la levadura de panificacin por un peso doble de yogurt natural
fresco
6.2 Determinacin de la presencia de Etanol
6.2.1 Fermentar al menos durante 1 hora la mezcla de levadura de cerveza y glucosa en tampn de Acetato
(bajo condiciones de anaerobiosis).
6.2.2 Filtrar el conjunto, recogindose un filtrado claro del que se separa una parte de alcuota de 2 mL y se le
aaden 0.2 g de Carbonato de Sodio finamente pulverizado.
o
6.2.3 Tras disolverlos, se ponen los tubos en bao de agua a 70 C y se van aadiendo gotas de solucin de
Yodo/Yoduro concentrada, hasta que ya no desaparezca el color del Yodo.
6.2.4 Llegado este punto, se dejan unos 2 minutos ms en el bao y luego se enfran en un bao de agua fra;
se apreciar la formacin de un precipitado de color amarillo de Yodoformo de olor caracterstico, que
puede recogerse por filtrado.
6.2.5 Es conveniente incluir en la serie para la determinacin de la presencia de Etanol un patrn con Etanol,
adems de un blanco de agua destilada.
6.3 Determinacin de la presencia de Acido Lctico
El Acido Lctico presente en el fermentado del Lactobacillus puede determinarse mezclando partes iguales de
fermentado con ter Etlico y agitando intensamente el conjunto; al separarse las fases se recoge una porcin
de 1 mL de la fase etrea y se le aade un volumen igual de solucin diluida de Cloruro Frrico.
El Lactato frrico formado confiere al conjunto un intenso color verde-amarillento. Compruebe la reaccin con
un patrn de Acido Lctico y un blanco de agua.
Determine el efecto de la utilizacin de diferentes medios de cultivo sobre el proceso fermentativo.
Determine la eficacia del proceso dependiendo del tipo de sustrato utilizado.
Consulte otros tipos de fermentacin y su aplicacin industrial.
Elabore un grafico de los mililitros de gas producido (eje de las ordenadas), frente al tiempo (eje de las
abscisas), indicando en el mismo los cambios de color observados.
Explique la no produccin de gas y tome nota de los cambios de color experimentados por el indicador en
funcin del tiempo.

Todos los residuos generados en sta prctica sern depositados en el frasco 1.
9. BIBLIOGRAFA
Edicin, 1988. p 335.
27
CARACTERIZACION DE LAS FRACCIONES OBTENIDAS APARTIR DE DIFERENTES TEJIDOS,

UTILIZANDO REACCIONES CARACTERISTICAS DE CARBOHIDRATOS, LIPDOS, PROTEINAS Y
ACIDOS NUCLEICOS
1-2-3
Ricardo Bentez Bentez
2.1 OBJETIVOS:
Investigar la presencia de carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos en los diferentes tejidos del
animal empleado, utilizando para ello reacciones cacteristicas de cada uno de los componentes anteriores.
2.2 FUNDAMENTO TEORICO:
2.2.1. Carbohidratos:
Los organismos vivos contienen carbohidratos que pueden estar formando polisacridos de reserva,
pueden ser componentes estructurales o pueden estar participando en el metabolismo en forma monomerica.
Las propiedades qumicas de tales compuestos permiten diferenciarlos, as:
-
Los polisacridos son solubles en soluciones acuosas cidas, pero insolubles en etanol.
Los polisacridos como el almidn-amilosa y amilopectina-, el glicgeno y los dextranos, forman

compuestos coloreados caractersticos cuando se combinan con yodo molecular, A pesar de que la
naturaleza de estos complejos no esta bien definida, evidencia indican la formacin de complejos de
absorcin entre las cadenas helicoidales del polisacrido y el yodo. Para que haya estructura helicoidal se
necesita por lo menos una cadena de 8 monosacridos.
Los polisacridos que a todo lo largo de su molcula muestran estructura helicoidal, dan coloracin azul
intensa, Ej. La amilasa.
Aquellos que son ramificados con hlices interrumpidas, producen coloraciones menos intensas. Ej. La
amilopectina. Los altamente ramificados con segmentos cortos de ramificacin, producen color pardo o rojizo,
ejemplo el glicgeno.
-
Reaccin de Molisch
Un azcar tratado con alfa-naftol y cido sulfrico concentrado, produce una coloracin violeta. Se
postula que el cido sulfrico acta como deshidratante con la formacin de derivados de furfural que
reacciona con el alfa-naftol para dar productos coloreados.
Reaccin de Benedict
Azucares reductores tratados con solucin alcalina suave (citratocarbonato sdicos) de ion cuprico (Cu+2),
lo reducen a oxido cuproso (Cu2O) de color ladrillo.
2.2.2. lpidos
En cuanto a la solubilidad,
solventes orgnicos.
los
lpidos
son
insolubles
en
agua
pero
solubles
en
- Los triglicridos tratados con hidroxi amina en medio bsico, dan los cidos hidroxamicos , y estos con
hierro ferrico (fe) forman un complejo de color vino tinto de hidroximato ferrico.
28
- Los hidroxiesteroides (esteroles) con instauracin en los carbonos 5, 6, reaccionan con anhidro actico
para dar esteres, que con cido sulfrico concentrado se deshidratan para producir un color rosado que
cambia a prpura, azul verdoso y finalmente verde.
- Los fosfolipdos por accin del NaOH de hidrolizan produciendo glicerol, jabones de sodio, fosfato
orgnico etc. El fosfato inorgnico con cido molbdico da fosfomolibdato, que por accin de reductores
como el 1, 2, 4-aminonaftol sulfonco o el cido ascrbico, produce complejos de xidos de molibdeno
de color azul.
Los jabones resultantes de la hidrlisis alcalina tratados con ter precipitan (son insolubles en ter) y en
el sobrenadarte queda el glicerol. Cuando este sobrenadarte se evapora el bao maria, el residuo que
resulta de predisuelve en agua caliente, se acidifica con HCL, si los jabones no se haban separado
totalmente, los cidos grasos de tales jabones aparecen en una capa insoluble en agua. Al evaporar la
capa acuosa, disolver el residuo en etanol, la adicin de sulfato de cobre seguida de NaOH 0.1 N, debido
a que los grupos (-CHOH)n reaccionan para formar complejos con iones metlicos, se formara un quelato
de cobre de color verde segn esta reaccin:
2.2.3. cidos nucleicos

Los lcalis diluidos (0.3 a 1.0 N), hidrolizan los enlaces ester 5 fosfato de cidos ribonucleicos (RNAs).
En cambio enlaces ester del cido deso-ribonuclico (DNA) son relativamente estables, lo mismo que los
enlaces N- glicosidicos de ambos cidos. La facilidad de la hidrlisis alcalina en el RNA parece estar
asociada a la presencia de grupos OH unidos a los carbonos 2`y 3`de la ribosa, que permite la formacin
del intermediario cclico 2`, 3`fosfodiester, el cual hidroliza finalmente para dar mezcla de los 2`y los
3`monofosfonucleotidos, con prevaleca del ultimo. El DNA contiene el azcar de oxi-ribosa que por no
llevar OH en el carbono 2`esta en incapacidad de formar el di ster cclico 2`, 3, lo que explica la
estabilidad de tal cido hacia el alcalino, precipita el DNA intacto.
Los nucletidos obtenidos en la hidrlisis anterior, fluorecen si se exponen a la accin de la luz

ultravioleta.
Los nucletidos de RNA y DNA debido a la presencia de las pentosas ribosa y deso-ribosa
respectivamente, dan los siguientes test para pentosas:
Si una pentosa en solucin cida se calienta, fcilmente se produce furfual.
- Test de la benzidina:
En presencia de cido actico glacial y calor, la benzidina y las pentosas reaccionan para dar una solucin
coloreada de rojo cereza estable. En las mismas condiciones las hexosas dan productos coloreados de
amarillo a pardo. Prueba positiva es dada por riboflavina y cidos nucleicos. El test es altamente especfico
para pentosas.
Test de Bial del orciol:

Es importante en determinacin de pentosas y nucletidos que las contiene.
No es pues especifico para pentosas. Las 2-de oxipentosas, 6-deoxipentosas, cidos hexuronicos, triosas y ciertas
heptosas producen color azul brillante idnticos.
29
Si el reactivo de orcinol se prepara sin agregar hierro ferroso, reacciona con el furfural derivado de la pentosa,
dando un producto de condensacin de color azul. Una interpretacin de lo que puede suceder seria la siguiente
secuencia de reacciones:
De otra parte, el furfural producido de pentosas reacciona con solucin alcohlica de orcinol en presencia de
hierro ferroso para dar un complejo de hierro coloreado de verde.
2.2.4. Protenas
- desnaturalizacin: puede definirse como cualquier cambio en la estructura de la protena nativa que no
rompe enlaces peptidicos. Agentes denaturantes tales como cidos o bases, calor por encima de los 50 o
C, agitacin, rayos X, oxidacin o reduccin, urea etc., actan rompiendo enlaces de hidrogeno,
afectando puentes salinos, oxidando o reduciendo enlaces disulfuro etc. Dando un compuesto que posee
conformacin y propiedades diferentes que las exhibidas por la protena nativa. La desnaturalizacin
puede ser un proceso reversible. Si la protena existe como una molcula que tiene dos o mas cadenas
peptidicas, es probable que su denaturacin no sea reversible, pero cuando se mueve el agente
denaturante se formaran nuevos enlaces en las cadenas. Las protenas desnaturalizadas tendrn expuestos
mas enlaces peptidicos, grupos sulfidrilos, grupos p-hidroxifenilo etc., que las protenas nativas. Asi por
medio de test simples es posible distinguir entre las dos.
- Milln
Test especifico para grupos hidroxifenilo que pueden nitrarse fcilmente. Protenas que contienen
tirosina, reaccionan con el reactivo (mercurio disuelto en cido ntrico concentrado), produciendo
nitroderivados mercuriales de color rosado o rojizo.
- Ninhidrina
La ninhidrina en caliente reacciona con alfa- aminocidos libres y con protenas, proteosas. Peptonas y
ppticos para dar complejos de color violeta. El test constituye una de las reacciones conocidas ms
general y mas sensible para la deteccin cualitativa de protenas y sus productos de hidrlisis.
Aparentemente todos los aminocidos obtenidos de la hidrlisis de protenas dan la reaccin de la
ninhidrina; sin embargo los colores dados por aminocidos diferentes varan en tonalidad y profundidad.
El color obtenido (prpura de Ruheman) se forma por la reaccin entre el amoniaco desprendido en la
primera etapa, una molcula de ninhidrina en estado oxidado y otra molcula de ninhidrina reducida, tal
como se muestra en la siguiente secuencia:
30
La prolina y al hidroxipolina, que no contienen en sus molculas grupos amino, con ninhidrina en
caliente dan productos de diferente tipo y color.
- Biuret
El test de Biuret (sulfato de cobre diluido en lcali fuerte) es dado por todos los compuestos que
contienen dos o ms enlaces peptidicos. La intensidad del color producido (violeta) es una medida del
numero de enlaces peptidicos presentes en la protena. La reaccin no es especifica de modo absoluto
para los enlaces peptidicos, pues cualquier compuesto que con tenga dos grupos carbonilos unidos por un
tomo de nitrgeno o de carbono, da resultado positivo. Dipptidos y aminocidos ( con excepcin de
serina y treonina ) no dan esta reaccin. La explicacin del complejo de coordinacin formado se da en
la pagina 1.
- Reaccin Xantoproteica
Esta reaccin se basa en la nitracin del anillo bencnico por el cido ntrico concentrado en caliente,
con produccin de derivados de color amarillo de nitro benceno. Las protenas que contienen tirosina y/o
triptofano dan el color amarillo que cambia a naranja brillante por adiccin de suficiente NaOH hasta
que la solucin sea fuertemente alcalina. El cambio de coloracin, del amarillo en solucin cida a
naranja brillante en solucin alcalina, constituya prueba positiva.
La nitracin de la fenilalanina es mas difcil, pues tambin requiere la presencia de H2SO4 que obra
como catalizador.
2.3. REACTIVOS
Etanol
HCL 2 N
Solucin de lugol
Reactivo de Molisch
H2SO4 concentrado
Reactivo de Benedict
ter etlico
NaOH al 15% y 10 %
Hidroxilamina al 5% en etanol
FeCL3 al 5%
Cloroformo
Anhdrido actico
31
cido molibdico
cido 1, 2,4 amino naftol sulfonico o cido ascrbico (150 mg /100 ml).
Bencidina al 4% en cido actico glacial
KOH 2 N en etanol
Reactivo de millon
Ninhidrina al 0.2%
Reactivo de Biuret
HNO3 concentrado
NaOH o NH4OH concentrados
Almidn al 0.1%
Glucosa al 0.1%
Triglicridos
Colesterol
Lecitina
Albmina al 0.1%
Glicina al 0.1%
Tirosina al 0.1%
Solucin de una pentosa al 0.1%
2.3.
PROCEDIMIENTO
Con las muestras M1, M2, M3, M4 y M5 obtenidas en la practica anterior, se harn las siguientes pruebas de
caracterizacin.
2.4.1.
Carbohidratos
Muestras M1 y M2 y patrones de mono y polisacridos.
Lugol
A una fraccin 0.5 ml de cada una de las muestras, agregarles tres gotas de solucin de lugol. Observar las
coloraciones.
A otras fracciones 0.5ml iguales de los mismos compuestos, adicionar a cada una 1 ml de HCl 2N y
colocarlas en bao maria durante 25 minutos. Enfriar al chorro y agregar cono antes tres gotas de lugol.
Anotar los resultados y explicarlos en el informe.
Molisch
A una nueva fraccin 1ml de los compuestos anteriores agregar a cada una 1 ml de agua destilada y dos
gotas de reactivo de molish. Mezcle. Inclinar el tubo de ensayo y cuidadosamente adicionar a cada uno 1
ml de cido sulfrico concentrado de modo que se forme una capa de cido debajo de la fase acuosa.
Anotar el color del anillo formado en la interfase de las dos soluciones.
Benedict
A fracciones 1ml de muestras y patrones en tubos de ensayo, adicione a cada uno 2 ml de reactivo de
Benedict y mezcle. Colocarlos por dos minutos en agua hirviente. Observar los resultados. Continuar el
calentamiento en agua en ebullicin hasta 15 minutos ms. De nuevo observar los tubos.
2.4.2.
lpidos
Muestra M3 y patrones de lecitina, colesterol y triglicridos.
cidos hidroxamicos
32
A cada una de las fracciones 1ml de muestras y patrones, adicionar 1ml de solucin de Hidroxilamina al
10%, a la cual se le ha incorporado 0.01% del indicador timolftaleina. Agregar lentamente solucin de
NaOH al 10% hasta alcanzar una coloracin azul permanente. Calentar en bao maria por diez minutos,
enfriar al chorro y adicionar HCL al 10% lentamente y con agitacin, hasta desaparicin del color azul,
mas dos gotas del mismo cido en exceso. Agregue por ultimo unas 5 gotas de solucin de FeCL3 al 5%.
Observar los cambios de coloracin que se presentan y anotar los resultados.
Prueba de Lieberman Burchard
A cada fraccin de muestras y patrones, agregar 3 ml de cloroformo anhidro y mezclar bien. Adicionar
luego 1 ml de anhidro actico, agitar.
Con el tubo inclinado agregar con cuidado por las paredes, 3 gotas de cido sulfrico concentrado.
Observar la coloracin al minuto y a los 15 minutos. Explicar.
Saponificacin
A cada cantidad anloga a la que se tomo en el ensayo anterior de cada fraccin, agregar 3ml de Nao h al
15%. En la boca de cada tubo poner una esfera de vidrio y colocar todo en bao maria durante 20 minutos.
Adicionar al final 5 ml de ter etlico. Filtrar los jabones resultantes.
Fosfatos
A 1 ml del filtrado anterior acidificado con HCL al 10% (comprobar con papel indicador la acidez)
agregar 1 ml de cido molibdico. Mezclar bien y dejar en reposo 10 minutos. Adicionar enseguida 0.5 ml
de cido 1,2,4 aminonaftol sulfonico o en su defecto 1 ml de solucin de cido ascrbico. Observar la
coloracin que se desarrolla.
2.4.3.
cidos Nucleicos
A una fraccin de la muestra M5 correspondientes a los cidos nucleicos, adicionar 3 ml de KOH 2 N y
poner en la boca del tubo de ensayo una esfera de vidrio. Colocar el tubo en bao de maria durante 30
minutos. Acidifique la solucin con HCL al 10% (pruebe con papel indicador) y observe si se forma
precipitado. En caso tal, separe el precipitado por centrifugacin.
Pentosas
A 0.5 ml de sobrenadarte anterior, adicione 0.5 ml de solucin de bencidina al 0.4% en cido actico
glacial, ponga una bola de vidrio en la boca del tubo y caliente la solucin al bao maria durante 10
minutos.
Observar la coloracin. Repita la prueba con 0.5 ml de una solucin con un patrn de pentosa.
2.4.4.
protenas
Muestra M4 y patrones de protena y aminocidos.
Millon
A una fraccin de la muestra de los patrones, suspendidas en 1 ml de agua destilada, agregue 3 gotas de
reactivo de Millon. Caliente por unos minutos en bao de agua hirviente. Observe el color del precipitado,
anote los resultados.
Ninhidrina
A una fraccin de la muestra y los patrones, agregue 1 ml de solucin de ninhidrina al 0.2%. Caliente en
bao de agua en ebullicin durante 10 minutos. Observe el color y anote.
33
Biuret: Tome una fraccin de la muestra y patrones y agregue a cada uno 1 ml de reactivo de biuret.
Mezcle. Espere 10 minutos y observe las coloraciones. Compare con un blanco usando agua destilada y 1
ml de reactivo.
Xantoproteica
Caliente con cuidado fracciones de la muestra y patrones con 1 ml de cido ntrico concentrado incoloro.
Enfre y observe las coloraciones. Con cuidado agregar a cada tubo de ensayo un exceso de hidrxido
amonico concentrado. Observe la interfase.
2.5. CALCULOS Y RESULTADOS
2.5.1. Tabule los resultados de las reacciones de color.
2.5.2. De acuerdo con ellos, deduzca que tipo de carbohidrato, polisacrido, aminocidos en las protenas,
lpidos y cidos nucleicos estn presentes en el tejido.
2.5.3. Explique la reaccin entre el reactivo de lugol, fracciones de carbohidratos y patrones, antes y despus
del tratamiento con HCL 2 N.
2.5.4. Porque el colesterol no es saponificable?
2.5.5. Escriba las reacciones correspondientes a las diferentes pruebas realizadas en esta prctica.
2.6. BIBLIOGRAFIA
2.6.1. CLARK JOHN M. (1984): Experimental Biochemistry , pg. 12, 64, 65, 75, 95, 129.
2.6.2. DANIEL L. y A. L. NEAL (1967): Laboratory experiments in Biochemistry, pg. 20, 21, 57, 131,
281, 282.
2.6.3. RENDINA G. (1974): tcnicas en Bioqumica aplicada, pg. 115, Edit. Interamericana.
2.6.4. LITWCK G. (1960): Experimental Biochemistry, pg. 21, 23, 26, 27.Jhon wiley and sons, Inc. New
York.
2.6.5. PLUMER D. T. (1981) Introduccin a la Bioqumica prctica, Editorial McGraw- Hill
Latinoamericana, S.A.
34

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Prctica: EXTRACCIN DE PIGMENTOS

Figura 1. Estructura qumica de los pigmentos fotosintticos.

Prctica: Extraccin de pigmentos fotosintticos mediante disolventes qumicos. 2/6

Extraer pigmentos fotosintticos presentes en las hojas de espinaca y acelga.

*Remitir al manual de protocolo de riesgo/ seguridad y fichas tcnicas de seguridad.

* Remitir al manual de protocolo de calibracin de equipos.

7.5 Adicin de ter Etlico

Prctica: Extraccin de pigmentos fotosintticos mediante disolventes qumicos. 4/6

7.7 Separacin de Clorofilas

Prctica: Extraccin de pigmentos fotosintticos mediante disolventes qumicos. 5/6

Cul es la funcin de la Acetona durante el proceso de extraccin?

9. RECUPERACIN, DESACTIVACIN Y/ ALMACENAMIENTO DE RESIDUOS

PLUMMER, D. Bioqumica Prctica. Editorial McGraw-Hill Latinoamericana S.A. Segunda Edicin,

LAMANA, M. Prcticas de Bioqumica . Editorial Alambra. Primera Edicin, 1983. p 335.

Prctica: Extraccin de pigmentos fotosintticos mediante disolventes qumicos.6/6

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Figura 1. Montaje de Cromatografa en Capa Fina CCF.

3. MATERIALES (por grupo)

*Remitir al manual de protocolo de riesgo/ seguridad y fichas tcnicas de seguridad.

* Remitir al manual de protocolo de calibracin de equipos.

7. OBSERVACIONES, CLCULOS Y RESULTADOS

Consigne en su cuaderno de laboratorio todas las observaciones realizadas en sta prctica.

8. RECUPERACIN, DESACTIVACIN Y/ ALMACENAMIENTO DE RESIDUOS

PLUMMER, D. Bioqumica Prctica . Editorial McGraw-Hill Latinoamericana S.A. Segunda

LAMANA, M. Prcticas de Bioqumica . Editorial Alambra. Primera Edicin, 1983. p 335.

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Separar pigmentos fotosintticos por Cromatografa en columna de Almina: Carbonato de Calcio:

8. MATERIALES (por grupo)

*Remitir al manual de protocolo de riesgo/ seguridad y fichas tcnicas de seguridad.

* Remitir al manual de protocolo de calibracin de equipos.

Separacin y elucin de los pigmentos

Consigne en su cuaderno de laboratorio todas las observaciones realizadas en sta prctica.

8. RECUPERACIN, DESACTIVACIN Y/ ALMACENAMIENTO DE RESIDUOS

WILLARD, H, H., Instrumental Methods of Analysis, Wadsworth, Inc., U.S.A., 1988.

Handbooks of Amersham Pharmacia Biotech: Ion Exchange Chromatography, Affinity

Prctica: Separacin de pigmentos de hojas por cromatografa en columna.3/3

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Fase Oscura Ciclo de Calvin- Benson:

6 CO2 + 6 H2O + Luz solar

Figura 1. Fase lumnica y oscura de la fotosntesis.

Prctica: Produccin de almidn durante la fotosntesis. 2/4

Reconocer la importancia de la luz durante el proceso fotosinttico.

MATERIALES (por grupo)

*Remitir al manual de protocolo de riesgo/ seguridad y fichas tcnicas de seguridad.

7. OBSERVACIONES, CLCULOS Y RESULTADOS

Consigne en su cuaderno de laboratorio todas las observaciones realizadas en sta prctica.

Compare la produccin de almidn en la hoja expuesta y la hoja no expuesta a la luz. De qu forma

8. RECUPERACIN, DESACTIVACIN Y/ ALMACENAMIENTO DE RESIDUOS

HARCOURT, GILBERT & MARTIN. Experimental Biochemistry, 3th Edition. p 171.

PLUMMER, D. Bioqumica Prctica . Editorial McGraw-Hill Latinoamericana S.A. Segunda

LAMANA, M. Prcticas de Bioqumica . Editorial Alambra. Primera Edicin, 1983. p 335.

Prctica: Produccin de almidn durante la fotosntesis. 4/4

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA EDUCACIN

Figura 1. Estructura general de los cloroplastos.

Figura 2. Hojas variegadas

Comprobar el efecto de la intensidad de la luz sobre el proceso de la fotosntesis en un vegetal completo

Comprobar la diferente eficiencia observada en el sistema frente a la utilizacin de luz de distintas

20. MATERIALES (por grupo)

Tampn de fosfatos: Fosfato disdico / Fosfato monosdico, 0.1 M, pH 7.3

*Remitir al manual de protocolo de riesgo/ seguridad y fichas tcnicas de seguridad.

* Remitir al manual de protocolo de calibracin de equipos.

6.1 Capacidad reductora de los cloroplastos aislados

6.2 Produccin de almidn en las plantas verdes por efecto de la luz