UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE INGENIERIA
INGENIERA AGROINDUSTRIAL
MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
ESTUDIANTE: Andrs Guayes
DOCENTE: Byron Herrera SEMESTRE: Cuarto Semestre
FECHA: 04-05-2015
TEMA: OBTENCIN Y CARACTERIZACIN DE MUTANTES PHANEGATIVOS EN CEPAS DE 'PSEUDOMONAS' PARA LA PRODUCCIN DE
COMPUESTOS DE INTERS INDUSTRIAL
RESUMEN: Pseudomonasaeruginosa 47T2 y P. aeruginosa 42A2,
fueron aislados a partir suelos y aguas, respectivamente,
contaminadas con residuos oleosos. Ambas cepas fueron
seleccionadas por su capacidad para sintetizar compuestos
hidrofbicos, como polihidroxialcanoatos (Phaser), ramnolpids (Rhls),
o estlido. Los Phaser son polisteres biodegradables y
biocompatibles de gran inters biotecnolgico para ser una buena
alternativa a los plsticos petroqumicos. Adems de producir Phaser,
P. aeruginosa 47T2 es capaz de producir Rhls, compuestos glicolpidos
conocidos como surfactantes microbianos que presentan actividades
antimicrobiona y / o antifngica. En cambio, P. aeruginosa 42A2 no
produce Rhls, pero si es capaz de convertir los aceites residuales en
mono-, di- o tri-hidroxi cidos grasos y ms tarde polimerizarse en
estlido. Los estlido son biopoliesters son conocidos por ser buenos
emulsificadores con interesantes aplicaciones industriales. Dadas las
diferencias metablicas a nivel lipdico detectadas entre ambas
cepas, se ha estudiado su sistema lipoltico comparndolo con la cepa
tipo Pseudomonas aeruginosa PA01. Tomando los productos lipdicos
comunes y diferentes, y teniendo en cuenta que comparten
intermediarios comunes en sus rutas biosintticas, se ha decidido
obtener mutantes negativos para la produccin de PHA para estudiar
el flujo de carbonos y poder as dilucidar parte de las rutas
metablicas que generan determinados productos. Estos mutantes se
generan por ambas cepas P. aeruginosa 47T28AD y P. aeruginosa
42A28AD. Despus de haber probado diferentes estrategias de
mutagnesis aleatoria sin xito (irradiacin controlada con luz UV y
transposicin), los mutantes se obtienen a travs de mutagnesis
dirigida con la que se fuerza la recombinacin y por tanto la mutacin
de los genes que codifican para la enzima PHA sintasa, mediante el
plsmido suicida pEX100Tlink. Se analizan los mutantes obtenidos por
microscopa electrnica de transmisin (MET) y la produccin de
Phaser analiza por resonancia magntica nuclear (RMN). Ambos
procesos permiten determinar que los potenciales mutantes no
producen Phaser y para confirmarlo se extrae y cuantifica el PHA

observando que la produccin de Phaser desaparece en los mutantes.

Una vez obtenidos los mutantes hay que ver si esta mutacin afecta a
la produccin de otros metabolitos. En la cepa P. aeruginosa 47T2, se
estudian los Rhls producidos a partir de aceites residuales, tanto a
nivel de cantidad de produccin como de calidad del producto. Se
cuantifican por gravimetra y HPLC-MS y se caracterizan a nivel
fisicoqumico (determinacin de CMCs, diagramas ternarios de fases,
capacidad emulsionante). Si bien la produccin de Phaser desaparece
en los mutantes seleccionados, parece que la produccin de Rhls
aumenta ligeramente respecto a la cepa parental, pero no de manera
proporcional a la desaparicin de Phaser. Por otra parte la
caracterizacin de los biotensioactius tampoco muestra diferencias
significativas entre los productos obtenidos a partir del mutante y de
la cepa parental, pero si es interesante por las posibilidades a nivel de
aplicaciones biotecnolgicas de los Rhls. Con respecto a la cepa P.
aeruginosa 42A2, los mutantes servirn para hacer el mismo estudio
cuantitativo y cualitativo de otro producto, los estlido, pero eso
forma parte de otro estudio del grupo. En la tesis lo cuantificado son
los derivados hidroxilados (mono- y di-hidroxilados) a partir de los
cuales se forman los estlido, que tambin tienen propiedades
tensioactivas y antimicrobianas y / o antifngicas.
CONCLUSIONES
-

Pseudomonasaeruginosa 47T2 y P. aeruginosa 42A2, fueron

aislados
a
partir
suelos
y
aguas,
respectivamente,
contaminadas con residuos oleosos. Ambas cepas fueron
seleccionadas por su capacidad para sintetizar compuestos
hidrofbicos, como polihidroxialcanoatos (Phaser), ramnolpids
(Rhls), o estlido.
Phaser, P. aeruginosa 47T2 es capaz de producir Rhls,
compuestos
glicolpidos
conocidos
como
surfactantes
microbianos que presentan actividades antimicrobiona y / o
antifngica; mientras que P. aeruginosa 42A2 no produce Rhls,
pero si es capaz de convertir los aceites residuales en mono-,
di- o tri-hidroxi cidos grasos y ms tarde polimerizarse en
estlido.
Los Phaser son polisteres biodegradables y biocompatibles de
gran inters biotecnolgico para ser una buena alternativa a los
plsticos petroqumicos.
Los estlido son biopoliesters son conocidos por ser buenos
emulsificadores con interesantes aplicaciones industriales.

RECOMENDACIONES
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LINKOGRAFIA
http://www.tdx.cat/handle/10803/31978
ANEXOS
-Residuo=Residue
Pseudomonas aeruginosa and Pseudomonas aeruginosa 42A2 47T2
were isolated from soil and water , respectively , contaminated with
oil residues .
-Cepa= Strain
A strain is a set of bacterial species that share at least one
characteristic .
-Tensioactivo=Surfactant
Surfactants are substances that influence or through the surface
tension at the interface between two phases.
-Lipolisis: Lipolysis
Lipolysis is the metabolic process by which the body lipids are
processed to produce fatty acids and glycerol to meet energy needs.
-Plasmid=Plasmido
Plasmids are circular DNA molecules or linear extrachromosomal
replicating and transmitted independent of chromosomal DNA .