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HIPOTESIS
Si la levadura Saccharomyces cerevisiae lleva a cabo, en condiciones anaerbicas el
proceso metablico de fermentacin alcohlica de la glucosa; entonces podremos
emplear ciertos mtodos para cuantificar los productos generados estequiometricamente
en base a la cantidad de glucosa fermentada.
DISEO EXPERIMENTAL
Lavaremos las clulas de levadura con agua destilada y centrifugacin 6 veces para
garantizar que se encuentran sin glucosa, ya que segn su procedencia, pueden contener
grandes cantidades de esta azcar, interfiriendo con nuestros resultados. Obtendremos
una concentracin celular 30% v/v con regulador de fosfatos.
NaHCO3
Na2CO3 + H2O
contena la muestra, con agua destilada libre de CO2 en este paso lo que ocurri fue que
el cloruro de bario reacciono con la muestra y se formo otra sal de carbonato de bario la
cual precipito mejor debido al peso atmico del bario.
Na2CO3 + BaCl2
BaCO3 + 2NaCl
El precipitado de BaCO3 que quedo se recupero por filtracin a travs de papel filtro de
Whatman No 1 de peso conocido. El papel con la muestra se deseca en una estufa a 60
C durante 20 y 24 horas y posteriormente haciendo uso del factor gravimtrico obtenemos
la cantidad original de dixido de carbono en milimoles.
Determinacin de Glucosa residual por el mtodo de DNS.
Para determinar la cantidad de glucosa residual se utilizo el mtodo del 3,5 dinitrosaliclico
(DNS), esto nos sirvi para calcular la cantidad de glucosa fermentada para
posteriormente sacar los milimoles de glucosa este mtodo se basa en la reduccin del
DNS (color amarillo) por la glucosa pasando a color rojo cuya presencia puede detectarse
por lectura de la absorbancia a 540 nm.
f(x) = 0x + 0.08
R = 0.96
0.8
Absorbencia a 540 nm
0.6
0.4
0.2
0
0
100
200
300
400
g de Glucosa
500
600
Despejando x:
Donde:
x=
y = absorbencia
x = concentracin
y +0.0186
4
9.3914 X 10
mg de Glucosa
67.9344
84.0343
2.9388
Problema:
Dilucin 1:10
Alcuota 0.2 mL y 0.5 mL
Testigo:
Dilucin 1:10
Alcuota 0.5 mL
( ali1 ) ( 10)
glucosaresidual x=
0.109+0.0186
9.3914 x 104
1
0.2
mg/10ml
glucosaresidual x=
mg/10ml
0.376+0.0186
9.3914 x 104
1
0.5
glucosaresidual x=
0.009+0.0186
9.3914 x 104
1
1
= 2.9388
mg/10ml
Glucosa real del Problema = Glucosa Residual Problema Glucosa Residual del Testigo
Glucosa real del Problema = 67.9344 mg/10ml 2.9388 mg/10ml = 64.9956 mg/ 10 ml glucosa
Glucosa real del Problema = 84.0343 mg/10ml 2.9388 mg/10ml = 81.0955 mg/ 10 ml glucosa
Donde:
y = absorbencia
x = concentracin
X=
y1.318351
3.236723 x 104
Dado que las dos muestras entran en la curva y no hay mucha diferencia entre ellas se
hace un promedio con el cual este ser ocupado en el clculo.
mgde Etanol
1
= ( mgde Etanol )
(10)
10 mL
alic
( )
mg
0.9721.318351
de etanol x=
10 ml
3.236723 x 104
mg/10ml
1
0.2
) (10)
/1000g
= 53.5033
mg
0.6001.318351
de etanol x=
10 ml
3.236723 x 104
1
0.5
) (10)
/1000g
= 44.3875
mg/10ml
mg
1.1671.318351
de etanol testigo x=
10 ml
3.236723 x 104
1
1
mg/10ml
Etanol real del Problema = Etanol Problema Etanol Testigo
Etanol real del Problema = 53.5033 mg/10ml 4.6760 mg/10ml = 48.8272 mg/ 10 ml etanol
Glucosa real del Problema = 44.3875 mg/10ml 4.6760 mg/10ml = 39.7114 mg/ 10 ml etanol
0.8020
802
0.8642
864.2
BaCO3 de fermentacin
0.0622
62.2
0.7950
795
0.9289
928.9
BaCO3 testigo
0.1339
133.9
BaCO3 Problema = Peso de papel con muestra Peso de papel sin muestra
BaCO3 Problema = 864.2 mg 802 mg
BaCO3 Problema = 62.2 mg
BaCO3 Testigo = Peso de papel con muestra Peso de papel sin muestra
BaCO3 Testigo = 928.9 mg 795 mg
BaCO3 Testigo = 133.9 mg
Donde F .G .=71.7
Donde F .G .=71.7
PM CO 2
=0.223
PM BaCO 3
PM 44CO 2
=15.9874
PM 197.33 BaCO 3
Por tanto;
mg de CO2 = -15.9874 mgCO2
Sabemos que:
44.0 mg de CO2 1 mmol de CO2
-15.9874 mg de CO2 x mmol de CO2
x = -0.3633 mmol
Compuestos
Concentracin
[mmol]
Moles de
producto
por moles
de Glu
Estado de
oxidacin
Val de
produc
oxid
Val de
prodc
red
Carbono
recuperado
-3.2391
3.2391
FUENTE DE ENERGA
Glucosa
(C6H12O6)
0.5941
PRODUCTOS.
Etanol
(C2H6O)
Dixido de
carbono
(CO2)
0.9623
1.6195
-2
+2
SUMA
0
0
O
0
=
R 3.2391
O
=0
R
0
3.2391
3.2391
C Recuperado =
3.2391
( 100 )
6
C Recuperado =53.985
DISCUSIN:
Al realizar nuestro balance de fermentacin del microorganismo Saccharomyces
cerevisiae al observar las cantidades, de etanol CO 2, no eran las esperadas, ya que
tericamente debamos obtener por cada mol de glucosa, dos moles de etanol y dos de
CO2 (condiciones anaerbicas), obtuvimos menos de ese valor. Las condiciones
anaerbicas, en la prctica se emple un mtodo, el cual una vez agregada la levadura a
nuestros matraces de fermentacin inyectamos N 2 para mantener a la levadura en
condiciones de anaerobiosis y as fermentara la glucosa, luego de eso se incubo en las
manos de un integrante del equipo, esto fue porque los microorganismos son mesfilicos,
es decir, necesitan de ciertas temperaturas para poder crecer.
Al realizar el balance de fermentacin, podemos discutir que en la determinacin de CO 2,
no se lleva a cabo acabo, ya que el matraz de reaccin no es el apropiado para
determinar este producto, por lo tanto suponemos que no se llev a cabo una buena
absorcin de este en el hidrxido de sodio, ya que nos arroja un valor negativo. En la
determinacin de etanol, pudimos observar que no obtuvimos 0.9623 mmol de este
producto, con esto podemos decir que aqu el mtodo no fue el adecuado ya que la
muestra probablemente estaba contaminada. Al calcular el ndice O/R nos da un valor de
cero y no podemos saber cuntos productos reducidos u oxidados hay en la reaccin, se
ve afectado el %C recuperado, ya que obtuvimos menos del 53.985%.
INTERFERENCIAS EN LA DETERMINACIN CON DNS
Al obtener valores bajos de azcar residual, no se pueden considerar la presencia de
interferencias en el proceso de fermentacin.
Estas interferencias se presentan cuando se obtienen valores muy parecidos al de la
concentracin inicial de la glucosa o se presentan valores mayores al inicial.
Esto se debe a la presencia de otros compuestos con estructura parecida al azcar, como
el cido gluconico que pueden reaccionar con el DNS y entonces obtenemos una lectura
que no solo nos da la presencia de la glucosa, sino tambin de otros compuestos y es
por eso que obtenemos lecturas similares o mayores a la inicial.
Otra de las causas por la cual podemos obtener una lectura incorrecta en el sistema, y de
este modo no cuantificar del modo adecuado la concentracin de glucosa, es la
contaminacin de las clulas con el hidrxido de la cmara central, al contaminarse las
clulas con este reactivo y al llevar al cabo la reaccin con el DNS, el hidrxido reacciona
con el DNS y pasa de cido dinitrosaliclico a dinitrosalicilato, el cual ya no lleva a cabo la
reaccin con el azcar y por lo tanto no nos da la reaccin colorida, y es por eso que
obtenemos lecturas de absorbencia baja, y por lo tanto al interpolar y realizar clculos
obtenemos una concentracin de glucosa residual baja.
BIBLIOGRAFIA
SOLOMON E.P., BERG L.R., MARTIN D.W. Biologa. Octava edicin. Interamericana
McGraw-Hill. 2008. Mxico. Parte 2. Captulo 8.
ROSE, Anthony H. Microbiologa qumica. Introduccin a la Fisiologa Microbiana
Ed. Alhambra, pp 244.