Cap 7

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Captulo 7: DNA: Estructura y replicacin

Preguntas clave:
Antes del descubrimiento de la doble hlice, qu evidencia experimental sugera

que el DNA era el material gentico?
Qu datos se emplearon para deducir el modelo de la doble hlice del DNA?
Cmo sugiere la estructura de la doble hlice un mecanismo para la replicacin del
DNA?
Cmo puede ser rpida y exacta a la vez la replicacin del DNA?
Qu mecanismo especial replica a los extremos del cromosoma; y qu
consecuencias tiene sobre la salud humana la replicacin defectuosa de estos
extremos?
Esquema:
7.1 DNA: el material gentico
7.2 La estructura del DNA
7.3 La replicacin semiconservativa
7.4 Visin general de la replicacin del DNA
7.5 El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria
7.6 La replicacin en los organismos eucariotas
7.7 Telmeros y telomerasa: terminacin de la replicacin.
James Watson, un genetista microbiano americano, y Francis Crick, un fsico ingls,
resolvieron la estructura del DNA en 1953. Su modelo de la estructura del DNA fue
revolucionario; ya que propuso una definicin de gen en trminos qumicos, y prepar el
terreno para entender a nivel molecular la accin gnica y la herencia. Una medida de la
importancia de su descubrimiento es que la estructura de la doble hlice se ha transformado
en un icono cultural que se cada vez se puede verse con mayor frecuencia en pinturas,
esculturas e incluso parques de recreo (Figura 7-1).
La historia comienza en la primera mitad del siglo veinte, cuando los resultados de
varios experimentos llevaron a los cientficos a concluir que el DNA es el material gentico,
y que no otra molcula biolgica como los hidratos de carbono, las protenas o los lpidos.
El DNA es una molcula simple formada por cuatro bloques constitutivos (los cuatro
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nucletidos). Era necesario entender cmo esta molcula tan simple podra contener las
instrucciones para la construccin de la increble diversidad de organismos que hay en la
Tierra.
El modelo de la doble hlice propuesto por Watson y Crick se construy sobre los
resultados obtenidos por los cientficos que les precedieron. Fundamentaron su modelo en
los descubrimientos previos de la composicin qumica del DNA y las proporciones de sus
bases. Adems, las imgenes del DNA por difraccin de rayos X revelaban al ojo entrenado,
que el DNA es una hlice de dimensiones exactas. Watson y Crick concluyeron que el DNA
es una doble hlice compuesta por dos cadenas de nucletidos ligados, que se enrollan una
alrededor de la otra.
La estructura propuesta del material hereditario sugiri de manera inmediata su

funcin como conjunto de instrucciones y cmo ste podra ser transmitido a lo largo de las
generaciones. Primero, la informacin para hacer un organismo podra estar codificada en la
secuencia de bases nucleotdicas que componen las dos cadenas de la hlice. Segundo,
debido a las reglas de complementariedad de bases descubiertas por Watson y Crick, la
secuencia de una cadena determina la secuencia de la otra cadena. De esta forma, la
informacin gentica en la secuencia del DNA podra trasmitirse de una generacin a la
siguiente haciendo que cada una de las cadenas por separado sirviera como molde para
producir nuevas copias de la molcula.
En este captulo, nos concentraremos en el DNA, en su estructura, y en la produccin
de copias de DNA mediante el proceso denominado replicacin. Cmo se replica
exactamente el DNA es todava, despus de 50 aos del descubrimiento de la doble hlice,
un rea activa de investigacin. Nuestra comprensin actual del mecanismo de replicacin
da un protagonismo central a una maquinaria de protenas denominada replisoma. Este
complejo de protenas coordina las numerosas reacciones que son necesarias para la
replicacin rpida y exacta del DNA.
7.1 DNA: El material gentico
Antes de ver cmo hicieron Watson y Crick para resolver la estructura del DNA,
revisaremos los conocimientos acerca de los genes y el DNA en el momento en que
comenzaron su colaboracin histrica:
1. Se saba que los genes, descritos por Mendel como los factores hereditarios, estn
asociados con caractersticas especficas, pero no se conoca su naturaleza fsica. De igual
forma, se saba que las mutaciones alteraban la funcin gnica, pero no se saba exactamente
qu era una mutacin.
2. La hiptesis de un gen una protena (descrita en el Captulo 6) postulaba que los genes
controlan la estructura de las protenas.
3. Se conoca que los genes se encontraban en los cromosomas.
4. Se saba que los cromosomas estaban constituidos por DNA y protenas.
5. Los resultados de una serie de experimentos que comenzaron en 1920 revelaron que el
DNA era el material gentico. Los experimentos, que describiremos a continuacin,
demostraron que las clulas bacterianas que expresan un fenotipo, pueden ser transformadas
en clulas que expresan un fenotipo distinto y que el agente transformante es el DNA.
El descubrimiento de la transformacin
En 1928, Frederick Griffith hizo una observacin sorprendente en el curso de sus
experimentos con la bacteria Streptococcus pneumoniae. Esta bacteria, que causa la
neumona en humanos, es generalmente letal en los ratones. Sin embargo, algunas cepas de
esta especie bacteriana han evolucionado hacia una forma menos virulenta (son menos
capaces de causar la enfermedad o la muerte). Los experimentos de Griffith se resumen en la
Figura 7-2. En sus experimentos, Griffith emple dos cepas de la bacteria que se distinguen
por la apariencia que presentan sus colonias al ser cultivadas en el laboratorio. Una cepa era
del tipo virulento normal que mata a la mayora de los animales de laboratorio. Las clulas
de esta cepa estn encerradas en una cpsula de polisacridos, que confiere a las colonias un
aspecto liso; y por lo tanto se identifica a esta cepa como S (del ingls smooth). La otra cepa
que emple Griffith era un tipo de mutante sin virulencia
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que crece en los ratones pero no es letal. Esta cepa no tiene la capa de polisacridos de
manera que las colonias tienen una apariencia spera, por lo tanto se identifica como cepa R
(del ingls rough).
Griffith mat algunas clulas virulentas hirvindolas; luego las inyect a los ratones
y stos sobrevivieron, mostrando que la cpsula de las clulas no es la causa de la muerte.
Sin embargo, los ratones inyectados con una mezcla de clulas virulentas muertas por calor
y clulas no virulentas vivas s que murieron. Ms an, al recuperar las clulas vivas de los
ratones muertos, presentaban un aspecto liso y eran virulentas al ser empleadas en las
siguientes inyecciones. De alguna manera, los restos celulares de la cepa S hervida haban
convertido a las clulas vivas R en clulas tipo S. Este proceso se denomina transformacin
y ya se ha discutido en el Captulo 5.
El siguiente paso fue determinar cul de los componentes qumicos procedentes de
las clulas donantes muertas era el que haba causado la transformacin. Esta sustancia haba
cambiado el genotipo de la cepa receptora, y por lo tanto podra ser el candidato para el
material hereditario. El problema se resolvi con los experimentos llevados a cabo en 1944
por Oswald Avery y sus dos colaboradores, Colin MacLeod y Maclyn McCarty (Figura 7-3).
Su aproximacin al problema fue destruir qumicamente los principales componentes
qumicos presentes en el extracto de las clulas muertas uno tras otro, y observar si el
extracto haba perdido la capacidad de transformacin. Las clulas virulentas tenan una
cubierta de polisacridos lisa, en cambio las clulas no virulentas no la posean, por lo tanto
los polisacridos eran los candidatos obvios para ser el agente transformante. Sin embargo,
cuando se destruan los polisacridos, la mezcla an era capaz de transformar. De manera
similar, fueron probados las protenas, los lpidos, y los cidos ribonucleicos (RNA) sin que
ninguno de ellos demostrara ser el agente transformante. La mezcla perdi su poder de
transformacin slo cuando la mezcla donante fue tratada con la enzima desoxirribonucleasa
(DNAsa), que corta el DNA. Estos resultados implican al DNA como slido candidato para
ser el material gentico. Se sabe ahora que los fragmentos de DNA transformante que
confieren virulencia entran al cromosoma bacteriano y reemplazan a su homlogo que no
confiere virulencia.
Mensaje: La demostracin que el DNA es el principio transformante fue la primera
evidencia que los genes (el material hereditario) estn compuestos por DNA.
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El experimento de Hershey-Chase
Los experimentos realizados por Avery y sus colaboradores fueron definitivos, pero
muchos investigadores eran muy reacios a aceptar al DNA como el material gentico en
lugar de las protenas. Despus de todo, cmo podra una molcula de tan poca
complejidad codificar para la diversidad de vida existente en el planeta? Alfred Hershey y
Martha Chase en 1952 aportaron una evidencia adicional realizando un experimento que
emplea un virus que infecta a las bacterias, el fago T2. Su argumento resida en que para
infectar a la bacteria el fago debe inyectar la informacin especfica que dicta la
reproduccin de nuevas partculas virales. Si pudieran averiguar qu material es el que
inyecta el fago dentro de la bacteria hospedadora, habran determinado el material gentico
de los fagos.
El fago tiene una constitucin molecular relativamente simple. La mayor parte de su
estructura es proteica, con el DNA contenido dentro de la cubierta proteica de su cabeza.
Hershey y Chase decidieron marcar diferencialmente el DNA y la protena usando
radioistopos, de manera que podan rastrear los dos materiales durante la infeccin. El
fsforo no forma parte de las protenas pero si forma parte integral del DNA; mientras que el
azufre est presente en las protenas pero nunca se encuentra en el DNA. Hershey y Chase
incorporaron el radioistopo del fsforo (32P) al DNA de un cultivo de fagos y el
radioistopo del sulfuro (35S) a las protenas de otro cultivo. Como se puede observar en la
Figura 7-4, se infectaron dos cultivos de E. coli con muchas partculas virales por clula: un
cultivo de E. coli recibi el fago marcado con 32P y el otro recibi el fago marcado con 35S.
Despus que tuviera lugar la infeccin, separaron las cabezas vacas de los fagos (llamadas
fantasmas) por agitacin con una batidora de cocina. Separaron las clulas bacterianas de los
fantasmas de los fagos con una centrfuga y entonces midieron la radioactividad en las dos
fracciones. Cuando se emplearon los fagos marcados con 32P para infectar E. coli, la mayora
de la radiactividad se encontr dentro de las clulas bacterianas, indicando que
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el DNA del fago entr en la clula. Cuando se emplearon los fagos marcados con 35S, la
mayora del material radioactivo se registr en los fantasmas fgicos, indicando que la
protena del fago nunca entr en la clula bacteriana. La conclusin es ineludible: el DNA es
el material hereditario. Las protenas del fago son un mero embalaje estructural que se
descarta luego de inyectar el DNA vrico en la clula bacteriana.
7.2 La estructura del DNA
An antes que se esclareciera la estructura del DNA, los estudios genticos indicaron
que el material hereditario debe tener tres propiedades claves:
1. Debido a que cada clula del cuerpo de un organismo tiene esencialmente la misma
composicin gentica, es crucial la replicacin fiel del material gentico en cada
divisin celular. As, las caractersticas estructurales del DNA deben permitir la
replicacin fiel. Las caractersticas estructurales sern consideradas ms adelante en
este captulo.
2. Debido a que debe codificar para la constelacin de protenas expresadas por un
organismo, el material gentico debe tener contenido informativo. Cmo se descifra
la informacin codificada en el DNA para producir protenas ser el tema de los
Captulos 8 y 9.
3. Debido a que los cambios hereditarios, llamados mutaciones, proveen la materia
prima para la seleccin evolutiva, el material gentico debe ser capaz de cambiar en
raras ocasiones. Sin embargo, la estructura del DNA debe ser lo suficientemente
estable como para que los organismos puedan contar con la informacin codificada.
Consideraremos los mecanismos de la mutacin en el Captulo 15.
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La estructura del DNA antes de Watson y Crick
Considere el descubrimiento de la estructura de la doble hlice de DNA por Watson y
Crick como la solucin a un rompecabezas tridimensional complicado. Para resolverlo,
Watson y Crick realizaron una maqueta en la cual ensamblaron los resultados de los
experimentos previos y de los experimentos que se hallaban en curso (las piezas) para
formar el rompecabezas tridimensional (el modelo de la doble hlice). Para comprender
cmo lo hicieron, primero se necesita saber qu piezas estaban disponibles para Watson y
Crick en 1953.
Los bloques estructurales del DNA La primera pieza del rompecabezas fue el
conocimiento de los bloques estructurales bsicos del DNA. Como sustancia qumica, el
DNA es bastante simple. Contiene tres tipos de componentes: (1) fosfato, (2) un azcar
llamado desoxirribosa, y (3) cuatro bases nitrogenadas: adenina, guanina, citosina y timina.
Los tomos de carbono en las bases tienen nmeros asignados para referirse a ellos
fcilmente. Los tomos de carbono en el azcar tambin tienen asignados nmeros, en este
caso, el nmero est seguido por una prima (1, 2, y as sucesivamente). El azcar en el
DNA se denomina desoxirribosa debido a que tiene un solo tomo de hidrgeno (H) en el
tomo de carbono 2, a diferencia de la ribosa (componente del RNA), que tiene un grupo
hidroxilo (OH) en esa posicin. Dos de las bases, la adenina y la guanina, tienen una
estructura de doble anillo caracterstico de un tipo de qumico llamado purina. Las otras dos
bases, la citosina y la timina, tienen una estructura de anillo simple del tipo llamado
pirimidina. Los componentes qumicos del DNA estn ordenados en grupos llamados
nucletidos, cada uno compuesto de un grupo fosfato, una molcula del azcar
desoxirribosa y cualquiera de las cuatro bases (Figura 7-5). Es
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conveniente referirse a cada nucletido por la primera letra del nombre de la base: A, G, C
T. El nucletido con la base adenina se llama monofosfato de desoxiadenosina -5, donde 5
se refiere a la posicin del tomo de carbono en el anillo del azcar al que est unido un
nico (mono) grupo fosfato.
Reglas de Chargaff de la composicin de bases. La segunda pieza del rompecabezas
empleada por Watson y Crick provena de un trabajo realizado varios aos antes por Edwin
Chargaff. Estudiando una gran seleccin de DNA de diferentes organismos (Tabla 7-1),
Chargaff estableci ciertas reglas empricas de la cantidad de cada tipo de nucletidos
descubiertos en el DNA:
1. La cantidad total de nucletidos de pirimidina (T + C) siempre es igual a la cantidad
total de nucletidos de purina (A + G).
2. La cantidad de T siempre es igual a la cantidad de A, y la cantidad de C siempre es
igual a la cantidad de G. Pero, la cantidad de A + T no es necesariamente igual a la
cantidad de C + G, como puede verse en la columna derecha de la Tabla 7-1. Esta
proporcin vara entre diferentes organismos pero es prcticamente la misma en
diferentes tejidos del mismo organismo.
Anlisis del DNA por difraccin de Rayos X. La tercera y ms controvertida pieza del
rompecabezas proviene de los datos de difraccin de rayos X sobre la estructura del DNA,
obtenidos por Rosalind Franklin cuando trabajaba en el laboratorio de Maurice Wilkins
(Figura 7-6). En sus experimentos, los rayos X bombardean las fibras de DNA y la
dispersin que producen los rayos sobre las fibras se captura sobre una pelcula fotogrfica,
donde los rayos X producen puntos. El ngulo de dispersin representado por cada punto
sobre el film suministra informacin acerca de la posicin del tomo o cierto grupo de
tomos en la molcula de DNA. Este procedimiento no es simple de realizar ni de explicar, y
la interpretacin del patrn de puntos requiere un tratamiento matemtico complejo que est
fuera del alcance de este libro. Los datos disponibles sugeran que el DNA es una molcula
larga y delgada y que tiene dos partes similares que discurren en paralelo a lo largo de la
molcula. Los datos de rayos X mostraron que la molcula era helicoidal (en forma de
espiral). Maurice Wilkin mostr la mejor fotografa de rayos X obtenida por Rosalind
Franklin a Watson y Crick sin que ella lo supiera, y esta fotografa fue la pieza clave del
rompecabezas que les permiti deducir la estructura tridimensional que podra explicar los
patrones de puntos de los rayos X.
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La doble hlice.
El trabajo de 1953 publicado por Watson y Crick en la revista Nature comenzaba con dos
frases que anunciaban una nueva era para la biologa: Deseamos sugerir una estructura para
la sal de cido desoxirribonucleico (D.N.A.). Esta estructura tiene caractersticas novedosas
que son de inters biolgico considerable. La estructura del DNA haba sido un tema de
gran debate desde los experimentos de Avery y sus colaboradores en 1944. Como ya se ha
visto, se conoca la composicin general del DNA, pero no se saba cmo concordaban las
partes en su conjunto. La estructura tena que satisfacer los principales requerimientos para
una molcula hereditaria: la capacidad de almacenar informacin, la capacidad de replicarse
y la capacidad de mutar.
La estructura en tres dimensiones presentada por Watson y Crick est compuesta por dos
cadenas o hebras de nucletidos que se tuerce formando una doble hlice (Figura 7-7).
Las dos cadenas de nucletidos estn unidas por puentes de hidrgeno entre las bases de
cada hebra, formando una estructura como de escalera en espiral (Figura 7-8b). El esqueleto
de cada espiral est formado por unidades alternantes de fosfato y de azcar desoxirribosa
que estn conectados por enlaces fosfodister. Podemos usar estos enlaces para describir
cmo se organiza una cadena de nucletidos. Como ya se ha mencionado, los tomos de
carbono de los azcares estn numerados desde el 1 hasta el 5. Un enlace fosfodister
conecta el tomo de carbono 5 de una desoxirribosa al tomo de carbono 3 de la
desoxirribosa adyacente. As, cada esqueleto de azcar-fosfato tiene una polaridad o
direccin 5 a 3, y el conocimiento de esta polaridad es esencial para entender cmo
desempea el DNA sus funciones. En la molcula de dos cadenas de DNA, los dos
esqueletos estn en orientacin opuesta, o antiparalela (vase Figura 7-8b).
Cada base est enlazada al tomo de carbono 1 de una desoxirribosa en el esqueleto
de cada cadena y se encara hacia el interior con una base de la otra cadena. Los puentes de
hidrgeno entre pares de bases mantienen unidas a las dos cadenas de la molcula de DNA.
Los puentes de hidrgeno estn indicados por lneas discontinuas en la Figura 7-8b.
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Dos cadenas de nucletidos emparejadas en direccin antiparalela automticamente adoptan

una conformacin de doble hlice (Figura 7-9), principalmente a travs de la interaccin
entre los pares de bases. Los pares de bases, que forman una estructura plana, se encuentran
apilados unos encima de otros en el centro de la doble hlice (vase Figura 7-9a). El
apilamiento de las bases aade estabilidad a la molcula de DNA debido a que excluye a las
molculas de agua de los espacios entre los pares de bases. La forma ms estable que surge
de la posicin de las bases es una doble hlice con dos surcos de distinto tamao distribuidos
a lo largo de la espiral: el surco mayor y el surco menor, como puede observarse tanto en
el modelo de cinta como en el modelo espacial compacto (vase Figura 7-9b) La mayor
parte de las asociaciones DNA-protenas se realizan en el surco mayor. Una nica cadena de
nucletidos no adopta una estructura helicoidal; la forma helicoidal del DNA depende por
completo del emparejamiento de las bases apiladas en las cadenas antiparalelas. El DNA es
una hlice dextrgira; en otras palabras, tiene la misma estructura que la de un tornillo que
se atornillase en el mismo sentido de las agujas del reloj.
La doble hlice explica con xito los resultados de los rayos X y los datos de
Chargaff. Watson y Crick estudiaron los modelos de la estructura, y comprobaron que el
radio observado de la doble hlice, obtenido a partir de los datos de rayos X, podra
explicarse si una purina siempre aparea con una pirimidina mediante puentes
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de hidrgeno (Figura 7-10). Este apareamiento podra explicar la regularidad observada por
Chargaff (A + G) = (T + C), pero predecira cuatro tipos de emparejamientos posibles: T
A, TG, CA y CG. Sin embargo, los datos de Chargaff indican que la T slo aparea
con la A, y la C slo aparea con la G. Watson y Crick concluyeron que cada par de bases
consiste de una purina y una pirimidina, apareadas de acuerdo con la siguiente regla: G
aparea con C y A aparea con T.
Observe que el par C-G tiene tres puentes de hidrgeno, mientras que el par A-T slo tiene
dos (vase Figura 7-8b).
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Se podra predecir que el DNA que contiene muchos pares G-C sera ms estable que el
DNA que contiene muchos pares A-T. De hecho, esta prediccin se confirma. El calor causa
que las dos cadenas de la molcula de DNA se separen, en un proceso llamado
desnaturalizacin de DNA o fusin del DNA; cuanto mayor es el contenido de C+G se
requiere mayor temperatura para desnaturalizar la molcula debido a la mayor fuerza de
atraccin del apareamiento G+C.
Mensaje: El DNA es una doble hlice compuesta por dos cadenas de nucletidos que se
mantienen unidas por complementariedad de los apareamientos de A con T y de G con C.
El descubrimiento de Watson y Crick de la estructura del DNA se considera uno de los ms
importantes descubrimientos biolgicos del siglo veinte y los por ello ganaron el Premio
Nobel junto con Maurice Wilkins en 1962 (Rosalind Franklin muri de cncer en 1958 y no
se otorga pstumamente). La razn por la que este descubrimiento sea considerado tan
importante es que la doble hlice, adems de ser consistente con los datos previos de la
estructura del DNA, cumple con los tres requisitos de una sustancia hereditaria.
1. La estructura en doble hlice sugiere cmo el material gentico podra determinar la

estructura de las protenas. Quiz la secuencia de pares de nucletidos en el DNA
dicte la secuencia de aminocidos en la protena especificada por el gen. En otras
palabras, alguna clase de cdigo gentico podra escribir la informacin en el DNA
como una secuencia de nucletidos y luego traducirlo en el lenguaje diferente de la
secuencia de aminocidos de la protena. Cmo esto se hace es el tema del Captulo
9.
2. Si la secuencia de bases del DNA especifica la secuencia de aminocidos, entonces la
mutacin es posible a travs de la sustitucin de un tipo de base por otra en una o
ms posiciones. Las mutaciones se discutirn en el Captulo 15.
3. Como Watson y Crick han sealado en las palabras finales de su trabajo en Nature de
1953, que comunicaba la estructura de doble hlice del DNA: No se ha escapado a
nuestra atencin de que el apareamiento especfico que hemos postulado sugiere
inmediatamente un posible mecanismo de copia del material gentico. Para los
genetistas de la poca, el significado de esta declaracin fue claro, como se ver en la
siguiente seccin.
7.3 Replicacin semiconservativa
El mecanismo de duplicacin al que se referan Watson y Crick se denomina replicacin
semiconservativa y se grafica en la Figura 7-11. Los esqueletos de azcar-fosfato se
representan por
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cintas finas, y la secuencia de pares de bases est al azar. Imagine que la doble hlice es
anloga a una cremallera cerrada que se abre empezando por un extremo (Vase Figura 711). Se puede ver que, si la analoga de la cremallera es vlida, al desenrollar las dos cadenas
se expondrn las bases simples de cada cadena. Cada base expuesta tiene el potencial de
aparear con los nucletidos libres que haya en la solucin. Ya que la estructura del DNA
impone requerimientos estrictos para el apareamiento, cada base expuesta slo podr
emparejarse con su base complementaria, A con T y G con C. De esta forma, cada una de
las dos cadenas actuara como molde o plantilla, que dirige el ensamblaje de bases
complementarias para formar una doble hlice idntica a la original. Se supone que los
nucletidos aadidos recientemente provienen de un grupo de nucletidos libres que deben
estar presentes en la clula.
Si este modelo es correcto, entonces cada molcula hija debera contener una cadena
de nucletidos original y una cadena nueva recin sintetizada. Sin embargo, un simple
razonamiento muestra que hay al menos tres modelos diferentes por los cuales una molcula
original estara relacionada con las molculas hijas. Estos modelos hipotticos de replicacin
se denominan semiconservativo (el modelo de Watson y Crick), conservativo, y dispersivo
(Figura 7-12). En la replicacin semiconservativa, la doble hlice de cada molcula hija de
DNA contiene una cadena de la molcula original y una cadena sintetizada de nuevo. Sin
embargo, en la replicacin conservativa, la molcula parental de DNA se conserva, y se
produce una molcula nueva con sus dos cadenas sintetizadas de nuevo. En la replicacin
dispersiva, la molcula hija est formada por dos cadenas y cada una de ellas contiene
segmentos de ambas, tanto de la cadena parental como de la sintetizada de nuevo.
El experimento de Meselson-Stahl
Para comprender el proceso de la replicacin del DNA, haba que determinar si el

mecanismo era semiconservativo, conservativo o dispersivo. En 1958, dos jvenes
cientficos, Matthew Meselson y Franklin Stahl, se propusieron descubrir cul de estas tres
posibilidades describe de manera correcta la replicacin del DNA. Su idea era permitir que
las molculas parentales que contienen nucletidos de una densidad determinada se
repliquen en un medio que contena nucletidos de densidad diferente. Si el DNA se replica
de manera semiconservativa, las molculas hijas debern tener una cadena con la densidad
de la molcula original y una cadena con la densidad de los nuevos nucletidos; en
consecuencia, las molculas hijas presentarn una densidad intermedia. Para realizar este
experimento, crecieron clulas de E. coli en un medio que contena el istopo pesado del
Nitrgeno (15N) en vez de la forma normal ms ligera (14N). El istopo se insert en las bases
nitrogenadas, y se incorporaron en la molcula de DNA sintetizada de nuevo. Despus de
muchas divisiones celulares en un medio rico en 15N, el DNA de las clulas estuvo marcado
por completo con este istopo pesado. Entonces, se cambiaron las clulas del medio con 15N
a un medio con 14N; y despus de una y dos divisiones celulares, se retiraron muestras de las
que se aisl el DNA.
Meselson y Stahl fueron capaces de distinguir el DNA de diferentes densidades
debido a que las molculas se separan unas de otras por un proceso llamado centrifugacin
en gradiente de cloruro de cesio. Si el cloruro de cesio (CsCl) se centrifuga a velocidades
tremendamente altas (50.000 rpm) durante muchas horas, los iones de cesio y de cloruro son
empujados por la fuerza centrfuga hacia la parte inferior del tubo. Finalmente, se establece
un gradiente de iones en el tubo, de manera que los iones de mayor densidad se depositan en
el fondo. El DNA centrifugado con cloruro de cesio forma una banda en la posicin
correspondiente a su densidad en el gradiente (Figura 7-13). El DNA de diferentes
densidades formar bandas en distintas posiciones. Las clulas crecidas en el medio con el
istopo pesado 15N mostraron un DNA de alta densidad. Este DNA se muestra en azul en el
lado
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izquierdo de la Figura 7-13a. Despus del crecimiento de estas clulas durante una
generacin en el medio enriquecido con el istopo ligero de 14N, los investigadores
descubrieron que el DNA presentaba una densidad intermedia; como se observa en el medio
de la Figura 7-13a, donde una cadena de la molcula es azul (15N) y la otra es amarilla (14N).
Meselson y Stahl continuaron el experimento durante una generacin ms, pudiendo
distinguir entre la replicacin semiconservativa y la dispersiva. Luego de dos generaciones,
observaron ambas densidades de DNA, la intermedia y la baja (lado derecho de la Figura 713a), tal y como lo predijeron Watson y Crick en su modelo de replicacin
semiconservativa.
Mensaje: El DNA se replica desenrollando las dos cadenas de la doble hlice y
construyendo una nueva cadena complementaria a cada una de las dos cadenas separadas de
la molcula original.
La horquilla de replicacin
Otra prediccin del modelo de Watson y Crick es que durante el proceso de la
replicacin del DNA, se forma una cremallera u horquilla en la molcula. Esta horquilla se
encuentra en el lugar donde la doble hlice se desenrolla para exponer las dos cadenas
simples que servirn de molde para el proceso de duplicacin. En 1963, John Cairns puso a
prueba esta prediccin permitiendo que el DNA de las clulas bacterianas se replique
incorporando timidina tritiada ([3H]-timidina); el nucletido timina marcado con un istopo

radioactivo llamado tritio. En teora, cada molcula hija recin sintetizada debera contener
una cadena radiactiva (caliente) con 3H y otra cadena no radioactiva (fra). Despus de
varios intervalos y varios ciclos de replicacin en un medio caliente, Cairns produjo la
lisis bacteriana y permiti que el contenido celular se depositase sobre una pieza de papel de
filtro, que coloc luego en un portaobjetos de microscopio. Por ltimo, Cairns cubri el
filtro con emulsin fotogrfica y la expuso en la oscuridad durante dos meses. Este
procedimiento, llamado autorradiografa, le permiti a Cairns revelar una foto de la
localizacin del 3H en el material celular. A medida que el 3H decae, emite partculas beta, un
tipo de electrn energtico. La emulsin fotogrfica detecta una reaccin qumica que tiene
lugar donde sea que la partcula beta golpee la emulsin. Al revelar la emulsin como una
fotografa, se pueden observar las partculas beta como puntos negros o granos.
Luego de un ciclo de replicacin en [3H]-timidina, aparece en la fotografa un anillo
de puntos. Cairns interpret este
anillo como una cadena radioactiva recin formada en una molcula hija de DNA circular,
como se muestra en la Figura 7-14a. Por tanto, es evidente que el cromosoma bacteriano es
circular; un hecho que tambin surgi del anlisis gentico descrito anteriormente en el
Captulo 5. En el segundo ciclo de replicacin, se observ efectivamente la horquilla
predicha por el modelo. Adems, la densidad de granos en los tres segmentos fue tal que
permiti interpretar que la delgada curva de puntos que recorta por el interior del crculo de
DNA sera la cadena hija recin sintetizada, formada por dos cadenas radiactivas, como se
muestra en la Figura 7-14b. Cairns vio todos los tamaos de este patrn autorradiogrfico en
forma de medialuna, correspondiente al movimiento progresivo de las horquillas de
replicacin, alrededor del crculo. El tipo de estructuras que se muestra en la Figura 7-14b se
denomina estructuras theta ().
DNA polimerasas
El siguiente problema que se les plante a los cientficos, era comprender cmo
hacen las bases para unirse al molde de la doble hlice. Aunque los investigadores
sospechaban que las enzimas jugaban algn papel, tal posibilidad no se demostr hasta
1959, cuando Arthur Kornberg aisl la DNA polimerasa de E. coli y demostr su actividad
enzimtica in vitro. Esta enzima aade desoxirribonucletidos al extremo 3 de una cadena
de nucletidos, y emplea como molde una cadena sencilla de DNA que se expone tras
desenrollarse la doble hlice (Figura 7-15). El sustrato para la DNA polimerasa son las
formas trifosfato de los desoxirribonucletidos, dATP, dGTP, dCTP y dTTP.
Ahora se conocen cinco DNA polimerasas en E. coli; la primera enzima que purific
Kornberg se denomina DNA polimerasa I, o pol I. Estas enzimas tienen tres actividades, que
parecen estar localizadas en partes diferentes de la molcula:
1. una actividad polimerasa, que cataliza el crecimiento de la cadena en direccin 5 a 3;
2. una actividad exonucleasa 3 a 5, que elimina las bases mal apareadas; y
3. una actividad exonucleasa 5 a 3, que degrada el DNA de doble cadena.
Ms adelante en este captulo, se retomar el significado de las dos actividades de
exonucleasa.
Aunque la pol I tiene un papel en la replicacin del DNA (vase la siguiente seccin),
algunos cientficos sospechaban que no es la responsable principal de la sntesis del DNA,
debido a que es demasiado lenta (20 nucletidos/segundo), es demasiado abundante (400
10
molculas/clula) y se disocia del DNA despus de la incorporacin de 20 a 50 nucletidos.

En 1969, John Cairns y Paula DeLucia resolvieron este asunto
(Fin de pgina 278)
(principio de pgina 279)
al demostrar que una cepa de E. coli que portaba una mutacin en el gen que codifica la
DNA pol I era capaz de crecer normalmente y de replicar su DNA. Entonces concluyeron
que otra polimerasa, llamada ahora pol III, cataliza la sntesis de DNA en la horquilla de
replicacin.
7.4 Visin general de la replicacin del DNA
A medida que la DNA pol III se mueve, la doble hlice se desenrolla continuamente
por delante de la enzima para exponer fragmentos adicionales de DNA de simple cadena que
actuarn como molde (Figura 7-16). La DNA pol III acta en la horquilla de replicacin, la
zona donde la doble hlice se encuentra desenrollada. Sin embargo, debido a que la DNA
polimerasa siempre aade nucletidos al extremo 3en crecimiento, slo una de las dos
cadenas antiparalelas puede servir como molde para la replicacin en la direccin de la
(Fin de pgina 15)
horquilla de replicacin. En esta cadena, la sntesis puede tener lugar de manera continua en
la direccin de la horquilla; de manera que la nueva cadena sintetizada sobre este molde se
denomina la cadena lder.
La sntesis en el otro molde tambin tiene lugar en el extremo creciente 3, pero se
realiza en la direccin contraria, porque para esta cadena, la direccin de sntesis 5 a 3se
aleja de la horquilla de replicacin (vase la Figura 7-16). Como ya veremos, la naturaleza
de la maquinaria de la replicacin requiere que la sntesis de ambas cadenas tenga lugar en la
regin de la horquilla de replicacin. Por lo tanto, la sntesis que se mueve alejndose de la
horquilla en crecimiento no puede ir demasiado lejos; se debe realizar en fragmentos cortos:
la polimerasa sintetiza un fragmento, luego se mueve hacia el extremo 5 del segmento,
donde la horquilla en crecimiento expone un nuevo molde, y comienza el proceso de nuevo.
Estos fragmentos cortos de 1000-2000 nucletidos de DNA recin sintetizado se denominan
fragmentos de Okazaki.
Otro problema que surge en la replicacin del DNA se debe a que la DNA polimerasa
puede extender una cadena, pero no iniciarla. Por lo tanto, la sntesis de la cadena lder y de
cada fragmento de Okazaki debe iniciarse mediante un cebador, una cadena pequea de
nucletidos, que se une a la cadena molde para formar un fragmento de cido nucleico de
doble cadena. El cebador en la replicacin del DNA se observa en la Figura 7-17. Los
cebadores se sintetizan por un conjunto de protenas llamado primosoma, cuyo componente
central es una enzima llamada primasa, que es un tipo de RNA polimerasa. La primasa
sintetiza un fragmento corto de 8-12 nucletidos de RNA complementario a una regin
especfica del cromosoma. Sobre la cadena lder, slo se necesita un cebador inicial, porque
luego la cadena en crecimiento de DNA sirve como cebador para una adicin continua. Sin
embargo, sobre la cadena complementaria, cada fragmento de Okazaki necesita su propio
cebador. La DNA pol III aade nucletidos a la cadena de RNA del cebador como si fuese
una cadena de DNA.
Una DNA polimerasa diferente, la pol I, elimina los cebadores de RNA y rellena los
huecos resultantes con DNA. Como se ha mencionado antes, la pol I es la enzima purificada
originalmente por Kornberg. Otra enzima, la DNA ligasa, se encarga de unir el extremo 3
11
del DNA de relleno al extremo 5 del fragmento de Okazaki que se encuentra ro abajo. La
cadena formada de esta manera se llama la cadena retrasada. La DNA ligasa une las piezas
sueltas de DNA
(Fin de pgina 279)
(Inicio de pgina 280)
catalizando la formacin de un enlace fosfodister entre el extremo 5-fosfato de un
fragmento y el grupo 3-OH adyacente de otro fragmento.
Un rasgo distintivo de la replicacin del DNA es su exactitud, tambin llamada
fidelidad; en total, se produce menos de un error por cada 1010 nucletidos insertados. Parte
de la razn de esta exactitud en la replicacin es que la DNA pol I y la DNA pol III poseen
una actividad de exonucleasa 3 a 5, que es una especie de funcin de correccin de
pruebas que corrige los errores escindiendo las bases insertadas que no aparean
correctamente. Las cepas que carecen de una exonucleasa funcional 3 a 5, tienen una alta
tasa de mutacin. Adems, debido a que la primasa carece de la funcin de correccin de
pruebas, el cebador de RNA tiene mayor probabilidad que el DNA de portar algn error.
Para mantener la alta fidelidad de la replicacin, los cebadores de RNA en los extremos de
los fragmentos de Okazaki se eliminan y se reemplazan con DNA. Antes de la sntesis, los
cebadores de RNA se degradan por la actividad de exonucleasa 5 a 3 de la pol I (vase la
Figura 7-17). El tema de la reparacin del DNA ser cubierto en detalle en el Captulo 15.
Mensaje: La replicacin del DNA tiene lugar en la horquilla de replicacin, donde la doble
cadena se desenrolla y las dos cadenas se separan. La replicacin progresa continuamente en
direccin hacia la horquilla sobre la cadena lder. El DNA se sintetiza en pequeos
fragmentos en direccin contraria a la horquilla sobre la cadena retrasada. La DNA
polimerasa requiere un cebador, una cadena corta de nucletidos que se encuentra en el sitio
para poder iniciar la sntesis.
7.5 El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria.
Otro rasgo distintivo de la replicacin del DNA es la velocidad. El tiempo necesario
para replicar el cromosoma de E. coli puede ser tan breve como 40 minutos. Por lo tanto, su
genoma, que tiene cerca de 5 millones de pares de bases, debe copiarse a una tasa cercana a
2000 nucletidos por segundo. Por el experimento de Cairns, se sabe que E. coli emplea
slo dos horquillas de replicacin para copiar su genoma entero. De esta manera, cada
horquilla debe ser capaz de moverse a una velocidad de no menos de 1000 nucletidos por
segundo. Lo extraordinario del proceso completo de la replicacin del DNA es que no
sacrifica velocidad por exactitud. Dada la complejidad de las reacciones que ocurren en la
horquilla de replicacin Cmo se puede mantener tanto la velocidad como la exactitud? La
respuesta es que la DNA polimerasa forma parte de un gran complejo nucleoproteco que
coordina la actividad en la horquilla de replicacin. Este complejo se denomina replisoma,
y es un ejemplo de maquinaria molecular. Encontrar otros ejemplos en los captulos
posteriores. El descubrimiento de que la mayora de las funciones de las clulas, por
ejemplo, la replicacin, la transcripcin y la traduccin, las realizan
(Fin de pgina 281)
grandes complejos compuestos de muchas subunidades, ha cambiado la forma de entender
lo que ocurre en la clula. Para comenzar con este conocimiento, veamos el replisoma ms
de cerca.
12
Algunos de los componentes que interactan en el replisoma de E. coli se muestran

en la Figura 7-18. En la horquilla de replicacin, el ncleo cataltico de la DNA pol III forma
parte de un complejo mucho mayor, llamado holoenzima pol III, que consiste de dos
ncleos catalticos y muchas protenas accesorias. Uno de los ncleos catalticos dirige la
sntesis en la cadena lder mientras que el otro ncleo conduce la sntesis en la cadena
retrasada. Algunas protenas accesorias (no se observan en la Figura 7-18) forman una
conexin que
(Fin de pgina 282)
une los dos ncleos catalticos, coordinando la sntesis de ambas cadenas. En la cadena
retrasada se produce un bucle de manera que el replisoma puede coordinar la sntesis de
ambas cadenas y moverse en la direccin de la horquilla de replicacin. Tambin se observa
una importante protena accesoria llamada abrazadera, que rodea al DNA como un dnut
y mantiene a la pol III sujetada a la molcula de DNA. De esta manera, la pol III se
transforma de una enzima que aade slo 10 nucletidos antes de descender al molde
(llamada enzima distributiva) en una enzima que permanece en la horquilla a medida que
se mueve y adems aade miles de nucletidos (una enzima procesiva). Resumiendo, a
travs de la accin de las protenas accesorias, la sntesis de ambas cadenas es rpida y muy
coordinada. Observe que la primasa, la enzima de sntesis del RNA cebador, no toca a la
protena abrazadera. Por lo tanto, la primasa acta como una enzima distributiva, que aade
slo unos pocos nucletidos antes de disociarse del molde. Esta forma de accin tiene
sentido porque el cebador slo necesita tener la longitud suficiente para formar el dplex
que sirva de punto de partida de la DNA pol III.
Desenrollando la doble hlice.
Cuando se propuso el modelo de la doble hlice en 1953, una objecin mayor fue
que la replicacin de este tipo de estructura necesitara desenrollar la doble hlice en la
horquilla de replicacin y romper los puentes de hidrgeno que mantienen unidas a las
cadenas. Cmo podra desenrollarse tan rpidamente el DNA? Y si lo hiciera, cmo hace
para no enrollar en exceso el DNA por detrs de la horquilla y provocar un nudo? Ahora se
conoce que el replisoma contiene dos clases de protenas que abren la doble hlice y
previenen el superenrollamiento: estas enzimas son las helicasas y las topoisomerasas,
respectivamente. Las helicasas son enzimas que rompen los puentes de hidrgeno que
mantienen unidas a las dos cadenas de la doble hlice. Como la protena abrazadera, la
helicasa se ajusta como un dnut alrededor del DNA; desde esta posicin, desenrolla
rpidamente la doble hlice para permitir la sntesis. Las protenas de unin a cadena
sencilla (SSB, del ingls single-strand binding), estabilizan el DNA desenrollado al unirse a
la cadena sencilla y prevenir la formacin del dplex.
El DNA circular puede doblarse y enrollarse como lo hace una goma elstica. El
desenrollamiento de la horquilla de replicacin por la helicasa causa un superenrollamiento
compensatorio en otras regiones, formndose espirales denominadas superenrolladas que
liberan a la cadena de la torcin extra. Las torsiones y los superenrollamientos deben
eliminarse para permitir que contine la replicacin. Las enzimas llamadas topoisomerasas
pueden crear o relajar estos enrollamientos, tal como lo hace la DNA girasa (Figura 7-19).
Las topoisomerasas relajan el DNA superenrollado produciendo roturas en la cadena sencilla
o doble de DNA, lo que permite rotar al DNA hacia una molcula ms relajada. La accin de
las topoisomerasas finaliza reuniendo las cadenas de la molcula, ahora relajada, de DNA.
13
Mensaje: Una maquinaria molecular denominada replisoma lleva a cabo la sntesis de DNA.
La maquinaria incluye dos unidades de DNA polimerasa que realizan la sntesis en cada
cadena y coordinan la actividad de las protenas accesorias requeridas para formar el
cebador, desenrollar la doble hlice y estabilizar las cadenas simples.
(principio de pgina 20) 284
Montaje del replisoma: la iniciacin de la replicacin.
El montaje del replisoma es un proceso ordenado que comienza en sitios precisos del
cromosoma, llamados orgenes, y tiene lugar slo en determinados momentos del ciclo
celular. La replicacin en E. coli se inicia en un sitio fijo (llamado oriC) y desde all procede
en ambas direcciones (formando una horquilla en los dos extremos, como se muestra en la
Figura 7-14), que prosigue hasta que las horquillas se fusionan. La Figura 7-20 muestra el
proceso en detalle. El primer paso en el montaje del replisoma es la unin de una protena
denominada DnaA a una secuencia especfica de 13 pares de bases (pb), que se repite cinco
veces en el oriC, llamada caja de DnaA. Como respuesta a la unin de la DnaA, el origen
se desenrolla a partir de una regin rica en nucletidos A y T. Recuerde que los pares de
bases A-T se mantienen unidos por dos puentes de hidrgeno, mientras que los G-C se
mantienen unidos por tres. De esta forma, es ms fcil separar la doble hlice en regiones
del DNA ricas en bases A y T.
Al comenzar la apertura de la doble hlice, ms protenas DnaA se unen a la regin de
cadena sencilla recin abierta. Mientras las protenas DnaA cubren el origen, dos helicasas
(las protenas DnaB) se unen y se deslizan en direccin 5 a 3 para mantener la apertura de
la doble hlice en la horquilla de replicacin. La primasa y la holoenzima DNA pol III se
incorporan a la helicasa a travs de una interaccin protena-protena, y comienza as la
sntesis de DNA. Por qu la DnaA no est presente en la Figura 7-18 (la maquinaria del
replisoma)?. La respuesta es que no forma parte de la maquinaria del replisoma. Su trabajo
es ms bien conducir al replisoma al sitio correcto del cromosoma circular para iniciar la
replicacin.
7.6 La replicacin en los organismos eucariotas
La replicacin del DNA en procariotas y eucariotas se realiza por un mecanismo
semiconservativo y se ocupa de la sntesis de las cadenas lder y retrasada. Por esta razn, no
debera sorprender que los componentes del replisoma procaritico y eucaritico sean muy
similares. Sin embargo, en la medida que se incrementa la complejidad de los organismos,
tambin se incrementa el nmero de componentes del replisoma.
El replisoma eucaritico
El replisoma de E. coli contiene 13 componentes conocidos y al menos se conocen
27 componentes en los replisomas de las levaduras y los mamferos. Una razn para la
complejidad adicional del replisoma eucaritico es la mayor complejidad del molde
eucaritico. Cabe recordar que a diferencia del cromosoma bacteriano, los cromosomas
eucariticos se encuentran en el ncleo formando la cromatina. Como se describe en el
Captulo 2, la unidad bsica de la cromatina es el nucleosoma, que es el DNA enrollado
alrededor de protenas de histonas. As, el replisoma no slo tiene que copiar la cadena
parental sino que tambin debe desensamblar el nucleosoma y volver a ensamblarlo en las
14
molculas hijas. Esta maniobra la realiza mediante la distribucin aleatoria de las histonas
viejas (de los nucleosomas existentes) a las molculas hijas y
(Fin de pgina 284)
la aportacin de nuevas histonas al replisoma a travs de una protena llamada Factor 1 de
ensamblaje de la cromatina (CAF-1, del ingls chromatin assembly factor 1).
El factor CAF-1 se une a las histonas y las dirige a la horquilla de replicacin, donde son
ensambladas al DNA que recin se sintetiza. El factor CAF-1 y su carga de histonas arriban
a la horquilla de replicacin unindose a la versin eucaritica de la abrazadera-, llamada
antgeno nuclear de la clula en proliferacin, PCNA (del ingls, proliferating cell
nuclear antigen) (Figura 7-21).
Mensaje: El replisoma eucaritico realiza todas las funciones del replisoma procaritico; y
adems, desensambla y vuelve a ensamblar los complejos DNA-protenas llamados
nucleosomas.
El origen de la replicacin de los eucariotas
Las bacterias como E. coli generalmente realizan un ciclo completo de replicacindivisin en un tiempo de 20 y 40 minutos, pero en los eucariotas el ciclo puede variar desde
1.4 horas en las levaduras a 24 horas en clulas animales cultivadas y en algunas clulas
puede durar entre 100 200 horas. Los eucariotas tienen que resolver el problema de la
coordinacin de la replicacin en ms de un cromosoma, as como el problema de la
replicacin en la estructura compleja del cromosoma en s mismo.
Para entender qu ocurre en el origen de la replicacin de los eucariotas, primero
centraremos nuestra atencin en las levaduras como eucariotas simples. Muchas protenas
eucariticas que tienen un papel en el origen de la replicacin fueron identificadas en las
levaduras, ya que la investigacin con levaduras y el anlisis gentico es fcil en este grupo
(vase en la pgina 390 el recuadro Levaduras como organismo modelo). El origen de la
replicacin es muy similar al oriC de E. coli. El origen tiene una secuencia de DNA
conservada de 100 a 200 pares de bases que incluye regiones ricas en AT que se
desnaturalizan cuando una protena iniciadora
(Principio de pgina 22) 286
se une a los sitios de unin adyacentes. A diferencia del cromosoma procaritico, cada
cromosoma eucaritico tiene mltiples orgenes de replicacin ya que se debe replicar
rpidamente un genoma mucho mayor. Aproximadamente, hay 400 orgenes de replicacin
dispersos a travs de los 16 cromosomas de las levaduras, y se estima que hay miles de
horquillas de replicacin crecientes en los 23 cromosomas humanos. En los eucariotas, la
replicacin procede en ambas direcciones en mltiples puntos de origen (Figura 7-22). Las
dobles hlices que se estn produciendo en cada origen de replicacin se alargan y
finalmente se juntan unas con otras. Cuando la replicacin de las dos cadenas se completa, el
resultado es dos molculas hijas idnticas de DNA.
Mensaje: Cundo y dnde tiene lugar la replicacin est cuidadosamente controlado por el
ensamblaje ordenado del replisoma en un sitio especfico llamado origen. La replicacin
tiene lugar en ambas direcciones desde un nico origen en el cromosoma procaritico
circular. La replicacin tiene lugar en ambas direcciones desde cientos o miles de orgenes
en cada uno de los cromosomas lineales eucariticos.
15
La replicacin del DNA y el ciclo celular de las levaduras

La sntesis del DNA tiene lugar en la fase S (sntesis) del ciclo celular eucaritico (Figura 723). Cmo se limita el inicio de la sntesis a esta nica etapa? En las levaduras, el mtodo
de control es asociar el ensamblaje del replisoma al ciclo celular. La Figura 7-24 muestra el
proceso. En las levaduras, se requieren tres protenas para comenzar el montaje del
replisoma. El complejo de reconocimiento del origen (ORC, del ingls, origin recognition
complex) se une primero a las secuencias de origen de la levadura, como lo hace la protena
DnaA en E. coli.
(Fin de pgina 286)
La presencia del complejo ORC en el origen sirve para reclutar otras dos protenas, Cdc6 y
Cdt1. Las dos protenas junto con el complejo ORC reclutan a su vez a la helicasa
replicativa, llamado el complejo MCM, y a los otros componentes del replisoma.
La replicacin est asociada al ciclo celular a travs de la disponibilidad de Cdc6 y Cdt1. En
las levaduras, estas protenas se sintetizan durante la mitosis tarda y la fase gap 1 (G1) y se
destruyen por protelisis despus del comienzo de la sntesis. Por tanto, el replisoma se
puede ensamblar slo antes de la fase S. Cuando ya ha comenzado la replicacin, no se
pueden formar nuevos replisomas en los orgenes, porque las protenas Cdc6 y Cdt1 se
degradan durante la fase S y no se encuentran disponibles durante demasiado tiempo.
Los orgenes de la replicacin en los eucariotas superiores
Como ya se ha expuesto, la mayora de los 400 orgenes de replicacin en las levaduras
estn compuestos por motivos de secuencia de DNA similar (con un tamao de 100-200 pb)
a los que reconocen las subunidades del complejo ORC. Es interesante remarcar que todos
los eucariotas superiores caracterizados tienen protenas ORC similares, pero los orgenes de
la replicacin son mucho mayores, posiblemente del orden de decenas de miles o cientos de
miles de nucletidos, y la similitud de secuencia es limitada. El complejo ORC de las
levaduras reconoce secuencias especficas de DNA en el cromosoma, pero an no queda
claro qu es lo que reconoce el ORC de los eucariotas superiores, ya que probablemente no
sea una secuencia especfica de DNA. En trminos prcticos, esto significa que es muy
difcil aislar los orgenes de replicacin en los humanos o en otros eucariotas superiores
debido a que los cientficos no pueden emplear una secuencia determinada de un origen
humano para realizar bsquedas computarizadas en la secuencia completa del genoma
humano y encontrar estos orgenes.
Si el complejo ORC de los eucariotas superiores no interacciona con una secuencia
especfica distribuida por los cromosomas, entonces cmo encuentran los orgenes de la
replicacin? Se piensa que estos complejos ORC interactan indirectamente por asociacin
con otros complejos de protenas que se encuentran unidos a los cromosomas. Un
mecanismo de reconocimiento de este tipo habra evolucionado para que los eucariotas
superiores pueden regular el momento de la replicacin del DNA durante la fase S (vase el
Captulo 11 para mayor informacin acerca de la eucromatina y la heterocromatina). Las
regiones ricas en genes de los cromosomas, la eucromatina, replican tempranamente en la
fase S; mientras que las regiones pobres en genes, que incluyen a la heterocromatina
empaquetada densamente, replican en forma tarda durante la fase S. La replicacin del
DNA no podra regularse temporalmente por regin si los complejos ORC se unieran a
secuencias relacionadas que se encontraran repartidas por los cromosomas. En cambio, los
ORC podran tener una alta afinidad por orgenes que se encontraran en la cromatina menos
16
condensada y unirse primero a estos orgenes, y entonces podra unirse a los sitios de
cromatina condensada slo despus de que se hayan replicado las regiones ricas en genes.
Mensaje: El origen de la replicacin en las levaduras, como el origen de los procariotas,
contiene una secuencia conservada de DNA que reconoce el complejo ORC y las dems
protenas necesarias para ensamblar el replisoma. Por el contrario, los orgenes de
replicacin de los eucariotas superiores han sido difciles de aislar y estudiar debido a que
son grandes, complejos y no contienen una secuencia conservada de DNA.
7.7 Telmeros y telomerasa: terminacin de la replicacin
La replicacin de la molcula lineal de DNA de los cromosomas eucariticos procede en
ambas direcciones desde numerosos orgenes de replicacin, como se muestra en la Figura
7-22. Este proceso replica la mayor parte del DNA cromosmico, pero hay un problema
inherente
(Fin de pgina 287)
en la replicacin de los dos extremos de las molculas lineales de DNA, las regiones
denominadas telmeros. La sntesis continua en la cadena lder puede proceder hasta la
misma punta del molde. Sin embargo, la sntesis de la cadena retrasada requiere de
cebadores; as que, cuando el ltimo cebador se elimina, queda una punta de cadena sencilla
en una de las molculas hijas de DNA (Figura 7-25). Si el cromosoma hijo con esta
molcula de DNA fuera replicado de nuevo, la secuencia perdida de la punta de la cadena
hara que el cromosoma se acortase despus de la replicacin. En cada ciclo de replicacin,
el telmero ira acortndose cada vez ms, hasta que se perdiera alguna informacin
codificante esencial.
Las clulas han desarrollado un sistema especializado para prevenir esta prdida. Un
componente del sistema se encarga de aadir en las puntas de los cromosomas mltiples
copias de una secuencia simple no codificadora. En 1978, Elizabeth Blackburn y Joe Gall
descubrieron que los extremos de los cromosomas estn formados por secuencias repetidas
en tndem, estos investigadores estudiaron el DNA de un macroncleo inusual del ciliado
unicelular llamado Tetrahymena. Como otros ciliados, Tetrahymena tiene un microncleo
convencional y un macroncleo inusual en el cual los cromosomas estn fragmentados en
miles de piezas del tamao de genes con extremos nuevos aadidos a cada pieza. Blackburn
y Gall fueron capaces de aislar los fragmentos que contienen los genes para el RNA
ribosmico (fragmentos llamados rDNA, vase el Captulo 9 para conocer ms acerca de los
ribosomas) empleando centrifugacin por gradiente en CsCl, la tcnica desarrollada por
Meselson y Stahl para aislar DNA de E. coli recin replicado (vase la pgina 276). Los
extremos de los fragmentos de rDNA contenan repeticiones en tndem de la secuencia
TTGGGG. Ahora se sabe que casi todos los eucariotas tienen repeticiones cortas en tndem
en sus extremos cromosmicos, aunque, la secuencia no es exactamente la misma. Los
cromosomas humanos, por ejemplo, terminan en repeticiones en tndem de 10 a 15 kb de la
secuencia TTAGGG.
Qu es lo que hacen estas repeticiones para prevenir la prdida de DNA de los
telmeros despus de cada ronda de replicacin? Elizabeth Blackburn y Carol Grieder
formularon una hiptesis que postula que las repeticiones se aaden a los extremos de los
cromosomas por una enzima. Trabajando nuevamente con extractos de macroncleos de
Tetrahymena (con sus 40.000 telmeros), identificaron una enzima, que llamaron
telomerasa, que aade las repeticiones cortas a los extremos 3 de las molculas de DNA.
17
Es interesante remarcar que la protena telomerasa lleva una pequea molcula de RNA, que
acta como molde para la polimerizacin de la unidad repetida telomrica. En todos los
vertebrados, incluyendo los humanos, la secuencia de RNA 3-AAUCCC-5 acta como
molde para la unidad repetida 5-TTAGGG-3 por un mecanismo como el que se muestra en
la Figura 7-26. Brevemente, primero la telomerasa se alinea al extremo 3 saliente del DNA,
que se extiende por accin de los dos componentes de la telomerasa: el pequeo RNA (como
molde) y la protena (con actividad polimerasa). Despus de aadir unos pocos nucletidos
al extremo 3 saliente, la telomerasa mueve el RNA sobre el DNA de manera que el extremo
3 puede extenderse por su actividad polimerasa. Movimientos repetidos de la telomerasa
continan extendiendo el extremo 3. La primasa y la DNA polimerasa emplean este
extremo saliente y muy largo como molde para rellenar el extremo de la otra cadena de
DNA.
Telmeros, cncer y envejecimiento
Adems de prevenir la erosin del material gentico en cada ronda de replicacin, los
telmeros preservan la integridad cromosmica al asociarse con protenas que forman los
tapones protectores. Estos tapones secuestran la cadena sencilla 3
(Fin de pgina 288
saliente, que puede tener alrededor de 100 nucletidos de longitud (Figura 7-27). Sin este
tapn protector, la clula podra confundir los extremos de doble cadena de los cromosomas
por roturas en la doble hlice y actuar en consecuencia. Como se ver ms tarde, en el
Captulo 15, las roturas de la doble hlice son potencialmente muy peligrosas porque pueden
producir inestabilidad cromosmica que podra desencadenar cncer as como una variedad
de fenmenos asociados al envejecimiento. Por esta razn, cuando se detecta una rotura en
la doble hlice, la clula responde de diferentes formas, dependiendo del tipo celular y del
grado del dao. Por ejemplo, la rotura de la doble cadena puede fusionarse con otra rotura o
la clula puede limitar el dao al organismo deteniendo las siguientes divisiones celulares
(por un mecanismo llamado senescencia) o bien iniciando la ruta de la muerte celular
programada (un proceso llamado apoptosis).
Mensaje: Los telmeros son estructuras especializadas de los extremos de los cromosomas,
que contienen repeticiones en tndem de una secuencia corta de DNA que se aade al
extremo 3 por la enzima telomerasa. Los telmeros estabilizan los cromosomas previniendo
la prdida de informacin genmica despus de cada ronda de replicacin y se asocian con
protenas para formar un tapn que oculta los extremos cromosmicos de la maquinaria
celular de reparacin del DNA.
Qu hacen los genetistas hoy en da?
Sorprendentemente, aunque la mayora de las clulas germinales tienen una
abundante cantidad de telomerasa, las clulas somticas producen muy poca cantidad o
nada. Por esta razn, los cromosomas de las clulas somticas en proliferacin se vuelven
progresivamente ms cortos con cada divisin celular hasta que la clula detiene todas las
divisiones y entra en la fase de senescencia. Esta observacin llev a muchos investigadores
a sospechar que existe una conexin entre el acortamiento del telmero y el envejecimiento.
Recientemente, los genetistas que estudian las enfermedades humanas con al fenotipo de
envejecimiento prematuro, han hallado evidencias que respaldan una conexin entre los dos
fenmenos. Las personas que tienen el sndrome de Werner experimentan la expresin
temprana de muchos sucesos relacionados con el envejecimiento, que incluyen la aparicin
18
de arrugas en la piel, cataratas, osteoporosis, canas en el cabello y enfermedades

cardiovasculares (Figura 7-28). Los estudios genticos y bioqumicos descubrieron que las
personas afectadas tienen los telmeros ms cortos que las personas sanas debido a una
mutacin en el gen denominado WRN, que codifica para una protena (una helicasa) que
forma parte de la estructura del tapn del telmero (vase la Figura 7-27). Se cree que esta
mutacin altera la formacin del telmero normal que lleva a la inestabilidad cromosmica y
al fenotipo de envejecimiento prematuro. Los pacientes con otro sndrome de
envejecimiento llamado disqueratosis congnita (DC) tambin tienen los telmeros ms
cortos que la gente no afectada de su misma edad, y tambin portan mutaciones en los genes
necesarios para la actividad de la telomerasa.
Los genetistas estn interesados tambin en las conexiones que existen entre los
telmeros y el cncer. A diferencia de las clulas somticas normales, la mayora de las
clulas cancergenas tienen actividad telomerasa.
(Fin de pgina 290
La capacidad de mantener a los telmeros funcionales puede ser una de las razones por las
que clulas cancerosas pueden crecer en los cultivos celulares durante dcadas y son
consideradas inmortales, a diferencia de las clulas normales. Aprovechndose de este
fenmeno, muchas compaas farmacuticas estn intentando capitalizar la diferencia entre
clulas normales y cancerosas mediante el desarrollo de frmacos que ataquen de forma
selectiva a las clulas cancergenas inhibiendo su actividad de telomerasa.
Resumen
El trabajo experimental sobre la naturaleza molecular del material hereditario demostr sin
lugar a dudas que el DNA es el material gentico (y no las protenas, los lpidos o los
carbohidratos). Utilizando los datos obtenidos por otros, Watson y Crick dedujeron el
modelo de la doble hlice con dos cadenas de DNA enrolladas una alrededor de la otra, en
sentido antiparalelo. La unin de las dos cadenas se mantiene por el encaje entre adenina (A)
y timina (T) y entre guanina (G) y citosina (C). El primer par se mantiene por dos puentes de
hidrgeno y el ltimo par se mantiene por tres puentes de hidrgeno.
El modelo de Watson y Crick muestra cmo el material gentico puede replicarse de
una forma ordenada, una condicin primordial del material gentico. La replicacin se
realiza de forma semiconservativa tanto en procariotas como en eucariotas. Una doble hlice
se replica para formar dos hlices hijas idnticas, cada una de las cuales contiene una cadena
vieja y una cadena recin polimerizada de DNA.
La doble hlice se desenrolla en la horquilla de replicacin, y las dos cadenas simples
sirven como molde para la polimerizacin de nucletidos libres. La enzima encargada de
este proceso es la DNA polimerasa, que aade nuevos nucletidos slo al extremo 3 libre de
la cadena creciente. Debido a que la adicin se produce slo en el extremo 3, la
polimerizacin en un molde es continua, constituyendo la cadena lder; mientras que en el
otro molde, se debe realizar en fragmentos cortos y discontinuos (los fragmentos de
Okasaki), produciendo la cadena retrasada. La sntesis de la cadena lder y de los fragmentos
de Okasaki se inicia por un cebador corto de RNA (sintetizado por la primasa) que
suministra el extremo 3 libre necesario para la adicin de los desoxirribonucletidos.
Los mltiples sucesos que tienen lugar de una forma rpida y exacta en la horquilla
de replicacin los realiza el replisoma, una mquina biolgica. Este complejo de protenas
incluye dos unidades de DNA polimerasa, una que acta en la cadena lder y la otra que
acta en la cadena retrasada. De esta forma, el proceso que ms tiempo consume, que es la
sntesis y reunin de los fragmentos de Okasaki en una cadena continua, se coordina en el
19
tiempo con la sntesis menos complicada de la cadena lder. El momento y el lugar en que
ocurre la replicacin estn controlados cuidadosamente por el ensamblaje ordenado del
replisoma en ciertos lugares del cromosoma llamados orgenes. En los genomas eucariticos
puede haber decenas de miles de orgenes. El montaje del replisoma en los orgenes tiene
lugar slo en un momento especfico del ciclo celular.
Los extremos de los cromosomas lineales, los telmeros, presentan un problema para
el sistema de replicacin porque siempre queda un trecho corto en una cadena en el que no
puede colocarse un cebador. La enzima telomerasa aade un cierto nmero de secuencias
repetitivas cortas para mantener la longitud. La telomerasa lleva un RNA corto que acta
como molde para la sntesis de las repeticiones telomricas. Estas repeticiones no
codificadoras se asocian a protenas para formar un tapn telomrico. En las clulas
somticas, los telmeros se van acortando progresivamente con la edad debido a que la
telomerasa no se produce en estas clulas. Los individuos que tienen los telmeros
defectuosos experimentan un envejecimiento prematuro.
Trminos clave
-abrazadera
antgeno nuclear de proliferacin celular (PCNA)
base
base complementaria
cadena lder
cadena rezagretrasada
cebador
cdigo gentico
desoxirribosa
DNA ligasa
doble hlice
enzima distributiva
enzima procesiva
estructura Theta
fosfato
fragmento de Okasaki
helicasa
holoenzima polimerasa III (pol III)
molcula hija
nucleosoma
nucletido
orientacin antiparalela
orgen de replicacin
primasa
primosoma
protenas accesorias
replicacin conservativa
replicacin dispersiva
surco mayor
surco menor
telomerasa
telmero
topoisomerasa
20
Problemas resueltos
Problema 1
La mitosis y la meiosis se estudiaron en el Captulo 2. Considerando que en este captulo se
han visto los conceptos relacionados con la replicacin del DNA, represente grficamente el
contenido de DNA en la clula en funcin del tiempo que sufre mitosis y meiosis. Suponga
que se trata de una clula diploide.
Solucin
(Grfico)
Problema 2
Si el contenido de CG de una molcula de DNA es del 56 %, cules son los porcentajes de
las cuatro bases en sta molcula? (A, T, G, C)
Solucin
Si el contenido de GC es del 56 %, entonces G = C, el contenido de G es del 28% y el
contenido de C es del 28% tambin. El contenido de AT es 100 56 = 44%. Como A = T, el
contenido de A es 22% y el contenido de T es del 22%.
Problema 3
Describa el patrn de bandas esperado en un gradiente de CsCl para la replicacin
conservativa del experimento de Meselson y Stahl. Dibuje un diagrama.
Solucin
Consulte la Figura 7-13 para una explicacin adicional. En la replicacin conservativa, si la
bacteria crece en presencia de 15N y luego se la cambia a 14N, una molcula de DNA ser 15N
despus de la primera generacin y la otra molcula 14N, que se ver en el gradiente como
una banda pesada y una banda ligera. Despus de la segunda generacin, el DNA con 15N
producir una molcula con 15N y una molcula con 14N, mientras que la molcula con 14N
slo producir molculas con 14N. De esta manera, se producen molculas que slo llevan
14
N y molculas que slo llevan 15N, que generaran una banda liviana y una banda pesada
nuevamente:
Incubacin de clulas pesadas con 14N
Controles Primera generacin Segunda generacin
14
N
15
N
Problemas
PROBLEMAS BSICOS
1. Describa los tipos de enlaces qumicos que existen en la doble hlice de DNA.
2. Explique qu significan los trminos replicacin conservativa y semiconservativa.
3. Qu entiende por cebador, y por qu los cebadores son necesarios para la replicacin del
DNA?
21
4. Qu son las helicasas y las topoisomerasas?

5. Por qu la sntesis del DNA es continua en una cadena y discontinua en la cadena opuesta.
6. Si los cuatro nucletidos mostraran un apareamiento no especfico (A con C, A con G, T
con G, y as sucesivamente), se podra mantener la informacin nica contenida en un gen
a travs de las distintas rondas de replicacin? Explquese.
7. Si se perdieran las helicasas durante la replicacin, qu ocurrira con el proceso de
replicacin?
(Fin de pgina 292
8. Se replican ambas cadenas de DNA simultneamente de forma continua en una cadena y
de forma discontinua en la otra. Por qu no puede replicarse una cadena entera (de inicio a
fin) antes que comience la replicacin de la otra?
9. Qu ocurrira si, durante la replicacin, las topisomerasas fueran incapaces de reunir los
fragmentos de DNA de cada cadena despus que se desenrollara (relajara) la molcula de
DNA?
10. Cul de las siguientes afirmaciones sera verdadera si la sntesis de DNA fuera
discontinua en cada cadena:
a. Los fragmentos de DNA de las dos nuevas cadenas se mezclaran, produciendo posibles
mutaciones.
b. La sntesis de DNA no tendra lugar, porque las enzimas apropiadas para la replicacin
discontinua no estaran presentes en las dos cadenas.
c. La sntesis de DNA llevara mucho tiempo, pero no habra otra diferencia.
d. La sntesis de DNA no tendra lugar, debido a que el cromosoma no podra estar
desenrollado en toda su longitud antes de que las dos cadenas estuvieran replicadas en una
forma discontinua.
11. Cul de las siguientes propiedades no es clave para el material hereditario:
a. Debe ser capaz de ser copiado exactamente.
b. Debe codificar la informacin necesaria para formar protenas y estructuras complejas.
c. Debe mutar ocasionalmente.
d. Debe ser capaz de adaptarse por si mismo en cada tejido del cuerpo.
12. Por qu es esencial que los cebadores de RNA de los extremos de los fragmentos de
Okasaki se eliminen y se reemplacen por DNA? De no producirse, cul de los siguientes
sucesos ocurrira?
a. El RNA puede que no fuera ledo exactamente durante la transcripcin, e interferira en la
sntesis de protenas.
b. El RNA tendra una mayor probabilidad de contener errores debido a que la primasa
carece de funcin de correccin de pruebas.
c. Los fragmentos de RNA podran desestabilizarse y comenzar a romperse en
ribonucletidos, creando huecos en la secuencia.
d. Los cebadores de RNA podran formar puentes de hidrgeno entre s, formando
estructuras complejas que podran interferir con la formacin de la doble hlice de DNA.
22
13. Las polimerasas generalmente slo aaden 10 nucletidos a una cadena de DNA antes de
disociarse. Sin embrago, durante la replicacin, la DNA pol III puede aadir decenas de
miles de nucletidos en una horquilla en movimiento. Cmo se lleva a cabo esta adicin?
14. En cada origen de replicacin hay dos horquillas de replicacin. Cul de los siguientes
supuestos podra ocurrir si surge un mutante que tenga slo una horquilla funcional por
burbuja de replicacin? (Vase el diagrama).
Normal
Mutante
a. No cambia nada en la replicacin.
b. La replicacin slo podra ocurrir en la mitad del cromosoma.
c. La replicacin slo podra completarse en la cadena lder.
d. La replicacin tardara el doble de tiempo.
15. En una clula diploide con 2n = 14, cuntos telmeros hay en cada una de las siguientes
fases del ciclo celular: (a) G1; (b) G2; (c) profase mittica; (d) telofase mittica?
16. Si la timina representa al 15 % de las bases de una molcula especfica de DNA. Qu
porcentaje representa la citosina?
17. Si el contenido de GC de una molcula de DNA es del 48 %, cul es el porcentaje de
cada una de las cuatro bases en esta molcula (A, T, G, C)?
18. Suponiendo que un cierto cromosoma bacteriano tiene un origen de replicacin. Bajo
condiciones de rpida divisin celular, la replicacin podra comenzar desde el origen antes
de que la replicacin precedente finalizara el ciclo completo. Cuntas horquillas de
replicacin podran estar presentes bajo esas condiciones?
19. Una molcula con la siguiente composicin
5-A A A A A A A A A A A-3
3-T T T T T T T T T T T T-5
se replica en una solucin de trifosfato de adenosina con todos sus tomos de fsforo en la
forma de istopo radioactivo 32P. Sern radiactivas ambas molculas hijas? Explquese.
Ahora se repite la pregunta para la siguiente molcula
5-ATATATATATAT-3
3-TATATATATATA-5
20. Habra funcionado el experimento de Meselson y Stahl si hubieran trabajado con
clulas diploides eucariticas?
21. Considere el siguiente fragmento de DNA, que es parte de una molcula mucho mayor
que constituye un cromosoma:
5 .ATTCGTACGATCGACTGACTGACAGTC..3
3 .TAAGCATGCTAGCTGACTGACTGTCAG..5
Si la DNA polimerasa comienza la replicacin en este fragmento desde la derecha,
a. cul ser el molde de la cadena lder?
(Fin de pgina 293
b. Esquematice la molcula cuando la DNA polimerasa est en la mitad del fragmento.
23
c. Esquematice las dos molculas hijas completas.

d. Su diagrama de la parte b es compatible con la replicacin bidireccional desde un origen
simple, o sea, con el modo normal de replicacin?
22. Las DNAs polimerasas estn posicionadas sobre el siguiente fragmento de DNA (que
forma parte de una molcula mucho mayor) y se estn moviendo desde la derecha hacia la
izquierda. Si suponemos que se forma un fragmento de Okazaki a partir de este fragmento,
cul sera la secuencia del fragmento? Marque los extremos 5 y 3.
5 CCTTAAGACTAACTACTTACTGGGATC3
3 GGAATTCTGATTGATGAATGACCCTAG5
23. Los cromosomas de E. coli en los que el tomo de N est marcado (es decir, cada tomo
de nitrgeno es el istopo pesado 15N en vez del istopo normal 14N), se replica en un
ambiente en el que todo el nitrgeno es 14N. Usando una lnea slida para representar una
cadena de oligonucletidos pesada y una lnea de puntos para una cadena ligera,
esquematice cada una de las siguientes descripciones:
a. El cromosoma parental y el producto de la primera replicacin despus de transferir las
clulas a un medio con 14N, suponiendo que el cromosoma es una doble hlice de DNA y
que la replicacin es semiconservativa.
b. Repita la parte a, pero ahora suponga que la replicacin es conservativa.
c. Repita la parte a, pero suponiendo que el cromosoma son dos doble hlice lado a lado, y
cada una de ellas se replica semiconservativamente.
d. Repita la parte c, pero suponiendo que cada doble hlice se replica conservativamente y
que la replicacin conjunta del cromosoma es semiconservativa.
e. Si el cromosoma hijo de la primera divisin en 14N es centrifugado en un gradiente de
densidad de CsCl y se obtiene una sola banda, cules de las posibilidades de los apartados
de a hasta d podran ser descartadas? Reconsidere el experimento de Meselson y Stahl: qu
es lo que demuestra?
24. Una estudiante del laboratorio del profesor Griffith encontr tres muestras celulares
marcadas con A, B, y C. No conoca lo que contena cada muestra, y decidi intentar
inyectarlas en sus ratones, tanto por separado como en combinacin, para ver si poda
determinar lo que contena cada muestra. Observ las respuestas de los ratones inyectados
despus de un perodo de incubacin y extrajo sangre de cada grupo para observar la
presencia de clulas infectadas. Anot sus observaciones en la siguiente tabla. Suponiendo
que cada muestra contena una sola cosa en estado puro, qu es lo que piensa que haba en
las muestras A, B, y C?
Muestra inyectada
A
B
C
A+B
A+C
B+C
A+B+C
Respuesta del ratn
Muerto
Ninguna
Ninguna
Muerto
24
Muerto
Muerto
Muerto
Tipos de clulas recuperadas del ratn
Clulas vivas S
Ninguna
Clulas vivas R
Clulas vivas S
Clulas vivas R y S
Clulas vivas S
Clulas vivas S
25. Si en el experimento del problema 24 la capa de protenas de las clulas fuera el factor
transformante, qu resultados esperara? Complete la siguiente tabla y recuerde que las
muestras son las mismas que en el problema 24.
Muestra inyectada
A
B
C
A+B
A+C
B+C
A+B+C
Respuesta del ratn
Tipos de clulas recuperadas del ratn
PROBLEMAS PARA PENSAR
26. Si en una clula ocurriese una mutacin que inactiva la telomerasa (actividad de la
telomerasa = cero), qu es lo que espera que ocurra?
27. En el planeta Rama, el DNA tiene seis tipos de nucletidos: A, B, C, D, E y F. Los tipos
A y B se denominan marzinas, los tipos C y D se denominan orsinas, y el E y F son pirinas.
Las siguientes reglas son vlidas para el DNA de Rama
Total de marzinas = Total de orsinas = Total de pirinas
A=C=E
B=D=F
a. Presente un modelo para la estructura del DNA de Rama.
b. En Rama, la mitosis produce tres clulas hijas. Teniendo en cuenta esto, proponga un
patrn de replicacin para su modelo de DNA.
c. Considere el proceso de la meiosis en Rama. Qu comentarios o conclusiones podra
sugerir?
28. Si extrae el DNA del colifago X174, encontrar que su composicin es del 25 % de A,
el 33 % de T, el 24 % de G y el 18% de C. Tiene sentido esta composicin basndose en las
25
reglas de Chargaff? Cmo podra interpretar estos resultados? Cmo har el colifago para
replicar su DNA?
26
FIGURAS
Modelo por ordenador del DNA. (J. Newdol, Computer Graphics
Laboratory, University of California, San Francisco. Copyright by Regents,
University of California)
FIGURA 7-1 Modelo de Watson y Crick de la molcula de DNA del Museo
de las Ciencias, Valencia, Espaa (Arco Images/Alarmy)
FIGURA 7-2
Ttulo: Transformacin de clulas R en clulas S
La presencia de clulas S muertas por calor transforma a clulas vivas R
en clulas S.
a) Ratn que muere despus de una inyeccin con la cepa virulenta S.
b) Ratn que sobrevive despus de una inyeccin con la cepa R.
c) Ratn que sobrevive despus de una inyeccin con la cepa S muerta
por calor.
d) Ratn que muere despus de una inyeccin con una mezcla de la cepa
S muerta por calor y la cepa R viva. La cepa S muerta por calor
transforma de alguna manera a la cepa R en virulenta. (De G.S. Stent y R.
Calendar. Molecular Genetics, 2nd ed. Copyright 1978 by W. H. Freeman
and Company. De R. Sager y F. J. Ryan. Cell Hereduty. Wiley 1961)
FIGURA 7-3
Ttulo: El DNA es el agente transformador.
El DNA es el agente transformador de la cepa R hacia la virulencia. Si se
destruye el DNA en un extracto de clulas de la cepa S muertas por calor,
entonces el ratn inyectado con una mezcla de clulas muertas por calor
y clulas de la cepa no virulenta R ya no morira.
FIGURA 7-4
Ttulo: El material gentico del fago es el DNA
El experimento de Hershey-Chase demostr que el material gentico del
fago es el DNA, no las protenas. El experimento emple dos grupos de
bacterifagos T2. En un grupo, la capa de protena est marcada con
azufre radioactivo (35S), que no se encuentra en el DNA. En el otro grupo,
el DNA est marcado con fsforo radioactivo (32P), que no se encuentra
en las protenas. Slo el 32P es inyectado en E. coli, indicando que el DNA
es el agente necesario para la produccin de nuevos fagos.
FIGURA 7-5
Ttulo: Estructuras de los cuatro nucletidos del DNA
Estos nucletidos, dos con bases pricas y dos con bases pirimidnicas,
son los bloques constructivos fundamentales del DNA. El azcar se llama
desoxirribosa porque es una variacin del azcar comn ribosa, que tiene
un tomo ms de oxgeno (la posicin se indica con una flecha roja)
FIGURA 7-6
Ttulo: Resultado crucial del experimento de Rosalind Franklin
27
Rosalind Franklin (izquierda) y su patrn de difraccin de rayos X del DNA

(derecha).
(Izquierda) Cortesa de la Galera Nacional Portrait, Londres; (derecha)
Rosalind Franklin/Science Source/Photo Researchers)
FIGURA 7-7
Ttulo: El primer modelo del DNA
James Watson y Francis Crick con su modelo del DNA (Camera Press)
FIGURA 7-8
Ttulo: La estructura del DNA
a) Modelo simplificado que muestra la estructura helicoidal del DNA. Las
barras representan los pares de bases y las cintas representan los
esqueletos de azcar-fosfato de las dos cadenas antiparalelas.
b) Un diagrama exacto de la estructura qumica de la doble hlice,
desenrollado para mostrar los esqueletos de azcar-fosfato (en azul) y los
peldaos de los pares de bases (en rojo). Los esqueletos corren en
direcciones opuestas: los extremos 5 y 3 se nombran por la orientacin
de los tomos de carbono 5 y 3 del anillo del azcar. Cada par de bases
tiene una base prica, (A) adenina o (G) guanina, y una base pirimidnica,
timina (T) o citosina (C), conectadas por puentes de hidrgeno (lneas
discontinuas). (De R.E. Dickerson, The DNA Helix and How it is Read.
Copyright 1983 por Scientific American, Inc. Todos los derechos
reservados.
FIGURA 7-9
Ttulo: Dos representaciones de la doble hlice de DNA
Diagrama en cintas (a) destacando el apilamiento de los pares de bases,
mientras que el modelo espacial (b) muestra los surcos mayor y menor.
((b) De C. Yanofsky, Gene Structure and Protein Structure. Copyright
1967 by Scientific American, Inc. Todos los derechos reservados).
FIGURA 7-10
Ttulo: Apareamiento de bases en el DNA
El apareamiento de las purinas y las pirimidinas explica exactamente el
dimetro de la doble hlice determinado por los datos de rayos X. El
dimetro est indicado por las lneas discontinuas verticales. (De R.E.
Dickerson, The DNA Helix and How it is Read. Copyright 1983 por
Scientific American, Inc. Todos los derechos reservados).
FIGURA 7-11
Ttulo: Replicacin semiconservativa del DNA
El modelo semiconservativo de la replicacin del DNA propuesto por
Watson y Crick se fundamenta en la especificidad de puentes de
hidrgeno de los pares de bases. Las cadenas parentales, mostradas en
azul, sirven de molde para la polimerizacin. Las cadenas recin
sintetizadas, mostradas en dorado, tienen secuencias de bases que son
complementarias a sus respectivos moldes.
FIGURA 7-12
28
Ttulo: Tres modelos alternativos para la replicacin de DNA

De los tres modelos alternativos para la replicacin del DNA, el modelo
de Watson y Crick de la estructura del DNA producira el primero
(semiconservativo). Las lneas amarillas representan las cadenas recin
sintetizadas.
FIGURA 7-13
Ttulo: El DNA se copia mediante replicacin semiconservativa
El experimento de Meselson y Stahl demuestra que el DNA se copia por
replicacin semiconservativa. El DNA centrifugado en gradiente de
cloruro de cesio (CsCl) formar bandas de acuerdo a su densidad.
a) Cuando las clulas crecen en 15N y se transfieren a un medio con 14N,
la primera generacin produce dos bandas: una intermedia y una liviana.
Este resultado est de acuerdo con las predicciones del modelo
semiconservativo de la replicacin del DNA. (b y c) El resultado predicho
por el modelo conservativo y dispersivo.
FIGURA 7-14
Ttulo: Replicacin de un cromosoma bacteriano
Un cromosoma bacteriano que se replica tiene dos horquillas de
replicacin. a) Izquierda: Autorradiografa de un cromosoma bacteriano
despus de una replicacin en timidina tritiada. De acuerdo al modelo
semiconservativo de replicacin, una de las dos cadenas debe ser
radioactiva. Derecha: Interpretacin de la autorradiografa. La hlice en
amarillo representa la cadena tritiada.
b) Izquierda: Autorradiografa de un cromosoma bacteriano en la segunda
ronda de replicacin en timidina tritiada (3H). En esta estructura theta (),
la doble hlice recin replicada que atraviesa el crculo podra consistir de
dos cadenas radioactivas (si la cadena parental fuera la radiactiva).
Derecha: El doble grosor de la radioactividad calcado de la
autorradiografa parece confirmar la interpretacin mostrada aqu.
FIGURA 7-15
Ttulo: Reaccin catalizada por la DNA polimerasa
La DNA polimerasa cataliza la reaccin de elongacin de la cadena. La
energa para la reaccin proviene de la rotura de los enlaces fosfato de la
alta energa del sustrato trifosfato.
FIGURA 7-16
Ttulo: Replicacin del DNA en la horquilla creciente
La horquilla de replicacin se desplaza durante la sntesis del DNA a
medida que la doble hlice se va desenrollando. La sntesis de la cadena
lder puede proceder lisamente sin interrupcin en la direccin de la
horquilla de replicacin, pero la sntesis de la cadena retrasada debe
proceder en la direccin opuesta, fuera de la horquilla de replicacin.
FIGURA 7-17
Ttulo: Sntesis de la cadena retrasada
29
Pasos en la sntesis de la cadena retrasada. La sntesis del DNA procede

por la sntesis continua en la cadena lder y la sntesis discontinua en la
cadena retrasada.
FIGURA 7-18
Ttulo: Protenas que operan en la horquilla de replicacin
El replisoma y las protenas accesorias llevan a cabo numerosos pasos en
la horquilla de replicacin. Las topoisomerasas y las helicasas desenrollan
y abren la doble hlice preparndola para la replicacin. Cuando la doble
hlice se abre, las protenas que se unen a las cadenas simples evitan
que se vuelva a cerrar. La ilustracin es una representacin del modelo
llamado trombn (denominado as por su semejanza con el instrumento
debido al bucle que se forma en la cadena retrasada) que muestra cmo
los dos ncleos catalticos del replisoma interactan para coordinar los
numerosos sucesos de la replicacin de la cadena lder y la retrasada.
(De Geoffrey Cooper, The Cell. Sinauer Associates, 200)
FIGURA 7-19
Ttulo: La DNA girasa elimina las torsiones extras
La DNA girasa, que es una topoisomerasa, elimina las torsiones extras
durante la replicacin. a) La regin con torsiones extras (superenrollada
positivamente) se concentra delante de la horquilla de replicacin a
medida que las cadenas parentales se separan para su replicacin. b)
Una topoisomerasa como la DNA girasa elimina estas regiones, cortando
las cadenas de DNA, permitindoles rotar, y reunindolas. ((a) De A.
Kornberg y T.A. baker, DNA replication, 2nd ed. Copyright 1992 by W.H.
Freeman and Company)
FIGURA 7-20
Ttulo: Iniciacin de la replicacin en procariotas
La sntesis del DNA de procariotas se inicia en el origen de replicacin.
Las protenas se unen al origen (oriC), donde separan las dos cadenas de
la doble hlice y reclutan los componentes del replisoma a la horquilla de
replicacin.
FIGURA 7-21
Ttulo: Ensamblaje de los nucleosomas durante la replicacin del DNA
La protena CAF-1 (factor de ensamblaje de la cromatina 1) se une a las
histonas de la horquilla de replicacin donde se ensambla para formar los
nucleosomas. PCNA, antgeno nuclear de proliferacin celular. Por
simplicidad, el ensamblaje del nucleosoma se muestra en una sola de las
cadenas replicadas.
FIGURA 7-22
Ttulo: La replicacin del DNA avanza en dos direcciones
La replicacin del DNA procede en ambas direcciones desde un origen de
replicacin. Las flechas negras sealan la direccin del crecimiento de las
30
molculas hijas de DNA. a) Inicio en el origen. La DNA polimerasa se

mueve en ambas direcciones desde el origen. Las flechas largas
representan las cadenas lderes y las cortas representan las cadenas
retrasadas. b) Proceso de la replicacin a nivel cromosmico. En este
ejemplo se muestran tres orgenes de la replicacin.
FIGURA 7-23
Ttulo: Etapas del ciclo celular
El DNA se replica durante la fase S del ciclo celular.
FIGURA 7-24
Ttulo: Iniciacin de la replicacin en eucariotas
Este ejemplo de levaduras muestra la iniciacin de la sntesis de DNA en
un origen de replicacin eucaritico. Como ya se ha visto en la iniciacin
procaritica (vase Figura 7-20), las protenas del complejo de
reconocimiento del origen (ORC) se unen al origen, donde separan las
dos cadenas de la doble hlice y reclutan a los componentes del
replisoma en las dos horquillas de replicacin. La replicacin est ligada
al ciclo celular a travs de la disponibilidad de dos protenas: Cdc6 y
Cdt1.
FIGURA 7-25
Ttulo: El problema de la replicacin de los extremos cromosmicos
(Superior) La replicacin de cada fragmento de Okazaki sobre la cadena
retrasada comienza con la insercin de un cebador.
(Inferior) El destino de la cadena inferior en la burbuja de trascripcin.
Cuando se elimina el cebador del ltimo fragmento de Okazaki de la
cadena retrasada, no hay forma de rellenar el hueco mediante la
replicacin convencional. Cuando el cromosoma que contiene el hueco se
replica se obtiene un cromosoma acortado.
FIGURA 7-26
Ttulo: Prolongacin de los telmeros
La telomerasa lleva una molcula de RNA corta (letras rojas) que acta
como molde para el aadido de secuencia de DNA complementaria, que
se aade al extremo 3 saliente (letras azules). Para aadir otra
repeticin, la telomerasa se transloca al final de la repeticin que ha
aadido. El extremo 3 saliente puede entonces servir como molde para
la replicacin convencional. (De Lin Kah Wai, Telomeres, Telomerase and
Tumorigenesis: A review. Medscape Gen, Med. 2004, 6(3): 19
Medscape)
FIGURA 7-27
Ttulo: La estructura del tapn telomrico
Un tapn protege al telmero al final de un cromosoma. El extremo 3
saliente se oculta cuando se sustituye una cadena de DNA en una
regin donde las repeticiones telomricas son de doble cadena. Las
protenas TRF1 y TRF2 se unen a las repeticiones telomricas, y otras
protenas, incluyendo la WRN, se unen a TRF1 y TRF2, para formar el
tapn protector del telmero.
31
FIGURA 7-28
Una mujer con el sndrome de Werner a la edad de 15 y 48 aos.
(International Registry of Werner Syndrome, www.wernersyndrome.org)
PARCHEADO
FIGURA 7-2
Parcheado:
1. Clulas vivas de la cepa S
2. Ratn muerto
3. Cepa R
4. Ratn vive
5. Cepa S muerta por calor
6. Ratn vive
7. Cepa R
8. Cepa S muerta por calor
9. Ratn muere
10. Clulas vivas de la cepa S.
FIGURA 7-3
Parcheado:
1. El DNA es el agente transformante
2. Extracto de la cepa S
3. No se destruye ningn componente
4. Se destruyen los polisacridos
5. Se destruyen los lpidos
6. Se destruye el RNA
7. Se destruyen las protenas
8. Se destruye el DNA
9. Cepa R
10. Ratn muerto
11. Ratn muerto
12. Ratn muerto
13. Ratn muerto
14. Ratn muerto
15. Ratn sobrevive
16. Cepa S recuperada viva
17. No se recupera cepa S viva.
FIGURA 7-4
Parcheado:
1. El material gentico del fago es el DNA
2. Fago T2 35S
3. E. coli
4. Batidora y centrfuga
5. Fantasmas de fagos
32
6. La mayor parte de la radioactividad se recupera en los fantasmas de

los fagos
7. 32P
8. Batidora y centrfuga
9. Fantasmas de fagos
10. La mayor parte de la radioactividad se recupera en las bacterias.
FIGURA 7-5
Parcheado
1. Estructuras de los cuatro nucletidos del DNA
2. Nucletidos pricos
3. Fosfato
4. Base nitrogenada (Adenina, A)
5. Azcar desoxirribosa
6. Desoxiadenosina 5-monofosfato (dAMP)
7. Desoxiguanosina 5-monofosfato (dGMP)
8. Guanina (G)
9. Nucletidos pirimidnicos
10. Citosina (C)
11. Desoxicitidina 5-monofosfato (dCMP)
12. Timina (T)
13. Desoxitimidina 5-monofosfato (dTMP)
FIGURA 7-6
1. Resultado crucial del experimento de Rosalind Franklin
FIGURA 7-7
1. El primer modelo del DNA
FIGURA 7-8
Parcheado:
1. La estructura del DNA
2. Esqueleto de azcar-fosfato
3. Par de bases
4. Unidad de nuclesido monofosfato
5. Enlace fosfodister.
FIGURA 7-9
Parcheado:
1. Dos representaciones de la doble hlice de DNA
2. Surco mayor
3. Surco menor
4. Pares de bases
5. Esqueleto de azcar-fosfato
6. H
7. O
8. C in la cadena ster fosfato
9. P
10. C y N en las bases.
33
FIGURA 7-10
Parcheado:
1. Apareamiento de bases en el DNA
2. Pirimidina + pirimidina: DNA demasiado fino
3. Purina + Purina: DNA demasiado grueso
4: Purina + Pirimidina: grosor compatible con los datos de rayos X
FIGURA 7-11
Parcheado:
1. Replicacin semiconservativa del DNA
2. Las dos cadenas de la doble hlice parental se desenrollan, y cada una
especifica una nueva cadena hija por las reglas del apareamiento de
bases.
3. Vieja
4. Nueva
FIGURA 7-12
Parcheado:
1. Tres modelos alternativos para la replicacin de DNA
2. Replicacin semiconservativa
3. Replicacin conservativa
4. replicacin dispersiva
FIGURA 7-13
Parcheado:
1. El DNA se copia mediante replicacin semiconservativa
2. a) Prediccin del modelo semiconservativo
3. Parental
4. 1 generacin
5. 2 generacin
6. 15N/15N DNA (pesado)
7. 14N/15N DNA (hbrido)
8. 14N/14N DNA (liviano)
9. b) Prediccin del modelo conservativo
10. Parental
11. 1 generacin
12. 2 generacin
14. 14N/14N DNA (liviano)
15. c) Prediccin del modelo dispersivo
16. Parental
17. 1 generacin
18. 2 generacin
FIGURA 7-14
1. Replicacin de un cromosoma bacteriano
2. (a) Cromosoma despus de una ronda de replicacin
34
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Autorradiografa
Interpretacin
(b) Cromosoma durante la segunda ronda de replicacin
Autorradiografa
Horquillas de replicacin
Interpretacin.
FIGURA 7-15
Parcheado:
1. Reaccin catalizada por la DNA polimerasa
2. Cadena molde de DNA
3. Cadena molde de DNA
Texto lateral Replicacin del DNA: el proceso de polimerizacin
nucleotdica
FIGURA 7-16
Parcheado:
1. Replicacin del DNA en la horquilla creciente
2. Cadenas molde
3. movimiento de la horquilla
4. Direccin de la sntesis
5. Cadena retrasada
6. Cadena lder
7. Direccin de la sntesis
FIGURA 7-17
Parcheado:
1. Sntesis de la cadena retrasada
2. 1. La primasa sintetiza oligonucletidos cortos de RNA (cebador) que
copia del DNA.
3. Cebador de RNA
4. 2. La DNA polimerasa III elonga los cebadores de RNA con nuevo DNA
5. DNA nuevo
6. Fragmento de Okazaki
7. 3. La DNA polimerasa I elimina el RNA en el extremo 5 del fragmento
contiguo y rellena los huecos
8. 4. La DNA ligasa conecta los fragmentos adyacentes.
FIGURA 7-18
Parcheado:
1. Protenas que operan en la horquilla de replicacin
2. Topoisomerasa
3. Movimiento de la horquilla de replicacin
4. Helicasa
5. El siguiente fragmento de Okazaki comienza aqu
6. Cebador de RNA
7. Primasa
8. abrazadera
35
9. Cadena lder
10.
Dmero de la DNA pol III
11.
Cebador de RNA
12.
Fragmento de Okazaki
13.
Protenas de unin a cadena sencilla
14.
DNA polimerasa I
15.
Cadena retrasada
16.
Ligasa
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
FIGURA 7-19
Parcheado:
la DNA girasa elimina los torsiones extras
Dplex parental desenrollado
Regin de superenrollamiento
1. La DNA girasa corta las cadenas de DNA
2. El DNA rota para eliminar las torsiones
3. La DNA girasa rene las cadenas de DNA
Horquilla de replicacin.
FIGURA 7-20
Parcheado:
1. Iniciacin de la replicacin en los procariotas
2. Regin rica en AT
3. Cajas de DnaA
4. Reconocimiento del origen (oriC) y desenrollamiento
5. Mltiples protenas DnaA
6. Carga de la helicasa
7. Movimiento de la helicasa
8. Reclutamiento del replisoma
FIGURA 7-21
Parcheado:
1. Ensamblaje de los nucleosomas durante la replicacin del DNA
2. Histonas sintetizadas recientemente
3. CAF-1
4. DNA que se replica
5. PCNA
6. Ensamblaje intermedio
7. Nucleosoma ensamblado de nuevo
8. Distribucin de nucleosomas espaciados.
FIGURA 7-22
Parcheado:
1. La replicacin del DNA avanza en dos direcciones
2. Origen de la replicacin
3. Crecimiento
4. Crecimiento
5. Comienzo de la replicacin en tres orgenes
6. Cromosoma
DNA
36
7. Cromtidas hermanas.
Rplicas de DNA (molculas hijas)
FIGURA 7-23
Parcheado:
1. Etapas del ciclo celular
2. Clula original
3. Clulas hijas
4. Etapas del ciclo celular
M: mitosis
S: sntesis del DNA
G1: etapa de crecimiento 1
G2: etapa de crecimiento 2
FIGURA 7-24
Parcheado:
1. Iniciacin de la replicacin en eucariotas
2. Secuencia consenso II-pb
3. Regin rica en AT
4. Reconocimiento del origen
5. Carga de la helicasa, Cdc6 y Cdt1
6. Apertura de la hlice y desplazamiento de la helicasa
7. Reclutamiento de la DNA polimerasa
FIGURA 7-25
Parcheado:
1. El problema de la replicacin de los extremos cromosmicos
2. Origen de la replicacin
3. Horquilla de replicacin
4. Cadena retrasada
5. Cadena lder
6. Cadena lder
7. Cadena retrasada
8. Cadena lder
9. Cadena retrasada
10.
Cebador
11.
Cebador degradado
12.
Hueco interno
13.
Hueco terminal
14.
Todos los huecos internos se rellenan, el hueco terminal no se
rellena
15.
Extremo saliente
FIGURA 7-26
Parcheado:
1. Prolongacin de los telmeros
2. a) Prolongacin del extremo 3 saliente
3. La telomerasa alinea al extremo 3 saliente
4. Telomerasa
5. Elongacin
37
6. Translocacin
7. Elongacin
8. b) Replicacin de la cadena complementaria
9. Se sintetiza un cebador
10.
Primasa
11.
La polimerasa rellena el hueco
12.
DNA polimerasa
13.
Se elimina el cebador y la ligasa sella el hueco
FIGURA 7-27
1. La estructura de la cpsula telomrica
38

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