Dra. Ela Alvarado A.

CONTENIDO
1- REVISION

DE LOS CIDOS NUCLEICOS: organizacin,

2- ARN : TRANSCRIPCIN Y SNTESIS DE PROTENAS

3- EL GEN: naturaleza y propiedades.
4-EL CDIGO GENTICO NUCLEAR: propiedades.
5-El ADN MITOCONDRIAL: Mapa del ADNm

6-VARIACIN EN LA EXPRESIN DE LOS GENES: penetrancia y

expresividad, pleitropa, heterogeneidad gentica y expresividad .
7- MTODOS Y TCNICAS DEL ADN :
* Tcnicas de Southern Blood, PCR,
* El ADN recombinante : aplicaciones
8-EL GENOMA HUMANO : Mapeo de cromosomas, mapa gentico y
mapa fsico.

9- LAS MUTACIONES : Tasa de mutacin, mutaciones a nivel

molecular, clasificacin de las mutaciones

MODELO DE UN CROMOSOMA HUMANO MOSTRANDO SUS

NIVELES DE ORGANIZACIN

3,000000,000 pb

Red de difraccin
del ADN (izquierda)
y del ARN (derecha)
Maurice Wilkins

Curvatura
superficial

Curvatura
profunda

Las hlices con sus escalones

codificados est lista para
dividirse

REPLICACIN
DEL

A D N

Al abrirse nuevas unidades de

cdigo
convergen hacia ella.

Las nuevas unidades se juntan

A las resultantes de la divisin
Segn el Cdigo.

De la hlice original empiezan

A formarse dos hlices
Independientes.

5- Terminado el proceso resultan

dos hlices exactamente iguales
a la original

1- Los componentes son: La barra codificadora creada por la hlice, Las

unidades de transferencia de 3 pas,
y las piezas protenicas.

La barra codificadora se acerca a las

unidades de transferencia y a las partes
protenicas.

Las unidades de transferencia encuentran a las partes

protenicas esperadas por la barra codificadora

Las unidades llevan las partes

protenicas con direccin a la
barra codificadora

Las unidades se aferran a la barra. Uniendo las partes

protenicas en el orden prescrito por el cdigo.

6- La protena terminada se separa del

Sistema de cdigo con que fu fabricada

COMPONENTES DE LOS ACIDOS NUCLEICOS

BASES:
A. PURICAS
ADENINA
(6-aminopurina)

GUANINA
(2-amino-6-oxipurina)

B.PIRIMIDICAS

TIMINA
(5-metio-2,4-dioxipiridina)

URACILO
(2,4-dioxipirimidina)

CITOCINA
2-oxi-4-aminopirimidina

COMPONENTES DE LOS ACIDOS NUCLEICOS

AZUCARES
DNA contiene
desoxirribosa
RNA contiene
ribosa

FOSFATO

DESDE LOS
GENES A LAS
PROTEINAS

UNIDAD DE TRANSCRIPCION DEL ADN

(Cadena peptdica de la Globina Humana)

RNA
SPLICING

TRADUCCIN Y SNTESIS DE PROTENAS

EL CODIGO GENETICO NUCLEAR

PROPIEDADES DEL CDIGO GENTICO

1. Es universal

2. Es degenerado
3. Es lineal
4. La unin de bases es especfica
5.- Es un cdigo de tripletes
6. El codn que inicia un gen el AUG (metionina)
7.Los codones de terminacin de un gen son: UUA, UAG, UGA.
8. Es variable
9. Es estable
10-Es una estructura totalmente decifrada (se basaron en la
sntesis de cadenas de polinucltidos desiguales, ej. UUU- Phe-.

EL GEN: PROPIEDADES
Capacidad de dirigir la formacin de una rplica exacta
de s mismos.
Capacidad de mutar, esto es, de sufrir alteraciones sin
perder la capacidad de reproducirse.
Capacidad de dirigir la formacin de enzimas u otras
protenas.

En cada opern se diferencian dos clases de genes

1.-Genes estructurales codifican enzimas (E1, E2, E3, ...)
2.-Gen regulador, codifica una protena represora (PR) que puede encontrarse en
la forma activa (PRa) o inactiva PRi). Agente que controla la expresin.
Adems otras regiones:
Promotor (P), zona donde se une la ARN polimerasa.
Operador (O), zona reconocida por la proteina represora activa. Cuando la PRa
se une al O, bloquea el avance de la ARN polimerasa.

VARIACIONES EN LA EXPRESION DE LOS

GENES
Penetrancia y Expresividad :
* Penetrancia : Capacidad del gen para alcanzar una
expresin.
Penetrancia reducida : Algunos individuos que
poseen el genotipo apropiado no expresan este
carcter.Ejm.Retinoblastoma (tumor ocular m.)HAD
* Expresividad : Gama de fenotipos que proceden de
un determinado genotipo.
Expresividad variable: Ejm. Neurofibromatosis tipo
I, Campodactilia, Fibrosis qustica, Osteognesis I.

RETINOBLASTOMA
( Penetrancia reducida)

EXPRESIVIDAD VARIABLE:
( Campodactilia )

EXPRESIVIDAD VARIABLE : Albinismo

 Pleitropa : (Un gen varios efectos).

* Genes pleitrpicos: Efectos fenotpicos mltiples
causados por un solo gen mutante o por un par de
genes.
- Sndrome de Marfn (mutacin de un solo gen
produce patologa en ojos esqueleto y sistema
cardio
vascular) Cromosoma 15q (gen codificador de la
fibrilina).
- Fibrosis qustica: ( puede afectar glndulas
sudorparas pulmones y pncreas).Cromosoma 7q31
- Anemia de clulas falciformes.(eritrocitos ,hueso y
bazo)

PLEITROPIA : S. de Marfan

 Heterogeneidad

: (Varios genes un solo

efecto)

* Osteognesis Imperfecta : ( AD y AR) Mutacin de genes causa

estructura anormal de la triple hlice del procolgeno.
Codificado por 2 genes ( crom.17 y otro en el crom.7 ).
Sndrome de Waardenburg :(sordera profunda infantil con
alteraci pigmentarias causados por diferentes genes recesivos en
diferentes loci.(padres recesivos tienen hijos de3 tipos : todos
sordos, todos oyentes y otros sordos y oyentes).
Heterogneidad en las diferentes distrofias musculares:
- Duchenne y tipo Becker ligados a X,
- Distrofia muscular risomlica AR ,
- Distrofia muscular facioescpulo humeral AD.
(con formas frustradas, unas ms severas que otras.)

HETEROGENEIDAD GENETICA:
(varios genes un solo efecto) Osteognesis I

HETEROGENEIDAD GENETICA
( S. de Waardenburg )

HETEROGENEIDAD :
(En las distrofias musculares)

CARACTERES LIMITADOS POR EL SEXO

( Pubertad precoz )

Nios afectados son mas altos que los de su edad, pero pronto interrumpen
su crecimiento y son bajos). Difcil de diferenciar de la HR ligada a X.

CARACTERES LIMITADOS POR EL SEXO

(S. de Feminizacin testicular)

Frmula cromosomica : 46, XY

Tipo de herencia: AR ligado a X

EDAD Y EXPRESION DE LOS GENES:

Muchos genes actan antes del nacimiento o en las primeras
fases del desarrollo
Cuando el nio comienza su vida independiente puede ser
afectado: fenilcetonuria, galactosemia (enfermedades metab.)
Corea de Huntington : HAD, locus 4p 16.3, Gen CAG 30-35
(premutantes). repeticiones de 35 a 40 (mutantes).

ADN MITOCONDRIAL ADN mt

PROPIEDADES DEL ADNmt

Doble hlice pequea de 16,579 pb.
Forma circular, contiene 37 genes para 22 ARNt.
Sus codones de terminacin no estn codificados por el
propio ADNmt. Parece que codifica solo algunas protenas
mitocondriales.
Las enzimas implicadas en su replicacin, transcripcin y
traduccin son codificadas por genes nucleares.
Tiene distribucin asimtrica de G y C generando:
Una cadena pesada (H) rica en G
Otra cadena ligera (L) rica en C.

DIFERENCIAS CON EL ADN NUCLEAR

UGA : Codifica para triptofano y no para terminacin
AUA : Codifica para metionina en vez de isoleucina.
AGA y AGG : Actan como codones de terminacin
en vez de codificar arginina.

AUA y AUU : Actan como codones de inicio junto a

AUG

A=ATPasa; CO=Citocromo oxidasa; Citb=Citocromo b, ND=NADH-coenzima Q

reducasa; OH, OL=Orgen de la replicacin de las cadenas H y L; 12S, 16S=ARNr,
N/C=Regin no codificadora, ll=ARNt.

TECNICA DEL SOUTHERN

ELECTROFORESIS DEL ADN

REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

Para amplificar cuanto se quiera, segmentos especficos de ADN situados entre

los primers que se colocan a ambos lados de la zona que se quiera amplificar

ADN RECOMBINANTE
La tcnica del ADN recombinante son mtodos que
permiten cartografiar los genes humanos sin
necesidad de conocer la naturaleza del gen ni el
producto del mismo. Consiste en la reunin artificial
de molculas de ADN o parte de esas molculas que
no se encuentran juntas en la naturaleza y
provienen de diferentes organismos.

Se agrupan en dos reas principales.

1.- Las tcnicas del clonado del ADN
2.- Los mtodos de anlisis del ADN

F
A
S
E
S

REQUISITOS BSICOS PARA CLONAR ADN

1. Un mtodo que permite colocar juntos a porciones de ADN
procedentes de distintos organismos.
2. El empleo de una forma de autoreplicacin del ADN conocido
como vector de clonacin que se une a un trozo de ADN que
se va ha clonar.
3. El traslado de un vector que lleva una porcin de ADN al
interior de una clula donde tiene lugar la replicacin.
4. Un mtodo para identificar las clulas que contiene cualquier
porcin deseada del ADN.

ENZIMAS DE RESTRICCION
Bacterias de donde se obtienen y secudncias de ADN que reconocn
(incluye el sitio donde lo rompen)

ENZIMA

BACTERIA

Alul

Athrobacter luteus

ROMPIMIENTO (*)
5
3
AG*CT

Mspl

Especies de Moraxella

GC*CC

Hinfl

Haemophilus influenzae Rf

G*ANTC

BamHl

Bacillus amyloliquefaciens H

G*GATCC

EcoRI

Escherichia coli RY13

G*AATTC

Pstl

Providencia stuartii

CTGCA*G

A=Adenina; C = Citocina; G = Guanina, T = Timina, N = cualquier base

VECTORES DE CLONACIN
Agentes transportadores, son pequeas molculas de
ADN con capacidad de autorreplicacin que se utilizan
para transferir segmentos de ADN extraos entre clulas
husped.
PRINCIPALES VECTORES DE CLONACION
1.

FAGICOS

2.

COSMIDOS

3.

PLASMIDOS

4.

CROMOSOMAS ARTIFICIALES (YACS)

PLASMIDOS
Son organismos muy sencillos que se encuentran en el
citoplasma de las clulas bacterianas.

Molculas de ADN circular de tamao menor que un

cromosoma.
Frecuentemente contienen 1 2 genes que codifican
resistencia a los antibiticos.
Fueron los primeros vectores de donacin fciles de aislar
y purificar, pueden ser reintroducidos en una bacteria por
transformacin.

El plsmido ms usado es el pBR322, contiene genes que

codifican a la ampicilina y a la tetraciclina y muchos sitios
de restriccin.

METODOS DE INTRODUCCION DEL VECTOR

1. Transformacin
La clula capta molculas de ADN que se encuentra en el
medio externo, las introduce en su interior y las
incorpora a su genoma
Ocurre espontneamente en ciertos tipos de bacterias y
se consigue artificialmente sometiendo a la clula
bacteriana a tratamientos fsicos y qumicos.

2. Transduccin.
Consiste en introducir el ADN en una clula hospedadora mediante
un virus
Se observa:
(1) El virus se aproxima a la
bacteria llevando un
genoma con el gen que le
interesa donar.
(2) El virus se pone en
contacto con la bacteria
donde se forma un poro.
(3) El virus inyecta su ADN
al interiror de la clula
bacteriana.

Mtodos de introduccin del

vector.
El siguiente paso ser
introducir el vector de
clonacin que contiene el
gen que se quiere clonar en
la clula hospedadora.
Existen varios mtodos que
dependern del tipo de
clula fundamentalmente.
En bacterias se realiza
mediante estos procesos:

El gen es insertado con una

fina aguja fabricada por los
cientficos.

CROMOSOMAS ARTIFICIALES
Transportan grandes cantidades de material gentico. Por
esto son muy tiles en la secuenciacin del genoma.
Cromosoma artificial de levadura: (YACS)(Yeast artifitial
chromom

* Es uno de los ms utilizados.

* Los segmentos de ADN contienen todos los elementos
necesarios para propagar un cromosoma en levaduras.

* Contienen fragmentos de ADN de 100 a 2000 kb de tama

pueden introducirse en clulas de S. cereviciae y sern
replicados juntos con los cromosomas verdaderos.

 Cromosoma artificial bacteriano:(BAC)

(Bacterial artificial chromome)
* Es un vector de donacin alternativo, basados en
plsmidos de fertilidad de E. Coli.
* Facil de reproducir y manipular, no sufre
recombinacin con la misma faciliad de los
YACS.
* Se insertan un fragmento de ADN foraneo hasta
de 30 kb de longitud mediante electroporacin.

APLICACIONES DEL ADN RECOMBINANTE

1. RFLP (Polimorfismos de longitud de los fragmentos de
restriccin)
2. CARTOGRAFIA DE LOS PROCESO HEREDITARIOS
3. PROYECTO GENOMA HUMANO
4. DIAGNOSTICO DE LOS PROCESOS HEREDITARIOS
5. TERAPIA GENICA

ANALISIS DE LOS RFLP

o Son variedades de la longitud de los fragmentos de ADN
generados por una endonucleasa de restriccin.
o Se heredan en forma codominante.
o Los RFLP se usan como marcadores de genes o cromosomas
especficos.
o El fenotipo depende de la obtencion de los fragmentos de
ADN que son de diferentes tamaos.
o Los fragmentos de RFLP se usan para cartografiar un
determinado cromosoma empleando hbridos de
cromosomas humanos en distintas combinaciones.
o Los RFLP son de diferentes longitudes en diferentes personas
que pueden reconocerse por la movilidad alterada de los
fragmentos en la electroforesis.

CARTOGRAFIA DE LOS PROCESOS

HEREDITARIOS
Para asignar un gen en un determinado cromosoma, es necesario:
* Una gran familia a cuyo travs se haya transmitido un
proceso
hereditario.
* Una coleccin de RFLP (almenos 1 de cada cromosoma
humano)
PROCEDIMIENTO:
* Anlisis del rbol genalgico para averiguar el tipo de
herencia del defecto gentico y para identificar a los afectados.
* Pruebas a cada miembro de la familia para averiguar el
modelo de herencia de los marcadores de RFLP especificos de
cada cromosoma. Ejm. DMD: Xp, HE: 4p, QF: 7q, NF1:
17q11.2 NF2: 22

EL GENOMA: Es el conjunto de informacin

gentica que presenta un organismo

PROYECTO GENOMA HUMANO

OBJETIVO: Determinar la localizacin de los genes que contiene
el GH y analizar la estructura de esos genes a nivel de la
secuencia de los nucletidos.
PROCEDIMIENTO:

* Construir un mapa gentico de alta resolucin de cada uno de

los cromosomas.
* Utlizando porciones del mapa genetico se elabora un mapa
fsico de alta resolucin.
* A partir del mapa fsico se obtendr una serie de secuencias
yuxtapuestas del ADN clonado.
* Se determinar la secuencia de cada uno de esos clones y la
secuencia de los nucleotidos conservados en un banco de datos
de un ordenador.

EL GENOMA HUMANO

El mapa genetico humano como resultado del estudio conjunto de la investigacin

pblica y privada con los 30,000 genes en los 23 pares de cromosomas

APLICACIONES MEDICAS DE LA
INGENIERIA GENETICA
* Produccin de protenas de utilidad medica (como la
somatostatina, la insulina, la hormona del crecimiento
humano, los interferones).

* Utilizacin de plantas desarrolladas mediante ingeniera

gentica para producir vacunas orales.

* Vacunas sintticas (por ejm: vacunas contra el paludismo

y la rabia) mediante tcnicas recombinantes.

CLONACION DE MAMIFEROS

(OVEJA DOLLY )

1986: se autorizan las pruebas

clnicas de la vacuna contra la
hepatitis B obtenida mediante
ingeniera gentica.
1987: propuesta comercial para
establecer la secuencia completa
del genoma humano (proyecto
Genoma),compuestoaproximada
mente por 100.000 genes.
1989:comercializacin de las
primeras mquinas automticas
de secuenciacin del ADN.
1994:Secomercializaen California
el primer vegetal modificado
genticamente (un tomate)

1997:Clonacindel1er. mamfero,
una oveja llamada Dolly

cM

MAPA GENETICO DEL

CROMOSOMA 1

Marcadores genticos: Son

variedades moleculares
obtenidos por tcnicas de ADN
recombinante

MAPA FISICO
DEL CROMOSOMA 1
1,990

CROMOSOMA -1 1,995

APLICACIONES DE LA INGENIERA GENTICA

Contribuciones a:
1. Medicina
2. Industria
3. Agricultura
4. Investigaciones bsicas

APLICACIONES MDICAS
1. Produccin de protenas de utilidad mdica:
- somatostatina

- hormona del crecimiento humana

- insulina

- interferones

2. Produccin de anticuerpos monoclonales

3. Uso de sondas para el diagnostico de enfermedades

infecciosas y genes mutantes

4. Introduccin a la ciruga gentica

5. Utilizacin de toxinas de fusin
6. Empleo de mamferos transgnicos que sintetizan
hemoglobina humana
7. Vacunas

APLICACIONES
MDICAS

VACUNAS
1. Vacunas orales usando plantas desarrolladas con la tcnica
del ADNrecombinante.
2. Vacunas sintticas, por ejemplo contra el paludismo y la
rabia
3. Vacuna recombinante contra la hepatitis B
4. Vacunas para animales infectados

VACUNAS

V
A
C
U
N
A
S

APLICIONES EN LA A G R I C U L T U R A

IMPACTO SOCIAL DELA TECNOLOGA DEL ADN

RECOMBINANTE
1. Probable diseminacion de infecciones por
microorganismos portadores de genes peligrosos
2. Cuestionamiento tico y moral acerca del empleo
de la tecnologa recombinante en seres humanos
para modificarlos y/o conocer su estructura
gentica
3. Preocupacin ecolgica sobre el uso de la
tecnologa recombinante en agricultura como
agente modificador del ecosistema

MUTACION
Definicin: Es todo cambio en el material gentico que
se debe a la variacin gentica de los seres humanos y
de otros organismos.
Tipos:
1.- Microscpica,
2.-Submicroscpica (mutaciones de punto)
sustitucin de una base por otra en el DNA.
Deteccin:
Cmo se produce una mutacin?
1.- En organismos inferiores se pueden disear
experimentos.
2.- En el genoma humano son indirectos y deducibles
por inferencia
(basndose en el Arbol Genealgico)

TASA DE MUTACIN
Definicin: Nmero de veces que se producen alelos mutantes
encada locus y en cada generacin.
Frecuencia: En humanos es de 10-5 10-6 gametos por generacin
Se deben diferenciar :
1.- Mutaciones recientes ,
2.- Mutaciones pre-existentes que se producen en el pasado, y
permite un fenotipo normal porque:
2.1- Existen genes mutates al fenotipo normal heredado
por uno de los padres.
2.2- Las mutaciones dominantes no siempre tienen el
100% de penetrancia, por tanto algunas veces no se expresan.
2.3- Las mutaciones dominantes se detectan fcilmente
porque se expresan en estado heterocigoto.

2.4 - Las mutaciones que el propio individuo acumula durante

su existencia:
* Por mutacin expontnea, debido a mecanismos normales
en la duplicacin o reparacin del DNA.
* Por mutgenos: fsicos, qumicos y biolgicos. Ejm.
Radiaciones que producen transiciones o tranversiones,
desaminacin y metilacin.
Estudios realizados demuestran que las mutaciones son
fenmenos raros en el GH observados en 1/ 1000,000 de
copias que genera 6-7 millones de genes mutantes en cada
generacin.
Disminuye por factores como:
* Naturaleza redundante del cdigo gentico,
* Carcter recesivo de la mayoria de las mutaciones,
* Tasa de muerte temprana que se asocia a muchas
enfermedades hereditarias.

MUTACIONES A NIVEL MOLECULAR

Las mutaciones en la molcula del ADN han aportado

pruebas que existe una unin directa entre el gen, la
proteina y el fenotipo.

Las mutaciones pueden aparecer expontneamente como

consecuencia de un error en la replicacin del ADN o
como resultado de cambio de los tomos en la base de los
nucletidos.

La mutacin por cambio de lectura produce una

modificacin en la lectura de los cdones que suelen
acarrear alteraciones espectaculares en la estructura y
funcin de los pptidos elaborados.

FACTORES QUE AFECTAN A LA FRECUENCIA DE

MUTACIONES EN LOS GENES :
Variaciones se deben a:

1.- Tamao del gen: DMD 2000,000 de Pb .

NF1 2,000 aa = 300,000 Pb

2.- Secuencia de los nucletidos: Xfrgil CGG se repiten

de 6 50 veces en no afectados y en afectados > de 50.
3.- Modificaciones qumicas expontneas:Ej. HbA y Hb S

FRECUENCIA DE MUTACIONES EN EL SER HUMANO

Rasgos
Acondroplasia
Aniridia
Retinoblastoma
Osteogenesis imperfecta
Neurofibromatosis
Enfermedad poliquistica renal
Sindrome de Marfan
Sindrome de Von-Hippel-Landau
Distrofia Muscular de Duchenne

Mutantes/milln Frecuencia
de gametos
de la
mutacin
10
2.6
6
10
50-100
60-120
4-6
<1
50-100

1 x 10 -5
2.6 x 10 -6
6 x 10 -6
1 x 10 -5
0.5-1 x 10 -4
6-12 x 10 -6
4-6 x 10 -6
1.8 x 10 -7
0.5-1 x 10 4

Secuencia de los ocho primeros aminocidos de las cadenas b

de la HbA y HbS. En posicin 6 la HbS tiene Val en lugar de
Glu, lo que se debe al cambio de un nucletido del codn
GGA en la HbA por GUA en la HbS.
Codn

Aminocido

HbA
GUU
CAU
UUA
ACU
CCU
GGA
GAA
AAA

Codn

Aminocido

HbS
Valina
Histidina
Leucina
Treonina
Prolina
Acido glutmico
Acido glutmico
Lisina

GUU
CAU
UUA
ACU
CCU
GUA
GAA
AAA

Valina
Histidina
Leucina
Treonina
Prolina
Valina
Acido glutmico
Lisina

CLASIFICACION DE LAS MUTACIONES

1. Respecto a su mecanismo de Produccin
1.1 En punto Susticiones o
Transiciones

Cambio de una base prica o

pirimidica por otra prica o
pirimidica.

Transversiones Cambio de una base prica por una

pirimidica o visceversa.
1.2 Fuera de Adiciones
fase
Deleciones o
inserciones

Se adiciona 1, 2 o mas bases.

Se suprimen 1, 2 o ms bases.

2. Respecto a su Expresin
2.1 Letales

2.2 Subletales

La preencia de la mutacin es incompatible

con la vida.
El cambio producido por la mutacin permite
la vida pero se presentan alteraciones
estructurales o funcionales.

El efecto de la mutacin solo se observa en

2.3Condicionales determinadas condiciones, es decir por
exposicin a farmacos.
2.4 Somaticas
2.5 Geneticas

El cambio por la mutacin afecta a algunas

estructuras del organismo
La mutacin altera la informacion genetica de los
gametos y los descendientes.

3. Respecto al efecto que producen en el organismo que

las presenta
3.1 Positivo

3.2 Negativo

3.3 Neutro

Confieren al organismo una nueva ventaja

respecto a su ambiente, una mayor facilidad
de adaptacin o nuevas aptitudes respecto a
otro.
Pueden restar capacidades de sobrivencia, de
adaptacin o estructura. Son los ms
frecuentes. Ej. Producen los padecimientos
hereditarios (autosmicos recesivos).
Pueden o no conferir cambios.

MUTAGENOS
1. FISICOS
* RADIACIONES
- Radiaciones ionizantes (rayos X, rayos a, b, g, etc)
- Luz ultravioleta

2. QUIMICOS (Tabaco, alcohol, alquitran, etc)

3. BIOLOGICOS
* Virus (retrovirus)