2016I

METODOS DE BANDEO
CROMOSOMICO

INTEGRANTES

Flores Paucar
Rocio

Hoyos Alarcn
Yosimar

Vsquez Burga

INTRODUCCION

Cesar Guzman Vigo MSc. Dr.

Marco Guzman Tello, Mgter.

III

Se entiende el conjunto de bandas transversales de tamao e intensidad de

tincin diferentes que aparecen sobre cromosomas determinados segn un
modelo de distribucin que depende del tinte utilizado. Como norma general se
admite que el patrn de bandeo es el mismo para cualquier tejido dentro de
una misma especie y que no cambie durante el desarrollo. El bandeo
cromosmico es, esencialmente, un fenmeno del cromosoma fijado. Aunque
las tcnicas de bandeo son muy variadas, todas ellas pueden agruparse en
seis clases principales. La clasificacin inicialmente propuesta por la
conferencia de pars, que presupone que en todos los casos hay una fijacin
con fluidos que contiene cido actico, es la siguiente: Bandas Q, G, C, R, T y
Feulgen. A estos tipos de bandas habra que aadir las bandas de replicacin y
las bandas de restriccin.

OBJETIVOS

Conocer los mtodos de Bandeos Cromosmicos

Identificar las nomenclaturas y grupos Cromosmicos.
El objetivo de esta ciencia ha sido el estudio de las bases citolgicas que

pudiesen explicar satisfactoriamente los fenmenos hereditarios.

Tambin para poder saber en qu podemos utilizar el mtodo de bandeo
y sobre todo que resultados podemos tener de ese mtodo empleado.

MARCO TEORICO

BANDEO CROMOSMICO
La heterogeneidad de la cromatina, las caractersticas qumicas de la misma
hacen que al aplicar tratamientos diferenciales se resalte uno u otro de los tipos
de cromatina existente, lo que en citogentica se conoce como Bandeo
cromosmico. El advenimiento de las tcnicas de bandeo cromosmico, dotan
hoy a la citogentica de una nueva herramienta otorgndole una mayor
precisin

en

la

individualizacin

de

los

cromosomas,

facilitando

su

agrupamiento y clasificacin morfolgica: la determinacin de aberraciones

cromosmicas de importante Incidencia en animales con problemas de
reduccin de la fertilidad: la localizacin de genes que confluyen al mapeo
gentico. Los bandeos cromosmicos hacen posible que se tenga un mayor
conocimiento acerca de la estructura cromosmica y de los reordenamientos
que se producen en las distintas alteraciones tales como: fusiones y fisiones
cntricas, translocaciones recprocas y en tandem; inverciones peri y
paracntricas; delecciones; duplicaciones; contricciones secundarias.; gapss,
fracturas cromosmicas, etc. Por otro lado permiten realizar estudios evolutivos
de especies relacionadas entre s.
Morfologa de tres tipos principales de cromosomas humanos.

LOS GRUPOS CROMOSMICOS

En Citogentica se conocen los trminos de coloracin selectiva y diferencial

cada una de ellas es especfica de un tipo de bandas. Las coloraciones
selectivas
Colorean sitios especficos del mismo, se conocen las bandas C y NORs; las
Tcnicas de coloraciones diferenciales producen bandas a lo largo de cada uno
de los cromosomas de un complemento, en este tipo se encuentran las bandas
G y R (Verma y Babu 1989 citado por Henao y Gmez, 1999).

Los Bandeos Morfolgicos:

Se obtienen basndose en tcnicas inherentes a la heterogeneidad de la
cromatina. Existe en ellos una relacin con protenas (histnicas y no
histnicas) e interacciones ADN. Estos bandeos pueden ser a su vez
clasificados en: tcnicas de tincin diferencial, mtodos de tincin selectiva,
coloraciones con fluorocromos especficos aislados o combinados con
colorantes no fluorescentes, y tinciones con anticuerpos fluorescentes
Los Bandeos Dinmicos:
Se obtienen basndose en: tcnicas que implican la incorporacin de una base
anloga, bromo-desoxiuridina (BrdU), en el ADN durante la fase S del ciclo
celular. Se denomina tambin bandeo de replicacin debido a la relacin
existente entre el tiempo de incorporacin del BrdU y el patrn de replicacin.
Cuando se incorpora BrdU durante la fase de replicacin temprana se obtiene

un patrn de bandeo R destacndose las regiones ricas en G-C. Luego de

realizada esta tcnica, los cromosomas pueden visualizarse utilizando distintos
mtodos de tincin que emplean colorante tales como el Giemsa o el naranja
de acridina o utilizando anticuerpos especficos.
Por otro lado si se incorpora la base anloga durante la fase tarda de
replicacin se obtiene un patrn de bandas G, destacndose las zonas de
predominio de secuencias A-T. Los cromosomas pueden ser visualizados
utilizando diferentes mtodos de tincin. En relacin con la nomenclatura para
descubrir los diferentes bandeos cromosmicos, se emplea un cdigo de tres
letras: la primera, indica el tipo de bandeo utilizado, la segunda, la tcnica de
deteccin empleada y la tercera, el tipo de tincin.
Nomenclatura De Bandeos Morfolgicos.
QFQ: Bandas Q por fluorescencia usando quinacrina.
GTG: Bandas G por tratamiento enzimtico con tripsina utilizando Giemsa.
RFA: Bandas R por fluorescencia usando naranja de acridina.
RHG: Bandas R mediante desnaturalizacin trmica utilizando Giemsa.
THG: Bandas T por desnaturalizacin trmica empleando Giemsa.
CBG: Bandas C por hidrxido de bario utilizando Giemsa.
Nomenclatura de bandeos dinmicos.
GBG: Bandas G por incorporacin de BrdU utilizando Giemsa.
RBA: Bandas R por incorporacin de BrdU empleando naranja de acridina.
RBG: Bandas R por incorporacin de BrdU utilizando Giemsa.
GB-AAu: Bandas G por incorporacin de BrdU empleando anticuerpos
especficos unidos a partculas de oro coloidal.
RB-AAu: Bandas R por incorporacin de BrdU usando anticuerpos especficos
unidos a partculas de oro coloidal.

En todas las disciplinas siempre existen procedimientos de mayor uso que

otros, as que en este mdulo slo hablaremos de las ms bandas
cromosmicas ms utilizadas en el cotidiano del ejercicio de la Citogentica
BANDA C
La tcnica de Banda C fue descubierta por casualidad y originada en un
experimento en donde ADN satlite marcado en ratn fue hibridizado in situ con
cromosomas de ratn. En este experimento, el ADN del cromosoma fue
desnaturalizado con NaOH y renaturalizado en buffer SSC. Los sitios
hibridados fueron detectados por autoradiografa usando coloracin de Giemsa
para cromosomas. La prueba de hibridacin preferencialmente fue en las
regiones centromericas de los cromosomas. Sin embargo tambin se not que
el Giemsa coloreo otras regiones en otros cromosomas (Fukui y Nakayama,
1996) Esta banda se caracteriza por teir aquellas regiones ricas en
heterocromatina constitutiva que corresponden a secuencias de ADN altamente
repetitivas; se encuentran principalmente en centrmero, telmeros y ADN
satlite y en ocasiones constricciones secundarias como son los NORs.
Despus del descubrimiento de las tcnicas de banda C se desarrolladas
tcnicas para cromosomas de mamferos. Mientras en animales se utiliza
NaOH para el paso de la desnaturalizacin, el Ba(OH)2 es usado para producir
banda C en cromosomas de plantas siguiendo el mtodo de Summer. l fue el
primero en sugerir que la coloracin oscura del Giemsa coloreaba
heterocromatina constitutiva causada por la preferencia del ADN altamente
repetitivo durante la renaturalizacin Los sitios de los cromosomas que
presentan heterocromatina constitutiva y que tien Banda C positiva son 1) en
la regin del centrmero 2) alrededor de la regin organizadora nucleolar 3)
cerca del sitio del RNA para 5S y 4) en la parte final de los cromosomas es
decir la heterocromatina telomerica.en general estas localizaciones se conocen
como centromerica e intercalar y la ltima categora incluye todas las otras
posiciones (Yunis y Yasmineh, 1972 citado por Maclean y Vaughan, 1978).
En el campo de la investigacin para aclarar qu tipo de elementos son los que
se remueven dentro del tratamiento de esta banda, en un estudio en donde se
analiz HCl 0.2 N el cual es una de las soluciones utilizadas para realizar

tratamiento para banda C se encontr por medio de electroforesis la presencia

de las 5 protenas histnicas, la que presentaba una banda de mayor
intensidad fue la H3 y H4, estando presentes tambin las otras pero en menor
cantidad (Burkhoder&Duezek, 1980).
Para cromosomas de plantas, la estandarizacin de las tcnicas en Banda C
han mejorado en su resolucin y el mtodo ha sido utilizado para la
identificacin de cromosomas. En plantas esta tcnica identifica las secuencias
que contienen gran cantidad de ADN repetitivo. Por ejemplo en cultivos de
centeno Secalecerealeen hibridizacinin situ es utilizada para detectar zonas
de ADN altamente repetitivode las cuales solamente unas pocas colorean
Banda C positiva (Fukui y Nakayama, 1996).
Por su parte, en muchas especies de animales domsticos se han encontrado
complementos cromosmicos que por las tcnicas convencionales de
coloracin no pueden ser ordenados completamente, debido a la presencia de
cromosomas con rasgos morfolgicos muy similares. Esto sucede, por ejemplo:
con los cromosomas 8, 9 y X del cerdo; con el 11 y el 12 de la misma especie;
con los cromosomas 14, 15, 16, 17, 18 y 19 del equino; con los cromosomas
23, 24, 25, 26 y 27 tambin del equino; y con gran parte de los cromosomas del
bovino, del ovino y del caprino. Lo anterior gener la necesidad de desarrollar
tcnicas de coloracin denominadas de bandeo, o sea, aquellas que producen
patrones constantes de bandas claras y oscuras, caractersticos de cada
cromosoma que permiten identificar los cromosomas sin ambigedades (Henao
y Gmez, 1997).
Las tcnicas de bandeo han permitido tanto en animales como en vegetales,
tambin, la deteccin de un gran nmero de aberraciones cromosmicas, con
la

correspondiente

definicin

de

los

componentes

del

complemento

comprometidos en el problema.

Bandas Ag-NOR
Se conoce como bandas Ag-NOR aquella que colorea las Regiones
Organizadoras Nucleares ( de ah la nomenclatura NOR) en ocasiones son
tambin llamadas Banda N, su coloracin es debido a la afinidad con el Nitrato
de Plata.

La Regin Organizadora Nucleolar es el sitio en donde estn localizados los

genes de ADNr; el nucleoloesta compuesto por cinco componentes
estructurales, el centro fibrilar, el componente fibrilar, el componente granular,
el intersticio nucleolar, y la cromatina condensada asociada. (Goessens, 1984)
En eucariotas el organizador nucleolar consiste de mltiples repeticiones
arregladas en tandem, de las secuencias para ARN-r 18S y 28S intercalado
con secuencias espaciadoras. Los espacios pueden ser transcritos, pero su
transcripcin nunca incluye un ribosoma maduro. Usualmente se refiere a ADN
ribosomal (ADN-r) como una repeticin de genes con secciones en tamdem
arregladas y agrupadas dentro de uno o varias regiones del set de
cromosomas (Champman y may, 1993)
Este tipo de banda se debe especficamente a la presencia de las protenas
afines a la actividad transcripcional en los cistronesribosomales (Henao y
Gmez, 1997).Durante la metafase estos estn localizados generalmente
dentro de laconstriccin secundaria (Howell 1982) Citado por (Fakan y
Hernndez-Verdun, 1986).
El comportamiento del nucleolo en proliferacin celular es llamado ciclo
nucleolar, se considera que el ciclo comienza en el momento en que en
interfase este o no la decisin de entrar en proliferacin o diferenciacin, se
considera que el ciclo comienza cuando el nucleolo se organiza nuevamente
seguido de las fases de la mitosis, es decir el nucleolo no es una entidad
nuclear individual (De la Torre y Jimnez-Martn, 1982) . Ante todo y de gran
importancia es de anotar que esta banda es funcional, es decir, es positiva
siempre y cuando las Regiones Organizadoras Nucleolares hayan estado en
actividad la interfase inmediatamente anterior al momento de realizar la banda,
es decir la banda se expresa en las metafases obtenidas cuando los genes de
ADNr hayan sido transcritos.
Un anlisis morfo-funcional de las Regiones Organizadoras Nucleolares
teniendo en cuenta los ciclos circadianos demostr la relacin directa de los
centro fibrilares ( uno de los componentes del NOR) con la actividad nucleolar.
(Fakan y Hernndez-Verdun, 1986 .

En un estudio sobre protenas asociadas con los NORs se estableci que

estas son no histonicas y son argyrophilic Las proteinas NOR estn
estrictamente localizadas dentro del centro fibrilar y el componente fibrilar
denso del nucleolointerfasico (Fakan y Hernndez-Verdun, 1986). En general,
el nucleolo crece durante la interfase, algunas veces el volumen es
proporcional al incremento tanto de el componente fibrilar y el granular, pero en
mayor proporcin de la acumulacin del componente granular. La talla final del
nucleolo maduro en el ciclo celular aparentemente no es una funcin
estrictamente lineal del numero de genes ribosomales que el NOR posee (De la
Torre y Jimnez-Martn, 1982).
Son varias las aplicaciones de las bandas NOR entre otras se tiene que:
(tomado de Camacho, 1999) con la banda NOR se puede establecer el grado
de variabilidad de los patrones inter e intra especficos entre especies y/o
poblaciones, pues tanto los cromosomas portadores de NOR como la posicin
en el cromosoma son usualmente diversos entre especies (Disney y Wright,
1987; Takai y Ojima, 1986 citado por Oberdorff et al, 1990). La diferencia en
talla entre NORs homlogos ha sido descrita en varias especies de vertebrados
(Miller et al., 1977; Ruiz el al., 1981; Galetti et al., 1984 citados por Sanchez et
al., 1990). Esta variacin interespecfica ha sido utilizada para probar hiptesis
filogenticas e

inferir otras, antes basadas principalmente

en

datos

morfolgicos (Amemiya yGold, 1990); parece ser que las alteraciones en los
NOR ocurren normalmente con relacin a la diferenciacin y evolucin de las
especies (Oberdorff et al, 1990).
La variacin intraespecfica puede ser usada para averiguar el origen maternal
y paternal de los cromosomas en un individuo (Mellink et al, 1994)
constituyndose la actividad del NOR como una propiedad heredable cuyo tipo
de transmisin puede ser mendeliana (Jotterand y Van Melle, 1981); adems
los NOR activos muestran variacin de generacin en generacin mientras los
inactivos no (Zakharov et al, 1982 citado por Mellink et al, 1994).
En plantas se encontr tambin que el mtodo servia no solo para localizar
Regiones Organizadoras Nucleolares sino para identificar cromosomas en
cereales, adems de encontrar una relacin entre bandas C y Namda N lo cual
fue clarificado por Schlegel y Gill. Tambin se realizo tcnicas de una banda N

secuencial con hibridacin in situ para identificar cromosomas con las la

posicin especifica de ADN, la metafase primero es identificada en sus
patrones de bandas y despus se destina para hibridizacinin situ as se puede
recurrir a la misma clula en metafase, de esta manera se permite una
asignacin directa de los sitios de hibridizacin con cromosomas individuales
(Fukui y Nakayama, 1996).
Bandas GTG
Las bandas G deben su nombre al hecho de que en todas sus modalidades se
emplea Giemsa para colorear los cromosomas. Esta tcnica que, en trminos
generales, es la ms usada en mamferos, por permitir excelentes
preparaciones

permanentes

sin

requerir

el

uso

de

microscopio

de

fluorescencia, se basa en un tratamiento que altera la estructura de las

protenas cromosmicas seguido de una coloracin. El mtodo de denaturacin
trmica descrito por Sumner et al. (1971), es conocido como ASG (Acid-SalineGiemsa) y se constituye en la primera tcnica de bandas G conocida. En esta
modalidad se logra la denaturacin proteica mediante un tratamiento con
2XSSC (Solucin Salina Citratada) caliente. Sin embargo, el mtodo ms
usado en la actualidad es el conocido con el nombre de bandas GTC (bandas
G por Tripsina usando Giemsa como colorante); fue introducido por Seabright
en 1971, y como su nombre lo indica, se basa en una digestin enzimtica con
Tripsina.
Se asume que el mecanismo por el cual se produce el patrn de bandeo G es
porque el colorante interactua con las protenas de cromosoma, al parecer ricas
en grupos disulfuro en las bandas positivas (oscuras), y en grupos sulfhidrilo en
las negativas (claras) (Verma y Babu, 1989). Se acepta, adems, que la
extraccin diferencial de protenas ocurrida durante la fijacin y los
tratamientosde denaturacin, juega un papel muy importante en la obtencin de
estas bandas. Rooney y Czepulkowski (1987), consideran que las bandas G
oscuras corresponden con las crommeras del paquiteno, que se presentan en
segmentos de DNA de replicacin tarda, con alto contenido de Adenina y
Timina, y con relativamente pocos genes activos (Henao y Gmez, 1999).

La banda G ha sido reportada en muchos grupos animales pero por ejemplo en

varias especies de peces esta banda no resulta positiva pues al parecer
muchos de ellos no poseen compartamentalizadin del ADN en isocoros
quienes serian los responsables del bandeamiento.
su parte en plantas los reportes son pocos, e inclusive su existencia se ha
puesto en duda. Sin embargo en un anlisis de centeno, S. cerealeal construir
el cariograma despus de tratamiento de banda G, se identificaron los
cromosomas homlogos por los patrones de tipo de bandas oscuras y claras,
se estableci diferencias con los patrones obtenidos en banda C, mientras
banda C positiva produce grandes bandas telomericas y algunas intersticiales
Banda G produce ms intersticiales que banda C negativa. Aunque los
resultados obtenidos son prometedores en este caso se hace necesario
mejorar antes las tcnicas antes de utilizarlas en la identificacin de
cromosomas en plantas (Fukui y Nakayama, 1996)
Bandas RHG:
Este patrn de bandas es, en trminos generales, el inverso (reverse) de las
bandas G, o sea, las bandas G-positivas son R-negativas, y las G-negativas
son R-positivas; se les denomina bandas RHG para significar que son bandas
reversas obtenidas por calor usando Giemsa como colorante. La tcnica
original se basa en una denaturacin trmica selectiva en buffers de diversa
naturaleza, seguida por una coloracin de cromosomas con Giemsa (Dutrillaux
y Lejeune, 1971). Respecto al mecanismo de produccin de este patrn de
bandeo, se asume que depende de la denaturacim selectiva que produce el
calor en ciertas zonas del cromosoma, al parecer asociadas con segmentos de
DNA ricos en Adenina-Timina; en este caso las bandas oscuras son las zonas
ricas en Guanina-Citocina, o sea, las que resisten el calor. Verma y Babu
(1989) describen el siguiente protocolo para estas bandas: (Henao y
Gmez,1999).
Entre las mltiples tcnicas de coloracin diferencial conocidas hoy, es preciso
resaltar la importancia de las bandas G y de las bandas R en la definicin de
los cariotipos de la mayora de los animales de importancia zootcnica. Entre
las tcnicas selectivas, las de mayor importancia son las bandas C y las

bandas NOR,por su aporte tanto a la identificacin cromosmica como a los

estudios de heteromorfismos.
ALGUNAS ABREVIATURAS DE LA NOMENCLATURA CROMOSMICA

Ideograma del cromosoma 14 a distintos niveles de resolucin (400, 550 y

850 bandas) ilustrando la nomenclatura de Pars de brazo, regin, banda,
subbanda y subsubbanda. Tomado de la revista Human Pathology, V 12,
6:495 (1981). W. B. Saunders Company. (modificado)

Para designar una banda en particular se acord poner primero el nmero del
cromosoma seguido del smbolo del brazo, el nmero de la regin, el nmero
de la banda, subbanda, etc., todo seguido y sin dejar espacios. Ejemplo,
14q32.3 es la designacin para la subbanda 3, de la banda 2, de la regin 3,
del brazo largo del cromosoma 14. Al leerlo de corrido, los nmeros que
corresponden a regin, banda y subbanda deben decirse separadamente y no
como decenas. Las bandas permiten tambin el mapeo de genes en el
cromosoma, es decir la designacin del locus (pl. loci). Muchos rearreglos
cromosmicos han permitido la identificacin de genes debido a los efectos
fenotpicos de la disrupcin de estos.
INTERPRETACIN

DE

LA

NOMENCLATURA

CROMOSMICAS.

Observacin: 7q31.2 es el locus el gen de la Fibrosis Qustica.

DE

BANDAS

Cuando de describe la composicin cromosmica, o cariotipo, de un individuo

adems del nmero total de cromosomas y el par sexual se puede tambin
indicar ganancia o prdida de un cromosoma poniendo +13 o -16 y se
interpreta como la presencia de un cromosoma 13 extra o la ausencia de un
cromosoma 16 respectivamente, o lo que es lo mismo una trisoma 13 o una
monosoma 16. Cuando ocurre una translocacin recproca entre dos
cromosomas se pone t(8;14)(q24;q32) que indica que los cromosomas
involucrados son el 8 y el 14 y los puntos de ruptura estn en 8q24 y 14q32.
Cuando hay aumento del bloque de heterocromatina en los cromosomas que
normalmente lo contienen se usa colocar h+ junto al brazo del ese cromosoma,
por ejemplo 9qh+, y se interpreta un polimorfismo ya que esta es una variacin
frecuente en la poblacin normal.
Ejemplos

del

uso

de

la

nomeclatura

en

algunas

anomalas

cromosmicas:
a- 47,XX,+21: trisoma 21 en una mujer ( sndrome de Down).
b- 47,XY,+18: trisoma 18 en un varn (sndrome de Edwards).
c- 45,X:monosoma del X (sndrome de Turner)
d- 47,XXY: trisoma de cromosomas sexuales (sndrome de Klinefelter)

CONCLUSIONES
Se Conoci los diferentes mtodos de Bandeo Cromosmico
Se identificacin y reconocieron los diferentes tipos de nomenclatura y
los grupos cromosmicos.
Pudimos identificar gracias a la ciencia de bases citolgicos a los
fenmenos hereditarios en los cromosomas.
Logramos saber que los mtodos de bandeo cromosmico son
importantes en lo que es citogentica.

BIBLIOGRAFIAS
Elsevier- Espaa- Emery, elementos de gentica mdica. Amazon.com.
Pag. 33
Juan ramn Lacadena- - citogentica. Editorial complutense. Pag 80-8
http://www.geocities.com/ResearchTriangle/Lab/2513/bandeos.htm