Guia Técnico Patologia e Imunologia de Camarões Penaeideos

GUA TCNICA
PATOLOGA E INMUNOLOGA
DE CAMARONES PENAEIDOS
Editores:
Vielka Morales Q.
Jorge Cullar-Anjel
Autores:
Jorge Cullar-Anjel
Carlos Pantoja
Donald V. Lightner
Alitiene Moura Lemos Pereira
Emiko Shinozaki Mendes,
Tereza Cristina Vasconcelos Gesteira
Vernica Arns Da Silva
Andreia Benedita Poletto
Mara Soledad Morales-Covarrubias
Bruno Gmez Gil R.
Margherita Anna Barracco
Luciane Maria Perazzolo
Rafael Diego Da Rosa
Ignacio De Blas Giral
Ana Muniesa Del Campo
Vielka Morales Q.
Cornelio Lara
Oscar Garca Surez
Gua Tcnica - Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos
Esta publicacin ha sido posible gracias al Organismo Regional Internacional de Sanidad Agropecuaria a travs
de su Coordinacin Regional de Inocuidad de Alimentos.
Todos los derechos reservados. Se autoriza la reproduccin y difusin de material contenido en esta Gua
Tcnica para ines educativos u otros ines no comerciales sin previa autorizacin escrita de los titulares de
los derechos de autor. Se prohbe la reproduccin de material contenido en esta Gua Tcnica para reventa u
otros ines comerciales sin previa autorizacin escrita de los titulares de los derechos de autor y del Organismo
Internacional Regional de Sanidad Agropecuaria.
Derechos reservados:
2014 Vielka Morales Q. y Jorge Cullar-Anjel
(507) 6747-2159 / (507) 6949-1976
vielkamorales2003@yahoo.com
jocuan@gmail.com
Panam
Segunda edicin en espaol Octubre 2014
Tiraje: 1000 ejemplares Distribucin gratuita
Impreso en Guatemala por Publicidad & Diseo Gmez (correo: publicidadydiseno28@gmail.com)
ISBN versin impresa: 978-9962-8500-7-6
ISBN versin PDF: 978-9962-8500-8-3
Esta obra se citar de la siguiente manera:
Todo el libro:
Morales, V. y J. Cullar-Anjel (eds.). 2014. Gua Tcnica Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos.
OIRSA, Panam, Rep. de Panam. 382 pp.
Ejemplo para citar un captulo:
Pantoja, C. y D. V. Lightner. 2014. Enfermedades virales. p. 99-164. En: Morales, V. y J. Cullar-Anjel (eds.).
2014. Gua Tcnica Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos. OIRSA, Panam, Rep. de Panam.
382 pp.
Como citar los 4 temas insertos en los diferentes captulos:
Morales-Covarrubias, M.S. 2014. Montajes en Fresco. p. 29-47. En: Morales, V. y J. Cullar-Anjel (eds.). 2014.
Gua Tcnica Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos. OIRSA, Panam, Rep. de Panam. 382 pp.
Pereira, A.M.L., E.S. Mendes, T.C.V. Gesteira, V.A. Silva, y A.B. Poletto. 2014. Mionecrosis infecciosa viral
IMNV y sus implicaciones en el cultivo de camarn brasileo. p. 139-148. En: Morales, V. y J. Cullar-Anjel
(eds.). 2014. Gua Tcnica Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos. OIRSA, Panam, Rep. de
Panam. 382 pp.
Pantoja, C. y D. V. Lightner. 2014. Espiroplasmosis en Camarones. p. 189-191. En: Morales, V. y J. Cullar-Anjel (eds.). 2014. Gua Tcnica Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos. OIRSA, Panam, Rep. de
Panam. 382 pp.
Pantoja, C. y D. V. Lightner. 2014. EMS/AHPND Descripcin de la enfermedad en Asia y Amrica. p.172-177.
En: Morales, V. y J. Cullar-Anjel (eds.). 2014. Gua Tcnica Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos. OIRSA, Panam, Rep. de Panam. 382 pp.
Diseo:
New Concept Publications, Inc.
(507) 226-7694
Panam
Fotos cortesa de:
Daniel Ho portada, contraportada, pginas 4, 6, 19, 97, 165, 195, 223, 235 y 307
Camaronera de Cocl, S.A. (CAMACO) - Panam - pginas 327 y 380
Agradecimientos
AGRADECIMIENTOS
Los editores agradecen a la Coordinacin Regional de Inocuidad de Alimentos del OIRSA, en

su momento representada por el Dr. Oscar de Jess Garca, quien apoy la realizacin de esta publicacin y su participacin constante en la actualizacin de los temas de normativas internacionales
para medicamentos.
A la Coordinacin Regional de Salud Animal del OIRSA a travs de su Coordinacin Regional
de Sanidad Acucola, por el esfuerzo econmico y logstico para la actualizacin de la Gua Tcnica
Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos como 2da edicin.
Especial agradecimiento al Dr. Abelardo De Gracia por su visin de incorporar dentro del
OIRSA el Programa de Sanidad Acucola, as como su apoyo en la creacin del Grupo Ad hoc de
especialistas acucolas del OIRSA, donde se cuenta con la participacin de excelentes y reconocidos
profesionales en el campo de la acuicultura con diversas especialidades.
Al Grupo CALESA a travs de su Vicepresidente Ejecutivo, Lic. Hans Hammerschlag, por el
apoyo constante que brinda al OIRSA, permitiendo que su equipo tcnico participe en las actividades
del Grupo ad hoc en Sanidad Acucola.
Se agradece la colaboracin incondicional del Ing. Roberto Chamorro (Licencia de intrprete
pblico autorizado del Ministerio de Gobierno y Justicia de Panam, Resolucin N28, de 8 de marzo
de 1984) por la traduccin del portugus al espaol del captulo de 6 Inmunologa del camarn
y del tema Mionecrosis infecciosa viral (IMNV) y sus implicaciones en los cultivos de camarones
brasileos del captulo 2 de Enfermedades Virales.
Igualmente se les agradece a todos los autores y coautores que han logrado enriquecer esta
nueva versin de la Gua Tcnica, en particular al Dr. Carlos Pantoja, a la Dra. Mara Soledad Morales
Covarrubias, a la Dra. Margherita Barracco, al Dr. Bruno Gmez Gil, a la Dra. Alitiene Pereira Moura,
al Dr. Oscar Garca, al Ing. Cornelio Lara y muy especialmente al Dr. Ignacio de Blas, quien aport
un nuevo captulo a la Gua.
La autora Mara Soledad Morales-Covarrubias, desea agradecer su apoyo y comprensin a
Ignacia Covarrubias Flores, Martha Silvia Morales Covarrubias, Pedro Antonio Morales Covarrubias,
ngel Eduardo Morales Ramos y Gael Iaqui Morales Ramos.
Finalmente, queremos reconocer y agradecer el apoyo que nos ha brindado el Ing. Dario
Lpez de Faralln Acuacultura, al facilitarnos ejemplares vivos para las fotos de portada y entre pginas, de esta Gua Tcnica de Patologa e Inmunologa de camarones penaeidos y al Lic. Reinaldo
Morales por su revisin en los datos estadsticos y apoyo constante en la consecucin de informacin.
Prlogo
PRLOGO
De acuerdo con la FAO (2014), la produccin acucola mundial alcanz el mximo histrico
de 90.4 millones de toneladas en 2012, de las cuales 66.6 millones de toneladas corresponden a
pescado comestible, incluida la produccin de camarn de cultivo que represent el 9.7% (6.4 millones de toneladas) y el 22.4% en valor, los cuales a su vez corresponden al 15% del valor total de
los productos pesqueros comercializados a nivel internacional.
En los pases que conforman OIRSA, la evolucin de los volmenes de produccin indica que
la camaronicultura tuvo un crecimiento ponderado del 214% entre 2000 y 2011. El sector present
una tendencia ascendente sostenida hasta 2008, cuando el aumento lleg hasta el 269% y desde
entonces present un comportamiento luctuante (FAO FishStat, 2014).
Si bien los resultados de la produccin de la acuicultura y en especial de los camarones cultivados son de alta importancia, la industria se ha visto afectada en diferentes pocas por el aparecimiento de enfermedades. Tal es el caso de Centroamrica, que en la dcada de los 90 fue fuertemente
impactada por la aparicin de patologas como el Sndrome de Taura y el Sndrome de la Mancha
Blanca, causando signiicativas prdidas en la produccin, la generacin de ingresos y empleos.
En 2012 y con mayor nfasis en 2013, se evidenci una disminucin de los volmenes en la
produccin mundial de camarn cultivado, debido principalmente a problemas relacionados con
enfermedades como la Enfermedad de la Necrosis Aguda del Hepatopncreas (AHPND o EMS) en
algunos pases de Asia, as como otras patologas similares en ciertos pases de Amrica Latina, lo
cual increment los precios del camarn en todo el mundo y afect el consumo en los mercados
tradicionales.
Debido al alto riesgo que representan las enfermedades tanto para las poblaciones en cultivo
como para los organismos silvestres, el sector acucola se ha visto en la necesidad de implementar
nuevas tecnologas, de aplicar las buenas prcticas de manejo en sus cultivos y tambin de capacitar de forma continua al personal tcnico y de campo.
El Organismo Internacional Regional de Sanidad Agropecuaria (OIRSA), como ente rector de
la sanidad agropecuaria en la regin, tiene entre sus compromisos el facilitar el desarrollo econmico y social de los pases miembros mediante la produccin agropecuaria sana y de calidad. Con
dicho propsito, OIRSA tiene el honor de presentar la Gua Tcnica de Patologa e Inmunologa de
Camarones Penaeidos, la cual recoge las tcnicas de identiicacin y caractersticas de las principales
enfermedades de los camarones y que le permitir a la regin contar con una camaronicultura que
cumpla los estndares de calidad y sea altamente productiva.
EFRAN MEDINA GUERRA

Director Ejecutivo
OIRSA, 2014
Introduccin
INTRODUCCIN
La Gua Tcnica Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos, primera edicin, fue
creada gracias al Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnologa para el Desarrollo (CYTED).
Este es un programa internacional multilateral de cooperacin cientica y tecnolgica de mbito
iberoamericano con carcter horizontal y a travs de la Red denominada FORO PARA LA GESTIN
DE CONOCIMIENTOS Y TRANSFERENCIA DE TECNOLOGAS SOBRE EL CULTIVO DE PENAEUS
VANNAMEI: RED VANNAMEI, se public en el 2008 bajo la Coordinacin de la Lic. Vielka Morales
como responsable de esta red temtica y co-editora del libro.
La presente actualizacin y publicacin de la 2da edicin de esta Gua Tcnica, ha sido posible gracias al Organismo Internacional Regional de Sanidad Agropecuaria (OIRSA), a travs de la
Coordinacin Regional de Salud Animal, su Coordinacin de Inocuidad de los Alimentos, su Programa Regional de Sanidad Acucola y del Grupo ad hoc en Sanidad Acucola, coordinado este ltimo
por el Dr. Jorge Cullar-Anjel, co-editor y co-autor del libro. El OIRSA como entidad intergubernamental especializada en materia de sanidad agroalimentaria, tiene el objetivo de mejorar y alcanzar
el estatus sanitario de la Regin, para que sea reconocido internacionalmente, permitiendo as el
acceso a mercados internacionales y contribuyendo con la seguridad alimentaria.
El Grupo Ad hoc del Programa de Sanidad Acucola dentro de la Coordinacin Regional de
Salud Animal, est dividido en tres sub grupos: Peces liderado por el Dr. Vctor Vidal del CIAD de
Mxico, Moluscos liderado por el Dr. Jorge Cceres del CICESE de Mxico y Crustceos liderado
por el Dr. Cullar-Anjel del sector privado de Panam. As mismo, el Programa cuenta con un Grupo
Network de apoyo, compuesto por grandes especialistas en diversos temas de la sanidad acucola,
dentro y fuera de la regin del OIRSA. Estos tres sub grupos, interesados en apoyar al sector acucola
de la Regin, han contribuido en diversas oportunidades con capacitaciones y material cientico que
sirve como instrumento de referencia en pro de una produccin acucola sana en la Regin.
El OIRSA ha dado inicio a travs de su Coordinacin Regional de Salud Animal y su Programa
de Sanidad Acucola y con el apoyo de su Grupo ad hoc, a una serie de actividades relacionadas con
la sanidad acucola, entre ellas varias capacitaciones tcnicas y temticas, manuales, conferencias
y, de forma destacada, la Campaa de Alerta Temprana sobre la nueva enfermedad conocida como
Sndrome de Mortalidad Temprana (EMS por sus siglas en Ingls) o Enfermedad de la necrosis aguda
del hepatopncreas (AHPND por sus siglas en Ingls).
Por tal motivo, se ha hecho un gran esfuerzo para poder reproducir la 2da edicin de esta
Gua Tcnica, con la ayuda de los mismos autores de su primera edicin y la contribucin de nuevos
autores, logrando as un documento actualizado, moderno y con nuevas enfermedades incorporadas.
Este documento servir como material bsico de consulta para estudiantes, profesores, profesionales
acucolas, investigadores, empresas privadas o mixtas y entidades estatales, que se dediquen al cultivo de camarones marinos.
El compromiso desinteresado de cada uno de los autores, es uno de los mejores aportes al sector camaronero y a quienes los editores agradecen por haber depositado su conianza en el Programa
Regional de Sanidad Acucola del OIRSA. Extendemos a estos autores, amigos y compaeros, un
cordial agradecimiento por toda su colaboracin, as como al Coordinador Regional de Salud Animal
y al Coordinador Regional de Inocuidad de los Alimentos del OIRSA, por su apoyo incondicional y
su conianza depositada en nosotros para este gran proyecto que es la 2da edicin de la Gua Tcnica
de Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos.
VIELKA MORALES Q.
JORGE CULLAR-ANJEL
Coordinadora del Programa

Regional de Sanidad Acucola
del OIRSA
Camaronera de Cocl, S.A. y

Coordinador del Grupo
ad hoc del OIRSA en Sanidad Acucola
7
NDICE
Prlogo
Introduccin
Resea de los Editores y Autores

Captulo 1 Mtodos para el Diagnstico de Enfermedades en Camarones Penaeidos
(Jorge Cullar-Anjel)
21
1.1 Anamnesis
22
1.2 Examen clnico
23
1.3 Microscopa directa (anlisis en fresco)
26
1.4 Montajes en fresco (Mara Soledad Morales-Covarrubias)
29
1.5 Bacteriologa
48
1.6 Histologa
52
1.7 Pruebas con anticuerpos
59
1.8 Mtodos moleculares
64
1.9 Parmetros inmunolgicos
78
1.10 Microscopa electrnica de transmisin
84
1.11 Bioensayos
87
1.12 Referencias bibliogricas
92
Captulo 2 Enfermedades virales del camarn (Carlos R. Pantoja y Donald V. Lightner)
99
2.1 Principales enfermedades y mtodos de diagnstico.
100
2.2 Virus de la necrosis hipodrmica y hematopoytica infecciosa (Infectious

hypodermic and hematopietic necrosis virus, IHHNV).
103
2.3 Virus del Sndrome de la Mancha Blanca (White spot syndrome virus, WSSV)
111
2.4 Virus del Sndrome de Taura (Taura syndrome virus, TSV)
121
2.5
11
Virus del sndrome de la cabeza amarilla (Yellow head syndrome virus,

YHV)
130
2.6 Virus de la mionecrosis infecciosa (Infectious myonecrosis virus, IMNV)
135
2.7 Mionecrosis infecciosa viral IMNV y sus implicaciones en el cultivo de

camarn brasileo (Alitiene Moura Lemos Pereira, Emiko Shinozaki Mendes, Tereza Cristina Vasconcelos Gesteira, Veronica Arns da Silva, Andreia
Benedita Poletto)
139
2.8 Penaeus vannamei nodavirus (PvNV)
149
152
ndice de Contenido
Captulo 3 Enfermedades bacterianas de camarones (Mara Soledad Morales-Covarrubias y Bruno Gomez-Gil)
167
3.1 Sndrome de la Mortalidad Temprana (EMS) o Enfermedad de la Necrosis

Aguda del Hepatopncreas (AHPND) - Situacin de Mxico
167
3.2 EMS/AHPND Descripcin de la enfermedad en Asia y Amrica (Carlos R.

Pantoja y Donald V. Lightner)
172
3.3 Necrosis sptica del hepatopncreas (NSHP)
178
3.4 Hepatopancreatitis necrotizante (NHP)
180
3.5 Sndrome de Zoea II
182
3.6 Enfermedad de luminiscencia
184
3.7 Erosin bacteriana del caparazn
185
3.8 Estreptococosis
187
3.9 Spiroplasma penaei (Carlos R. Pantoja y Donald V. Lightner)
189
3.10 Referencias Bibliogricas

Captulo 4 Parsitos en camarones (Jorge Cullar-Anjel)
192
197
4.1 Gregarinas
197
4.2 Microsporidios
202
4.3 Haplosporidios
209
4.4 Epicomensales
210
4.5 Metazoarios
217
221
Captulo 5 Enfermedades causadas por hongos (Carlos R. Pantoja y Donal V. Lightner)
225
5.1 Micosis
225
5.2 Fusariosis
228
232
Captulo 6 Avances en la Inmunologa del Camarn (Margherita Anna Barracco, Luciane Mara Perazzolo y Rafael Diego Rosa)
237
6.1 Sistema circulatorio, hemolinfa y coagulacin
239
6.2 Las clulas del sistema inmune
241
6.3 Mecanismos de reconocimiento y sealizacin celular
245
6.4 Mecanismos lticos y microbicidas
258
6.5 Defensas antivirales
267
6.6 Inmunoestimulantes
277
6.7 Parmetros hemato-inmunolgicos como indicadores de salud
282
6.8 Conclusiones y Perspectivas
287
289
Captulo 7 Vigilancia epidemiolgica en Camaronicultura (Ignacio de Blas y Ana

Muniesa)
7.1 Generalidades sobre vigilancia epidemiolgica
310
7.2 Investigacin de brotes de enfermedad
313
7.3 Vigilancia epidemiolgica para detectar enfermedad
317
7.4 Vigilancia epidemiolgica para estimar prevalencia
321
7.5 Conclusin
327
327
Captulo 8 Buenas prcticas y bioseguridad para el cultivo del camarn blanco Penaeus (Litopenaeus) vannamei (Boone, 1931) (Jorge Cullar-Anjel, Vielka
Morales, Cornelio Lara y Oscar Garca)
10
309
331
8.1 Aspectos a considerar en las Buenas Prcticas de Manejo
332
8.2 Sistema de disposicin de desechos segn su clasiicacin y posibilidad de

reciclaje
357
8.3 Uso de energa
357
8.4 Planes de contingencia
357
8.5 Registros en una granja camaronera
358
8.6 Trazabilidad
358
8.7 Referencias Bibliogricas
359
Abreviaturas
361
Glosario
364
Resea de los Editores
RESEAS
DE LOS EDITORES
VIELKA MORALES Q.
Coordinadora Programa Regional de Sanidad Acucola
vmorales@oirsa.org
Licenciada en Biologa. Experiencia de 14 aos en el tema de larvicultura,
maduracin, zooplancton y itoplancton en laboratorio de camarones de Panam. Durante 15 aos como coordinadora tcnica de la Organizacin del
Sector Pesquero y Acucola de Centroamrica - OSPESCA. Consultora para
FAO y PRADEPESCA-UE. Cuenta con ms de 17 publicaciones en temas de
camarones. Ha participado en redes del CYTED relacionada a camarones y
moluscos. Actualmente Coordinadora del Programa de Sanidad Acucola, de
la Coordinacin Regional de Salud Animal de la Organizacin Internacional
Regional de Sanidad Agropecuaria OIRSA.
JORGE CULLAR-ANJEL
Director del Departamento de Patologa e Investigacin
Camaronera de Cocl S.A. (CAMACO)
Aguadulce, Cocl, Repblica de Panam
jocuan@gmail.com
Mdico Veterinario (U.D.C.A., Bogot), Mster en Microbiologa con nfasis en
Inmunologa (Pontiicia Universidad Javeriana, Bogot). Actualmente Patlogo
e Investigador de CAMACO y Coordinador del Grupo ad hoc del OIRSA en Sanidad de Organismos Acuticos. Experiencia de 21 aos en las reas de cultivo
de camarn marino Litopenaeus vannamei, diseo y montaje de laboratorios
de patologa para camarones (bioensayos, microbiologa, histopatologa y biologa molecular), diagnstico y capacitaciones para la deteccin de enfermedades en camarones penaeidos y en peces marinos y dulceacuculas, docencia
universitaria e investigacin aplicada en Patologa, Inmunologa, Toxicologa
y Nutricin de camarones y peces, con desempeo profesional en Centro y
Sudamrica.
11
DE LOS AUTORES
MARIA SOLEDAD MORALES-COVARRUBIAS
Centro de Investigaciones en Alimentacin y Desarrollo, A.C.
Unidad Mazatln en Acuicultura y Manejo Ambiental
Mxico,
marisol@ciad.mx
Maestra y Doctorado en Patologa de crustceos, Licenciatura en Biologa Pesquera. Actualmente es profesor titular en CIAD. Sus principales trabajos de
investigacin estn enfocados en sanidad y isiologa de camarones penaeidos
en ambiente marino y de baja salinidad; imparte cursos en sanidad acucola,
transferencia tecnolgica, capacitacin y consultora en sanidad de crustceos en
Mxico y en el extranjero. Miembro del Grupo Ad hoc del OIRSA.
JORGE CULLAR-ANJEL
Aguadulce, Cocl, Repblica de Panam
jocuan@gmail.com
La resea de este autor ha sido citada previamente en Resea de los Editores
CARLOS PANTOJA
School of Animal and Comparative Biomedical Sciences
The University of Arizona
Tucson, Arizona, USA
cpantoja@email.arizona.edu
Ingeniero Bioqumico en Explotacin de Recursos Acuticos (Tec de Monterrey,
Campus Guaymas, Mxico). Maestra en Acuacultura (Tec de Monterrey, Campus
Guaymas, Mxico). Doctorado en Patobiologa (The University of Arizona). Actualmente es profesor investigador asociado en el laboratorio de patologa acucola
de la Universidad de Arizona. Principales reas de trabajo en patologa morfolgica, caracterizacin de nuevas enfermedades y agentes infecciosos de camarones
peneidos, desarrollo de mtodos de deteccin de agentes infecciosos y diagnstico
de enfermedades. Provee servicios de consultora a la industria camaroncola en el
rea de patologa y da entrenamiento tcnico en el rea de diagnstico de enfermedades a travs de talleres en la Universidad de Arizona o en el extranjero.
12
Resea de los Autores
DONALD V. LIGHTNER
School of Animal and Comparative Biomedical Sciences
Tucson, Arizona, USA
dvl@u.arizona.edu
PhD en Patologa y Biologa Pesquera, Maestra en Biologa Pesquera y su Licenciatura en Biologa Pesquera. Su experiencia est dirigida a la patologa y
enfermedades de los cultivos de crustceos y peces, enfermedades de invertebrados, marinos y de agua dulce, enfermedades infecciosas, virologa, histologa, microscopio electrnico, desarrollo de mtodos de diagnsticos, nutricin
de animales acuticos y toxicologa acutica. Provee servicios de consultoras
a la industria camaroncola en el rea de patologa y da entrenamiento tcnico
en el rea de diagnstico de enfermedades a travs de talleres en la Universidad
de Arizona o en el extranjero.
BRUNO GMEZ GIL R.

Laboratorio de bacteriologa y de Genmica Microbiana
CIAD, A.C. Unidad Mazatln en Acuicultura y Manejo Ambiental
Mxico
bruno@ciad.mx
Bilogo con doctorado en mirobiologa por la Universidad de Stirling, Escocia. Investigador de tiempo completo en la lneas de biodiversidad de bacterias
acuticas y enfermedades bacterianas de organismos acuticos. Ha publicado
mas de 60 artculos cienticos, diversos captulos en libros y formado estudiantes de licenciatura, maestra y doctorado. Es miembro de la American Society
for Microbiology, Association of Vibrio biologists y de la Academia Mexicana de
Ciencias. Adems de investigacin cientica, realiza servicios de diagnstico y
bioensayos a la industria camaroncola.
MARGHERITA ANNA BARRACCO

Universidad Federal de Santa Catalina (UFSC),
Laboratorio de Inmunologa Aplicada a la Acuicultura (LIAAq),
Departamento de Biologa Celular, Embriologa y Gentica (BEG),
Florianpolis, SC, Brasil
margherita.barracco@ufsc.br
Doctorado en Inmunologa de Invertebrados y Licenciatura en Ciencias Biolgicas. Profesora Titular de Biologa Celular, con participacin en los programas
de Postgrado en Acuicultura y Biotecnologa. Investigadora en el rea de inmunologa de crustceos y moluscos de inters para la acuicultura, con implicaciones en la sanidad y en el monitoreo ambiental. Sus principales trabajos de
investigacin estn enfocados en el estudio de la respuesta inmunolgica a infecciones, la produccion de antibiticos naturales, el desarrollo de parmetros
hemato-inmonolgicos para el monitoreo de condiciones de salud y el efecto de
sustancias inmunoestimulantes en camarones y bivalvos marinos.
13
LUCIANE MARIA PERAZZOLO

l.m.perazzolo@ufsc.br
Doctorado en Biologa y Fisiologa Celular, Maestra en Inmunologa de Crustceos Marinos y Licenciatura em Ciencias Biolgicas. Investigadora en el Laboratorio de Inmunologa Aplicada a la Acuicultura (UFSC) con participacin en los
programas de Postgrado en Acuicultura y en Biologa Celular y del Desarrollo.
Sus principales reas de investigacin estn enfocadas en los mecanismos de
defensa antiviral y en la busca de marcadores moleculares de resistencia de los
camarones a las enfermedades.
RAFAEL DIEGO DA ROSA

rafael.d.rosa@ufsc.br
Doctorado en Inmunogentica de Moluscos Bivalvos, Maestra en clonaje y
caracterizacin de pptidos antimicrobianos de camarones. Licenciatura en
Ciencias Biolgicas. Profesor investigador en el Laboratorio de Inmunologa
Aplicada a la Acuicultura de la Universidad Federal de Santa Catarina. Sus principales trabajos de investigacin estn enfocados en la inmunologa de crustceos y moluscos bivalvos, en especial en los pptidos antimicrobianos, respuestas intestinales e interacciones microorganismo-hospedador
ALITIENE MOURA LEMOS PEREIRA

Embrapa Meio-Norte,
Parnaba, PI, Brasil,
alitiene.pereira@embrapa.br
Tecnloga en Acuicultura, con Maestra y Doctorado en Acuicultura. Investigadora de la Empresa Brasilea de Investigacin Agropecuaria (Embrapa). Responsable por el Laboratorio de Patologa de Organismos Acuticos (LAPOAq).
Responsable por proyectos en patologa, diagnstico y monitoreo sanitario de
camarones y peces cultivados.
14
EMIKO SHINOZAKI MENDES,

Universidade Fed. Rural de Pernambuco,
Recife, PE, Brasil
esmendes@dmv.ufrpe.br
Mdica Veterinaria, con Maestra en Ciencia y Tecnologa de Alimentos, Doctorado en enfermedades tropicales. Profesora Asociada del Departamento de
Medicina Veterinaria, y en los programas de pos-grado en Veterinaria y de los
Recursos Pesqueros y Acucolas, ambos de la Universidad Federal Rural de Pernambuco. En la actualidad, profesora asociada en la Universidad Federal Rural
de Pernambuco, con experiencia en el campo de la Medicina Preventiva Veterinaria, con nfasis en la inspeccin de productos de origen animal y sanidad
animal acutica. Coordinadora de la Red Temtica del camarn Red Nacional
de Investigacin en Salud (RECARCINA), inanciado por FINEP.
TEREZA CRISTINA VASCONCELOS GESTEIRA

Universidade Fed. do Cear,
LABOMAR, CE, Brasil
gesteira@ufc.br
Biloga con Maestra en Zoologa por la Universidad Federal de Rio de Janeiro
y PhD en Biologa por la Universidad de New Brunswick Canad. Trabaja en
el rea de histologa y en histopatologa de camarones penaeidos. Est actualmente como profesor jubilado de la Universidad Federal de Cear. Miembro
fundador del Centro para la Enfermedad Diagnstico de Organismos Acuticos -CEDECAM/LABOMAR/UFC. Consultora ad hoc del Consejo Nacional
de Desarrollo Tecnolgico y CNPq. Miembro de la Asociacin brasilea de
Patlogos de Organismos Acuticos- ABRAPOA. Experiencia en el rea de los
recursos pesqueros y de la ingeniera de la pesca, con nfasis en el cultivo de
camarn, que acta sobre los siguientes temas: el camarn marino, biologa
penaeidos y la histopatologa.
VERONICA ARNS DA SILVA

Universidade Fed. Rural de Pernambuco,
Recife, PE, Brasil
veronicaarns@yahoo.com.br
Licenciada en Veterinaria por la Universidad Federal Rural de Pernambuco
(UFRPE). Especializacin en Vigilancia Sanitaria y Gestin de Calidad de los
Alimentos por SPEI. Maestra en Acuicultura y Recursos Pesqueros y Doctorado
en Ciencias Veterinarias, con nfasis en la salud del camarn marino cultivado
por la Universidad Federal Rural de Pernambuco.
15
ANDREIA BENEDITA POLETTO

Embrapa Meio-Norte,
Bolsista PNPD/CAPES
Parnaba, PI, Brasil,
andreiapol@yahoo.com.br
Licenciada en Ciencias Biolgicas PUC-Campinas, Master en Ciencias Biolgicas (Gentica) de la UNESP-Botucatu-SP (2005) y doctorado en Ciencias
Biolgicas (Gentica) de la UNESP-Botucatu - SP (2009), Post-doctorado en la
Embrapa Meio-Norte, Piaui. Experiencia en el rea de la gentica, diagnstico
molecular, cultivo celular e histologa. Con estudios de patologa del camarn de cultivo Litopenaeus vannamei. Actualmente es consultora Ad Hoc de la
Fundacin para el Apoyo a la Investigacin del Estado de Maranho (FAPEMA).
CORNELIO LARA
Jefe del Programa de Sanidad Acucola
Ministerio de Desarrollo Agropecuario
Panam
corla5430@gmail.com
Licenciado en Ingeniera Agronmica, con Magster en Ciencias Ambientales
con nfasis en Manejo de Recursos Naturales. Jefe del Programa de Sanidad
Acucola de la Direccin Nacional de Salud Animal, Ministerio de Desarrollo
Agropecuario. Ms de 30 aos de experiencia en el Sector Acucola; Consultor
Privado del Sector Acucola, nacional e internacional. Punto focal de la OIE
para animales acuticos, miembro del Grupo Ad hoc para organismos acuticos
de la Organismo Internacional Regional de Sanidad Agropecuaria (OIRSA) y
miembro Ad Honorem del Comit Consultivo Agropecuario Nacional.
OSCAR GARCA SUREZ

Coordinador Regional de Inocuidad
de Alimentos del Organismos Internacional
Regional de Sanidad Agropecuaria OIRSA
ogarcia@oirsa.org
Mdico Veterinario con Maestra en Medicina Veterinaria Higiene Animal, Doctorado en Higiene de los Alimentos de la Universidad de Leipzig, Alemania.
Actualmente ocupa el cargo de Coordinador Regional de Inocuidad en OIRSA. Presidente de la Red Panamericana de Inspeccin, Control de Calidad y
Tecnologa de Productos Pesqueros (2013-2014). Miembro del Grupo Asesor
Internacional Escuela Virtual de Inspeccin de Alimentos en Amrica Central
y Repblica Dominicana. Delegado de OIRSA ante la Comisin del Codex
Alimentarius.
16
VIELKA MORALES Q.
Coordinadora Programa Regional de Sanidad Acucola
bajo la Coordinacin Regional de Salud Animal del
Organismo Internacional Regional de Sanidad Agropecuaria
OIRSA
vmorales@oirsa.org
La resea de este autor ha sido citada previamente en Resea de los Editores
IGNACIO DE BLAS GIRAL

Facultad de Veterinaria
Universidad de Zaragoza
Espaa,
deblas@unizar.es
Doctor en Veterinaria (programa de Patologa Animal: Sanidad Animal) y Licenciatura en Veterinaria por la Universidad de Zaragoza. Profesor Titular en el Departamento de Patologa Animal de la Universidad de Zaragoza. Es responsable
del rea de Epidemiologa del Laboratorio de Ictiopatologa de la Universidad
de Zaragoza. Es responsable de la docencia de la asignatura Epidemiologa y
Bioestadstica. Su investigacin est orientada a la epidemiologa de especies
acuticas: peces, moluscos y crustceos, con nfasis en el diseo y anlisis
de experimentos y estudios observacionales, as como en el desarrollo y evaluacin de tratamientos teraputicos y proilcticos (antibiticos, probiticos,
vacunas).
ANA MUNIESA DEL CAMPO

Facultad de Veterinaria
Universidad de Zaragoza
Espaa,
animuni@unizar.es
Maestra en Iniciacin a la Investigacin en Ciencias Veterinarias y Licenciatura
en Veterinaria por la Universidad de Zaragoza. En la actualidad es becaria de
investigacin en el Departamento de Patologa Animal de la Universidad de
Zaragoza y est realizando su Doctorado en el programa de Medicina y Sanidad Animal de la Universidad de Zaragoza. Su investigacin se centra en el
desarrollo de nuevas herramientas orientadas a mejorar los programas de vigilancia epidemiolgica en acuicultura. Ha participado como docente en cursos
de formacin en epidemiologa y bioseguridad acucola.
17
18
Captulo 1
Mtodos para el Diagnstico de
Enfermedades en Camarones Penaeidos
20
Captulo 1 - Mtodos para el Diagnstico de Enfermedades en Camarones Penaeidos
Captulo 1
Mtodos para el Diagnstico de Enfermedades en Camarones Penaeidos
Jorge Cullar-Anjel
Camaronera de Cocl, S.A. (CAMACO)
Coordinador del Grupo ad hoc del OIRSA en Sanidad Acucola
Panam
Introduccin
En este Captulo se revisan y detallan los principales mtodos que sirven como herramienta
para realizar el diagnstico de enfermedades en camarones, con base en las tcnicas recientes ms
utilizadas para la deteccin de agentes patgenos. Aunque algunos de estos procedimientos pueden
ser realizados por los mismos productores en los laboratorios de maduracin y/o larvicultura o en
las incas camaroneras, la mayora deben ser hechos por profesionales en sanidad acucola o por
Mdicos Veterinarios especialistas. Se debe recordar siempre que el diagnstico no lo da una prueba
de laboratorio como tal, sino la interpretacin que hace el especialista en Sanidad, con base en sus
conocimientos y en la informacin recopilada de las pruebas de campo y de laboratorio de cada caso
en particular. Se incluye dentro de este captulo, la participacin de Mara Soledad Morales-Covarrubias con la explicacin del tema Montajes en Fresco.
Pasos para el diagnstico:
Anamnesis (informacin histrica del caso, datos relacionados con el evento)
Examen clnico
Microscopa (anlisis con microscopio de luz directa, contraste de fase o campo oscuro, con
montajes en fresco de tejidos teidos o sin coloraciones, barridos o montajes en fresco de tiras
fecales)
Bacteriologa (de tejidos de camarones o de sustratos relacionados como agua, sedimento y otros
organismos acuticos)
Histologa de especimenes ijados
Pruebas basadas en anticuerpos para la deteccin de patgenos utilizando anticuerpos policlonales (PAbs por sus siglas en ingls) o anticuerpos monoclonales (MAbs por sus siglas en ingls)
Mtodos moleculares
Sondas de ADN en pruebas de hibridacin dot blot directamente con muestras frescas de
tejido o con ADN extrado
Sondas de ADN o de ARN en pruebas de hibridacin in situ con cortes histolgicos de

tejidos ijados
21
PCR, RT-PCR, PCR en tiempo real o LAMP para pruebas directas con muestras de tejido
fresco o con ADN o ARN extrado
Parmetros inmunolgicos (hemogramas y medicin de periles inmunes)
Microscopa electrnica de barrido o de transmisin
Bioensayos con portadores sospechosos o subclnicos, utilizando hospederos altamente susceptibles (estadios del animal o especies) como indicadores de la presencia del patgeno.
1.1
Anamnesis
En la medida de lo posible, el profesional en sanidad acucola responsable de realizar el diagnstico de una enfermedad en una poblacin de camarones, debe incluir una visita a la instalacin
afectada (maduracin, larvicultura o inca de engorde).
Para poder llegar a un correcto diagnstico conirmatorio que permita la toma de decisiones
acertadas, una de las actividades ms importantes que el especialista en sanidad acucola debe realizar durante su visita a la granja afectada, es una correcta anamnesis. Como concepto, la anamnesis
se reiere a la recopilacin de datos clnicos relevantes y a informacin histrica que proporciona el
productor acerca del estanque afectado. Esta informacin se debe ordenar y analizar como parte de
los procedimientos para emitir un diagnstico. Durante la visita, el especialista debe recopilar toda la
informacin relacionada con la aparicin del brote de enfermedad. Para ello, deber realizar preguntas al productor, relacionadas al menos con los siguientes puntos (entre otros):
Condicin actual del estanque (qu le ocurre?, desde cundo?, a qu cree que se debe?,
cuntos estanques tienen el problema?, hay alguna granja vecina afectada?)
Densidad de siembra
Das de cultivo
Procedencia de las postlarvas sembradas en el estanque
Supervivencia actual estimada
Crecimiento semanal
Alimentacin de los camarones
Tipo de alimento
Frecuencia y mtodo de suministro del alimento
Cambios recientes en el tipo, consumo o suministro del alimento
Tiempo de almacenamiento del alimento en la inca
Parmetros ambientales y fsico-qumicos del estanque afectado
Tipos y procedimientos de fertilizacin del fondo y el agua
Brotes similares que se han presentado anteriormente en esta u otras granjas vecinas
Relato ordenado de los sucesos o problemas clnicos que ha presentado el estanque
Descripcin del productor en trminos no tcnicos, de los signos de enfermedad detectados, su

progresin en la poblacin y la duracin que han tenido
Hacer preguntas al productor, le ayuda a recordar informacin que no crey importante mencionar, pero que puede ayudar a la hora del diagnstico
22
Trnsito de personas forneas (uso de servidumbres) o de equipos por las instalaciones de la

inca
Presencia de animales forneos en el sistema (perros, aves, roedores, vacas, etc.)
Productos qumicos o biolgicos utilizados durante el cultivo incluidos antibiticos y probiticos
Toda aquella informacin adicional que sea relevante y que pueda estar relacionada con la
poblacin afectada
La edad del cultivo es importante, ya que algunas enfermedades afectan ms a camarones de

cierta edad que de otra. Los animales jvenes presentan ms frecuentemente patologas causadas
por agentes infecciosos como virus, bacterias y hongos; los adultos aunque son ms resistentes a
enfermedades, pueden presentar parasitosis internas (gregarinas) o externas (epicomensales), lesiones
degenerativas o en algunos casos tumores. Realizar una adecuada anamnesis acompaada de una correcta exploracin fsica, puede conducir a un diagnstico certero o a deinir en cuanto a las pruebas
especiales de laboratorio, cules s y cules no se deben realizar con muestras del estanque afectado.
Debe llevarse un registro de la informacin obtenida en la granja, para despus ponerla en
orden de prioridad con el in de preparar el listado de posibles diagnsticos que acompaados por
los datos recogidos en la valoracin clnica de campo, ayudar a preparar los exmenes complementarios necesarios para un correcto diagnstico y un eventual tratamiento.
Los mtodos de diagnstico nunca pueden sustituir la informacin obtenida mediante una
anamnesis completa y una buena valoracin clnica. Es importante considerar que una anamnesis
correcta no debe centrarse exclusivamente en el motivo de la visita tcnica al estanque, ya que a veces existen otros problemas no reportados por el productor y que podran ser incluso ms importantes
que el motivo inicial por el cual se solicita la asistencia del especialista en sanidad acucola.
1.2
Examen clnico
Cuando se trate de un brote de una enfermedad, durante la visita a las instalaciones deben
evaluarse las unidades de produccin (tanques o estanques) que presenten problemas. Se deben
realizar capturas de camarones in situ y hacer una revisin individual de animales, para formarse
una idea aproximada de la proporcin del problema: qu tanta poblacin est afectada (prevalencia
en %), grado de severidad de las afecciones observadas en los organismos enfermos y qu tipo de
enfermedad puede estar causando el brote.
El examen clnico debe incluir un recorrido manual y visual muy cuidadoso de los camarones
que sean revisados, los cuales no deben ser capturados al azar, sino seleccionados por presentar alguna manifestacin de enfermedad. Con base en los hallazgos de esta valoracin clnica, es factible
en algunos casos hacer un diagnstico presuntivo, el cual se debe conirmar con pruebas complementarias de laboratorio.
El nmero de animales que se debe tomar para realizar un estudio sobre la etiologa de enfermedades, est afectado por la habilidad de reconocer camarones enfermos en exmenes generales,
la naturaleza del problema presente y por la experiencia del profesional especialista en sanidad acucola. Cuando se eligen camarones que presenten signos clnicos, 5 a 10 por poblacin examinados
individualmente, sern suicientes.
La recoleccin de camarones para realizar un examen que busca determinar la presencia de
enfermedad, debe realizarse procurando el mnimo de estrs durante la captura y manipulacin de
los animales (Fig. 1.2.1).
23
Si el examen clnico debe ser realizado en un lugar diferente al de la captura y los camarones
deben ser transportados hacia otra parte, la movilizacin debe hacerse en recipientes con agua del
mismo estanque, limpia (sin lodo ni trozos de vegetales), con adecuada aireacin y teniendo una
densidad baja (para evitar el estrs). Si los camarones van a permanecer un perodo de tiempo en el
recipiente antes de ser examinados, deben tener buena aireacin y, en lo posible, se debe bajar la
temperatura a 25-27C mediante la adicin de bolsas con hielo (selladas).
En estudios de camarones presumiblemente enfermos, se deben seleccionar animales moribundos, descoloridos, con comportamiento inusual o que presenten anormalidades macroscpicas
con las cuales se sospeche de una enfermedad (Fig. 1.2.2 y 1.2.3). Las principales observaciones que
se deben realizar en camarones enfermos durante una valoracin clnica, son las siguientes:
Color del animal
Tamao del cuerpo comparado con el resto de la poblacin (enanismo)
Expansin de cromatforos
Deformidades en rostro, abdomen o apndices
Flexin del msculo abdominal (calambre)
Color de las branquias (amarillas, marrn o negras)
Color de los apndices (pereipodos, plepodos y urpodos)
Color de las antenas
Edema (presencia anormal de lquido) en apndices u otras partes del cuerpo
Transparencia de los msculos del abdomen y del cefalotrax
Replecin intestinal (porcentaje del intestino que se encuentra lleno)
Textura del exoesqueleto (duro o blando)
Tono del msculo abdominal (irme o lcido)
Presencia de moco sobre la cutcula (resbaloso o spero al tacto)
Manchas, laceraciones, heridas, zonas oscuras u opacas, astillas
Color del esfago y estmago (anaranjado sugiere canibalismo por mortalidad)
En cuanto a manifestaciones de enfermedad en condiciones naturales en los tanques o estanques, las siguientes son observaciones frecuentes en camarones enfermos:
Nado errtico (en crculo o en lnea recta sin rumbo)
Letargia y debilidad
Prdida del relejo de huida (permiten ser capturados sin ejercer resistencia)
Vulnerabilidad a predadores (aves)
Nado supericial (barbeo)
Susceptibilidad a la hipoxia
Disminucin en la alimentacin
Cuando se realicen muestreos aleatorios intencionales para estimar la prevalencia de una enfermedad en una poblacin, los camarones deben ser tomados al azar (no escogidos). El tamao de
la muestra para estudios de enfermedades en camarones, es revisado en detalle por el Dr. Ignacio de
Blas en el captulo 7 (Vigilancia epidemiolgica).
24

EXAMEN CLNICO
Figura 1.2.1. Captura de camarones en un

estanque de cultivo mediante el uso de una
atarraya, para ser sometidos a un examen
clnico.
Figura 1.2.2. Muestra de camarones P. vannamei sanos, enfermos y muertos observados

en un recipiente de fondo blanco, despus
de su captura en un estanque de cultivo. Se
observan algunos camarones muertos sin
apndices (pereipodos o plepodos), debido a que han sido canibalizados por otros
camarones.
Figura 1.2.3. Camarones P. vannamei que

estn siendo observados luego de haber sido
capturados en un estanque de cultivo, durante un procedimiento de examen clnico. En
el caso de estos 5 camarones, no se observan
manifestaciones clnicas de enfermedad.
25
1.3
Microscopa Directa (Anlisis en fresco)
Esta tcnica est basada en la observacin bajo el microscopio de tejidos o partes de camarones visiblemente afectados (Fig. 1.3.1), con el in de establecer en la medida de lo posible, un
diagnstico presuntivo. Las partes ms comnmente examinadas bajo el microscopio, son: hepatopncreas, branquias, contenido intestinal (heces), msculo esqueltico y contenido gstrico (Fig.
1.3.2 hasta Fig. 1.3.7).
Para una evaluacin sanitaria con microscopa directa, deben examinarse las muestras lo ms
pronto posible despus del muestreo y despus de la preparacin del montaje en un portaobjetos. Se
deben utilizar organismos vivos siempre que sea posible, o usar muertos frescos que han sido mantenidos en fro (refrigerados o enhielados), o muestras ijadas en formalina 10% tamponada, cuando no
sea posible trabajar con camarones vivos. Si se puede contar con un laboratorio del campo adecuado,
debe usarse para procesar y examinar las muestras lo ms cerca del sitio del muestreo.
Una aplicacin importante del mtodo de microscopa, es el examen del contenido gstrico
en camarones. Para ello, deben ser sacriicados al menos 10 animales capturados al azar en una poblacin determinada (estanque o tanque). Se extrae cuidadosamente el estmago luego de hacer una
diseccin del mismo utilizando tijeras y pinzas pequeas. Se realiza una incisin por la lnea media
con las tijeras y se extrae el equivalente a una gota de contenido gstrico. Se ubica sobre una lmina
portaobjetos y se aade una gota de solucin salina. Se coloca luego una lmina cubreobjetos y se
hace presin con la pinza cuidadosamente, con el in de separar los componentes gstricos.
Se observa luego la muestra bajo el microscopio utilizando los objetivos de 4X y 10X, registrando la proporcin estimada de alimento artiicial (pellets), microalgas, zooplancton, sedimento y
otros componentes que se observen. Se promedian los porcentajes estimados en los 10 camarones
para cada una de estas observaciones y se obtienen los valores estimados para dicha poblacin. Este
mtodo permite conocer factores que estn afectando el crecimiento, as como realizar ajustes en la
racin diaria de alimento de los camarones.
MICROSCOPA (Montajes en fresco)
Figura 1.3.1. Camarones P. vannamei bajo

observacin durante un examen clnico. Ntese la presencia de una zona oscura en la
parte media del cefalotrax y superior de las
branquias (lechas). La opacidad generalizada del msculo abdominal puede deberse al
tiempo que han estado fuera del agua (estrs
por hipoxia). No se observan manifestaciones
adicionales de enfermedad.
26
Figura 1.3.2. Camarn juvenil P. vannamei

en el cual se est levantando la cutcula posterior del cefalotrax, para extraer muestras
del hepatopncreas, las branquias y heces
del intestino medio, a partir de las cuales se
va a preparar un montaje en fresco.
Figura 1.3.3. Preparacin de un montaje en

fresco de un camarn P. vannamei en donde ya
se han colocado bajo el cubreobjetos muestras
de hepatopncreas (izquierda) y branquias (centro). Las heces estn siendo extradas del intesino medio con la ayuda del borde de unas ijeras.
Figura 1.3.4. Muestra de hepatopncreas

de un camarn subadulto P. vannamei preparada mediante un montaje en fresco. Se
observa gran cantidad de vacuolas lipdicas
(reservas de grasa) de colores amarillo y gris y
con tamaos variados (todas normales). En el
centro hay un proceso de melanizacin (color marrn) de un tbulo del hepatopncreas,
el cual est rodeado por varias capas de hemocitos (halo blanco alrededor del tbulo
melanizado) y presenta una forma alargada
siendo ms ancho hacia la izquierda. Sin tincin. Ampliicacin: 100X.
27
Figura 1.3.5. Muestra de branquias de un

juvenil P. vannamei preparada mediante un
montaje en fresco. Se observan 2 lamelas
branquiales bifurcadas en su extremo (superior), las cuales presentan melanizacin
de origen txico. Sin tincin. Ampliicacin:
100X.
Figura 1.3.6. Montaje en fresco preparado

a partir de una muestra de heces de un camarn subadulto P. vannamei. Se observan
dos trofozoitos de gregarina Nematopsis sp.,
uno de ellos con el extremo posterior bifurcado. Estos protozoarios estn formados por
3 clulas (arriba) y por 2 clulas (centro), respectivamente. Se puede diferenciar la clula
anterior (protomerito) y la clula posterior
(deutomerito). Sin tincin. Ampliicacin:
200X.
Figura 1.3.7. Montaje en fresco preparado

a partir de heces de una postlarva (pl-10) de
P. vannamei, en la que se observan trofozoitos de la gregarina Paraophioidina sp. (probablemente P. scolecoides). Cada trofozoito
est compuesto por una nica clula con el
ncleo visible. Este parsito tiene la particularidad de formar grupos en los cuales varios
organismos se adhieren a uno. Sin tincin.
Ampliicacin: 100X.
28
Los detalles relacionados con la tcnica de montajes en fresco, son estudiados a continuacin
por la Dra. Mara Soledad Morales-Covarrubias.
1.4
Montajes en fresco (Mara Soledad Morales-Covarrubias)
Introduccin
Las enfermedades representan el mayor obstculo en camaronicultura, generando considerables prdidas econmicas a los productores, propiciando la disminucin de inversiones en el sector
acucola y prdidas de empleos. Debido a la complejidad de causas que ocasionan las enfermedades
en el camarn, es necesario conocer las condiciones de cultivo, el ambiente y los patgenos. Para
lograr detecciones tempranas, prevenir y tratar las enfermedades, se requiere obtener informacin del
organismo, edad, fuente de la postlarva, cambios de comportamiento, alteraciones en exoesqueleto,
calidad de agua, cantidad consumida de alimento, crecimiento, sistema de produccin, densidad,
mortalidad, descripcin del caso, problemas previos, programas sanitarios, frmacos utilizados y
anlisis realizados.
El anlisis en fresco es la tcnica que se utiliza para monitorear el estado de salud de los organismos y realizar diagnsticos presuntivos en laboratorio y campo. Consiste en la observacin y diseccin del camarn en todos sus estados, para observar alteraciones y patgenos que presenten sus
rganos y tejidos. Su sensibilidad depende de la caracterstica de la tcnica, de la carga infectante, de
la biologa de los parsitos, del conocimiento del hospedero, del transporte, de la preparacin de la
muestra, de la implementacin de equipos adecuados y de la disponibilidad de tiempo y experiencia
de los observadores.
rganos y Tejidos para revisin de Anlisis en Fresco
Externos
El camarn blanco Penaeus (Litopenaeus) vannamei y el camarn azul Penaeus (Litopenaeus)
stylirostris, son crustceos decpodos que pertenecen a la familia Penaeidae.
Presentan cabeza y trax unidos en un nico bloque, llamado cefalotrax, en el que destacan
el rostro alargado con dientes, los ojos, las antenas y antnulas, las piezas bucales y los apndices
torcicos o pereipodos. El abdomen es alargado (el segundo segmento montado sobre la parte posterior del primero) con los apndices abdominales (especializados para la natacin) o plepodos y el
telson alargado y de forma triangular (Fig. 1.4.1) los cuales cumplen diferentes funciones (Tabla 1).
Tabla 1. Funcin principal de los rganos y tejidos externos de los camarones peneidos
(Modiicada de Brock y Main, 1992).
rgano/tejido
Funcin
Msculo abdominal estriado
Contracciones rpidas para escapar de los

depredadores
Antenas
Sensores tctiles (deteccin de depredadores)
Antnulas
Quimiorreceptores
Exoesqueleto
Soporte y barrera protectora
Branquias
Respiracin, excrecin, osmorregulacin y fagocitosis
Mandbulas, palpo mandibular y escafognatito
Sensores tctiles, para tomar las partculas de alimento

y movimiento de agua sobre las branquias.
Pereipodos y plepodos
Locomocin y quimiorrecepcin
29
Figura 1.4.1. rganos y tejidos externos del camarn blanco (P. vannamei).
Internos
En la parte interna se encuentra el hepatopncreas, principal rgano digestivo en camarones,
sus funciones incluyen la secrecin y sntesis de enzimas digestivas, retencin temporal o cclica de
reservas y absorcin de nutrientes. El hepatopncreas es un conjunto de tbulos y cada tbulo posee
una red de ibras musculares que permiten los movimientos peristlticos, posee clulas especializadas que tienen funciones especicas y el intestino que se considera como un tubo interno dividido
en tres partes: estomodeo o intestino anterior, mesentern o intestino medio y proctodeo o intestino
posterior (Fig. 1.4.2). El estomodeo y el proctodeo estn cubiertos de quitina. El estomodeo es una
estructura con funciones digestivas mecnicas y extracelulares. El mesentern regula los movimientos
de lo ingerido dentro del hepatopncreas, donde la digestin tiene lugar, y los movimientos peristlticos del proctodeo expulsan las heces.
Figura 1.4.2. rganos y tejidos internos del camarn blanco (P. vannamei).
30
SELECCIN Y TOMA DE MUESTRA

Para analizar una poblacin se requiere la seleccin y la toma adecuada de la muestra; sta se
elige de acuerdo con el estado de salud de los organismos o ante la sospecha de alguna enfermedad.
La intensidad del muestreo (nmero de muestreos en el tiempo hasta la cosecha) depender de la
necesidad de la informacin, de la historia de la granja, del origen de los organismos y de la densidad
de organismos sembrados en el cultivo. Dependiendo del propsito del estudio, el muestreo puede
ser aleatorio o no aleatorio (Para ms detalles sobre tipos de muestreos, ver el captulo 7).
Muestreo aleatorio
Cuando solamente se quiere determinar el estado de salud o cuando se busca la presencia de
algunos patgenos, se colectarn los organismos al azar y debern tomarse de cuatro reas diferentes
del estanque (Fig. 1.4.3). El tamao mnimo de la muestra o submuestra debe garantizar el 95% de
conianza que, de existir una infeccin, sta se incluir en la muestra; para la prevalencia, el muestreo depender de la presencia estimada del patgeno y del nivel de conianza elegido (Tabla 2). Los
camarones seleccionados se depositan en contenedores con aireacin (debe procurarse crearles el
menor estrs posible) y se trasladan de inmediato al laboratorio para su anlisis.
Figura 1.4.3. Estanque de cultivo de camarn donde se observan las cuatro reas para
la seleccin de organismos en muestreo aleatorio.
31
Tabla 2. Seleccin del tamao de muestra con base en la prevalencia esperada de un

patgeno en una poblacin determinada (Tomada de Lightner, 1996 y modiicada de
Amos, 1985).
Clculo de tamao de muestra con base en una prevalencia estimada de la enfermedad*
Tamao de la
poblacin
2%
5%
10%
20%
30%
40%
50%
50
50
35
20
10
100
75
45
23
11
250
110
50
25
10
500
130
55
26
10
1,000
140
55
27
10
1,500
140
55
27
10
2,000
145
60
27
10
4,000
145
60
27
10
10,000
145
60
27
10
>/= 10,000
150
60
30
10
*Prevalencia= Porcentaje de individuos de una especie de hospedero infectada con una especie particular de parsito/nmero de
hospederos examinados (Margolis et al., 1982)
Esta tabla servir de referencia para otros captulos en donde se har mencin de la misma.
Muestreo no aleatorio
Involucra solamente organismos enfermos. Este tipo de muestreo se realiza cuando se tiene
la sospecha de la presencia de alguna enfermedad o sndrome en el estanque. Se seleccionan por lo
menos 10 organismos que presenten seales clnicas, tales como: decoloracin, melanizacin y necrosis en la cutcula, as como anorexia (falta de apetito), letargia (reduccin de la actividad normal),
coloracin rojiza de los plepodos y telson, o cualquier otra alteracin evidente. Los organismos
con estas caractersticas generalmente se encuentran en la compuerta de salida y entrada de los
estanques (Fig. 1.4.4). Las muestras debern procesarse inmediatamente, de acuerdo con los procedimientos que se hayan elegido para la deteccin del agente causal de la enfermedad. Los organismos
habrn de ser preservados en las soluciones ijadoras adecuadas, congelados o enviados vivos a los
laboratorios de diagnstico.
32
Figura 1.4.4. Estanque de cultivo de camarn donde se

observa la compuerta de salida, rea para la seleccin de
organismos en muestreo no aleatorio.
Otras muestras
Muchas enfermedades infecciosas (como las virales) de impacto signiicativo en la produccin
de camarones, tienen un amplio rango de especies hospederas dentro de los crustceos, por lo que
stos deben ser considerados como portadores potenciales de los agentes etiolgicos de dichas enfermedades (Fig. 1.4.5), a menos que se demuestre que son refractarios a ciertos patgenos, o que las
condiciones ambientales no son propicias para la transmisin/virulencia de los mismos.
Figura 1.4.5. Especie hospedera (camarn de agua dulce) de patgenos infecciosos que tienen
que incluirse en los muestreos.
33
Transporte de organismos
Los organismos son depositados en cajas con bolsas de plstico con agua del mismo estanque
y aire para su transporte. Se debe de mantener la misma temperatura del agua del estanque durante
la movilizacin de los organismos, por lo que es necesario en algunos lugares adicionar hielo encima
de las bolsas con aire antes de cerrar las cajas (Fig. 1.4.6).
Figura 1.4.6. Caja con bolsa de plstico, organismos y agua del estanque para
transporte.
MATERIAL Y EQUIPO PARA EL ANLISIS EN FRESCO

Para la realizacin del anlisis en fresco se requiere contar con espacio limpio en donde se
tenga el siguiente material y equipo (Fig. 1.4.7):
Bata Blanca (laboratorio)
Goteros
Agua corriente
Portaobjetos
Cubreobjetos
Cajas de petri
Tijeras con punta ina
Pinzas con punta ina
Guantes de ltex
Microscopio compuesto, con objetivos de 4X, 20X, 40X, 60X y 100X
Tabla de diseccin
Pizetas
Agua de mar estril o iltrada
Jeringas desechables (1 ml, 3 ml y 5 ml)
Contenedores para muestras
Equipo para suministrar aire a las muestras
34
Hoja de reporte (Tabla 3)

Manuales
Solucin de Davidson (AFA, alcohol-formaldehdo-cido actico)*
Solucin de Davidson modiicada (AFA, alcohol-formaldehdo-cido clorhdrico)*
Etanol absoluto*
Etanol al 70%*
Todos estos reactivos se adquieren en las casas proveedoras de productos qumicos
Figura 1.4.7. Material y equipo necesario para realizar el anlisis en fresco.
35
Tabla 3. Hoja de reporte para el anlisis en fresco.

Fecha: ________________________________________________________________________________________
Procedencia: __________________________________________________________________________________
Especie:_______________________________________________________________________________________
No. Estanque: ____________________________ Tamao de la muestra: ________________________________
No. de muertos: __________________________ No. de examinados: ___________________________________
Estado de vida: ___________________________ Peso promedio:_____________ Tamao promedio: _______
Caractersticas externas
Observaciones
Caractersticas internas
Actividad de los
camarones
Hepatopncreas
Coloracin del organismo
Tamao
Contenido del intestino
Coloracin
Presencia de heces
en forma de cadena o
discontinua
Presencia de
epicomensales, bacterias y
hongos en la cutcula del
camarn
Caractersticas de la
cutcula
Melanizacin (color caf
claro).
Deformidades en
el rostrum, antenas
abdomen, telson,
uropdos y plepodos
Coloracin anormal de los
apndices
Presencia de los virus

BP y MBV
Deformacin de los
tbulos
Ndulos hemocticos
y/o Encapsulacin de
hemocitos
Presencia de cmulos de
bacterias
Tbulos melanizados y/o
necrticos
Cantidad de lpidos
Apndices rotos
Intestino
Branquias
Presencia endoparsitos
Coloracin
Presencia de ectoparsitos
Presencia
de cianobacterias
Cuerpos de oclusin de
BP
Ndulos hemocticos en
las lmelas branquiales
Msculo
Micosis (hifas, conidios)
Textura
Melanizacin
Color
Necrosis
Microsporidios
Sndrome del
acalambramiento
36
Observaciones
DESARROLLO DE LA TCNICA DE ANLISIS EN FRESCO

Recepcin de los organismos en laboratorio
Al recibir los organismos en laboratorio se toman los parmetros del agua que contiene los organismos
Se miden y se pesan para obtener el peso y el tamao promedio (Fig. 1.4.8)
Figura 1.4.8. Determinacin del peso en una balanza (A) y medicin de la longitud (B) de un camarn.
Se toma una muestra de urpodos (Fig. 1.4.9) y se deposita en el portaobjetos con una gota de
solucin salina para detectar estado de muda (Fig. 1.4.10).
Figura 1.4.9. Muestra de urpodos para revisar estado de muda.
37
Figura 1.4.10. Estados de muda generales: A: intermuda, se observa una pequea separacin entre la
cutcula vieja y la nueva; B, por histologa se observa fragmentacin de la cutcula vieja e hipertroia
de la epidermis subyacente; C: premuda: formacin completa de la nueva cutcula, separacin mayor
entre la vieja y la nueva cutcula; D, histologa, formacin de exocutcula (nueva cutcula), alargamiento de la epidermis subyacente; E: muda; formacin completa de la nueva cutcula, separacin
total entre la vieja y la nueva cutcula; F, histologa, formacin completa de exocutcula y alargamiento de la epidermis subyacente; G: No se observa ninguna separacin, ni formacin de nueva cutcula;
H, histologa, cutcula nueva con sus cuatro capas bien diferenciadas; la epicutcula, exocutcula,
endocutcula y la capa membranosa.
Se revisa el organismos para detectar cambios de su color normal blanco translcido (Fig.
1.4.11) a las siguientes coloraciones: coloracin amarillenta, opacidad muscular, transparencia (Fig.
1.4.12), coloracin rojiza (Fig.1.4.13), melanizacin y necrosis (Fig. 1.4.14), as como tambin se
pueden observar edemas, cutcula delgada (o suave) y deformaciones en el rostrum y en abdomen.
Figura 1.4.11. Espcimen adulto de P. vannamei con coloracin aparente normal (blanco translcido).
38
Figura 1.4.12. Juveniles de P. vannamei con coloracin amarillenta (A), opacidad muscular (B) y transparencia (C),
en cefalotrax y abdomen.
Figura 1.4.13. Juveniles de P. vannamei con coloracin rojiza total en cefalotrax y abdomen (A), rojiza con erosiones en abdomen (B) y rojiza en urpodos, telson y sexto segmento (C).
39
Figura 1.4.14. Juvenil de P. vannamei con melanizacin multifocal en cefalotrax y abdomen.
DISECCIN DEL ORGANISMO

Del organismo se toman pequeas muestras de:
Regin oral
De la regin oral (Fig. 1.4.15 y Fig. 1.4.16), con tijeras inas, se toma una pequea porcin y
se coloca en un portaobjetos, luego se vierten unas gotas de agua de mar y se deposita en el cubreobjetos para la bsqueda de bacterias ilamentosas (Leucothrix mucor) Flexibacter sp., melanizacin y
detritus del fondo de los estanques.
Figura 1.4.15. Regin oral de juvenil de P. vannamei (lecha).
40
Figura 1.4.16. Regin oral de juvenil de P. vannamei con melanizacin y necrosis multifocal.
Branquias
Con las tijeras inas, se elimina el exoesqueleto que cubre las branquias, se toma una pequea porcin y se coloca en el portaobjetos (Fig. 1.4.17) para buscar: cambios en la coloracin de los
ilamentos branquiales (como: melanizacin, necrosis, reas blanquecinas bien deinidas), presencia
de protozoarios como: Zoothamnium sp., Epistylis sp., Acineta, Ascophris, Bodo sp. (Tablas 4 y 5),
bacterias ilamentosas (Leucothrix mucor), Flexibacter sp., detritos del fondo de los estanques, restos
de microalgas, hongos, aglomerados de bacterias, melanizaciones y deformaciones. Para detectar
cuerpos de inclusin viral en las branquias por improntas, es necesario ijarlas en solucin Davidson modiicada (AFA, alcohol-formaldehdo-cido clorhdrico) si van a ser procesadas de manera
inmediata; si este no es el caso, se pueden ijar en la solucin de Davidson (AFA, alcohol-formaldehdo-cido actico), que se utiliza para ijar organismos para histologa.
Figura 1.4.17. Con tijeras inas, se elimina el exoesqueleto que cubre las branquias
de juvenil de P. vannamei (1), se toma una pequea porcin (2) y se coloca en el
portaobjetos (3) para buscar cambios en la coloracin de los ilamentos branquiales
(4).
41
Tabla 4. Principales ectoparsitos en camarones penaeidos.
NOMBRE Y DESCRIPCIN
Leucothrix mucor. Organismos gram negativos,

aerbicos, constituidos por largos ilamentos no
ramiicados, compuestos de pequeas clulas ovoides
o cilndricas.
Zoothamnium sp. Protozoario ciliado colonial, ijo

mediante un pednculo contrctil, con mionema
continuo, donde todas las ramiicaciones del tallo con
sus individuos se contraen al mismo tiempo.
Epistylis sp. Ciliado perifrico ssil. Tiene cuerpo en

forma de campana invertida y se encuentran montados
encima de un pednculo ramiicado no contrctil pues
carecen de mionema.
Vorticella sp. Ciliado que vive generalmente en
aguas dulces con gran contenido orgnico, solitario o
formando grupos. El cuerpo tiene forma de campana o
vescula y est unido al sustrato mediante un pednculo
contrctil.
Acineta sp. Presenta forma cnica, cuya clula se
encuentra rodeada por una lrica, los tentculos se
agrupan en fascculos, situados a ambos lados del
cuerpo.
Ascophrys sp. Ciliado apostomado que posee cilios

para su locomocin y captura de alimento.
Ephelota sp. Ciliado ssil, generalmente pedunculado,

con tentculos en el extremo libre. Adultos sin cilios,
pero presentes en los estados larvarios nadadores.
42
FOTOGRAFA
Tabla 5. Principales ectoparsitos y endoparsitos en camarones penaeidos.
NOMBRE Y DESCRIPCIN
FOTOGRAFA
Bodo sp. Ciliado con lagelos en forma de ltigos los

cuales utilizan para nadar.
Lagenophrys sp. Organismo ssil, con muy pocos

ciliados en el cuerpo.
Microsporidios. Como su nombre indica, se

caracterizan por sus esporas de tamao mnimo, de 2 a
20 m. Ameson, produce esporas individuales (1.2 x 2
m) a partir del esporonte.
Lagenidium spp y el Sirolpidium spp son hongos
que pertenecen al grupo de los icomicetos; atacan
principalmente a larvas y poslarvas de camarones y
provocan altas mortalidades en los laboratorios de todo
el mundo.
Fusarium solani. Microconidad ovoides que pueden
tener tabique y su tamao oscila entre 8-16 x 2-4,5 m
y microconidias cuyo tamao aproximado es de 28-65
x 4-6 m.
Gregarinas. Son protozoarios parsitos presentes
en todo el mundo. Pueden encontrarse inter o intra
celularmente en su husped y aunque las clulas
husped individuales son destruidas por las fases
intracelulares del parsito, la mayora de las especies
(Nematopsis sp., Cephalolobus sp. y Paraophioidina
sp.) no son consideradas como de alta patogenicidad
en Penaeus duorarum, Penaeus setiferus y Penaeus
vannamei. La nica especie reportada como causante
de daos en camarones es la denominada Nematopsis
penaei.
43
Hepatopncreas
Eliminar todo el exoesqueleto del cefalotrax para descubrir el hepatopncreas y el estmago.
Se observa la coloracin, el tamao del hepatopncreas para decidir si hay atroia (reduccin de
tamao) o hipertroia (aumento de tamao) del rgano. Con unas pinzas se retira la membrana que
cubre el hepatopncreas y con un bistur se parte por la mitad (longitudinalmente) para observar bajo
el microscopio la coloracin del luido, textura, melanizacin y necrosis tubular. Se toma una pequea muestra y se coloca en un portaobjetos para buscar: Baculovirus penaei, Monodon baculovirus,
cmulos de bacterias, deformacin tubular, ndulos hemocticos, encapsulacin, melanizacin y
necrosis de los tbulos (Fig. 1.4.18). Para la realizacin de improntas e histologa es necesario ijar los
rganos y tejidos conforme al diagnstico elegido.
Figura 1.4.18. Juvenil de P. vannamei con hepatopncreas expuesto (1), con pinzas se retira la
membrana que cubre para ver su coloracin (2), se toma una pequea muestra y se coloca en un
portaobjetos (3) para buscar cmulos de bacterias, deformacin tubular, ndulos hemocticos y encapsulacin (4).
Intestino
El abdomen se separa del cefalotrax, del telson y se retiran los urpodos para facilitar la
extraccin del intestino. Por la parte posterior se localiza el intestino (que puede contener o no hilo
fecal); con ayuda de una pinza ina, se extrae con cuidado y se coloca en el portaobjetos, procurando extenderlo. Luego se vierten unas gotas de agua de mar y se presiona ligeramente al poner el
cubreobjetos. Al observar la muestra en el microscopio, se buscarn: gregarinas (diferentes estadios,
distribucin y porcentaje de adherencia en el intestino), inlamacin (Fig. 1.4.19), nemtodos, cuerpos de oclusin de Monodon baculovirus y Baculovirus penaei.
44
Figura 1.4.19. Extraccin del intestino (1) para colocarse en portaobjetos, procurando extenderlo (2)
para observar inlamacin (3), gregarinas en sus diferentes estadios (4), distribucin y porcentaje de
adherencia en el intestino (5).
Msculo y gnadas
Se toma una pequea muestra de msculo y de las gnadas (especialmente, aquel tejido que
muestre opacidad de tipo lechoso). Se coloca en un portaobjetos y se presiona para facilitar la bsqueda de microsporidios. Si estos tejidos fueron parasitados, se deben observar las esporas que de
acuerdo con su tamao y forma indican el tipo de parsito que los est afectando.
Tambin en msculo se debe hacer un corte transversal y ponerlo entre dos portaobjetos y
observar a 4X para buscar larvas de helmintos y nemtodos anisquidos (hacen zoonosis en humanos).
Revisin de muestras
Las muestras ya preparadas se analizan en el microscopio, iniciando con el objetivo de menor
aumento y inalizando con el de mayor. Debido a su rpida descomposicin, la primera muestra que
se analiza es hepatopncreas; despus se estudian las branquias, regin oral, intestino y inalmente
el msculo. En la hoja de reporte se anota todo lo que se observa. Luego se calcula el porcentaje de
prevalencia y se determina el grado de severidad (Tablas 6, 7, 8 y 9), que presente la muestra analizada. Se inaliza con el diagnstico y el reporte inal.
45
Tabla 6. Gua general para dar un valor numrico cualitativo del grado de severidad a la
infeccin, infestacin y sndrome (Adaptado de Lightner, 1996).
Grado de severidad
Signos clnicos
No presentan signos de infeccin por el agente patgeno, parsito o epicomensal.

No presentan lesiones caractersticas de la enfermedad.
Trazas
Presencia de parsitos o epicomensales apenas por encima del lmite de deteccin
Presencia muy baja del patgeno, parsito o epicomensal. En aquellos en los que
se tiene un nmero estndar permitido, ste se encuentra justo arriba del lmite
normal. Se observan muy pocas lesiones caractersticas de la enfermedad.
Se observa la presencia baja y moderada del patgeno, parsito o epicomensal.

Se observan lesiones ligeras o moderadas, caractersticas de la enfermedad.
Incremento en la mortalidad si no se aplica tratamiento (cuando existe tratamiento).
Se observa la presencia moderada del patgeno, parsito o epicomensal. Se

observan lesiones de moderadas a severas, caractersticas de la enfermedad.
Potencialmente letal si no se aplica tratamiento (cuando existe tratamiento).
Se observa gran cantidad del patgeno, parsito o epicomensal. Se observan

severas lesiones caractersticas de la enfermedad. Muy letal con altas mortalidades.
Esta tabla servir de referencia para otros captulos en donde se har mencin de la misma.
Tabla 7. Gua para dar un valor numrico cualitativo del grado de severidad a la deformacin
tubular en hepatopncreas con anlisis en fresco
(Tomado de Morales-Covarrubias 2013).
Grado de severidad
Signos clnicos
No presentan signos de infeccin. No presentan deformacin tubular ni

rugosidad.
Organismo sano
Presencia muy baja de deformacin tubular (1-5/campo/organismo). Se observa

muy poco desprendimiento celular.
Fase (0), infeccin.
Se observa la presencia moderada de deformacin tubular (6-10/campo/

organismo), atroia, melanizacin y necrosis tubular. Se presenta mortalidad si
no se aplica tratamiento.
Fase (1), inicial.
46
Se observa presencia alta de deformacin tubular (11-16/campo/organismo), con

lesiones de moderadas a severas, con melanizacin, necrosis, desprendimiento
celular y atroia tubular. Letal si no se aplica tratamiento.
Fase (II), aguda.
Se observa gran cantidad de tbulos deformes (ms de 16/campo/organismo),
con severas lesiones con melanizacin, necrosis, atroia tubular y tbulos
vacos. Presencia de hemocitos alrededor de tbulos atroiados, melanizados y
necrticos.
Fase (III), crnica.
Tabla 8. Gua para dar un valor numrico cualitativo del grado de severidad a la infestacin
por gregarinas utilizando anlisis en fresco.
(Tomado de Morales-Covarrubias, 2013).
GRADO DE SEVERIDAD
SIGNOS CLNICOS
No presentan signos de infeccin por el parsito. No presentan lesiones

causadas por el parasitismo.
Presencia muy baja del parsito (1-15/intestino/organismo), con muy poca

inlamacin.
Se observa la presencia moderada del parsito (16-50/intestino/organismo).

Incremento en las lesiones causadas por el parasitismo como reduccin
de la mucosa, deformacin del intestino, inlamacin, melanizacin y
formacin de ndulos hemocticos. Se observa mortalidad si no se aplica
tratamiento.
Se observa alta presencia del parsito (51-100/intestino/organismo). Se

observan lesiones moderadas a severas causadas por el parasitismo,
como reduccin de la mucosa, deformacin del intestino, inlamacin,
melanizacin y formacin de ndulos hemocticos.
Potencialmente letal si no se aplica tratamiento.
Se observa gran cantidad del parsito (ms de 100/intestino/organismo). Se
observan severas lesiones causadas por el parasitismo, como reduccin de la
mucosa, deformacin del intestino, inlamacin, melanizacin y formacin
de ndulos hemocticos. Muy letal, con altas mortalidades.
Tabla 9. Gua para dar un valor numrico cualitativo del grado de severidad a la infestacin
por epicomensales en lamelas branquiales (Tomado de Lightner, 1996 y modiicado por
Morales-Covarrubias, 2013)
Grado de severidad
Signos clnicos
No presentan signos de infeccin por protozoario. No presentan lesiones

causadas por epicomensales.
Presencia muy baja de protozoarios (1-5/lamela/organismo), muy pocas

lesiones causadas por los epicomensales, como inlamacin.
Se observa la presencia moderada de protozoarios (6-10/lamela/organismo),

incremento en las lesiones causadas por los epicomensales, como
inlamacin, melanizacin y formacin de ndulos hemocticos. Se observa
mortalidad si no se aplican medidas de correccin.
Se observa alta presencia de protozoarios (10-15/lamela/organismo), lesiones

moderadas a severas causadas por los epicomensales, como inlamacin,
reas multifocales melanizadas y formacin de ndulos hemocticos.
Potencialmente letal si no se toman medidas de correccin.
Se observa gran cantidad de parsitos (ms de 15). Severas lesiones
causadas por los epicomensales, como inlamacin, formacin de ndulos
hemocticos, reas multifocales melanizadas y necroticas. Muy letal, con
altas mortalidades.
47
1.5
Bacteriologa
Objetivo. El objetivo de la bacteriologa en camarones, es cuantiicar la cantidad y el tipo de las bacterias presentes en la hemolinfa, otros tejidos o larvas y postlarvas, as como en agua para / de cultivo.
Descripcin. La bacteriologa es un conjunto de mtodos que se utiliza como apoyo en el diagnstico de enfermedades en camarones, cuando se sospecha que la causa de la enfermedad est
relacionada con presencia de bacterias patgenas en el agua de cultivo o dentro del organismo de los
animales. Consiste en la siembra de muestras en diferentes medios de cultivo, para determinar si hay
crecimiento o no de bacterias potencialmente patgenas.
Metodologa. Despus de deinir qu poblaciones afectadas se van a examinar, se debe determinar el
tipo de muestreo con base en el objetivo del estudio. El tamao de muestra depender de si la captura
es aleatoria o, de si se escogen slo animales enfermos para la evaluacin (ver Captulo 7 Vigilancia
Epidemiolgica en camaroniculura para ms detalles sobre tipo y tamao de muestreo). Los camarones que se van a someter a pruebas de bacteriologa, deben estar siempre vivos; no debe realizarse
ninguna prueba bacteriolgica con camarones muertos, debido a que los resultados estarn sesgados
por los cambios autolticos (post-mortem), con los cuales se alteran las poblaciones bacterianas presentes en los tejidos, as como su crecimiento.
Antes de iniciar cualquier procedimiento bacteriolgico, se deben tener previamente esterilizados todos estos elementos y hay que trabajar en una supericie esterilizada o en una cmara de
lujo laminar (Fig. 1.5.2). El material de vidrio se envuelve en papel kraft y se esteriliza por la tcnica
de calor seco mediante un horno a una temperatura de 180o C durante un lapso de dos horas. El agua
destilada y los medios lquidos de cultivo como el agua peptonada deben ser esterilizados por vapor
hmedo mediante un autoclave a 15 libras de presin (121o C) durante quince minutos (Fig. 1.5.2). Las
asas de platino se esterilizan directamente por calor seco mediante la llama del mechero. El momento
en el cual el asa se encuentra estril sucede cuando sta se torna de un color rojo incandescente. El
colador con ojo de malla ino se debe desinfectar dejndolo inmerso en una solucin de hipoclorito
de sodio concentrado por 5 minutos. Posteriormente se lava con agua estril hasta que desaparezca
el olor producido por el hipoclorito.
La toma de muestra para anlisis bacteriolgico de agua de transporte (de nauplios) y de
nauplios, se debe realizar, si es posible, en el momento de recibir los animales y directamente en las
bolsas o cajas de transporte. La toma de muestra de agua en tanques de larvicultura, se debe realizar
al menos en 2 puntos: la entrada del tanque y en el centro del mismo.
En el caso de larvas o postlarvas, se debe tomar una cantidad conocida o estimada (lo ms
coniable posible) de animales, con el in de emitir los resultados en funcin de unidades formadoras
de colonia (UFC) por animal o por gramo de larvas/postlarvas. La muestra debe ser lavada con agua
de mar estril utilizando una malla ina o un colador pequeo de cocina, previamente desinfectado
con yodo, formalina o etanol 70%. Las muestras deben ser luego maceradas en un recipiente esterilizado y agregando una cantidad conocida (en mL) de agua de mar estril o solucin salina estril
para la dilucin del macerado.
En el caso de camarones juveniles, subadultos o reproductores, se recomienda desinfectar el
rea de puncin (seno cardaco dorsal o seno hemolinftico ventral) con trozos de algodn impregnado con etanol 70%. Con una aguja de insulina (1 mL) nueva y estril que tenga aguja hipodrmica (muy delgada), se extraen al menos 100 mL de hemolinfa. Es importante que si las posibilidades
del laboratorio lo permiten, se utilice algn anticoagulante (ej.: citrato de sodio 10% en relacin 1:1),
cuyo volumen dentro de la jeringa se debe considerar antes de emitir los resultados de los conteos
bacterianos en UFC.
48
Tanto en el caso de macerado de larvas/postlarvas, hemolinfa de camarones mayores (anticoagulada o no) o agua de cuerpos de agua en estudio, se deben sembrar 100 mL en un medio slido
para el aislamiento de bacterias (cultivo primario). Esta siembra puede hacerse en agar TCBS (tiosulfato citrato bilis sal sacarosa), el cual es un medio selectivo principalmente para bacterias marinas de
la familia Vibrionaceae (gnero Vibrio), aunque tambin crecen especies bacterianas de los gneros
Pseudomonas, Plesiomonas, Aeromonas, Flavobacterium y enterobacterias, entre otras (Fig. 1.5.3 y
1.5.4). Para cultivos primarios existen medios no selectivos en los cuales crecen bacterias totales (la
mayor parte de las bacterias presentes en agua o en los camarones), tales como TSA (agar tripticasa
soya) y Agar Marino.
Una vez se inoculan los 100 mL de muestra sobre el agar elegido y en condiciones aspticas
(ambiente estril con mecheros y/o en una cmara de lujo laminar [Fig. 1.5.1]), se extiende circularmente mediante el uso de un asa de Drigalski (varilla de vidrio tipo stick de hockey). De esta manera, se obtiene una distribucin homognea del inculo. Seguidamente, se invierte la caja de Petri y se
incuba de esta manera a una temperatura de 30C por 24-48 horas. Para determinar la morfologa de
las bacterias que han crecido, se realiza un extendido de una colonia representativa sobre una lmina
portaobjetos, habindola diluido antes en solucin salina estril hasta obtener un grado de 0.5 en la
escala de McFarland. Luego se deja secar y se colorea con tincin de Gram. Las bacterias del gnero
Vibrio se observarn como bacilos Gram negativos bipolares.
En caso de que haya crecimiento de bacterias, se deben contar las colonias para lo cual
existen mtodos de observacin directa (a trasluz) o utilizando un equipo especial para conteo de
colonias (Fig. 1.5.5). Los valores se dan en UFC; en el caso de larvas o postlarvas ser UFC/g o por
cada X nmero de animales. En el caso de hemolinfa o de agua, el resultado se da en UFC/mL.
Si las bacterias aisladas sugieren ser la causa de una enfermedad en los camarones (bacteriosis), se realizan pruebas de sensibilidad a antibiticos (antibiogramas), para establecer qu productos
antibacterianos comerciales son capaces de eliminar dichas bacterias aisladas. Una vez determinado
el antibitico ms efectivo, se puede realizar una prueba para medir la concentracin mnima inhibitoria (MIC) de dicho antibitico, capaz de matar la mayor parte de las bacterias. El resultado del MIC
ser utilizado como referencia para la medicacin de la poblacin afectada de camarones. Tanto el
antibiograma como el MIC, se deben realizar en medios de cultivo slidos cuyos componentes no interieran con el crecimiento bacteriano, como por ejemplo el agar Meller Hinton. La concentracin
del antibitico que se vaya a utilizar en el alimento para la terapia de los camarones, debe corresponder al resultado del MIC (en ppm), multiplicado por 2, 5 o hasta 10 veces. Esto se hace con el in de
asegurar que los camarones obtengan una concentracin efectiva que sea suiciente.
El tiempo de coagulacin de la hemolinfa, es una herramienta de campo fcil de aplicar y que
pudiera ser indicativo de condiciones de estrs o de infecciones bacterianas, particularmente cuando
hay presencia de clulas bacterianas circulando por la hemolinfa de los camarones (bacteremia). Estudios recientes en Centroamrica con camarones preadultos P. vannamei de cultivo, indicaron que
hay una muy alta correlacin entre tiempos de coagulacin de 25 segundos o ms y la presencia de
bacteremia sembrando hemolinfa en agar TCBS. A su vez, tiempos de coagulacin de 24 segundos o
menos, concordaron con camarones en los que no se present crecimiento bacteriano en la hemolinfa (Cullar-Anjel, no publicado).
Finalmente, se debe tener en cuenta que de acuerdo con la normativa internacional en Sanidad Animal, el Mdico Veterinario es quien decide si se debe medicar o no una poblacin de
camarones en cultivo, donde se sospeche de bacteriosis intra o extracelular. Toda medicacin en un
estanque, debe estar soportada por un documento impreso con el diagnstico (enfermedad bacteriana) y con la prescripcin veterinaria, preferiblemente apoyados por antibiograma y MIC.
49

BACTERIOLOGA
Figura 1.5.1 Cabina de lujo laminar, utilizada durante la siembra de muestras de camarones, agua o sedimento en medios de
cultivo, para evitar la contaminacin con
bacterias presentes en el ambiente. En su parte superior, la cabina posee un sistema que
iltra el aire que ingresa al rea de trabajo.
Estos equipos estn dotados con entradas de
agua, gas y sistemas de vaco, as como luz
blanca y luz ultravioleta.
Figura 1.5.2. Autoclave horizontal utilizado

para esterilizar elementos, materiales y reactivos que se utilizan en bacteriologa. Funciona con alta presin producida por vapor de
agua, lo que eleva la temperatura a 121C,
a la cual se exponen los materiales por 15
minutos.
50

BACTERIOLOGA
Figura 1.5.3. Siembra (inoculacin) de hemolinfa anticoagulada de un camarn P. vannamei en agar TCBS. Se est utilizando un mechero de alcohol cerca del medio de cultivo,
para procurar tener un ambiente estril alrededor de la zona de siembra. El inculo de
100 mL aplicado con una micropipeta graduada volumtricamente, ser esparcido por
todo el medio utilizando una barra metlica
especial para tal in.
Figura 1.5.4 Plato Petri con agar TCBS en el

cual se observa crecimiento de bacterias Sucrosa positiva (colonias amarillas). La muestra pertenece a hemolinfa de un camarn P.
vannamei y fue incubada durante 24 horas a
30C. El amarillo del medio (y no verde que
es el original del agar TCBS) se debe al cambio de pH producido por el uso de la Sucrosa
por parte de las bacterias predominantes.
Figura 1.5.5. Contador de colonias con pantalla digital, utilizado para la cuantiicacin
de las colonias en los platos Petri donde se
presentan crecimientos bacterianos. Cada
colonia procede de una bacteria, la cual
constituye una unidad formadora de colonia
(UFC).
51
1.6
Histologa
Objetivo. La histologa es la rama del saber cientico que se ocupa del estudio de los rasgos morfolgicos de los tejidos, por medio de instrumentos ampliicantes. La histopatologa es entonces la ciencia
que estudia las modiicaciones patolgicas de las clulas y tejidos. En camarones, es una herramienta
de diagnstico que permite identiicar cambios a nivel celular en cortes de tejidos que han sido sometidos a procesos fsicos y tinciones rutinarias o especiales. Esta tcnica permite detectar factores
de mortalidad, bajo crecimiento, alteraciones de comportamiento y otros aspectos durante el cultivo
en laboratorios de larvicultura, incas de engorde e instalaciones de maduracin de reproductores.
Descripcin. La histopatologa permite identiicar en la mayora de los casos, la etiologa de la enfermedad de la poblacin de camarones bajo estudio; se logra generalmente hacer el diagnstico de
todas las enfermedades virales reportadas en camarones (por ejemplo las causadas por IHHNV, TSV,
WSSV, HPV, YHV, BP, IMNV y PvNV), necrosis hepatopancretica (NHP), necrosis aguda del hepatopncreas (EMS/AHPND), bacteriosis crnicas, gregarinas, protozoarios epicomensales, nemtodos,
enteritis hemoctica y necrosis muscular idioptica, entre otras enfermedades. Para esto, se requiere
que las lminas histolgicas sean perfectamente preparadas y examinadas bajo el microscopio por el
ojo de un patlogo entrenado.
La autolisis es un proceso post-mortem que se presenta en los crustceos extremadamente
rpido y que consiste en la ruptura celular, salida de enzimas y componentes celulares, prdida de la
arquitectura de los tejidos y destruccin de los rganos. Por esta razn, los camarones deben morir
por efecto de la inyeccin del ijador y por la inmersin en el mismo, el cual debe ofrecer una rpida
penetracin en los tejidos. El hepatopncreas es el rgano ms susceptible a la autolisis. Durante la
ijacin, la solucin debe penetrar el rgano rpidamente o los cambios post-mortem conducirn a
la prdida de estructuras tisulares, eliminando zonas de tejido importantes para el diagnstico.
Si existe inters en estudiar problemas de morfologa externa en camarones como es el caso
de deformidades en post-larvas o presencia de epibiontes (epicomensales) adheridos a las branquias,
tambin se obtienen buenos resultados si los animales son ijados vivos por inmersin en una solucin de formalina al 10%.
Metodologa. El ijador de Davidson (Humason, 1979) es el ms utilizado y sugerido para los procedimientos de rutina, cuando se van a preparar muestras de camarones para anlisis histopatolgico.
Adems de ofrecer buen nivel de detalle en el ncleo de las clulas, el cido actico del ijador descalciica la cutcula, evitndose as pasos adicionales de descalciicacin del exoesqueleto durante el
proceso histolgico. La preparacin del ijador de Davidson debe realizarse con base en la siguiente
frmula:
Para 1 litro de ijador de Davidson:

Etanol 95%:
Formaldehdo 39%:
cido actico glacial:
Agua (corriente):
330 mL
220 mL
115 mL
335 mL
Para la realizacin de un estudio histolgico en camarones, se requiere de un proceso sistemtico que incluye ijacin, deshidratacin, inclusin en paraina, corte de segmentos ultradelgados
(3 micras de espesor) y tincin. Cada etapa de stas tiene sus propios pasos y tiempos cuya inalidad
52
es preservar el tejido lo ms intacto posible y obtener lminas de ptima calidad, las cuales permitan
nitidez ptica en la organizacin celular de los tejidos, cuando sean estudiados bajo el microscopio.
Fijacin. Corresponde a la preservacin de los tejidos en las mismas condiciones estructurales y
morfolgicas del momento de la muerte del camarn, lo cual como ya se mencion debe ser a causa
de la inyeccin del ijador (Davidson). Los camarones deben ser ijados vivos o moribundos, nunca
muertos y el procedimiento se debe realizar en espacio abierto o utilizando una cabina de extraccin
de gases (Fig. 1.6.2). La ijacin pretende desnaturalizar los componentes proteicos de las clulas.
Durante la ijacin, se debe inyectar abundante ijador de Davidson en el hepatopncreas, resto del
cefalotrax y en el msculo (Fig. 1.6.1). Luego, el camarn se debe sumergir en el mismo ijador
en relacin 1:10 (10 veces el volumen del ijador respecto al de la muestra). En el caso de pls, se
deben sumergir directamente en el ijador. Camarones con ms de 12 g se deben someter a un corte
lateral y longitudinal de la cutcula para facilitar el ingreso del ijador. El tiempo ptimo de ijacin
depende del tamao del camarn, requirindose 12-24 horas para postlarvas y juveniles, 48 horas
para pre-adultos y 72 horas para reproductores. Luego de estos tiempos, el ijador debe ser sustituido
completamente por etanol 70%, el cual deber reemplazarse a los 15 das si los camarones an no
han sido procesados, para evitar la acidiicacin de los rganos y tejidos.
Deshidratacin e inclusin en paraina. Consiste en eliminar la mayor parte del agua tisular y reemplazara con paraina lquida. Se realiza con un equipo automtico y programable llamado procesador de tejidos (Fig. 1.6.3). Durante el proceso, los tejidos pasan por 12 recipientes estando 1 hora
en cada uno, los cuales contienen etanol 70% (2), etanol 80% (2), etanol 95% (2), etanol 100% (2),
aclarante (2) (Xilol o Hemo-De) y inalmente paraina lquida a temperatura controlada (2).
Bloqueo. Terminada la inclusin en paraina, los tejidos son ubicados en moldes (metlicos o plsticos) para formar un bloque el cual al enfriarse se solidiica, conteniendo el tejido en su interior. En la
actualidad, existen unidades de bloqueo (Fig. 1.6.4) que consisten en equipos que manejan simultneamente supericies con varias temperaturas diferentes, las cuales permiten tener paraina lquida,
supericies de trabajo calientes y planchas con escarcha (hielo pulverizado) para el enfriamiento
inal de la paraina al terminar de hacerse el bloque. Los moldes plsticos disponibles para bloqueo,
permiten adems servir como base para el montaje de los tejidos en la unidad de corte (micrtomo).
Corte. Esta es la parte del proceso histolgico en la cual se utiliza un equipo altamente especializado
llamado micrtomo (Fig. 1.6.5), nombre dado debido a que permite realizar cortes de tejido con
un espesor de 1 a 15 micras. Luego de ajustar el grosor deseado en este equipo, se realizan los cortes
mediante giros de una manivela y cada vez que se le da una vuelta, el bloque de paraina avanza la
cantidad de micras programada, hacia una cuchilla con un ilo y calidad especial para histotecnia.
Recuperacin del corte. Las tiras de paraina que contienen el tejido cortado, son puestas sobre un
equipo llamado bao de recuperacin de tejidos (Fig. 1.6.6), el cual contiene agua moderadamente
caliente con temperatura controlada (40-50C aprox.), y puede contener una pequea concentracin
de gelatina neutra. Las tiras se expanden al entrar en contacto con el agua caliente y as se elige la que
presente una estructura ms completa del tejido en cuestin. Separada de los segmentos no deseados
mediante el uso de un pincel delgado, la porcin seleccionada es recuperada con una lmina portaobjetos, en la cual quedar adherida de manera permanente y sobre la cual se har la tincin inal.
Tincin. En camarones, el mtodo de tincin ms frecuente es el de Hematoxilina de Mayer-Bennett
y Floxina/Eosina (H&E). Esta tincin involucra las siguientes soluciones y reactivos: Hemo De, etanol,
agua destilada, hematoxilina, agua corriente, Floxina/Eosina y medio de montaje (Fig. 1.6.7). Una vez
teidas las lminas histolgicas, se sellan utilizando una gota de medio de montaje sobre el tejido y
un cubreobjetos para proteger la muestra permanentemente (Fig. 1.6.8). Los tiempos para cada paso
pueden ser consultados en Lightner, 1996.
53
Los colorantes (o tinciones) son sustancias qumicas complejas, a menudo de comportamiento variable. Pueden ser de uso general para teir tanto ncleo como citoplasma, o ms especicos
respecto a algn componente particular. Son sales neutras con radicales tanto cidos como bsicos.
El colorante es bsico cuando la propiedad de tincin est en el radical bsico y las estructuras que
tie se denominan basilas. Las estructuras basilas son qumicamente cidas; tal es el caso de los
cidos nucleicos del (ADN) y los componentes cidos del citoplasma (ARN). El colorante es cido
cuando la propiedad de tincin est en el radical cido de la sal neutra; tal es el caso del citoplasma
y en este caso las estructuras teidas con colorante cido son llamadas acidilas.
La tincin H&E marca y deine bien el ncleo, el citoplasma y la membrana celular por ainidad de electrones, resultando en la coloracin azul oscuro del ncleo y la pared de las membranas
por efecto de la hematoxilina y, el citoplasma de color rosado por efecto de la eosina. Los tejidos se
tien para aumentar el contraste natural y hacer ms evidentes los diversos componentes celulares,
tisulares y material extrnseco. Adems de ver la clula individualmente, la tincin H&E permite observar en conjunto las clulas de los rganos o tejidos, ofreciendo una buena diferenciacin.
Existen otras tinciones especiales que resaltan ciertas partes de los tejidos u organelos celulares, como el cido peridico de Shiff (PAS) que resalta de rojo magenta el citoplasma de las
clulas que contienen carbohidratos (msculo). Para teir hongos de negro, se utiliza la tincin de
Groccott ya que contienen sales de plata. Aunque las tinciones para hongos suelen tener sales de
plata, tambin se utilizan para detectar bacterias como espiroquetas (Levaditi) y bacilos cido-alcohol
resistentes (Zihel-Neelsen). Otras tinciones para camarones incluyen la de Gram (bacterias), Brown
& Brenn (rickettsias), Steiner & Steiner (espiroquetas y rickettsias), Giemsa (bacterias), Wright (rickettsias), Pinkerton (rickettsias), Kinyoun (bacterias cido-alcohol resistentes), McManusPAS (glicgeno
y hongos), Feulgen (ADN) y Tricromo de Masson (contrastes especiales).
Montaje. El exceso de colorante despus de la tincin se elimina con agua o alcohol y se deshidrata
el corte con alcoholes a concentraciones crecientes, pasando despus de alcohol absoluto a una
solucin de agente aclarante. Posteriormente, se coloca una gota de blsamo de Canad (medio de
montaje) y se cubre con el cubreobjetos dejndose secar. El corte obtenido, generalmente de no ms
de 3 micras de espesor, estar listo para ser observado a travs de un microscopio ptico.
Lectura e interpretacin. Una adecuada interpretacin de un corte observado al microscopio ptico,
depende de factores como el plano del corte, la tincin utilizada y la interpretacin funcional. Respecto al plano, es fundamental reconstruir la estructura tridimensional de clulas, tejidos y rganos a
partir de cortes bidimensionales. La tincin es tambin fundamental ya que debe ser elegida correctamente con base en las estructuras microscpicas que queremos estudiar. En cuanto a la interpretacin
funcional, es importante establecer las correlaciones entre estructura y funcin de lo observado, tratando de transformar mentalmente las condiciones estticas del corte en las dinmicas de la vida (Fig.
1.6.9 al 1.6.11). Es fundamental para una correcta interpretacin de hallazgos histopatolgicos, que
la observacin sea hecha por un ojo entrenado en patologa y, en particular, en los tejidos especicos
de la especie que se va a estudiar. No es suiciente tener lminas preparadas con gran acierto y que
ofrecen excelente calidad ptica bajo el microscopio, si quien las examina no tiene habilidad para
diferenciar tejidos sanos de rganos o tejidos con lesiones (Fig. 1.6.11).
Durante la preparacin de los cortes histolgicos, pueden presentarse alteraciones denominadas artefactos, los cuales deben ser reconocidos y diferenciados de reas conservadas de tejidos.
Generalmente, se deben a errores en el empleo de sustancias en la preparacin del tejido, defectos en
la cuchilla que se traducen en muescas en la preparacin, contaminacin de los colorantes o, errores
de montaje como pliegues.
54

HISTOLOGA
Figura 1.6.1 Fijacin de un camarn P. vannamei. La solucin que se est inyectando al

animal an vivo, es Davidson - AFA. Ntese
el cambio de color del hepatopncreas que
pas de amarillo (normal) a anaranjado, por
efecto del ijador luego de haber sido inyectado. Se observa el uso indispensable de
guantes para la manipulacin de esta solucin ijadora.
Figura 1.6.2 Cabina para extraccin de gases, utilizada para la manipulacin de muestras que han sido ijadas para procesamiento
histolgico. Se observa un vidrio de seguridad en el frente, a travs del cual se pueden
ver las muestras que se manipulan y el cual
protege la cara de salpicaduras de reactivos
irritantes. Tambin cuenta con fuente de agua
para lavado de elementos o partes del cuerpo
en donde haya cado algn reactivo histolgico.
Figura 1.6.3 Procesador de tejidos para histologa. Este equipo cuenta con 10 vasos de 1
L cada uno, donde se hace la deshidratacin
de los tejidos y se incorpora paraina lquida a temperatura controlada (2 vasos con
termostatos, de color blanco ubicados a la
derecha). Cuando esta se enfra, da textura
irme al tejido y permite realizar cortes con el
micrtomo sin que se deformen por el paso
de la cuchilla.
55

HISTOLOGA
Figura 1.6.4 Central de bloqueo. Esta unidad

posee supericies y compartimentos con temperaturas controladas electrnicamente (T1,
T2 y T3) y permite preparar los bloques de
paraina con los tejidos incluidos. Durante
este proceso, el tejido en paraina es ubicado
en un cassette plstico y cubierto con paraina lquida obtenida a travs de un dispositivo
especial (P), para formar un bloque. Este se
solidiica luego de estar por unos minutos sobre una supericie con escarcha que posee el
mismo equipo (E).
Figura 1.6.5 Corte de tejidos en el micrtomo. Se observa un cassette (blanco) con

un corte de cefalotrax (anaranjado) siendo
montado en la base mvil de un micrtomo,
antes de que sean cortadas las secciones a 3
micras de grosor.
56

HISTOLOGA
Figura 1.6.6 Bao de recuperacin de tejidos, en el cual las tiras de paraina con tejido que se han obtenido con el micrtomo,
son puestas en lotacin en agua caliente. La
paraina se expande con el calor y se elige
el mejor corte, capturndolo con una lmina portaobjetos y ubicndolo sobre esta en
la posicin en la cual va a quedar de forma
deinitiva.
Figura 1.6.7 Batera de tincin con hematoxilina y eosina, en la cual se agregan los colorantes a los tejidos para obtener el contraste
entre las diferentes clulas y entre las distintas partes de cada una. En la foto se observan
los reactivos utilizados para la tincin de rutina, donde se puede apreciar la canasta con
lminas siendo inmersa en eosina.
Figura 1.6.8 Lmina portaobjetos con cortes

histolgicos de un camarn juvenil P. vannamei, los cuales han sido teidos con H&E. Se
observa un corte longitudinal de cefalotrax
(C), uno transversal de abdomen (A) y uno
longitudinal de branquias (B).
57

HISTOLOGA
Figura 1.6.9 Corte histolgico de un segmento del corazn de un camarn subadulto P.

vannamei. Se observa la vlvula artica de un
animal sano (lechas), en el lugar donde la
hemolinfa ingresa a la arteria aorta (A). H&E.
Ampliicacin: 100X.
Figura 1.6.10 Corte histolgico de hepatopncreas sano en un camarn subadulto P.

vannamei. Se observan tbulos normales
compuestos por diferentes tipos de clulas y
con un lumen en el centro. No hay evidencia
de lesiones que sugieran presencia de una
enfermedad degenerativa. H&E. Ampliicacin: 200X.
Figura 1.6.11 Corte histolgico del rgano

linfoide de un camarn adulto P. vannamei, con ndulos melanizados a causa de
una bacteriosis sistmica. Los principales
hallazgos histopatolgicos son agregacin
hemoctica localizada en borde superior (inlamacin), melanizacin de varios ndulos
y necrosis en las zonas afectadas. H&E. Ampliicacin: 60X.
58
1.7
Pruebas con anticuerpos
ELISA
Objetivo. La prueba de ELISA (enzyme linked immunosorbant assay) es una prueba rpida de laboratorio, en la cual un anticuerpo conocido se une a un antgeno (viral o bacteriano) presente en una
muestra de camarn, con el in de detectar la presencia o no de dicho agente patgeno en la muestra.
Esta prueba que utiliza anticuerpos para el diagnstico de enfermedades en camarones, se llama en
espaol inmunoanlisis ligado a enzimas o tambin enzimoinmunoanlisis de adsorcin (EIA).
Descripcin. La tcnica de ELISA utiliza anticuerpos especicos para la identiicacin de antgenos
tambin especicos, los cuales son componentes estructurales (usualmente protenas) de agentes
patgenos o, protenas nicas producidas o inducidas por ellos.
Esta prueba provee una estrategia de diagnstico la cual es potencialmente muy rpida (en algunos
casos slo tarda 1 hora), de buena sensibilidad y adaptable a un gran nmero de muestras en un pequeo espacio tanto en laboratorio como en condiciones de campo. La prueba de ELISA puede ser
realizada con base en anticuerpos policlonales o monoclonales.
Metodologa. La prueba de ELISA combina la especiicidad de anticuerpos con la sensibilidad de
pruebas enzimticas simples, usando anticuerpos o antgenos acoplados a una enzima fcilmente
detectable. La ELISA puede proporcionar un sistema til para la medicin de la concentracin de un
antgeno o de un anticuerpo. Hay dos variaciones principales en este mtodo: la ELISA puede usarse
para detectar la presencia de antgenos que son reconocidos por un anticuerpo o para detectar anticuerpos que reconocen un antgeno.
Una prueba de ELISA es un procedimiento que involucra cinco pasos generales: 1) cobertura
de los pozos de la microplaca con el antgeno; 2) bloqueo de todos los sitios no cubiertos por el antgeno, para evitar resultados falsos positivos; 3) adicin de anticuerpos a los pozos de la microplaca; 4)
adicin de anticuerpos conjugados con una enzima; 5) reaccin de un substrato con la enzima para
producir un producto coloreado, indicando as una reaccin positiva. Hay muchos tipos diferentes de
ELISA. Uno de los tipos ms comunes es la ELISA sandwich. La siguiente es la metodologa general
para realizar una prueba de ELISA. Algunos pasos, reactivos y cantidades podrn cambiar segn se
requiera para cada protocolo asociado con un antgeno en particular.
Una microplaca para ELISA se debe cubrir con el antgeno apropiado, llenando los pozos
con 100 mL del antgeno diluido. Se incuba toda la noche a 4C y se lava el antgeno no adherido en
la microplaca mediante golpes suaves. Luego se llenan los pozos con agua destilada y se vacan de
nuevo con un golpe suave; se repite esto 2 veces ms utilizando con PBS-Tritn.
Se debe bloquear la unin no especica agregando 200 mL de BSA/PBS 1% y se incuba luego
por 30-60 minutos a temperatura ambiente. Se lava la microplaca como se mencion anteriormente
y se agregan 100 mL de las muestras diluidas en los respectivos pozos de la microplaca. Hay que
asegurarse de incluir siempre controles positivo y negativo y, si es necesario, una curva estndar. Se
incuba por 1 hora a temperatura ambiente y se repite luego el paso del lavado.
Luego se prepara la dilucin apropiada del segundo paso del anticuerpo conjugado con fosfatasa alcalina o con peroxidasa de rbano (los anticuerpos deben ser titulados para buscar obtener
una dilucin ptima).
Se deben agregar luego 100 mL del anticuerpo del segundo paso a los pozos y se incuba por
1 hora. Hay que repetir nuevamente el paso del lavado. Se prepara la solucin del substrato y se
agregan 100 mL a los pozos, incubando luego a temperatura ambiente por 60 minutos. Finalmente se
agrega la solucin de parada en cantidad suiciente y se leen las microplacas en un lector de ELISA
(Fig. 1.7.1 a 1.7.3).
59
INMUNOCROMATOGRAFA
Es una tcnica de deteccin basada en un inmunoensayo de lujo lateral de un solo paso, en
la cual los resultados se establecen visualmente y sin el uso de ningn tipo de instrumento. El sistema
emplea una prueba con anticuerpos monoclonales para identiicar selectivamente el agente en cuestin, con un alto grado de sensibilidad y de especiicidad. El principio se basa en una prueba de tipo
sndwich, montada en un dispositivo plstico con una membrana. Por el momento, slo existe de
manera comercial para la deteccin del virus del sndrome de la mancha blanca (WSSV). Consiste en
un anticuerpo monoclonal conjugado anti-WSSV marcado con oro coloidal, ubicado sobre una almohadilla en donde se coloca la muestra. La membrana est cubierta con un anticuerpo monoclonal
anti-WSSV diferente en la zona de prueba (T) y con un anticuerpo Inmunoglobulina-G (IgG) en la
zona control (C) (Fig. 1.7.7).
En ausencia de WSSV en la muestra de camarn, el anticuerpo conjugado con oro coloidal se
mueve con la muestra por capilaridad a lo largo de la membrana a travs de la zona de T hasta llegar
a la zona C. En este punto, el anticuerpo conjugado con oro coloidal reacciona con el anticuerpo IgG
para producir una banda de color rosado visible. Cuando se forma slo una banda de color rosado
en la zona C y no hay banda en la zona T, signiica que el resultado es no detectado (negativo, para
efectos de campo).
Cuando el WSSV est presente en la muestra de camarn, el anticuerpo conjugado con oro
coloidal reacciona con el virus WSSV para producir un complejo antgeno-anticuerpo que se mueve
hasta la zona T. En este punto, el complejo reacciona con el anticuerpo monoclonal diferente anti-WSSV para producir una banda de color rosado visible. Un remanente de anticuerpo conjugado
con oro coloidal en estado libre, pasa a travs de la zona T hasta la zona C. En este punto, el anticuerpo reacciona con el anticuerpo IgG para producir una banda de color rosado visible (Fig. 1.7.7).
Cuando la banda de color rosa aparece tanto en la zona T como en la zona C, signiica positivo
(Fig. 1.7.4 a 1.7.7).
60

PRUEBAS CON ANTICUERPOS Y PARMETROS INMUNOLGICOS
(ESPECTROFOTOMETRA)
Figura 1.7.1 Procedimiento de ELISA en microplaca de 96 pozuelos. Se ijan anticuerpos

y se agrega el antgeno complementario. Esta
unin se detecta agregando un segundo anticuerpo contra el mismo antgeno, marcado
con una enzima. Esta, en contacto con un
substrato, produce color cuya intensidad es
proporcional a la cantidad de antgeno presente en la muestra. Foto: Cultek S.L.U.
Figura 1.7.2 Microplacas de ELISA con 96

pozuelos, utilizadas para pruebas con anticuerpos y en mediciones de parmetros inmunolgicos de camarones. Son montadas
en un lector de ELISA para detectar por colorimetra la cantidad existente de un antgeno
de inters. Foto: Cultek S.L.U.
Figura 1.7.3 Lector de microplacas de ELISA

con 96 pozuelos. Colormetro que permite
hacer lecturas de punto inal, funcionando
de manera independiente o conectado a un
computador para registro y anlisis de datos.
Tiene capacidad para almacenar 100 ensayos y 20 microplacas de datos. Foto: Cultek
S.L.U.
61

INMUNOCROMATOGRAFA
Figura 1.7.4 Representacin del principio de

inmunocromatografa, a partir de anticuerpos monoclonales conjugados. Ilustracin
de Mechanizumu. Fuente: FUJIKURA KASEI
CO., LTD.
Figura 1.7.5 Ilustracin del procedimiento

para una prueba de inmunocromatografa a
partir de muestras de camarones. Fuente: FUJIKURA KASEI CO., LTD.
62
Figura 1.7.6 Interpretacin de resultados en una prueba de inmunocromatografa a partir de muestras de camarones. Fuente: FUJIKURA
KASEI CO., LTD.
Figura 1.7.7 Foto de una prueba con un

kit comercial de inmunocromatografa
para la deteccin del virus WSSV en
muestras de camarn, mediante el uso
de anticuerpos monoclonales conjugados. Las marcas de referencia (letras)
corresponden a la siguiente descripcin:
T= oriicio donde se deposita el macerado de tejido de camarn con un buffer
de lisis; M= banda de la muestra que
aparece slo si es positiva al virus WSSV;
C= banda control que siempre debe
aparecer si el kit de deteccin est funcionando bien.
63
1.8
Mtodos moleculares
La hibridacin es una de las principales metodologas que se utiliza actualmente en los laboratorios de biologa molecular. Unas de estas tcnicas se han diseado para identiicar secuencias
especicas en los cidos nucleicos.
La hibridacin se reiere al apareamiento especico que ocurre entre cadenas de cidos nucleicos con secuencias complementarias, proceso que es anlogo a la reaccin antgeno-anticuerpo,
pero con la diferencia de que en la hibridacin en lugar de anticuerpos se emplean sondas genticas.
stas son fragmentos cortos de ADN o ARN sintetizados in vitro y que se marcan con sustancias radiactivas, luorescentes o de otro tipo, a in de hacer posible su posterior deteccin y de esta manera
la identiicacin de la secuencia de ADN o ARN de inters.
En camarones, las principales tcnicas de biologa molecular utilizadas como apoyo para la
deteccin de agentes patgenos en muestras de animales afectados, son: dot blot, hibridacin in situ,
PCR, RT-PCR y PCR en tiempo real (real-time PCR), esta ltima principalmente en investigacin ms
que en diagnstico. De stas, las que presentan mayor sensibilidad y especiicidad son las relacionadas con PCR.
Dot blot
Objetivo. Deteccin de patgenos (ej.: virus) en una muestra de tejido de camarn, mediante el reconocimiento de la presencia de su ADN a travs de un proceso de lisis (ruptura) celular, extraccin
del ADN, hibridacin y revelado.
En camarones existen sondas para detectar virus como WSSV o IHHNV y para detectar bacterias intracelulares como la alfa Proteobacteria causante de la NHP.
Descripcin. El dot blot es una tcnica de hibridacin en la cual el ADN se ubica directamente sobre
una membrana de nylon o de nitrocelulosa. Su nombre se debe a que sobre la membrana donde se
ubican las muestras del ADN extrado, se forman crculos o puntos. Esta tcnica involucra sondas
genticas en su procedimiento, las cuales son pequeos fragmentos de ADN (oligonucletidos), que
son complementarios de regiones que nos interesan en el ADN que se est buscando en una muestra
(ej.: virus). De esta manera, si en una muestra problema se produce la hibridacin entre la sonda y el
ADN viral, se puede concluir que el virus en cuestin se encuentra presente.
Las sondas genticas para camarones son marcadas utilizando molculas como la biotina
o la digoxigenina, las cuales son luego detectadas mediante enzimas como la fosfatasa alcalina,
produciendo una reaccin colorimtrica y de esta manera detectable por el ojo humano. Las sondas
genticas son especicas para un nico tipo de microorganismo.
En la actualidad, es factible conseguir sondas genticas en kits comerciales. Este tipo de prueba es muy til cuando se quiere estudiar un gran nmero de muestras, pero tiene la limitante de no
ofrecer muy alta sensibilidad, adems de que su revelado inal es por colorimetra.
Metodologa. El procedimiento de dot blot en camarones, inicia con una muestra de hemolinfa o de
otro tipo de tejido de un animal sospechoso de una enfermedad (ej.: virus WSSV). Cabe recordar que
se debe utilizar una sonda especica para el tipo particular de microorganismo que se va a buscar.
La muestra es macerada mecnicamente con un tampn (buffer) de lisis, con lo cual se busca
romper las clulas y permitir la salida de las molculas de ADN hacia la solucin del macerado.
Luego, una cantidad de macerado (inferior a una gota) es puesta sobre una membrana de nylon (o de
nitrocelulosa). El ADN es luego desnaturalizado, es decir, se separan las cadenas de la doble hebra
y luego se coloca la sonda previamente calentada. Dicha sonda ha sido modiicada, habindosele
unido una molcula de digoxigenina.
64
Se incuban las muestras con la sonda y si esta encuentra regiones del ADN viral que sean
complementarias (guardando el concepto de complementariedad de los nucletidos A-T y C-G), se
produce anillado o hibridacin (unin entre la sonda y el ADN viral), que es una molcula estable de
ADN hbrida de doble cadena.
Luego de incubar, se realiza un lavado y se agregan anticuerpos anti-digoxigenina, que han
sido previamente marcados con la enzima fosfatasa alcalina. Si la sonda est presente en las muestras, se formar un complejo antgeno-anticuerpo con la digoxigenina. Se hace un ltimo lavado y
se agrega una solucin reveladora (BCIP-NBT), la cual reacciona con la fosfatasa alcalina y produce
una reaccin colorimtrica. La intensidad del color morado que se produce, es proporcional a la
cantidad de microorganismos presentes en la muestra (partculas virales de WSSV en el caso de este
ejemplo) (Fig. 1.8.1).
Hibridacin in situ (HIS)
Objetivo. Este mtodo permite detectar el ADN o ARN problema en el interior de las clulas, permeabilizndolas de tal forma que se permita la entrada de una sonda. Entre las principales aplicaciones
de la HIS, est la deteccin de ARN o ADN de origen viral o, ADN de origen bacteriano, en tejidos
de camarones ijados y procesados mediante inclusin en paraina. Por lo tanto, tambin es til para
realizar estudios retrospectivos en material de archivo ijado e incluido en paraina varios aos atrs.
Los patgenos o enfermedades en camarones que pueden ser detectados en la actividad mediante HIS, son IHHNV, TSV, YHV, WSSV y NHP.
Descripcin. Es un mtodo histoqumico que emplea la biologa molecular, de la misma manera que
la inmunohistoqumica utiliza los mtodos de la inmunologa. Al igual que en el caso de la hibridacin dot blot, la especiicidad de la HIS se basa en la unin recproca de una sonda (secuencia de oligonucletidos), con un fragmento complementario de ARN o ADN dentro de una muestra de tejido.
A diferencia del dot blot, la HIS utiliza como matriz un corte histolgico de un camarn previamente ijado y procesado mediante inclusin en paraina, el cual ha sido adherido (al igual que en
la histologa) sobre una lmina portaobjetos, pero en este caso la lmina debe tener una carga positiva. En vez de realizar el proceso de tincin como en histologa, se realiza la aplicacin de la sonda y
los dems componentes para la deteccin genmica de un agente patgeno especico.
Metodologa. El procedimiento de hibridacin in situ en camarones, se inicia a partir de un bloque
de paraina con una muestra de camarn, igual al que es utilizado para histologa de rutina. El bloque
es ubicado en un micrtomo y se corta una seccin no mayor a 4 micras de espesor, la cual debe ser
recuperada por lotacin en una lmina portaobjetos cargada positivamente.
La lmina con la muestra en paraina debe ser calentada para eliminar la paraina y posteriormente re-hidratada utilizando xilol (o algn substituto), etanol en concentraciones descendentes
(100%, 95%, 80% y 50%), agua destilada y buffer TNE.
La lmina se incuba luego con proteinasa K en una cmara hmeda, se sumerge luego en
formaldehdo y se lava con un buffer. Se aplica entonces la solucin de hibridacin y se incuba en
cmara hmeda. Si el ADN o ARN del patgeno que se est buscando se encuentra presente en la
muestra, en este momento se realiza el anillado o hibridacin que como ya se explic en la tcnica
de dot blot, es una unin entre la sonda y fragmentos del genoma viral o bacteriano, que forma as
una molcula estable.
Para los virus IHHNV, HPV y TSV, la sonda se diluye en la solucin de hibridacin y es puesta
directamente sobre la muestra. En el caso de BP, MVB, WSSV y NHP, se requiere de un calentamiento
previo de la muestra para desnaturalizar el ADN baculoviral de doble cadena (dsDNA). La muestra
65
se debe incubar en cmara hmeda toda la noche; para el caso de IHHNV y HPV a 37C, para BP,
MVB, WSSV, NHP y TSV a 42C.
Posteriormente las muestras deben ser sometidas a varios lavados con buffers distintos y luego
se aplican los anticuerpos anti-digoxigenina conjugados con fosfatasa alcalina. Se incuban y posteriormente se hacen nuevos lavados con soluciones buffer.
Se aplica la solucin de desarrollo y se frena luego la reaccin cuando sea ya necesario de
acuerdo con criterios colorimtricos, lavando con soluciones buffer y despus con agua destilada. Las
muestras se someten luego a tincin con el colorante Bismark Brown Y y se deshidratan posteriormente utilizando etanoles ascendentes (95% y 100%) y xilol (o algn substituto).
Sin dejar secar la muestra en este momento (y en ninguno de los procesos anteriores), se pone
una gota de medio de montaje sobre el tejido y se cubre con una laminilla o lmina cubreobjetos. Se
deja secar y se observa luego en un microscopio de campo oscuro, para detectar depsitos intracelulares de precipitado negro o azul oscuro y/o alguna citopatologa especica que haya sido marcada
por la sonda (Fig. 1.8.2).
La interpretacin de los resultados vara en cada muestra, segn el patgeno que se est buscando y, por consiguiente, las clulas de los tejidos blanco que se espera hayan sido infectados por
el agente viral o bacteriano.
En el caso del virus TSV, debe considerarse que una manipulacin incorrecta antes de la
prueba, puede arrojar resultados falsos negativos. Adicionalmente, las muestras para TSV deben ser
manejadas en ambientes y con reactivos libres de RNAsas; el personal debe ser entrenado en el manejo de muestras con patgenos cuyo genoma es RNA y en este tipo de ambientes libres de RNAsas.
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)
Objetivo. La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en ingls - polymerase chain
reaction), es un mtodo enzimtico de ampliicacin de secuencias especicas de ADN, que permite
la sntesis in vitro de un fragmento de ADN de forma tal que, en cada ciclo del proceso, se duplica el
nmero de molculas. De esta manera, se utiliza para la deteccin genmica de ciertos microorganismos patgenos como virus (ADN y RNA) y bacterias, en muestras de camarones o de organismos
relacionados.
La PCR es utilizada en camarones para la deteccin de los virus WSSV, IHHNV, BP, MBV,
SMV, YHV (grupo), IMNV, TSV y PvNV, as como de las bacterias causantes de las enfermedades NHP
(Hepatobacter penaei) y EMS/AHPND (cepa de Vibrio parahaemolyticus).
Descripcin. El principio de la PCR se basa en determinar la secuencia genmica de inters y utilizar
pequeos segmentos de nucletidos llamados iniciadores o cebadores (primers en Ingls), complementarios con una pequea porcin de la secuencia de nucletidos de los extremos opuestos de las
cadenas que lanquean a dicha secuencia en el genoma de nuestro patgeno de inters, a partir de
los cuales se inicia la elongacin o sntesis de nuevas cadenas en el extremo 3 de cada iniciador.
La PCR se realiza en forma de ciclos. Cada ciclo duplica la cantidad de ADN, por lo que
permite obtener hasta un milln de copias de un solo fragmento en pocas horas. Los elementos necesarios para llevarla a cabo se comercializan en forma de kits.
En esta tcnica se consideran importantes los siguientes parmetros: un suministro abundante
de iniciadores y de desoxinucletidos trifosfatados (dNTPs); una fuente renovada de ADN polimerasa
(enzima encargada de la sntesis de las cadenas complementarias) y los ciclos peridicos de cambios
de temperatura. Estos ltimos consisten en: desnaturalizacin del ADN a 100C, alineamiento de los
66
iniciadores con las secuencias de inters entre 50C y 60C y, sntesis del ADN a 72C. Estas temperaturas pueden variar de acuerdo con las condiciones de la reaccin.
El poder de la ampliicacin con PCR es tan alto que los ms pequeos contaminantes pueden
dar resultados falsos positivos, por lo que el material y las soluciones a emplear deben ser muy cuidadosamente manipulados y almacenados.
Metodologa. La reaccin en cadena de la polimerasa imita el fenmeno de replicacin del ADN
que ocurre de forma natural en las clulas vivas. El ADN es de doble cadena (es decir, cada cadena
de ADN est apareada con otra complementaria). La aplicacin de muchas tcnicas moleculares
para el estudio del genoma (ADN o ARN), depende grandemente de la habilidad para extraer dichos
cidos nuclicos. Siendo la extraccin de ADN ms frecuente que la de ARN, se debe considerar que
la calidad y la pureza de los cidos nucleicos son dos de los elementos ms importantes en ese tipo
de anlisis. Si se desea obtener cidos nucleicos muy puriicados y que no contengan contaminantes
inhibidores de la reaccin de PCR, se deben aplicar mtodos de extraccin adecuados para tal in.
Algunos de los inhibidores ms frecuentes reportados en la literatura, son los siguientes: Dodecilsulfato sdico >0,005%, Fenol >0,2%, Etanol >1%, Isopropanol >1%, Acetato de sodio >5 mM, Cloruro
de sodio >25 mM, EDTA >0,5 mM, Hemoglobina >1 g/mL, Heparina >0,15 UI/mL, Urea >20 mM
y Mezcla de reaccin >15%. Tambin se ha considerado que los ojos de las postlarvas pequeas de
camarn, contienen inhibidores de la PCR, por lo que se recomienda extraerlos mecnicamente antes
de someter dichos organismos a macerado para extraccin de ADN o ARN.
Para extraer los cidos nucleicos del material biolgico, se debe provocar una lisis celular, inactivar las nucleasas celulares y separar los cidos nucleicos de los restos de las clulas. Un acertado
procedimiento de lisis debe ser lo suicientemente fuerte para romper el material inicial complejo
(tejidos, por ejemplo), pero los suicientemente suave como para preservar el cido nucleico que
estamos buscando extraer. Los principales procedimientos de lisis incluyen: a) rotura mecnica (maceracin, lisis hipotnica, b) tratamiento qumico (detergentes, agentes caotrpicos, reduccin con
tioles) y c) digestin enzimtica (Proteinasa K, etc.).
Es posible romper la membrana celular e inactivar las nucleasas intracelulares al mismo tiempo, usando una solucin que contenga detergentes que solubilicen las membranas celulares y sales
caotrpicas fuertes que inactiven las enzimas intracelulares. Luego de la lisis celular y de la inactivacin de las nucleasas, los restos celulares se eliminan fcilmente mediante iltracin o precipitacin.
Para puriicar los cidos nucleicos se suelen aplicar combinaciones de varias de las siguientes
tcnicas:
Extraccin/precipitacin
Cromatografa
Centrifugacin
Separacin por ainidad
Algunas veces se hace extraccin con disolventes para eliminar los contaminantes de los cidos nucleicos. Tal es el caso cuando se usa una combinacin de fenol y cloroformo, con el objetivo
de eliminar las protenas. Para concentrar los cidos nucleicos suele hacerse una precipitacin con
isopropanol o con etanol. Si la cantidad de cido nucleico a extraerse es escasa, puede aadirse a
la mezcla un portador inerte como el glucgeno, lo cual ayudar a favorecer la precipitacin; esta
ltima tambin puede realizarse de manera selectiva, con concentraciones salinas elevadas (precipitacin salina) o con precipitacin de protenas usando cambios de pH.
Teniendo el cido nucleico extrado, se da inicio a la reaccin de PCR. Durante la replicacin,
las dos cadenas se separan y una enzima especializada llamada polimerasa, hace una copia de cada
67
una de las cadenas, utilizando la original como plantilla o modelo. Normalmente este proceso de
copia tiene lugar cuando la clula se divide y da lugar a la formacin de un par de cadenas hijas.
La polimerasa necesita otros tres ingredientes para copiar ADN. El primero es una reserva de
los cuatro bloques bsicos que constituyen la molcula de ADN, llamados nucletidos o bases. El
segundo es una ibra corta de ADN copiado, que se llama cebador oligonucleotdico o primer, el cual
est formado por varios nucletidos que inician la replicacin. El tercero es el cofactor MgCl2, sin el
cual la enzima no puede funcionar. La PCR utiliza estos mismos ingredientes para copiar ADN en un
microtubo de ensayo (Fig. 1.8.3).
La reaccin tiene lugar en tres fases. Durante la primera o desnaturalizacin, la plantilla o
fragmento original de ADN se calienta hasta una temperatura de 90C a 95C durante 30 segundos;
esto provoca la separacin de las dos cadenas. En la segunda fase, llamada anillaje, la temperatura
de la mezcla se baja hasta 55C durante 20 segundos para que los cebadores oligonucleotdicos se
enlacen con el ADN escindido. En la tercera fase o de polimerizacin, la temperatura de la mezcla se
eleva hasta 75C para que la polimerasa copie rpidamente la molcula de ADN.
Estas tres fases tienen lugar en el mismo tubo de reaccin y constituyen un ciclo completo de
PCR, que se realiza en menos de dos minutos (Fig. 1.8.5). Tericamente, el ciclo de PCR se puede
repetir sin lmite, pero la polimerasa, los nucletidos y los cebadores, deben renovarse al cabo de
unos 30 ciclos. Estos 30 ciclos, que duran menos de tres horas, bastan para producir millones de
copias de ADN.
Cuando la muestra contiene un agente patgeno cuyo genoma es ARN, se debe utilizar antes
de la PCR un paso adicional. Consiste en adicionar a la muestra (ARN extrado) una enzima llamada
transcriptasa reversa, la cual transcribe el RNA en ADN complementario (cDNA), molcula que es
un ADN de doble cadena y, por consiguiente, susceptible de ser ampliicada mediante una reaccin
normal de PCR. Este proceso enzimtico que se requiere para los virus ARN, ha hecho que la PCR
que lo utiliza se llame PCR con transcriptasa reversa (RT-PCR).
La polimerasa utilizada actualmente en una PCR tradicional, es termoestable, no se inactiva
por las elevadas temperaturas de la primera reaccin y es llamada Taq, debido a que proviene de
Thermus aquaticus, una bacteria termila. Debido a que la polimerasa Taq no resulta destruida por
las elevadas temperaturas a las que transcurre la PCR, basta con aadirla una vez, al principio de la
reaccin. La polimerasa Taq se fabrica ahora con bacterias modiicadas genticamente.
El uso de la PCR exige mucho cuidado. Lo ms importante es evitar la contaminacin de la
mezcla reactiva. Es tan sensible, que permite multiplicar accidentalmente cantidades mnimas de
ADN contaminante. Se utilizan procedimientos especiales para evitar la contaminacin (Fig. 1.8.3 y
1.8.4).
La electroforesis en gel (de agarosa o de poliacrilamida), es una tcnica que se emplea para
separar los cidos nucleicos luego del proceso de ampliicacin mediante la PCR. La separacin de
las macromolculas depende de dos variables: carga y masa. Cuando una muestra biolgica como
el ADN se mezcla en una solucin tampn y se aplica a un gel, esas dos variables actan conjuntamente. La corriente elctrica de un electrodo repele las molculas, al tiempo que el otro electrodo las
atrae. La fuerza de friccin del material de gel acta como tamiz molecular, separando las molculas en funcin de su tamao (Fig. 1.8.6). Durante la electroforesis, las macromolculas son empujadas
a travs de los poros y su tasa de migracin por el campo elctrico depende de los siguientes factores:
68
Fuerza del campo

Tamao y forma de las molculas
Hidrofobicidad relativa de las muestras
Fuerza inica y temperatura del tampn en que se desplazan las molculas
La velocidad de una molcula cargada en un campo elctrico, depende del gradiente de

potencial, la carga y la fuerza de friccin de la molcula y se conservan a temperatura ambiente.
Existe asimismo una resistencia de friccin que hace ms lento el desplazamiento de las molculas
cargadas, lo cual sucede en funcin de los siguientes factores:
Tamao hidrodinmico de la molcula

Forma de la molcula
Tamao de poro del medio en que tiene lugar la electroforesis
Viscosidad del tampn
El TBE se utilizaba inicialmente a una concentracin de trabajo de 1x en el caso de la electroforesis en gel de agarosa. No obstante, una solucin de trabajo de 0,5x proporciona un poder ms
que suiciente y en la actualidad, prcticamente todas las electroforesis en gel de agarosa se practican
utilizando esta concentracin. Un fragmento de ADN de un tamao determinado migra a diferentes
velocidades a travs de los geles segn la concentracin de agarosa. En funcin de la concentracin
de agarosa o tampn, se pueden separar segmentos de ADN que contengan de 20 a 50.000 pb. En
los geles horizontales, la agarosa se emplea por lo general en concentraciones comprendidas entre
un 0,7 % y un 3 % (Fig. 1.8.6).
La observacin de las bandas luego de la electroforesis, se realiza extendiendo el gel en un
transiluminador de luz ultravioleta (UV), proceso durante el cual se debe reconocer el patrn de
bandas positivas del Control utilizado, para comparar sobre dicha lnea de avance las bandas de las
muestras que se han corrido durante la electroforesis. Se consideran como positivas aquellas en las
que la ubicacin de la banda coincida con la banda del control positivo. De igual manera, se debe
veriicar que el control negativo no haya presentado ninguna banda. Es importante obtener un registro
fotogrico de cada gel de agarosa observado en el transiluminador UV, con el in de conservar evidencia impresa (o digital) de los resultados de cada anlisis por PCR (Fig. 1.8.7 y 1.8.8).
PCR Multiplex
Partiendo de la base que la PCR tradicional utiliza un solo par de iniciadores (primers) para
ampliicar una secuencia especica (un nico patgeno, por ejemplo WSSV), la PCR Mltiplex utiliza
varios y diferentes pares de iniciadores para ampliicar muchas secuencias simultneamente (varios
patgenos a la vez a partir de una misma muestra). La presencia de muchos iniciadores de PCR en
un solo tubo de reaccin, podra tener muchos inconvenientes como el aumento de la formacin de
productos de PCR con errores de cebado, dmeros de iniciadores y la discriminacin de la ampliicacin de fragmentos ms largos de ADN.
Para este tipo de ampliicacin por PCR, se utilizan iniciadores con temperaturas de hibridacin similares. Las longitudes de los productos ampliicados deben ser muy parecidas. Si hay grandes
diferencias entre las longitudes de las molculas de ADN, se favorece la ampliicacin de la molcula
diana ms corta, respecto a la ms larga; esto implica diferencias en el rendimiento de los productos
ampliicados.
De igual manera, los tampones de PCR Multiplex contienen un aditivo de la Taq polimerasa
que reduce la competencia entre los productos de ampliicacin (amplicones) y la discriminacin de
fragmentos ms largos de ADN durante este tipo especial de PCR. Los productos de ampliicacin
pueden seguir hibridndose con una sonda gentica especica con el objeto de hacer una veriicacin conirmativa.
69
PCR en tiempo real (real time PCR, qPCR)
Objetivo. La prueba de PCR en tiempo real se utiliza para determinar la cantidad de ADN en tiempo
real durante el proceso de ampliicacin, usando sondas marcadas luorescentes.
Descripcin. En biologa molecular, la reaccin en cadena de la polimerasa en tiempo real, tambin
es llamada la reaccin en cadena en tiempo real cuantitativa de la polimerasa (QRT-PCR) o reaccin
en cadena cintica de la polimerasa.
La PCR en tiempo real es una tcnica de laboratorio que permite cuantiicar y ampliicar
simultneamente una parte especica de una molcula dada de ADN o ARN. Se utiliza para determinar si una secuencia especica est o no presente en una muestra; si est presente, la tcnica permite
conocer el nmero de copias en la muestra. Es la versin en tiempo real de la reaccin en cadena
cuantitativa de la polimerasa (qPCR), as como una modiicacin de la tradicional reaccin en cadena
de la polimerasa.
Para llevar a cabo la deteccin en tiempo real de un genoma de inters, existen varios mtodos
pero casi todos basados en la utilizacin de otro fragmento de ADN (sonda) complementario a una
parte interna del ADN que queremos ampliicar. Esta sonda lleva adherida una molcula luorescente
y otra molcula que inhibe esta luorescencia (quencher), de tal forma que slo cuando la sonda es
desplazada de su sitio por accin de la ADN polimerasa, la molcula luorescente se libera de la accin del quencher y emite luorescencia al ser iluminada con un lser. La cuantiicacin de la luorescencia emitida durante cada ciclo de la PCR, ser proporcional a la cantidad de ADN que se est
ampliicando. En general, para que sea vlida esta tcnica, requiere realizar en paralelo una curva
patrn en las mismas condiciones, para conocer la cantidad total de ADN que se est ampliicando.
Las diferentes formas de deteccin de la PCR en tiempo real como TaqMan o Molecular Beacon, se han vuelto herramientas populares para la deteccin de agentes infecciosos. Estas nuevas
pruebas tienen varias ventajas sobre las PCR clsicas (un paso) o anidadas (2 pasos). Slo es utilizado
un par de iniciadores (primers), los cuales proporcionan con frecuencia una sensibilidad similar o
igual a la de PCR anidada, pero con un mucho menor riesgo de contaminacin. La luorescencia que
indica la presencia del producto ampliicado, es medida en el mismo tubo de reaccin, por lo que
no es necesaria la manipulacin post-PCR de los productos ampliicados. La lectura de la luorescencia es automatizada, por lo que se evitan resultados subjetivos. Estos procedimientos consumen
una cantidad de tiempo considerablemente menor comparados con la PCR tradicional, ya que no
es necesario detectar el fragmento ampliicado mediante electroforesis en geles de agarosa, seguidos
por la tincin con bromuro de etidio y, de nuevo, el riesgo de contaminacin es reducido. El uso de
un formato de bandeja con 96 pozuelos sin necesidad de hacer una PCR anidada, permite que el
procedimiento sea automatizado.
Metodologa. Los equipos requeridos para realizar una PCR en tiempo real, son de forma combinada
un termociclador, un luormetro y un monitor. El termociclador efecta la PCR en muestras que contienen luorocromo luorescente proporcional a la cantidad de DNA, cantidad que dobla de ciclo en
ciclo. Un rayo lser excitador es transmitido a la muestra por una ibra ptica. La emisin luorescente
inducida es enviada al luormetro que la analiza a diferentes longitudes de onda. A menudo, la misma ibra transmite el rayo excitador y recibe la luorescencia. El monitor indica, despus de cada ciclo, la luorescencia leda dentro de la longitud de onda elegida para la muestra (Fig. 1.8.9 y 1.8.10).
A partir de este momento, la seal dobla de ciclo en ciclo. Se observar aparecer en el computador una curva creciente, ya que la luorescencia de cada tubo es medida en cada ciclo. El nmero
de ciclos a partir del cual la curva comienza a crecer, es proporcional a la concentracin inicial de
ADN (Fig. 1.8.11).
70
PCR isotrmica (LAMP)

El mtodo de PCR isotrmica (LAMP por sus siglas en ingls - Loop-mediated isothermal ampliication), consiste en una reaccin en cadena de la polimerasa a una temperatura constante y
con similares resultados a los de una PCR tradicional realizada en un termociclador. El proceso
est basado en el principio de sntesis de ADN por desplazamiento de cadena, que se lleva a cabo
por una polimerasa con alta actividad de desplazamiento de cadena y un sistema de dos cebadores
(primers) internos y dos cebadores externos, para reconocer 6 secuencias distintas del ADN blanco.
Este mtodo que fue publicado por Notomi y colaboradores en 2000, ha sido revisado y ajustado frecuentemente desde entonces, para mejorar la posibilidad de deteccin molecular de virus, bacterias,
hongos y protozoarios. En la actualidad, existen kits de PCR LAMP comerciales para la deteccin de
patgenos virales y bacterianos comunes en camarones penaeidos de cultivo.
Descripcin de los principios del mtodo LAMP. En los pasos iniciales de la reaccin, son utilizados
los cuatro cebadores y al completarse un ciclo, slo se usan los cebadores internos para la sntesis del
ADN; los internos se llaman Forward Inner Primer (FIP) y Backward Inner Primer (BIP), respectivamente y cada uno contiene dos secuencias distintas que corresponden a las secuencias sentido y
antisentido del ADN blanco, uno para cebar en la primera etapa y el otro para auto-cebarse en etapas
posteriores. Las secuencias en ambos extremos de la regin blanco para la ampliicacin en un ADN
se conocen como F2c y B2, respectivamente. Dos secuencias internas son designadas F1c y B1 y dos
secuencias externas a los extremos de F2c y B2 son llamadas F3c y B3. Una muestra de ADN que
contiene la secuencia blanco y los cuatro cebadores, se desnaturaliza con calor y rpidamente se
enfra en hielo. La reaccin de LAMP se inicia despus por la adicin de un fragmento considerable
de ADN polimerasa Bst (Bacillus stearothermophylus) y se eleva a 65C por 1 hora.
El cebador interno FIP se une a F2c en el ADN blanco e inicia la sntesis de la hebra complementaria. El cebador externo F3, se une lentamente a F3c en el ADN blanco e inicia la sntesis
de ADN por desplazamiento de la hebra. Al liberar una cadena complementaria unida a FIP, puede
formar una estructura enrollada en bucle en un extremo. Esta hebra sencilla de ADN se usa como
molde para la sntesis de ADN iniciada por BIP y la subsiguiente sntesis de ADN por desplazamiento
de la hebra a partir del cebador B3, comenzando as la produccin de un ADN en forma de doble
asa. Este es convertido a una forma de bucle en tallo por la sntesis de ADN del autocebador. Esta
forma sirve de inicio para los ciclos de la segunda etapa de la reaccin de LAMP.
Los ciclos de LAMP, comienzan con la unin de FIP a la estructura en herradura de ADN,
inicindose de esta manera la sntesis por desplazamiento de la hebra. Esto produce una separacin
intermedia en la estructura en herradura de ADN con una copia invertida adicional de la secuencia
blanco en la base y un asa o bucle formada en el extremo opuesto a travs de la secuencia BIP. Posteriormente, la sntesis de ADN por desplazamiento de la hebra, produce una estructura complementaria a la herradura de ADN original y un ADN en herradura reparado con una base elongada dos
veces y un bucle en el extremo opuesto. Los dos productos son entonces utilizados como molde para
un cebador BIP en los ciclos posteriores de la reaccin por desplazamiento de la hebra. De stos,
una parte se llama elongacin y la otra reciclaje. De esta manera, la secuencia original de LAMP
es ampliicada tres veces cada medio ciclo. El uso de cuatro cebadores al inicio del LAMP y de dos
cebadores durante los siguientes pasos, asegura un proceso de ampliicacin con alta especiicidad.
La deteccin del producto de ampliicacin se puede hacer de manera visual por turbidez, visual por luorescencia, visual por sustancias que se integran al producto, en tiempo real por turbidez
y por electroforesis. Como ventajas del mtodo LAMP, tenemos que: a) no requiere reactivos especiales, b) no se utilizan equipos soisticados y de manejo complicado, c) no requiere sistemas complejos
para el control de la temperatura y d) el molde puede ser detectado fcilmente mediante la presencia
del producto ampliicado (Fig. 1.8.12 a 1.8.14).
71

PRUEBAS MOLECULARES - DOT BLOT
Figura 1.8.1 Resultados de una prueba de

dot blot para WSSV sobre una membrana de
nitrocelulosa. Cada cuadro pequeo (1 cm2)
corresponde a un camarn. La intensidad de
la mancha morada en cada cuadro, es proporcional a la cantidad de ADN viral presente en las clulas analizadas de cada camarn.
En esta membrana se pueden observar muestras con severidad baja (crculo amarillo),
media (crculo azul) y alta (crculo rojo). En
la parte inferior (centro) se observan los resultados del control con 3 cuadros, siendo de
izquierda a derecha negativo (ausencia de
color), positivo leve (una +, color morado
tenue) y positivo ms fuerte (dos ++ y color
morado ms intenso).
PRUEBAS MOLECULARES - HIBRIDACIN IN SITU
Figura 1.8.2 Corte de tejido de epitelio cuticular de estmago de un camarn juvenil

P. vannamei infectado con el virus WSSV. La
sonda reaccion fuertemente con el ADN
viral presente en los cuerpos de inclusin
intranucleares, mediante la prueba de hibridacin in situ utilizando una sonda de ADN
marcada con digoxigenina. La coloracin
obtenida es producto de la reaccin entre la
sonda marcada y Bismark Brown. Ampliicacin: 1000X (modiicada de Lightner, 1996).
72

PRUEBAS MOLECULARES - PCR
Figura 1.8.3 Procedimiento de extraccin de

ADN, mediante la utilizacin de un kit comercial con base en soluciones de lisis celular. Ntese el uso de puntas de micropipeta
protegidas con un iltro (blanco) en su base,
para evitar la contaminacin de la micropipeta y el paso de ADN viral de una muestra a
otra (contaminacin cruzada).
Figura 1.8.4 Cmara de trabajo para PCR.

Dentro de ella, circula aire ultrailtrado y se
utiliza para la preparacin de los reactivos
que se utilizarn en las pruebas de ampliicacin (PCR). Los elementos que se utilizan
dentro de la cmara, no deben salir de la
misma y deben estar marcados segn sean
utilizados en diferentes tipos de muestras o
para diferentes tipos de agentes patgenos.
73

Figura 1.8.5 Termociclador (aparato de

PCR) con 96 pozos para igual nmero de
tubos de 0.2 mL. En este equipo se realiza
propiamente la PCR dentro de los tubos que
contengan el ADN de la muestra y los reactivos de ampliicacin. Su funcin es realizar
mediante un comando computarizado programable, muchos ciclos a diferentes temperaturas y con diferentes tiempos.
Figura 1.8.6 Cmara de electroforesis (izquierda) y fuente de poder (derecha), que

permiten la migracin del ADN ampliicado en un gel de agarosa y mediante un lujo
elctrico continuo. Despus de este proceso,
las muestras migradas en el gel, estn listas
para ser observadas en un transiluminador
UV.
74

Figura 1.8.7 Transiluminador de luz ultravioleta utilizado para revelar la presencia de

bandas de ADN, producto de la ampliicacin por PCR y que migraron en una cmara de electroforesis. La tapa que se observa
color prpura, posee un iltro que protege al
operario de la luz uv. Ntese el uso de guantes por parte del operario, mientras manipula el gel de agarosa para ser puesto sobre el
transiluminador.
Figura 1.8.8 Gel de agarosa con productos

de ampliicacin de ADN obtenidos mediante PCR, vistos a travs de un transiluminador
de luz ultravioleta. La columna de la izquierda posee un marcador de peso molecular; las
columnas siguientes (1 a 5) poseen muestras
que fueron ampliicadas. Las bandas blancas que se observan en stas, corresponden
a resultados positivos en la bsqueda de un
agente patgeno de una muestra mediante
PCR.
75

PRUEBAS MOLECULARES - PCR EN TIEMPO REAL
Figura 1.8.9 Equipo utilizado para realizar

PCR en tiempo real (qPCR), lo cual incluye
un mdulo trmico o equipo de qPCR (termociclador) y un computador para el procesamiento y anlisis de los datos suministrados
por los el equipo. En el monitor se realiza la
visualizacin de los resultados que se van
obteniendo en cada ciclo y en tiempo real.
Figura 1.8.10 Termociclador utilizado para

la prueba de PCR en tiempo real. Se observa
un panel de control con comandos (botones)
verdes y azules para la programacin del
equipo, as como una pequea pantalla para
visualizar la informacin correspondiente a
la programacin y al avance de los ciclos de
ampliicacin y cuantiicacin.
Figura 1.8.11 Visualizacin de una grica

con datos de productos ampliicados durante
una prueba de PCR en tiempo real. Cada lnea de color corresponde a una muestra analizada y al control utilizado.
76

PRUEBAS MOLECULARES - LAMP
Figura 1.8.12 Resultados de ampliicacin

mediante PCR LAMP. Los dos microtubos de
la izquierda (A) son visualizados mediante
turbidez siendo positivo el izquierdo y negativo el derecho. La deteccin en los dos de la
derecha (B) es mediante la adicin de SYBR
Green y uso de luorescencia. Foto: PubMed
Central (PMC), U.S. National Library of Medicine. URL: http://openi.nlm.nih.gov/
Figura 1.8.13 Comparacin de la sensibilidad

entre la prueba de PCR LAMP (A) y la tcnica
de PCR convencional (B), utilizando gDNA de
una lnea transgnica de caa de azcar. (A) Productos del LAMP detectados mediante 1000X
SYBR Green I. (B) Deteccin de los productos
del LAMP mediante electroforesis en gel de agarosa teido con Bromuro de Etidio. (C) Productos
de la PCR detectados mediante electroforesis en
gel de agarosa teido con Bromuro de Etidio. En
el mtodo (A) y en el (B), las muestras 3, 4, 5 y 6
fueron positivas; en el mtodo (C) slo las 3 y 4,
siendo la 5 positiva muy leve. Las muestras 1, 2,
7 y 8 fueron negativas con los 3 mtodos. Foto:
Scientiic Reports. URL: www.nature.com.
Figura 1.8.14 Equipos y materiales utilizados por el sistema

comercial IQ PlusTM AHPNS/EMS Kit para la deteccin
de la bacteria causante de la
enfermedad HPND/EMS en
camarones, mediante la prueba de PCR LAMP. Foto: Shrimp
News International. URL:
www.shrimpnews.com.
77
1.9
Parmetros inmunolgicos
Este tema ser tratado con mayor profundidad en el punto 3 (parmetros hemato-inmunolgicos como indicadores de salud) del Captulo Inmunologa (Margherita Barracco et al.). Por esta
razn, slo se har en ste captulo una mencin general de las principales tcnicas inmunolgicas,
como herramientas para el diagnstico de enfermedades en camarones.
La medicin de algunos parmetros inmunolgicos en los camarones, permite evaluar y determinar en un momento dado, las condiciones sanitarias de un grupo de animales o de una poblacin
en un sistema comercial de cultivo. Estos parmetros estn relacionados con la capacidad de respuesta inmune de los organismos, frente a la invasin de agentes bioagresores (virus, bacterias y hongos),
o elementos inertes que entran en contacto con los animales.
Los principales parmetros inmunes de los camarones que se pueden medir en la hemolinfa,
son los siguientes:
Hemograma: los hemocitos constituyen la barrera celular del sistema inmune, que deiende al camarn de agresores que ingresan al organismo para causar infeccin celular y posteriormente enfermedad. El hemograma consiste en realizar un conteo total o diferencial de los hemocitos en la hemolinfa,
para establecer una relacin entre los valores obtenidos y las condiciones de salud de los camarones
examinados (o de sus poblaciones de origen). Para realizar un hemograma, se extrae hemolinfa con
un anticoagulante protector de hemocitos (por ejemplo solucin de Alsever (AS) o SSS) conteniendo
una concentracin de NaCl apropiada para animales marinos (de 330 a 450 mM NaCl), o simplemente una solucin de citrato de sodio o de EDTA) y se monta sobre una cmara de Neubauer para
realizar el conteo (Fig. 1.9.1 a 1.9.5). El valor inal debe incluir los clculos correspondientes a la
dilucin con el anticoagulante y la profundidad y rea de la cmara utilizada. Los resultados se dan
en hemocitos (totales, granulares, semigranulares o hialinos) por cada mm3 de hemolinfa. Los valores
promedio de hemocitos totales/mm3 ms frecuentes en camarones preadultos sanos, se encuentran
entre 25.000 y 35.000. Como se mencionar ms adelante, deben tenerse en cuenta las condiciones
propias del camarn (muda, sexo y edad) y del medio de cultivo (temperatura, salinidad y oxgeno
disuelto, entre otras), ya que stas afectan los valores obtenidos en los conteos de hemocitos.
Concentracin de protenas plasmticas: este parmetro es utilizado para evaluar el estado sanitario
de los camarones. Sin embargo, entre el 60 y el 97% de las protenas plasmticas totales est compuesto por hemocianina (pigmento extracelular que transporta el oxgeno a los tejidos del camarn).
Por esta razn, cambios importantes en la concentracin de la hemocianina, afectan directamente
los valores obtenidos para protenas plasmticas. Adicionalmente, la concentracin de las protenas
plasmticas puede verse inluenciada por condiciones de tipo infeccioso, ambiental o isiolgico.
Cuando el camarn est infectado, puede haber una lisis celular y destruccin de sus tejidos afectados, lo que genera un aumento en la concentracin proteica de la hemolinfa. Todo lo anterior sugiere
que deben realizarse estudios ms profundos, para poder utilizar este parmetro inmunolgico como
un verdadero criterio para conocer el estado sanitario de los camarones. Para determinar las protenas
plasmticas totales en una muestra de hemolinfa de camarn, se pueden utilizar mtodos de rutina
como el de Lowry, Biuret o Bradford.
De manera general, el nivel de protenas plasmticas totales en camarones se determina a
partir de muestras de suero. Luego de extraer la hemolinfa, se deja coagular a 4C por al menos 12
horas y luego se centrifuga para recuperar el suero. Se agrega un volumen de suero a una microplaca
y se hace reaccionar con el reactivo del mtodo utilizado. De esta manera se obtiene la formacin de
un complejo coloreado el cual es medido con un lector de microplacas utilizando un iltro con una
longitud de onda determinada para cada mtodo (ej.: 546 nm para Biuret). Finalmente, se extrapola
78
la concentracin de protenas totales en el plasma de la muestra, a partir de una curva de calibracin

con una solucin stock de BSA estndar (1mg/mL).
Capacidad de hemoaglutinacin: con este mtodo es posible determinar las condiciones sanitarias
de los camarones, mediante la medicin de la capacidad de las protenas de reconocimiento de
patrones (PRPs) (especialmente las de reconocimiento de lipopolisacridos), presentes de manera
natural en la hemolinfa. Sus funciones incluyen reconocer y aglutinar cuerpos invasores. Por comodidad, se usan en los ensayos eritrocitos de diferentes mamferos, por ser clulas extraas al camarn
y, sobretodo, por ser clulas con coloracin natural, facilitando as la observacin a simple vista de
la reaccin. El estudio de estas protenas y sus mecanismos de reconocimiento, comienza a ser una
herramienta muy potente para las estrategias de seleccin de animales genticamente resistentes a
enfermedades. La actividad hemoaglutinante de la hemolinfa, podra constituirse en un indicador de
salud y de adaptacin del camarn, ya que por ejemplo existe una relacin directa entre los ttulos
de hemoaglutinacin y la calidad reproductiva de los machos (ndice de espermatognesis). Igualmente, la sensibilidad de la actividad hemoaglutinante ante el estrs, demuestra que los ttulos de
hemoaglutinacin pueden ser usados tanto como indicadores sanitarios, como de adaptacin de los
animales a sus condiciones de vida. La prueba de hemoaglutinacin se realiza utilizando eritrocitos
humanos o de otros mamferos (principalmente de roedores que son particularmente reconocidos por
las aglutininas de camarn) en microplacas de 96 pozuelos con fondo en forma de U y en presencia
de suero. Se determina as visualmente la presencia de aglutinacin y el ttulo aglutinante. Cuanto
mayor es el ttulo, mayor ser la cantidad de PRP en la hemolinfa del camarn.
Actividad de la fenoloxidasa: la enzima fenoloxidasa (PO por sus siglas en Ingls), se encuentra
coninada en el interior de los hemocitos del camarn y juega un papel crucial en la cascada inmunolgica que se activa cuando es reconocida una substancia como cuerpo extrao (antgeno). La PO
se encuentra en forma de enzima inactiva (zimgeno) llamada profenoloxidasa (proPO). En condiciones de infeccin, esta enzima inactiva es exocitada de los hemocitos hacia el plasma del camarn
y es convertida en PO mediante el efecto de la Enzima Activadora de la proPO (AEproPO), la cual
es una serin-proteasa. Las reacciones que culminan con la transformacin de proPO en PO y con
la subsecuente melanizacin, son consideradas como un componente que integra los mecanismos
de reconocimiento y de defensa de los crustceos. En pruebas hechas in vitro, se ha observado que
el paso de proPO a PO se produce incubando la muestra con Tripsina (serin-proteasa comercial). La
actividad total de la PO se mide utilizando L-DOPA como sustrato. La determinacin de la actividad
de la PO, permite tener una idea de la capacidad de respuesta inmune de un camarn, frente a la
presencia de agentes patgenos en el organismo. Para su medicin, se parte de la reaccin en la que
se utiliza suero de los camarones o un lisado de sus hemocitos, que son la fuente de la enzima PO y
se incuba con la L-DOPA y tripsina (activador de proPO). En presencia de oxgeno, se forma un compuesto colorido (rojo-coral) que presenta su mxima absorbancia a 490 nm y puede ser detectada
espectrofotomtricamente con un lector de microplacas.
Actividad antibacteriana de los hemocitos por la produccin de intermediarios reactivos de oxgeno
(fagocitosis): en condiciones normales, las clulas fagocticas de los camarones se encuentran en
estado inactivo. La presencia de partculas extraas sobre la supericie de estas clulas, cambia de
inmediato su situacin pasando a un incremento en la actividad metablica; esta se llama choque respiratorio o metabolismo oxidativo. La transicin celular de un estado inactivo a uno activo, involucra
cambios caractersticos como incremento en el consumo de oxgeno por la enzima NADPH oxidasa,
que se encuentra en la supericie celular y tambin en las membranas de vacuolas intracelulares
(lisosomas). En este proceso que se inicia con la activacin de la NADPH oxidasa, ocurre la produccin de muchos reactivos intermediarios de oxgeno altamente txicos como el anin superxido,
perxido de hidrgeno y oxgeno singlete (singlet oxygen).
79
Estos productos resultantes del choque respiratorio, estn relacionados con la actividad antimicrobiana en el camarn y con la destruccin de los agentes infectantes.
La produccin del anin superxido puede ser medida a partir de una muestra de hemolinfa,
mediante la estimulacin de los hemocitos y la capacidad de este anin para reducir el nitro blue tetrazolium (NBT). Esta reaccin produce un depsito de color azul que se puede cuantiicar utilizando
un lector de microplacas, con un iltro que tenga una longitud de onda de 620 nm.
Actividad antibacteriana del plasma: existen en la hemolinfa del camarn diferentes pptidos con
efectos antimicrobianos. Entre mayor sea la concentracin y tipo distinto de stos en un camarn
cuando se presenta el ataque de bioagresores, mayores sern las posibilidades de defensa y, por ende,
de supervivencia. La prueba de la actividad antibacteriana del plasma permite medir la inhibicin del
crecimiento bacteriano, por la accin de pptidos que poseen propiedades microbicidas y que estn
presentes en la hemolinfa de los camarones.
Con base en lo anterior, medir la actividad antibacteriana del plasma/suero de camarones, permite estimar la capacidad de respuesta frente a una eventual infeccin por bacterias. Para realizar la
evaluacin, se deben tener cultivos de cepas bacterianas Gram positivas y negativas en pozos de una
microplaca y se hacen diluciones seriadas del plasma/suero de camarones frente a estas bacterias.
Se analiza la inhibicin del crecimiento bacteriano causada por el plasma diluido seriadamente y se
calcula luego el ttulo de inhibicin. La medicin se hace por medio de un mtodo turbidimtrico,
cuyo principio est basado en la determinacin espectrofotmetrica de la turbidez causada por las
suspensiones bacterianas; si la turbidez de la muestra de bacterias disminuye en presencia de plasma,
sugiere destruccin bacteriana por presencia de los pptidos antibacterianos. La cuantiicacin se
realiza mediante comparacin espectrofotomtrica del cultivo control (sin plasma/suero) y del cultivo
con la muestra de plasma/suero, utilizando un lector de microplacas.
Cuantiicacin de la 2 Macroglobulina plasmtica: en invertebrados, se ha sugerido que esta enzima
regula la activacin del sistema de la proPO, inhibiendo a la Enzima Activadora de la proPO (EAproPO), razn por la cual se le considera mediador del sistema inmune. Los inhibidores de las proteasas
no slo participan en las acciones de proteccin contra microorganismos patgenos, sino que tambin juegan un papel importante en otros procesos de defensa como la coagulacin. La cuantiicacin de la 2Macroglobulina plasmtica, se realiza basndose en que reacciona con las proteasas sin
bloquearles el sitio activo, siendo as protegidas las proteasas e impidiendo el acceso de substratos
(protenas) grandes. Sin embargo, pptidos pequeos como BAPNA, s pueden ser degradados por las
proteasas que han sido atrapadas. Esta degradacin produce un compuesto de color amarillo, el cual
puede medirse con un lector de microplacas usando un iltro con una longitud de onda de 415 nm.
Cuantiicacin de BGBP en hemolinfa: La presencia de compuestos microbianos en el sistema inmune puede activar directamente las funciones celulares de defensa tales como fagocitosis, melanizacin, encapsulacin y coagulacin; las protenas reconocedoras presentes en el plasma, amplan
ese estmulo. La puriicacin de los componentes del sistema proPO de crustceos, ha permitido
demostrar la presencia de dos protenas directamente relacionadas con la comunicacin celular entre hemocitos. Una de ellas es la protena de unin al -1,3-Glucano (BGBP del ingls -1,3-Glucan
Binding Protein) presente en el plasma. La BGBP es una PRP tal como las aglutininas, capaz de reconocer componentes de la pared de los hongos. La BGBP fue identiicada en el plasma del camarn
Penaeus californiensis por Vargas-Albores et al. (1996). Esta protena reacciona con los -glucanos y el
complejo glucano BGBP induce a la degranulacin y activacin del sistema proPO. La otra molcula
es la protena de unin a los lipopolisacridos de la pared de bacterias Gram negativas (LBP del ingls
Lipopolysaccharide Binding Protein), la cual es una PRP que reconoce LPS.
La protena LBP ha sido descrita como aglutinina y se ha probado su capacidad para aglutinar
bacterias. Una vez reacciona con el LPS o con bacterias, la protena se une a los hemocitos y estimula
80
la fagocitosis. La BGBP y la LBP estimulan las funciones celulares solamente despus de reaccionar
con los -glucanos y con los LPS, respectivamente. La cuantiicacin de estas PRPs plasmticas del
camarn, se realiza con el mtodo de la inhibicin de ELISA, el cual permite eliminar las reacciones
inespecicas observadas entre los inmuno-reactantes y la hemolinfa.
Los anticuerpos contra BGBP reaccionan de manera especica con sus respectivos antgenos.
Con base en esto, la prueba para su deteccin consiste en inmovilizar antgeno (dichas protenas) en
una microplaca de poliestireno, agregando luego los anticuerpos e incubando para que stos reaccionen. Despus se usa un sustrato revelador para detectar y cuantiicar las PRPs. Si se ha presentado
unin antgeno-anticuerpo, la aplicacin del sustrato en presencia del anticuerpo producir una reaccin colorimtrica medible mediante espectrofotometra, utilizando un lector de microplacas con
una longitud de onda apropiada segn el mtodo.
Concentracin de hemocianina en la hemolinfa: la hemocianina es una protena presente en la
hemolinfa de los camarones, responsable del transporte de por lo menos el 90% del oxgeno hacia
los rganos y tejidos. Esta protena tambin participa en las actividades inmunolgicas del camarn,
ya que los hemocitos pueden convertir porciones de la hemocianina en una enzima similar a la fenoloxidasa. Adicionalmente, posee homologa con varias protenas del sistema inmune. Es posible
que estmulos antignicos desencadenen reacciones donde la hemocianina genera varias molculas
inmunorreactivas. La medicin de esta protena a partir de muestras de hemolinfa, permite estimar
las condiciones isiolgicas del camarn y, en parte, de su capacidad de respuesta inmune. La cuantiicacin de la hemocianina se puede realizar a travs de mtodos de espectrofotometra, utilizando
un lector de microplacas.
Concentracin de xido ntrico sintasa: una nueva prueba reportada en 2006 por Hernndez et al.,
hace referencia a la medicin de xido ntrico sintasa (NOS) como criterio para medir la actividad de
los hemocitos dentro de las acciones de defensa de un camarn. El xido ntrico (NO) es el producto
de la oxidacin del aminocido L-arginina a L-citrulina mediado por la NOS. Este gas transmisor de
seales producido por una clula, penetra a travs de la membrana celular y regula la funcin de
otras clulas. El NO es altamente inestable transformndose rpidamente en nitritos (NO2) y nitratos
(NO3). El NO es extremadamente txico y por lo tanto altamente microbicida. Su produccin por
los hemocitos le otorga un papel de gran importancia en el control de infecciones. El NO puede ser
analizado por quimioluminescencia, aunque debe ser liberado de la muestra y la recuperacin no
siempre es adecuada. Un mtodo para detectar y cuantiicar NO, se basa en la transformacin del
NO a NO2 y NO3. Para medir la concentracin total de nitratos y nitritos (NOx), se pueden usar dos
mtodos: la reduccin qumica con cadmio o la reduccin enzimtica utilizando nitrato reductasa.
Otra forma de detectar la presencia de NOS en muestras biolgicas, es utilizando anticuerpos
contra la protena. Para ello se utilizan anticuerpos de conejo anti-iNOS (NOS inducible presente en
los hemocitos), los cuales reconocen la NOS de camarn, pudindose as ser utilizados para implementar un mtodo indirecto de ELISA. Se han probado diferentes diluciones de anti-NOS y combinaciones de conjugado anti-conejo, habiendo sido las mejores 1:1000 y 1:40000, respectivamente.
Consideraciones generales sobre parmetros inmunolgicos
La interpretacin de resultados obtenidos con todas las pruebas mencionadas anteriormente,
debe hacerse considerando factores que interieren directamente sobre cada uno de los parmetros
inmunes. En los camarones, estn principalmente la edad, sexo, estado de muda, estrs (ambiental,
nutricional o sptico) y condiciones sanitarias (presencia o ausencia de enfermedad); en el agua de
cultivo est principalmente la temperatura, salinidad, pH, oxgeno disuelto y presencia de substancias
txicas (de origen qumico o biolgico).
81

PRUEBAS MOLECULARES - HEMOGRAMA
Figura 1.9.1 Elementos para el montaje de hemolinfa cuando se hace conteo de hemocitos. De
izquierda a derecha se observa una caja con puntas de micropipeta (20-200 mL), micropipeta con
volumen graduable (20-200 mL), microtubos de
1.5 mL con tapa y contador de clulas.
Figura 1.9.2 Puncin para la extraccin de

hemolinfa del seno hemolinftico ventral,
ubicado en la unin entre el cefalotrax y
el abdomen, ventralmente. Ntese el uso de
una jeringa desechable de 1 mL (tipo insulina), la cual contiene una solucin anticoagulante.
Figura 1.9.3 Montaje de 20 mL de hemolinfa

anticoagulada en una cmara de Neubauer (hematocitmetro). Debido a que esta cmara posee
dos campos de conteo, se pueden montar muestras de 2 animales diferentes al mismo tiempo.
82

PRUEBAS MOLECULARES - HEMOGRAMA
Figura 1.9.4 Observacin de hemolinfa anticoagulada en cmara de Neubauer, utilizando un microscopio de contraste de fases y el
objetivo de 40X.
Figura 1.9.5 Hemocitos de un camarn preadulto P. vannamei observados en cmara de

Neubauer, utilizando microscopio de contraste de fases y objetivo de 40X. Se pueden
observar encerradas en cuadros amarillos, 3
clulas caractersticas de los tipos diferentes
de hemocitos que hay reportados: granulares
(G), semigranulares (S) y hialinos (H). Sin tincin. Ampliicacin: 400X.
83
1.10
Microscopa electrnica de transmisin
Objetivo. La microscopa electrnica de transmisin (TEM) en camarones, tiene el propsito de

acceder a lesiones microscpicas en tejidos afectados, con el in de detectar la presencia o ausencia
de agentes infecciosos muy pequeos. Su uso est indicado en la bsqueda de agentes patgenos o
lesiones dentro de las clulas de tejidos afectados.
Descripcin. La TEM es una herramienta poderosa en el diagnstico de virus especicos, rickettsias,
bacterias intracelulares y otros muy pequeos microorganismos que estn asociados y que causan
lesiones particulares en las clulas (Fig. 1.10.1). En las preparaciones para TEM, el patlogo examina
las estructuras internas de las clulas y los organelos celulares, en busca de anormalidades. Una
ijacin o almacenamiento inadecuado de muestras para TEM, puede ocasionar grandes artefactos o
cambios en las clulas estudiadas, con lo cual se afecta la calidad de la bsqueda y la obtencin de
resultados concluyentes. Por esta razn, la preparacin, seccionamiento, tincin e interpretacin de
material mediante TEM, es una actividad altamente especializada y debe ser realizada por personal
bien entrenado (Fig. 1.10.2).
Metodologa. Durante el proceso de preparacin del ijador as como durante los eventos de ijacin
y de muestras y su manipulacin, siempre deben usarse guantes y gafas protectoras. Para preparar
una solucin ijadora de trabajo aproximadamente al 6%, se utilizan 10 mL de glutaraldehdo 50%
grado microscopa electrnica (EM), los cuales se aaden a 76 mL de buffer fosfato 0.15M. Esta solucin se debe almacenar a 4C y se debe utilizar dentro de los siguientes 90 das posteriores a la
preparacin. Luego de este tiempo, la solucin ijadora que no se ha utilizado an, se debe descartar.
Se deben agregar sal y sucrosa a la solucin, para ajustarla a la osmolaridad similar a la de los camarones (700 a 800 mmol/kg).
Las soluciones de glutaraldehdo comercial generalmente vienen en concentraciones de 25%,
50% y 70%. La de 25% es grado histolgico y por eso es la ms utilizada para TEM en camarones,
consiguindose en botellas mbar de 500 mL. Las concentraciones 50% y 70% se consiguen en
ampollas de 5 mL.
La siguiente tabla adaptada de Lightner (1996), sugiere las cantidades de glutaraldehdo y buffer a utilizar, partiendo de las 3 concentraciones comerciales disponibles de glutaraldehdo y segn
la concentracin inal de la solucin ijadora que se quiera preparar:
Actividad ijadora en %
Volumen stock (mL) / Buffer requerido (mL)
Glutaraldehdo
stock
% activo
Actividad por ampolla
1%
4%
6%
25%
n/a
4 / 96
16 / 84
24 / 76
50%
2.5 g/5 mL
5 / 245
5 / 57.5
5 / 42
70%
3.5 g/5 mL
5 / 345
5 / 82.5
5 / 53.5
Al igual que en muestras que se preparan para diagnstico histopatolgico, la preservacin de

los tejidos debe hacerse de manera rpida y a temperatura baja, para evitar cambios en las muestras
a causa de la degeneracin. En el caso de larvas o postlarvas, stas deben ser ijadas mediante inmersin directa en la solucin ijadora de glutaraldehdo al 6%, excediendo una relacin de ijador-tejido
de 10:1. Las muestras deben permanecer ijadas al menos por 24 horas antes de ser procesadas para
TEM.
84
En juveniles y camarones inferiores a 6 g, se debe inyectar ijador en diferentes partes cubriendo el hepatopncreas, regin del estmago, regin del intestino medio y msculo abdominal. Con
tijeras de diseccin y por debajo de la cutcula (sin atravesar tejido blando), se debe hacer un corte
longitudinal por la lnea media a los dos lados, para asegurar una adecuada penetracin del ijador.
Los tejidos de camarn se deben preservar mediante la inyeccin de solucin ijadora de glutaraldehdo al 6% en animales vivos, la cual se debe tener a una temperatura de 4C. No se deben
ijar camarones muertos y los camarones vivos deben morir por el efecto del ijador en el momento
de su inyeccin.
En camarones de ms de 6 g, se deben extraer los rganos o tejidos de inters, debindolos
cortar rpidamente con una cuchilla y mantenindolos inmersos en la solucin ijadora de glutaraldehdo 6% fra. Los cortes deben ser en trozos de pocos milmetros de espesor (mximo 1 x 2 mm).
Los camarones o sus partes para TEM, deben ser ijados sin exceder un volumen de tejido mayor a
1 cm3. Los trozos deben ser luego transferidos a frascos rotulados y que contengan solucin ijadora
fra, buscando una relacin de ijador-tejido de 10:1. Estos trozos ijados deben mantenerse por 24 a
48 horas antes de ser procesados para TEM. Luego, se debe eliminar la solucin ijadora de glutaraldehdo 6% y debe ser reemplazada por buffer fosfato 0.15M. Esta nueva ijacin de tejidos se debe
mantener a 4C.
Los procedimientos posteriores pueden realizarse siguiendo los protocolos estndar para TEM.
Las muestras de tejido de camarn pueden ser guardadas por varias semanas en una solucin de glutaraldehdo 6% con buffer fosfato, a temperatura de refrigerador. Se deben preparar nuevas soluciones
de ijador y de buffer fosfato cada tres meses. Si se requiere mantener muestras de camarones ijadas
por tiempo indeinido, se pueden preservar a 4C en soluciones de glutaraldehdo de 0.5% a 1%.
85

MICROSCOPA ELECTRNICA DE TRANSMISIN (TEM)
Figura 1.10.1 Microscopio Electrnico de Transmisin (HITACHI 8100-TEM). Gobernado por

un Microprocesador y funciona con emisin
termoinica entre 75KV y 200 KV. Permite observaciones de 50X hasta 600.000X, con alta capacidad de resolucin. Permite gran inclinacin
del espcimen (+/- 45 grados) de pieza polar.
Permite experimentos de calentamiento in situ
con una etapa de calentamiento que llega hasta 900 grados. Posee un sistema crio-TEM con
un crio-sujetador hasta -170 grados. Su sistema
visual posee una cmara CCD tasa TV Gatan de
alta calidad para imgenes de hasta 0.5 nm de
resolucin y la difraccin tiene gran inclinacin
con soporte doble. Las principales aplicaciones
son: organizacin de clulas y tejidos, estudio de
organelos celulares, estudio de especializacin
morfologa de virus, estudios de micropartculas
y nanopartculas y, estructura interna de lminas
delgadas.
Figura 1.10.2 Microfotografa de un corte de

tejido de Penaeus monodon infectado con el virus YHV. Se observan inclusiones citoplsmicas
de virus YHV envueltos de manera organizada.
Tambin se observan (aunque menos fcilmente) inclusiones virales muy delgadas parecidas a
ibras con forma de bastn, de nucleocpsides
sin envoltura del virus YHV cerca de la membrana. Ampliacin: ~50.000X. Foto: Lightner, 1996
(Cortesa de T.W. Flegel, Bangkok, Tailandia).
86
1.11
Bioensayos
Objetivo. Determinar si el agente causal de una enfermedad es de origen infeccioso (virus, bacterias,
hongos, etc.), txico (toxinas qumicas o biolgicas) o, descartando lo anterior, de origen ambiental
o por manejo. Tambin se utilizan los bioensayos para evaluar la patogenicidad de una cepa viral o
bacteriana inyectada o suministrada va oral a camarones libres de dichos agentes patgenos.
Descripcin. Los bioensayos son estudios realizados con seres vivos, camarones en este caso, durante los cuales se busca reproducir una enfermedad detectada en camarones de una poblacin determinada, utilizando como organismos blanco camarones sanos y susceptibles a dicha enfermedad.
stos pueden ser libres de patgenos especicos (SPF por su sigla en ingls) o simplemente libres
de la enfermedad que se pretende reproducir.
La susceptibilidad de los camarones que se utilizan en los bioensayos, hacen referencia a
la especie y talla de los animales. La manera de buscar su eventual infeccin es utilizando batido
(macerado) de camarones enfermos y los cuales presentaban manifestaciones de la enfermedad (sacriicados en fase aguda). La aparicin de la enfermedad en los camarones susceptibles utilizados
en un bioensayo, deber corresponder al tiempo estimado de aparicin de los signos clnicos en los
camarones que se enferman en condiciones naturales.
Metodologa. Los bioensayos son pruebas de desafo, en las cuales se utiliza tejido infectante para
realizar de manera experimental, una infeccin per os (va oral) en camarones susceptibles. El material infectante debe provenir de camarones vivos (enfermos avanzados o moribundos), que hayan
presentado los mismos signos clnicos de la enfermedad en cuestin y procedentes de una misma
poblacin (edad y talla similar). La capacidad infectante de este batido de tejido de camarones enfermos, depende de la carga viral o bacteriana que tenga (cantidad de microorganismos por gramo
de aquellos que causan la enfermedad) y de la cantidad de tejido que se suministre a los camarones
blanco. Si existen pruebas moleculares disponibles para el agente etiolgico del estudio, se puede
establecer de manera semi-cuantitativa (PCR con diluciones seriadas del ADN extrado) o cuantitativa
(PCR en tiempo real), la carga del patgeno presente en cada gramo de tejido infectante.
Los camarones que van a ser infectados experimentalmente per os, deben estar libres de la
enfermedad que se pretende reproducir. Para ello, deben proceder de una poblacin libre de patgenos conocidos, SPF si es posible y que no hayan presentado o estn presentando signos clnicos
de ninguna enfermedad (completamente sanos). Si existen herramientas moleculares de diagnstico
para la enfermedad en cuestin, se debe someter a prueba un grupo de camarones procedentes de
la poblacin de donde se utilizarn los animales blanco para el estudio. stos, deben ser negativos
(no detectado) al patgeno del cual es objeto el bioensayo.
Cuando el objetivo del bioensayo incluye trabajar con un patgeno desconocido y para el cual
no existen en el momento pruebas de diagnstico moleculares, los camarones blanco deben ser
SPF para que los resultados de la prueba sean concluyentes.
Los bioensayos deben realizarse en instalaciones cerradas, con condiciones controladas y con
parmetros fsico-qumicos estables (Fig. 1.11.1 a 1.11.3). Los principales factores que deben mantenerse bajo control durante un bioensayo, son los siguientes:
Calidad del agua: iltrada, recambio constante o frecuente, uso de bioiltros, condiciones bacteriolgicas apropiadas
Temperatura: del agua y del aire de la sala de bioensayos
Luminosidad
Oxgeno disuelto
87
pH
Salinidad
Metabolitos potencialmente txicos: nitritos, nitratos, amonio y fsforo
Materia orgnica: sedimentada y como partculas en suspensin
Unidades experimentales (UE): acuarios, tinas o tanques (tamao, forma, transparencia)
Densidad experimental: camarones por L, sin exceder 2.8 g/L de biomasa
Material de las UE: plstico, vidrio, acrlico, ibra de vidrio, concreto, etc.
Volumen de las UE: capacidad de operacin
Cercana a zonas con condiciones trmicas o lumnicas intensas (ventanas, calentadores,

congeladores o tragaluces)
Fuente del agua de recambio: reservorio de tierra, tanque sin o con iltracin, recirculacin, etc.
Antes de realizar un bioensayo, debe tenerse un plan de trabajo bien deinido, con el protocolo de operacin claramente comprendido por la o las personas que participarn en la prueba y
deiniendo los momentos para cada fase del estudio, tales como fecha de inicio, fecha de infeccin,
pruebas conirmatorias de diagnstico para la enfermedad en estudio, criterios de decisin para establecer las conclusiones inales y fecha (o condiciones particulares) para dar por terminada la prueba
(ej.: luego de 2 das en los que se haya estabilizado la mortalidad).
Las canidades de camarones de cada UE deben ser conocidas el da de la infeccin experimental,
ya que este valor ser el 100% de la poblacin de parida. Con base en estos datos, se podr establecer al
inalizar la prueba, la supervivencia en porcentaje. Los datos de mortalidad diaria deben ser observados con
rigurosidad y registrados en un formato diseado para tal in. stos permiirn conocer la tasa de mortalidad diaria y el momento de mayor mortalidad de la prueba, entre otra informacin de inters.

BIOENSAYOS
Figura 1.11.1 Vista de una sala de bioensayos,

en la cual se utilizan tanques de vidrio con capacidad para 30 L. En las partes superior e inferior
de los tanques, se observa la tubera de aire a
travs de la cual se conectan las mangueras de
aireacin para cada uno. Los tanques de arriba
estn con agua y tienen mangueras de aireacin
y piedras difusoras en sus extremos (dentro de
cada tanque).
88

BIOENSAYOS
Figura 1.11.2 Revisin de parmetros fsico-qumicos en un tanque de vidrio durante

la realizacin de un bioensayo. Se observa
dentro del tanque el electrodo del equipo,
con el cual se obtienen datos de temperatura, salinidad y oxgeno disuelto.
Figura 1.11.3 Alimentacin dosiicada de

camarones P. vannamei durante la realizacin de un bioensayo. Ntese la presencia
de una cubierta de malla que est siendo
levantada para la alimentacin y la cual
evita prdida de camarones por saltos hacia
el exterior del tanque o hacia otros tanques
vecinos.
89
Recomendacin general
Es importante hacer una eliminacin adecuada de todos los productos de desecho procedentes de pruebas de diagnstico, as como de camarones que han sido utilizados para extraccin de
muestras o para bioensayos. Esto, para evitar la contaminacin de entornos acuticos comerciales o
silvestres y del propio ambiente.
Apndice
Mtodos para la deteccin de los principales agentes virales en camarones penaeidos
(modiicado de Lightner y Pantoja, 2001. En: USDA-UCA, 2001).
Mtodo
WSSV
IHHNV
BP
MBV
BMN
SMV
YHV*
TSV
IMNV
PvNV
Directa BF / LM /
PH / DF
++
+++
+++
++
++
Histopatologa
++
++
++
++
++
++
+++
+++
++
++
Bioensayos
++
++
TEM / SEM
++
ELISA CON PAb

/ MAb
++
Sondas ADN /
DBH / ISH
+++
+++
++
++
++
+++
+++
+++
PCR / RT-PCR
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
*Grupo YHV. La informacin sobre los virus IMNV y PvNV, fue suministrada por el Dr. Carlos Pantoja de la Universidad de
Arizona, USA (2008).
Deiniciones de aplicacin de los mtodos para cada virus
mtodo desconocido o cuya aplicacin no est publicada
mtodo cuya aplicacin es conocida o est publicada, pero no frecuentemente

practicada o difcilmente disponible
++
mtodo cuya aplicacin provee suiciente exactitud de diagnstico o sensibilidad

en la deteccin de patgenos para la mayora de las aplicaciones
+++
mtodo que provee un alto grado de sensibilidad en la deteccin de patgenos
90
Abreviaturas para los mtodos

BF
= microscopa de luz de campo brillante para el anlisis de improntas de tejidos, montajes

hmedos o montajes enteros teidos.
LM
= microscopa de luz
PH
= microscopa con contraste de fases
DF
= microscopa de campo oscuro
EM
= microscopa electrnica de secciones o de virus puriicados o semipuriicados
ELISA = prueba de enzimas marcadas inmunoabsorbentes

PAb
= anticuerpos policlonales
MAb
= anticuerpos monoclonales
DBH
= hibridacin mancha-punto (dot blot)
ISH
= hibridacin in situ
Mtodos para vigilancia y diagnstico de patgenos virales en camarones penaeidos (modiicado de Lightner y Pantoja, 2001. En: USDA-UCA, 2001).
Agente
Vigilancia
Diagnstico
TSV
RT-PCR
RT-PCR, sondas de ADN, AB, histopatologa
WSSV
PCR, AB
YHV
RT-PCR
BMN
Histopatologa
BP/MBV
PCR, microscopa directa, histopatologa
IHHNV
PCR, sondas de AND
SMV
Sondas de ADN
IMNV
RT-PCR, sondas de ADN
PvNV
RT-PCR, sondas de ADN
PCR, sondas de ADN, AB, histopatologa,

bioensayos
RT-PCR, sondas de ADN, AB, histopatologa,
bioensayos
Microscopa directa, histopatologa
PCR, microscopa directa, histopatologa
PCR, sondas de ADN, histopatologa
Sondas de ADN, histopatologa, bioensayos
RT-PCR, sondas de ADN, histopatologa
RT-PCR, sondas de ADN, histopatologa
La informacin sobre los virus IMNV y PvNV, fue suministrada por el Dr. Carlos Pantoja de la Universidad de Arizona, USA (2008).
91
1.12
Referencias bibliogricas
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96
Captulo 2
Enfermedades virales del
camarn
98
CAPTULO 2 - Enfermedades virales del camarn
CAPTULO 2
Enfermedades virales del camarn
Carlos R. Pantoja y Donald V. Lightner

Aquaculture Pathology Laboratory
1117 E. Lowell St.
Tucson, Arizona 85721 USA
Introduccin
En poco menos de 40 aos, la camaronicultura mundial se ha desarrollado desde sus inicios a
nivel experimental, hasta volverse una industria con ingresos de billones de dlares, proveyendo de
empleo, directa e indirectamente, a cientos de miles de personas.
En los aos de 1970 a 1990, la industria dependa completamente de la captura de postlarva
silvestre o de postlarva producida a partir de reproductores capturados en el ocano. La mayora de
las veces, estos animales eran capturados cerca de la regin en donde seran cultivados. Los sistemas
de cultivo eran relativamente simples, se usaban tasas muy altas de recambio de agua y las medidas
de bioseguridad eran mnimas o no existentes. En esa poca se saba de muy poco de las enfermedades del camarn y todava menos sobre los mecanismos de defensa humoral y celular especialmente
contra agentes virales. Haba muy pocos especialistas en enfermedades de camarn y la capacidad
de diagnstico era muy pequea en la mayora de las regiones. El uso de antibiticos y agentes qumicos era prctica comn, tanto en los laboratorios de produccin de postlarvas como en las granjas.
No fue sino hasta 1987, cuando el aumento explosivo de la industria camaroncola fue acompaado
de pandemias virales, que rpidamente se puso de maniiesto que las enfermedades ocasionadas por
virus eran una de las mayores amenazas para la industria. Tambin, rpidamente se puso en evidencia
que la dispersin de esas enfermedades, fue el resultado del traslado sin control tanto de postlarvas
como de reproductores.
La industria camaroncola del presente ha sido transformada por la necesidad de un mejor
control de las enfermedades. Como resultado de los cambios rpidos que comenzaron a principios
de los 90s, la dependencia de la industria sobre el suministro de postlarva silvestre, o de postlarva
derivada de reproductores silvestres, ha disminuido bastante. Desde hace algunos aos hasta la fecha, poblaciones domesticadas de Penaeus vannamei (tambin llamado Litopenaeus vannamei) han
reemplazado a P. monodon como la principal especie cultivada y se encuentran ya en progreso
varios programas para la domesticacin de otras especies. Se han descrito ya muchas enfermedades
importantes y aunque se han desarrollado mtodos para su diagnstico, existen todava algunos problemas relativos a su implementacin y estandarizacin. Las medidas de bioseguridad aplicadas a los
sistemas intensivos de cultivo se vuelven ms comunes cada da. El uso de probiticos se ha vuelto
tambin comn tanto en los laboratorios de produccin de postlarva como en granjas y se investigan ya medidas soisticadas de control biolgico. Como resultado de esto, el uso de antibiticos ha
disminuido y se ha vuelto ms responsable. Estudios de biologa molecular estn ayudando a lograr
un mejor entendimiento de la relacin entre el camarn y los agentes patgenos que lo atacan. El
resultado de todos estos avances ha sido un incremento continuo de la produccin mundial de camarn cultivado.
99
En el futuro, se espera que la industria camaroncola mundial tenga fcil acceso a una variedad de especies de camarn domesticadas, genticamente mejoradas y libres de los patgenos ms
importantes. Mtodos para el diagnstico de estas enfermedades, tanto en el laboratorio como en
el campo, estarn disponibles en el mercado en forma de kits y se mejorarn los mecanismos para
su estandarizacin. De la misma manera, se espera una mejora en los mtodos de bioseguridad, los
cuales sern aplicados en todos los tipos de sistemas de cultivo, aunque aquellos con mayor control
(sistemas intensivos y sper-intensivos) sern ms competitivos que los sistemas ms tradicionales y
extensivos. En general, la eiciencia en la produccin y el desarrollo de mtodos intensivos de cultivo
se vern facilitados a travs del mejor entendimiento del camarn, sus patgenos, la ecologa microbiana, y el uso de agentes antibacterianos y antivirales ambientalmente seguros.
2.1
Principales enfermedades y mtodos de diagnstico.
Las enfermedades que afectan a los camarones de cultivo incluyen sndromes con etiologas
infecciosas y no infecciosas (Tabla 1 y Tabla 2). Dentro de las enfermedades infecciosas de importancia econmica estn aquellas ocasionadas por virus, bacterias, (incluyendo rickettsias), hongos,
protozoarios y parsitos metazoarios. Existen tambin un nmero de enfermedades no infecciosas de
importancia para la industria y dentro de ellas, estn incluidas aquellas ocasionadas por extremos
ambientales, desbalances nutricionales, agentes txicos y desordenes genticos.
Procedimientos de diagnstico para la deteccin de agentes patgenos especicos.
En el caso del camarn, se cuenta con herramientas o procedimientos de diagnstico de dos
tipos.
Mtodos clsicos. Dependiendo del tipo de enfermedad, estos mtodos pueden ser lo suicientemente especicos y/o sensitivos para alcanzar un diagnstico deinitivo.
Historial del caso
Apariencia externa y signos clnicos
Examen directo al microscopio
Microbiologa (aislamiento y cultivo)
Histologa y pruebas histoqumicas
Microscopa electrnica
Mtodos moleculares. Cuando los mtodos clsicos no son lo suicientemente especicos

y/o sensitivos, es necesario complementarlos con uno o ms de los siguientes mtodos moleculares.
100
Pruebas serolgicas con anticuerpos monoclonales o policlonales
Anticuerpos luorescentes (AF)
ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
Sondas genticas (con agente localizador radioactivo o no radioactivo)
Hibridaciones tipo dot blot (en membrana de nylon)
Hibridaciones tipo in situ (en cortes histolgicos)
Ampliicacin de cidos nucleicos (ADN o ARN) por medio de la reaccin en cadena de la

polimerasa (PCR, por sus siglas en ingls)
Tabla 1. Enfermedades de mayor importancia en la camaronicultura del Indo-Pacico y

Este asitico
Enfermedades de origen viral
Enfermedades de origen
bacteriano/fngico
Otras enfermedades
WSSV (White spot syndrome virus

disease)
YHV (Yellow head virus disease)
BMN (Baculoviral midgut gland
necrosis virus disease)
MBV (Monodon baculovirus
disease)
IHHNV (Infectious hypodermal
and hematopoietic necrosis virus
disease)
Vibriosis
- sistmica/entrica (incluyendo
Sndome de mortalidad
temprana o EMS)
- vibriosis larvaria
Epicomensales
- Leucothrix mucor
- Protozoarios
peritrichidos
Rickettsia
Gregarnidos
HPV (Hepatopancreatic parvovirus

disease)
IMNV (Infectious myonecrosis virus
Micosis larvaria
disease)
Desbalances nutricionales
Fusariosis
Sndromes txicos
Microsporidios
Sndromes ambientales
Fuente: Adaptado a partir de: Lightner D.V. 1996. A handbook of shrimp pathology and diagnostic procedures for diseases of
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Tabla 2. Enfermedades de mayor importancia en la camaronicultura de las Amricas

Enfermedades de origen viral
WSSV (White spot syndrome virus
disease)
TSV (Taura syndrome virus disease)
BP (Baculovirus penaei disease)
YHV (Yellow head virus disease)
IHHNV (Infectious hypodermal
and hematopoietic necrosis virus
disease)
HPV (Hepatopancreatic parvovirus
disease)
Enfermedades de origen
bacteriano/fngico
Vibriosis
- sistmica/entrica (incluyendo
Sndome de mortalidad
temprana o EMS)
- vibriosis larvaria
NHP (Necrotizing
hepatopancreatitis disease)
Otras enfermedades
Epicomensales
- Leucothrix mucor
- Protozoarios
peritrichidos
Gregarnidos
Espiroplasmosis (?)
IMNV (Infectious myonecrosis virus

Micosis larvaria
disease)
Desbalances nutricionales
PvNV (Penaeus vannamei nodavirus

Fusariosis
disease)
Sndromes txicos
Microsporidios
Sndromes ambientales
Sndrome de Zoea II
Fuente: Adaptado a partir de: Lightner D.V. 1996. A handbook of shrimp pathology and diagnostic procedures for diseases of
101
Muestreo
Muestreo aleatorio
Cuando se requiera muestrear al azar a una poblacin para determinar el estado de salud o
la presencia de algn patgeno, el nmero de camarones que ser necesario colectar va a depender
de la prevalencia estimada de dicho patgeno y del nivel estadstico de conianza deseado. En este
aspecto, la Tabla de Seleccin de tamao de muestras tomada de Lightner 1996, es usada con frecuencia como una gua para determinar el tamao muestral. (ver Tabla 2 en Captulo 1, pgina 32 y
ver captulo 7 de Vigilancia epidemiolgica del Dr. Ignacio de Blas).
Muestreo no aleatorio
En situaciones en las que los camarones presentan claramente signos externos de la enfermedad, se deben seleccionar por lo menos 5-10 camarones que muestren signos caractersticos de la
enfermedad de la que se sospecha o bien alguna otra anormalidad.
Para asegurar un diagnstico acertado, las muestras deben de ser procesadas de inmediato, o a
la brevedad posible, de acuerdo al procedimiento o procedimientos que se hayan seleccionado. Los
especmenes debern ser preservados con solucin ijadora adecuada o bien empacados en hielo o
congelados dentro de un contenedor estril (por ejemplo, bolsas de plstico).
Preparacin de las muestras
Al momento de tomar las muestras, tambin es necesario recabar cierta informacin y entregarla al laboratorio que examinar los especmenes. Esto con el objeto de facilitar un diagnstico
acertado, as como tambin para documentar apropiadamente la epizootiologa de la enfermedad,
la distribucin geogrica y las especies de camarn afectadas. La informacin recabada debe incluir
por lo menos lo siguiente:
Historial del caso. Una explicacin breve del porqu se estn enviando las muestras.
Esto deber de incluir una descripcin de las anormalidades observadas tales como mortandades, crecimiento lento, comportamiento anormal de nado o de alimentacin, lesiones externas,
cambios de coloracin en el exoesqueleto, etc. Si no hay problemas aparentes y las muestras se
estn colectando para hacer una evaluacin de rutina, esto tambin se debera mencionar.
Especie. Especie (o especies) de camarn de que se trata
Estado de vida. en el caso de muestras de larvas
Origen de cada grupo de muestras. Esto se reiere al pas de origen, nombre de la granja o laboratorio, nmero de tanque o estanque, etc.
Fecha. en que la muestra fue colectada y ijada
Fijacin. Mtodo de ijacin o el nombre de la solucin ijadora (por ejemplo, Davidson, alcohol
etlico al 90-95%, glutaraldehdo, formalina al 10%, congelado, etc.)
102
Preparacin de muestras para anlisis histolgico

Las muestras que sern destinadas para un anlisis histolgico debern ser de camarones
vivos. Los camarones ya muertos son inservibles. Los camarones debern ser ijados por medio de
inyeccin y/o inmersin cuando an se encuentren vivos.
Muestras de larvas o postlarvas tempranas. Fijar por inmersin en un volumen de solucin ijadora aproximadamente 10 veces la del volumen de la muestra (proporcin de 10:1). En cuanto el
tamao del animal lo permita, el cefalotrax de las postlarvas deber ser pinchado con una aguja
de jeringa de insulina para facilitar la penetracin del ijador. Posteriormente ijar por inmersin
por un lapso de 12 a 24 horas.
Grados de severidad
Una forma de documentar de manera semicuantitativa las observaciones que servirn para
alcanzar un diagnstico, es a travs de la asignacin de grados de severidad. Dicha asignacin puede
referirse a una lesin en particular o al proceso infeccioso en general. Ver referencia de la Tabla 6 del
Captulo 1, pgina 46 (Lightner, 1996), donde se ilustra el criterio que se utiliza para la asignacin de
los grados de severidad. El valor numrico asignado tambin es til para determinar tendencias y para
la toma de decisiones de manejo tales como: cundo aplicar un tratamiento, cundo cosechar, etc.
2.2
Virus de la necrosis hipodrmica y hematopoytica infecciosa (Infectious hypodermic and
hematopietic necrosis virus, IHHNV).
Nuevo mtodo de PCR para ayudar a diferenciar entre IHHNV infeccioso y no infeccioso en
P. monodon. Mtodos moleculares (PCR) recomendados por OIE.
Nombre de la enfermedad
Necrosis hipodrmica y hematopoytica infecciosa (enfermedad IHHN); sndrome de la deformidad y enanismo (runt deformity syndrome o RDS).
Nombre del agente etiolgico
Virus de la necrosis hipodrmica y hematopoytica infecciosa (IHHNV).
Caractersticas del agente
IHHNV es un pequeo parvovirus (dimetro promedio de 22 nm) constituido por una cadena
sencilla de ADN (monocatenario).
Mtodos preferidos actualmente para la deteccin del patgeno
PCR usando hemolinfa o tejidos homogenizados tomados a partir de camarones sospechosos u

otro tipo de muestras
Histologa de rutina, con tincin de hematoxilina/eosina (H&E), en especmenes que muestren

signos de la enfermedad de IHHN
Aplicado a muestras histolgicas ijadas en solucin de Davidson (AFA)
103
Aplicado a muestras histolgicas tomadas despus de 15-30 das de potenciamiento de la

enfermedad
Existen otros mtodos, tales como el uso de sondas genticas con marcadores de digoxigenina
(BS4.5, BA402), las cuales pueden ser aplicadas en formato de hibridacin in situ o en Dot-blot. Sin
embargo, estos mtodos tienen mayor aplicacin en la investigacin.
Rango geogrico de distribucin y especies afectadas
Rango geogrico
Ampliamente distribuido en instalaciones de cultivo en las Amricas y Asia incluyendo:
Amrica: sureste de los Estados Unidos, Mxico, Amrica Central, Ecuador, Per, Brasil y
numerosas islas del Caribe
Pacico Central: Hawi, Guam, Tahit y Nueva Caledonia
Asia e Indo-Pacico: Singapur, Filipinas, Tailandia, Malasia e Indonesia
Se presume que IHHN es enzotico en camarones penaeidos silvestres del Indo-Pacico; ha sido
detectado tambin en camarones silvestres del Ecuador, la costa occidental de Panam y la costa
occidental de Mxico
Se ha demostrado la existencia de diferencias a nivel de genoma entre cepas de IHHNV de distintas regiones geogricas (Tang, K.F.J., et al., 2003). Asimismo se ha reportado la existencia de
la integracin de una porcin del genoma de IHHNV al genoma de una poblacin silvestre de
Penaeus monodon en frica (Tang, K.F.J. & Lightner, 2006). Se desconoce hasta este momento
si este fenmeno de integracin de una porcin del genoma de IHHNV pudiera haber ocurrido
en otras poblaciones de P. monodon o en otras especies de camarones penaeidos. En el caso del
IHHNV integrado al genoma del camarn, la porcin integrada no es infecciosa. Por lo tanto, ha
sido necesario desarrollar un mtodo de PCR (Tang et al., 2007) para poder diferenciar camarones infectados con IHHNV (IHHNV infeccioso) y camarones no infectados por IHHNV (IHHNV
parcialmente integrado al genoma del camarn = No infeccioso).
Especies afectadas
Se han observado infecciones naturales en: P. stylirostris, P. vannamei, P. occidentalis, P. californiensis, P. monodon, P. semisulcatus y P. japonicus
Debido a que otras especies de camarones penaeidos (P. setiferus, P. duorarum, y P. aztecus) han
podido ser infectadas en condiciones de laboratorio, es probable que tambin ocurran infecciones naturales en otras especies
Especies tales como P. indicus y P. merguiensis parecen ser refractarias a IHHNV
Aparentemente los miembros sobrevivientes de poblaciones que han sido infectadas por IHHNV
pueden volverse portadores del virus de por vida y transmitirlo a su progenie y a otras poblaciones por medio de transmisin de tipo vertical y horizontal
104
Signos clnicos de importancia diagnstica

P. stylirostris
IHHN es una enfermedad de tipo agudo que puede ocasionar altas mortandades en juveniles
de esta especie. Larvas y postlarvas infectadas verticalmente no se muestran enfermas sino hasta
alcanzar aproximadamente el estado de PL35 o un poco despus. Una vez alcanzada esta edad,
es posible observar signos externos, los cuales son seguidos por mortandades masivas. En animales
infectados horizontalmente, el perodo de incubacin y la severidad de la infeccin dependen, hasta
cierto punto, del tamao/edad, siendo los juveniles pequeos los ms severamente afectados. Los
adultos raramente presentan signos de la enfermedad o mortandades.
Los signos externos de la enfermedad no son especicos de IHHN, pero en la etapa aguda
de la infeccin, los juveniles de P. stylirostris muestran una marcada reduccin en el consumo de
alimento, lo cual es seguido por cambios en el comportamiento y la apariencia. Durante la fase
aguda, se ha observado que los camarones de esta especie nadan lentamente hacia la supericie en
donde se quedan completamente quietos, se voltean con el vientre hacia arriba, y luego se hunden
lentamente hasta el fondo del estanque. Se ha visto que los camarones que muestran esta conducta,
pueden hacerlo por horas hasta que se vuelven demasiado dbiles para continuar o hasta que son
canibalizados por sus congneres ms sanos. En este estado de la infeccin, P. stylirostris puede
llegar a exhibir una coloracin blanquecina con manchas de color crema, lo cual le da al camarn
una apariencia moteada (Fig. 2.2.1) Este patrn moteado no es deinitivo y tiende a desaparecer un
poco ms adelante. Tambin se ha observado frecuentemente que en P. stylirostris y en P. monodon
infectados por IHHNV, se tiende a adquirir una coloracin azulosa bastante distintiva y una opacidad
de la musculatura abdominal.
Si la enfermedad progresa hasta alcanzar una fase crnica, P. stylirostris tambin puede sufrir
de lo que se conoce como sndrome de las deformaciones y el enanismo (RDS).
P. vannamei
En esta especie, IHHN es tpicamente una enfermedad de tipo crnico. El sndrome de las
deformidades y el enanismo (Runt Deformity Syndrome o RDS) que afecta a esta especie ha sido
ligado a IHHNV (Fig. 2.2.2). Tpicamente, los juveniles afectados por RDS exhiben rostros doblados
o deformes, antenas arrugadas, caparazn spero o rugoso, y otras deformidades (Fig. 2.2.3). Las poblaciones de juveniles con RDS, exhiben tpicamente una distribucin de tallas relativamente amplia
con una proporcin de tallas pequeas (enanos) mucho mayor de lo normal. El coeiciente de variacin (CV=La desviacin estndar dividida entre el promedio de diferentes grupos de tallas dentro de
una poblacin dada) de una poblacin con RDS es tpicamente mayor de 30% y puede incluso llegar
al 50%, mientras que en poblaciones de juveniles de P. vannamei libres de IHHNV (y por lo tanto sin
RDS) los CVs son de entre 10% y 30%.
Procedimientos de diagnstico en casos de enfermedad
Diagnstico presuntivo
Presencia de signos clnicos
Historial de las instalaciones de cultivo, de las especies cultivadas, o de la regin, que indique la
posibilidad de infeccin por IHHNV
105
Diagnstico deinitivo
A travs de los siguientes mtodos es posible alcanzar un diagnstico deinitivo tanto a nivel
individual como a nivel de poblaciones:
Histopatologa directa
Potenciamiento seguido por histopatologa o pruebas de hibridacin in situ
Bioensayos utilizando P. stylirostris libre de patgenos especicos (Speciic Pathogen Free/SPF)

como la especie indicadora
Pruebas con sondas genticas, u otras sondas adecuadas en los siguientes formatos:
Hibridacin en Dot-Blot
Hibridacin in situ (histologa)
El PCR tambin puede ser utilizado para la deteccin del virus en muestras de hemolinfa o de
tejidos tomadas de camarones sospechosos
Mtodo de histopatologa directa para la deteccin de IHHNV

Se basa en la demostracin histolgica de cuerpos de inclusin intranucleares tipo Cowdry A
(CAIs), bastante prominentes (Fig. 2.2.4 y Fig. 2.2.5), eosinoflicos (en preparaciones de especmenes
ijados con soluciones que contengan cido actico, tales como la solucin de Davidson AFA y la solucin de Bouin, y que han sido teidas con H&E), los cuales a su vez estn rodeados de un anillo de
cromatina dentro de ncleos hipertroiados en clulas de tejidos de origen ectodrmico (branquias,
epidermis, epitelio hipodrmico de la parte anterior y posterior del tracto digestivo, cordn nervioso
ventral y ganglios asociados) y mesodrmico (rganos hematopoyticos, glndula antenal, gnadas,
rgano linfoide, tejido conectivo y msculo estriado).
Cuando son teidos con el mtodo de Feulgen, estos cuerpos de inclusin son de coloracin
variable dependiendo del estado de virognesis y de la cantidad de ADN presente. Por lo tanto,
los CAIs en desarrollo pueden ser Feulgen negativos, mientras que aquellos que han alcanzado la
madurez mostrarn una reaccin positiva en esta prueba. Durante los estados larvales de mysis o
de postlarva temprana, es posible encontrar CAIs dentro de las clulas del epitelio del intestino. Es
posible encontrar cuerpos de inclusin CAIs dentro de las clulas epiteliales de los tbulos del hepatopncreas, pero esto ocurre muy raramente y es por lo general acompaado de infecciones severas
en otros de los tejidos ya mencionados.
Pruebas de hibridacin con sondas genticas especicas para IHHNV
Hibridacin tipo Dot blot usando sondas genticas no radio activas con marcadores de digoxigenina (DIG)
En el procedimiento tipo Dot-blot para el diagnstico de IHHNV, las muestras de tejido

homogenizado son inmovilizadas por adsorcin en una membrana de nitrocelulosa o nylon y luego hibridadas con sondas genticas de ADN (por ejemplo la sonda BS4.5 u otras especicas para
IHHNV) marcadas con DIG (digoxygenin-11-dUTP). Despus de la hibridacin y de la reaccin de
revelado, las muestras de tejido positivas se observan marcadas por la presencia de un precipitado
de color azul-negro o prpura, el cual vara en intensidad dependiendo de la concentracin del virus
en la muestra (Fig.2.2.6).
La presencia de manchas de color rosado o salmn, son debidas a la reaccin no especica
de la sonda con componentes desconocidos en el tejido del camarn. Para evitar confusin en la
interpretacin de los resultados de esta prueba, se debern incluir siempre los controles apropiados.
106
Tales controles pueden ser: tejido de camarn SPF (control negativo); tejido de camarn IHHNV positivo (control positivo); y un grupo de muestras cuya condicin IHHNV sea desconocida as como un
control negativo, y uno positivo sujetos a una prueba de hibridacin sin sonda, nicamente expuestos
al anticuerpo y al substrato de revelado.
Hibridacin in situ
La prueba de hibridacin in situ para la deteccin de IHHNV (en cualquier fase de la infeccin)
puede aplicarse sin ningn problema a especmenes de camarn ijados en formalina o solucin de
Davidson (AFA) y baados en paraina. Por medio de esta prueba, es posible observar la formacin
de un precipitado azul-negro o prpura en cualquier lugar del cuerpo del camarn en donde el ADN
del virus IHHN (y presumiblemente mARN) se encuentre presente (Fig.2.2.7).
En una prueba tpica de hibridacin in situ, las clulas con CAIs, muestran una intensa reaccin nuclear a la sonda, especialmente en la cromatina marginada o en la supericie interna de la
membrana nuclear. Mediante esta prueba se ha demostrado con frecuencia, que los ncleos picnticos y ncleos de clulas aparentemente normales tambin pueden contener cidos nucleicos de
IHNNV.
Muchas clulas positivas para IHHNV tambin muestran acumulaciones citoplasmticas densas del virus. De la misma manera, se puede observar con frecuencia una reaccin positiva a la sonda
asociada a los fragmentos de clulas necrticas, en el debris extracelular y en el contenido de los
fagolisosomas de los fagocitos del corazn, branquias y otros tejidos.
Comnmente, la porcin acelular de la cutcula del camarn (infectado por IHHNV o no)
toma una coloracin azul debido a la reaccin no especica de la sonda. Esta coloracin azul es
debida a la presencia de la quitina, un polmero complejo de n-acetilglucosamina, el cual se adhiere
(tal vez electrostticamente) al ADN de la sonda.
Procedimientos no letales para el anlisis de reproductores
Animales reproductores de las especies P. vannamei, P. stylirostris y P. monodon pueden ser
examinados individualmente para determinar la presencia de IHHNV por medio de una biopsia no
letal.
Muestra
La muestra consiste de un apndice, tal como el segundo o tercer plepodo, un proceso branquial, o uno de los maxilpedos. Despus de obtener el apndice, este debe ser preservado ya sea por
congelacin, en solucin de Davidson o en alcohol etlico al 95% y inalmente procesado de acuerdo
al mtodo de diagnstico de preferencia.
Cuando se utiliza hemolinfa como tejido para muestreo, debe ser procesada ya sea inmediatamente o preservada por congelacin o ijacin en alcohol al 95% y subsecuentemente procesada.
Pruebas de diagnstico
Dos de las pruebas ms apropiadas para examinar este tipo de biopsias son PCR e hibridacin
in situ con la sonda gentica BS4.5 especica para IHHNV (u otras sondas para IHHNV). Aunque
menos sensitiva, la hibridacin en formato Dot blot tambin pueden utilizarse para analizar este
tipo de muestras.
107
Histologa de rutina
El diagnstico de esta enfermedad est basado en la presencia de inclusiones intranucleares
patognomnicas (CAI). El corte histolgico del apndice es hecho en el plano longitudinal medio
para de esta manera proveer una panormica tan amplia como sea posible de los tejidos presentes
(epidermis, subcutis y ibras nerviosas). El corte resultante es examinado para determinar la presencia
de inclusiones intranucleares tipo CAI (las cuales aparecen como cuerpos elongados en las clulas
de las ibras nerviosas). Mediante esta tcnica es posible detectar muchos de los animales infectados
en una poblacin, sin embargo, se desconoce la sensibilidad del procedimiento y por lo tanto no es
recomendable para certiicar la condicin SPF de una poblacin.
Mtodo de PCR (Reaccin en cadena de la polimerasa)
Originalmente, los mtodos de PCR recomendados por la OIE para la deteccin de IHHNV
incluan dos pares de iniciadores (o cebadores) conocidos como 392F/R y 389F/R (Krabsetsve et al.,
2004; Tang y Lightner, 2002). Estos son considerados como los ms adecuados para detectar todas las
variantes genticas conocidas, incluidos los tipos 3A y 3B, que son los que se encuentran integrados
en el genoma de P. monodon de la zona Indo-Pacica occidental, frica oriental, Australia y la India
(Tang y Lightner, 2006; Tang et al., 2007). Afortunadamente, existe un par de iniciadores (309F/R; Tang
y Lightner, 2006; Tang et al., 2007) que reconoce nicamente los tipos 1 y 2 (infeccioso), pero no los
tipos 3A y 3B (no-infeccioso) y que puede ser utilizado para diferenciar entre ambos.
La necesidad de contar con un mtodo de PCR que pueda ayudar a distinguir entre los tipos
3A-3B (no infeccioso) y los tipos 1 y 2 (infeccioso) es de particular inters en aquellas zonas en donde
se presenta comnmente el fenmeno de la integracin, pero en donde se desea al mismo tiempo
excluir este virus. Por ejemplo, si se desea utilizar un grupo de camarones silvestres P. monodon del
Ocano Indico como candidatos para desarrollar una poblacin libre de IHHNV, un resultado positivo usando los iniciadores 392F/F y/o 389F/R, sera inconcluso ya que no se podra saber si son portadores de IHHNV infeccioso o no-infeccioso. Para poder determinar el tipo, se necesitara analizar
las muestras positivas con los iniciadores 309F/R. Un resultado positivo indicara que los camarones
son portadores de IHHNV infeccioso (tipos 1 2). Se han desarrollado tambin mtodos de PCR en
tiempo real (qPCR) para IHHNV (Dhar et al., 2001; Tang y Lightner, 2001), los cuales son altamente
sensibles y con un lmite terico de deteccin de una sola partcula viral. Sin embargo, estos no
pueden distinguir entre los tipos 3A-3B y 1-2 y un resultado positivo en muestras originarias de las
regiones antes mencionadas, an tendra que ser sometido a la prueba con los iniciadores 309F/R
para determinar el tipo.
De acuerdo a la OIE (Organizacin Mundial de Sanidad Animal; www.oie.int) PCR es el mtodo recomendado para la vigilancia dirigida y destinada a la declaracin de la ausencia de IHHNV,
principalmente por motivos de utilidad, disponibilidad, sensibilidad y especiicidad diagnsticas.
108

IHHNV
Figura 2.2.1 Especimenes de P. stylirostris

durante la fase aguda de la enfermedad causada por IHHNV. Ntese el patrn anormal
de coloracin en los segmentos abdominales impartindole al camarn una apariencia
bandeada o moteada. Tanto el camarn en
la esquina superior izquierda (solamente se
observan los plepodos) como el de la esquina inferior derecha (solamente se observa
la cabeza), se econtraban extremadamente
letrgicos (postrados de lado) y posiblemente
moribundos
Figura. 2.2.2 Ejemplos adicionales de deformaciones corporales en P. vannemei a consecuencia de la enfermedad causada por IHHNV
(sndrome de las deformaciones y el enanismo).
Ntese la deformacin del sexto segmento abdominal en 3 de los 4 camarones que se muestran.
Figura. 2.2.3 Se muestran varios ejemplos

de rostrums deformados en P. vannamei con
IHHNV en fase crnica (sndrome de las deformaciones y el enanismo). El rostrum puede
llegar a mostrar desviaciones prcticamente en
cualquier direccin.
109
Figura. 2.2.4 Fotomicrografa a bajo aumento de un corte histolgico de un juvenil de P.

stylirostris en la etapa aguda de la enfermedad
causada por IHHNV (G4=grado severo). La preparacin muestra un corte hecho a travs del
epitelio cuticular y el tejido conectivo subcuticular, en la parte dorsal del cuerpo, justo posterior al corazn. Se pueden observar numerosas
clulas necrticas con ncleos picnticos o
con cuerpos de inclusin intranucleares eosinoflicos de tipo patognomnico (inclusiones de
Cowdry tipo A o CAI). Las lechas sealan algunos ejemplos. Tincin; H&E de Mayer-Bennett.
Magniiacin: 830X.
Figura. 2.2.5 Fotomicrografa de una lamela

branquial mostrando tres clulas adyacentes con cuerpos de inclusin intranuclear de
IHHNV tipo CAI, dentro de los ncleos hipertroiados (varios ejemplos marcados por las lechas). Tincin: H&E de Mayer-Bennett. Magniicacin: 1,800X.
Figura. 2.2.6 Resultados de una prueba de hibridacin en formato de punto-mancha (Dotblot) para IHHNV. Se utiliz una sonda de
ADN, marcada con DIG, especica para la deteccin de IHHNV. Las muestras de hemolinfa
positivas presentan la deposicin de un precipitado de color azl o prpura, mientras que
las muestras negativas no muestran precipitado
alguno
110
Figura. 2.2.7 Resultados de una prueba de hibridacin in situ para IHHNV. Se utiliz una sonda
de ADN, marcada con DIG, especica para la
deteccin de IHHNV. Corte medio-sagital de
un juvenil de P. vannamei con sndrome RDS
(RDS=Runt deformity syndrome o Sndrome
de las deformaciones y el enanismo). Se puede
observar una reaccin positiva de la sonda en
varios CAIs y restos celulares as como tambin
en la hemolinfa. Tincin: Bismarck Brown y
sonda gentica marcada con DIG. Magniicacin: 600X.
2.3.
Virus del Sndrome de la Mancha Blanca (White spot syndrome virus, WSSV)
Nueva distribucin geogrica. Mtodos moleculares (PCR) recomendados por OIE. Resistencia signiicativa contra WSSV en lneas panameas de P. vannamei.
Sndrome de la mancha blanca
Agente etiolgico
Virus del Sndrome de la Mancha Blanca (WSSV)
En la literatura (principalmente la referente a los primeros reportes de esta enfermedad) se hace
mencin a por lo menos tres virus dentro del complejo del sndrome de la mancha blanca (WSSV).
Hoy en da se sabe que todos son en realidad el mismo agente.
Agente
HHNBV = Hypodermal & hematopoietic necrosis baculovirus (baculovirus de la necrosis hematopoytica e hipodrmica); SEED= Shrimp Explosive Epidermic Disease (enfermedad explosiva de la epidermis del camarn); China virus disease (enfermedad del virus de la China)
RV-PJ = Rod-shaped nuclear virus of Penaeus japonicus (virus intranuclear cilndrico de Penaeus japonicus)
SEMBV = Systemic ectodermal and mesodermal baculovirus (baculovirus sistmico del ectodermo y del mesodermo); enfermedad roja; enfermedad de las manchas blancas
WSBV = White spot baculovirus (baculovirus de la mancha blanca); sndrome de la mancha

blanca; enfermedad de la mancha blanca
Hoy en da tambin se sabe que no se trata realmente de un baculovirus sino de un virus completamente diferente, con caractersticas propias y para el cual el Comit Internacional de Taxonoma
de Virus (ICTV) ha asignado WSSV al gnero Whispovirus (gnero nico) dentro de una nueva familia
111
que lleva el nombre de familia Nimaviridae. Aunque se han identiicado un sinnmero de cepas geogricas de WSSV con variabilidad genotpica, todas ellas estn clasiicadas como una nica especie
dentro del gnero Whispovirus (Lo et al., 2012).
WSSV es un virus de doble cadena de ADN (bicatenario), presenta forma elptica a cilndrica,
membrana trilaminar y los viriones tienen un tamao de 80-120 x 250-380 nm. En preparaciones
teidas negativamente, es posible observar la presencia de un apndice o cola. El genoma tiene
un tamao aproximado de 290 kbp, lo cual lo hace uno de los virus ms complejos que infectan al
camarn.
Mtodos preferidos actualmente para el diagnstico de WSSV:
Mtodos histolgicos de ruina con incin de hematoxilina/eosina (H&E)

Mtodo rpido de campo para la tincin de improntas
Hibridacin in situ con sondas genticas especicas
Hibridacin en formato dot blot con sondas genticas especicas
PCR con pares de iniciadores especicos para la deteccin de WSSV (por ejemplo, el mtodo
reconocido por la OIE y kits comerciales).

Rango geogrico
Despus de su aparicin en 1992-1993 en el noroeste de Asia, WSSV se dispers rpidamente
a travs de la mayora de las regiones camaroncolas de Asia y del Indo Pacico incluyendo China,
Japn, Corea, Tailandia, Indonesia, Taiwn, Vietnam, Malasia e India. Sin embargo, debido a que la
industria depende mucho del transporte regional e internacional de camarn vivo, la distribucin de
ste y otros virus ha continuado su expansin.
En noviembre de 1995, ocurri el primer caso conirmado de WSSV en el hemisferio occidental. En este caso, se trataba de camarones cultivados (P. setiferus) en una granja del sur del estado de
Texas. En la vecindad de la granja afectada se encontraba una planta procesadora de camarn, la cual
se sospecha pudo haber sido el foco de la infeccin, ya que era uno de los mayores importadores y
reprocesadores de camarn proveniente de zonas afectadas por WSSV en Asia.
Ms adelante, a inales del ao 1999, ocurri el primer caso conirmado de WSSV en Amrica
Central. Hoy en da, la enfermedad se ha dispersado a Mxico, Nicaragua, Honduras, Costa Rica,
Panam, Ecuador, Per, Colombia y Brasil.
Ms recientemente, se han conirmado por primera vez la presencia de brotes de WSSV en
Arabia Saudita (2010), Mozambique (2011) y en la costa oeste de Madagascar (2012) (Tang et al.,
2012, 2013).
Especies afectadas
Infecciones naturales. Se han observado infecciones naturales en las siguientes especies: Penaeus
monodon, P. japonicus, P. chinensis (=orientalis), P. indicus, P. merguiensis, P. setiferus, P. stylirostris
y P. vannamei.
Infecciones experimentales. En estudios de laboratorio, una cepa de virus originaria de Tailandia
result altamente patognica para las siguientes especies: P. vannamei, P. stylirostris, P. aztecus, P.
duorarum y P. setiferus.
112
Existen muy pocos casos documentados que demuestren resistencia signiicativa a la infeccin
con WSSV. Una de las excepciones es la resistencia reportada en tres familias de P. vannamei originarias de un programa de seleccin en Panam (Cullar-Anjel et al., 2012). En este estudio, despus
de 17 das de haber sido expuestos a WSSV por el mtodo per os, estas tres familias resultaron con
sobrevivencias de 23%, 26% y 57%. No se detect WSSV en los sobrevivientes al ser analizados por
medio de PCR.
Se ha reportado que durante la fase aguda de la enfermedad, los camarones tienden a mostrar
una reduccin en el consumo de alimento, se vuelven letrgicos, la cutcula se desprende fcilmente y presenta manchas blancas (de ah el nombre dado a la enfermedad) de aproximadamente 0.5 a 2.0 mm de dimetro, las cuales son ms conspicuas en la parte interna del caparazn.
Es posible que las manchas blancas representen depsitos anormales de sales de calcio en el
epitelio cuticular
En muchos casos, como sucede con los penaeidos americanos, los camarones moribundos presentan una coloracin rosada a rojiza (de ah el nombre de la enfermedad roja) debido a la expansin de cromatforos del epitelio cuticular. En estos casos, la presencia de manchas blancas
es limitada o ausente (Fig. 2.3.1, 2.3.2 y 2.3.3)
Las poblaciones de camarn que presentan estos signos clnicos tienden a exhibir altas tasas
de mortandad acumulada, alcanzando hasta el 100% de 3 a 10 das despus de que se observan los
primeros signos.
Factores ambientales
Se ha reportado una marcada inluencia de la temperatura del agua en la manifestacin de
la enfermedad (Vidal et al., 2001, Granja C.B. et al., 2003). Las temperaturas medias situadas entre
los 18C y los 30C predisponen a los camarones a brotes de WSSV y a mortandades subsecuentes.
La presencia de signos clnicos tal y como se describi anteriormente
Historial de las instalaciones de cultivo, de la especie cultivada, o de la regin, que indique la

posibilidad de que haya una infeccin por WSSV (por ejemplo, la importacin previa de camarones penaeidos, ya sea PLs, reproductores, etc., desde una regin en donde recientemente haya
habido un brote de WSSV)
Demostracin de ncleos hipertroiados y vacuolizados, visibles en preparaciones o improntas

de tejido epitelial y tejido conectivo del estmago y/o de las branquias, en camarones que exhiban signos clnicos de la enfermedad tal y como se describi anteriormente
Para llegar a un diagnstico deinitivo de WSSV, se pueden utilizar cualquiera de los siguientes
mtodos:
113
Mtodos histolgicos de rutina
El diagnstico histolgico de WSSV est basado en la demostracin de inclusiones intranucleares

prominentes, de color eosinilo a basilo plido (con tincin de H&E), Feulgen positivas, las
cuales se encuentran dentro de ncleos hipertroiados, comnmente en las clulas epiteliales y
el tejido conectivo y con menos frecuencia en el epitelio de la glndula antenal, en las clulas
parenquimales del rgano linfoide, en el tejido hematopoytico y en los fagocitos ijos localizados dentro del corazn (Fig. 2.3.4, 2.3.5 y 2.3.6)
Durante la fase temprana de desarrollo, los cuerpos de inclusin de WSSV son eosinoflicos,
centro-nucleares, rodeados de un halo claro y un anillo de cromatina, lo cual los hace muy parecidos a los cuerpos de inclusin de IHHNV. En este estado es difcil distinguir entre ambos, a
menos que se utilice hibridacin in situ con sodas genticas especicas (Fig. 2.3.7 y 2.3.8)
Sin embargo, durante la etapa ms avanzada de la infeccin de WSSV, los tejidos infectados
presentan cuerpos de inclusin ms grandes y ms desarrollados, no muestran un halo y son de
un color basoflico plido, lo cual los hace fcilmente distinguibles de los cuerpos de inclusin
de IHHNV. Usualmente los ncleos de las clulas infectadas por WSSV presentan una sola inclusin, pero ocasionalmente se pueden llegar a observar inclusiones mltiples (Fig. 2.3.9)
Mtodo rpido de campo para la tincin de preparaciones en hmedo.

Este mtodo est basado en la visualizacin de cuerpos de inclusin intranucleares de WSSV,
a partir de tejidos previamente ijados en solucin de Davidson. Las piezas de tejido ijado son rehidratadas, teidas con hematoxilina-eosina de Mayer-Bennet y examinadas con un microscopio
compuesto.
Este protocolo fue diseado originalmente en China y luego modiicado en la Universidad
de Arizona para la deteccin rpida de WSSV. Con este mtodo, el bilogo encargado de cualquier
laboratorio de produccin de postlarvas o granja, puede efectuar un diagnstico deinitivo si previamente se ha familiarizado con la apariencia microscpica de las lesiones causadas por WSSV (como
se observan por medio de histologa con tincin H&E) (Fig. 2.3.10).
En el libro titulado A handbook of pathology and diagnostic procedures for the major diseases of penaeid shrimp (Lightner, 1996) es posible encontrar referencias fotogricas, otros mtodos
de diagnstico y una descripcin de las signos clnicos y de las lesiones causadas por WSSV a nivel
histolgico.
Materiales y equipo:
A continuacin se proporciona una lista del material necesario:
114
Microscopio compuesto
Pipetas Pasteur o gotero
Tijeras y navaja ina o bistur
Pinzas de punta ina
Portaobjetos y cubreobjetos de vidrio
Solucin ijadora de Davidson
Papel iltro o bolsas de t vacas (para envolver las piezas de tejido)
Seis contenedores pequeos (25-100 ml de capacidad) o cajas de Petri
etanol al 50 y 70%
Hematoxilina (de Mayer/Bennett)
Eosina Y al 2% (solucin acuosa)
Agua corriente
Agua destilada
Seleccin de la muestra:
Para llevar a cabo esta prueba se deben de utilizar nicamente animales moribundos o que
muestren signos agudos de la infeccin (por ejemplo, letargia, coloracin caf obscura o rojiza, altas
tasas de mortandad, etc.). Al menos en el caso P. vannamei o P. stylirostris no es comn observar las
manchas blancas que caractersticamente se observan de manera ms conspicua en otras especies
tales como P. monodon.
Fijacin:
Este protocolo ha sido diseado para su uso con camarones o partes de camarn que han sido
previamente ijados con solucin de Davidson AFA (4-24 horas) y luego transferidos a alcohol etlico
al 70%.
Procedimiento:
Tome la muestra y fjela con la solucin de Davidson siguiendo el mtodo usual
Prepare seis contenedores con las siguientes soluciones:

a) etanol 70%
d) hematoxilina
b) etanol 50%
e) agua corriente
c) agua destilada
f)
eosina Y al 2%
(Para prevenir evaporacin mantenga los contenedores cubiertos)
Despus de un perodo mnimo de ijacin de 4 horas para postlarvas y juveniles pequeos (o

piezas de tejido) y de 24 horas para juveniles grandes y adultos, remueva el estmago y ambas
cubiertas de las branquias (la capa de cutcula que recubre a la cmara branquial). Envuelva
los tejidos en papel poroso o colquelos dentro de una bolsa de t vaca para evitar perderlos
durante los lavados
Sumerja el paquete de tejidos en el alcohol al 70% por un perodo de 1 hora y media. Haga un
cambio de alcohol fresco al 70% y deje los tejidos en el mismo por otra hora y media. Nota: no
deje que los paquetes se sequen durante ninguna de las fases de este procedimiento
Escurra bien el paquete al sacarlo del alcohol al 70%, y transiralo an hmedo al alcohol al
50%, en donde deber de permanecer por 15 minutos
Escurra el paquete y transiralo al contenedor con agua destilada por un perodo de tiempo de 5
minutos. Reemplace el agua 6 veces durante este lapso de tiempo. Escurra el exceso de agua del
paquete y transiralo a la hematoxilina por un perodo de tiempo de 25 minutos
Escurra la hematoxilina y sumerja el paquete en agua corriente por un perodo de 25 minutos.

Reemplace el agua 6 veces durante este lapso de tiempo
Escurra el exceso de agua y coloque el paquete en la solucin de eosina al 2% por un perodo

de tiempo de 1-2 minutos
Enjuague el paquete brevemente con agua destilada
Coloque la muestra sobre una gota de agua destilada en un portaobjetos limpio. Examine por
separado los tejidos de un solo animal
Con la ayuda de unas pinzas de punta ina, desprenda de la cutcula del estmago (o de la cubierta de las branquias) la capa de epitelio y colquela en el portaobjetos. Resulta un poco ms
difcil desprender la capa de epitelio del estmago, pero ste es uno de los mejores rganos para
la deteccin de los cuerpos de inclusin de WSSV. Usando una navaja de rasurar, es posible
115
cortar el estmago en piezas pequeas (en cuadros de 2-3 mm) las cuales son colocadas en el
portaobjetos y con pinzas inas se les puede desprender la capa de epitelio
Una vez que se han obtenido los fragmentos de tejido epitelial, se agrega un poco de agua si es
necesario y se le coloca encima un cubreobjetos
Examine los tejidos con la ayuda de un microscopio compuesto (con aumentos de 20 o 40X).
Los organismos infectados por WSSV presentan cuerpos de inclusin bastante prominentes, de
tincin variable (de eosinoflico a basoflico), los cuales son aproximadamente 2-3 veces ms
grandes que el tamao del ncleo y generalmente muy numerosos. Los cuerpos de inclusin
tempranos tienen un parecido muy grande a los cuerpos de inclusin tipo Cowdry A que aparecen a consecuencia de la infeccin por IHHNV. Los cuerpos de inclusin de WSSV ms tardos o
maduros tienden a aparecer ms basoflicos (generalmente de color morado) y de forma variable
(de circular a irregular)
Diagnstico de WSSV usando sondas genticas
En varios pases tales como, China, Japn, Tailandia, y los Estados Unidos, se han desarrollado
sondas genticas para la deteccin de WSSV
Los detalles de los procedimientos para el uso de estas sondas estn disponibles a travs de las
compaas o grupos distribuidores de las sondas o de los estuches (kits) completos para efectuar las pruebas. El Manual Acutico de la OIE tambin proporciona detalles del procedimiento
Las clulas de los tejidos infectados por WSSV se tien intensamente en los lugares en donde la
sonda se ha hibridado con el material gentico del virus (Fig. 2.3.7 y 2.3.8)
El virus WSSV es reconocido nicamente por la sonda especica para WSSV. Ninguna de las
otras sondas (por ejemplo para IHHNV, BP, HPV, etc.) reacciona con WSSV
Deteccin de WSSV por medio de la reaccin de anticuerpos monoclonales

Se ha reportado tambin el desarrollo de varios mtodos para la deteccin y diagnstico de
WSSV utilizando anticuerpos monoclonales (B. Poulos et al., 2001; Y. Takahashi et al., 2003) (Fig.
2.3.9). Estos anticuerpos reaccionan con una de las protenas estructurales del virus y pueden ser
aplicados a muestras de especmenes ijados en solucin de Davidson (Poulos et al., 2001) o en membranas a travs de lujo lateral (Y. Takahashi et al., 2003). Para el uso de los anticuerpos de acuerdo al
mtodo desarrollado por Poulos et al., 2001, no es necesario impregnar los especmenes en paraina
(aunque el mtodo tambin funciona en cortes histolgicos en paraina). En el caso del Shrimple,
desarrollado por Y. Takahashi et al., 2003, se requiere de tejido fresco o congelado, pero no se puede
usar tejido ijado.
Mtodo de PCR (Reaccin en cadena de la polimerasa)
Existen hoy en da un sinnmero de mtodos de PCR para la deteccin de WSSV, los cuales
utilizan iniciadores o cebadores diseados a partir de diferentes regiones del genoma del virus. El
protocolo que ha sido recomendado por la OIE es el protocolo anidado, o de dos pasos, publicado
originalmente por Lo et al., 1996. Sin embargo, ms recientemente se ha publicado otro mtodo, el
cual ha sido validado por medio de la comparacin con el de Lo et al., 1996, y que consiste en un
solo paso, acortado la duracin de la prueba pero al mismo tiempo manteniendo la especiicidad y
sensibilidad (Nunan & Lightner, 2011). Otro protocolo recomendado por OIE es el de PCR de tiempo
real (Durand y Lightner, 2002), el cual tienen un lmite de deteccin de cuatro partculas virales.
116
La OIE tambin considera aceptable el uso de kits comerciales de PCR para la deteccin de
WSSV siempre y cuando hayan sido validados de acuerdo a sus lineamientos. Para una lista de kits
certiicados por la OIE para este in se puede consultar el siguiente sitio web (http://www.oie.int/en/
our-scientiic-expertise/certiication-of-diagnostic-tests/the-register-of-diagnostic-tests/).
De acuerdo a la OIE el PCR anidado y la secuenciacin son los dos mtodos recomendados
para declarar la ausencia de la enfermedad. Esta prueba debe utilizarse nicamente con muestras
de juveniles y adultos. En estados ms tempranos, tales como huevo, larva y postlarva, la infeccin
puede estar presente a niveles por debajo de los lmites de deteccin del mtodo, pudiendo resultar
en falsos negativos.

WSSV
Figu 2.3.1. Cuatro juveniles P. monodon

mostrando signos de la infeccin por WSSV.
El camarn de la parte superior y el de la
derecha casi no muestran manchas blancas,
pero se puede distinguir una coloracin rosada a caf-rojiza causada por la expansin de
los cromatforos subcuticulares. Es posible
que sta coloracin rojiza sea ms aparente durante la etapa aguda de la enfermedad.
El camarn de la izquierda y el de la parte
inferior muestran las manchas blancas que
caractersticamente aparecen en sta especie
al pasar la etapa aguda de la infeccin.
Figura 2.3.2. Caparazn de un juvenil de P.

monodon con la enfermedad de la mancha
blanca (WSSV). Las manchas blancas son depsitos calcreos localizados en la porcin
interna del exoesqueleto. Fotografa cortesa
P. Saibaba (S.K.B.R. College, Amalapuram,
India).
117

WSSV
Figura 2.3.3. Caparazn de un juvenil de P.

vannamei con la enfermedad de la mancha
blanca (WSSV). Se a observado que en el
caso de las especies de camarones peneidos
americanos, la presencia de manchas blancas no es una caracterstica muy comn durante las epizootias de WSSV. Sin embargo,
se pueden llegar a presentar, como se observa en el espcimen que se muestra en esta
igura.
Figura 2.3.4. Microfotografa de un corte histolgico a travs del estmago de un juvenil
P. chinensis infectado con WSSV. Se observa
una abundacia de cuerpos de inclusin intranuclear prominentes, ubicados en el epitelio cuticular y el tejido conectivo sub-cuticular (algunos ejemplos son sealados por
las lechas). Las clulas muestran cuerpos de
inclusin intranuclear en diferentes fases de
la infeccin. Predominando en este fotografa se pueden observar cuerpos de inclusin
en la fase temprana de la infeccin, los cuales estn localizados en la parte central del
ncleo, son eosinoflicos y rodeados de un
halo claro creado por un artefacto de ijacin
que los separa de las membranas nucleares
y la cromatina marginada (lo cual los hace
muy similares a los cuerpos de inclusin de
IHHNV). Tincin: H&E de Mayer-Bennett.
Magniicacin 900X.
Figura 2.3.5. Corte histolgico a travs del

estmago de un juvenil P. stylirostris infectado experimentalmente con WSSV. Se puede
observar una abundacia (grado G4) de cuerpos de inclusin intranucleares caractersticos de WSSV (algunos ejemplos sealados
con lechas). Tincin: H&E de Mayer-Bennett. Magniicacin: 900X.
118

estmago de un juvenil P. vannamei infectado experimentalmente con WSSV. Se puede
observar una abundacia (grado G4) de cuerpos de inclusin intranucleares caractersticos de WSSV. Tincin: H&E de Mayer-Bennett. Magniicacin: 900X.

estmago de un juvenil P. vannamei, el cual
ha sido sometido a una prueba de hibridacin in situ con una sonda de ADN, marcada
con DIG, especica para la deteccin de este
virus. La sonda ha reaccionado intensamente
con cuerpos de inclusin intranucleares (los
cuales contienen WSSV) en varios tejidos del
camarn incluyendo el epitelio cuticular del
estmago. Tincin: Bismarck Brown y sonda
gentica marcada con DIG. Magniicacin:
900X.
Figura 2.3.8. Corte histolgico a travs de la

glndula antenal de un juvenil P. vannamei,
el cual ha sido sometido a una prueba de
hibridacin in situ con una sonda de ADN,
marcada con DIG, especica para la deteccin de este virus. Se muestra una reaccin
bastante intensa a la sonda dentro de los ncleos de las clulas infectadas en el epitelio
de la glndula antenal. Tincin: Bismarck
Brown y sonda gentica marcada con DIG.
Magniicacin: 450X.
119
Figura 2.3.9. Ejemplo de los resultados

obtenidos al usar anticuerpos monoclonales para la deteccin de WSSV en
muestras de tejidos rehidratados, previamente ijados en solucin de Davidsons.
Esta fotomicrografa muestra una porcin
de una lamela branquial y la deposicin
de un precipitado azl obscuro dentro de
los ncleos de las clulas infectadas por
WSSV en donde los anticuerpos han reaccionado con las partculas virales. Tincin: Bismarck Brown.
Figura 2.3.10. Ejemplo del mtodo rpido de campo para la tincin de preparaciones en hmedo para el diagnstico
de WSSV. Esta microfotografa ilustra el
resultado inal despus de la tincin con
H&E de Mayer-Bennett. El tejido que se
muestra es epitelio cuticular de la cubierta de la cmara branquial. Se pueden
observar claramente los cuerpos de inclusin intranuclaer caractersticos de WSSV
(Flecha).
120
2.4.
Virus del Sndrome de Taura (Taura syndrome virus, TSV)
Sndrome de Taura (TS); enfermedad de Taura; enfermedad de la cola roja.
Agente etiolgico
Virus del Sndrome de Taura (TSV)
Agente
El virus del sndrome de Taura (TSV) tiene una morfologa icosahdrica, las partculas tienen
un dimetro promedio de 30-32 nanmetros, con una densidad de 1.337 g/ml, el tipo de replicacin
es citoplsmico, los sitios de replicacin son Feulgen negativos, contiene ARN monocatenario con
una longitud de aproximadamente 10 kb, y la cpside est compuesta de tres protenas estructurales
principales (49, 36.8 y 23 kDa) y dos secundarias (51.5 y 52.5 kDa). El Comit Internacional de Taxonoma de Virus (ICTV) en su 9 informe, ha asignado a TSV dentro del gnero Aparavirus, familia
Dicistroviridae.
Mtodos preferidos actualmente para la deteccin y el diagnstico
Histologa de rutina con tincin de H&E
Hibridacin in situ con sondas genticas especicas para TSV
Bioensayos en combinacin con histologa utilizando camarones juveniles SPF P. vannamei

como indicadores de la presencia de TSV
Deteccin del virus por medio de RT-PCR

Rango geogrico
El sndrome de Taura fue reconocido por primera a vez como una enfermedad nica en granjas
camaroneras en la cercana de la boca del ro Taura en Guayaquil, Ecuador, en junio de 1992
Sin embargo, a travs de un anlisis retrospectivo de muestras de camarn tomadas en la regin

de Taura en Ecuador en septiembre de 1991, se demostr que la enfermedad ya estaba presente
en esta regin antes de 1992. De la misma manera, algunos granjeros de la regin sospechan que
la enfermedad ya estaba presente a mediados de 1990, cuando se observaron prdidas inexplicables durante la fase de crianza de P. vannamei forzando a varios granjeros a abandonar el uso
de estanques de crianza y adoptando en su lugar la prctica de siembra directa de postlarvas a
densidades relativamente bajas en los estanques de engorda
Anlisis retrospectivos de muestras de P. vannamei tomadas en Colombia en febrero de 1990

tambin han revelado la presencia de lesiones similares a las observadas en casos de sndrome
de Taura (Laramore, 1995)
A partir de 1992, el sndrome de Taura se ha dispersado a muchas de las regiones del continente
americano, en donde ha sido observado tanto en camarones silvestres como cultivados. Se ha
reportado la presencia de TSV prcticamente en todas las regiones camaroncolas de las Am-
121
ricas, incluyendo Ecuador, Colombia, Per, Brasil, El Salvador, Guatemala, Honduras, Belice,
Mxico, Nicaragua, Panam, Costa Rica, Venezuela y en los Estados Unidos (Carolina del Sur,
Florida, Hawi y Texas)
A inales de la dcada de los 90s, TSV era considerado como un virus del hemisferio occidental,
hasta que en 1998 hizo su aparicin en Taiwn y ms recientemente en Tailandia, Myanmar,
China, Corea e Indonesia. Uno de los ltimos brotes en una regin nueva ha sido en Arabia
Saudita (Tang et al., 2012)
Es posible que la distribucin geogrica del sndrome de Taura contine expandindose debido
a la tendencia de la industria a transportar camarones vivos (reproductores, postlarvas) tanto a
nivel regional como internacional
Especies afectadas
El rango de especies afectadas no se conoce completamente
Se han documentado infecciones en poblaciones silvestres de P. vannamei, P. stylirostris y P.

setiferus
Se ha logrado infectar experimentalmente postlarvas y juveniles de P. setiferus, postlarvas de P.

aztecus y juveniles de P. chinensis
En el estado de postlarva (de ~PL-12 en adelante) y de juvenil de P. vannamei TSV causa infecciones serias y altas mortandades en poblaciones de camarn cultivado
Los estados de postlarva y de juvenil de P. aztecus y P. duorarum parecen ser resistentes a esta
enfermedad

El sndrome de Taura es muy conocido como una enfermedad que se presenta durante la fase
de crianza de P. vannamei, lo cual ocurre de los 14 a los 40 das despus de la siembra de las postlarvas en los estanques. Por lo tanto, los camarones afectados tienden a ser tpicamente juveniles de
aproximadamente 0.05 g. a menos de 5 g. Los camarones ms grandes tambin pueden ser afectados,
especialmente si nunca han sido expuestos al virus.
La enfermedad exhibe una fase aguda, una fase de transicin y una fase crnica, las cuales
pueden distinguirse a simple vista (Fig. 2.4.1).
Fase aguda: En los camarones moribundos, durante la fase aguda de la enfermedad, los signos observables a simple vista incluyen expansin de los cromatforos rojos, lo cual le imparte al camarn una
coloracin general que va de rosada a rojiza y a los urpodos una coloracin roja (de ah el nombre
de la enfermedad de la cola roja). Los animales en la fase aguda tienden a morir durante la ecdisis
(el proceso de muda).
En estos animales, cuando se examina con ms detenimiento el epitelio cuticular, por ejemplo
de un apndice (en la punta de los urpodos o de los plepodos, por ejemplo), es posible observar
evidencia de necrosis multifocal del epitelio (Fig. 2.4.2 y 2.4.3).
Los camarones que muestran estos signos agudos, generalmente tambin tienen la cutcula
suave, el intestino vaco y se encuentran en el estado D del ciclo de muda (Fig. 2.4.9).
Los animales con infeccin aguda severa mueren tpicamente durante la ecdisis, lo cual sugiere que el proceso de muda es una parte importante de la patognesis del sndrome de Taura.
122
Fase de recuperacin: a este etapa se le conoce como de transicin ya que comparte caractersticas
de la fase aguda y de la fase crnica. En condiciones experimentales, si el camarn sobrevive la fase
aguda, generalmente entra a la fase de transicin aproximadamente a los 4 das despus de haber
sido infectado. Es en la etapa de transicin cuando es posible observar manchas melanizadas en
todo el cuerpo (Fig. 2.4.4). Las caractersticas histolgicas de la etapa de transicin se describen ms
adelante.
Fase crnica: en esta etapa los camarones no presentan ninguna lesin externa evidente. Los camarones en esta fase de la enfermedad puede o no que presenten cutcula blanda y expansin de los
cromatforos rojos. Es posible observar a tales camarones comportndose y alimentndose normalmente.
Aunque una epizootia de sndrome de Taura puede resultar en mortandades acumuladas que van del
80% al 90% de la poblacin en un estanque (en lneas de camarn susceptibles), los sobrevivientes
tpicamente muestran sobrevivencias de 60% o ms al tiempo de la cosecha.
La presencia de signos clnicos tal y como se describi anteriormente
Un historial ya sea de las instalaciones de cultivo, de la especie cultivada o de la regin, que indique la posibilidad de infeccin por TSV (por ejemplo la importacin de P. vannamei originario
de Ecuador o de otras regiones en donde se sabe que existe TSV)
Preparaciones hmedas de apndices (urpodos, escamas antenales, plepodos, etc.) que muestren necrosis multifocal del epitelio cuticular en animales juveniles durante la fase aguda de la
enfermedad.
Mtodos para la deteccin y el diagnstico deinitivo del virus

Para llegar a un diagnstico deinitivo de TSV, tanto en camarones individuales como en poblaciones enteras, se puede utilizar cualquiera de los siguientes mtodos:
Mtodos histolgicos de rutina
El diagnstico histolgico de la enfermedad (con tincin H&E), durante la fase aguda, se basa en
la demostracin de reas de necrosis multifocal en el epitelio cuticular del caparazn, apndices, branquias, esfago, estmago e intestino posterior (Fig. 2.4.5)
Slo muy raramente el epitelio de los tbulos de la glndula antenal se ve afectado
Con frecuencia, el tejido conectivo subcuticular y las ibras adyacentes de msculo estriado
tambin se ven afectadas
Las lesiones cuticulares multifocales son muy conspicuas en la fase aguda y consisten de lo
siguiente:
El citoplasma de las clulas afectadas muestra un incremento en la eosinoilia
La picnosis nuclear y cariorrexis son una caracterstica comn en las lesiones del sndrome
de Taura
En ocasiones es posible observar la presencia de inclusiones citoplsmicas y frecuentemente una abundancia extrema de cuerpos esfricos (de 1 a 20 m de dimetro) que van de
eosinoflico a basoflico plido
123
Los ncleos picnticos y cariorrcticos dan una reaccin positiva con la tincin de Feulgen
(para ADN), lo cual los distingue de las inclusiones citoplsmicas eosinilas/basilas plidas que no contienen ADN
La ausencia de iniltracin hemoctica, o de otro tipo de respuesta inlamatoria, distingue la

fase aguda de la fase de recuperacin o crnica de la enfermedad
La presencia de ncleos picnticos y cariorrcticos as como de las inclusiones citoplsmicas

generalmente esfricas, le dan a las lesiones de la fase aguda/peraguda una apariencia aperdigonada o apimentada, lo cual es considerado como una caracterstica patognomnica de la
enfermedad (Fig. 2.4.6)
Durante la fase de transicin es posible observar algunas lesiones de tipo agudo, pero adems se
comienzan a observar iniltrados hemocticos en el epitelio acompaados de melanizacin. Estas
lesiones cuticulares se asemejan a aquellas ocasionadas por infeccin bacteriana del exoesqueleto (shell disease) (ver iguras adjuntas)
Estas lesiones pueden llegar a presentar erosin de la cutcula, colonizacin bacteriana

supericial e invasin de la cutcula por presuntas especies de Vibrio
Una marcada iniltracin hemoctica, la cual puede o no estar melanizada, se encuentra con
frecuencia en posicin basal con respecto a las lesiones cuticulares melanizadas
La fase crnica de la enfermedad se caracteriza por la ausencia de necrosis del epitelio (a como
se describi en la fase aguda). De la misma manera, las manchas melanizadas desaparecen. Es
comn observar la presencia de estructuras dentro del rgano linfoide conocidas como esferoides (Fig. 2.4.7). Se ha observado que en camarones durante la fase crnica de la enfermedad
estos esferoides son el nico rastro de la infeccin, los cuales muestran una reaccin positiva a
la sonda gentica para la deteccin de TSV, sugiriendo una relacin estrecha con el proceso de
la enfermedad.
Diagnstico de TSV usando sondas genticas

Se han desarrollado sondas gentica de ADN complementario (cADN) las cuales proveen
excelente sensibilidad diagnstica en casos de infeccin por TSV. Este mtodo se emplea principalmente en investigacin o en casos en que se requiere la conirmacin con un mtodo adicional.
La sonda gentica, no radioactiva y marcada con digoxigenina (DIG), puede ser usada en ensayos de hibridacin in situ
La prueba de hibridacin in situ puede ser aplicada a muestras de tejido ijadas de acuerdo al
procedimiento explicado en la seccin sobre toma y preparacin de muestras
Cuando son sujetas a la prueba de hibridacin in situ con las sondas cADN, las lesiones de TSV
muestran una reaccin positiva bastante prominente en la forma de un precipitado que va de
azul a negro y el cual est localizado en el citoplasma de las clulas afectadas (Fig. 2.4.8)
Los fragmentos nucleares picnticos y cariorrcticos que contribuyen a la apariencia aperdigonada o apimentada de las lesiones patognomnicas, no reaccionan con la sonda gentica
Hibridacin en formato Dot blot
124
El ensayo de hibridacin en formato de dot blot ha sido aplicado solamente a nivel experimental para el diagnstico con sondas no radioactivas marcadas con DIG y usando muestras de
hemolinfa y virus semipuriicado
Problemas relacionados con la estabilidad del ARN monocatenario (el cual constituye el genoma
de TSV) durante la prueba de dot blot ha limitado el desarrollo y la aplicacin de este tipo de
kits de campo basados en el uso de sondas cADN marcadas con DIG para la deteccin de este
agente
Mtodo de RT-PCR (reaccin en cadena de la polimerasa con transcripcin inversa) para la deteccin de TSV
Uno de los mtodos de RT-PCR recomendados por OIE es el publicado por Nunan et al., 1998.
Este mtodo utiliza un par de iniciadores (9992F y 9195R) que ampliican un fragmento de 231 pares
de bases. A pesar de haber sido diseado hace 16 aos, este mtodo sigue siendo uno de los mejores
debido a su alta sensibilidad y a que es capaz de detectar todas las variantes geogricas de TSV que
continan apareciendo alrededor del mundo.
TSV provoca una infeccin de tipo sistmico en el camarn y por lo tanto las muestras idneas
para el anlisis por medio de RT-PCR pueden ser hemolinfa o tejido (p.ej. plepodo, branquias, etc.).
No se recomienda el anlisis de huevecillos, larvas, o postlarvas menores a PL10, utilizando el mtodo de RT-PCR ya que durante esos estados, la infeccin puede estar presente a niveles por debajo del
lmite de deteccin y existe el riesgo de obtenerse resultados falsos negativos.
De acuerdo a la OIE, el mtodo de RT-PCR es el recomendado para la vigilancia dirigida y para
la declaracin de la ausencia de la enfermedad.
Tasa de mutacin de TSV
En un estudio en donde se compararon diferencias en el genoma de 83 cepas de TSV originarias de 16 pases, colectadas durante un perodo de 16 aos, se estim una tasa de mutacin de
aproximadamente 2.37x10-3 nucletidos sustituidos/sitio/ao (Wertheim et al., 2009). Esta tasa de
mutacin es comparable a la de otros virus de ARN de evolucin rpida tales como la enfermedad
vesicular porcina (3.4x10-3 nucletidos sustituidos/sitio/ao), enterovirus humano (3.4x10-3 nucletidos sustituidos/sitio/ao) y el virus humano de la inmunodeiciencia adquirida tipo-1 (2.5x10-3 nucletidos sustituidos/sitio/ao). En retrospectiva, esta tasa de mutacin tan alta ayudara a explicar
situaciones tales como el cambio en la susceptibilidad de P. stylirostris a este virus. En un principio,
cuando TSV recin haba hecho su aparicin en Mxico, la industria comenz a utilizar P. stylirostris
en lugar de P. vannamei debido a que el primero, a pesar de ser afectado por la enfermedad mostraba
una mayor sobrevivencia. Este camarn fue comercializado como Supershrimp. Sin embargo, despus de algunos aos, P. stylirostris comenz a presentar mortandades debido a TSV al mismo nivel
que P. vannamei. Es muy probable que esto haya obedecido a la aparicin de una nueva cepa de TSV
(producto de la alta tasa de mutacin del virus) que result ser mucho ms virulenta para P. stylirostris.
Las implicaciones de la rpida tasa de mutacin de TSV para la industria camaroncola estn
relacionadas principalmente con el desarrollo de lneas de camarn resistentes a TSV. En muchos
pases se ha utilizado esta estrategia para el manejo de TSV, principalmente en aquellas regiones en
donde se ha vuelto endmico. Sin embargo, una lnea de camarn resistente a TSV el da de hoy, tal
vez pudiera dejar de serlo el prximo ao. Esto signiica que el desarrollo de lneas de camarn resistentes a TSV deber de ser un esfuerzo continuo. Un ejemplo de esto es el reciente descubrimiento
de una cepa de TSV en Colombia ocasionando altas mortandades en incas cultivando P. vannamei
resistente a la enfermedad (Aranguren et al., 2013).
Respecto a los mtodos moleculares para la deteccin del virus (p.ej., RT-PCR), afortunadamente los mtodos preponderantes (incluyendo el recomendado por la OIE) estn diseados para
ampliicar una zona conservada del genoma viral, excluyendo la posibilidad de obtener resultados
falsos negativos.
125

TSV
Figura 2.4.1. Figura esquemtica mostrando el
progreso hipottico de la enfermedad de TSV
en P. vannamei. Inmediatamente despus de
la infeccin inicial, sobreviene una viremia que
dispersa las partculas virales a travs del hemoceloma del camarn. Durante los estados de
muda previos a la ecdisis, las clulas altamente
activas del epitelio cuticular proveen un blanco ideal para el virus y, una vez infectadas, TSV
comienza a replicarse a expensas de las funciones normales de estas clulas (por ejemplo, la
secrecin de la cutcula, y la transferencia de
calcio entre la cutcula nueva y la que ser reemplazada). La etapa aguda de la infeccin se
maniiesta con mayor intensidad durante los
estados crticos de la ecdisis y, debido a la interrupcin resultante, muchos camarones mueren
durante esta etapa. Los camarones que sobreviven a la muda entran en la etapa crnica o de
recuperacin y generalmente exhiben lesiones
melanizadas de la cutcula en aquellos lugares
en donde las lesiones de TSV se encuentran en
vas de recuperacin. Los camarones afectados
de esta manera pueden sufrir otro episodio agudo de la infeccin durante la siguiente muda o
bien puede que lleguen a mudar normalmente
y recuperarse. Durante esta etapa de recuperacin los camarones pueden ser portadores del
virus pero se ignora por cuanto tiempo.
126

TSV
Figura 2.4.2. Dos ejemplares de camarn

cultivado P. vananmei colectados en Ecuador. Ambos especmenes se encontraron moribundos y con signos de la fase aguda del
sndrome de Taura. Durante la etapa aguda
los camarones se encuentran generalmente
aletargados, tienen una cutcula blanda y los
urpodos pueden llegar a tomar una coloracin rojiza.
Figura 2.4.3. Fotografa, a mayor aumento,

de los urpodos de uno de los camarones de
la Fig. 2.4.2. Usando una lupa, o una cmara
fotogrica con lente de acercamiento, es posible observar la irregularidad de los bordes
del epitelio cuticular de los urpodos (sealado por la lecha). Estas irregularidades en el
epitelio son la manifestacin de la necrosis
causada en este tejido por el virus de TSV.
Magniicacin: aproximadamente 10X.
Figura 2.4.4. Juvenil de P. vannamei capturado en un estanque de cultivo en Ecuador.

Este ejemplar se encuentra en la etapa de recuperacin, de TSV. Se pueden observar mltiples focos de melanizacin que sealan los
sitios de la cutcula en donde el epitelio necrosado por la infeccin de TSV se encuentra
en vas de recuperacin.
127

TSV

estmago de un juvenil P. vannamei en la
etapa aguda de infeccin por TSV. Se muestran reas necrticas prominentes (la lecha
gruesa seala un ejemplo) en el epitelio cuticular, el cual normalmente secreta la parte
acelular de la cutcula. Adyacente a las lesiones necrticas focales es posible observar
clulas epiteliales aparentemente normales
(la lecha delgada seala algunos ejemplos).
Tincin: H&E de Mayer-Bennett. Magniicacin 300X.
Figura 2.4.6. Microfotografa de alto aumento mostrando una lesin clsica de TSV.
Este tipo de lesiones consiste de necrosis
del epitelio cuticular y del tejido conectivo
sub-cuticular, con clulas mostrando ncleos
picnticos o cariorrcticos, as como tambin una marcada eosinoilia e inclusiones
citoplasmticas con propiedades variables
de tincin. Las inclusiones citoplasmticas
y los ncleos picnticos y cariorrcticos le
imparten a la lesin su apariencia caracterstica (patodiagnstica) aperdigonada (buckshot-riddled) o apimientada (peppered).
Tincin: H&E de Mayer-Bennett. Magniicacin: 900X.
Figura 2.4.7. Corte medio-sagital a travs del
rgano linfoide (OL) de un juvenil P. vannamei infectado experimentalmente con TSV.
Al momento de la ijacin, el espcimen
se encontraba en la fase crnica de la enfermedad. Las lesiones patognomnicas de
TSV nunca ocurren en el OL sin embargo
la infeccin por TSV induce lesiones de otro
tipo en este rgano. Entremezclado con los
cordones de tejido normal del OL, los cuales
se caracterizan por su arquitectura de varias
capas de clulas arregladas concntricamente alrededor de un conducto central para la
hemolinfa (se seala un ejemplo con una lecha delgada), se encuentran acumulaciones
desorganizadas de clulas, las cuales forman
estructuras a las que se les ha llamado esferoides del OL (EOL). Los EOL caracen de un
conducto central y consisten de clulas que
muestran kariomegalia, vacuolas citoplasmticas bastante prominentes e inclusiones
citoplasmticas de tamao y forma irregular
(la lecha gruesa muestra un ejemplo de un
esferoide). Tincin: H&E de Mayer-Bennett.
Magniicacin: 450X.
128
Figura 2.4.8. Corte histolgico a travs de

uno de los apndices de una postlarva de P.
vannamei en la fase aguda de infeccin por
TSV. Este ejemplar ha sido sometido a una
prueba de hibridacin in situ con una sonda
gentica de cADN marcada con DIG, especica para la deteccin de TSV. La sonda ha
reaccionado intensamente con clulas infectadas en donde es posible observar un precipitado azl obscuro o negro dentro del citoplasma de clulas del epitelio cuticular y del
tejido conectivo sub-cuticular. La sonda no
ha reaccionado con los ncleos picnticos o
kariorrcticos, lo cual es de esperarse ya que
TSV es un virus citoplsmico. Los restos de
los ncleos contribuyen a dar la apariencia
apimientada tpica de las lesiones de TSV.
Tincin: Bismarck Brown y sonda gentica
marcada con DIG. Magniicacin: 900X
Figura 2.4.9. Preparacin en hmedo que
muestra la porcin de un urpodo de una
postlarva de P. vannamei en la etapa aguda de la infeccin por TSV. Este espcimen
se encontraba en el estado D4 del ciclo de
muda (segn la separacin que se puede observar entre la cutcula vieja y la nueva).
La lecha de la izquierda seala un rea necrtica en el epitelio cuticular (rea desorganizada y con una abundancia de pequeas
esferas refrctiles. las cuales son en realidad
ncleos picnticos y cariorrcticos) mientras
que la lecha en la esquina superior derecha seala una porcin de epitelio cuticular
aparentemente normal. Se pueden observar
tambin algunos cromatforos rojos en el
tejido conectivo sub-cuticular del urpodo.
Tincin: Preparacin en hmedo sin teir.
Magniicacin: 300X
129
2.5
Virus del sndrome de la cabeza amarilla (Yellow head syndrome virus, YHV)
Enfermedad de la cabeza amarilla, enfermedad (YH) o enfermedad de la cabeza amarilla de
P. monodon.
Agente etiolgico
Virus de la cabeza amarilla (YHV).
Inicialmente algunos investigadores tailandeses reportaron que YHV era un baculovirus citoplsmico Tipo B (virus de la granulosis) o un virus similar a un baculovirus y le asignaron el nombre de
baculovirus de la cabeza amarilla o YHB. Sin embargo, al llevar a cabo una caracterizacin detallada
se encontr que se trataba de un virus completamente nuevo, para el cual hubo necesidad de crear
una nueva familia, conocida con el nombre de familia Roniviridae.
Agente
YHV no es un baculovirus ya que no contiene cdADN (cadena doble de ADN) sino csARN (cadena sencilla de ARN)
El virus de la cabeza amarilla es un virus de ARN monocatenario (ssARN), tiene forma cilndrica,
presenta una envoltura y es de replicacin citoplsmica
Los viriones tienen forma cilndrica y varan en tamao en un rango de 150 nm a 200 nm de
longitud por 40 nm a 50 nm de ancho. Las estructuras que posiblemente sean las nucleocpsides (y/o formas aberrantes de nucleocpsides) miden aproximadamente 15 nm de dimetro con
longitudes variables de hasta aproximadamente 800 nm de largo
YHV es realmente uno de los seis genotipos del grupo conocido como el complejo de virus de la
cabeza amarilla y se le conoce como el genotipo 1. Los otros genotipos se les ha encontrado en
P. monodon de la costa Este de frica, en Asia y en Australia, en donde aparentemente no tienen
efecto daino en el hospedero. El nico genotipo que parece ser patognico es el genotipo 1
Mtodos preferidos actualmente para el diagnstico
Historial y signos clnicos de YHV
Mtodos histolgicos de rutina con tincin H&E
Tincin de hemocitos con el mtodo de ruina de Wright-Giemsa
Deteccin del virus por medio de RT-PCR
Hibridacin in situ con sondas genicas especicas para la deteccin de YHV

Rango geogrico
Aparentemente YH es una enfermedad ampliamente distribuida en poblaciones de P. monodon.
Aunque hasta hace relativamente poco la enfermedad de la cabeza amarilla fue reconocida
y descrita por primera vez en camarones de Tailandia, es probable que YHV haya sido el mismo
sndrome que ha venido afectando a la industria del cultivo de P. monodon por casi una dcada. Es
posible que YHV haya sido responsable del hundimiento de la industria de Taiwn en 1986-1987, y
130
de epizootias ms pequeas, pero serias, en regiones de Indonesia, Malasia, China y Filipinas que
cultivan P. monodon.
Hace relativamente poco, se report la presencia de YHV en el continente americano (Loh et
al., 1998), sin embargo, el hallazgo nunca pudo ser conirmado y es probable que se haya tratado
ms bien de un diagnstico errneo.
Especies afectadas
YHD es una enfermedad importante en sistemas intensivos de cultivo de P. monodon en el sureste de Asia e India
A travs de bioensayos con P. monodon como especie indicadora, se encontr que camarones
de agua salobre de las especies Palaemon styliferus y Acetes sp. (presentes en los estanques de
camarn) son portadores de YHV (Flegel et al., 1995)
Aunque resistentes a la enfermedad cuando se encuentran en los estanques, se ha observado que
P. merguiensis y Metapenaeus ensis pueden ser infectados experimentalmente durante pruebas
de reto (Flegel et al., 1995)
Se ha demostrado experimentalmente que YHV puede infectar y causar infecciones serias en
los estados juveniles de los camarones penaeidos americanos de las especies P. vannamei, P.
stylirostris, P. setiferus, P. aztecus y P. duorarum. En estos mismos estudios, se observ que los
estados de postlarva de las mismas especies eran relativamente resistentes
Signos Clnicos de Importancia Diagnstica

Existen ciertos signos clnicos caractersticos que pueden ser observados en P. monodon cuando ste ha sido infectado por YHD. Durante varios das, los juveniles y los subadultos (especialmente
durante los 50-70 das de cultivo) en estanques intensivos de cultivo muestran un incremento anormal
y abrupto en el consumo de alimento. Posteriormente, los animales dejan de alimentarse completamente y dentro de un plazo de un da es posible observar algunos camarones moribundos nadando
lentamente cerca de la supericie en las orillas de los estanques. Estos camarones moribundos pueden llegar a exhibir una coloracin amarillenta del cefalotrax (Fig. 2.5.1). El nmero de camarones
mostrando signos similares, incrementa dramticamente en el segundo da y para el tercero, despus
de haber cesado de alimentarse, comienza una mortandad masiva la cual tpicamente resulta en la
prdida total del estanque.
Los camarones moribundos pueden llegar a presentar con frecuencia uno o ms de los siguientes signos: palidez corporal generalizada en combinacin con una coloracin amarillenta del
cefalotrax; branquias blanquecinas o de color amarillo plido a caf; hepatopncreas de color amarillo plido.
Se ha reportado que en una ocasin en que incidentalmente se encontraron postlarvas de P.
merguiensis en el mismo estanque en que se hallaba una poblacin de P. monodon infectado por
YHV, las postlarvas de P. merguiensis no presentaban ningn signo de la enfermedad.
Historial y signos clnicos
Presencia de los signos clnicos descritos previamente
Un historial que indique la posible presencia de YHV en las instalaciones de cultivo, en la regin
o en las especies de camarn usadas para el cultivo
131
El diagnstico deinitivo se basa en el historial, la presencia de signos clnicos descritos anteriormente y la conirmacin por medio de histopatologa.
Histopatologa
La histopatologa se caracteriza por una necrosis generalizada, de multifocal a difusa, con presencia prominente de picnosis y cariorrexis. En los tejidos afectados es posible observar inclusiones
citoplasmticas perinucleares basoflicas, generalmente esfricas. Entre los tipos de clulas o tejidos
afectados se incluyen los hemocitos, rgano linfoide, tejido hematopoytico, clulas pilar y epiteliales de las lamelas branquiales, tejido conectivo esponjoso del subcutis, msculo, intestino, glndula
antenal, gnadas, cordn y ganglios nerviosos, etc. (Fig. 2.5.2 y 2.5.3).
Entre los cambios celulares tempranos ocasionados por YHV se incluye la hipertroia nuclear,
disminucin y marginacin de la cromatina y desplazamiento lateral del nuclolo.
Respuesta inlamatoria, en forma de iniltracin hemoctica, agrupamiento, y encapsulacin
puede llegar a ocurrir pero es ms bien difusa y no muy conspicua, a menos de que al mismo tiempo
se presente una infeccin bacteriana secundaria.
Existe un tipo nico de clula que se presenta con frecuencia en camarones infectados con
YHV y que puede servir como ayuda para el diagnstico histolgico de esta enfermedad. Este tipo de
clula se presenta en cantidades muy variables, pero no es del todo rara. Generalmente se le puede
observar en los espacios hemales existentes en varios tejidos tales como branquias, glndula antenal,
hepatopncreas, corazn etc.; este tipo de clula es generalmente esfrica, presenta citoplasma de
apariencia uniforme, plidamente basoflico y con un ncleo esfrico y central. Es probable que estas
clulas sean en realidad hemocitos inmaduros liberados prematuramente por los rganos hematopoyticos en respuesta a la hemocitopenia causada por la infeccin de YHV.
Es importante tener en cuenta que infecciones severas de WSSV pueden llegar a ocasionar una
necrosis del rgano linfoide casi idntica a la ocasionada por YHV (Pantoja y Lightner, 2001) (Fig.
2.5.4). Esta similitud puede ocasionar confusin y resultar en un diagnstico errneo de YHV. Sin
embargo, en el caso de WSSV dicha necrosis del rgano linfoide es acompaada por la presencia de
los cuerpos intranucleares caractersticos de WSSV. De cualquier manera, si hay razn para sospechar
la presencia de YHV en muestras de camarn procedentes de regiones afectadas por WSSV, se debe
recurrir a pruebas de hibridacin in situ (con la sonda para YHV) y/o de RT-PCR para determinar el
estatus real de YHV en los animales en cuestin (Fig. 2.5.5).
Fenmeno de interferencia viral.
El fenmeno de interferencia viral entre YHV y TSV fue reportado por Aranguren et al., 2012.
En un estudio bajo condiciones controladas de laboratorio, los investigadores indujeron primero una
infeccin con TSV a nivel crnico en camarones SPF P. vannamei, para despus exponerlos a YHV.
Las diferencias en sobrevivencia a YHV entre grupos de camarones pre expuestos a TSV y no expuestos a TSV fue estadsticamente signiicativa, con las supervivencias ms altas en los grupos previamente expuestos a TSV. Mediciones de la concentracin de partculas virales de YHV mostraron niveles
mucho ms altos en los camarones no expuestos a TSV. Este fenmeno de interferencia viral tal vez
ayude a explicar la aparente ausencia de brotes de YHV en las Amricas, en donde TSV se encuentra
ampliamente distribuido. Resulta interesante que aunque ha habido reportes de la presencia de YHV
en el Pacico mexicano y otros pases de Latinoamrica, los brotes no han alcanzado la magnitud que
de otras enfermedades tales como WSSV.
132
Mtodos moleculares para deteccin de YHV.

El manual de la OIE para enfermedades de animales acuticos menciona la existencia de tres
protocolos de RT-PCR para la deteccin de YHV. El primer protocolo es un mtodo de RT-PCR de un
solo paso (Wongteerasupaya et al., 1997) que es especico para el genotipo 1 (patognico). Los otros
dos protocolos son utilizados principalmente para distinguir entre los diferentes genotipos requiriendo ambos la secuenciacin del producto ampliicado para determinar el genotipo.
Existen tambin en el mercado kits comerciales para la deteccin de YHV y otros miembros
del complejo del virus de la cabeza amarilla.
De acuerdo a la OIE, el mtodo recomendado para declarar la ausencia de la enfermedad
es el protocolo 3 de RT-PCR de dos pasos (Wijegoonawardane et al., 2008) en combinacin con la
secuenciacin conirmatoria del producto ampliicado. Tambin se hace hincapi, en que aquellos
casos en donde no pueda conirmarse la presencia de virus por medio de la secuenciacin, estos
sern considerados negativos.

YHV
Figura 2.5.1. Los tres specimens de P. monodon del grupo de la izquierda muestran los
signos externos de la enfermedad causada
por YHV. Ntese la coloracin amarillenta o
caf-amarillenta del cefalotrax en general,
lo cual le di el nombre a la enfermedad (fotografa cortesa del Dr. T.W. Flegel, Bagok,
Tailandia).
Figura 2.5.2. Corte histolgico a travs de las

branquias de un juvenil P. monodon infectado por YHV. Se puede observar una necrosis
generalizada y difusa en las clulas de las
lamelas branquiales, dentro de las cuales es
aparente la presencia de ncleos picnticos
y cariorrcticos (algunos ejemplos son sealados por las lechas). Dentro de las clulas
sealadas tambin es posible observar un
citoplasma bastante basoflico y la presencia
de inclusiones citoplasmticas basoflicas
perinucleares. Dichas clulas son posiblemente hemocitos que han sido liberados
prematuramente en respuesta a la hemocitopenia inducida por la infeccin con YHV.
Tincin: H&E de Mayer-Bennett. Magniicacin: 1,000X.
133

YHV
Figura 2.5.3. Corte histolgico a travs del rgano
linfoide (OL) de un juvenil P. monodon en la fase
aguda de infeccin por YHV. Se puede observar una
necrosis generalizada y difusa de las clulas del OL.
Las clulas afectadas muestran ncleos picnticos y
cariorrcticos. Las lechas sealan algunas clulas con
cuerpos de inclusin citoplasmticos perinucleares,
los cuales varan en coloracin de basoflico plido a
obscuro. Esta marcada necrosis durante la fase aguda
de la infeccin por YHV la distingue de TSV que causa
lesiones similares en otros tejidos pero no en el OL.
Recientemente se ha comprobado que infecciones
severas por WSSV pueden causar tambin este tipo de
necrosis en el OL, sin embargo, en el caso de WSSV
se pueden observar los cuerpos de inclusin intranucleares en combinacin con la necrosis severa del
rgano. La necrosis severa del OL no debe tomarse
por si sola como evidencia concluyente de infeccin
por YHV. Para poder conirmar el diagnstico de YHV,
es necesario llevar a cabo pruebas adicionales (como
por ejemplo, hibridacin in situ con sondas especicas para la deteccin de YHV o RT-PCR). Tincin:
H&E de Mayer-Bennett. Magniicacin: 525X.
Figura 2.5.4. Corte histolgico a travs de las

branquias de un juvenil P. duorarum infectado experimentalmente con YHV. Se puede
observar una necrosis severa (grado G4), de
multifocal a difusa, caracterizada por la presencia de clulas con un incremento en la
eosinoilia del citoplasma y ncleos picnticos. Tincin: H&E de Mayer-Bennett. Magniicacin: 1,000X.
Figura 2.5.5. Corte histolgico a travs del rgano linfoide de
un camarn P. monodon infectado por YHV. El espcimen
fue sujeto a una prueba de hibridacin in situ con una sonda
gentica marcada con DIG, especica para la deteccin del
virus de la cabeza amarilla (YHV). Se puede observar una
intensa reaccin positiva (deposicin de un precipitado azl
obscuro o negro) a la sonda dentro del citoplasma de las clulas parenquimales de un esferoide en el rgano linfoide.
Aparentemente las estructuras conocidas como esferoides
del rgano linfoide (EOL) son una respuesta no especica
del sistema imunolgico del camarn contra una variedad
de agentes patgenos. Adems de YHV, se han observado
EOLs durante la fase crnica o de recuperacin de TSV (ver
seccin 3.4.4.2) y tambin durante algunas enfermedades
bacterianas. Los EOL no deben de tomarse como una caracterstica diagnstica deinitiva de ninguna enfermedad. La
precencia de EOL debe ser interpretada dentro del contexto
histrico de las muestras y la sospecha de una determinada
enfermedad viral debe ser conirmada por medio de otros
mtodos, por ejemplo, hibridacin in situ con la sonda gentica apropiada. Tincin: Bismarck Brown y sonda gentica
marcada con DIG. Magniicacin: 100X.
134
2.6. Virus de la mionecrosis infecciosa (Infectious myonecrosis virus, IMNV)

Mionecrosis infecciosa; Necrosis infecciosa del msculo.
Agente Etiolgico
Virus de la mionecrosis infecciosa (IMNV)
Agente
IMNV es un virus tentativamente clasiicado como un totivirus (Familia Totiviridae). Los viriones son de forma icosahdrica, con un dimetro de aproximadamente 40 nm y una densidad de
1.366 en gradientes de cloruro de cesio. El genoma consiste de una sola molcula de ARN de doble
cadena (dsRNA). El genoma consiste de 7,560 pares de bases.
Rango geogrico y de especies afectadas
IMNV infecta camarones penaeidos. Infecciones naturales han sido observadas nicamente en
P. vannamei. Infecciones experimentales han sido logradas con P. stylirostris y P. monodon. IMNV es
una enfermedad que se descubri por primera vez en la costa del nordeste de Brasil. Posteriormente
se disemin al sureste de Asia (Java, Indonesia) en donde se piensa fue introducido a travs de la importacin de camarones P. vannamei infectados.
La transmisin de la enfermedad puede ocurrir horizontalmente a travs del agua y canibalismo. Se piensa que la transmisin vertical es bastante probable, pero no ha sido demostrada experimentalmente.
La enfermedad de IMN no es la misma que la conocida como enfermedad de la cola blanca.
Ambas enfermedades resultan en la necrosis del msculo esqueltico y aparentemente los signos son
muy similares. Sin embargo, la enfermedad de las colas blancas es causada por un virus completamente diferente a IMNV (ver PvNV, ms adelante).
Los estados de vida del camarn afectados por IMNV incluyen postlarvas, juveniles y adultos.
Tejidos/rganos afectados
Tpicamente se incluyen el msculo esqueltico (y el cardiaco con menor frecuencia), tejido
conectivo, hemocitos, y las clulas parenquimales del rgano linfoide.
Lesiones observadas a nivel macroscpico
Los camarones infectados presentan reas necrticas en el msculo estriado (esqueltico) del
abdomen (cola). Estas reas necrticas son multifocales en sus inicios y posteriormente se vuelven
ms difusas, incrementando en tamao hasta que se expandan abarcando casi la totalidad de la cola
(Fig. 2.6.1). En estados avanzados de la enfermedad, las zonas necrticas adquieren una coloracin
anaranjada-rojiza (Fig. 2.6.2). Los camarones continan alimentndose a pesar de estar infectados
severamente. Si estos camarones son estresados (por ejemplo, al ser capturados con una atarraya,
135
o debido a cambios drsticos en la salinidad, temperatura, etc.) se pueden volver moribundos y la

mortandad puede sobrevenir rpidamente y continuar por varios das.
Si se hace una diseccin en fresco para exponer el rgano linfoide, se puede observar que
ambos lbulos se encuentran hipertroiados, adquiriendo un tamao 3-4 veces mayor de lo normal.
Lesiones observadas a nivel microscpico
Preparaciones de msculo en fresco ya sea teidas o sin teir, muestran la presencia de anormalidades (por ejemplo, ausencia de estriaciones, ibras deformes o fragmentadas, etc.). Preparaciones del rgano linfoide en fresco, pueden poner de maniiesto la presencia de masas esfricas
(esferoides), entre los tbulos normales.
Procedimientos de diagnstico
Diagnstico presuntivo. Basado en historial del caso y signos clnicos descritos anteriormente.
Diagnstico conirmatorio. Basado en uno o ms de los siguientes mtodos:
Histopatologa. Utilizando tcnicas de rutina con tinciones de hematoxilina-eosina (H&E), se
puede observar que en los camarones infectados se presenta una necrosis de tipo coagulativo en las
ibras musculares estriadas acompaada frecuentemente por edema (Fig. 2.6.3). En algunos casos, es
posible observar una combinacin de lesiones nuevas o agudas y viejas o crnicas. El progreso
de las lesiones parece ir de los niveles ms agudos en donde predomina la necrosis coagulativa, hasta
los estadios ms crnicos en donde se observa primero iniltracin hemoctica y posteriormente una
matriz suelta de ibrocitos y ibras de tejido conectivo mezcladas con ibras musculares recin regeneradas. El anlisis histolgico tambin puede poner de maniiesto la hipertroia del rgano linfoide
ocasionada por la acumulacin de esferoides. Esta lesin se presenta de manera muy consistente en
camarones durante las fases agudas y crnicas de la enfermedad. Con frecuencia, estos esferoides se
pueden observar tambin en otras partes del cuerpo del camarn, incluyendo el corazn, branquias,
glndula antenal, cordn ventral nervioso, tejido conectivo, etc. El anlisis histolgico tambin puede
poner de maniiesto, la presencia de cuerpos de inclusin intracitoplsmicos en las clulas del msculo esqueltico, rgano linfoide y/o tejido conectivo (Fig. 2.6.4).
RT-PCR. Utilizando los mtodos descritos por Poulos et al., 2006, o bien alguno de los kits
disponibles en el mercado (por ejemplo, IQ2000). Debido a la gran similitud entre las lesiones producidas por IMNV y por PvNV (ver ms adelante), es aconsejable combinar el anlisis histolgico con
el RT-PCR, o con pruebas de hibridacin in situ y sondas genticas especicas, para poder obtener un
diagnstico conirmatorio coniable (Fig. 2.6.5)
136

IMNV
Figura 2.6.1. Signos clnicos de la enfermedad causada por IMNV. Camarones P. vannamei tomados de un estanque de cultivo. La
necrosis del msculo es evidente en forma de
reas opacas de color blanquecino.
Figura 2.6.2. Signos clnicos de la enfermedad causada por IMNV. En estados ms

avanzados, el msculo necrosado puede
adquirir una coloracin anaranjada/rojiza,
como se puede observar en el especimen
superior.
Figura 2.6.3. Necrosis de tipo coagulativo

acompaada de inlamacin hemoctica y
ibrosis. Como referencia, se puede observar
una porcin de msculo esqueltico normal
en la esquina superior derecha. Tincin: Hematoxilina/eosina-loxina de Mayer-Bennett.
Barra= 50 m.
137
Figura 2.6.4. Las lechas muestran algunos

ejemplos de cuerpos de inclusion intracitoplsmicos, de tipo basilo, dentro de un
grupo de clulas del msculo. Tincin: Hematoxilina/eosina-loxina de Mayer-Bennett.
Barra= 20 m
Figura 2.6.5. Corte histolgico de msculo

esqueltico sometido a una prueba de hibridacin in situ con una sonda gentica especica para la deteccin de IMNV. El precipitado de color azl obscuro indica los lugares
en donde la sonda ha reaccionado con el virus. Tincin de contraste: Caf de Bismarck.
Barra= 50 m.
138
2.7
mionecrosis infecciosa viral IMNV y sus implicaciones en el cultivo de camarn brasileo
Alitiene Moura Lemos Pereira, Emiko Shinozaki Mendes, Tereza Cristina Vasconcelos Gesteira,
Veronica Arns da Silva, Andreia Benedita Poletto4
Embrapa Meio-Norte, BR 343, km 35, C.P.341, Parnaba, PI, Brasil, alitiene.pereira@embrapa.br
Universidade Fed. Rural de Pernambuco, Av. Dom Manoel de Medeiros, s/n. Recife, PE, Brasil, esmendes@dmv.
ufrpe.br
Universidade Fed. do Cear, LABOMAR, Av. da Abolio, 3207, Fortaleza, CE, Brasil, gesteira@ufc.br
PNPD/CAPES, Embrapa Meio-Norte, BR 343, km 35, C.P.341, Parnaba, PI, Brasil, andreiapol@yahoo.com.br
Traducido del Portugus al Espaol por: Roberto Chamorro, Interprete Pblico Autorizado Panam.
Introduccin
El cultivo de camarn brasileo concentr sus esfuerzos en el desarrollo de un sistema de
produccin con la especie P. vannamei nativa del Ocano Pacico, luego de problemas de baja
productividad y adaptacin al medio ambiente con especies nativas y exticas en los aos 90. Esta
especie ampliamente estudiada, demostraba un buen desempeo zootcnico, rusticidad y adaptabilidad, adems de que ya se conoca su tecnologa de produccin y formulacin para alimento
balanceado, con base en sus requerimientos nutricionales. El factor decisivo para la escogencia de
esta especie, fue el incremento exponencial de produccin obtenido en Brasil, a partir del dominio
de la tecnologa para produccin en cautiverio, resultando en aumento de divisas para el sector productivo. (Figura 2.7.1).
A pesar de las mejoras econmicas y del crecimiento de la produccin (70% al ao), pasando
de 2.880 toneladas en 1996 a 25.000 toneladas en 2000, el sistema de cultivo utilizado con esta
nueva especie present fallas, debido a problemas de adaptacin, ausencia de tcnicas adecuadas de
cultivo y aumento de la intensiicacin del sistema de produccin, lo cual no fue acompaado de un
aumento importante del rea cultivada (MAPA, 2001).
Figura 2.7.1: Desempeo de la industria Brasilea de camarn cultivado, 1997-2012.

Fuente: Asociacin Brasilea de Criadores de Camarn - ABCC (Rocha, 2013).
139
El sistema intensivo de cultivo de camarn, fue empleado en muchos casos con instalaciones
inadecuadas, sin el monitoreo y conocimiento tcnico necesarios. La inexistencia de medidas de
seguridad permiti el libre trnsito de larvas y reproductores entre los diversos estados, sin el mnimo
control sanitario para el transporte de camarones.
Considerando que las enfermedades infecciosas ocurren con frecuencia en los cultivos de
todo el mundo y nuevas epizootias de origen viral son identiicadas a cada ao, ya haban sido registradas enfermedades causadas por virus, bacterias y protozoarias en las incas camaroneras brasileas, sin reportes de prdidas importantes (Gesteira, 2006).
Sin embargo, la competencia con el aparecimiento de mionecrosis infecciosa viral (IMNV,
Infectious Myonecrosis Virus), problemas cambiantes ambientales observados en los aos de 2005
hasta 2009, provocaron una cada de la produccin, segn la Asociacin Brasilea de Criadores de
Camarn ABCC, la camaronicultura brasilea present signos de crecimiento en 2010, cuando se
produjeron 75.000 toneladas (Rocha, 2013) (Fig. 2.7.1).
Surgimiento de la Mionecrosis Infecciosa Viral
El primero reporte de IMNV en Brasil, se dio en septiembre de 2002 en una camaronera del
Estado del Piau y diagnosticada despus en otros estados del nordeste brasileo, con registros de
mortalidad diaria, principalmente a partir de 7g en animales que presentaron como principal signo
clnico, la opacidad en el msculo abdominal (Nunes et al., 2004; Andrade et al., 2007; Pinheiro et
al., 2007). La ocurrencia de la mionecrosis permaneci restringida a esta regin hasta la conirmacin
de su presencia en Indonesia (Senapin et al., 2007).
Existen dudas sobre una posible ocurrencia previa de esta enfermedad, debido a que signos
semejantes haban sido reportados hace 35 aos y diferentes autores ya relacionaban la necrosis
muscular con factores climticos o con situaciones de extremo estrs tales como lluvias intensas,
elevaciones bruscas de temperatura y salinidad, reduccin del nivel de oxgeno, alta densidad de
poblacin y la presencia de polucin qumica en el agua (Lakshmi et al., 1978; Lightner, 1988).
Esas enfermedades, en aquel momento llamadas Necrosis Muscular Idioptica, fueron diagnosticadas en P. aztecus en EUA en 1970 (Rigdon & Baxter, 1970) y en Mxico en 1978, y relaciona
con cambios de temperatura y salinidad, mostrando similitud con la enfermedad observada en los
EUA (Lakshmi et al., 1978). Fue tambin reportada en la especie nativa Farfantepenaeus subtilis en la
zona costera del estado de Piau en los aos 80 (Lightner, 1988).
Ninguno de los reportes anteriores presentaba una mortalidad de 70% y la ocurrencia de estos
brotes fue considerada como una enfermedad de manejo, la cual sera solucionada con una mejora
de las condiciones ambientales y la correccin de las eventuales fallas tcnicas realizadas por los
tcnicos de campo. As como otras enfermedades, esta tambin pareca ser multifactorial (Thrusield,
2004), habiendo un agente principal en el caso del virus de la mionecrosis infecciosa.
Fueron emitidas algunas hiptesis sobre la causa de esta mionecrosis, como por ejemplo la
ocurrencia de la enfermedad del algodn causada por un microsporidio y que provoca prdida de
la transparencia del msculo abdominal, el sndrome del encalambramiento (CMS) o, desequilibrio
mineral en el alimento. Debido a la falta de precisin para determinar la causa de la enfermedad, esta
pas a ser llamada Necrosis Idioptica Muscular (NIM); es decir, de causa desconocida.
En los primeros meses de 2003 y durante el invierno, los estados del Cear y Piau, se vieron
afectados por precipitaciones elevadas, con cadas bruscas de la salinidad (de 50 ppt a 10 ppt),
temperaturas elevadas y elevada aloracin de cianobacterias en los estanques. Estas condiciones
ambientales agravaron la aparicin de los signos clnicos observados anteriormente en camarones
140
cultivados en Piau y se hicieron los primeros registros de camarones enfermos en camaroneras del
estado de Cear (Nunes et al., 2004).
Se hicieron cambios en la metodologa de cultivo y en los tratamientos para la mionecrosis,
tales como incremento del recambio diario de agua (>20%), aplicacin de cal en los estanques (150
a 300 kg/ha) y reduccin de la densidad de cultivo. Sin embrago, la utilizacin de esas medidas, la
elevacin de la salinidad por disminucin de las lluvias, no logr eliminar la mionecrosis del pas.
Segn la Asociacin Brasilea de Criadores de Camarn ABCC, las prdidas debido a IMNV fueron
estimadas en 20 millones de dlares slo durante 2004.
Diseminacin de la enfermedad
Varios profesionales y productores del Nordeste de Brasil, registraron las alteraciones ms
comunes en los ambientes de cultivos y su relacin con la evolucin de la enfermedad. Sin embargo,
como se trataba de una nueva enfermedad, fue difcil su caracterizacin. A pesar de lo anterior, el
intercambio de informacin entre el sector cientico y productivo del pas fue mnimo y la mayora
de los productores no saba lo que estaba ocurriendo. Para agravar la situacin, la ausencia de barreras sanitarias en la actividad acucola del pas, permiti la rpida diseminacin de la enfermedad
entre las camaroneras de la Regin Nordeste de Brasil, mucho antes de que se conociera la verdadera
dimensin del problema.
Con la diseminacin de la enfermedad en ambientes adversos, el rango de los brotes se fue
ampliando llegando a afectar sistemas de produccin con las siguientes condiciones:
Fases de pre-cra con densidades de 35 a 120 Pls/l
Fase de engorde con camarones de 3 g promedio
En densidades de 15 a 80 camarones/m2
Camarones procedentes de diferentes laboratorios de produccin de post-larvas
Cultivos que utilizan variadas marcas de alimentos comerciales
En cultivos con la variables fsicas y qumicas aceptables para la especie
La supervivencia promedio obtenida fue de 30 a 40% con un FCA (factor de conversin alimenticia )> 2:1
Algunos productores cultivaron P. vannamei en agua dulce durante el perodo de gran incidencia de mionecrosis y no reportaron problemas con la enfermedad. Pero el virus puede presentarse
tambin en animales cultivados en agua dulce y afectar todos los estadios de desarrollo.
Etiologa
Bioensayos realizados en laboratorio, por Graf et al. (2003), exponiendo individuos presumiblemente saludables a tejidos de camarones con signos clnicos de mionecrosis, mostraron que el
mayor vector de transmisin de esa patologa, fue la ingestin directa de los tejidos contaminados, caracterizando por tanto, su transmisin horizontal.
Despus de la conirmacin de la naturaleza infecciosa, a travs de desafos por inyecciones y

preparacin de tejidos contaminados en individuos libres de patgenos conocidos (SPF, Speciic Pathogen Free) el agente causante de IMN fue identiicado como un virus perteneciente
a la Familia Totiviridae (Lightner & Pantoja, 2004). La puriicacin y caracterizacin del virus
denominado virus de la mionecrosis infecciosa, fueron efectuadas por Poulos et al. (2006). La
partcula viral tiene forma icosahdrica y mide 40 nm de dimetro. Su genoma est formado por
una molcula de RNA de doble cadena (dsRNA) de 7.560 bp.
141
Silva et al (2014) seal que machos y hembras sexualmente maduros despus de desaiados con
IMNV en L. vannamei, presentaran el virus en ovario y espermatforo, despus de diagnstico
por PCR, lo que indica una ruta vertical de la transmisin para la infeccin.
Esta enfermedad conocida como IMNV (Necrosis Infecciosa Muscular o Mionecrosis Infecciosa
Viral), tuvo su primer registro en los estados del Nordeste de Brasil y ms recientemente en P.
vannamei cultivado en Indonesia (Senapin et al., 2007). La deteccin fue hecha utilizando un kit
comercial de RT-PCR y anlisis subsecuentes revelaron que la muestra del IMNV de Indonesia
tena 99,6% de similitud con la secuencia del cido nucleico del IMNV brasileo registrado en
GeneBank. Segn algunos autores y como informacin extra oicial, hubo entrada irregular de
reproductores provenientes del Brasil, en la Isla de Java.
Adems del diagnstico de la enfermedad en todas las fases de cultivo (post-larva, juvenil y adulto) de la especie P. vannamei, tambin se han mostrado susceptibles al virus IMNV, camarones de
las especies P. stylirostris y P. monodon, presentando signos clnicos y alteraciones en los tejidos
caractersticos de la enfermedad (Tang et al., 2005). Coelho et al. (2009) en especmenes de Farfantepenaeus subtilis sometidos a pruebas de desafo con el virus de IMNV por un perodo de 30
das, mostr susceptibilidad probada por anlisis histopatolgico y molecular.
Mtodos de Diagnstico
El diagnstico puede ser presuntivo con base en la sintomatologa observada macroscpicamente, siendo el foco principal la prdida de transparencia del msculo abdominal. Tambin se
puede detectar la enfermedad a travs de estudios histopatolgicos, cuando son investigadas posibles
alteraciones en los rganos internos y tejidos. La hibridacin in situ fue desarrollada y optimizada
como una herramienta de diagnstico por Tang et al. (2005). Otro mtodo molecular para la deteccin del virus es la RT-PCR Andrade et al. (2007) mostraron que el RT-PCR usado con sondas TaqMan
resulta ser un mtodo de diagnstico de alta sensibilidad.
Puthawibool et al. (2009), sugirieron que un diagnstico rpido y prctico del IMNV puede
realizarse a travs de la tcnica loop-mediated isotermic ampliication (LAMP) del material genmico, con alta especiicidad y sensibilidad, garantizando un diagnstico seguro y el monitoreo de las
enfermedades en las camaroneras. Los autores tambin demostraron que la combinacin de la transcriptasa reversa y LAMP (RT-LAMP) seguida por la deteccin del cido nucleico usando un cromatographic lateral low dipstick (LFD), permite un diagnstico en un intervalo del tiempo de 75 minutos.
Sin embargo, estas tcnicas son ms soisticadas y dependen de laboratorios y tcnicos de alto nivel.
Signos Clnicos
En el inicio del brote de la IMNV, los camarones presentan opacidad focal o multifocal del
msculo del abdomen (Fig. 2.7.2) y en casos de mayor severidad, se tornaban rojizos, principalmente
en el ltimo segmento (Fig. 2.7.3). Los individuos quedaban aletargados, presentando baja conversin alimenticia, abdomen encalambrado (en algunos casos), expansin de los cromatforos, reduccin de la tasa de crecimiento y tiempo elevado de coagulacin de la hemolinfa.
De acuerdo con lo reportado por Gesteira (2006), los grados de infeccin pueden cambiar y
presentar cuadros clnicos diversos:
Leve a moderado baja mortalidad y menos de 10% de los camarones cultivados presentan
signos clnicos.
Aguda - elevada mortalidad, ms de 10% de la poblacin cultivada presenta signos clnicos con
nivel de severidad de medio a alto.
142
Crnica mortalidad baja, pero persistente y signos clnicos perceptibles en menos de 5% de

los individuos. En ese estado se pueden presentar signos agudos, cuando se presentan fallas de
manejo o cualquier otro evento que produzca en los camarones una condicin de inmunosupresin.
Aparentemente, la mionecrosis es una enfermedad que surge como consecuencia de fallas de

manejo, o en sistemas sobrecargados de materia orgnica. Todos los eventos han tenido en comn el
desequilibrio de condiciones de cultivo, denominadas detonantes por muchos autores, las cuales
desencadenan la enfermedad e incluyen el exceso de lluvias, presencia elevada de plancton, infestacin elevada de parsitos como gregarinas o, accin de bacterias oportunistas como los vibrios.
Como consecuencia de la enfermedad, las incas camaroneras han adoptado buenas prcticas
de manejo que incluyen bajar las densidades de siembra y buen tratamiento de suelo entre los ciclos
de cultivo, entre otras. Con stas, se obtienen buenos resultados de produccin inal, a pesar que se
detecten lesiones sugestivas de mionecrosis durante el anlisis presuntivo o conirmatorio durante el
ciclo. La presencia de putrefaccin en el ltimo segmento abdominal que se observ al principio de
los brotes en Brasil (2003), prcticamente no se observan en la actualidad.
Apolinrio (2009) realiz estudios en camaroneras del Estado de Cear en las estaciones de
lluvia y seca, encontrando las mayores ocurrencias de individuos portadores de IMNV en el periodo
lluvioso, concordando con los datos colectados por Morales-Covarrubias et al. (2011) en el Estado
de Piau. Pero Silva et al. (2010), estudiando la ocurrencia en el Estado de Pernambuco, no encontr
camarones con presencia de IMNV en el perodo de lluvia.
Estos datos indican que el gatillo para la presencia de la infeccin se correlaciona con ms de
un factor ambiental. Anlisis de datos, procedentes de estos tres estados, indicaron que la presencia
de esta enfermedad est correlacionada a la variacin de salinidad, altas proporciones de amonio,
pH, materia orgnica en el suelo (Figura 2.7.4), aloraciones de cianobacterias y al tiempo de cultivo.

IMNV
Figura 2.7.2. Camarn portador de IMNV

presentando opacidad del msculo abdominal. Foto Cortesa de A. Pereira.
143
Figura 2.7.3. Camarones con mionecrosis infecciosa. Foto Cortesa de A. Pereira.
Figura 2.7.4. Suelo de estanque despus de

la cosecha, presentando elevado contenido
de materia orgnica (> 2%). Foto Cortesa de
A. Pereira.
Aunque la presencia de esta enfermedad ha llegado a 33% de los camarones diagnosticados

por histopatologa, la mayora era asintomtica, sin registro de mortalidades elevadas (por arriba de
30%). Segn Tsai et al. (1999), un virus considerado inicialmente como altamente patgeno puede
sufrir mutaciones y tornarse menos agresivo, elevando la supervivencia de los animales cultivados.
Histopatologa
Los exmenes histopatolgicos muestran diferentes alteraciones en rganos y tejidos afectados por el IMNV, dependiendo del grado de severidad de la enfermedad. El aumento en la talla del
rgano linfoide es comn y tambin es frecuente observar esferoides en este rgano (lymphoid organ
spheroids- LOS) (Fig. 2.7.5). Pueden ser encontrados LOS ectpicos en tejido conjuntivo, msculo
del corazn (Fig. 2.7.6 y 2.7.7) y prximos a los tbulos de las glndulas antenales. Las lesiones del
tejido muscular dependen del grado de severidad de la infeccin, pudindose presentar en la fase inicial una iniltracin hemoctica (Fig. 2.7.8 y 2.7.9). La fase aguda se caracteriza por ser una necrosis
de coagulacin, con presencia de edema y un elevado dao en las ibras musculares, muchas veces
sustituidas por tejido conjuntivo (Fig. 2.7.10). En esta fase, se observan cuerpos de inclusin tpicos de
enfermedades virales, detectados en clulas musculares, tejido conectivo y hemocitos con necrosis
de licuefaccin (Fig. 2.7.11), con iniltracin hemoctica en msculo afectado (inlamacin) y ibrosis,
ocurre en camarones en fase crnica de la enfermedad, cuando los LOS ectpicos son ms comnmente visualizados (Fig. 2.7.12) (Lightner & Pantoja, 2004; Lightner et al., 2004; Gesteira, 2006).
144

IMNV
Figura 2.7.5. rgano linfoide mostrando la

presencia de esferoide (lecha). H & E. Foto
cortesa: T.C.V. Gesteira.
Figura 2.7.6. Corte histolgico de bajo aumento con presencia de mltiples LOS en
tejido cardiaco (lechas). Tincin H&E, ampliicacin 40X. Foto cortesa de A. Pereira.
Figura 2.7.7. Corte histolgico mostrando

la presencia de esferoides ectpicos en la
regin cardiaca (lechas). Tincin H&E, ampliicacin 400X. Foto cortesa de A.Pereira.
145
Figura 2.7.8 y 2.7.9. Mionecrosis en la fase

aguda, acompaada de iniltracin hemoctica y ibrosis. Foto cortesia: T.C.V. Gesteira.
Figura 2.7.10. Lesiones coagulativas musculares resultantes de la accin del virus de la

mionecrosis H & E. Foto cortesa: T.C.V. Gesteira.
146
Algunos camarones asintomticos presentaron diagnstico positivo por RT-PCR para IMNV,
sin lesiones en el abdomen, pero s en la parte inferior del cefalotrax, con lesiones coagulativas
focales bien deinidas (Fig. 2.7.13), caracterizando tambin como una fase crnica de la infeccin.
Figura 2.7.11. Necrosis de licuefaccin resultante de la accin del virus de la mionecrosis infecciosa. H & E. Foto cortesa de A.
Pereira.
Figura 2.7.12. Seccin longitudinal del tejido

muscular del camarn P. vannamei mostrando la fase crnica de la infeccin, mostrando
ibrosis y presencia de LOS (lechas) Foto cortesa: D. F. Apolinario (2008).
Figura 2.7.13. Corte longitudinal del cefalotrax presentando lesiones coagulativas focales. Foto cortesa: A.B. Poletto.
147
Diagnstico diferencial
La necrosis muscular en el abdomen de los camarones, es una lesin que puede ocurrir como
consecuencia de estrs, bajas de oxgeno, alta densidad de siembra, cambio brusco de temperatura o
salinidad (Lakshmi et al., 1978; Rigdom & Baxter, 1970) y tambin puede ser resultante de la accin
de un agente infeccioso, como el caso de la IMNV.
A pesar de la importancia de la histopatologa como herramienta de diagnstico conirmatorio, el uso de sondas geonmicas, como hibridacin in situ o PCR, garantizan una mayor sensibilidad
y especiicidad en el diagnstico. Un ejemplo es la necrosis muscular detectada en camarones de la
especie P. vannamei procedentes de Belice. Segundo Tang et al, (2007), los individuos presentaban la
misma opacidad muscular en el abdomen, con caractersticas histopatolgicas similares a aquellas
observadas en portadores de IMNV. Despus del examen utilizando las tcnicas de hibridacin in
situ y RT-PCR, los resultados fueron negativos para IMNV, sugiriendo que la enfermedad era causada
probablemente por otro virus RNA. Los autores encontraron 69% de similitud de este virus de Belice
con el nodavirus del Macrobrachium rosenbergii, adoptando este nuevo virus la denominacin de
PvNV (Penaeus vannamei nodavirus).
Adems de agentes virales, las bacterias tambin pueden causar opacidad muscular que se
asemeja a la observada en IMNV (Lightner, 1996), como por ejemplo los vibrios y las pseudomonas.
La diferencia puede ser vista a travs de histopatologa (ausencia de cuerpos de inclusin) o mediante
pruebas moleculares como RT-PCR.
Consideraciones inales
Considerando las caractersticas del sistema inmune de los camarones, no existe un tratamiento especico para la IMNV. Como cualquier enfermedad, las medidas preventivas son las ms econmicas y eicaces. Un buen manejo de los cultivos debe incluir la adopcin de normas de bioseguridad
para evitar la entrada y establecimiento de nuevos patgenos y permitir una mejor supervivencia en
la presencia de enfermedades.
Actualmente, en muchas incas camaroneras algunas de las prcticas de manejo de cultivos
fueron cambiadas principalmente por reduccin de la densidad de siembra (10 a 40 camarones/m2),
tratamientos del suelo entre los cultivos, preparacin y fertilizacin de los estanques y vaciado sanitario entre los ciclos de cultivo.
En algunos laboratorios productores de Pls, fueron implementados programas de mejoramiento gentico, inclusive con importacin de reproductores SPF y SPR (resistente a patgenos especicos - Speciic Pathogen Resistence) que podran proporcionar Pls de buena calidad y con menores
posibilidades de enfermedad por IMNV. En otros laboratorios, a pesar de no tener implementada esas
prcticas, han sido cuidadosos con la bioseguridad y por ello, en cultivos que son bien manejados, no
se detecta una incidencia elevada de IMN. En la actualidad, a pesar de que en Brasil se pueden observar lesiones sugestivas de mionecrosis durante anlisis presuntivos o conirmatorios en camarones,
la supervivencia promedio es de 70%, a proporcionar ingresos al sector productivo.
Todava queda la pregunta: El aumento de la supervivencia y la disminucin de la severidad
de los signos clnicos son evidencia de acomodacin viral o el resultado directo de la utilizacin de
las mejores prcticas de produccin?
148
2.8
Penaeus vannamei nodavirus (PvNV)
Enfermedad de la cola blanca.
Agente Etiolgico
Penaeus vannamei nodavirus.
Agente
PvNV es un virus tentativamente asignado a la Familia Nodaviridae. Los viriones son de forma
icosahdrica, con un dimetro de aproximadamente 22 nm. El genoma consiste de dos molculas de
ARN de cadena sencilla (ssRNA).
Infecciones naturales han sido observadas nicamente en P. vannamei. Infecciones experimentales han sido logradas con P. monodon. PvNV fue descubierto por primera vez en Belice y
aunque se sospecha que pueda estar presente en otros pases de Centro y Sudamrica; hasta la fecha
no se sabe de brotes en otros pases los cuales hayan sido debidamente conirmados.
La transmisin de la enfermedad puede ocurrir horizontalmente a travs de canibalismo y posiblemente a travs del agua. Existe la posibilidad de transmisin vertical, pero no ha sido demostrada
experimentalmente.
Hasta el momento, los estados de vida del camarn que se sabe son afectados por PvNV
incluyen juveniles y sub-adultos. Se ignora el efecto de la enfermedad en adultos reproductores,
estados larvales.
Tpicamente se incluyen el msculo esqueltico, tejido conectivo, hemocitos, y las clulas
parenquimales del rgano linfoide.
Al igual que con IMNV, los camarones infectados presentan reas necrticas en el msculo estriado (esqueltico) del abdomen (cola). En sus inicios, las reas necrosadas son relativamente pequeas y multifocales posteriormente aumentando su tamao hasta coalescer abarcando casi la totalidad
de la cola (Fig.2.8.1). Aunque no muy frecuentemente, en estados avanzados de la enfermedad, las
zonas necrosadas pueden volverse rojizas. Los camarones continan alimentndose a pesar de estar
infectados severamente. Si estos camarones son estresados (por ejemplo, al ser capturados con una
atarraya, o debido a cambios drsticos en la salinidad, temperatura, etc.) se pueden volver moribundos y la mortandad puede sobrevenir rpidamente y continuar por varios das.
Si se hace una diseccin en fresco para exponer el rgano linfoide, es posible observar hipertroia en ambos lbulos, adquiriendo un tamao 3-4 veces mayor de lo normal.
149
Lesiones observadas a nivel microscpico

Preparaciones de msculo en fresco ya sea teidas o sin teir, muestran la presencia de anormalidades (por ejemplo, ausencia de estriaciones, ibras deformes o fragmentadas, etc.). Preparaciones del rgano linfoide en fresco, pueden poner de maniiesto la presencia de masas esfricas
(esferoides), entre los tbulos normales (Fig. 2.8.2).
Histopatologa. Utilizando tcnicas de rutina con tinciones de hematoxilina-eosina (H&E), se
puede observar que en los camarones infectados se presenta una necrosis de tipo coagulativo en las
ibras musculares estriadas acompaada frecuentemente por edema. En algunos casos, es posible
observar una combinacin de lesiones nuevas o agudas y viejas o crnicas. El progreso de las
lesiones parece ir de los niveles ms agudos en donde predomina la necrosis coagulativa, hasta los
estadios ms crnicos en donde se observa primero iniltracin hemoctica y posteriormente una
matriz suelta de ibrocitos y ibras de tejido conectivo mezcladas con ibras musculares recin regeneradas. El anlisis histolgico tambin puede poner de maniiesto la hipertroia del rgano linfoide
ocasionada por la acumulacin de esferoides. Esta lesin se presenta de manera muy consistente en
camarones durante las fases agudas y crnicas de la enfermedad. Es posible tambin observar cuerpos basilos intracitoplsmicos dentro de las clulas del msculo esqueltico, el rgano linfoide y
el tejido conectivo.
RT-PCR. Utilizando los mtodos descritos por Poulos et al. 2006, o bien alguno de los kits
disponibles en el mercado (por ejemplo, IQ2000). Debido a la gran similitud entre las lesiones producidas por IMNV y por PvNV, es aconsejable combinar el anlisis histolgico con el RT-PCR, o con
sondas genticas especicas por medio de hibridacin in situ, para poder obtener un diagnstico
conirmatorio coniable.

PvNV
Figura 2.8.1. Signos clnicos de la enfermedad causada por PvNV. Camarones P. vannamei mostrando focos de necrosis en el
msculo esqueltico, causada por Penaeus
vannamei nodavirus, PvNV (ejemplos marcados con lechas).
150
Figura 2.8.2. Lesiones observadas a nivel histolgico. A) Necrosis del msculo esqueltico, acompaada de iniltracin hemoctica. B) Cuerpos de inclusion intracitoplmicos, de tipo basoflico, en clulas del msculo esqueltico. D) Cuerpos de inclusion intracitoplmicos, de tipo basoflico, en clulas del rgano linfoide. Tincin:
Hematoxilina/eosina-loxina de Mayer-Bennett. Barras= 25 m.
151
2.9
General
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164
Captulo 3
Enfermedades bacterianas de
camarones
166
Captulo 3 - Enfermedades bacterianas de camarones
Captulo 3
Enfermedades bacterianas de camarones
Mara Soledad Morales-Covarrubias y

Bruno Gmez-Gil
Centro de Investigacin en Alimentacin y Desarrollo A. C. Unidad Mazatln en Acuicultura y
Manejo Ambiental. Mazatln, Sinaloa.
marisol@ciad.mx; bruno@ciad.mx
Introduccin
Las luctuaciones de temperatura, salinidad, oxgeno, pH, nutrientes orgnicos e inorgnicos,
inluyen en las comunidades bacterianas presentes en los estanques de cultivo, dando como resultado un aumento en el nmero o haciendo que proliferen patgenos nocivos provocando mortalidades
en los organismos cultivados. Los factores ambientales detonan la rpida multiplicacin de las bacterias oportunistas, localizadas sobre todo en el tracto digestivo, branquias y cutcula. El exoesqueleto
provee una barrera fsica efectiva para los patgenos que tratan de penetrar la supericie externa de
los crustceos, as como el intestino en la regin anterior y posterior. Sin embargo, Vibrio sp. est
entre las bacterias quitinoclsticas asociadas con la enfermedad del exoesqueleto y puede ingresar a
travs de las heridas. Las branquias parecen ser susceptibles a la penetracin de bacterias debido a
que estn cubiertas por exoesqueleto delgado, pero stas se limpian debido al constante movimiento
de las dendobranquias. El intestino medio que incluye a la glndula digestiva o hepatopncreas no
est revestido por un exoesqueleto y, por consiguiente, parece ser el sitio probable de penetracin de
patgenos presentes en el agua, alimento y sedimentos. Las enfermedades de origen bacteriano reportadas en los sistemas de cultivo son causadas principalmente por Vibrio harveyi, V. parahaemolyticus, V. penaeicida, V. nigripulchritudo, V. campbellii, Micrococcus sp. y Streptococcus sp.
3.1.
Sndrome de la Mortalidad Temprana (EMS) o Enfermedad de la Necrosis Aguda del Hepatopncreas (AHPND) - Situacin de Mxico
Recientemente, ha sido reportada esta enfermedad en camarn, causada por algunas cepas
de V. parahaemolyticus, el cual produce una toxina capaz de destruir el tejido y provocar disfuncin
en el hepatopncreas. El agente presumiblemente se transmite por va oral y coloniza el tracto gastrointestinal de los camarones causando mortalidad masiva durante los primeros 30 das de cultivo.
Fue reportada por primera vez a principios del 2009 cuando se detectaron, repentinamente, casos de
mortalidades masivas (60-80%) de camarones juveniles de cultivo en China. Como hasta ese momento era desconocido el agente causal de esta enfermedad, se le asign el nombre de Sndrome de Mortalidad Temprana (EMS por sus siglas en ingls). Posteriormente, durante 2010 y 2011, se registraron
mortalidades similares en Vietnam y Malasia; y estos nuevos casos compartan algunas caractersticas
con lo ocurrido en 2009. Durante el 2012, Tailandia tambin se vio afectada por la presencia de EMS
con mortalidades de camarn de cultivo de 20 a 30%. En Amrica en agosto de 2013, el doctor Donald Lightner conirm, en la Sexta Reunin del Comit Interamericano de Sanidad de los Animales
Acuticos, llevada a cabo en Yucatn, la presencia de la enfermedad en Mxico desconocindose
hasta la fecha la va por la cual lleg al pas causando mortalidades altas en produccin de camarn
de cultivo.
167
A inicios de abril del 2013, en Nayarit Mxico, se presentaron mortalidades masivas en camarones cultivados en los primeros 20 das de sembrados en granjas de cultivo semi-intensivo e intensivo. Casi de manera simultnea las mortalidades se presentaron por toda la regin noroeste (Sinaloa,
Sonora y Nayarit), que comprende ms del 90% de la produccin de camarn cultivado en Mxico.
Existe evidencia de que actualmente se presenta en cultivos en Chiapas, Colima, y Baja California
(valle de Mexicali), estos dos ltimos cultivos en agua de muy baja sanilidad.
El diagnstico de AHPND se realiza de manera presuntiva a nivel de hallazgos en el estanque
(signos clnicos) y de manera conirmatoria partir del estudio histopatolgico en camarones afectados
de manera individual y por reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). Por histopatologa presenta
una fase aguda, con desprendimiento progresivo de las clulas de los tbulos del hepatopncreas,
que avanza de la parte interna (proximal al intestino), hacia la externa (distal), quedando libres en la
luz de los conductos tubulares, presentando iniltracin hemoctica moderada, disfuncin de las clulas R, B, F y E que conforman el epitelio tubular, notndose en stas ltimas cariomegalia (aumento
nuclear) y una disminucin marcada en sus actividades de formacin de nuevas clulas (mitosis).
En fase terminal, se observa encapsulacin de clulas y tbulos, iniltracin hemoctica severa, presencia de aglomerados de bacterias en lumen de los tbulos, ndulos hemocticos con y
sin melanizacin en las paredes de los tbulos melanizados y necrticos con infeccin bacteriana
secundaria severa.
Los organismos colectados durante los eventos de mortalidad presentaron signos clnicos y
daos severos en hepatopncreas muy parecidos a los reportados para AHPND los cuales se describen a continuacin:
Signos clnicos
Los organismos presentaron nado errtico, encontrndose la mayora en el fondo, con hepatopncreas de coloracin plida o blanquecina, debido a prdida de la pigmentacin de la membrana
que recubre al rgano (Fig. 3.1.1) y atroia severa. Intestino con presencia entrecortada de alimento
y algunos sin alimento con una secrecin blanquecina y el msculo abdominal opaco con exoesqueleto suave.
Diagnstico
Por anlisis en fresco, la enfermedad presenta tres etapas de desarrollo (fases inicial, aguda y
terminal). La fase inicial, con hepatopncreas de color normal con deformacin tubular (Fig.3.1.2),
tbulos vacos de la regin apical los cuales van aumentando al entrar en fase aguda (Fig.3.1.3), en
esta etapa el hepatopncreas es de color plido o blanquecino y al realizar la diseccin longitudinal
la parte central del rgano esta licuefactivo y en fase terminal, el hepatopncreas se observa color blanquecino, atroiado (Fig.3.1.4) con tbulos melanizados, necrosis y presencia de cmulos de
bacterias en los ndulos y encapsulaciones (Fig.3.1.5). El intestino se observa sin alimento con una
secrecin blanquecina (Fig. 3.1.4).
168
Figura 3.1.1. Juvenil de P. vannamei

con hepatopncreas de coloracin plida (lecha negra) ablanquecina (lecha
roja), debido a prdida de la pigmentacin de la membrana que recubre al
rgano.
Figura 3.1.2. Montaje en fresco de hepatopncreas de P. vannamei deformacin tubular.
Figura 3.1.3. Montaje en fresco de hepatopncreas de P. vannamei con tbulos vacos de la regin apical.
169
Figura 3.1.4. Camarn con hepatopncreas expuesto atroiado de color blanquecino (lecha roja) y el intestino sin
alimento (lecha negra) con secrecin
blanquecina.
Figura 3.1.5. Montaje en fresco de hepatopncreas de P. vannamei donde se

observan tbulos melanizados encapsulados.
Por histologa, las muestras de camarones tomadas de estanques con mortalidad atpica
presentaron: fase inicial, clulas epiteliales elongadas hacia el lumen sin iniltracin hemoctica
(Fig.3.1.6), con agregados de bacterias en las setas del molino gstrico (criba) (Fig.3.1.7), en fase
aguda, se present desprendimiento progresivo de las clulas de los tbulos del hepatopncreas,
que avanza de la parte interna (proximal), hacia la externa (distal), quedando libres en la luz de
los conductos tubulares (Fig. 3.1.8) con iniltracin hemoctica moderada, disfuncin de las clulas
R, B, F y E que conforman el epitelio tbular, notndose en stas ltimas aumento nuclear. En fase
terminal, se observa encapsulacin de clulas y tbulos, iniltracin hemoctica severa, presencia
de aglomerados de bacterias en lumen de los tbulos, ndulos hemocticos con y sin melanizacin,
en las paredes de los tbulos melanizados y necrticos con infeccin bacteriana secundaria severa.
170
Figura 3.1.6. Corte histolgico e hepatopncreas de P. vannamei, donde se

observa la fase inicial de necrosis severa
del hepatopncreas (NSHP), con clulas epiteliales elongadas hacia el lumen
sin iniltracin hemoctica. Tincin de
hematoxilina-eosina.
Figura 3.1.7. Corte histolgico del Molino gstrico con agregados de bacterias
(criba). Tincin Giemsa.
Figura 3.1.8. Corte histolgico de P.

vannamei en fase aguda de necrosis
severa del hepatopncreas (NSHP), con
desprendimiento progresivo y agudo de
las clulas de los tbulos del hepatopncreas, que avanza de la parte interna (proximal), hacia la externa (distal),
quedando libres en la luz de los conductos tubulares. Tincin de hematoxilina-eosina.
171
3.2
EMS/AHPND Descripcin de la enfermedad en Asia y Amrica ( Carlos R. Pantoja y Donald
V. Lightner)
Necrosis hepatopancretica aguda; sndrome de la mortalidad temprana (Early mortality syndrome, EMS).
Agente Etiolgico
Vibrio parahaemolyticus.
Agente
El agente causante de AHPND ha sido identiicado como una cepa patgena de Vibrio parahaemolyticus, un miembro del clade Vibrio harveyi. Hasta este momento no se ha publicado informacin
sobre las caractersticas del genoma de esta cepa, sin embargo, es posible que contenga genes especicos para la produccin de una toxina hasta el momento no identiicada y posiblemente diferente a las
ya conocidas. Aparentemente, el mecanismo de accin de esta bacteria es a travs de la colonizacin
de las partes bucales, esfago y/o estmago, en donde al alcanzar un cierto nmero se desencadena
la produccin de la toxina(s) que al llegar al hepatopncreas resulta en la descamacin severa de los
tbulos y la necrosis del rgano (Tran et al., 2013a).
De acuerdo a Tran et al. 2013(b), algunas cepas de V. parahaemolyticus producen dos toxinas
termoestables conocidas como TDH y TRH, las cuales pueden causar gastroenteritis en humanos al
consumir alimentos contaminados. Sin embargo, la cepa de V. parahaemolyticus causante de AHPND
no produce estas toxinas y no representa un riesgo para la salud humana.
Rango geogrico
La enfermedad fue reconocida por primera vez al sur de China en 2009. Posteriormente, se
ha conirmado su presencia en Vietnam (2010), Malasia (2011), Tailandia (2012) y ms recientemente
en el Pacico mexicano (2013). Como se ha observado en el caso de otras enfermedades infecciosas
de los camarones penaeidos, es posible que el rango siga extendindose debido a la tendencia de la
industria al transporte regional e internacional de camarones vivos con propsitos de reproduccin.
Especies afectadas
Penaeus vannamei y Penaeus monodon.
Esta enfermedad se presenta tpicamente dentro de las primeras 4-5 semanas despus de haber
sembrado los estanques y por lo tanto, los camarones afectados tienden a ser juveniles de tallas pequeas. En algunos casos, se han observado brotes de la enfermedad despus de 7-10 das de la siembra.
Los signos observados comnmente incluyen nado errtico, tasa de crecimiento reducida, coloracin
plida o blanquecina del hepatopncreas y prdida de la consistencia del rgano, atroia notable del
hepatopncreas, cutcula blanda, intestino y estmago vaco o parcialmente lleno (Fig. 3.2.1), tbulos
melanizados dentro del hepatopncreas. Los camarones moribundos se hunden al fondo del estanque.
Las mortandades pueden alcanzar hasta 100% en unos cuantos das.
172

Basado en un historial de la granja/regin y la presencia de los signos clnicos mencionados
anteriormente.
Histopatologa. La enfermedad presenta tres fases distintivas con las siguientes caractersticas histolgicas, notablemente diferentes de un hepatopncreas con estructura normal (Fig. 3.2.2):
Fase aguda: Prdida de la funcin de las clulas que recubren los tbulos del hepatopncreas
(clulas R, B, F y E); desprendimiento agudo severo de las clulas de los tbulos del hepatopncreas con distribucin proximal a distal; es comn observar clulas desprendidas con ncleos aun
intactos; ausencia de infeccin bacteriana (de cualquier tipo) dentro del hepatopncreas; ausencia
de inlamacin intertubular o bien inlamacin muy leve. Estas lesiones se consideran diagnsticas
de AHPND y no se les ha observado en ningn otro tipo de infeccin bacteriana de camarones penaeidos (Fig. 3.2.3).
Fase de transicin: Inlamacin intertubular; melanizacin de las reas ms afectadas, principalmente en la regin proximal de los tbulos (las reas ms cercanas al intestino medio). Se puede
observar los inicios de infeccin bacteriana. Contina el desprendimiento de las clulas de los tbulos (Fig. 3.2.4).
Fase terminal: Inlamacin intertubular muy marcada; melanizacin multifocal extensa de
los tbulos necrosados; infeccin bacteriana secundaria masiva por especies oportunistas de Vibrio
sp. En esta etapa, es muy difcil diferenciar entre una vibriosis entrica comn severa y AHPND (Fig.
3.2.5).
Mtodos moleculares (PCR)
Hasta este momento, la enfermedad AHPND no se encuentra incluida todava en la lista de
la OIE para enfermedades de animales acuticos y por lo tanto no hay un mtodo recomendado por
esta organizacin para la deteccin del patgeno y el diagnstico de la enfermedad. Sin embargo,
existen ya mtodos de PCR que proveen resultados consistentes y cuya sensibilidad y especiicidad
han sido comprobadas. Nunan et al. (2014) ha diseado un mtodo especico para la deteccin
de V. parahaemolyticus causante de AHPND, el cual ampliica un fragmento de 470pb a partir de
una secuencia que se presenta nicamente en cepas de esta bacteria, pero no en otras cepas de V.
parahaemolyticus.
En Junio 2014, el Dr. Timothy Flegel, de la Universidad de Mahidol, en Tailandia report en
Shrimp News (www.shrimpnews.com) la disponibilidad de un mtodo de PCR, nuevo y mejorado,
para la deteccin del patgeno causante de AHPND. Este mtodo fue desarrollado por investigadores
del Centro de Investigacin para la Salud de Animales Acuticos CENTEX en Tailandia. Los detalles
del mtodo, incluyendo las secuencias de los iniciadores que estn disponibles en el mismo anuncio
publicado en Shrimp News.
Existe tambin ya un kit comercial, el cual es distribuido por la compaa GeneReach Biotechnologies.
173
Diagnstico diferencial para las Amricas

Existen otras dos enfermedades bacterianas en las Amricas que tambin afectan al hepatopncreas y aunque algunos de los signos clnicos pudieran llegar a parecerse, las caractersticas
histolgicas son muy distintas. Estas otras dos enfermedades son Hepatopancreatitis necrotizante causada por Hepatobacter penaei (Necrotizing hepatopancreatitis, NHP) y Necrosis hepatopancretica
sptica, causada por Vibrio spp. (Septic hepatopancreatic necrosis, SHPN)
H. penaei es una bacteria intracelular y por lo tanto las lesiones observables en el hepatopncreas a nivel histolgico son muy distintas a las que se presentan en casos de AHPND y SHPN. Las
clulas infectadas por H. penaei incrementan de tamao debido a la proliferacin bacteriana dentro
de su citoplasma y esta abundancia de bacterias resulta en un incremento marcado en la basoilia
(con tinciones de hematoxilina/eosina) de las clulas. Esto no ocurre con AHPND y SHPN (ver Tabla
1).
En el caso de SHPN, a pesar de ser causada por bacterias de tipo Vibrio, las lesiones son muy
distintas a las de AHPND, al menos durante las etapas iniciales de la enfermedad en donde es posible
encontrar presencia de bacterias en SHPN, as como inlamacin y melanizacin multifocal (lo cual
no sucede en el caso de AHPND en la etapa inicial).
La Tabla 1 muestra un resumen del diagnstico diferencial para AHPND en las Amricas.
174
Tabla 1. Histopatologa de la enfermedad de la necrosis hepatopancretica aguda (AHPND). Diagnstico diferencial para las Amricas
ENFERMEDAD
SHPN
(Necrosis
hepatopancretica
sptica, causada por
Vibrio spp.)
SHPN
(Necrosis
hepatopancretica
sptica, causada por
Vibrio spp.)
Desprendimiento agudo, masivo, de las clulas

de los tbulos del hepatopncreas (HP). Muchas
clulas conservan la morfologa normal del
ncleo al momento de desprenderse. Ausencia
de colonizacin bacteriana dentro de los tbulos
del HP durante la fase aguda. Ausencia de
inlamacin durante la etapa aguda. Avance de
las lesiones en sentido proximal a distal durante
la etapa aguda.
AFIRMATIVO
NEGATIVO
NEGATIVO
Desprendimiento crnico de las clulas

de los tbulos del HP. Las clulas
desprendidas muestran un citoplasma
basoflico debido a la replicacin
bacteriana intracelular.
NEGATIVO
AFIRMATIVO
NEGATIVO
Desprendimiento crnico de las clulas de

los tbulos del HP. Debido al proceso de
necrosis, las clulas desprendidas muestran
un citoplasma eosinilo acompaado
de picnosis del ncleo. La presencia de
bacterias sueltas dentro de los tbulos del
HP es comn a lo largo de la enfermedad.
NEGATIVO
NEGATIVO
AFIRMATIVO
TIPO DE LESION
EMS
(Sndrome de la mortalidad temprana)
175
NHP
(Hepatopancreatitis
necrotizante causada
por Hepatobacter
penaei)

AHPND
Figura 3.2.1. Penaeus vannamei con signos

clnicos de AHPND. El camarn de la izquierda muestra estmago e intestinos vacos
as como una coloracin plida y atroia de
la glndula digestiva (hepatopncreas). Estos
signos clnicos son tpicos del Sndrome de
la mortandad temprana, tambin conocido
como Sndrome de la necrosis hepatopancretidca aguda. El camarn de la derecha
esta libre de la enfermedad. Ambos camarones fueron colectados en una granja en
Vietnam (Foto cortesa del Dr. Loc Tran)
Figura 3.2.2. Hepatopncreas normal de un

camarn peneido (P. vannamei) mostrando
tbulos intactos con una abundancia de clulas vacuoladas (clulas tipo R) as como
ausencia de iniltracin hemoctica (inlamacin) y melanizacin. Tincin Hematoxilina-Eosina de Mayer-Bennett. Magniicacin
50X.
176

AHPND
Figura 3.2.3. Fase aguda de AHPND. Ntese

la ausencia de clulas tipo R y el desprendimiento o descamacin masivo de las clulas que recubren los tbulos del hepatopncreas. Uno de los tbulos muestra la porcin
distal an intacta, ilustrando la progresin de
las lesiones en direccin proximal a distal. En
esta fase no se observa colonizacin bacteriana dentro del rgano. Tincin Hematoxilina-Eosina de Mayer-Bennett. Magniicacin
50X.
Figura 3.2.4. Fase de transicin de AHPND.

Contina la descamacin de los tbulos
(porcin central de la fotografa) en donde muchas de las clulas desprendidas aun
muestran ncleos intactos. La zona de descamacin esta lanqueada por dos tbulos
melanizados (reas rojizas) los cuales muestran indicios de colonizacin bacteriana e
iniltracin hemoctica (inlamacin). Tincin Hematoxilina-Eosina de Mayer-Bennett.
Magniicacin 50X.
Figura 3.2.5. Fase terminal de AHPND. La

gran mayora de los tbulos se encuentran
necrosados y se observa una marcada inlamacin y melanizacin. Es evidente tambin
la presencia de infeccin bacteriana masiva,
probablemente por especies oportunistas de
Vibrio spp., incluyendo la misma bacteria
causante de AHPND. Tincin Hematoxilina-Eosina de Mayer-Bennett. Magniicacin
50X.
177
3.3.
Necrosis sptica del hepatopncreas (NSHP)
Esta enfermedad tambin conocida como SHPN por sus siglas en ingls (SEPTIC HEPATOPANCREATIC NECROSIS) se encuentra distribuida en las instalaciones de cultivo de todo el mundo; se observa con mayor presencia en los laboratorios de produccin de postlarvas y en granjas camaroneras.
Afecta a todas las especies de camarn de acuicultura, ya que pueden ser susceptibles a la infeccin
cuando se encuentran en condiciones de estrs. Las cepas reportadas como causantes de mortalidades en larvas, postlarvas, juveniles y adultos son: V. harveyi, V. parahaemolyticus, V. alginolyticus, V.
penaeicida y V. campbellii. De manera ocasional en laboratorios y granjas de camarn son reportadas:
Photobacterium damsela (antes clasiicada como V. damsela), V. luvialis y Vibrio sp.
Principales signos de NSHP
Los camarones moribundos afectados por esta bacteria se encuentran en la supericie y nadando en las orillas de los estanques, por lo que son presa fcil de las aves marinas, que se alimentan de
ellos; debido a esto en algunas regiones de Amrica le llaman sndrome de la gaviota.
Cuando la enfermedad se encuentra en fase inicial se observan algunos organismos con opacidad muscular y tracto digestivo vaco; en fase aguda, se presenta expansin de los cromatforos,
hepatopncreas inlamado, luminiscencia, coloracin caf en la parte ventral (Fig.3.3.1) y heces de
color blanco; y en fase crnica, el hepatopncreas se observa atroiado. En los laboratorios de produccin larvaria las zoeas, mysis, larvas y postlarvas que presentan infeccin bacteriana, con o sin
luminiscencia, tienen intestino vaco, nado errtico, acumulacin de materia orgnica en branquias,
melanizacin y necrosis de los apndices y cutcula, las mortalidades reportadas con luminiscencia
son de 40 a 100 %.
Figura 3.3.1. Camarn con coloracin

caf en la regin ventral.
178
Diagnstico
Se realiza de manera presuntiva por anlisis en fresco, la enfermedad presenta tres etapas de
desarrollo (fases inicial, aguda y terminal), con deformacin tubular progresiva, gran cantidad de
hemocitos, cmulos de bacterias, desprendimiento celular, ndulos hemocticos (Fig.3.3.2) y tbulos melanizados y necrticos. De manera conirmatoria por histopatologa con tincin de hematoxilina-eosina, la mayora de los tbulos normales (Fig.3.3.3) desaparecen y se observan secciones
del hepatopncreas con iniltracin de hemocitos, hipertroia del lumen, desprendimiento celular,
ndulos hemocticos, melanizacin, necrosis y atroia de moderada a severa (Fig.3.3.4). La iniltracin de hemocitos y la formacin de ndulos hemocticos con presencia de cmulos de bacterias, los cuales pueden o no estar melanizados, se aprecian tambin en corazn, branquias, rgano
linfoide, glndula antenal, tejido y cordn nervioso, tejido conectivo, telson, estmago, esfago,
apndices, msculo y ciegos hepticos. Por anlisis de bacteriologa es necesario aislar la bacteria en
especial de organismos moribundos que muestren una gran colonizacin de bacterias. El aislamiento
se realiza en agar TCBS sembrando el macerado de los organismos previamente desinfectados. Al obtener los resultados en las placas se observa gran cantidad de colonias luminiscentes de color verde.
Figura 3.3.2. Montaje en fresco de

hepatopncreas de P. vannamei donde
se observa ndulo hemoctico.
Figura 3.3.3. Corte histolgico de

hepatopncreas de P. vannamei con
tbulos normales. Tincin de hematoxilina-eosina.
179
Figura 3.3.4. Corte histolgico de

hepatopncreas con iniltracin de
hemocitos, hipertroia del lumen,
desprendimiento celular, ndulos
hemocticos, melanizacin, necrosis.
Tincin de hematoxilina-eosina.
3.4.
Hepatopancreatitis necrotizante (NHP)
La necrosis del hepatopncreas (NHP), es una enfermedad producida por una Alpha-Proteobacteria, pleomorica similar a las ricketsias, Gram negativa, intranuclear obligada. Es un bacilo
que no presenta lagelos, de 0.25 por 0.90 micrones y se multiplica en el citoplasma de las clulas
del hepatopncreas. Su identiicacin se propuso recientemente como Candidatus Hepatobacter
penaei. Las principales fuentes de trasmisin de NHP son el canibalismo de camarones infectados y
la cohabitacin de camarones sanos con camarones infectados. A nivel experimental se trasmite por
inyeccin con material infectado, por cohabitacin entre organismos infectados y no-infectados, y
por alimentacin de hepatopncreas infectado fresco y congelado a organismos no infectados. Se ha
propuesto el nombre de Hepatobacter penaei para esta bacteria causante de NHP.
NHP es una enfermedad que fue reportada por primera vez por Johnson (1990) como hepatopncreas granulomatoso (por la formacin de granulomas), causando altas mortalidades en las
granjas de la parte central y sur de Texas; mas tarde fue reportado en Per, Costa Rica, Panam, Brasil,
Venezuela, Ecuador, Mxico, Colombia, Belice, Nicaragua y Honduras, provocando mortalidades
entre 20 y 95 % en los sistemas de cultivo de P. vannamei (camarn blanco) y P. stylirostris (camarn
azul). NHP tambin se ha detectado en camarn blanco cultivado de Eritrea (frica), con mortalidades en cultivo de 15 a 30 % durante el primer y segundo ao de su introduccin. NHP afecta a
P. vannamei, P. stylirostris, P. setiferus y P. aztecus. P. monodon y P. chinensis son susceptibles en
infecciones experimentales.
NHP se asocia con factores medioambientales como temperatura y salinidad elevadas, durante periodos prolongados, ya que se tienen reportes que esta enfermedad se hace presente cuando se
tienen temperaturas de 29 a 35 C, por un periodo de 45 a 50 das, as como de salinidades entre 20
a 38 ppm en los sistemas de cultivo. NHP es una enfermedad que provoca altas mortalidades en los
camarones si no es detectada a tiempo, ya que ataca al hepatopncreas, rgano bsico del camarn
que realiza varias funciones, entre ellas almacenar temporalmente, digerir y metabolizar el alimento
y producir protenas que se encargan de funciones vitales, como la que realiza la hemocianina, que
se encarga de transportar el oxgeno a todas las clulas del camarn. Debido a esto NHP afecta de
manera directa los procesos isiolgicos en camarn hasta provocarle debilidad y desnutricin.
180
Principales signos de NHP

En fase aguda, las postlarvas tardas, juveniles y adultos presentan marcada reduccin en el
consumo de alimento hasta dejar de comer por completo. Posteriormente, se observa la aparicin de
camarones moribundos nadando cerca de la supericie, en la compuerta de salida y en las orillas de
los estanques. Los camarones moribundos muestran palidez generalizada del cuerpo, con un color
caf amarillento, branquias de color amarillo plido a caf oscuro y el hepatopncreas puede o no
estar atroiado, con coloracin amarillenta a caf oscuro (Fig.3.4.1), provocando que sea fcil de
confundir con enfermedades virales en esta fase se observan las mas altas mortalidades.
Diagnstico
Se realiza de manera presuntiva por anlisis en fresco, la enfermedad presenta 4 etapas de
desarrollo (fases de infeccin, inicial, aguda y terminal), sin presencia de hemocitos en la etapa de infeccin e inicial, en fase aguda se observa gran cantidad de hemocitos, deformacin tubular, tbulos
vacos, melanizados, necrticos y formacin de cpsulas. De manera conirmatoria por histopatologa con tincin de hematoxilina-eosina, la mayora de los tbulos normales desaparecen en la etapa
aguda y se observa desprendimiento celular severo, atroia y melanizacin de los tbulos; formacin
multifocal de cpsulas envolviendo a uno o ms tbulos, las clulas epiteliales dentro de los tbulos
en algunos casos estn hipertroiadas conteniendo en el citoplasma cmulos de bacterias (Fig.3.4.2).
Las clulas de los tbulos cercanos a los atroiados y con presencia de cpsulas presentan atroia,
con ncleos picnticos, muy pocas vacuolas de lpidos (clulas R) y vacuolas secretoras (clulas B).
Tambin es posible observar que el epitelio columnar de estos tbulos se ve afectado, pues la atroia
de las clulas lo convierte en epitelio cuboidal.
Control
Debido a que es una enfermedad endmica en muchos pases, slo se puede evitar su diseminacin mediante medidas de bioseguridad impuestas por cada empresa cultivadora de camarones.
Esto implica evitar movilizacin de especmenes vivos infectados entre zonas de cultivo, realizar
muestreos semanales para detectar oportunamente casos sospechosos y realizar montajes en fresco
de hepatopncreas para evaluar nivel de vacuolas lipdicas, presencia y severidad de tbulos melanizados.
Las medidas teraputicas slo se deben utilizar cuando el patgeno haya revasado las medidas
proilcticas. Los antibiticos se utilizan para controlar la infeccin en casos de NHP.
Uso de alimentos medicados con Oxitetraciclina (2 a 5 Kg/Ton de alimento) y Florfenicol (1
a 1.5 Kg/Ton de alimento) por un periodo de 10 a 14 das, buscando concentraciones de 2,000 a
5,000 ppm y de 200 a 300 ppm, respectivamente, de principio activo. Para esto, hay que considerar
el tiempo de retiro (das sin el producto que se deben esperar antes de la cosecha).
Se deben desarrollar programas de reproductores libres de NHP, para evitar la posible transmisin de la bacteria a las nuevas generaciones, lo cual conllevara a la continuidad de la enfermedad
en estanques de cultivo.
181
Figura 3.4.1. P. vannamei con color

caf amarillento en abdomen y branquias color a caf oscuro
Figura 3.4.2. Corte histolgico de hepatopncreas de un P. vannamei con

desprendimiento celular severo, atroia
de los tbulos; formacin multifocal de
cpsulas envolviendo a los tbulos, las
clulas epiteliales dentro de los tbulos
contienen en el citoplasma cmulos de
bacterias. Tincin de hematoxilina-eosina.
3.5.
Sndrome de Zoea II
Es enfermedad que provoca altas mortalidades en el estado de Zoea II de camarones blancos

y camarones azules; ataca el hepatopncreas y los intestino medio y posterior. En 1993 se report
por primera vez en cultivos larvarios de P. vannamei en Ecuador, Mxico y Estados Unidos, pero fue
hasta 1995 cuando se manifest en todos los laboratorios de Amrica Latina. En Ecuador se report
que el agente causal de esta enfermedad es V. harveyi. Esta enfermedad tambin se conoce como el
sndrome de las bolitas blancas, debido al desprendimiento de las clulas de los tbulos del hepatopncreas.
Signos clnicos
Se presentan altas mortalidades despus de 36-48h de haber transcurrido la metamorfosis de
Zoea I a Zoea II. Las sintomatologas ms importantes de los organismos infectados son: anorexia
(falta de apetito), rpida evacuacin del contenido intestinal, letargo (disminucin de la actividad
normal) con nado errtico y permanencia en el fondo del tanque de los organismos infectados.
182
Diagnstico
Se realiza mediante la elaboracin de placas en fresco de Zoeas II, donde se observa hepatopncreas de tamao normal con desprendimiento celular, atroia del hepatopncreas con desprendimiento celular o hepatocitos hipertroiados y redondos llamados bolitas blancas, inlamacin y
presencia de clulas del hepatopncreas viajando a travs del intestino (Fig.3.5.1). Se piensa que las
bolitas blancas son una reaccin a la presencia de toxinas bacterianas (Vibrio sp.). En organismos con
la enfermedad de bolitas blancas, el diagnstico por histologa de rutina con tincin de hematoxilina-eosina se basa en la inspeccin del hepatopncreas para buscar la presencia de clulas (bolitas
blancas) viajando por el lumen del tbulo del hepatopncreas (Fig.3.5.2) y del intestino de la Zoea
II, hepatocitos hipertroiados y, en algunos casos, iniltracin hemoctica y formacin de ndulos.
Figura 3.5.1. Muestra de Zoea II de P.

vannamei en fase inicial; se observa
hepatopncreas normal con desprendimiento celular viajando por el intestino (lecha).
Figura 3.5.2. Corte histolgico de hepatopncreas de P. vannamei con desprendimiento celular (bolitas blancas),
al lumen del tbulo e iniltracin de
hemocitos en tejido conectivo. Tincin
hematoxilina-eosina.
183
3.6.
Enfermedad de luminiscencia
Es causada por bacterias luminiscentes y ha sido responsable de altas mortalidades (80%) en

los laboratorios de larvicultura de muchos pases de Amrica Latina. La bacteria ms predominante
que se ha aislado en esta enfermedad es V. harveyi o V. campbellii.
Signos clnicos
Los organismos infectados con esta bacteria se observan con luminiscencia (Fig.3.6.1), letargo
(disminucin de la actividad normal), nado errtico, permanencia en el fondo del tanque y mortalidades masivas.
Diagnstico
El diagnstico por montaje en fresco, se realiza mediante la elaboracin de placas en fresco
de larvas, donde se observa en fase inicial colonizacin masiva de las bacterias en los apndices,
tracto digestivo y regin oral. Pero conforme avanza la enfermedad y entra en la fase aguda se observa
colonizacin en el intestino medio y posterior y en hepatopncreas hasta llegar a colonizar todos los
rganos y tejidos del organismo y tener una septicemia generalizada con mortalidades altas.
Por bacteriologa es necesario aislar la bacteria en especial de organismos moribundos que
muestren una gran colonizacin de bacterias. El aislamiento se realiza en agar TCBS sembrando el
macerado de los organismos previamente desinfectados. Al obtener los resultados en las placas se observa gran cantidad de colonias luminiscentes de color verde (V. campbellii) o amarillas (V. harveyi).
En organismos con la enfermedad de luminiscencia se diagnostica por histopatologa con
tincin de hematoxilina-eosina, y se busca la presencia de colonias de bacterias, iniltracin de hemocitos, ndulos hemocticos en apndices, tracto digestivo, intestino y hepatopncreas (Fig.3.6.2).
Figura 3.6.1. Mysis de P. vannamei con

luminiscencia en ojo y melanizacin
en pereipodos.
184
Figura 3.6.2. Corte histolgico de hepatopncreas de mysis de P. vannamei,

con clulas del hepatopncreas con
cmulos de bacterias localizadas en el
lumen (lecha). Tincin de hematoxilina-eosina.
3.7
Erosin bacteriana del caparazn
Esta enfermedad se presenta en juveniles y adultos de todas las especies de camarones penaeidos. Se maniiesta en forma de manchas cafs o negras en el exoesqueleto, siendo las heridas
las que permite la entrada de bacterias quitinolticas como Vibrio spp., y de bacterias oportunistas
(Aeromonas sp., Spirillum sp. y Flavobacterium sp.), estas manchas se producen por la acumulacin
de melanina, que es el producto inal de la respuesta inlamatoria en crustceos. Cuando las lesiones
no alcanzan a afectar a las membranas internas y al msculo, por lo general stas desaparecen con
la muda. Esta afeccin se considera una infeccin secundaria, ya que para manifestarse se necesita
que el organismo presente heridas en el caparazn. Las erosiones bacterianas tambin son causadas
por infeccin de las heridas en la cutcula de los camarones, y se dan por lo regular cuando se tienen
organismos en altas densidades o por condiciones ambientales extremas o toxicidad qumica. Esta
enfermedad debe ser controlada, ya que puede convertirse en una infeccin grave denominada astillas negras, la cual penetra al msculo dandolo severamente o puede llegar hasta una vibriosis
sistmica atacando todos los rganos y tejidos del camarn.
Signos clnicos
Se observan en la cutcula manchas de color cafs o negras (Fig.3.7.1) en reas que han sido
erosionadas por accin de bacterias quitinolticas. Cuando la infeccin progresa se observa el msculo melanizado, con secciones de necrosis y atroia muscular.
Diagnstico
Al realizarse el anlisis en fresco de muestras de cutcula y msculo, se observan con claridad las manchas rojas, cafs y negras, as como secciones del msculo con erosiones melanizadas
y hemocitos rodeando la lesin (Fig.3.7.2). En organismos con esta enfermedad por histopatologa
con tincin de hematoxilina-eosina, se observa en algunas secciones de la cutcula y msculo, melanizacin, necrosis con iniltracin de hemocitos, atroia de los paquetes musculares y presencia de
ndulos hemocticos con cmulos de bacterias (Fig.3.7.3).
185
Figura 3.7.1. Camarn P. vannamei,

con necrosis multifocal en el exoesqueleto.
Figura 3.7.2. Montaje en fresco de

msculo de camarn P. vannamei, con
erosin melanizada rodeada por hemocitos.
Figura 3.7.3. Corte histolgico de msculo de P. vannamei; con melanizacin iniltracin hemoctica, necrosis,
atroia de los paquetes musculares y
ndulos hemocticos melanizados.
Tincin de hematoxilina-eosina.
186
3.8.
Estreptococosis
Es causada por Streptococus sp., relacionadas a S. uberis y S. parauberis, provocando altas

mortalidades en camarones de cultivo de Penaeus vannamei (80%). Existen muy pocos reportes de
infecciones por cocos gram positivos en crustceos; solo se encuentran documentados la enfermedad
del msculo blanco en langostino Macrobrachium rosembergii causada por Lactococcus lactis y L. garvieae que estn incluidas en la familia Streptococcaceae. En Mxico, en 2011 y 2012 se observaron
mortalidades altas juveniles de camarn blanco en cultivos en agua a baja salinidad, los organismos
presentaron desprendimiento celular severo de los tbulos del hepatopncreas, atroia tubular con
iniltracin hemoctica severa causando mortalidades del 40%, la bacteria caracterizadas fue Streptococcus sp.. Este brote present una prevalencia del 25% con 30 das de observacin; perodo
durante el cual los organismos frenaron su tasa de crecimiento y se afect la sobrevivencia. Se cree
que existi una aceleracin en la dinmica del patgeno por la condicin hipotnica del cultivo, la
elevada densidad y nitritos altos.
Signos clnicos
Los organismos infectados con esta bacteria se observan en fase inicial con msculo blanquecino y ciego heptico posterior opaco (Fig.3.8.1) y en fase aguda el organismos se encuentra totalmente blanquecino con letargo (disminucin de la actividad normal), nado errtico, permanencia en
el fondo del tanque y mortalidades masivas.
Diagnstico
Se realiza de manera presuntiva por anlisis en fresco, en hepatopncreas hay deformacin
tubular progresiva (Fig.3.8.2), gran cantidad de hemocitos, cmulos de bacterias, desprendimiento
celular, ndulos hemocticos y tbulos melanizados y necrticos. De manera conirmatoria por histopatologa con tincin de hematoxilina-eosina, la mayora de los tbulos normales desaparecen y
se observan secciones del hepatopncreas con iniltracin de hemocitos, hipertroia del lumen, desprendimiento celular, ndulos hemocticos, melanizacin, necrosis y atroia de moderada a severa.
Tambin se observan numerosos cocos libres dentro de la hemolinfa y en mayor presencia en el lumen de los tbulos del rgano linfoide (Fig.3.8.3) en muestras histolgicas teidas con hematoxilina
eosina y Giemsa.
El aislamiento se realiza en agar sangre sembrando de macerado de hepatopncreas. Al obtener los resultados en las placas se observa gran cantidad de colonias en cadena de forma esfrica (2
micrmetros de dimetro).
187
Figura 3.8.1. P. vannamei, con opacidad en musculo (lecha roja) y en cefalotrax y abdomen (lecha negra).
Figura 3.8.2. Muestras en fresco de

hepatopncreas con desprendimiento
celular severo, tbulos vacos, necrosis tubular con clulas muertas en el
interior del lumen de juvenil de P. vannamei con infeccin de Streptococcus
sp.
Figura 3.8.3. Corte histolgico de rgano linfoide de P. vannamei; con

estreptococos en el lumen del tbulo.
Tincin Giemsa.
188
3.9
Spiroplasma penaei (Carlos R. Pantoja y Donald V. Lightner)
Espiroplasmosis.
Agente Etiolgico
Spiroplasma penaei.
Agente
Las bacterias incluidas dentro del gnero Spiroplasma (Clase Mollicutes) se caracterizan por
carecer de una pared celular y por tener una morfologa helicoidal. Los espiroplasmas son motiles a
pesar de carecer de lagelos. Histricamente, los espiroplasmas han sido asociados a enfermedades
de plantas y de artrpodos, principalmente insectos y garrapatas, pero ms recientemente se han
encontrado a miembros de este gnero infectando a algunas especies de cangrejos de agua dulce
(Eriocheir sinensi) y los camarones alvinocridos de las chimeneas hidrotermales en el fondo del
ocano (Rimicaris exoculata) en donde parece no causar enfermedad alguna, sino ms bien, parece
ser parte de la microlora normal. Spiroplasma penaei es el primer espiroplasma patognico que ha
sido aislado a partir de un crustceo marino (Fig. 3.9.1).
Infecciones naturales han sido reportadas nicamente en P. vannamei. S. penaei fue descubierto por primera vez en una granja camaroncola de Colombia, en la costa del Caribe, en condiciones
de baja salinidad.
La transmisin de la enfermedad puede ocurrir horizontalmente a travs de canibalismo y
posiblemente a travs del agua. Existe la posibilidad de transmisin vertical, pero no ha sido demostrada experimentalmente.
Hasta el momento, los estados de vida del camarn que se sabe son afectados por S. penaei
incluyen juveniles y sub-adultos. Se ignora el efecto de la enfermedad en adultos reproductores,
estados larvales.
Tpicamente se incluyen el cordn ventral nervioso, msculo esqueltico, corazn, glndula
antenal, rgano linfoide, tejido conectivo ibroso dentro del hepatopncreas, tejido conectivo esponjoso perigstrico, ilamentos branquiales y subcutis en el caparazn y apndices corporales.
Los camarones infectados no presentan lesiones distintivas que sean aparentes a simple vista.
Los cromatforos pueden encontrarse expandidos en algunos casos. Se ha reportado tambin la condicin llamada sndrome de los camarones parados en la cual los camarones muertos tienden a lotar en la supericie como si estuvieran balancendose en la punta de la cola y mirando hacia el cielo.
189
Histopatologa. Las lesiones causadas por este espiroplasma son las caractersticas de una enfermedad bacteriana de tipo sistmico. Utilizando tcnicas de rutina con tinciones de hematoxilina-eosina
(H&E) los camarones moribundos presentan reacciones inlamatorias sistmicas multifocales, moderadas a severas, en forma de congestin hemoctica, coagulacin de hemocitos, formacin de ndulos hemocticos (Fig.3.9.2), fagocitosis (algunas veces acompaada de melanizacin) y ibrosis. Los
rganos afectados incluyen (en orden de severidad): cordn ventral nervioso, msculo esqueltico,
corazn, glndula antenal, rgano linfoide, tejido conectivo ibroso dentro del hepatopncreas,
tejido conectivo esponjoso perigstrico, ilamentos branquiales y subcutis. El desarrollo de las lesiones parece ser como sigue: (1) Presencia de clulas necrticas con ncleos picnticos. (2) Migracin y congregacin de clulas fagocticas en el rea necrosada. (3) Fagocitosis de las clulas
necrosadas y restos celulares y formacin de ndulos hemocticos. (4) Melanizacin de ndulos
hemocticos. (5) Inlamacin ibroctica.
PCR. Utilizando los mtodos descritos por Nunan et al., 2004. Debido a la gran similitud entre las
lesiones producidas por S. penaei y otras enfermedades bacterianas tales como vibriosis sistmica, es aconsejable combinar el anlisis histolgico con PCR, o con pruebas de hibridacin in situ
(Fig.3.9.3), para poder obtener un diagnstico conirmatorio coniable.
190
ESPIROPLASMOSIS
Spiroplasma penaei
Figura 3.9.1. Microfotografa electrnica de barrido mostrando la forma

helicoidal de S. penaei. Barra=1m.
Figura 3.9.2. Lesiones observadas a

nivel histolgico. En la parte central
de la fotografa se muestran ejemplos
de la formacin de ndulos hemocticos y de la fagocitosis de clulas
necrticas entre ibras musculares
del corazn. Tincin: Hematoxilina/
eosina-loxina de Mayer-Bennett. Barra=10 m.
Figura 3.9 .3. Ejemplo del uso de la

sonda gentica especica para la deteccin de S. penaei La presencia de
un precipitado de color azul obscuro
a negro indica los lugares en donde la
sonda a reconocido la presencia de la
bacteria entre los tbulos del rgano
linfoide. Tincin de contraste: Caf de
Bismarck.
191
3.10.
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194
Captulo 4 - Parsitos en camarones
Captulo 4
Parsitos en camarones
195
196
CAPTULO 4
Parsitos en camarones
Jorge Cullar-Anjel
Coordinador del Grupo ad hoc del OIRSA en Sanidad Acucola
Panam
Introduccin
Un parsito puede ser considerado como todo organismo vegetal o animal que vive a costa de
otro de distinta especie, alimentndose de las sustancias que este consume o elabora y pudindole
o no perjudicar, aunque sin llegar necesariamente a producirle la muerte. Los parsitos se clasiican
en endoparsitos y ectoparsitos, segn si habitan en el interior o en el exterior de sus hospederos.
La afeccin de un animal por parsitos, es llamada parasitosis. Los principales parsitos de
camarones son gregarinas, epicomensales (protozoarios, algas y bacterias ilamentosas), microsporidios, haplosporidios y metazoarios (nemtodos o tremtodos). Los protozoarios son los que ms comnmente afectan a los camarones, pudiendo ser observados en branquias, apndices, exoesqueleto
y tracto digestivo (intestino medio y eventualmente hepatopncreas).
4.1
Gregarinas
Gregarinas, parasitismo por gregarinas o enfermedad de gregarinas.
Etiologa
Las gregarinas (Protozoa, Apicomplexa) son parsitos protozoarios de diversos tipos, ampliamente distribuidos en la naturaleza y comunes en muchos grupos de invertebrados, especialmente
artrpodos, anlidos y moluscos. En stos, las gregarinas pueden aparecer nter o intracelularmente y
aunque las clulas hospedero individuales son destruidas por el estado intracelular, muchas especies
no son consideradas como de alta patogenicidad. Sin embargo, cada especie de gregarina suele ser
especica de una nica especie de hospedero.
Las gregarinas pueden ser encontradas tanto en camarones silvestres, como en sistemas de
cultivo. Todos los camarones penaeidos son hospederos conocidos o potenciales de las gregarinas.
Por lo menos dos gneros, Nematopsis y Cephalolobus, cada uno con diversas especies, aparecen de
manera frecuente en los camarones penaeidos con una distribucin geogrica mundial. Un tercer
gnero llamado Paraophioidina, se ha observado espordicamente en postlarvas de P. vannamei bajo
condiciones de cultivo.
Debido a que se considera que existen mltiples especies de gregarinas con distribucin geogrica an sin deinir en todo el mundo, es recomendable realizar monitoreos sanitarios cuando van
197
a ser movilizados camarones procedentes de regiones aisladas, ya que stas pueden poseer poblaciones nativas de estos parsitos.
Agente etiolgico y hospederos ms comunes
Las gregarinas que se presentan con ms frecuencia en camarones P. vannamei de cultivo, son
del gnero Nematopsis spp. Pueden trasmitirse al camarn mediante la ingestin de poliquetos como
la Polydora cyrrhosa o a travs de la ingestin de materia fecal de este segundo hospedero del protozoario. Otros hospederos son algunos moluscos bivalvos, que al igual que los poliquetos, ingieren las
zigosporas que son las formas infestantes del protozoario.
Otros dos gneros que tambin se han observado en camarones penaeidos de cultivo son
Paraophioidina y Cephalolobus, aunque con menor frecuencia. Las siguientes son algunas de las
caractersticas de los 3 gneros mencionados:
Nematopsis: el trofozoito est compuesto de 2 clulas: un protomerito largo provisto de un collar
muscular, unido a un deuteromerito ms largo y ms angosto. La forma del trofozoito se asemeja al
de un champin. El paso de esporozoito a trofozoito lo realiza en el intestino medio.
Paraophioidina: en estado adulto se presenta como una sola clula alargada con un solo ncleo en
zona media. En su parte anterior presenta estructuras de ijacin mediante las cuales se adhiere al
hospedero o a otras gregarinas congneres. Al igual que el gnero anterior, el paso de esporozoito a
trofozoito lo realiza en el intestino medio.
Cephalolobus: se caracteriza por tener un englobamiento en la porcin anterior, haciendo semejanza
con una falsa cabeza. El ciclo de vida y las caractersticas morfolgicas generales excepto la dilatacin cefaloide, son similares a las descritas para Nematopsis sp. A diferencia de los gneros anteriores, el paso de esporozoito a trofozoito lo lleva a cabo en la zona posterior del estmago.
Ciclo de vida
En los camarones, la ingestin de un hospedero intermediario que contenga esporas de gregarina, trae como consecuencia la infestacin. Las esporas ingeridas germinan para llegar a ser
esporozoitos, los cuales se adhieren a la capa de quitina de las paredes y a los pliegues terminales del
iltro gstrico. Tambin pueden invadir o unirse al intestino medio o a las clulas epiteliales del ciego
anterior, con su proceso especializado de epimeritos. Una vez adheridos, se desarrollan a trofozoitos
que se caracterizan por su epimerito especializado y consisten en la forma inicial del protomerito,
con un ncleo diferenciado y localizado centralmente (Fig. 4.1.2). De cada uno pueden generarse
al menos tres trofontes.
Los trofontes se separan de su unin al estmago o intestino medio, para convertirse en esporadio y pasar al intestino posterior, alojndose en sus pliegues. De cada clula individual de esporadio,
se desarrolla un gametocisto. Algunas de estas clulas darn paso a la fase sexual de la reproduccin
del parsito, formando microgametos (gametos masculinos) y macrogametos (gametos femeninos).
Cuando hay ruptura de los gametocistos, los gametos se entrecruzan y fusionan para formar cigotos,
los cuales son liberados al medio externo.
Las zigosporas son consumidas por bivalvos y poliquetos. En el interior de estos segundos
hospederos, ocurre la esporogonia en las clulas del epitelio intestinal. Posteriormente, el camarn
ingiere los poliquetos o sus heces y se infesta. Dentro del tracto gastrointestinal del camarn, se liberan los esporozoitos, ocupando el estmago posterior o el intestino medio, adhirindose a la cutcula
o penetrando las membranas de las clulas del hospedero. Los esporozoitos son desarrollados a trofozoitos en el intestino medio, posterior o en el propio estmago (Fig. 4.1.1).
198
Mecanismos de transmisin
Debido a la necesidad de varios hospederos dentro del ciclo de vida de las gregarinas, se cree
que la transmisin de un camarn a otro no es frecuente. Algunos ensayos de transmisin en acuarios
han mostrado que eliminando el segundo hospedero una vez estn infestados los camarones, desaparecen los protozoarios del tracto intestinal en pocos das.
Aunque los moluscos bivalvos han sido implicados tradicionalmente como hospederos intermediarios de las gregarinas para camarones penaeidos, el poliqueto Polydora cirrhosa, anlido
muy comn que vive en el fondo de las piscinas camaroneras, fue encontrado como un importante
hospedero intermediario para el Nematopsis sp. segn estudios realizados en Ecuador, en estanques
de cultivo de P. vannamei.
Signos clnicos
Los camarones con infestaciones muy altas (ms de 100 trofozoitos por cm de intestino medio), pueden mostrar una coloracin amarillenta del intestino medio. En los casos en los que la infestacin es severa e involucra a una gran parte de la poblacin de cultivo, se puede presentar bajo
crecimiento de los camarones y aumento en el factor de conversin alimenticia.
Los camarones con niveles bajos o moderados de infestacin por gregarinas, pueden no presentar signos clnicos y tener una apariencia general equivalente a camarones aparentemente sanos.
Diagnstico
Montaje en fresco: pueden ser observados esporozoitos, trofozoitos o gametocistos en heces de camarones extradas del intestino medio y examinadas bajo el microscopio, utilizando objetivos de
10x y 20x. No se requieren tinciones para la diferenciacin del parsito. Su apariencia ser plida
cuando est inmaduro y tendiente a color marrn oscuro entre ms cercano est de ser adulto. En
algunos casos se observan gregarinas con su extremo distal bifurcado en forma de Y. Cada segmento (clula) que conforma el organismo, tiene su ncleo visible y de fcil diferenciacin cuando
se usa el ajuste micromtrico de foco en el microscopio (Fig. 4.1.3 a 4.1.5).
Histopatologa: se observan parsitos en el intestino medio y con frecuencia en la luz del ciego anterior, as como en los conductos primarios del hepatopncreas; estmago anterior y porcin inicial
del tracto digestivo anterior. Las lesiones signiicativas aparecen tpicamente en infestaciones severas
y consisten en taponamiento mecnico del lumen intestinal, reduccin del grosor de la mucosa del
intestino medio, hiperplasia del epitelio intestinal formando pliegues tipo vellos y, perforaciones de
la mucosa intestinal. stas, pueden proporcionar una ruta de entrada a Vibrio spp. u otras especies
de bacterias extracelulares, que son agentes potenciales causantes de bacteremia por oportunistas.
Medidas de control
Los aumentos en la intensiicacin de los sistemas de produccin, han venido acompaados
por aumentos en la incidencia de gregarinas en las explotaciones de camarn. Con el in de mantener
los niveles de gregarinas por debajo de los grados considerados como de riesgo para el crecimiento (y
eventualmente supervivencia), muchos productores realizan monitoreos peridicos para gregarinas y
han comenzado a incorporar anticoccidiales veterinarios en los alimentos balanceados, con las dosis
recomendadas para avicultura y ganadera bovina, teniendo resultados variables que son medidos a
travs de muestreos de rutina. Sin embargo, se debe considerar que los ingredientes activos conocidos
como coccidiostticos y segn el Reglamento No. 37/2010 de la Comisin Europea, no estn autorizados para especies acuticas sino nicamente para las especies establecidas en dicho reglamento.
199
Otras tcnicas de control incluyen la eliminacin del organismo hospedero (Polydora sp. y moluscos
bivalvos), mediante la adicin de cal en niveles adecuados al fondo del estanque luego de la cosecha,
para destruir estos vectores potenciales del protozoario.
Figura 4.1.1. Ciclo de vida de las gregarinas en camarones. Adaptado de Johnson (1978). A. El camarn
ingiere las esporas con detritus orgnicos del fondo. B. Los esporozoitos emergen dentro del intestino
del camarn. C. Los esporozoitos se adhieren a la pared intestinal y crece en trofozoitos; algunos
trofozoitos no se adhieren a las paredes sino entre s, formando estructuras inusuales. D. Estas formas
inusuales se desarrollan y se adhieren a la parte inal del intestino (recto) para formar gametocistos. E.
Los gametocistos sufren mltiples divisiones para producir gimnosporas que quedan libres luego de la
ruptura del gametocisto. F. Las gimnosporas son engolfadas por clulas de la supericie del tejido blando de las almejas. G. Dentro de las almejas, se desarrollan hasta formar esporas. H. Las esporas (con
esporozoitos en su interior) son luego liberadas por al almeja adheridas a masas de moco.
GREGARINAS
Figura 4.1.2. Microfotografa del epitelio intestinal de un camarn P. vannamei mostrando dos
trofozoitos de gregarina Nematopsis sp. de diferente tamao, adheridos a las clulas epiteliales
dentro del lumen del intestino medio. Tincin:
H&E de Mayer-Bennett. Magniicacin: 1,500X.
200
Figura 4.1.3. Montaje en fresco de gregarinas

Nematopsis sp. en el intestino medio de un P.
vannamei. Los organismos presentes son formas
tempranas de trofozoitos de 2 clulas. Sin tincin. Magniicacin: 800X.
Figura 4.1.4. Montaje en fresco de gregarinas

Nematopsis sp. en el intestino medio de un P.
vannamei. Los organismos presentes son formas
maduras de trofozoitos de 3 y 5 clulas. Sin tincin. Magniicacin: 500X.
Figura 4.1.5. Montaje en fresco de trofozoitos

de gregarinas Paraophioidina sp. en el intestino
medio de una postlarva de P. vannamei. Sin tincin. Magniicacin: 100X.
201
4.2
Microsporidios
Microsporidiosis, enfermedad del camarn algodonoso, enfermedad del camarn lechoso o
enfermedad del Nosema (entre otras).
Etiologa
Anteriormente se sostena que la microsporidiosis era una enfermedad parasitaria producida en camarones penaeidos por protozoarios intracelulares miotrpicos, pero ahora se sabe que
el agente causal de la enfermedad pertenece a los hongos, de acuerdo con estudios moleculares a
partir de secuenciacin del RNA ribosomal. Los principales gneros son Agmasoma (anteriormente
Thelohania), (A. penaei y A. duorara), Ameson (anteriormente Nosema) (A. nelsoni) y Pleistophora
(anteriormente Plistophora) (P. penaei). Un nuevo gnero Tuzetia, fue reportado en 2002 e incluye
la especie T. weidneri. Las especies de microsporidios observadas en los tejidos de los camarones,
pueden ser diferenciadas segn el tamao de las esporas (1 a 8 m), el nmero de esporas producidas
y el nmero de giros del tbulo polar.
Especies afectadas
Probablemente todas las especies de camarones penaeidos puedan ser infestadas por una o
ms especies de microsporidios. Los tejidos afectados estn tpicamente inlamados. Las clulas que
son parasitadas, presentan hipertroia tanto del citoplasma como del ncleo y poseen esporas del
protozoario que pueden verse esfricas o cilndricas.
Estos parsitos protozoarios intracelulares afectan a artrpodos, peces y tambin al hombre.
Poseen reproduccin sexual por esporogamia (en el hospedero) y asexual por isin mltiple (esquizogamia).
La enfermedad del camarn algodonoso en P. vannamei, se presenta cuando el msculo estriado es invadido por el protozoario Ameson sp. Los procesos de reproduccin asexual culminan con
la produccin de gran cantidad de esporas que se localizan dentro de las clulas en tejido muscular
del camarn.
Ciclo de vida y vas de transmisin
El parsito tiene un ciclo de vida indirecto que involucra dos hospederos: los camarones (hospederos intermediarios) y los peces (hospederos deinitivos). Algunos estudios tambin han demostrado que los coppodos y cladceros son utilizados como hospederos intermediarios por parte de los
microsporidios, incluyendo las especies del gnero Tuzetia. En el medio natural, los peces adquieren
los microsporidios cuando se alimentan de camarones que tienen esporas del parsito, colonizando
as sus tejidos. Estudios realizados en Tailandia durante 1994, revelaron que las especies de peces
Priacanthus tayenus y Scatophagus aarhus son portadoras de las esporas de microsporidios. Estas
esporas continan su desarrollo en el intestino de los peces y eventualmente el estadio infectante es
liberado al medio natural en las heces del pez. Los camarones probablemente ingieren estas formas
infectantes del parsito en el momento en que se estn alimentando con detritos orgnicos del fondo.
El parsito se localiza entonces en las clulas del msculo estriado (u otros tejidos) y se divide de
manera eiciente, produciendo esporas que desplazarn las clulas musculares (Fig. 4.2.1)
Especies de microsporidios como las que pertenecen al gnero Ameson, han sido detectadas
en reproductores silvestres de P. vannamei. En condiciones de cultivo en estanques, es muy raro ver
brotes de microsporidiosis y an menos frecuentes son en tanques de levantamiento o mantenimiento
202
de reproductores. Sin embargo, se tienen reportes de un brote de la enfermedad que se dio en camarones cultivados en tanques, los cuales fueron puestos en contacto con agua o sedimento de peces
que haban sido alimentados con camarones silvestres.
Ciclo de vida de los microsporidios
Figura 4.2.1. Adaptada y modiicada despus de Johnson 1978 por el Dr. Kenneth W. Hasson. Partes de
la igura fueron tomadas directamente de Canning y Lom 1986, Perkins 1991 y Putz y McLaughlin 1970.
Mtodos de diagnstico
El examen clnico permite detectar presencia de manchas blancas en cefalotrax, gnadas,
tracto digestivo y/o msculo esqueltico en abdomen o cefalotrax, las cuales pueden sugerir infeccin con el hongo (Fig. 4.2.2 a 4.2.4). Estos hallazgos tambin pueden estar acompaados por
opacidad u oscurecimiento generalizado del camarn.
El montaje en fresco a partir de tejido muscular afectado sin teir o coloreado con la tcnica
de Giemsa, permite observar las esporas del parsito bajo el microscopio (400x). Son caractersticas
las masas de esporas refringentes que de acuerdo con su tamao y forma, indican el tipo de organismo que se encuentra presente en los tejidos afectados (Fig. 4.2.5 y 4.2.6).
El anlisis histolgico realizando tinciones con H&E, Giemsa o cido-alcohol resistente (acid
fast), permite visualizar las esporas de los microsporidios claramente dispuestas en colonias dentro
de los tejidos afectados (Fig. 4.2.7 y 4.2.8).
En la Tabla 1 se describen las caractersticas de las esporas de cada especie, segn los nuevos
esquemas taxonmicos y mediante el uso de microscopa electrnica de transmisin (TEM):
203
Tabla 1: Caractersticas de las esporas de cada especie.

Esporas de cada especie
Tamao de esporas
Observaciones
Ameson
Esporas de 1.2 x 2 mm
Son producidas individualmente a

partir de esporontes
Pleistophora
Esporas de 2.1 x 2.6 mm
Presentes de 16 a ms de 40 en
cada esporonte
Agmasoma penaei
Esporas de 2.0 x 5.0 o de 5.0 x 8.2 mm Con 8 por esporonte
Agmasoma duorara
Esporas de 3.6 x 5.4 mm
Con 8 por esporonte
Para la deteccin de especies de microsporidios del gnero Agmasoma en tejidos afectados de

camarones penaeidos, ha sido desarrollada una sonda gentica marcada con Digoxigenina, as como
primers para pruebas de PCR. Estos ltimos se han obtenido a partir de una secuencia conservada de
una pequea subunidad ribosomal de RNA, perteneciente a otra microsporidia, de la cual se posee
un mayor conocimiento.
Los signos evidentes de microsporidiosis, incluyen como principal caracterstica opacidad difusa y lechosa de la musculatura abdominal, con apariencia de camarn cocido. Los camarones severamente afectados son en algunos casos ms pequeos que sus compaeros de estanque y presentan
adems una coloracin tpica azulosa y oscura. Tambin se puede presentar letargia y debilidad. En
fase temprana de la infeccin, se observa opacidad multifocal de la musculatura.
De las cuatro especies mencionadas anteriormente, tres infestan y terminan reemplazando el
msculo estriado de los camarones afectados, causando la tpica coloracin opaca y blanquecina.
La especie Agmasoma penaei afecta gnadas, corazn, vasos hemolinfticos, branquias, hepatopncreas e intestino medio, produciendo opacidad blanquecina y agrandamiento de las gnadas y con
frecuencia zonas de inlamacin blanquecinas parecidas a tumores tanto en las branquias, como
en tejido subcuticular y apndices. En la Tabla 2 se describen los tejidos infectados de las especies
afectadas por microsporidios o haplasporidios.
En los casos en los que los camarones estn severamente afectados por la enfermedad, la cutcula se torna de color azulada y oscura debido a la expansin de los melanforos cuticulares. La importancia de esta enfermedad en sistemas comerciales de produccin de camarones, radica en que al
afectarse la musculatura abdominal, se inhabilita la comercializacin de los individuos con infeccin
severa. De esta manera, se reducen las posibilidades de obtener una utilidad econmica en el cultivo,
en proporcin directa con la prevalencia y la severidad del brote en el momento de la cosecha. Otro
aspecto importante en la produccin relacionado con la microsporidiosis, es que los reproductores
infestados pueden llegar a ser estriles en los casos en los que las gnadas han sido afectadas.
204
Tabla 2. Microsporidios y haplosporidios en camarones penaeidos. Adaptado de Lightner, 1996.

Microsporidios o
haplosporidios
Ameson (=Nosema)
nelsoni
Nosema sp.
Especies afectadas
Tejidos infectados
Eporas/
esporontes
Tamao de las
esporas (m)
P. aztecus
Msculo estriado
1.2 x 2.0
Msculo estriado
No reportado
P. duorarum
P. setiferus
P. vannamei
Metapenaeus
monoceros
P. esculentus
No reportado
P. latisulcatus
No reportado
P. merguiensis
No reportado
P. semisulcatus
No reportado
Vasos sanguneos,
intestinos anterior
y posterior,
gnadas y
msculo
Vasos sanguneos,
intestinos anterior
y posterior,
gnadas y
msculo
2.0 x 5.0 y
5.0 x 8.2
No reportado
Msculo
3.6 x 5.4
Msculo estriado
No reportado
Msculo, corazn,
intestino anterior,
branquias y
hepatopncreas
16 to 40+
2.1 x 2.6
P. vannamei
Hepatopncreas
--
--
P. monodon
Hepatopncreas
--
--
Agmasoma
(Thelohania) penaei
P. setiferus
P. vannamei
Agmasoma
(Thelohania) sp.
P. monodon
P. merguiensis
Agmasoma (=
Thelohania) duorara
P. duorarum
P. aztecus
P. brasiliensis
Thelohania sp.
P. esculentus
P. latisulcatus
P. merguiensis
P. semisulcatus
P. aztecus
Pleistophora sp.
P. setiferus
P. stylirostris
P. duorarum
Haplosporidios
205
Mecanismos de control
No se conocen tratamientos especicos para el control de la microsporidiosis en sistemas
de produccin. Por esta razn, solamente se puede tratar de evitar el contacto entre los camarones
expuestos a riesgo de infestacin (hospederos intermediarios), los peces requeridos como hospederos
deinitivos para cerrar el ciclo y, el parsito en s.
Por lo anterior, se hace evidente la importancia de realizar planes de exclusin de predadores
de camarones (peces), tanto de los estanques de cultivo, como de los canales de suministro de agua
(reservorios).
Los camarones afectados por el parsito, deben ser descartados durante el cultivo en estanques
y durante el momento de la cosecha. De igual manera, deben extremarse cuidados para evitar la diseminacin de reproductores de P. vannamei infestados con alguna de las especies de microsporidios,
en regiones geogricas en donde el parsito no se encuentre o no haya sido reportado. No se deben
utilizar camarones infectados o sospechosos de microsporidiosis, en sistemas de maduracin.
MICROSPORIDIOS
Figura 4.2.2. Camarn P. vannamei infectado con Ameson (arriba) y presentando la

enfermedad del camarn algodonoso. En
contraste, camarn sano (abajo). Ntese
en el camarn enfermo, la apariencia blanquecina del msculo estriado (lechas), as
como su coloracin oscura y su pigmentacin azulosa tenue.
Figura 4.2.3. Camarn P. vannamei infectado con Ameson presentando signos de la

enfermedad del camarn algodonoso. Ntese la apariencia blanquecina del msculo
estriado en el primer segmento abdominal
(lecha gruesa) y en el cefalotrax (lechas
delgadas), as como la pigmentacin azulosa generalizada.
206
Figura 4.2.4. Secciones de abdomen de un

camarn P. vannamei infectado con Ameson y padeciendo la enfermedad del camarn algodonoso (izquierda) y de un camarn sano (derecha). Ntese en el enfermo
la apariencia blanquecina del msculo
estriado abdominal, indicndose que se trata de una infeccin por un microsporodio
miotrpico.
Figura 4.2.5. Montaje en fresco de msculo

estriado de un camarn P. duorarum infectado con Agmasoma. Cada esporonte conigurado en forma de vescula, contiene ocho
esporas (lechas). Magniicacin 1000X.
Foto: Jan Landsberg y Yasu Kiryu. Florida
Fish and Wildlife Conservation Commission, USA.
Figura 4.2.6. Montaje en fresco sin tincin

de msculo estriado de un camarn P. vannamei infectado con Ameson. Se observa
un esporonte conteniendo muchas pequeas esporas. Magniicacin 2000X.
207
Figura 4.2.7. Corte sagital en baja magniicacin (400X) de msculo abdominal de

un camarn P. vannamei infectado con
Ameson. Las ibras de msculo estriado del
centro del corte, han sido completamente
reemplazadas por masas levemente basoflicas de esporas del hongo (lechas). H&E.
Magniicacin 400X.
Figura 4.2.8. Corte histolgico de corazn

de P. vannamei infectado con Ameson.
La infeccin del hongo ha producido una
respuesta inlamatoria circundando el rea
afectada por agregacin de hemocitos (lechas delgadas) alrededor de la masa de
esporas de microsporidios (lecha gruesa).
H&E. Magniicacin 1200X.
208
4.3
HAPLOSPORIDIOS
Haplosporidiosis hepatopancretica, infeccin por haplosporidios o haplosporidiosis.
Etiologa
Se cree que las afecciones en camarones penaeidos son producidas por varios posibles haplosporidios. Algunos de estos parsitos reportados en cultivos de camarn en Asia y Mxico, no
han sido lo suicientemente estudiados y tampoco han sido demostradas esporas del parsito como
para poder ser ubicados taxonmicamente dentro del phylum Haplosporea. Para ello, se requerirn
estudios a partir de TEM con el in de utilizar las caractersticas de su ultraestructura en una correcta
clasiicacin.
Sin embargo, recientemente ha sido propuesto (Painhealth Medical References) que los haplosporidios sean clasiicados en el orden sporozoa como protozoarios del phylum Ascetospora,
clase Stellatosporea, con reproduccin asexual mediante esquisogonias y que producen esporas pero
no lagelos, pudiendo tener seudpodos.
Distribucin geogrica y rango de la enfermedad
Los haplosporidios han sido observados en camarones P. vannamei silvestres y de cultivo, tanto en Cuba como en Nicaragua. Tambin se han reportado en P. stylirostris en Mxico, en P. monodon
en Indonesia y en Filipinas. Fue reportado un caso presuntivo de haplosporidiosis en P. monodon en
el norte de Australia, pero sin conirmar. El reporte de haplosporidiosis en P. stylirostris en Mxico,
correspondi en la realidad a camarones que se encontraban en fase terminal por microsporidiosis,
causada esta por una especie del gnero Ameson.
Debido a que en los camarones afectados, los parsitos han sido observados en clulas de los
tbulos del HP, se presume que la va de infeccin es por ingestin, aunque an no se tiene claro cual
es el mecanismo de transmisin de estos protozoarios en los camarones.
Mtodos de diagnstico
Figura 4.3.1. Corte histolgico de hepatopncreas (HP) de un juvenil

P. monodon infectado con haplosporidios. En la foto se ilustran los
diferentes estadios de infeccin en las clulas epiteliales de los tbulos
del HP (lechas). Tincin: Mayer-Bennett H&E. Magniicacin: 1800X.
Foto cortesa del Lic. A. Varela, a partir de la coleccin histolgica
del Laboratorio de Patologa Acutica de la Universidad de Arizona
(Tucson, EE.UU.).
Anlisis histolgico para demostrar la presencia intracelular del

protozoario en las clulas epiteliales
de los tbulos del HP. En infecciones
tpicas, el protozoario se aprecia apicalmente o lateralmente al ncleo,
como si fuera un plasmodio multinucleado que puede fragmentarse en estados mononucleados. Estas clulas
mononucleadas pueden ser encontradas en el lumen de los tbulos del HP,
presumiblemente despus de haber
sido liberadas por clulas necrticas.
Los plasmodios pueden ser observados en cortes histolgicos teidos con
hematoxilina y eosina o con Wolbachs Giemsa (Fig. 4.3.1).
209
En los casos de infecciones muy severas, los tbulos del HP con alta presencia de haplosporidios se observan rodeados por masas de hemocitos, los cuales estn encapsulando y melanizando
activamente las porciones afectadas de los tbulos.
Al realizar estudios mediante TEM a partir de clulas epiteliales de tbulos afectados del HP,
se observa la presencia de haplosporosomas dentro del parsito cuyo tamao aproximado es de 29140 nm x 130-603 nm.
Signos clnicos
No han sido reportados signos de enfermedad en camarones penaeidos afectados por el parsito, que puedan ser asociados con presencia de haplosporidios en sus tejidos. Sin embargo, los
camarones afectados podran presentar bajo crecimiento.
Estrategias de control
Los camarones infectados con haplosporidios deben ser removidos del sistema de produccin
y eliminados adecuadamente para destruir el parsito. Las instalaciones de cultivo deben ser desinfectadas de manera cuidadosa y los camarones (en cualquier estadio) infectados o sospechosos, no
deben ser movilizados ni entre incas, ni entre regiones geogricas.
4.4
EPICOMENSALES
Los camarones penaeidos cultivados en sistemas de produccin semiintensivos, intensivos o

sobreintensivos, con altas densidades de siembra en los estanques o aguas de baja calidad, frecuentemente desarrollan formas de enfermedad causadas por microorganismos o agentes que se adhieren a
las branquias o a la supericie del animal. La mayora de stos, viven en estado libre en el agua y no
son patgenos verdaderos. Debido a que utilizan al camarn como un substrato para adherirse, son
llamados organismos epicomensales o epibiontes. En la mayor parte de los casos, estos organismos
no causan daos directos al camarn, aunque s producen problemas indirectamente al adherirse a
las branquias (compitiendo por el oxgeno disuelto), o a las supericies cuticulares de apndices y
otras partes del cuerpo.
Enfermedad de las branquias, enfermedad de branquias ilamentosas, enfermedad bacteriana
de las branquias, branquias sucias, branquias negras, branquias cafs o, branquias con adherencias
de protozoarios.
Etiologa
La enfermedad por adherencia de epicomensales en camarones, se presenta cuando se afectan las funciones respiratorias, alimenticias o locomotoras de los animales, a causa de colonizacin
excesiva de la cutcula principalmente por bacterias ilamentosas, bacterias con forma de bastn
(bacilos), protozoarios, diatomeas y algas ilamentosas verde-azules. Los siguientes son los agentes
ms comunes en camarones (Fig. 4.4.1 a la 4.4.9):
Organismos tipo Leucothrix (Leucothrix like-organisms-LLO): Leucothrix mucor, Leucothrix spp.

y Thiothrix sp.
Bacterias que forman muy pequeos ilamentos (small little ilaments-SLF): Vibrio sp., Flavobacterium sp., Cytophaga sp. y Flexibacter sp. Existen posiblemente otras bacterias an no
identiicadas.
210
Protozoarios
Pertricos ciliados con colonias: Zoothamnium sp., Epistylis sp. y Vorticella sp.
Apostoma ciliados: Ascophrys spp. y otros
Loricados ciliados: Lagenophrys spp. y Cothurnia spp.
Suctorianos: Acineta spp., Ephelota spp. y otros
Flagelados: lagelados tipo Bodo y Chrysidella sp.
Algas
Diatomeas (pennales): Nitzschia spp., Amphiprora spp. y Navicula spp.

Algas verdes: Enteromorpha spp. y otras algas verdes ilamentosas
Algas ilamentosas verde-azules: Spirulina subsala, Lyngbya spp. y Schizothrix spp.
Agentes abiticos: sales de hierro
Diagnstico
Las enfermedades por organismos epicomensales, son diagnosticadas mediante la observacin de preparaciones en fresco de los microorganismos, tanto en larvas y postlarvas, como en secciones de branquias y apndices orales de camarones juveniles o adultos afectados.
En sistemas intensivos y sobreintensivos, debe ser una prctica frecuente el monitoreo de
camarones y su examen bajo un microscopio, para determinar la prevalencia y severidad de la enfermedad. De esta manera, se proporciona informacin signiicativa sobre las condiciones sanitarias
de las branquias con base en la adherencia de epibiontes en los camarones. Las decisiones para
implementar sistemas de control en los casos de enfermedades por organismos epicomensales, estn
basadas en los datos obtenidos a partir de estos monitoreos.
Los camarones para los anlisis de rutina, no deben ser seleccionados aleatoriamente de una
poblacin bajo estudio. El mejor procedimiento es seleccionar individuos que estn decados, con
las branquias manchadas o que tengan la musculatura opaca (sospechosos de hipoxia), ya que el
propsito principal de este examen es decidir si se necesita algn tipo de tratamiento y qu clase de
qumico o manejo debe ser utilizado para salvar la poblacin.
Normalmente, de cinco a diez camarones de un tanque o estanque, deben ser seleccionados
y sometidos a un examen microscpico.
Utilizando cortes histolgicos en paraina teidos con H&E, pueden detectarse y usualmente
identiicarse organismos epicomensales del cuerpo, branquias y apndices. Adems, el grado de severidad de la infestacin por organismos epicomensales, es con frecuencia fcilmente determinado,
especialmente por cortes que proporcionan un panorama de las branquias.
Rango geogrico y especies afectadas
La presencia de epicomensales puede ser observada en cualquier regin del mundo donde se
cultiven camarones penaeidos.
Todas las especies de camarones son potencialmente susceptibles a adherencias de epicomensales, tanto en sistemas extensivos, como semi-intensivos e intensivos. Tambin pueden ser observados en otras especies de decpodos bentnicos que sirven como hospederos o vectores. De igual
manera, enfermedad por epibiontes pueden presentarse en todos los estadios del ciclo de vida de los
camarones.
211
A pesar de su amplia distribucin geogrica, pueden presentarse cepas o especies nicas y

que son propias de determinadas regiones. stas, pueden signiicar un peligro para instalaciones de
cultivo de otros lugares donde no existan, en caso de que se realice una importacin con camarones
infestados. En este sentido, deben tomarse medidas preventivas para excluir parsitos epicomensales
potencialmente exticos.
Efecto en los camarones afectados
Estos organismos se presentan generalmente sobre la supericie de cutcula en las branquias
principalmente. No se consideran como patgenos verdaderos para los camarones, ya que slo los
utilizan como sustrato para adherirse al exoesqueleto donde viven y se alimentan de los nutrientes
del medio acutico. Por esta razn, se les conoce como epicomensales o epibiontes. Sin embargo,
pueden causar dao a los camarones cuando colonizando en grandes cantidades, se ubican en las
lamelas branquiales e interieren con el intercambio gaseoso (liberacin de CO2 y captacin de O2).
Los organismos epicomensales pueden llegar a matar al camarn, por el impedimento que
causan al lujo normal de agua a travs de las branquias, diicultando en casos extremos el intercambio gaseoso en las lamelas branquiales (hipoxia). Igualmente, pueden interferir con los procesos
de muda, aprehensin del alimento y movimientos bsicos de los animales severamente afectados,
cuando colonizan severamente los apndices motrices, natatorios o alimentarios. De la misma manera, algunos organismos epicomensales producen exotoxinas, que podran causar algn grado de
lesin en los tejidos colonizados y adyacentes.
Con frecuencia, las infestaciones involucran poblaciones mixtas de organismos, existiendo
una especie dominante. A este respecto, las bacterias cortas y largas con forma de bastn, son las de
mayor prevalencia en los laboratorios de larvicultura de camarn. A su vez, las bacterias ilamentosas
y los protozoarios pertricos son generalmente las causas principales de enfermedad en juveniles y
adultos de P. vannamei.
En sntesis, la enfermedad causada por epicomensales en camarones puede producir bajo crecimiento, disminucin en el consumo de alimento, comportamiento de nado anormal, intolerancia al
ejercicio (y al estrs), intolerancia a condiciones de bajo oxgeno disuelto y cambios en la coloracin
de las branquias.
Signos clnicos
Las lamelas de las branquias son el lugar ms frecuente para la infestacin en juveniles y
camarones mayores. Por esta razn, el examen visual de camarones afectados mostrar cambio de
coloracin de las branquias, constituyndose as en un examen muy valioso para la deteccin de
enfermedad por epicomensales.
La presencia de coloracin amarilla, caf o negra en las branquias, est relacionada con colonizacin de epicomensales y pueden ser debida a material detrtico o lodo atrapado por los microorganismos que estn adheridos a las lamelas.
Si se observa coloracin verde o verdosa de las branquias, puede deberse a colonizacin de
las lamelas branquiales por una o varias especies de algas.
Algunos camarones pueden tomar una apariencia de peluche, algodonosos o como si estuvieran colonizados por hongos, lo cual corresponde en realidad a una fuerte colonizacin de organismos epicomensales sobre la supericie del animal.
212
Una invasin desde moderada hasta alta, puede inhibir la respiracin del animal. Los camarones pueden aparecer exteriormente normales pero mueren rpidamente durante o inmediatamente
despus del ejercicio, manipulacin (muestreos o transferencias) o exposiciones a condiciones de
oxgeno bajo en el agua.
En infestaciones de larvas o postlarvas, con frecuencia se ven involucrados los apndices natatorios, ojos y algunas partes de la boca. Como se mencion anteriormente, los animales afectados
pueden mostrar diicultades para moverse y alimentarse.
Cuando los camarones se encuentran severamente afectados por epicomensales, pueden morir durante la muda, encontrndose luego en el fondo con apariencia limpia del exoesqueleto, pero
con la cutcula suave. Teniendo las branquias fuertemente colonizadas por epibiontes, las condiciones de oxgeno disuelto bajo durante las madrugadas pueden potencializar el ambiente hipxico del
camarn que de por s se est presentando por la enfermedad en las branquias.
Tanto los hallazgos mediante montajes en fresco como a travs de anlisis histolgicos, deben
ser registrados para establecer la prevalencia y severidad del problema. Los grados de severidad pueden ser estimados en la escala de 0 a 4 de acuerdo con la Tabla propuesta por Lightner (1996), ver
Tabla 6 del captulo 1 (pg. 46).
Vas de transmisin
Todos los agentes epicomensales son habitantes normales del medio acutico marino. Estos
organismos son parte de la lora natural asociada con la cutcula de los crustceos marinos y de esta
manera, infestaciones menores causan pequea o ninguna prdida de las funciones o signos de enfermedad. Cuando las condiciones medioambientales son convenientes, puede desencadenarse la
adherencia de organismos epicomensales, los cuales generarn enfermedad por adherencias en los
camarones de cultivo. El hacinamiento en las piscinas y el aporte de nutrientes mediante el alimento
suministrado, contribuyen a las condiciones eutricas en los tanques o estanques de cultivo de camarn.
La prevencin de enfermedades causadas por organismos epicomensales, requiere de condiciones ambientales ptimas de cultivo, que permitan el sano crecimiento de los camarones. Sin embargo, no existen lineamientos especicos disponibles, concernientes a los niveles de requerimientos
nutricionales mnimos, manipulacin precisa del medioambiente y factores de manejo que alteren
los niveles de infestacin. Por esta razn, los cambios en las condiciones que predisponen la presencia de estas enfermedades, deben ser manejados hasta el momento, de manera intuitiva aunque con
fundamentos tcnicos.
Los factores bsicos que pueden ser alterados, incluyen el aumento en el recambio de agua,
mejoramiento de la circulacin del cuerpo de agua, disminucin en la densidad de cultivo o reduccin de la biomasa (raleo), uso de alimentos balanceados y fertilizar el terreno adecuadamente,
teniendo en cuenta la proporcin P:N para evitar la acumulacin de materia orgnica y proliferacin
de protozoarios.
Si el control no puede mantenerse a travs del manejo del agua y del alimento o del saneamiento del tanque o estanque, se ha reportado efectividad en el uso de Neomicina, realizando baos
durante la noche a 10 ppm en tanques de larvicultura. Para el caso de juveniles y adultos, se ha
utilizado sulfato de cobre (Cutrine plus: 0.2 - 0.5 ppm Cu, baos de 4 horas) y Formalina (50 - 100
ppm, baos de 1 hora).
213
EPICOMENSALES
Figura 4.4.1. Montaje en fresco de branquias de P. vannamei con una colonia de

Epistylis sp. (lecha). Es caracterstica en este
protozoario la ausencia de mionema. Sin
tincin. Magniicacin 400X.
Figura 4.4.2. Corte histolgico de una lamela branquial de P. vannamei con una
colonia de Epistylis sp. sobre la cutcula del
extremo de la lamela. Debido a que esta
colonia carece de mionema, se sugiere que
se trata de Epistylis sp. H&E. Magniicacin
400X.
Figura 4.4.3. Montaje en fresco del extremo de una lamela branquial de P. vannamei
con una colonia de Zoothamnium sp. Adherida a su extremo. Es notable la existencia de mionema en el tallo de este parsito
(lecha). Sin tincin. Magniicacin 400X.
214
Figura 4.4.4. Corte histolgico de branquia

de P. vannamei infestado con Zoothamnium
sp. Es caracterstica la presencia de mionema en el centro del tallo del protozoario
(lecha), el cual es una ibra retrctil que da
movimiento al organismo. H&E. Magniicacin 600X. Cortesa del Dr. Ken Hasson y
Dra. Barbara Lewis.
Figura 4.4.5. Montaje en fresco del suctoriano Acineta sp. Sobre lamelas branquiales
de P. vannamei. El organismo tiene apariencia similar a copa de vino y posee un ncleo central, esfrico y oblongo. Sin tincin.
Magniicacin 400X.
Figura 4.4.6. Corte histolgico de branquias

de P. vannamei con presencia de Acineta
sp. Es caracterstica la forme de copa de
vino y tentculos apicales (lecha). H&E.
Magniicacin 600X.
215
Figura 4.4.7. Montaje en fresco de branquias de P. vannamei, con colonizacin

moderada por bacterias ilamentosas Leucothrix mucor (lechas). Sin tincin. Magniicacin 400X.
Figura 4.4.8. Montaje en fresco de branquias

de P. vannamei con colonizacin moderada
por microalgas (diatomeas) Nitzschia sp.
(lecha). Sin tincin. Magniicacin 400X.
Figura 4.4.9. Adherencias severas del alga

verde ilamentosa Enteromorpha sp. sobre
la cutcula del cefalotrax de un reproductor P. vannamei, mantenido en un tanque
externo de concreto. A pesar de la colonizacin externa, las branquias no presentaban adherencias y tampoco se observaron
lesiones histolgicas en rganos o tejidos
de este animal.
216
4.5
Metazoarios
Agente causal
Las parasitosis producidas por metazoarios en los camarones, son causadas por larvas de
cstodos (gusanos planos como tenias), nemtodos (gusanos redondos) o tremtodos (platelmintos o
gusanos con forma de hoja). Estos organismos infestan de manera ocasional diferentes tipos de tejidos
en los camarones penaeidos. Rara vez se asocian con problemas de enfermedad o mortalidad masiva
en cultivos de camarones, debido a la diicultad en que se cierre el ciclo de vida dentro de los estanques de produccin y durante el tiempo de engorde de los camarones.
Cstodos. Tambin llamados gusanos planos (como la tenia), estn generalmente asociados con infestaciones en el hepatopncreas. Se encuentran usualmente incorporados en el tejido de esta glndula
digestiva o cerca de sta bajo su tejido capsular. En los camarones, los cstodos se encuentran bajo
formas inmaduras del parsito, mientras que las irmas adultas (maduras) se encuentran en las rayas.
Adems de los gneros Prochristianella, Parachristianella y Renibulbus que son los ms frecuentes en
camarones, tambin existe un gusano con forma de pera que se ubica en el intestino y pertenece al
grupo cyclophyllidea. Los gusanos planos se encuentran ms comnmente en camarones silvestres
que en camarones de cultivo. La diferenciacin entre los grupos de los gusanos planos, se hace con
base en la forma general del cuerpo y en la armadura tentacular (Fig. 4.5.1).
Nemtodos. Los gusanos redondos se observan con ms frecuencia en camarones silvestres que en
camarones bajo sistemas de cultivo. Esta diferencia en el grado de infestacin, puede estar relacionada con la ausencia de hospederos alternativos en los sistemas de cultivo. Cuando se presentan, las
infestaciones por nemtodos pueden darse dentro o alrededor de la mayora de los rganos del camarn as como en su tejido muscular. Los nemtodos ms frecuentes en camarones son Spirocamallanus pereirai, Leptolaimus sp., Ascaropsis sp. e Hysterothylacium reliquens (Fig. 4.5.2, 4.5.4 y 4.5.6).
Tremtodos. Los platelmintos se encuentran presentes en los camarones bajo las formas inmaduras
llamadas metacercaria, enquistados en varios tejidos del animal. En instalaciones comerciales de
cultivo de camarn, se han reportado especies pertenecientes a las familias Opecoelidae, Microphallidae y Echinostomatidae. Unas de las especies ms frecuentes, son Opecoeloides imbriatus,
Helicometrina nimia y Microphallus sp. (Fig. 4.5.3).
Especies afectadas y estadios susceptibles
Los metazoarios pueden ser encontrados en tejidos de camarones subadultos hasta reproductores, potencialmente en la mayora de las especies de penaeidos y en la mayor parte de los pases
tropicales y subtropicales productores de camarn de cultivo.
Ciclo de vida
En el medio natural, los camarones P. vannamei sirven como hospederos intermediarios para
muchos parsitos metazoarios incluyendo nemtodos y tremtodos. En el tejido del camarn, se desarrolla un estado intermediario de la larva como parte del ciclo de vida del organismo, requiriendo
de otro hospedero para completar su ciclo. Este hospedero inal generalmente no est presente en los
estanques de cultivo de camarn y por lo tanto, no es frecuente observar larvas de metazoarios en
camarones de cultivo, siendo ms fcil encontrarlos en tejidos de reproductores silvestres.
217
Figura. 4.5.1. Ciclo de vida del cstodo Prochristianella penaei. El camarn se come un coppodo u otro pequeo
crustceo infestado con la larva del parsito (A), la larva se desarrolla a un estado larval avanzado en los tejidos del
camarn (B), una raya ingiere a los camarones infestados (C), el tremtodo se convierte en adulto en el intestino
(vlvula espiral) de la raya y comienza a liberar sus huevos (D), los huevos salen por las heces de la raya y son consumidos por coppodos (E), los huevos eclosionan y las larvas del gusano se desarrollan dentro del cuerpo de los
coppodos (F). Adaptado de Johnson, 1995.
Figura 4.5.2. Ciclo de vida del nemtodo Hysterothylacium relinquens. El camarn se come un coppodo u otro
pequeo crustceo infestado con larvas de estas lombrices intestinales (A), el nemtodo se desarrolla en etapa larval
avanzada en los tejidos del camarn (B), un pez tipo pejesapo ingiere los camarones infestados (C), el nemtodo
se desarrolla hasta hacerse adulto en el intestino del pez (D) y al liberarse en las heces (E) son comidos por los coppodos (F). Adaptado de Johnson, 1995.
218
Figura 4.5.3. Ciclo de vida del tremtodo (platelminto) Opecoeloides imbriatus. La forma infecciosa o cercaria
ingresa al camarn (A), la cercaria migra hacia el tejido y se enquista hasta formar una etapa ms avanzada llamada
metacercaria (B), los camarones infestados con metacercarias son comidos por peces (perca plateada, corvina, sargo
o varios otros) (C). El camarn es digerido dentro del pez y se libera as la metacercaria (D), la cual se desarrolla
dentro del mismo pez hasta alcanzar su estado adulto (E). Los huevos puestos por estos adultos salen en las heces
de los peces. Se libera entonces un estado infeccioso llamado miracidio, el cual ingresa a un caracol y se multiplica
dentro de esporocistos (F). Dentro de los esporocistos se desarrollan las cercaras y cuando estn completamente
desarrolladas, sale del esporocisto y del caracol y nadan en la bsqueda de un camarn (G). Si al poco tiempo logran
llegar hasta un camarn, se completa el ciclo del parsito. Adaptado de Johnson, 1995.
Signos clnicos
Aunque no se han reportado signos clnicos ocasionados por estos parsitos, es posible hallar
muchos de ellos en un solo camarn y tal vez podran llegar a afectar la tasa de supervivencia de
poblaciones infestadas de camarones en cultivo. De igual manera, podran disminuir la tasa reproductiva en padrotes severamente parasitados.
Diagnstico
El mtodo ms comn y rpido para diagnosticar la presencia de metazoarios en camarones,
es mediante montajes en fresco de tejidos sospechosos, observando (luego de liberarlos de su cpsula) los organismos muy activos en hepatopncreas y en contenido intestinal.
En los parsitos se puede observar un tubo digestivo notorio, mediante movimientos con el
ajuste micromtrico del microscopio y en los nemtodos se nota un extremo anterior (curvo y romo)
y uno posterior (agudo).
Mediante histopatologa, se pueden observar cortes longitudinales, sagitales y/o transversales
de parsitos, enquistados generalmente en tejido perigstrico, aunque tambin se observan los organismos o parte de ellos en hepatopncreas y contenido intestinal.
Las medidas sanitarias ms indicadas para el manejo de instalaciones en las que exista un riesgo importante de padecer infestaciones por metazoarios, deben estar centradas en evitar la introduccin de reproductores silvestres, si stos se encuentran altamente infestados con larvas de parsitos.
En casos de infestaciones severas en estanques de produccin en los cuales los metazoarios
estn causando problemas, adems de excluir reproductores silvestres, debe determinarse cules son
los hospederos deinitivos y eliminarlos del sistema de produccin para cortar el ciclo del parsito.
219
METAZOARIOS
Figura 4.5.4. Montaje en fresco de hepatopncreas de P. vannamei, quedando expuesto por ruptura completa de los tbulos, un gusano redondo (nemtodo). En un
extremo se puede observar la gnada del
parsito (lecha gruesa) y en el centro a lo
largo del organismo se encuentra el tubo
digestivo (lecha delgada). Especie no identiicada. Sin tincin. Magniicacin 100X.
Figura 4.5.5. Montaje en fresco de heces

de P. vannamei, con presencia de un parsito tubular con extremos romos y segmentos en su interior (lecha). Especie sin identiicar. Sin tincin. Magniicacin 100X.
Figura 4.5.6. Corte histolgico de tejido

perigstrico de P. vannamei, con un quiste de un nematodo (lechas), en la regin
prxima al estmago. No se observa respuesta inlamatoria alrededor del tejido del
parsito. H&E. Magniicacin 200X.
220
4.6
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222
CAPTULO 5 - Enfermedades causadas por hongos
Captulo 5
Enfermedades causadas por hongos
223
224
CAPTULO 5
Enfermedades causadas por hongos
Carlos R. Pantoja y Donal V. Lightner

Aquaculture Pathology Laboratory
1117 E. Lowell St.
Tucson, Arizona 85721 USA
Introduccin
Prcticamente todos los estados de vida del camarn son susceptibles a enfermedades causadas por hongos. Independientemente de la especie de camarn de que se trate, los estados larvarios
son susceptibles a este tipo de infecciones y por lo tanto, es comn y necesario el uso de tratamientos
proilcticos para poder controlarles. Se desconoce si las especies de hongos que afectan los estados
larvarios del camarn son todas de distribucin mundial, pero la micosis larvaria es un problema que
se presenta tanto en el hemisferio oriental como el occidental. Por otro lado, los esdados de vida ms
avanzados (postlarva, juvenil, adulto) tambin son susceptibles a enfermedades causadas por hongos,
siendo Fusarium solani la especie ms comn. F. solani es un patgeno oportunista y como tal se establece con mayor facilidad en camarones que se encuentran ya debilitados por otras(s) enfermedades,
o que se encuentran estresados por condiciones ambientales extremas, o por haber sido expuestos
a agentes qumicos irritantes, o que han sufrido heridas por trauma fsico (por ejemplo, heridas causadas por el rostrum de otros camarones). Una vez iniciada la infeccin por F. solani, las heridas
causadas en el camarn facilitan el ataque de otros patgenos oportunistas, tales como Vibrio spp.
5.1
MICOSIS
Micosis larvaria.
Agente Etiolgico
Lagenidium spp., Sirolpidium spp.
Agente
La mayora de los casos de micosis larvaria son debidos a hongos phycomycetos Lagenidium
spp. (L. callinectes es la especie ms comn) y Sirolpidium spp. Otras especies, tales como Phytium
spp., Leptolegnia marina y Haliphthoros milfordensis, se pueden llegar a presentar ocasionalmente
causando enfermedades.
225

La micosis larvaria en general es aparentemente cosmopolita, presentndose en todos aquellos
lugares en donde haya actividad camaroncola. Sin embargo, no se sabe si especicamente Lagenidium spp. y Sirolpidium spp. son cosmopolitas o no. Todas las especies de camarones penaeidos son
susceptibles a la micosis larvaria.
Los signos clnicos incluyen:
Mortandades sbitas durante los estados larvarios o durante los estados de postlarvas temprana
Las infecciones ocasionadas por Lagenidium spp. ocurren ms comnmente en los estados de
huevo, nauplio, protozoea y mysis
Las infecciones debidas a Sirolpidium spp. ocurren con mayor frecuencia en los estados de
mysis y postlarvas tempranas
Las infecciones producidas por estas dos especies de hongos en las larvas y postlarvas resultan
en micosis progresivas, pueden ir a acompaadas de una ligera respuesta inlamatoria o no inlamacin del todo. Las infecciones son generalmente letales y pueden ir acompaadas de vibriosis
durante los estados terminales
Tpicamente el micelio invade completamente el cuerpo del camarn reemplazando todos los
rganos y tejidos.
No hay lesiones distintivas, pero en los estados avanzados de la enfermedad, las larvas dejan
de alimentarse, se aletargan y adquieren una coloracin opaca blanquecina.
Basado en historial del caso y signos clnicos descritos anteriormente.
Diagnstico conirmatorio
Basado en uno o ms de los siguientes mtodos:
Preparaciones en fresco
Las larvas son examinadas en fresco utilizando un microscopio de luz con objetivos de por lo
menos 20X. Las larvas infectadas muestran la presencia de un micelio extensivo, sin septas y altamente ramiicado invadiendo el cuerpo y los apndices de la larva. Las hifas reemplazan prcticamente
todos los tejidos y rganos de las larvas o postlarvas y son de una coloracin plida verde-amarillenta
y contienen numerosos inclusiones pequeas que refractan la luz. Un tipo de hifa especializada
forma tubos de descarga, los cuales pueden o no presentar una vescula terminal en su parte distal y
se les puede observar empujando hacia afuera a travs de la cutcula. En el caso de Sirolpidium spp.,
226
las zoosporas mtiles pueden ser observadas al ser liberadas a travs de los tubos de descarga (los
cuales son ms cortos que los de Lagenidium spp.y no protruyen a travs de la cutcula). En el caso
de Langenidium spp., las zoosporas se desarrollan dentro de la vescula apical prominente en el pice
de un tbulo de descarga relativamente largo.
Anlisis histolgico
El diagnstico histolgico se basa en la demostracin de las hifas y los tubos de descarga que
protruyen conspicuamente (en el caso de Lagenidium spp.) o no (en el caso de Sirolpidium spp.) a
travs de la cutcula (Fig. 5.1.1 y 5.1.2).
Informacin adicional
Debido a la implementacin de medidas proilcticas a las cuales son sometidos tanto los
huevecillos como los nauplios, la frecuencia de casos de micosis larvaria ha tenido una tendencia a
disminuir en la camaronicultura moderna. Probablemente, entre estas medidas, las ms efectivas han
sido la colecta de nauplios basada en la respuesta fototctica positiva y el uso de tratamientos con
trelan durante las primeras fases del cultivo larvario.
ENFERMEDADES CAUSADAS POR HONGOS

MICOSIS LARVARIA
Figura 5.1.1. Preparacin en fresco mostrando una larva de P. setiferus en estado

avanzado de infestacin con Lagenidium
callinectes. Las lechas indican los tbulos
de descarga que protruyen a travs de la
cutcula. Cuando los nutrientes se han agotado y el cuerpo de la larva ha sido consumido completamente, el hongo inicia la
esporognesis. Magniicacin 70X.
227
Figura 5.1.2. Preparacin en fresco de una

larva mysis de P. vannamei infestada severamente con Sirolpidium sp. Se muestra una
porcin del ojo compuesto el cual, al igual
que el resto del cuerpo (no mostrado), se
encuentra completamente invadido por el
micelio (lecha gruesa). El tubo de descarga corto, caracterstico de Sirolpidium sp., es
evidente protruyendo a travs de la cutcula
(lecha delgada). Magniicacin: 300X.
5.2
FUSARIOSIS
Fusariosis, enfermedad de las branquias negras (en P. japonicus).
Agente etiolgico
Fusarium spp.
Agente
Hongo imperfecto Fusarium solani y posiblemente otras especies del mismo gnero, incluyendo F. moniliforme. Los hongos phycomycetos Atkinsiella dubia y Haliphthoros spp., raramente
causan enfermedades en camarones penaeidos, pero se les ha encontrado asociados a lesiones en las
branquias o en la cutcula, las cuales son muy similares a las causadas por Fusarium.
Fusarium spp. es de distribucin cosmopolita. Se le encuentra comnmente en plantas terrestres, suelo y ambientes de agua dulce y salobre.
Todas las especies de camarones penaeidos son susceptibles a la fusariosis. En la mayora de
las especies, los estados de sub-adulto y adulto son afectados con mayor severidad y frecuencia.
Algunas especies de camarones penaeidos son bastante susceptibles a esta enfermedad, an
en los estados de juvenil, principalmente cuando son sometidos a condiciones de cultivo en sistemas
intensivos y superintensivos. Ejemplos de especies altamente susceptibles son P. japonicus y P. califor-
228
niensis. Ejemplos de especies moderadamente susceptibles son P. stylirostris y P. vannamei. Ejemplos

de especies relativamente resistentes son P. monodon y P. merguiensis.
Signos clnicos de importancia diagnstica.
Los signos clnicos incluyen:
Lesiones con una respuesta inlamatoria muy intensa (melanizacin). Las lesiones melanizadas
tienden a ser bastante extensas, comnmente con un borde rojizo y necrtico y pueden localizarse
con frecuencia en los apndices, tales como escamas de las antenas, lagelos antenales, pednculos
oculares, pereipodos, urpodos y telson (Fig. 5.2.1). No es raro que lesiones en la cutcula debidas
a raspaduras, prdidas de apndices y punciones con la espina rostral, se infecten posteriormente
con Fusarium.
Cualquier parte externa del cuerpo, incluyendo branquias y cmara branquial. Fusarium tiene
tendencia a infectar la base coxal de los pereipodos para posteriormente invadir el tejido branquial
adyacente causando melanizacin intensa. De la misma manera, tiene tendencia a invadir las porciones basales de la cabeza y los apndices de la cola, desde donde se dispersa a zonas adyacentes.
Necrosis cuticular y melanizacin intensa muy dispersa.
Basado en historial del caso y signos clnicos descritos anteriormente.
Diagnstico conirmatorio
Basado en uno o ms de los siguientes mtodos:
Preparaciones en fresco
Examen en fresco de raspados de lesiones melanizadas. El anlisis microscpico a magniicaciones de 100X o 200X revela la presencia de las hifas del hongo. Estas preparaciones son tambin
tiles en la demostracin de las macroconidias, las cuales tienen una forma de canoa. La demostracin de las macroconidias proporciona un diagnstico deinitivo (Fig. 5.2.2).
Anlisis histolgico
El anlisis con tinciones de H&E revela la presencia de lesiones granulomatosas bastante prominentes, acompaadas de una multitud de ndulos hemocticos con centros melanizados. Tinciones
especiales (por ejemplo, PAS y tinciones de plata basadas en la tcnica de PAS) demuestran claramente la presencia de las hifas y de las macroconidias, las cuales se tien de color rosa o rojo (PAS)
o negro (tinciones de plata basadas en la tcnica de PAS) (Fig. 5.2.3 y 5.2.4).
229
Informacin adicional
Fusarium solani es un patgeno oportunista que ataca camarones debilitados por otras enfermedades, por exposicin a agentes qumicos irritantes o a ciertos metales pesados, o por amontonamiento a densidades altas.
El principal mecanismo para el establecimiento de la infeccin es la presencia de lesiones (pequeas o grandes) en la cutcula. La infeccin puede comenzar en varias partes del cuerpo al mismo
tiempo y pueden llegar a cubrir hasta un 10% de la supericie corporal.
Una vez hecha su aparicin, la enfermad progresa con un porcentaje de recuperacin de solo
un 30% aproximadamente. Las lesiones producidas por Fusarium tambin sirven como puerta de
entrada para otros patgenos oportunistas, tales como Vibrio spp.
ENFERMEDADES CAUSADAS POR HONGOS

FUSARIOSIS
Figura 5.2.1. Lesiones melanizadas (negras)

dentro de la cmara branquial de un camarn Penaeus sp. causadas por infestacin
con Fusarium solani.
Figura 5.2.2. Preparacin en fresco, sin teir, de un raspado obtenido de una lesin
causada por F. solani. Las hifas del hongo
son bastante evidentes dentro de la masa de
tejido necrosado, inlamado y melanizado.
Magniicacin: 1,000X.
230
Figura 5.2.3 Fotografa a bajo aumento

de un corte histolgico a travs de una lesin causada por F. solani. Se muestra una
porcin de la pared corporal y el msculo
subyacente. Masas de hemocitos han iniltrado la zona y encapsulado las hifas de Fusarium. Algunas de las hifas encapsuladas,
principalmente cerca de la pared corporal
han sido melanizadas (ejemplos sealados
con lechas). Tincin: Hematoxilina/eosina-loxina de Mayer-Bennett. Magniicacin: 300X.
Figura 5.2.4. Fotografa a alto aumento de

un corte histolgico a travs de una lamela
branquial de un camarn juvenil P. vannamei, la cual ha sido infestada por F. solani.
Las hifas y las condias (ejemplos sealados con lechas) son bastante evidentes.
Tincin: PAS de McManus y verde claro.
Magniicacin: 600X.
231
5.3
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233
234
CAPITULO 6 - Avances en la inmunologa del camarn
Captulo 6
Avances en la Inmunologa del
Camarn
235
236
Captulo 6
Avances en la Inmunologa del Camarn
Margherita Anna Barracco, Luciane Mara Perazzolo y

Rafael Diego Rosa
Laboratorio de Inmunologa Aplicada a la Acuicultura (LIAA)
http://www.liaaq.ccb.ufsc.br/
Departamento de Biologa Celular, Embriologa y Gentica (BEG)
Universidad Federal de Santa Catarina (UFSC)
Traducido del Portugus al Espaol por: Roberto Chamorro, Intrprete Pblico Autorizado Panam.
Resumen
Los camarones poseen una relevancia especial dentro del grupo de los crustceos, dada su
gran importancia econmica en la acuicultura mundial. Sin embargo, el xito de esta actividad viene sufriendo graves limitaciones, debido al constante surgimiento de nuevas enfermedades, principalmente de origen viral, que causan mortalidades masivas y producen perjuicios econmicos
incalculables. El siguiente captulo ofrece una visin general y actualizada del sistema inmune de
los crustceos, en especial de los camarones, con base en el progreso recientemente logrado en la
elucidacin de los diferentes mecanismos de defensa de estos animales contra los patgenos. En
el captulo son discutidas las reacciones celulares y humorales desencadenadas en respuesta a los
agentes infecciosos, los procesos de reconocimiento y los diferentes mecanismos inmunoefectores.
Se da un nfasis especial a las defensas antivirales, una vez que los virus constituyen los principales
agentes infecciosos que amenazan seriamente la sostenibilidad de la camaronicultura mundial. Finalmente, el captulo discute adems de la utilizacin y eicacia de compuestos inmunoestimulantes,
la utilizacin de inmunoparmetros como indicadores de las condiciones de salud de los camarones.
En esta nueva edicin hubo una importante actualizacin de los temas relacionados a los pptidos
antimicrobianos, el papel de las lectinas en los mecanismos de reconocimiento y como molculas
inmunoefectoras, la modulacin de genes inmunolgicos durante infecciones y principalmente los
diferentes mecanismos antivirales existentes en camarones, con relevancia especial en la va del RNA
de interferencia (RNAi).
Principales abreviaturas: ALF: factor anti-liposacrido; AMPs: pptidos antimicrobianos; 2M:
2-macroglobulina; BGBP: protena que se une a los -glucanos; CP: protena de coagulacin; CRD:
dominio para el reconocimiento de carbohidratos; CTLs: lectinas calcio-dependientes; DHC: conteo
diferencial de hemocitos; dsRNA: DNA doble cadena; Dscam: Down syndrome cell adhesion molecule (implicada en el reconocimiento); FREPs: lectinas con un dominio semejante al ibringeno;
GBP: protena que se une a los -glucanos; HGG: hemocito con grnulos grandes; HGP: hemocito
con grnulos pequeos; HH: hemocitos hialinos; hRNA: hairpin RNA de origen endgena; IFN: interfern; LGBP: protena que se une a los -glucanos y LPS; LPS: lipopolisacridos; LTA: cido lipoteicoico; NLR: NOD-like receptor; NOS: xido ntrico sintasa; miRNA: microRNA de origen endgena;
PAMPs: patrones moleculares presentes en los patgenos; PEN: penaeidina; PGNs: peptidoglicanos;
proPO/PO: pro-fenoloxidasa/fenoloxidasa; PRPs/PRRs: protenas/receptores de reconocimiento patrn; PS: polisacridos sulfatados; RLR: RIG-I-like receptor; RNAi: RNA de interferencia; RNIs: radicales de nitrgeno; ROIs: radicales de oxgeno; siRNA: RNA de interferencia de cadena corta (short) de
237
origen viral; SOD: superxido dismutasa; THC: conteo total de hemocitos; TLR: Toll-like proteins de
vertebrados; VP19 Y VP28: protenas de la membrana del WSSV.
Introduccin
Los crustceos pertenecen a un antiguo y exitoso grupo zoolgico, constituido por ms de 65
mil especies vivientes, muchas de las cuales son muy apreciadas para consumo humano, como son
los camarones, langostas, langostinos de agua dulce, cangrejos y jaibas.
El cultivo de crustceos, principalmente de camarones (camaronicultura), sobresale en este
contexto como una importante alternativa para la rpida produccin y en gran escala, como alimento
para el consumo humano, contribuyendo adems a la preservacin de las poblaciones naturales de
una extraccin excesiva. Actualmente, cerca del 50% de los camarones consumidos en el mundo son
provenientes del cultivo, siendo los penaeidos Penaeus (Litopenaeus) vannamei, Penaeus monodon
y Fenneropenaeus chinensis las especies marinas ms cultivadas (FAO, 2010). Actualmente, la camaronicultura es responsable de millones de empleos en pases tropicales, siendo los cinco principales
productores mundiales, China, Tailandia, Vietnam, Indonesia e India. En las Amricas los tres mayores
productores son Ecuador, Mxico y Brasil (FAO, 2010).
Hoy en da, el principal factor limitante para el xito de la camaronicultura mundial, consiste
en el control de las infecciones principalmente las de origen viral. Las altas densidades poblacionales
usualmente utilizadas en los cultivos, propician la rpida propagacin de agentes infecciosos, resultando generalmente en mortalidades masivas y consecuentemente, causando perjuicios econmicos
incalculables. Actualmente, la proilaxis y el control de las enfermedades en los cultivos se limitan
bsicamente al manejo adecuado y a la disminucin de condiciones de estrs, considerando que los
factores que determinan el estado de salud de los camarones son todava poco conocidos.
En este contexto, el estudio del sistema inmunolgico de los crustceos sobresale como una
estrategia novedosa y promisoria, pues permite conocer las bases de la susceptibilidad y de la resistencia de estos animales a los microorganismos patgenos y parsitos, adems de proporcionar aportes valiosos para el establecimiento de parmetros de salud e inmunomarcadores para la seleccin
gentica de animales ms resistentes a las infecciones y al desarrollo de compuestos inmunoestimulantes.
Los camarones estn en constante contacto, en su ambiente natural, con una gran diversidad
de microorganismos, incluyendo mltiples virus, que pueden constituir una seria amenaza a su sobrevivencia. No obstante, el evidente xito de este grupo zoolgico a lo largo de ms de 500 millones
de aos de su historia evolutiva, conirma la presencia de un sistema inmunolgico eiciente y capaz
de protegerlos contra la invasin de los agentes causantes de enfermedades.
Los principales sistemas de defensa actualmente reconocidos en los crustceos son: (1) reconocimiento del no-propio por protenas de reconocimiento patrn y Dscam; (2) sealizacin y
activacin de los hemocitos; (3) respuestas inmunocelulares (fagocitosis, formacin de cpsulas y
ndulos, iniltracin y trampas extracelulares de cidos nucleicos); (4) produccin de molculas antimicrobianas (especies reactivas de oxgeno y nitrgeno y pptidos antimicrobianos); (5) melanizacin
mediada por el sistema de activacin de la pro-fenoloxidasa (proPO) y (6) defensas antivirales (citocinas anlogas a interferones, sistema RNA de interferencia, apoptosis y autofagia).
En esta nueva versin del captulo, fueron actualizadas varias informaciones, en especial los
temas que se reieren a los pptidos antimicrobianos, a las lectinas y su papel como molculas de
reconocimiento e inmunoefectoras, a la generacin de diversidad del gene Dscam y su implicacin
en el reconocimiento, a las vas de sealizacin celular (Toll, Imd y JAK/STAT), a la modulacin de
238
genes inmunolgicos durante infecciones y principalmente a las defensas antivirales de camarones,

con relevancia al sistema de RNA de interferencia o RNAi. Introducimos adems, varias referencias
bibliogricas recientes en los diferentes tpicos de la inmunologa de crustceos.
6.1.
Sistema circulatorio, hemolinfa y coagulacin
La primera lnea de defensa de estos animales es proporcionada por la presencia de un caparazn externo rgido o exoesqueleto, que funciona como una barrera isicoqumica protectora. Adems
de ello, todo el tracto digestivo de estos animales, que es la principal va de entrada de los microorganismos, tambin est revestido por una capa quitinosa y an ofrece un ambiente cido y lleno
de enzimas y efectores antimicrobianos (Soonthornchai et al., 2010), capaz de inactivar y digerir la
mayora de los microorganismos que no son parte de su microbiota natural. Cuando estas barreras
son traspasadas, siendo insuicientes para impedir la penetracin de los patgenos, se desencadenan
en el hospedero una serie de reacciones inmunolgicas internas/sistmicas complejas con el objetivo
de neutralizar y eliminar los agentes invasores.
A ejemplo de otros invertebrados, los camarones disponen solamente de un sistema inmune
innato, diferente de los vertebrados que adems de esto, tienen tambin un sistema inmune adaptativo. El sistema inmune innato es ilogenticamente ms antiguo, encontrado en todos los organismos
multicelulares, incluyendo invertebrados y plantas, mientras que el sistema inmune adaptativo slo se
encuentra en los vertebrados. Este ltimo se caracteriza por la presencia de una ininidad de receptores y anticuerpos altamente especicos y por la induccin de clulas de memoria, que garantizan una
respuesta de defensa altamente eiciente y especica para los ms diversos patgenos. Esta respuesta
transcurre de la presencia de una lnea celular linfoctica, presente solamente en los vertebrados,
donde se apoyan todos los mecanismos de especiicidad y de memoria inmunolgica. De esta forma,
su ausencia en los invertebrados inviabiliza cualquier tentativa de desarrollo de vacunas, en su concepto clsico de la palabra, disminuyendo as de manera sustancial, la posibilidad de la prevencin
y control de infecciones en los camarones.
El sistema circulatorio de los camarones es de tipo abierto o semi-abierto, por donde transita
un tejido luido denominado hemolinfa, correspondiente a la sangre de los vertebrados (Fig. 6.1.1).
La hemolinfa de los crustceos
presenta un color azul, debido a
la presencia de la protena respiratoria hemocianina, que posee
cobre en su principio activo. Esta
corresponde a ms del 90% de las
protenas totales del plasma (Rochu y Fine, 1978) que, adems de
participar del transporte del oxgeno, tambin puede participar
de las respuestas de defensa de
camarones. La fragmentacin de
esa protena multifuncional puede
generar, por ejemplo, fragmentos
proteicos con actividad antimiFigura 6.1.1: Sistema circulatorio abierto/semi-abierto de camarn y r- crobiana o que participan en los
ganos asociados. C: corazn; HP: hepatopncreas; OHA: rgano hema- procesos de melanizacin (Coates
topoytico antenal; OHD: rgano hematopoytico dorsal; OHV: rgano y Nairn, 2014).
hematopoytico ventral; OL: rgano linfoide; VD: vaso dorsal (adaptado
de Bachre et al., 2004).
239
En la hemolinfa son transportados continuamente nutrientes, excretas, oxgeno, hormonas y

otras molculas importantes para los diferentes rganos de esos animales. Debido a su luidez y por la
capacidad de llegar directamente a todos los tejidos de los crustceos, la hemolinfa contiene adems
todos los componentes del sistema inmunolgico.
La hemolinfa est compuesta por una fraccin celular, representada por las clulas circulantes
o hemocitos y por una fraccin lquida constituida por el plasma que contiene diferentes factores
humorales. Las respuestas inmunocelulares y humorales actan de forma integrada en los crustceos,
protegindolos contra la invasin de microorganismos y parsitos, garantizando as su integridad
corporal y homeosttica.
La coagulacin de la hemolinfa es un mecanismo inmunolgico esencial para la supervivencia
de animales invertebrados con un sistema circulatorio abierto o semi-abierto como los crustceos.
La formacin de cogulos previene tanto la prdida de la hemolinfa, como la diseminacin de los
patgenos por la cavidad corporal del animal. En los invertebrados son reconocidos dos diferentes
mecanismos de coagulacin (Jiravanichpaisal et al., 2006; Cerenius y Sderhll, 2011). El primero es
una cascada proteoltica activada por componentes microbianos, como los lipopolisacridos (LPS) de la pared de bacterias Gram
negativas y los -1,3-glucanos de los hongos, ocurriendo en limlidos y el segundo
es una reaccin de coagulacin dependiente de la enzima transglutaminasa (TGasa),
ocurriendo en insectos y crustceos (Cerenius y Sderhll, 2011).
En el caso de la coagulacin de los
crustceos, un componente clave en el proceso de geliicacin del plasma es la protena de coagulacin (CP), que forma cogulos estables por medio de una reaccin de
unin cruzada entre sus molculas, mediadas por la TGasa. Las TGasas son enzimas
Ca2+-dependientes, usualmente compartimentalizadas dentro de los hemocitos de
los crustceos, capaces de formar uniones
entre residuos de glutamina y lisina (Fig.
6.1.2) presentes en ciertas protenas, como
la protena de coagulacin del plasma de
crustceos y de algunos insectos (Jiravanichpaisal et al., 2006; Cerenius y Sderhll,
2011).
La CP fue aislada y caracterizada en
varias especies de penaeidos, como en P.
monodon y M. japonicus (Yeh et al., 1998),
L. vannamei (Montao-Prez et al., 1999)
y F. paulensis (Perazzolo et al., 2005). Las
Figura 6.1.2: Reaccin de coagulacin en crustceos, mediada CPs de los crustceos son lipoprotenas
por la formacin de ligaciones cruzadas entre residuos de lisina (Jiravanichpaisal et al., 2006). Secuencias
y glutamina de las protenas de coagulacin, a travs de la acaminoacdicas completas de la CP fueron
cin de la TGasa y calcio.
240
determinadas en los camarones P. monodon (Yeh et al., 1999) y M. japonicus (Cheng et al., 2008),
siendo que el RNAm correspondiente es expresado en el hepatopncreas y en varios otros tejidos (Yeh
et al., 2007; Cheng et al., 2008), con excepcin de los hemocitos y de los msculos. Interesantemente, el tejido epidrmico sub-cuticular de M. japonicus demostr ser el principal sitio de la sntesis de
la CP, justamente resaltando la importancia de la coagulacin durante la muda del animal, cuando
eso se vuelve potencialmente ms expuesto a las lesiones y ataques microbianos (Cheng et al., 2008).
Excepto por la similitud funcional, las CPs de los crustceos no tienen ninguna caracterstica
molecular en comn con el ibringeno de los mamferos, o con el coagulgeno de los limlidos, lo
que sugiere que la CP de los crustceos representa un tipo distinto de protena formadora de cogulos. Curiosamente, las CPs de crustceos pertenecen a la clase de las lipoprotenas de densidad muy
alta (VHDL) y estn evolutivamente relacionadas con las vitelogeninas (VTG) (Jiravanichpaisal et al.,
2006; Cheng et al., 2008; Cerenius y Sderhll, 2011). La VTG es la principal precursora de vitelo
en hembras ovparas y no est relacionada con reacciones de coagulacin. Sin embargo, tanto la CP
como la VTG, tienen una regin similar en el dominio D del factor von Willebrand, implicado en la
coagulacin de la sangre de los mamferos (Sadler, 1991).
6.2.
Las clulas del sistema inmune
Hemocitos: las clulas inmunocompetentes de camarones

Las respuestas inmunocelulares de los crustceos estn bsicamente relacionadas con las clulas de la hemolinfa o hemocitos e incluyen la fagocitosis de microorganismos y la formacin de
cpsulas y ndulos en torno a los invasores. Los patgenos son neutralizados por una amplia variedad de molculas lticas y/o microbicidas, usualmente producidas por las clulas de la hemolinfa.
Muchas de estas molculas se encuentran almacenadas dentro de las vesculas o grnulos de ciertas poblaciones de hemocitos de donde son liberadas/secretadas durante las infecciones actuando
como inmunoefectores en diferentes respuestas de defensa y cascadas inmunolgicas. Otras son
constitutivamente liberadas a la hemolinfa, mientras otras son producidas transitoriamente durante
las infecciones. Adems de actuar en las respuestas de defensa, los hemocitos tambin participan en
la reparacin de heridas, esclerotizacin de la cutcula y se cree que tambin estn relacionados con
el metabolismo y transporte de carbohidratos (Jiravanichpaisal et al., 2006).
La comprensin de las reacciones inmunocelulares de los crustceos est fuertemente relacionada a la identiicacin y la caracterizacin de sus clulas inmunocompetentes. A pesar de no
haber todava una uniformidad en la clasiicacin de los hemocitos, tres tipos de clulas son usualmente reconocidos y descritos en los crustceos (Fig. 6.2.1 A-F): hemocitos hialinos (HHs), hemocitos
semi-granulares o con grnulos pequeos (HGPs) y hemocitos granulares o con grnulos grandes
(HGGs) (Bauchau, 1981; Hose et al., 1990; Jiravanichpaisal et al., 2006). La falta de homogeneidad
en la identiicacin de los hemocitos se debe principalmente al hecho de que esas clulas son muy
frgiles y reactivas, alterando rpidamente sus caractersticas morfoisiolgicas in vitro, lo que torna
su estudio ms difcil, que en el caso de los leucocitos de los vertebrados. La activacin de los hemocitos de los crustceos resulta generalmente en su estiramiento y degranulacin o ruptura, ocurriendo
la liberacin de una gran variedad de efectores inmunolgicos para el plasma.
De una manera general, los HHs de los crustceos son usualmente descritos como los menores hemocitos, con una alta relacin ncleo-citoplasma y conteniendo pocos o ningn grnulo (Fig.
6.2.1 A, D). De acuerdo con algunos autores, los HHs pertenecen a una lnea celular distinta de los
hemocitos granulares y estn esencialmente relacionados con los mecanismos de coagulacin (Hose
et al., 1990). Otros autores consideran que los HHs son las principales clulas fagocitarias (Johansson
241
et al., 2000) y que ese tipo celular es una forma intermedia de

la lnea de hemocitos granulares (van de Braak et al., 2002a).
Por otra parte, los hemocitos granulares (HGPs y
HGGs) son descritos como clulas de citoplasma ms abundante y ricos en grnulos de
diversos tamaos y contenidos
(Fig. 6.2.1 B, C, E, F). Algunos
autores sealan los HGPs como
formas intermedias, que luego
de su maduracin se transforman en HGGs (Bauchau, 1981;
Hose et al., 1990; Gargioni y
Barracco, 1998). En cuanto a
la funcin de los hemocitos
granulares, esta parece estar relacionada principalmente con
la fagocitosis de microorganismos, en la formacin de cpsulas y ndulos y tambin con la
produccin y almacenamiento
de molculas txicas y microbicidas (Hose et al., 1990; Gargioni y Barracco, 1998; van de
Braak et al., 2002b).
Nuevos hemocitos son
producidos y liberados en la circulacin a partir de los tejidos
hematopoyticos (Johansson et
al., 2000; van de Braak et al.,
2002a; Sderhll et al., 2003;
Jiravanichpaisal et al., 2006).
Esos tejidos son generalmente
constituidos por lbulos densos,
situados en la regin dorsal y
dorso-lateral del estmago y del
intestino anterior (regin epigstrica), as como en la base de los maxilpedos en el caso de los camarones penaeidos (van de Braak et al., 2002a) (Fig. 6.1.1). Los tejidos hematopoyticos presentan una
alta tasa de proliferacin celular y son los responsables por la diferenciacin y la maduracin de los
hemocitos que sern liberados en la hemolinfa (Lin y Sderhll, 2011).
Figura 6.2.1: Tipos de hemocitos (A-F) y reacciones celulares de defensa en
crustceos (G-J). A, D: hemocitos hialinos (HHs) de camarones observados
al microscopio de contraste de fase y eletrnico de transmisin, respectivamente; B, E: hemocitos con grnulos pequeos (HGPs); C, F: hemocitos con
grnulos grandes (HGGs). G: fagocitosis de una levadura por un hemocito de
L. vannamei; H: encapsulamiento in vitro del nemtodo Panagrellus redivirus
por hemocitos de Macrobrachium rosenbergii; I: encapsulamiento in vitro de
hifas del hongo Ganoderma sp. por hemocitos de Farfantepenaeus paulensis,
con fuerte reaccin de melanizacin; J: ndulo hemoctico en el hepatopncreas de L. vannamei con agregados bacterianos en el centro (reproducido
de Morales-Covarrubias, 2004).
La identiicacin de uno o ms progenitores celulares, as como la diferenciacin de las lneas

hemocticas producidas, es todava controvertida (Bauchau, 1981; van de Braak et al., 2002a; Sderhll et al., 2003; Bachre et al., 2004). A pesar de que los tejidos hematopoyticos son los principales
responsables por la produccin de los hemocitos, hay algunas evidencias reportadas de divisin de
242
esas clulas en la hemolinfa de camarones penaeidos, como en Marsupenaeus japonicus (Sequeira et

al., 1996) y Farfantepenaeus paulensis (Gargioni y Barracco, 1998), aunque la frecuencia de divisin
es muy baja.
El rgano linfoide (Fig. 6.1.1), ausente en muchas especies de crustceos decpodos, se localiza en la parte anterior del hepatopncreas de los camarones y parece participar en los procesos
de eliminacin y depuracin de agentes patgenos, ocurriendo en muchos casos la formacin de
cuerpos esferoidales durante las infecciones. No est claro si el proceso de la fagocitosis ocurre principalmente en ese rgano o si los hemocitos conteniendo los microorganismos ya fagocitados migran
a dicho lugar, para realizar la depuracin (van de Braak et al., 2002b).
Reacciones inmunocelulares de defensa
Luego de la invasin por microorganismos en la cavidad corporal de los camarones, estos son
reconocidos como agentes extraos por los hospederos y los hemocitos migran a los sitios de infeccin (iniltracin), generando una respuesta inlamatoria clsica. En estos sitios de infeccin ocurre
entonces la fagocitosis de los microorganismos y/o la formacin de agregados celulares densos en
torno de las partculas invasoras (ndulos y cpsulas) hasta la formacin de trampas extracelulares
de cidos nucleicos (un tipo nuevo de muerte celular asociada al sistema inmune de vertebrados e
invertebrados). Esas respuestas pueden culminar con la liberacin de diferentes molculas inmunoefectoras, capaces de neutralizar y degradar los agentes invasores (Jiravanichpaisal et al., 2006)
como ser descrito en la Seccin 6.4. Adems de actuar en las respuestas de defensa, los hemocitos
tambin participan en la reparacin de heridas, esclerotizacin de la cutcula y se cree que tambin
estn relacionados con el metabolismo y transporte de carbohidratos (Jiravanichpaisal et al., 2006).
Fagocitosis y formacin de cpsulas y ndulos
En el proceso de fagocitosis, el agente extrao es reconocido, englobado e interiorizado por

la clula dentro de una vacuola fagoctica o fagosoma, que luego se funde con las vesculas/grnulos
presentes en el citoplasma (Fig. 6.2.1 G). La fagocitosis de microorganismos fue bien demostrada en
diferentes especies de crustceos y camarones (Hose et al., 1990; Gargioni y Barracco, 1998; Muoz
et al., 2002). Aunque todava existan controversias en la literatura en lo que se reiere a los tipos de
hemocitos relacionados con los procesos de fagocitosis en los crustceos, se sabe que ese mecanismo, extremadamente importante, constituye la primera lnea de defensa celular para el control de la
invasin de microorganismos.
Luego de la fagocitosis de los microorganismos, estos son capturados en las vacuolas fagocticas intracelulares que se unen con los grnulos citoplasmticos y lisosomales. Los grnulos lisosomales se caracterizan por su pH cido (estabilizado por bombas de protones) y por la presencia de
una amplia variedad de enzimas hidrolticas capaces de degradar a la gran mayora de los microbios
invasores (Fig. 6.2.2). Entre estas se destaca la lisozima, una enzima capaz de romper polisacridos
complejos o peptidoglicanos (PGNs) de las paredes bacterianas. Las lisozimas representan aproximadamente 4% de las protenas totales de los hemocitos de camarones (Sotelo-Mundo et al., 2003) y poseen una actividad ltica potente contra un amplio espectro de bacterias Gram-positivas y negativas,
incluyendo especies de vibrios marinos (Hikima et al., 2003; de la Vega et al., 2006).
Cuando la cavidad corporal de los crustceos es invadida por una cantidad masiva de microorganismos o por partculas/patgenos de gran tamao, cuya fagocitosis no es posible, se desencadena
entonces la formacin de ndulos y cpsulas celulares, respectivamente. La formacin de cpsulas se
caracteriza por la agregacin de varias capas de hemocitos alrededor del patgeno de gran tamao,
como hifas de hongos nematodos y determinadas formas de protozoarios, capturndolos para su pos243
Figura 6.2.2: Mecanismos degradativos y microbicidas asociados a los hemocitos de crustceos durante el proceso
de fagocitosis. AMPs: pptidos antimicrobianos; RNI: especies reactivas de nitrgeno; ROI: especies reactivas de
oxgeno.
terior destruccin (Fig. 6.2.1 H, I). La formacin de ndulos, por otro lado, ocurre alrededor de una
gran cantidad de invasores (pequeos) como bacterias, que tambin son capturados dentro de agregaciones celulares (Covarrubias, 2004) (Fig. 6.2.1 J), semejantes a las cpsulas. Esta reaccin evita su
diseminacin por todo el cuerpo del camarn y la produccin de una septicemia.
En las regiones ms centrales de los ndulos, es comn observar la fagocitosis de microorganismos por los hemocitos que estn en contacto ms prximo de los microorganismos (Bauchau,
1981; Hose et al., 1990; Jiravanichpaisal et al., 2006). Ambas reacciones, la de encapsulamiento y
la formacin de ndulos, no solamente llevan al aprisionamiento de los patgenos, sino tambin
limitan y localizan las respuestas inmunolgicas solamente en la regin donde se encuentran los
agentes invasores. Esta respuesta inmune localizada, ayuda a proteger los tejidos del hospedero de los
daos causados por las molculas txicas y degradativas producidas y liberadas durante el proceso
inlamatorio y que sern explicadas posteriormente. En general, las regiones ms centrales de esas
agregaciones de hemocitos, se tornan fuertemente pigmentadas por una coloracin oscura, conocida
como melanizacin, como resultado de la liberacin de los compuestos inmunoefectores presentes
en los hemocitos que sern discutidos ms adelante.
Iniltracin
El nmero de hemocitos libres en la hemolinfa puede disminuir drsticamente durante una

infeccin como resultado de su iniltracin en los tejidos infectados y su utilizacin en la formacin
de los ndulos y cpsulas. En la reciente grave enfermedad causada por la bacteria Vibrio parahaemolyticus denominada inicialmente EMS (sndrome de mortalidad temprana) y despus de AHNPS
(sndrome de la necrosis hepatopancretica aguda), los anlisis histopatolgicos en L. vannamei y P.
monodon mostraron lesiones caractersticas en el hepatopncreas, causadas por las toxinas bacterianas y con iniltraciones hemocticas tpicas del proceso inlamatorio en las regiones inter e intra
tubulares de la glndula (Tran et al., 2013).
244
Trampas extracelulares de cidos nucleicos
Las trampas extracelulares de cidos nucleicos o ETs (del ingls, extracelular traps) constituyen
un nuevo mecanismo de defensa del sistema inmune innato, el cual fue inicialmente descrito en
neutrilos de mamferos (Brinkmann et al., 2004). Esas trampas son formadas por DNA, histonas y
protenas antimicrobianas, que son liberadas al medio extracelular (despus del rompimiento de la
membrana plasmtica) en respuesta a un determinado estimulo microbiano. La formacin de esas
redes extracelulares es dependiente de la generacin de radicales libres por la clula y sirve como
una barrera fsica que limita la diseminacin de los agentes invasores en el hospedero, adems de
neutralizar y destruir los patgenos por intermedio de las histonas y protenas antimicrobianas liberadas por el citoplasma (Brinkmann et al., 2004). Ese mecanismo fue recientemente descrito en el
camarn L. vannamei (Ng et al., 2013). Segn los autores, despus de un estmulo con PMA (phorbol
myristate acetate), LPS o con la bacteria Escherichia coli, los hemocitos son capaces de formar redes
extracelulares compuestas por DNA e histonas, as como los neutrilos de mamferos (Brinkmann et
al., 2004). No obstante, los mecanismos moleculares y celulares envueltos en la produccin de ETs
por los hemocitos de camarones necesitan an ser aclarados.
6.3.
Mecanismos de reconocimiento y sealizacin celular
Protenas/Receptores de Reconocimiento de Patrones Moleculares (PRPs/PRRs)

El primer paso para desencadenar cualquier reaccin inmunolgica se reiere al reconocimiento de los cuerpos extraos invasores del hospedero. Como se dijo anteriormente, los invertebrados,
incluyendo los camarones, no producen molculas de reconocimiento altamente especicas como
los anticuerpos, ni contienen las clulas antgeno-especicas como los linfocitos de los vertebrados.
Sin embargo, ellos poseen molculas capaces de diferenciar eicientemente lo propio de lo no-propio
y, as, desencadenar mecanismos que resultan en la neutralizacin y/o destruccin de los patgenos
invasores. Las respuestas de defensa en los camarones son desencadenadas a partir del contacto con
el patgeno, o con sus componentes (Fig. 6.3.1). Esas reacciones son iniciadas por el reconocimiento
del agente invasor por protenas de reconocimiento patrn, presentes en el hospedero.
El trmino protenas/receptores de reconocimiento patrn o PRPs/PRRs (del ingls, pattern-recognition proteins/receptors), hace alusin al hecho de que el sistema inmunolgico reconoce
primariamente patrones moleculares presentes en los microorganismos o M/PAMPs (del ingls, microbe or pathogen-associated molecular patterns) (Janeway y Medzhitov, 2002). En el texto utilizaremos
preferencialmente los trminos PRPs y PAMPs. Las PRPs son molculas producidas por el hospedero
que reconocen y se unen a los PAMPs y pueden ser secretadas hacia el plasma, o estar localizadas
en la membrana de las clulas, principalmente las del sistema inmune o an estar libres en el citosol.
En los invertebrados, los principales PAMPs reconocidos por PRPs son los LPS de la supericie
de las bacterias Gram-negativas, los peptidoglicanos PGNs y LTA de la pared de las Gram-positivas,
los -1,3-glucanos de la pared de hongos, el dsRNA (del ingls, double-stranded RNA) producido
durante la replicacin de varios virus, el ssRNA viral (del ingls, single-strand RNA) y motivos CpG
(DNA no-metilado) de microorganismos (Wang y Wang, 2013a). Estos PAMPs, caractersticos de
microorganismos y ausentes en el hospedero, son esenciales para la supervivencia de los microorganismos, lo que signiica que estos blancos de la inmunidad innata no pueden sufrir mutaciones o ser
evolutivamente descartados por los microbios, para evadirse del reconocimiento por el hospedero.
Una vez dentro del hospedero, los patrones moleculares del patgeno son reconocidos y unidos a sus
respectivas PRPs y/o PRRs y en el caso de los crustceos, inician la activacin principalmente de los
hemocitos, desencadenando una respuesta inmune celular o la produccin/liberacin de una serie
de molculas inmunoefectoras/inmunoreguladoras por degranulacin o, an ms, por modular la
expresin de genes inmunolgicos especicos (Figura 6.3.1).
245
Figura 6.3.1: Respuestas inmunolgicas inducidas en los hemocitos, despus del reconocimiento de patgenos, va
PRPs plasmticas o celulares y subsecuente activacin (1) desgranulacin, con liberacin de diferentes inmunoefectores e inmunoreguladores; (2) induccin y/o represin de genes inmunolgicos; (3) activacin de respuestas
celulares como fagocitosis y formacin de ndulos y cpsulas.
Varias PRPs fueron identiicadas y caracterizadas en la hemolinfa de los crustceos, tales como
las que se unen a los LPS (LBP), -1,3-glucanos (GBP y GBP), LPS y -1,3-glucanos (LGBP y protenas mas-like) y a diferentes azcares presentes en la supericie de los microorganismos invasores
(varios tipos de lectinas) (Wang y Wang, 2013a). Adems de esas, los camarones poseen tambin
PRPs de la familia de las Dscam, las cuales presentan un amplio espectro de reconocimiento debido
a mecanismos de recombinacin somtica (Armitage et al., 2014). No obstante, distintos de otros
invertebrados (Steiner, 2004), los crustceos no poseen la clsica protena de reconocimiento PGNs,
la PGRP (del ingls, peptidoglycan recognition proteins) (Wang y Wang, 2013). En el genoma completo de un crustceo, el del braquipodo Daphnia pulex, ningn gene codiicado para PGRP fue
encontrado (McTaggart et al., 2009). Recientemente, fue demostrado que las protenas QM (tumor
suppressor gene) y lectinas del tipo FREP son las responsables por el reconocimiento de PGNs en
camarones (Udompetcharaporn et al., 2014). Curiosamente el sistema de activacin de la pro-fenoloxidasa (proPO) del cangrejo de ro P. leniusculus puede ser activado va PGNs a travs de la participacin de dos protenas homlogas a la serino-proteasa y una LGBP, pero no por la PGRP (Liu et al.,
2011), como ocurre en los insectos.
Algunas de las diferentes PRPs identiicadas en los crustceos se presentan en la Tabla 1.
246
Tabla 1: Las principales protenas de reconocimiento patrn (PRPs) de camarones.

PRP
Reconocimiento (PAMP)
Microorganismos
GBP
-1,3-glucanos
Hongos
GBP
-1,3-glucanos
Hongos
LGBP
LPS y -1,3-glucanos
Hongos y bacterias Gram-negativas
Mas-like
LPS y -1,3-glucanos
Hongos y bacterias Gram-negativas
Lectinas
Azcares variados
Diferentes microorganismos
LBP
LPS
Bacterias Gram-negativas
Dscam
nd
Diferentes microrganismos
Nd = no determinada.
Protenas que se unen a los -1,3-glucanos: GBP y GBP
Las protenas que reconocen exclusivamente los -glucanos tienen la capacidad de unirse a
los componentes de la pared celular de los hongos y fueron caracterizadas en muchas especies animales, denominndose de manera general como GBP y GBP. En los crustceos existen por lo menos
estas dos clases de protenas que reconocen y se unen a los -glucanos. La primera est representada por una lipoprotena de alta densidad, la GBP (Yepiz-Plascencia et al., 1998), sintetizada en el
hepatopncreas (Romo-Figueroa et al., 2004) y constitutivamente presente en la hemolinfa de estos
animales. La segunda clase est compuesta por pequeas protenas, la GBP (Sritunyalucksana et al.,
2002) y la LGBP (Du et al., 2007; Liu et al., 2009a), sintetizadas por los hemocitos y/o el hepatopncreas de los crustceos.
La GBP fue inicialmente aislada/clonada y caracterizada en el cangrejo de ro P. leniusculus
(Duvic y Sderhll, 1990) y en seguida en varios otros crustceos (Duvic y Sderhll, 1993; Thrnqvist et al., 1994), incluyendo varias especies de camarones como F. californiensis (Vargas-Albores et al., 1996), L. vannamei (Jimnez-Vega et al., 2002; Romo-Figueroa et al., 2004), L. stylirostris
(Vargas-Albores et al., 1997), F. chinensis (Lai et al., 2011) y ms recientemente en F. paulensis y L.
schmitti (Gonalves et al., 2012). Bioqumicamente, las GBPs son glicolipoprotenas conteniendo en
su estructura oligosacridos ricos en manosa y un alto porcentaje de lpidos (aproximadamente 50%),
siendo los fosfolpidos la clase lipdica predominante (Ruiz-Verdugo et al., 1997). Estas protenas
contienen un motivo de adhesin celular RGD (arginina-glicina-aspartato) y/o RGE (arginina-glicina-glutamato) (Wang y Wang, 2013a).
Fue demostrado que la GBP del cangrejo de ro es idntica a una lipoprotena de alta densidad (LP1) presente en la hemolinfa de los machos y hembras del camarn Penaeus semisulcatus y que
estaba relacionada con el transporte de lpidos hacia el ovario, en el caso de las hembras (Lubzens
et al., 1997). Tambin fue demostrado en camarones, que la GBP y la HDL (del ingls, high density
lipoprotein) eran de hecho la misma protena (Yepiz-Plascencia et al., 1998). As, se considera que las
GBPs de los crustceos tienen una doble funcin: transportar lpidos como una HDL y participar en
el sistema inmune como una PRP.
247
La interaccin de la GBP con los -1,3-glucanos lleva a la formacin de un complejo que

se une a una protena asociada a la supericie celular, un superxido dismutasa (SOD) o a una
-integrina de supericie, a travs del motivo RGD (Jiravanichpaisal et al., 2006). Luego de esta unin,
ocurre la activacin celular, que resulta en la adhesin y degranulacin parcial de los hemocitos
granulares (Barracco et al., 1991). La exocitosis del material granular promueve la liberacin de las
molculas del sistema proPO, entre otras molculas, ocurriendo una posterior activacin de este
sistema por los mismos -1,3-glucanos (Jiravanichpaisal et al., 2006). Fue tambin demostrado que la
GBP puede actuar como una opsonina, aumentando la fagocitosis de levaduras por los hemocitos
de los cangrejos de ro (Cerenius et al., 1994). Tambin se demostr recientemente que las GBP de
los camarones F. paulensis y L. schmitti presentan una actividad aglutinante contra levaduras conirmando nuevamente su multifuncionalidad (Gonalves et al., 2012).
Otra protena que se une a los -glucanos, es la GBP, que fue clonada de los hemocitos del camarn P. monodon (Sritunyalucksana et al., 2002) y no del hepatopncreas como las dems GBPs.
La GBP es una protena constitutivamente expresada en los hemocitos y reconoce especicamente
hongos, por unirse a los -1,3-glucanos (curdlan y zymosan) de su pared. As como la GBP, la
GBP tambin induce la activacin del sistema proPO de los crustceos luego de unirse a los -1,3glucanos (Jiravanichpaisal et al., 2006).
Protenas que se unen a los LPS y -1,3-glucanos: LGBP
PRPs que se unen a ambos, LPS y -1,3-glucanos (LGBPs), fueron identiicadas en crustceos
e insectos y presentan un importante papel en las respuestas inmunes innatas. Las LGBPs de los crustceos son protenas pequeas (36-46 kDa) producidas en los hemocitos (Liu et al., 2009a) y/o en el
hepatopncreas de estos animales (Roux et al., 2002; Cheng et al., 2005). La primera LGBP aislada y
caracterizada en los crustceos, fue en el cangrejo de ro P. leniusculus (Lee et al., 2000). Esta LGBP
est presente en los hemocitos, pero ausente en el plasma y tiene la propiedad de unirse tanto a los
LPS como a los -1,3-glucanos, pero no a los PGNs mostrando su especiicidad para bacterias Gramnegativas y hongos. Una vez unida a sus respectivos PAMPs, la LGBP as como la GBP, lleva a la
activacin del sistema proPO del cangrejo. En los camarones penaeidos, existen algunas referencias
sobre la clonacin del gene de la LGBP: en L. stylirostris (Roux et al., 2002), L. vannamei (Cheng et
al., 2005) y F. chinensis (Du et al., 2007; Liu et al., 2009a).
As como las PRPs descritas anteriormente, las LGBPs participan tambin en la activacin del
sistema proPO del cangrejo de ro (Lee et al., 2000) y de los camarones L. stylirostris (Roux et al.,
2002) y P. monodon (Amparyup et al., 2012). Sin embargo, la protena del cangrejo de ro debe estar
simultneamente unida a los dos PAMPs para que ocurra una completa activacin del sistema proPO
(Lee et al., 2000). El anlisis de la expresin diferencial de la LGBP de L. stylirostris infectados con
WSSV, demostr que ocurre una sper expresin del gene en respuesta a la infeccin viral, sugiriendo
que la LGBP sea una protena inducible de fase aguda, importante no solamente para las infecciones
bacterianas y de hongos, sino tambin en las infecciones virales (Roux et al., 2002).
A pesar de que las LGBP y GBP tienen dominios de adhesin celular (RGD) como la BGBP, estas PRPs diieren de la BGBP por contener tambin sitios caractersticos semejantes a las -glucanasas
(dominio GLU) bacterianas, lo que no ocurre en la GBP (Wang y Wang, 2013a). El dominio GLU es
un sitio de fragmentacin de ligaciones glucosdicas (-1,3 e -1,4). Debido a la presencia de este
dominio caracterstico y comn en la GBP y LGBP (as como en protenas de insectos y otros invertebrados) fue propuesto agrupar PRPs con sitios GLU en una clase especial, denominada BGRP (del
ingls, -1,3-glucanase-related proteins) (Wang y Wang, 2013a) en la cual la BGBP no est incluida.
248
Protenas mas-like
La mas-like es una protena de reconocimiento patrn multifuncional descrita en insectos y

crustceos. En el cangrejo de ro P. leniusculus la mas-like se une a las bacterias Gram-negativas y
levaduras y, consecuentemente, a los LPS y -1,3-glucanos, semejante a la LGBP. Luego del reconocimiento de lo no-propio, esta PRP promueve la activacin del sistema proPO, la adhesin celular
y el aumento de la fagocitosis (Jiravanichpaisal et al., 2006). La mas-like de P. leniusculus (Huang et
al., 2000; Lee y Sderhll, 2001) fue as denominada debido a su similitud con la masquerade de la
Drosophila, presente durante su embriognesis, en el desarrollo larval y en el estadio de pupa (Murugasu-Oei et al., 1995).
Wang y Wang (2013a) proponen denominar las mas-like de los crustceos/insectos como SPHs
(del ingls. serine protease homologs) debido a su homologa molecular con las serino-proteasas,
aunque sin actividad hidroltica.
La mas-like del cangrejo de ro existe en los hemocitos bajo una forma inactiva. Esta protena
es exocitada de los hemocitos aun en su forma inactiva y despus de su unin a microorganismos
especicos es fragmentada por una proteasa todava desconocida, produciendo as varios fragmentos
peptdicos. Uno de ellos promueve la adhesin celular en el cangrejo de ro (Jiravanichpaisal et al.,
2006). Por otro lado, in vitro la mas-like funciona como una opsonina, estimulando la fagocitosis por
los hemocitos del cangrejo de ro.
Otra clase de mas-like, homloga a las serino-proteasas, fue identiicada tambin en P. leniusculus (Sricharoen et al., 2005) y en P. monodon (Amparyup et al., 2007). Estas protenas hemocitarias
presentan homologa con los factores de activacin de la proPO (del ingls, FAPPs) de insectos, a
diferencia de la mas-like descrita anteriormente, que parece ser una PRP.
Aglutininas y/o Lectinas
Las lectinas son protenas sin actividad cataltica, con capacidad de unirse a carbohidratos
especicos de la supericie de diferentes clulas, incluyendo microorganismos, causando su aglutinacin. Debido a esta caracterstica, inicialmente se consider que las lectinas de los invertebrados
eran anlogas funcionales de las inmunoglobulinas de los vertebrados, pero hoy se sabe que son
estructural y funcionalmente distintas. Actualmente, las lectinas, tanto de vertebrados como de invertebrados, son preferencialmente deinidas como protenas de reconocimiento o PRPs, una vez que
son capaces de reconocer y unirse a los azucares especicos de la supericie de patgenos y entonces
causar su aglutinacin.
La propiedad de aglutinacin deriva del hecho de que estas molculas son por lo menos bivalentes, presentando dos o ms sitios de unin con los carbohidratos especicos, denominados dominios para el reconocimiento de carbohidratos o CRDs (del ingls, carbohydrate recognition domain)
(Marques y Barracco, 2000).
Usualmente la presencia de lectinas es investigada a travs de pruebas de hemaglutinacin,
razn por la cual estas protenas son tambin conocidas por hemaglutininas o aglutininas. En estas
pruebas se utilizan eritrocitos de diferentes vertebrados, por presentar una variedad de azcares especicos en su supericie y sobre todo por tener coloracin roja natural, lo que facilita la visualizacin del fenmeno de aglutinacin a simple vista. Sin embargo, en estas pruebas se pueden utilizar
tambin diferentes tipos de bacterias y/o levaduras, que tambin presentan azcares especicos en
su supericie. Por otro lado, la reaccin de aglutinacin no es tan fcilmente observable como en el
caso de los eritrocitos.
249
La mayora de las lectinas relacionadas con el sistema inmune de crustceos pertenece a la

superfamilia de las lectinas del tipo-C o CTLs (del ingls, C-type lectins), siendo as denominadas por
el hecho de su actividad biolgica ser calcio-dependiente. Estas CTLs son comnmente producidas
de forma constitutiva en el hepatopncreas de los crustceos, son secretadas hacia el plasma y reconocen generalmente azcares N-acetilados, en especial derivados del cido silico y sialoglicoconjugados. Hay tambin lectinas que reconocen otros azcares como los galactsidos, conocidos como
galectinas, los mansidos, y las lectinas relacionadas con el ibringeno, llamadas de FREPs (Wang y
Wang, 2013b). En este captulo trataremos solamente de las CTLs y de las FREPs.
Las primeras lectinas a ser bioqumicamente puriicadas de la hemolinfa de crustceos fueron
las de la langosta Homarus americanus hace ms de 30 aos (Hall y Rowlands, 1974) y desde entonces, otras varias lectinas han sido detectadas y aisladas en diferentes crustceos.
Recientemente varias CTLs fueron identiicadas y caracterizadas por abordaje molecular (clonacin y produccin en sistema recombinante) en camarones (Tabla 2). La gran mayora de estas
lectinas son producidas por el hepatopncreas de forma constitutiva y parecen funcionar como PRPs,
debido a que tienen la propiedad de unirse a diferentes PAMPs, como PGN, cido lipoteicoico y
principalmente LPS de la supericie de bacterias. Es importante resaltar que las lectinas se diferencian
funcionalmente de las LGBPs, que tambin reconocen LPS (y beta-glicanos), porque no solamente
actan en el reconocimiento, sino que tambin causan la aglutinacin de las clulas portadoras de
LPS, lo que no ocurre con las LGBPs. Adems, aparte de estar relacionadas al reconocimiento y aglutinacin de patgenos invasores, las lectinas pueden presentar funciones inmunolgicas adicionales
actuando como verdaderas molculas inmunoefectoras.
En el camarn F. chinensis, por ejemplo, fueron clonadas y caracterizadas cinco lectinas
(FcL1-FcL5). Las cinco CTLs son producidas de forma constitutiva en el hepatopncreas, son secretadas hacia el plasma y ms all de funcionar como PRPs presentan adems actividades inmunolgicas
adicionales. Todas las lectinas de F. chinensis tienen la capacidad de unirse y aglutinar diferentes
especies de bacterias Gram positivas y Gram negativas y tienen su expresin gnica inducida despus del desafo con bacterias (Vibrio anguillarum) y/o virus (WSSV). Las FcL1, FcL3 y FcL4 poseen
un nico tipo de CRD con ainidad para manosa (FcL1 y FcL3) (Sun et al., 2008; Wang et al., 2009a)
o para galactosa (FcL4) (Wang et al., 2009b). Curiosamente, la FcL1 presenta una fuerte actividad
antimicrobiana contra ciertas bacterias y varios hongos (Sun et al., 2008), lo que no es comn entre
las lectinas. Por otro lado, la FcL3 tiene la propiedad de unirse e interactuar con la protena de la envoltura viral VP28 del virus de la mancha blanca (Wang et al., 2009a). Ya la FcL4 se une fuertemente
a la supericie de V. anguillarum y facilita su eliminacin del hospedero infectado. Interesantemente,
la FcL4 presenta una mayor homologa molecular con las lectinas de insectos que con las de los
camarones, inclusive con las propias lectinas de F. chinensis (Wang et al., 2009b). Por otro lado, las
FcL2 y FcL5 presentan dos CRDs distintos en la misma molcula, uno con ainidad para manosa y
otro para galactosa (Zhang et al., 2009a; Xu et al., 2010). La actividad aglutinante de la FcL5 est ms
dirigida contra bacterias Gram negativas que contra Gram positivas (Xu et al., 2010). Por otro lado,
los dos CRDs de la FcL2 se unen a bacterias distintas y probablemente deban trabajar en sinergismo
in vivo durante las infecciones. Esto parece ser conirmado, por el hecho de que la actividad de los
fragmentos de la molcula (producidos a travs del sistema recombinante) conteniendo apenas uno
de los CRD de esta lectina es menor que la actividad de la molcula completa (Zhang et al., 2009a).
250
Tabla 2: Caracterizacin de las principales lectinas (CTLs) recientemente identiicadas en

camarones peneidos.
Lectina
Expresin
Ligandos
*Aglutinacin
Modulacin (Funcin)
Referencia
Fenneropenaeus chinensis
FcLec1
HP, St
Man, LPS, PGN
G+/G
Bac (+) WSSV(+)

(AMP)
Sun et al., 2008
FcLec2
HP, St
Gal, Man, PGN,

LPS, LIA
G+/G-
V. ang. (+)
WSSV(+)
Zhang et al.,
2009a
FcLec3
HP
Man, PGN
G+/G-
V. ang. (+)
WSSV(+)
(receptor de VP28 WSSV)
Wang et al.,
2009a
FcLec4
HP, St, Br, Int
PGN
G+/G-
FcLec5
HP
Gal, Man, PGN,

LPS, LIA
G+/G-
V. ang. (+)
WSSV (+)
Xu et al., 2010
LvL(#)
nd
GalNAc,
GlucNAc,
NeuAc, LPS
G-
nd
Sun et al., 2007
LvLT
HP
Man, Gal
nd
WSSV(-)
Ma et al., 2007
Zhao et al.,
2009
V. ang. (+)
(eliminacin bac)
Wang et al.,
2009b
Penaeus vannamei
LvCTL1
HP, ST
Man
nd
WSSV(+)
(se une al WSSV)
LvLec
Hem
Man
E. coli
nd
Zhang et al.,
2009b
PmAV
Hp
Man
WSSV(+)
(antivirus)
Luo et al., 2003
PmLec
Hp, Int, Hem,

St
Gal, LPS
G+/G-
V. harveyi (opsonina)
Luo et al., 2006
PmLT
Hp
Man, Gal
nd
WSSV(-)
(encapsulacin)
Ma et al., 2008
Penaeus monodon
Marsupenaeus japonicus
MjLecA
Hep, Hem
GlucNAC, LPS
G+/G-
nd
(se une al WSSV)
Song et al.,
2010
MjLecB
Hep, Hem
Man, GlucNAC,
LPS
G+/G-
nd
(se une al WSSV)
Song et al.,
2010
MjLecC
Hp
GalNAC, LPS
G+/G-
nd
(se une al WSSV)
Song et al.,
2010
MjHeCL
Hem
nd
nd
Modula la expresin de
pptidos antimicrobianos y
controla la microbiota
Wang et al.,
2014
*La aglutinacin de eritrocitos fue omitida; Br: branquias; (#) lectina puriicada bioqumicamente; AMP: pptido antimicrobiano;
Gal: galactosa; GalNAC: N-acetil galactosamina; GlucNAC: N-acetil glucosamina; G+: bacterias Gram positivas; G-; bacterias
Gram negativas; Hem: hemocitos; Hp: hepatopncreas; Int: intestino; LIA: cido lipoteicoico; LPS: lipopolisacridos; Man:
manosa; NeuAC: cido N-acetil neuramnico; nd: no descrito; PGN: peptidoglicanos; St: estmago; V. ang: Vibrio anguillarum;
(+): expresin aumentada; (-): expresin disminuida.
251
En L. vannamei tambin fueron detectadas y caracterizadas diferentes CTLs por abordaje bioqumica (aislamiento) y molecular (clonacin). Una lectina con alta ainidad por azcares N-acetilados y con capacidad de unirse a LPS y aglutinar bacterias Gram negativas fue puriicada del plasma
de L. vannamei (LVL) (Sun et al., 2007). Otra lectina denominada LvLT fue clonada a partir del hepatopncreas de esta misma especie (Ma et al., 2007). La LvLT presenta dos CRDs distintos, uno para
manosa y otro para galactosa y su expresin es modulada durante infecciones con el WSSV. Posteriormente, Zhao et al., (2009) clonaron otra lectina tambin del hepatopncreas, denominada LvCTL-1,
conteniendo un CRD con ainidad para manosa. Interesantemente, la LvCTL-1 tiene la capacidad de
unirse a diferentes protenas de la envoltura del virus WSSV y fue mostrado que esta unin resultaba
en una disminucin de la infeccin de los camarones por este virus. Estos resultados sugieren as,
que adems de su funcin en el reconocimiento de lo no-propio, la LvCTL1 presenta tambin una
funcin antiviral (Zhao et al., 2009). Finalmente una nueva lectina con ainidad para manosa (LvLec)
fue clonada a partir de los hemocitos (y no del hepatopncreas) de L. vannamei (Zhang et al., 2009b).
No obstante, esta lectina est expresada principalmente en el cerebro de los camarones y apenas de
forma moderada en los hemocitos y hepatopncreas. La LvLec tiene actividad aglutinante contra E.
coli y parece estar implicada en reacciones de defensa contra bacterias Gram negativas.
En P. monodon fueron descritas tres CTLs. La primera, denominada PmAV fue clonada a partir
del hepatopncreas de camarones resistentes a WSSV y contiene apenas un CRD para manosa (Luo
et al., 2003). Los autores reieren que la PmAV presenta una fuerte actividad antiviral y que esta actividad no deriva de la inhibicin de la unin del virus a los receptores de la clula hospedera. Posteriormente, Luo et al., (2006) puriicaron otra CTL del plasma de P. monodon (PmLec) con capacidad
de unirse especicamente a los LPS de bacterias Gram negativas (Luo et al., 2006). En consecuencia,
la PmLec tiene la propiedad de aglutinar fuertemente varias especies de bacterias Gram negativas y
funciona adems como opsonina facilitando la fagocitosis de E. coli por los hemocitos. La PmLec fue
posteriormente clonada y caracterizada molecularmente, mostrando contener un CRD con ainidad
para galactosa (Luo et al., 2006). Una tercera CTL, conteniendo dos CRDs (manosa y galactosa) fue
tambin clonada a partir del hepatopncreas de P. monodon y denominada PmLT (Ma et al., 2008).
La expresin de la PmLT es modulada durante las infecciones con WSSV, pero no con bacterias Gram
negativas. Interesantemente, la PmLT estimula fuertemente el encapsulamiento de cuerpos extraos
por los hemocitos, mostrando una vez ms, que ms all de funcionar como molcula de reconocimiento, las lectinas presentan adems otras funciones inmunolgicas.
Tambin en M. japonicus fueron caracterizadas, tres CTLs (MjLecA, MjLecB y MjLecC), todas
expresadas en el hepatopncreas y conteniendo un nico CRD, con capacidad de aglutinar algunas
especies de bacterias (Song et al., 2010). Las tres lectinas tienen ainidad por azcares N-acetilados
(N-Acetil-glicosamina) y LPS, conirmando una vez ms su funcin de PRP. Ms all de unirse a LPS,
las tres CTLs tienen adems la capacidad de unirse a diferentes protenas de la envoltura del WSSV,
debiendo por consiguiente estar tambin implicadas en la defensa antiviral (Song et al., 2010). Una
cuarta CTL, MjHeCL, producida por los hemocitos (y no por el hepatopncreas) fue recientemente
identiicada como molcula-llave en la regulacin de la expresin de pptidos antimicrobianos en
la hemolinfa y en la manutencin de la microbiota endobionte de M. japonicus (Wang et al., 2014).
Adems de las lectinas descritas arriba, varias otras fueron caracterizadas en otros penaeidos
como en Fenneropenaeus merguiensis (Rittidach et al., 2007), F. californiensis (Vargas-Albores et al.,
1993) L. schmitti (Cominetti et al., 2002) y L. setiferus (Alpuche et al., 2005). As como las otras lectinas de crustceos, la mayora de estas CTLs asocian la funcin de PRP con otras funciones inmunolgicas, conirmando su importante papel inmunoefector en la deteccin y eliminacin de patgenos.
Aparte de las CTLs, otras clases de lectinas fueron tambin identiicadas en crustceos. Las
FREPs (del ingls, ibrinogen-related proteins), por ejemplo, son protenas denominadas as por con252
tener un dominio altamente conservado semejante al ibringeno y un dominio de la superfamlia

de las inmunoglobulinas (Igs). Son tambin conocidas como inmunolectinas una vez que unen a
carbohidratos de diferentes clulas y llevan a una reaccin de aglutinacin/coagulacin. Las FREPs
son universalmente encontradas en vertebrados e invertebrados (Dong y Dimopoulos, 2009). En el
cangrejo de ro P. leniusculus fueron descritas dos FREPS, llamadas icolinas capaces de unirse a
diferentes bacterias Gram positivas y Gram negativas, adems de auxiliar en la eliminacin de bacterias Gram negativas (Wu et al., 2011). Tambin en M. japonicus fue identiicada una FREP (MjFREP1),
expresada en las branquias y cuya expresin es aumentada en la presencia de bacterias Gram positivas, Gram negativas y del virus WSSV. La MjFREP1 tiene incluso la propiedad de aglutinar diferentes
bacterias Gram-positivas y es capaz de unirse a PGNs, LPS y hasta a la VP28 del WSSV (Wang y
Wang, 2013a). De manera interesante una FREP denominada Protena Inhibidora de Melanizacin
fue recientemente identiicada en P. leniusculus y en el camarn P. monodon (Sderhll et al., 2009;
Angthong et al., 2010). En P. leniusculus se sugiere que esta FREP actu como un regulador de la
induccin de la melanizacin por patgenos. As que, las FREPs o inmunolectinas, funcionan no
solamente como PRPs en el reconocimiento de patgenos pero tambin como importantes inmunoefectores envueltos tanto en la regulacin de mecanismos de defensa (proceso de melanizacin) como
en el control de infecciones por diferentes microorganismos.
Protenas Dscam: - esperanza de alta especiicidad y memoria inmunolgica
En nuestra opinin, entre los descubrimientos ms intrigantes y promisorios de estas ltimas

dcadas, en el campo de la Inmunologa de Invertebrados est el que se reiere a la identiicacin del
gene/protenas Dscam en insectos y crustceos. Este gene (y sus productos) fue descubierto inicialmente en humanos (1998) y recibi esta denominacin debido a su asociacin con el Sndrome de
Down (del ingls: Down syndrome cell adhesion molecule). Poco tiempo despus (2000), un gene
homlogo tambin fue identiicado en D. melanogaster (ver revisin de Armitage et al., 2014).
El gen/protenas Dscam pertenece a la superfamilia de las inmunoglobulinas (lgs) o anticuerpos y adems de poseer varios dominios lg en su estructura molecular, posee adems dominios FN
(ibronectina, molcula de adhesin celular). El gene Dscam es expresado en el sistema nervioso
de los mamferos e insectos y asume un papel importante en la formacin de circuitos neuronales
(Armitage et al., 2014). Adems del sistema nervioso, el gene Dscam de Drosophila est tambin
expresado en las clulas de su sistema inmunolgico (hemocitos) y el cuerpo graso (rgano principal
de la sntesis y almacenamientos de los insectos). Las protenas Dscam ocurren en las membranas de
estas clulas, pero adems son secretadas hacia la hemolinfa.
La gran sorpresa en relacin a la Dscam es que este gene y sus productos combinan una amplia variabilidad, tanto a nivel genotpico, como somtico, generando una diversidad de isoformas, a
travs de splicing alternativo mutuamente excluyente, principalmente en la regin extracelular de la
molcula (as como tambin en los dominios transmembranas), responsable por el reconocimiento.
Estas sorprendentes caractersticas se asemejan mucho al sistema inmune adaptativo de los vertebrados, donde los linfocitos T/B generan variabilidad en sus anticuerpos y receptores altamente especicos, a travs de un proceso muy similar.
En Drosophila, por ejemplo, ya fueron referenciados ms de 18,000 isoformas posibles de
Dscam, aunque este nmero puede ser muy superior (Sun et al., 2013; Armitage et al., 2014). Esta
diversidad no tiene precedentes en la historia de los invertebrados, donde es comnmente aceptado, como se menciona arriba, que el reconocimiento de patgenos se da a travs de PRPs, cuya
capacidad de reconocimiento es limitada apenas a patrones moleculares caractersticos de clases de
microorganismos/parsitos, pero sin posibilidad de distinguir patgenos relacionados. Es evidente
253
que la magnitud del nmero de isoformas generadas por la Dscam de Drosophila es muy inferior a lo
que ocurre con los receptores/anticuerpos de los vertebrados, pero ciertamente esa variabilidad inesperada representa una forma mucho ms compleja y eiciente de reconocimiento del que se juzgaba
podra existir en este grupo zoolgico.
Adems de la alta diversidad, sorprende el hecho de que la expresin de Dscam puede ser
inducida por patgeno y las mltiples isoformas generadas por recombinacin somtica pueden
ligarse especicamente a su inductor. Adems estas mismas isoformas tienen la capacidad de estimular la fagocitosis del microorganismo inductor, una vez que su silenciamiento gnico, a travs de la
tcnica del RNA de interferencia (ver abajo), disminuye signiicativamente el proceso fagoctico (ver
revisiones de Wang y Wang, 2013a; Armitage et al.; 2014). Todas estas caractersticas representan una
revolucin conceptual en el sistema inmune de los invertebrados, que pasa a ser actualmente considerado como un sistema adaptativo alternativo (ver revisin de Armitage, 2014), en contraposicin al
sistema adaptativo de los vertebrados.
Tal como se esperaba, protenas Dscam tambin fueron identiicadas en crustceos, como
en los camarones L. vannamei (Chou et al., 2009), P. monodon (Chou et al., 2011),en el cangrejo
de ro P. leniusculus (Watthanasurorot et al., 2011) y en el cladcero Daphnia (Brites et al., 2008).
La Dscam de L. vannamei (LvDscam) tiene la capacidad de producir por lo menos 9.000 isoformas
distintas y parece adems estar implicada en la defensa antiviral contra el WSSV (Chou et al., 2009).
Por su parte la Dscam de P. leniusculus (PlDscam) puede generar ms de 22.000 isoformas y su expresin es inducida por la inyeccin de LPS, pero no por PGN o WSSV. De manera interesante, la
PlDscam produce isoformas con sitios de ligaciones capaces de reconocer especicamente diferentes
bacterias, adems de promover su fagocitosis y eliminacin del hospedero, en un mecanismo semejante a la opsonizacin (Watthanasurorot et al., 2011). No obstante, todava no fueron identiicados
los receptores especicos para Dscam en las clulas fagocitarias de crustceos/insectos, para validar
el evento de una opsonizacin verdadera.
Es importante sealar, sin embargo, que no siempre la Dsacm es expresada despus de una exposicin a patgenos en las diferentes especies de insectos/crustceos estudiados. Adems, en algunos casos puede ocurrir induccin de su expresin despus del desafo con algunos microorganismos
y/o parsitos, pero no con otros. Por ejemplo, la exposicin al WSSV lleva a un aumento de los niveles de Dscam en L. vannamei (Chiang et al., 2013) pero no ocurre en P. leniusculus (Watthanasurorot
et al., 2009). Como el descubrimiento de la Dscam es muy reciente, las evidencias disponibles son
todava limitadas y no permiten generalizaciones deinitivas. Futuros estudios llevarn ciertamente a
una comprensin mayor de este sistema y sus implicaciones prcticas en el control de infecciones en
crustceos de importancia comercial.
Otro aspecto intrigante en relacin a la Dscam se reiere a su envolvimiento con una posible
memoria inmunolgica, o sea, con la capacidad del sistema inmune de almacenar y recordar informaciones sobre un patgeno previamente encontrado, respondiendo a l de forma ms rpida y
eiciente en una segunda infeccin. Este fenmeno, bien conocido en los vertebrados, es llamado
speciic immune priming en los invertebrados. No obstante, evidencias del evento de un priming en
insectos/crustceos son todava muy iniciales y poco conclusivas. An no han sido realizados estudios
inequvocos probando la hiptesis del envolvimiento de la Dsam en la generacin de una memoria
inmunolgica altamente especica. Poco se sabe tambin a respecto del tiempo de duracin de las
isoformas Dscam en la hemolinfa de los insectos/crustceos despus de un desafo inmunolgico y si
existira una posible expansin clonal de las clulas inmunolgicas de respuesta como ocurre en los
vertebrados (Armitage et al., 2014).
254
El evento de una memoria inmunolgica de largo plazo en crustceos, sera tal vez una de las
propiedades ms deseables para el xito de la camaronicultura, pues abrira la posibilidad de una
real vacunacin de los animales, en el sentido clsico de la palabra. Esta perspectiva altamente promisoria permitira controlar efectivamente las infecciones de forma especica, eiciente y sobre todo
a largo plazo, lo cual todava no se ha mostrado en la actividad camaronera.
Vas de sealizacin del sistema inmune
As como en los mamferos, el reconocimiento de agentes invasores dentro de la cavidad
corporal de los invertebrados lleva a la activacin de diferentes respuestas inmunolgicas, con el
objetivo de controlar y eliminar infecciones. Los diferentes estmulos externos son integrados, internamente, por vas de sealizacin celular. Tales vas son responsables por la activacin de importantes factores de transcripcin, que orquestan la expresin de diferentes genes envueltos en las
respuestas inmunolgicas. En insectos, fueron caracterizadas tres principales vas de sealizacin
celular implicadas en la activacin del sistema inmune: Toll, Imd e JAK/STAT (Hoffmann y Reichhart,
2002). Esas mismas vas fueron posteriormente identiicadas en camarones y otros crustceos a travs
de estudios transcriptmicos. (Fig. 6.3.2).
Figura 6.3.2: Vas de sealizacin celular asociadas a la activacin de las respuestas de defensa de camarones (adaptado de Tassanakajon et al., 2013).
255
Va Toll
Los receptores Toll son protenas de la supericie de clulas que fueron primeramente identiicados en la mosca de la fruta Drosophila melanogaster y revelaron inicialmente tener una importante funcin en la determinacin del eje dorso-ventral en el desarrollo embrionario de este insecto
(Anderson y Nusslein-Volhard, 1984). Todava, adems de su importante papel en la embriognesis,
los receptores Toll mostraron estar tambin crucialmente implicados en las respuestas inmunolgicas
de esta mosca (Lemaitre et al., 1996). Ms tarde, protenas semejantes a los receptores Toll de D.
melanogaster fueron tambin identiicadas en vertebrados y denominadas TLRs (del ingls, Toll-like
receptors). Los TLRs estn implicados en el sistema inmune innato de los vertebrados y actan de
forma esencial en el reconocimiento de PAMPs. Los receptores Toll y TLRs son glicoprotenas transmembranales (PRRs) caracterizadas por presentar un dominio extracelular rico en residuos de leucina
o LRR (del ingls, leucine-rich repeat) y por un dominio de sealizacin citoplasmtico homlogo
al del receptor de interleucina 1, denominado de TIR (del ingls, Toll/interleucin-1 receptor domain)
(Yamamoto y Takeda, 2010).
Los TLRs de mamferos tienen regiones de unin a los PAMPs en su dominio LRR y luego de
la activacin, inducen a la expresin de citocinas inlamatorias importantes como los interferones y
otras molculas activas de la respuesta inmune adaptativa (Akira, 2006; Yamamoto y Takeda, 2010).
En mamferos, ya fueron identiicados ms de diez TLRs distintos, todos implicados en el reconocimiento directo de PAMPs, como LPS (TLR4), lipoprotenas (TLR2), dsRNA (TLR3), lagelina (TLR5),
DNA CpG (TLR9) y varios otros componentes virales (TLR7) (Akira, 2006; Yamamoto y Takeda, 2010).
La va Toll de invertebrados es semejante a la va TLR de mamferos, pero a diferencia de
esa, el receptor responsable por la transduccin de la seal (Toll) no reconoce directamente los
PAMPs, pero s la citocina Sptzle. Esa citocina se encuentra en el plasma en una forma inactiva
que es procesada, va una cascada proteoltica, en su forma activa despus del reconocimiento de
bacterias Gram-positivas y/o hongos. Esos microorganismos son reconocidos a travs de protenas
que reconocen peptidoglicanos (PGRP-SA e PGRP-SD) y protenas que se unen a bacterias Gramnegativas (GNBP-1 y GNBP-3). La unin de Sptzle con el receptor Toll lleva al reclutamiento de las
protenas intracelulares adaptadoras MyD88, Pelle y Tube, que activan la fosforilacin y subsecuente
degradacin de Cactus, el inhibidor de dos factores de transcripcin de la familia de los NF-B, Dif
y Dorsal. En la mosca de la fruta Drosophila melanogaster, despus de la degradacin de Cactus, los
NF-B son translocados para el ncleo donde promueven la transcripcin de los AMPs drosomicina
y metchnikovina (Leclerc & Reichhart, 2004; Tanji et al., 2007).
Respecto a los camarones, apenas recientemente fueron identiicados receptores del tipo Toll
en las clulas de los penaeidos L. vannamei (lToll) (Yang et al., 2007), P. monodon (PmToll) (Arts et
al., 2007), M. japonicus (MjToll) (Mekata et al., 2008) y F. chinensis (FcToll) (Yang et al., 2008). Esos
receptores presentan una alta homologa con los Tolls de D. melanogaster (dToll y dToll5) y de otros
insectos y limlidos. A ejemplo de los Tolls y TLRs conocidos, los Tolls de camarones tambin tienen
dominios LRR y TIR conservados. Sin embargo, no contienen regiones de unin para los PAMPs en
el dominio LRR, como los TLRs de vertebrados, parecindose una vez ms a los Tolls de Drosophila. Recientemente fue clonada la primera protena Sptzle en camarones F. chinensis (Fc-Spz)
(Shi et al., 2009). Los autores mostraron que el dominio activo de la Fc-Spz (producido en sistema
recombinante) es capaz de inducir la expresin de una crustina en el cangrejo de ro Procambarus
clarkii. La similitud de estos receptores de camarones con los Tolls de Drosophila, que inducen la
transcripcin del AMP drosomicina (dToll), lleva a la suposicin de que esas protenas pueden estar
tambin implicadas en la inmunidad innata de los camarones penaeidos, inclusive en sus respuestas
antivirales como en Drosophila.
256
Adems de los receptores Toll y de su ligando Sptzle, otros componentes de esa va tambin
fueron identiicados en camarones, como las protenas adaptadoras MyD88, Pelle y Tube, el activador TRAF6, el inhibidor de NF-B (IB) Cactus y el factor de transcripcin NF-B Dorsal (Li y Xiang,
2013). Estudios con la tcnica de IRNA de interferencia o RNAi (ver abajo) mostraron que la activacin de la va Toll en camarones induce la expresin de pptidos antimicrobianos, as como ocurre en
insectos (Li et al., 2012). De manera interesante, 40 genes del virus WSSV poseen en sus promotores
sitios de vinculacin de NF-B, los cuales pueden ser activados por la va Toll. Adems de eso, existe
en el genoma de ese virus un homlogo de la protena Tube de camarones, que consigue activar la
va Toll y regular la expresin de genes virales (Wang et al., 2011).
Fue mostrado en L. vannamei, que el silenciamiento del IToll por la tcnica del RNAi no afecta
la respuesta antiviral de este camarn contra WSSV, sugiriendo que el IToll no est implicado en la
defensa antiviral de esta especie (Labreuche et al., 2009). Por otro lado, otros estudios mostraron
que la expresin del FcToll (Yang et al., 2008) y del IToll (=LvToll) (Han-Ching Wang et al., 2010) es
fuertemente inducida despus del desafo con V. anguillarrum y V. harveyi, respectivamente. Corroborando estos resultados, fue referido que el silenciamiento del IToll (=LvToll) por la tcnica del RNAi
resulta en un aumento signiicativo de la mortalidad de los camarones desaiados con V. harveyi, pero
no aquellos desaiados con WSSV, conirmando que el IToll est de hecho implicado en la defensa
antibacteriana y no en la antiviral (Wang et al., 2010).
Va Imd
Al contrario de la va Toll, la va lmd de insectos es activada a travs del reconocimiento de

molculas de PGN conteniendo cido diaminopimlico (DAP-type PGN), que son encontrados solamente en la pared celular de bacterias Gram-negativas. Las molculas de DAP-type PGN son reconocidas por PGRPs que interactan con la protena intracelular lmd que al complejarse con la protena
Fadd, activa la caspasa Dredd. Esa caspasa puede entonces actuar tanto en la activacin del NF-B
Relish como en la fragmentacin del propio lmd (Paquette et al., 2010). Despus de la fragmentacin, Imd puede asociarse con un complejo de ubiquitinacin (Iap2, Bendless, Effete y Uev1a),
resultando en la activacin de Tak1 (MAPKKK) y Tab2. La activacin del complejo Tak1/Tab2 puede
llevar tanto a la activacin de la va JNK (MAPK envuelta en la activacin del factor de transcripcin
AP-1) como de la va de degradacin de Relish (NF-B) (Silverman et al., 2003). Para la degradacin
de Relish, el complejo Tak1/Tab2 necesita activar dos quinasas inhibidoras de B (IKK), Ird5 (IKK) y
Kenny (IKK). Esas IKK fosforilan directamente Relish, que es fragmentado, liberando su regin N-terminal que contiene un dominio RHD. Al ser translocado para el ncleo, ese dominio es responsable
por la transcripcin de los AMPs diptericina, cecropina y atacina (Marmaras y Lampropoulou, 2009).
Comparativamente a la va Toll, poco ha sido descrito a respecto de la va Imd de camarones.
Hasta el momento, fueron identiicados el adaptador Imd, las quinasas IKK y IKK y el factor de
transcripcin NF-B Relish (Li y Xiang, 2013; Wang et al., 2013). Estudios in vitro mostraron que la
va Imd en camarones est envuelta en la modulacin de la expresin de lisozimas, peneidinas y
crustinas (Wang et al., 2013).
Va JAK/STAT
La va Jak/Stat (del ingls, Janus kinase/signal transducer and activator of transcription) est
asociada a la induccin de genes del citoesqueleto, algunos AMPs y de la TEP1 (del ingls, Thioestercontaining Protein 1), protena responsable por la opsonizacin, ya que est envuelta en la fagocitosis
de microrganismos por los hemocitos. En D. melanogaster, esa va puede ser inducida tanto por un
estmulo microbiano como por lesiones en los tejidos, que promueven la unin de la citocina Upd
(Unpaired) al receptor Domelles. Esa unin lleva a la dimerizacin de ese receptor que fosforila la JAK
tirosina quinasa Hopscotch (Hop). La fosforilacin de Hop crea un sitio de unin para las protenas
257
STAT que, al ser fosforiladas, dimerizan y son translocadas para el ncleo donde activan la transcripcin de genes (Gupta et al., 2009).
En camarones, todava se conoce poco a respecto de va JAK/STAT y su implicacin en la
modulacin de genes asociados al sistema inmune. Fue demostrado que la protena STAT es capaz
de inducir la expresin del gene ie1 (immediate-early gene) del virus WSSV (Liu et al., 2007) y que,
durante una infeccin, ocurre un aumento en la activacin y translocacin de la protena STAT del
citoplasma para el ncleo (Chen et al., 2008).
6.4. Mecanismos lticos y microbicidas
Produccin de radicales de oxgeno (ROIs) y de nitrgeno (RNIs)
Adems de la destruccin de los microorganismos invasores por las enzimas lisosomales, se
observa, durante las reacciones inmunocelulares, en especial en la fagocitosis, la produccin y liberacin de molculas altamente txicas, que auxilian en la lisis y degradacin del agente invasor. En
ese momento, ocurre un importante aumento en el consumo de oxgeno a nivel intracelular, llamado
choque respiratorio o estrs oxidativo, que resulta en la produccin de una variedad de radicales libres altamente reactivos de oxgeno conocidos como ROIs (del ingls, reactive oxygen intermediates).
Pueden formarse adems otros compuestos txicos y reactivos como los RNIs (del ingls, reactive
nitrogen intermediates).
Los ROIs poseen electrones libres o no pareados en su rbita ms externa, lo que les coniere
una elevada capacidad de reaccionar con y daar las estructuras y compuestos prximos, tales como
las membranas celulares, protenas y cidos nucleicos (DNA y RNA) de los patgenos invasores.
Siendo as, funcionan como agentes microbicidas potentes, destruyendo o inhibiendo el crecimiento
de los invasores.
La produccin de esos radicales est ligada a la activacin de un complejo enzimtico denominado NADPH oxidasa, localizado en la membrana celular y en la supericie de los grnulos
lisosomales (Fig. 6.4.1). Este complejo es activado por componentes microbianos, tales como los
lipopolisacridos (LPS), lipoprotenas de bacterias y -glucanos de hongos (Bogdan et al., 2000). La
activacin de esta enzima resulta en la reduccin del oxgeno molecular al anin superxido (O2-).
Este compuesto txico y microbicida puede dismutarse, espontneamente o a travs de la enzima
intracelular superxido dismutasa (SOD), en perxido de hidrogeno (H2O2). El H2O2 es un compuesto
igualmente txico y, si no es destruido por la catalasa del peroxisoma, puede difundirse y llegar al
medio extracelular. El O2- puede tambin ser convertido en otros componentes citotxicos, como en
el radical hidroxilo (OH.) y en aniones hidroxilo (OH-) por la reaccin de Haber-Weiss o, luego de
la dismutacin en H2O2, en cido hipocloroso (HOCl), oxgeno singlet (1O2) y en cloraminas por la
accin de la mieloperoxidasa (MOP) (Bogdan et al., 2000; Abele y Puntarulo, 2004) (Fig. 6.4.1). Cabe
resaltar que todas estas molculas son qumicamente muy inestables y su decaimiento espontneo
ocurre en fracciones de segundo.
Es importante destacar que la produccin de estas molculas altamente txicas, aunque muy
inestables e importantes en la destruccin de los patgenos invasores, puede tambin provocar graves
daos a los tejidos del hospedero. Para evitar esta autoagresin, el hospedero cuenta bsicamente
con tres mecanismos de proteccin o defensas antioxidantes. Los primeros dos mecanismos son endgenos e incluyen la presencia de enzimas antioxidantes intracelulares, como la SOD, la catalasa y
la glutationa peroxidasa, capaces de degradar/neutralizar a las ROIs y, tambin las enzimas de reparacin que pueden restablecer los daos provocados por las ROIs en el DNA, membranas y protenas
del hospedero (Abele y Puntarulo, 2004). El tercer mecanismo comprende la accin de compuestos
antioxidantes de origen exgeno, como el cido ascrbico (vitamina C), la glutationa y el -tocoferol
258
(vitamina E), que pueden interactuar directamente con los radicales libres neutralizndolos (Abele y
Puntarulo, 2004). Es conveniente resaltar que los antioxidantes de origen exgeno, asumen especial
importancia en los cultivos de camarones, una vez que pueden ser adicionados a las dietas en dosis
apropiadas.
La produccin in vitro de ROIs por los hemocitos inmunoestimulados por componentes microbianos, ya fue descrita en varios camarones penaeidos, como en P. monodon (Song y Hsieh, 1994;
Sung et al., 1994), L. vannamei (Muoz et al., 2000; Campa-Crdova et al., 2002a), Litopenaeus
setiferus (Rosas et al., 2004) y en las especies nativas brasileas, F. paulensis y L. schmitti (Guertler et
al., 2010).
La cuantiicacin in vitro de la produccin del anin superxido por los fagocitos puede ser
realizada a travs del mtodo de reduccin del NBT (del ingls, nitroblue tetrazolium), o por la tcnica de la quimioluminiscencia. Esta evaluacin permite determinar el grado de estrs oxidativo de los
animales, como consecuencia de diferentes factores de estrs como infecciones, destacndose como
un valioso inmunoparmetro para la determinacin del estado inmunolgico de los camarones.
La produccin del anin superxido tambin viene siendo muy utilizada en los camarones
para evaluar el efecto de substancias consideradas inmunoestimulantes, como los -glucanos de
hongos y los polisacridos sulfatados (PS) de algas, que pueden ser adicionados a la dieta (Fu et al.,
2007; Cantelli, 2009), o en el agua a travs de baos de inmersin (Campa-Crdova et al., 2002a y
b; Chang et al., 2003), o tambin administrados en forma de inyeccin (Hou y Chen, 2005; Cantelli,
2009). Un estudio del nuestro grupo, demostr que juveniles de L. vannamei alimentados por 1 mes
con balanceado adicionado con PS de alga Gracillaria birdiae podra aumentar la produccin intracelular del anin superxido (O2-) y aumentar la tasa de sobrevivencia (11%) de camarones infectados
con una baja carga viral de WSSV (Cantelli, 2009).
Adems de las ROIs, los hemocitos de los crustceos pueden tambin producir intermediarios
reactivos de nitrgeno o RNIs, como el xido ntrico (NO) y el radical peroxinitrito (ONOO-), compuestos altamente citotxicos y microbicidas (Abele y Puntarulo, 2004; Palumbo, 2005; Gao, 2009).
La produccin del gas NO tiene origen en la enzima xido ntrico sintasa o NOS (del ingls, nitric
oxide synthase), presente en el citoplasma de varios tejidos animales, incluyendo las clulas del sistema inmunolgico. En estas ltimas, la NOS es inducida por situaciones de estrs (iNOS) y produce
NO. En los otros tejidos, la NOS es expresada de forma constitutiva. La NOS es capaz de generar
NO a partir del aminocido L-arginina y del oxgeno molecular. Una vez producido, el NO puede
reaccionar con el O2 originado durante el choque respiratorio y formar el peroxinitrito (ONOO-) que
tambin es altamente txico (Abele y Puntarulo, 2004; Gao, 2009) (Figura 6.4.1). En los vertebrados,
estn bien documentadas las actividades antivirales, antibacterianas y antiparasitarias de las RNIs,
que igual que las ROIs causan daos al DNA, a varias enzimas y a las membranas de los patgenos,
directa o indirectamente (Palumbo, 2005; Gao, 2009).
En crustceos existen todava pocos estudios a este respecto, pero algunos trabajos ms recientes vienen apuntando al importante papel de los RNIs en la defensa antimicrobiana. Entre estos,
un trabajo que investig la produccin de NO en los hemocitos de camarones F. chinensis y M.
japonicus despus del desafo con WSSV (Jiang et al., 2006). Los autores observaron que hubo un
aumento evidente de la produccin de NO en los hemocitos de M. japonicus desaiados, pero no
en F. chinensis donde el aumento de la produccin de NO fue mucho menos acentuado y de corta
duracin. Adems, camarones de la especie F. chinensis murieron mucho ms rpidamente que los
de la especie M. japonicus despus del desafo con WSSV. Los autores especularon que las diferencias de susceptibilidad de ambos penaeidos a WSSV podra deberse a la diferencia de actividad de
las NOS de los hemocitos de ambas especies. Interesantemente, dos NOS fueron muy recientemente
259
Figura 6.4.1: Produccin de especies reactivas de oxgeno (ROIs) y nitrgeno (RNIs) por los hemocitos de crustceos
durante el proceso de fagocitosis y otras reacciones celulares. CAT: catalasa; iNOS: xido ntrico sintasa inducible;
SOD: superxido dismutasa. Las especies reactivas txico-microbicidas estn representadas en rojo.
clonadas a partir de los hemocitos de la langosta Panulirus argus (Rodrguez-Ramos et al., 2010) y de
las branquias de M. japonicus (Inada et al., 2010). La expresin de ambas enzimas fue inducida despus de inyeccin con LPS (en los hemocitos de langosta) y con Vibrio penaeicida (en las branquias
de camarones), sugiriendo una vez ms que esta enzima est implicada en la defensa antimicrobiana
de crustceos.
Es importante resaltar que la utilizacin de la produccin de RNIs como inmunoparmetros
para evaluar el estado inmunolgico de los camarones de cultivo, es una herramienta todava muy
poco utilizada, a pesar de su potencial promisorio. Se espera que estos resultados recientes estimulen en un futuro prximo una mayor utilizacin de este parmetro como indicador de salud y/o de
inmunoestimulacin.
Pptidos antimicrobianos (AMPs)
Los pptidos antimicrobianos o AMPs (del ingls, antimicrobial peptides) son componentes
esenciales del sistema inmune innato ampliamente distribuidos entre los diferentes reinos de los seres
vivos, siendo encontrados desde bacterias hasta en plantas y animales (vertebrados e invertebrados).
Esas molculas pueden presentar una actividad microbicida rpida y potente contra un amplio espectro de microorganismos, incluyendo bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, hongos ilamentosos, levaduras y en algunos casos tambin contra protozoarios y virus envueltos (Guan-Guerra et
al., 2010). Los AMPs fueron inicialmente identiicados en la hemolinfa de la mariposa Hyalophora
cecropia (Steiner et al., 1981) y desde entonces, ms de mil diferentes pptidos han sido aislados y
caracterizados en los ms variados organismos (Smith et al., 2010). Esos efectores son clsicamente
descritos como molculas anipticas y catinicas de bajo peso molecular (<10 kDa, entre 15-100 residuos de aminocidos). La gran mayora de los AMPs son productos gnicos transcritos y traducidos
por las clulas sanguneas y epiteliales (mucosas) que estn potencialmente expuestas a microorganismos. Sin embargo, otros grupos de molculas antimicrobianas que no presentan las caractersticas
260
de los AMPs clsicos fueran tambin descritos, como pptidos aninicos, protenas mayores que 10
kDa y pptidos generados a partir de la hidrlisis de una protena precursora multifunctional (Yount
et al., 2006).
El mecanismo de accin de los AMPs se maniiesta generalmente a nivel de la membrana del
microorganismo, provocando su desestabilizacin. Presentan en general una actividad detergente
o formadora de poros, a travs de la interaccin electrosttica con los fosfolpidos aninicos de la
membrana celular, llevando a un desequilibrio de sus funciones. Eso se debe a sus caractersticas
anipticas, presentando una regin altamente catinica y una regin hidrofbica, lo que facilita su
interaccin e insercin en las membranas de los microorganismos. Es importante sealar que fosfolpidos aninicos son caractersticos de los microorganismos, en especial de las bacterias, y no son
comnmente encontrados en la supericie de las clulas eucariotas normales y organismos pluricelulares. Tambin pueden insertarse en la bicapa lipdica, formando grandes poros, lo que lleva a un
lujo descontrolado de solutos y extravasin del contenido citoplasmtico, resultando en la muerte
del microorganismo (Bulet et al., 2004; Yount et al., 2006). Otras clases de AMPs pueden ser interiorizadas e interferir con diferentes vas metablicas esenciales al ciclo de vida de los microorganismos
(Yount et al., 2006).
A la fecha, 15 distintas familias de AMPs fueran identiicadas en crustceos y fueron recientemente clasiicadas en cuatro diferentes grupos de acuerdo con sus caractersticas estructurales y composicin aminoacdica: (1) pptidos -hlice linear anipticos y pptidos ricos en un tipo particular
de aminocido, (2) pptidos contiendo uno o ms puentes de cistena, (3) pptidos con mltiplos
dominios moleculares y (4) pptidos non convencionales, incluyendo protenas multifuncionales y
fragmentos peptdicos generados a partir de la hidrlisis de protenas precursoras (Rosa y Barracco,
2010). Por cuestiones de inters econmico, las tres familias de AMPs mejor conocidas en crustceos
fueron principalmente caracterizadas en camarones penaeidos: peneidinas, crustinas y los factores
anti-lipopolisacridos (ALFs) (Rosa y Barracco, 2010; Tassanakajon et al., 2010) (Tabla 3).
Tabla 3: Familias de pptidos antimicrobianos (AMPs) expresadas en los hemocitos de

camarones penaeidos.
AMP
Actividad antimicrobiana
ALF
Bacterias Gram+, Gram- y hongos ilamentosos
Crustina
Bacterias Gram+ y Gram-
Peneidina
Bacterias Gram+ y hongos ilamentosos
Stilicina
Hongos ilamentosos
Estructura
nd
nd
nd: no determinada
261
Las peneidinas (5 a 8 kDa) son pptidos con mltiples dominios inicialmente aislados y caracterizados a partir de la hemolinfa del camarn L. vannamei. Son molculas altamente catinicas,
compuestas por una regin N-terminal rica en residuos de prolina y una regin C-terminal conteniendo seis residuos de cistena, unidos por tres puentes disulfdicos (Destoumieux et al., 1997;
Yang et al., 2003) (Tabla 3). Las peneidinas son AMPs exclusivos de camarones penaeidos y estn
subdivididas en cuatro subgrupos (PEN2, PEN3, PEN4 y PEN5), siendo que cada una contiene varias
isoformas distintas (Cuthbertson et al., 2002; Gueguen et al., 2006; Kang et al., 2007). El subgrupo
PEN1, inicialmente aislado de la hemolinfa de L. vannamei (Destoumieux et al., 1997), fue posteriormente clasiicado como una variante del subgrupo PEN2 (Cuthbertson et al., 2002). Interesantemente,
los subgrupos PEN2 y PEN4 fueron encontrados apenas en camarones occidentales mientras que lo
subgrupo PEN5 es exclusivo de camarones asiticos (Tassanakajon et al., 2010). Las peneidinas son
expresadas constitutivamente en los hemocitos granulares y semigranulares donde son almacenadas
en sus grnulos (Destoumieux et al., 2000). Las peneidinas presentan una actividad potente contra
bacterias Gram-positivas y hongos ilamentosos (Destoumieux et al., 1999). Adems, los diferentes
subgrupos pueden presentar actividades antimicrobianas distintas (Cuthbertson et al., 2008). Algunas
isoformas de peneidina tienen todava un motivo molecular de unin a la quitina en su regin C-terminal, que tambin es encontrado en algunas lectinas de plantas y en varios pptidos anti fngicos
(Destoumieux et al., 2000).
Las crustinas (7 a 14 kDa) son tambin AMPs con mltiples dominios y fueron inicialmente
aisladas de los hemocitos granulares del cangrejo Carcinus maenas (Relf et al., 1999). Esas molculas
antimicrobianas son constitutivamente expresadas en hemocitos y se caracterizan por la presencia de
un dominio WAP (del ingls, whey acidic protein) en su regin C-terminal (Smith et al., 2008). WAP
es una familia general de protenas normalmente encontradas en la leche de mamferos con posible
funcin de inhibir a las proteasas (Ranganathan et al., 1999). Basado en sus caractersticas estructurales, las crustinas fueron categorizadas en tres principales tipos (crustinas de Tipo I, II y III) (Smith et
al., 2008). Las crustinas de Tipo I son compuestas por una regin rica en residuos de cistena antes
del domino WAP y pueden ser encontradas en camarones (Dai et al., 2009; Sun et al., 2010), mas
son especialmente frecuentes en cangrejos y langostas (Smith et al., 2008; Rosa y Barracco, 2010).
Por otro lado, el Tipo II presenta adems de esos dominios una regin N-terminal rica en residuos de
glicinas y es ms frecuente en camarones penaeidos (Tassanakajon et al., 2014). Las crustinas de Tipo
III, tambin conocidas como protenas single-whey domain (SWD), presentan apenas una pequea
regin N-terminal rica en residuos de prolina/arginina y la regin C-terminal contiendo el dominio
WAP. Esas crustinas son encontradas en camarones penaeidos y en el cangrejo del ro (Smith et al.,
2008). La actividad antimicrobiana de los distintos tipos de crustinas abarca esencialmente bacterias
Gram-positivas, pero tambin algunos vibrios marinos (Smith et al., 2008; Rosa y Barracco, 2010).
Adems de sus actividades antimicrobianas, las crustinas de Tipo III tambin mostraran una actividad antiproteasa fuerte (Rosa y Barracco, 2010). Durante los procesos inlamatorios, esas molculas
pueden ejercer un papel fundamental en la inactivacin de las proteasas producidas por los microorganismos invasores o en la regulacin de cascadas proteolticas endgenas del hospedero, como del
sistema proPO (ver abajo).
Los factores anti-lipopolisacridos o ALFs (del ingls, anti-lipopolysaccharide factors) son molculas de aproximadamente 10 kDa, inicialmente aisladas de limlidos (Tanaka et al., 1982). En
camarones, los ALFs fueron primeramente identiicados por biologa molecular (Gross et al., 2001;
Supungul et al., 2002) y mostraron contener dos residuos conservados de cistena comprometidos en
la formacin de una estructura terciaria en forma de grapa (-hairpin) como en los ALFs de limlidos
(Yang et al., 2009) (Tabla 3). Basado en sus caractersticas moleculares y estructurales, los ALFs de
camarones fueron categorizados en cuatro grupos: ALF Group A, B, C y D (Rosa et al., 2013). El ALF
262
Group B es el ms catinico, mientras que el ALF Group D es el ms aninico. De forma interesante,

los ALFs aninicos son encontrados apenas en camarones occidentales mientras que los otros grupos
son encontrados en camarones occidentales y asiticos (Rosa et al., 2013). Los ALFs son molculas
constitutivamente expresadas en los hemocitos granulares y presentan una actividad antimicrobiana
potente y de amplio espectro, siendo activas contra bacterias Gram-positivas y Gram-negativas (incluyendo patgenos de camarones), hongos ilamentosos y tambin virus humanos envueltos (Tassanakajon et al., 2014). Su actividad antimicrobiana est asociada a su propiedad de unirse al LPS y al
cido lipoteicoico (LTA), componentes de la supericie de bacterias Gram-negativas y Gram-positivas,
respectivamente (Somboonwiwat et al., 2008). De forma interesante, los ALFs aninicos no son capaces de unirse al LPS y tampoco presentan actividad antimicrobiana (Rosa et al., 2013).
Adems de estos tres principales AMPs, una nueva familia de AMPs, llamada stilicina (8,9
kDa), fue recientemente identiicada en camarones penaeidos. En contraste a los otros AMPs, las
stilicinas son pptidos aninicos compuestos por una regin N-terminal rica en residuos de prolina/
arginina y una regin C-terminal conteniendo trece residuos de cistena (Rolland et al., 2010). Como
los otros pptidos de camarones, las stilicinas son expresadas constitutivamente en los hemocitos.
Esos AMPs presentan una actividad potente contra hongos ilamentosos y la capacidad de unirse a
los LPS (Rolland et al., 2010).
En adicin a las familias de AMPs constitutivamente producidas en los hemocitos, otros grupos
de molculas antimicrobianas, como protenas multifuncionales y pptidos originados a partir de la
hidrlisis de protenas precursoras, tambin fueron encontrados en camarones. Entre stos se destacan las histonas y sus fragmentos (Patat et al., 2004) y pptidos derivados de la protena plasmtica
hemocianina (Destoumieux-Garzn et al., 2001). Las diferentes histonas (y fragmentos relacionados)
presentan actividad contra bacterias Gram-positivas, mientras que los fragmentos de hemocianina (de
caractersticas aninicas) presentan una actividad restringida a los hongos ilamentosos.
La expresin de las peneidinas, crustinas y ALFs se inician en las primeras fases del desarrollo
ontogentico de los camarones (nauplios, zoea y mysis) (Muoz et al., 2003; Jiravanichpaisal et al.,
2007; Tassanakajon et al., 2010). Adems, en los hemocitos de adultos, esas molculas se presentan
en grandes cantidades, cerca de 20% de todas las secuencias transcritas (Gross et al., 2001; Supungul
et al., 2002; Robalino et al., 2009). Durante infecciones causadas por diferentes tipos de patgenos,
ocurre la modulacin de la expresin de diferentes familias de AMPs (Bachre et al., 2004; de la Vega
et al., 2007; Robalino et al., 2007a; Rosa y Barracco, 2010). En camarones desaiados con bacterias
Gram-negativas del gnero Vibrio, por ejemplo, ocurre una disminucin signiicativa de los niveles
de expresin de peneidinas, crustinas y stilicinas en las primeras horas luego de la inyeccin. Esta
disminucin es seguida por el retorno a los niveles basales de esas molculas luego de 12 horas y por
un aumento signiicativo en los niveles de expresin luego de 72 horas de inyeccin, sugiriendo, una
induccin tarda de estas molculas durante las infecciones (de Lorgeril et al., 2008). Sin embargo, en
camarones susceptibles a infecciones por el hongo Fusarium solani, la expresin de los AMPs disminuye fuertemente (Gonalves et al., 2014).
Fue tambin demostrado, que en las primeras horas de la infeccin, cuando el nivel de expresin de las peneidinas disminuye drsticamente, ocurre simultneamente un aumento en sus concentraciones plasmticas (Destoumieux et al., 2000). Se cree que este aumento sea proveniente de
la liberacin de estos AMPs por los hemocitos que se encuentran prximos a los sitios de infeccin
(Bachre et al., 2004). Por otro lado, la expresin de ALFs parece mostrar una cintica contraria a las
otras dos familias de AMPs de crustceos. En distintas especies de camarones, los niveles de expresin de ALFs aumentan signiicativamente en las primeras horas luego de una infeccin con Vibrio y
vuelven a sus niveles basales cerca de 48 horas despus del inicio del proceso inlamatorio (Supungul
et al., 2004; de Lorgeril et al., 2008).
263
El papel in vivo de algunos AMPs de camarones fue recientemente investigado va el RNAi (ver
abajo). El silenciamiento de la crustina en el camarn L. vannamei resulta curiosamente en un aumento signiicativo de su susceptibilidad a infecciones con la bacteria Gram-negativa V. penaeicida,
pero no con el hongo F. oxysporum (Shockey et al., 2009). Por otro lado, en esa misma especie de
camarn, el ALF parece estar implicado en las defensas contras las dos enfermedades (de la Vega et
al., 2008). Es importante resaltar que la presencia de diferentes familias de AMPs en crustceos, junto
a la ocurrencia de innumerables isoformas de un mismo subgrupo, probablemente con actividades
antimicrobianas distintas, sugiere una actuacin sinrgica de estas diferentes molculas inmunoefectoras, que pueden as eliminar un amplio espectro de agentes patgenos simultneamente (Rosa y
Barracco, 2010).
Sistema de activacin de la pro-fenoloxidasa (proPO)
Como se dijo anteriormente, la formacin de ndulos y cpsulas hemocticas en crustceos es
frecuentemente acompaada por una reaccin de melanizacin en la regin ms central. La melanizacin es tambin observada durante la cicatrizacin de heridas, donde la coagulacin de la hemolinfa y la migracin de los hemocitos al lugar de la lesin permiten la formacin de un tapn celular
hasta que una nueva cutcula sea reconstituida (Jiravanichpaisal et al., 2011).
La biosntesis de la melanina en los artrpodos es un proceso complejo que comprende una
serie de reacciones qumicas en cascada, denominadas sistema de activacin de la pro-fenoloxidasa o sistema proPO (Figuras 6.4.2 y 6.4.3). Este sistema est compuesto por varios zimgenos de
proteasas, por la pro-fenoloxidasa, por inhibidores de proteasas, adems de protenas asociadas de
reconocimiento de patrn o PRPs y protenas de sealizacin y ampliicacin (Cerenius et al., 2010;
Amparyup et al., 2013).
El sistema proPO es reconocido como una de las principales respuestas inmunoefectoras de
los crustceos desencadenada por componentes de la supericie de microorganismos, como los LPS
de bacterias Gram-negativas y los -1,3-glucanos de hongos (Jiravanichpaisal et al., 2006; Amparyup
et al., 2013). Durante las infecciones, estos compuestos se unen a receptores de los hemocitos granulares directamente o a travs de las PRPs presentes en el plasma e inducen su activacin. Una vez
activados, ocurre la degranulacin y/o lisis de los hemocitos con la liberacin de varias molculas
inmunoefectoras, entre las cuales estn las molculas del sistema proPO. Una vez liberadas, ocurre
la activacin de este sistema por los propios componentes de los microorganismos presentes en la
hemolinfa.
La presencia del sistema proPO y de algunas molculas asociadas en los hemocitos granulares
(HGPs y HGGs) fue especialmente estudiada en el cangrejo de ro P. leniusculus (Jiravanichpaisal et
al., 2006), y tambin en varios camarones como P. monodon (Kondo et al., 1992), Farfantepenaeus
californiensis (Hernndez-Lpez et al., 1996), L. stylirostris (Le Moullac et al., 1997), F. paulensis (Perazzolo y Barracco, 1997) y L. vannamei (Lai et al., 2005). Anlisis moleculares y bioqumicas de la
proPO de crustceos revelaron que esta protena (76-78 kDa) presenta similitud con la hemocianina,
una vez que las dos presentan sitios de unin para el cobre (Jiravanichpaisal et al., 2006). Adems de
ello, las proPOs de camarones presentan una regin tiol-ster (GCGWPRHM), como las protenas C3
y C4 del sistema del complemento de los vertebrados y las 2-macroglobulinas (Aspn et al., 1995;
Sritunyalucksana et al., 1999a; Lai et al., 2005; Liu et al., 2006).
La activacin de la forma inactiva o proPO hacia la enzima activa o fenoloxidasa (PO), ocurre
por la accin de serino-proteasas denominadas enzimas activadoras de la proPO o PPAEs (del ingls,
proPO-activating-cascade enzymes), iniciando una cascada proteoltica cuyo producto inal es la melanina (Fig. 6.4.3). En crustceos, una PPAE llamada ppA fue puriicada (Aspn y Sderhll, 1991) y
posteriormente clonada (Wang et al., 2001) en los hemocitos de P. leniusculus. La ppA es sintetizada
264
y mantenida como un zimgeno (pro-ppA) en los hemocitos, siendo activada luego de su exocitosis,
como consecuencia de una lesin o infeccin microbiana. Su activacin ocurre por un clivaje proteoltico, por parte de una proteasa an desconocida (Amparyup et al., 2013).
La forma activa PO es una xido reductasa que cataliza dos reacciones sucesivas: la primera,
de hidroxilacin de un monofenol a -difenol (actividad monofenoloxidsica) y, la segunda, de oxidacin del -difenol a -quinona (actividad difenoloxidsica) (Fig. 6.4.2). La produccin de o-quinonas
resulta en la sntesis de la melanina a travs de una cascada de reacciones qumicas intermedias,
siendo la mayora espontnea, no mediadas por enzimas (Fig. 6.4.3). La produccin de quinonas
lleva tambin a la esclerotizacin de la cutcula de los crustceos, fenmeno esencial en los perodos
de muda (Jiravanichpaisal et al., 2006; Vavricka et al., 2010).
Con relacin al papel inmunolgico del sistema proPO, se conoce que sta va genera transitoriamente molculas altamente txicas, como las quinonas, hemiquinonas (Figura 6.4.3) y radicales
libres de oxgeno (ROIs), una vez que ocurre el consumo de oxgeno molecular, que llevan a una destruccin de los patgenos invasores, mas tambin pueden daar los tejidos del hospedero. El pigmento oscuro e insoluble o melanina parece tener una actividad fungisttica (Cerenius y Sderhll, 2004)
y puede todava funcionar como scavenger de radicales libres (Nappi y Vass, 1993; Vavricka et al.,
2010), minimizando as los efectos deletreos de estas molculas altamente txicas para el organismo
del hospedero. Debe ser resaltado que la melanina, per se, no es la molcula inmunoefectora ms
importante durante la activacin del sistema proPO, siendo los compuestos citotxicos intermedios
los ms efectivos (Nappi y Vass, 1993; Vavricka et al., 2010). De esta manera, la melanizacin representa, ms especicamente, el inal de un potente proceso inmunoefector.
Figura 6.4.2: Liberacin de diferentes efectores inmunolgicos y molculas inmunoreguladoras, despus de la activacin de los hemocitos por patgenos. Todava no est conirmado si la TGase es liberada por hemocitos granulares
o hialinos.
265
Cabe resaltar que concomitante

con la liberacin de los componentes
del sistema proPO, otras varias molculas son tambin exocitadas por los
hemocitos inmunoestimulados. Una de
ellas es la peroxinectina (76 kDa) que
es una peroxidasa, homologa a la mieloperoxidasa humana y que acta en la
adhesin celular manteniendo tambin
su actividad peroxidsica. Esta protena
gana su actividad biolgica concomitantemente a la activacin del sistema
proPO en el plasma y promueve el
encapsulamiento de parsitos, luego
de unirse al receptor SOD de la membrana de los hemocitos, mencionado
anteriormente (Jiravanichpaisal et al.,
2006). Por otro lado, la peroxinectina
induce adems una fuerte degranulacin de los hemocitos, llevando a la
liberacin de ms compuestos inmunoefectores y consecuentemente a una
acentuada ampliicacin de la respuesta inmunolgica del hospedero.
Otras molculas son tambin
exocitadas durante la activacin hemoctica, como la enzima transglutaminasa (TGasa) que induce el proceso
de coagulacin, algunos inhibidores
de proteasas, PRPs como la mas-like,
AMPs y otras molculas inmunoefectoFigura 6.4.3: Reaccin de melanizacin en crustceos. A: Herida ras/inmunoreguladoras (Bachre et al.,
melanizada (lecha) en el camarn Farfantepenaeus paulensis; B:
Principales pasos de la biosntesis de melanina desencadenados 2004; Jiravanichpaisal et al., 2006).
por la enzima fenoloxidasa (PO) en presencia de substratos fenlicos (adaptado de Nappi y Vass, 1993).
La activacin del sistema proPO

debe ser estrictamente regulada para
evitar una activacin/melanizacin no
deseada o generalizada en el organismo del crustceo, evitando as los daos a los tejidos del camarn. Para eso, los animales poseen inhibidores de proteasas en el plasma y/o hemocitos. Entre ellos
podemos destacar la pacifastina, los inhibidores de la familia Kazal, la serpina y la 2-macroglobulina
(Jiravanichpaisal et al., 2006; Cerenius et al., 2010; Amparyup et al., 2013). El inhibidor ms eiciente
de la ppA del cangrejo de ro, es la pacifastina (Jiravanichpaisal et al., 2006; Cerenius et al., 2010).
Esta molcula pertenece a una nueva clase de inhibidores de serino proteasas denominada pacifastina-like, que tambin regulan el sistema proPO de insectos (Simonet et al., 2002). Otro importante
inhibidor de proteasas en crustceos es la protena plasmtica 2-macroglobulina (2M), que es constitutivamente sintetizada por los hemocitos de estos animales. La 2M es un inhibidor de proteasas
de amplio espectro (serino, aspartato, cistena y mtalo-proteasas) que inhibe tanto las proteasas del
propio hospedero, como aquellas producidas por el patgeno durante el proceso infeccioso. Una
caracterstica fundamental de estos inhibidores es la presencia en la molcula de una regin tiol-ster,
266
como ocurre en las protenas C3 y C4 del sistema del complemento de los vertebrados y en la proPO
como fue mencionado arriba (Jiravanichpaisal et al., 2006; Amparyup et al., 2013).
La 2M de los crustceos es una glicoprotena que fue aislada y caracterizada en los camarones L. vannamei (Gllas-Galvn et al., 2003) y F. paulensis (Perazzolo et al., 2011). La secuencia
codiicante para la 2M de penaeidos fue determinada en M. japonicus, P. monodon, L. vannamei,
L. schmitti y F. paulensis (Rattanachai et al., 2004; Lin et al., 2007; 2008; Rosa et al., 2008). El papel
inmunomodulador de la 2M en los crustceos, todava no est bien establecido. Anlisis de la expresin gnica de la 2M de crustceos a travs de la tcnica de PCR en tiempo real, revelaron que su
expresin es aumentada durante infecciones por el virus de la mancha blanca (Tonganunt et al., 2005)
o por el hongo Fusarium solani (Perazzolo et al., 2011), y tambin despus del tratamiento de los animales con LPS (Vaseeharan et al., 2007) o PGNs bacterianos (Lin et al., 2007; 2008). Estos hallazgos
son relevantes, ya que sugieren que la 2M participa de las respuestas inmunolgicas, siendo tal vez
capaz de inhibir proteasas de patgenos y/o regular la activacin del sistema proPO y sus molculas
txicas, minimizando as la agresin del patgeno y/o los daos causados a los tejidos del hospedero.
6.5. Defensas antivirales
Como se mencion anteriormente, las enfermedades virales constituyen actualmente, la ms
seria amenaza para la industria de la camaronicultura a nivel mundial y el principal riesgo para la
sostenibilidad de la actividad. Ms de veinte diferentes enfermedades virales han sido descritas hasta
el momento, en penedos marinos y camarones de agua dulce (Bonami, 2008), siendo que las de
mayor impacto estn notiicadas por la Organizacin Mundial de Salud Animal (OIE).
La primera enfermedad viral que afect seriamente la industria del camarn, ocurri en las
Amricas a inicios de los aos 80, causada por el virus de la necrosis infecciosa hipodrmica y hematopoytica o IHHNV (del ingls infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus), tambin
conocido como densovirus de Penaeus stylirostris (PstDNV) (Tattersall et al., 2005), y que result en
mortalidades masivas. Otros brotes graves de enfermedades virales siguieron al IHHNV, destacndose
el virus de la cabeza amarilla o YHV (del ingls, yellow head virus) en Asia, el virus del sndrome del
Taura o TSV (del ingls, Taura sndrome virus) en las Amricas y por in el surgimiento del virus del sndrome de la mancha blanca o WSSV (del ingls, white spot sndrome virus) que alcanz proporciones
catastricas principalmente en Asia (a inicio de los aos 90) y seguidamente en las Amricas (al inal
de los aos 90) (Lightner, 2011; Flegel, 2012). El WSSV se torn el virus ms desastroso de la historia
de la camaronicultura a nivel mundial, causando un ndice elevado y persistente de mortalidad que
ha llevado y todava lleva a prdidas econmicas incalculables.
En el ao 2002, una nueva enfermedad fue relatada en juveniles y sub adultos de L. vannamei
cultivados en el Nordeste brasileo, con seales de necrosis muscular progresiva y que llevaban a una
mortalidad acumulada de 40 a 70% (Nunes et al., 2004). Esa enfermedad fue llamada mionecrosis
infecciosa o NIM (del ingls, Infectious myonecrosis) y el agente etiolgico fue denominado Virus de
la Mionecrosis Infecciosa o IMNV (del ingls, infectious myonecrosis virus) (Lightner et al., 2004).
Algunos aos despus esa virosis fue tambin encontrada en L. vannamei cultivados en Indonesia
(Senapin et al., 2007).
Las pandemias causadas por los WSSV y TSV, y en menor escala por los IHHNV, IMNV y YHV,
han causado colectivamente perjuicios de billones de dlares a la industria camaronera, con prdidas
relevantes en las cosechas, empleos y el ingreso de exportacin (Lightner, 2011; Flegel, 2012). Los
impactos sociales y econmicos causados por estos patgenos han sido sobresalientes en pases cuya
actividad camaronera es importante. Siendo as, la contribucin ms urgente y esperada en la industria de la camaronicultura es indiscutiblemente el control de las infecciones virales.
267
En los vertebrados, las infecciones virales inducen a varias respuestas inmunolgicas, que en
ltima instancia buscan controlar la multiplicacin y propagacin de los virus y los daos celulares
causados por ellos. Entre estas respuestas se destacan, (1) la destruccin de las clulas infectadas
por los linfocitos NKs (del ingls, natural killer) y linfocitos T citotxicos (CTLs), (2) la produccin
de anticuerpos neutralizantes para virus y, (3) la induccin de protenas del sistema interfern (IFN)
que generan un estado antiviral. Adems de estos procesos ntimamente ligados al sistema inmune,
ocurren otros mecanismos de origen ms isiolgico y evolutivamente ms antiguos, que asumen gran
importancia en la defensa antiviral de los vertebrados y tambin de los invertebrados. Estos son: (4)
el silenciamiento de genes virales por la va del RNA de interferencia (RNAi), (5) la apoptosis celular
y, (6) la autofagia.
Como ya se mencion anteriormente, los crustceos tienen apenas un sistema inmune innato,
y por lo tanto no pueden contar con los dos primeros mecanismos antivirales que son dependientes
de la lnea celular linfoctica. Los dems mecanismos se indican ms adelante (Fig. 6.5.1).
Figura 6.5.1: Esquema

representativo de los principales mecanismos celulares antivirales de crustceos.
268
Sistema interfern
Vertebrados
En los vertebrados, los interferones (IFNs) son citocinas conocidas principalmente por su capacidad de interferir en la replicacin viral y en inducir un estado antiviral en el hospedero. En la
realidad, los IFNs son ms que simples protenas antivirales y ejercen un amplio espectro de otras
funciones biolgicas, siendo la mayora relacionada con el sistema inmune. En vertebrados se conocen tres tipos de interferones (Tipo I, II y III), pero solamente los interferones tipo I (IFN- e IFN-)
son realmente importantes para la defensa antiviral (Samuel, 2001; Donnelly y Kotenko, 2010). La
produccin de IFN-/ es inducida por las infecciones virales y estimulan la expresin de una serie
de genes participantes en las respuestas antivirales.
Durante las infecciones virales, las clulas del hospedero reconocen PAMPs especicos producidos por los virus a travs de cuatro principales tipos de PRPs o PRRs: los TLRs (ya comentados
anteriormente), los RLRs (del ingls, Retinoic acid-inducible gene o RIG-I-like receptors), los NLRs (del
ingls, nucleotide oligomerization domain NOD-like receptors) y los PKRs (del ingls, RNA-activated
protein kinase) (McAllister y Samuel, 2009; Takeuchi y Akira, 2009). Mientras que los TLRs son protenas transmembranas y detectan PAMPs en el espacio extracelular y en las vesculas intracelulares
denominadas endosomos, los NLRs, RLRs y PKRs son sensores citoslicos que detectan los PAMPs
virales presentes en el citoplasma de la clula hospedera.
Los TLRs, RLRs y PKRs son particularmente importantes en el desencadenamiento de la produccin de interferones IFN-/, de varias citocinas pro-inlamatorias y en la activacin de la apoptosis (Takeuchi y Akira, 2009). Por su parte, los NLRs no inducen la produccin de IFN-/, pero estn
relacionados tambin al proceso inlamatorio y apoptosis (Kanneganti, 2010).
Como mencionamos anteriormente, los TLRs de mamferos son homlogos a la protena Toll
inicialmente identiicada en Drosophila y que induce una respuesta inmunolgica contra los hongos
y bacterias Gram-positivas. Entre los diferentes TLRs, algunos reconocen particularmente PAMPs de
virus, siendo el TLR3 uno de los ms importantes por reconocer el dsRNA, producido durante la replicacin de muchos virus de RNA y DNA. Entre los RLRs se destacan las helicasas RIG-1 y MDA5
(del ingls, melanoma differentiation-associated gene 5). Mientras que la RIG-1 reconoce ssRNA 5trifosfatados y dsRNA de secuencias cortas (hasta 1 kb), el MDA5 reconoce dsRNAs de secuencia larga
(>2kb), generados durante la replicacin viral (Takeuchi y Akira, 2009). Y inalmente, el reconocimiento de largos dsRNA tambin es realizado por los NLRs.
Luego de la internalizacin de los virus en la clula de un mamfero, sus cidos nucleicos
son liberados por el sistema endsomo/fagolissomo y reconocido por los diferentes TLRs. Los TLRs
activan una compleja cascada de sealizacin intracelular, induciendo la transcripcin de una variedad de genes, incluyendo los IFN-/ (Uematsu y Akira, 2006; 2007). Por su parte, los IFN-/,
desencadenan la activacin de mltiples vas intracelulares que interieren con muchas de las etapas
del ciclo de vida de los virus, limitando la ampliicacin y la diseminacin de los virus, atenuando as
el proceso infeccioso. Los IFNs secretados participan en la activacin de la sealizacin intracelular
JAK/STAT, que resulta en la induccin de mltiples genes que codiican diversas protenas implicadas
en las respuestas antivirales. Entre ellas se destacan la PKR (del ingls, serine/threonin protein kinase),
la OAS (del ingls, 2-5-oligoadenylate synthetase), la RNase L, la ADAR (del ingls, RNA-speciic
adenosine desaminase) y la Mx (del ingls, myxovirus-resistance protein GTPase). Estas protenas afectan principalmente la multiplicacin de los virus en la clula infectada, generando un estado antiviral
inespecico en las clulas del hospedero (Samuel, 2001).
269
Camarones
Hasta muy recientemente las protenas del sistema IFN eran consideradas molculas presentes
desde los cordados inferiores hasta los mamferos, no encontrndose en los invertebrados, principalmente en el ramo de los protstomos que incluye los crustceos. Adems, en los genomas completos disponibles de varios insectos, que estn ntimamente ligados a los crustceos, y del crustceo
branquipodo Daphnia pulex (McTaggart et al., 2009) no fueron encontradas secuencias gnicas
homlogas para IFNs. Sin embargo, recientemente la expresin de una protena homologa al IFN-
de los mamferos fue reportada por primera vez en un invertebrado, en los hemocitos del penaeido
M. japonicus (He et al., 2005). De forma interesante, esta protena denominada IntlP (del ingls, interferon-like protein; GenBank AY695938) slo se expresa en camarones supervivientes a la infeccin
por WSSV y no en camarones sanos.
La identiicacin de este producto gnico en 2005 provoc gran optimismo, una vez que
implicaba en la presencia de un sistema antiviral inespecico en crustceos basado en IFN, como
en los vertebrados. Los autores produjeron IntlP en un sistema recombinante y mostraron que esta
protena tena de hecho una actividad antiviral, una vez que confera proteccin celular contra los
efectos citopticos causados por el virus del pez SGIV (del ingls, Singapore grouper iridovirus). Ms
recientemente fue relatado que la forma recombinante de la IntlP de M. japonicus, adems de una
actividad antiviral, tambin presentaba una actividad antibacteriana contra tres especies de vibrios
marinos (Mai et al., 2009).
Infelizmente, estos resultados parecen no corresponder a la realidad una vez que en los anlisis moleculares realizados en nuestro laboratorio fue demostrado que el IntlP corresponde de hecho
a una subunidad molecular del complejo proteico ATP sintetasa mitocondrial (cadena de la porcin
F0) de ocurrencia universal entre los organismos aerbicos, y no a una protena del sistema interfern. Se trata por consiguiente de una protena expresada constitutivamente, independiente de la presencia de infecciones virales y bacterianas que fue detectada en varios penaeidos (Rosa y Barracco,
2008; Barracco y Rosa, 2009). Siendo as, sus actividades antivirales y antibacterianas parecen muy
dudosas.
Se debe resaltar, que a pesar de la aparente ausencia de molculas homlogas a los IFNs
de mamferos en penaeidos, la induccin de un estado antiviral inespecico fue inequvocamente
mostrado en los camarones L. vannamei, un poco antes del reporte de la IntlP por He et al., (2005).
En 2004, Robalino et al., demostraron que la inyeccin de secuencias inespecicas de dsRNA
en camarones, causaba un aumento signiicativo de su resistencia a la infeccin por dos virus no relacionados, el TSV y el WSSV. Estos resultados mostraron, por primera vez en crustceos, la induccin
de un estado antiviral inespecico, independiente de la secuencia de dsRNA inyectada y por tanto
muy semejante al estado antiviral producido por los IFNs de mamferos (Robalino et al., 2004). Poco
despus, otros autores demostraron que tambin pequeos RNAs de doble cadena eran capaces de
inducir una proteccin antiviral inespecica en camarones (Westenberg et al., 2005). Estos resultados, aliados a la reciente demostracin de la presencia de receptores Toll en los hemocitos de varios
camarones penaeidos llevaron a la suposicin natural de la existencia de citocinas semejantes a IFNs
en camarones (Harpeni, 2011).
Ante estos resultados, es razonable suponer que citocinas anlogas y no homlogas a los IFNs
de vertebrados, deben de hecho existir en camarones (Figura 6.5.1). y seran las responsables por
la produccin del estado antiviral inespecico relatado por los autores citados. La identiicacin de
estas citocinas todava no descritas en crustceos, llevar ciertamente a una mayor comprensin de
los mecanismos antivirales de los camarones y podr abrir nuevas perspectivas para la estimulacin
270
de un estado antiviral general en camarones de cultivo, buscando un mayor control de los brotes de
infecciones virales.
Sistema RNA de interferencia (RNAi)
Adems de inducir al sistema IFN en los vertebrados, el patrn molecular dsRNA viral es tambin capaz de desencadenar otras vas intracelulares que tambin llevan a otras respuestas antivirales. Entre ellas, se destaca el mecanismo de silenciamiento post-transcripcional de genes, conocido
por RNA de interferencia o RNAi (Robalino et al., 2007b; Obbard et al., 2009). El RNAi representa
un antiguo y bien conservado mecanismo de defensa natural contra virus y transposones, presente
en todos los organismos pluricelulares, incluyendo plantas, hongos, protozorios, invertebrados y
vertebrados. De manera diferente al sistema IFN, que es inducido inespecicamente por cualquier
secuencia de dsRNA (patrn molecular), la proteccin antiviral basada en la va RNAi es secuencia-especica.
En animales, este mecanismo fue primeramente descrito en el nematodo C. elegans (Fire et
al., 1998), donde fue demostrado que inyecciones de dsRNAs podan silenciar los genes endgenos
del gusano, cuyas secuencias transcritas eran complementarias a aquellas de las cadenas del RNA
introducido. Posteriormente, se demostr en Drosophila que adems del papel isiolgico de regulacin gnica, el RNAi tena adems un importante papel en la defensa antiviral, formando parte del
sistema inmune innato de los animales (Li et al., 2002). Mayores informaciones sobre la implicacin
del sistema RNAi en las respuestas antivirales de los mamferos e invertebrados se pueden obtener en
las revisiones de Obbard et al., (2009), Sabin y Cherry (2013) y Sidahmed et al., (2014).
La activacin del sistema RNAi de una clula ocurre en el citosol y se inicia por el reconocimiento de dsRNA largos, provenientes de la replicacin viral (origen exgena), o regiones de RNA de
cadena simples en forma de horquillas (hairpin RNAs o hRNA), de origen endgena, por la ribonucleasa Dicer. Esta enzima los fragmenta en pequeos RNAs dplex (19-25 pb) denominados siRNAs
(del ingls, short interfering RNA) en el caso del dsRNA (Aliyari y Ding, 2009) y miRNAs (microRNAs)
en el caso del hRNA (Aliyari y Ding, 2009; Castanotto y Rossi, 2009).
En el caso de una infeccin viral, los siRNAs son conocidos tambin por viRNA (del ingls,
viral RNA). Los miRNAs son molculas producidas en el ncleo en la forma de largos transcriptos primarios
conocidos como pri-miRNAs que, a su vez, son fragmentados en pr-miRNAs (70-80 pares de bases) por una
RNAsa III nuclear, denominada Drosha (Lee et al., 2003). Los pr-miRNAs formados son entonces exportados al citosol va exporina-5 para, entonces, ser fragmentados por la RNAsa III citoslica, Dicer, en
miRNAs. En conclusin, la Dicer fragmenta dsRNAs presentes en el citosol, sean oriundos de un miRNA endgeno o de la replicacin viral. Conviene recordar que los dsRNA son considerados PAMPs
virales y por lo tanto la Dicer se comporta, en ese caso, como una PRP para virus.
Los pequeos RNAs resultantes del clivaje por la Dicer son incorporados al complejo multiproteico de silenciamiento inducido por RNA o RISC (del ingls, RNA-induced silencing complex) que
llevar a la degradacin especica o a la represin de la traduccin del RNAm con regiones complementarias a la secuencia del dsRNA/hRNA desencadenante (Castanotto y Rossi, 2009). De forma
resumida se puede decir que despus de la asociacin de los siRNAs/miRNAs al RISC citoslico, sus
dos cadenas sern separadas y la cadena anti sentido (o secuencia gua) ser utilizada como molde
por el RISC para encontrar y degradar el RNAm-blanco de secuencia complementaria (Fig. 6.5.1).
El ncleo cataltico del RISC (AGO2) es miembro de una familia altamente conservada de protenas,
denominado argonauta (Liu et al., 2004). Los pequeos RNAs dplex son producidos por diferentes
enzimas Dicers (Dcr1 y Dcr2), que actan predominantemente con distintos argonautas (AGO1 y
AGO2) (Frstemann et al., 2007). Estudios recientes, no obstante, demuestran algn tipo de cross talk
entre esas vas (Okamura et al, 2011).
271
Aunque los miRNAs sean reconocidos por participar en el silenciamiento pos-transcripcional

en el citoplasma, tambin se demostr con evidencias que algunos miRNAs regulan la expresin
gnica, va transcripcin, a nivel nuclear. El silenciamiento gnico dirigido por los pequeos RNAs
puede ocurrir bajo dos formas: (i) represin de la traduccin en el citosol, mecanismo conocido por
silenciamiento gnico pos transcripcional o PTGS (del ingls, post-transcriptional gene silencing), o
(ii) represin de la transcripcin en el ncleo, conocido por silenciamiento gnico transcripcional o
TGS (del ingls, transcriptional gene silencing) (Castanotto y Rossi, 2009; Moazed, 2009).
El PTGS resulta en la degradacin del RNAm-blanco en el citoplasma, sin causar daos a la
transcripcin nuclear del gene correspondiente y puede ocurrir a travs de dos mecanismos: por clivaje directa de la secuencia-especica del RNA o por la represin de la traduccin y degradacin del
RNA (Castanotto y Rossi, 2009). Clivajes directas de secuencias especicas ocurren cuando el RNAmblanco es perfectamente complementario al siRNA y su degradacin se da inmediatamente despus
de la clivaje sitio-especica por la RISC. Por otro lado, la represin de la traduccin y degradacin del
RNA ocurre cuando la secuencia gua del miRNA (en los nucletidos 2 a 8 de la extremidad 5) posee
apenas una complementariedad parcial al RNAm-blanco llevando a un emparejamiento incompleto
entre la secuencia gua y el RNAm. Ese emparejamiento parcial bloquea la traduccin y promueve
la degradacin del RNAm en regiones electrodensas del citosol, denominadas cuerpos P (Castanotto
y Rossi, 2009). Conviene sealar que ese mecanismo es utilizado especicamente por los miRNAs.
El TGS es un mecanismo de silenciamiento hace poco comprendido, pero a diferencia del
PTGS, acta a nivel nuclear y no directamente sobre la molcula de RNAm. El TGS promueve alteraciones en la estructura de la cromatina inhibiendo la transcripcin de genes especicos, habiendo
sido inicialmente descubierto en plantas, donde pequeos RNAs producidos de transgenes promovan la metilacin de secuencias homlogas de DNA endgeno y de histonas (All y Kornblihtt,
2010). Posteriormente el TGS fue tambin detectado en levaduras, clulas de mamferos (All y
Kornblihtt, 2010), Drosophila y C.elegans (Moazed, 2009).
Camarones
En lo que se reiere al papel antiviral del RNAi, la primera evidencia de la existencia de una
defensa antiviral especica en camarones fue demostrada por Robalino et al., (2005) en L. vannamei.
Los autores mostraron que despus de inyectar secuencias especicas de dsRNA de protenas virales
(WSSV o TSV) haba una proteccin antiviral prcticamente completa contra infecciones por estos
virus (Robalino et al., 2005). De manera semejante, secuencias especicas de dsRNA fueron tambin
capaces de suprimir la replicacin del virus YHV en clulas en cultivo de P. monodon (Tirasophon et
al., 2005). Con base en estos resultados, se volvi evidente que el mecanismo antiviral modulado por
RNAi ocurra efectivamente en camarones y su eiciencia y especiicidad fueron claramente demostradas. Mayores informaciones sobre la implicacin del sistema RNAi en las respuestas antivirales en
los camarones se pueden obtener en la revisin de Labreuche y Warr (2013).
Muchos estudios han sido realizados para identiicar los principales componentes de la va
RNAi en camarones, siendo que algunos de los genes que codiican para protenas-llave, como Dicer
y argonauta, ya fueron identiicados y clonados en varios peneidos (ver revisin de Labreuche y Warr,
2013), como en P. monodon (Unajak et al., 2006; Dechklar et al., 2008; Su et al., 2008) y L. vannamei
(Labreuche et al., 2010; Yao et al., 2010; Chen et al., 2011). Es importante sealar que el trabajo de
Robalino et al., (2005) fue el primero en demostrar que la induccin del sistema RNAi en camarones
puede darse por va sistmica, o sea, por la inyeccin de dsRNA.
La incorporacin del dsRNA por las clulas y el fenmeno de propagacin sistmica del silenciamiento ya fue conirmado en C. elegans y D. melanogaster y parece estar ligado a dos mecanismos
distintos: (a) transferencia del dsRNA al citosol por un canal proteico transmembrana denominado
272
SID-1 (del ingls, systemic interference defective) y (b) endocitosis del dsRNA, utilizando receptores
del tipo scavengers de reconocimiento patrn (Huvenne y Smagghe, 2010).
La propagacin sistmica del efecto RNAi en camarones es todava un fenmeno no comprendido. No obstante, muy recientemente, un homlogo del SID-1 fue identiicado en L. vannamei
(Lv-Sid1) (Labreuche et al., 2010). De manera interesante, la expresin de este receptor aumenta
sustancialmente despus de inyecciones de cualquier dsRNA (independientemente de su secuencia),
sugiriendo as que la captacin de dsRNAs por las clulas del camarn debe ocurrir va SID-1, a
ejemplo de otros invertebrados.
En estudio reciente en nuestro laboratorio, la inyeccin de juveniles L. vannamei con dsRNAVP28 (protena de la envoltura del WSSV) antes de un desafo letal con WSSV (mortalidad de 100%
en 5 das) activ el sistema RNAi, mejor las condiciones inmunolgicas generales de los animales
y los llev a una sobrevivencia de 73% de los animales desaiados, durante 30 das (Guertler et al.,
2013). Ms interesante todava es el hecho que 80% de esos animales sobrevivientes no presentaba
el virus en su organismo. En camarones tratados con dsRNA, el hemograma disminuy hasta 6 horas
despus del desafo, seguido por aumento y alcanzando su nivel normal en 72 horas. De esta forma,
el tratamiento con dsRNA-VP28 limit la infeccin en los camarones por WSSV, restaurando sus
condiciones inmunolgicas y promoviendo el clearance viral en la mayora de los sobrevivientes.
Estos hallazgos son extremadamente relevantes, una vez que demuestran que el tratamiento previo de
camarones juveniles con dsRNA-VP28 puede llevar a la restitucin de las buenas condiciones inmunolgicas de animales desaiados con WSSV, al control de la infeccin viral en su fase inicial, adems
de promover una limpieza viral en la mayora de los sobrevivientes. De esa forma, la utilizacin de
dsRNA-VP28 podra representar una potencial terapia antiviral de carcter preventivo contra el WSSV,
en camarones juveniles infectados con una carga viral alta.
Es importante destacar, que a pesar de que la tecnologa del RNAi pudiera ser considerada
actualmente como la estrategia ms promisoria contra las virosis de camarones, la necesidad de
inyectar los animales individualmente con dsRNA de secuencia-especica, asociada al alto costo de
la tcnica, constituye todava un factor limitante para su utilizacin en gran escala dentro de la camaronicultura. Inyecciones con dsRNA/siRNA son inviables en granjas de camarones y la bsqueda de
vas alternativas de administracin y de disminucin de costos son urgentes e imperativas.
Uno de los mtodos alternativos a ser evaluados sera la administracin oral de bacterias productoras de dsRNA de secuencia especica (bacterias transformadas, deicientes en RNAsa III, conteniendo un plsmido que sintetiza ambas cadenas del dsRNA), mtodo ya bien establecido para C.
elegans (Timmons et al., 2001). Un primer estudio de este tipo fue realizado por Sarathi et al. (2008),
en P. monodon, utilizando dos formas diferentes de administracin oral: (1) alimento cubierto con
bacterias (E. coli) transformadas con plsmidos productores de dsRNA-VP28 o, (2) nanopartculas de
quitosano conteniendo el dsRNA-VP28. Los autores encontraron tasas expresivas de sobrevivencia
de los camarones desaiados con WSSV despus de un mes de tratamiento (70% y 40%, respectivamente) (Sarathi et al., 2008).
Un punto relevante a ser considerado en ese abordaje es que la activacin del sistema RNAi
depende de la entrada del dsRNA/siRNA en las clulas del hospedero y por tanto, la administracin
oral debe garantizar que los dsRNA/siRNA atraviesan el tracto digestivo del camarn sin ser degradados y alcancen los diferentes tejidos de los animales, incluyendo los potencialmente infectados.
Para eso, es imperativo tener una comprensin muy clara de la isiologa del tracto intestinal de
los camarones, que posibilite delinear metodologas eicaces de transferencia del dsRNA/siRNA del
intestino hacia los tejidos. Estudios de este tipo son todava muy escasos o ausentes, a pesar de la
273
fuerte demanda de investigaciones en esta rea para validar o no la va de administracin oral de

estas construcciones.
Otro mtodo que parece muy promisorio y merece ser mejor investigado se reiere a la utilizacin de vectores plasmidiales que expresen RNAs en forma de horquilla (hRNAs), que pueden ser
de secuencias largas (lhRNA:, del ingls, long-hairpin RNA) o cortas (shRNA:, del ingls, short-hairpin
RNA). La mayora de las aplicaciones teraputicas basadas en el RNAi introducen directamente en
el organismo el dsRNA/siRNA. Todava los efectos de esas molculas son transitorios, una vez que
ellas pueden ser degradadas en el organismo. Por otro lado, la insercin de un sistema de vectores
plasmidiales o virales expresando hRNAs, puede llevar a un silenciamiento especico y potente, una
vez que promueven la transcripcin de los precursores de RNA doble cadena para ser procesado va
RNAi. Cabe destacar que tales estrategias permiten una entrega continua del hRNA al organismo,
superando as la limitacin de la accin transitoria de los siRNAs (Lambeth et al., 2010). Segn Castanotto y Rossi (2009), la utilizacin de un promotor que induce la expresin de hRNAs o miRNAs
podra promover un silenciamiento de largo plazo, con apenas una nica aplicacin. Ese mtodo tendra ciertamente una fuerte funcin prctica para la acuicultura, una vez que dispensara eventuales
refuerzos de inyeccin de los dsRNA/siRNA virales para proteger los animales.
El primer estudio en camarones, utilizando una construccin de DNA expresando lhRNA, fue
realizado por Krishnan et al., (2009). En ese estudio, construcciones plasmidiales expresando lhRNAVP28 o lhRNA-VP19 fueron producidas e inyectadas en P. monodon, en diferentes concentraciones.
Despus del desafo con WSSV, los animales tratados con lhRNA-VP28 presentaron una alta tasa
de sobrevivencia (75%) despus de un mes de la inyeccin (35 g). Anlisis de PCR en tiempo real
(qPCR) indicaron una disminucin signiicativa en el nmero de copias virales en estos animales,
resultando que los autores atribuyeron a la biodisponibilidad continua y funcionalidad de la construccin, que fue detectada en varios tejidos del animal, hasta por un mes del tratamiento (Krishnan
et al., 2009). Mayores informaciones sobre la aplicacin de la tcnica de RNAi contra virus causando
enfermedades en animales acuticos, pueden ser encontradas en la revisin de Reshi et al., (2014).
En conclusin, el uso de dsRNA para activar la inmunidad antiviral en camarones despunta en
el momento actual como una alternativa teraputica de las ms promisorias en el combate a las virosis, una vez que ese patrn molecular induce simultneamente respuestas secuencia-inespecicas, a
travs de un sistema interferon-like y secuencia-especicas, a travs de la va RNAi. Por otro lado, la
induccin del sistema RNAi por dsRNA/vectores expresando hRNA va sistmica y eventualmente por
va oral, implican una atrayente posibilidad de desarrollarse terapias antivirales, de forma compatible
con la camaronicultura.
Apoptosis celular: mecanismo antiviral o pro-viral?
La muerte celular programada o apoptosis es un proceso bien conocido con implicaciones
variadas en la regulacin de la homeostasis de un organismo, actuando tanto en el desarrollo embrionario, como en el control de los tejidos en general y tambin en las respuestas inmunolgicas
contra clulas alteradas y/o infectadas por patgenos intracelulares como los virus. Es en s, un mecanismo ilogenticamente antiguo y bien conservado entre los diferentes grupos de seres vivos. La
induccin de apoptosis se inicia en respuesta a una variedad de estmulos, incluyendo las infecciones
virales y envuelve varias alteraciones morfolgicas celulares, como la condensacin de la cromatina,
la fragmentacin del ncleo, el blebbing de la membrana, el achicamiento celular y inalmente la
fragmentacin de la clula en pequeas vesculas revestidas por la membrana, denominadas cuerpos
apoptticos, que son en general rpidamente fagocitados por las clulas vecinas o por macrfagos
(Fig. 6.5.2). Las alteraciones bioqumicas subyacentes a estas alteraciones morfolgicas, incluyen la
activacin de enzimas nucleasas y proteasas, dentro de las cuales se destaca la familia de las caspa274
sas (iniciadoras y ejecutoras). stas tienen un papel crucial en el proceso apopttico, pues catalizan
muchos de los diferentes pasos en la muerte celular (Chowdhury et al., 2008).
Muchas protenas y componentes virales perturban la isiologa celular y proporcionan seales
celulares que inducen la muerte celular por apoptosis. En mamferos, ya fue demostrado que algunos
componentes de las vas pro-apoptticas pueden ser activados por el dsRNA viral (Gantier y Williams,
2007). Luego, durante una infeccin viral, el dsRNA estara implicado tanto en la sealizacin intracelular activando los sistemas de RNAi e interfern, como tambin estara induciendo la apoptosis
celular (Fig. 6.5.2).
Figura 6.5.2: Apoptosis celular. Representacin de la apoptosis de una clula, con la formacin de cuerpos apoptticos endocitados por una clula saludable (A). Ncleos apoptticos (B) y no-apoptticos (C) de hemocitos de L.
vannamei infectados con el virus de la mionecrosis infecciosa (IMNV), teidos con bis-benzimida.
Es importante sealar que la induccin de la apoptosis en estadio precoz de la infeccin viral,

puede efectivamente limitar la produccin de partculas virales y reducir o eliminar la propagacin
de la progenie viral para otros tejidos. Sin embargo, una apoptosis tarda puede, por lo contrario, favorecer la infeccin viral. De hecho muchos virus desarrollaron, a lo largo de la evolucin, un mecanismo de inhibir o retardar el proceso apopttico, como forma de evadirse de esta respuesta antiviral
y garantizar su replicacin en el hospedero (Roulston et al., 1999). La apoptosis celular, en estadio
inal del ciclo de la replicacin viral, ofrece muchas ventajas a los virus. Durante este proceso, todo
el contenido celular, incluyendo la progenie del virus, es empacado en los cuerpos apoptticos. Los
virus son as indetectables para el sistema inmune, estando protegidos dentro de los cuerpos apoptticos. Evitan de esta manera las respuestas inlamatorias y su inactivacin por anticuerpos (en los
vertebrados) y proteasas del hospedero. Estos cuerpos apoptticos, alojando innumerables virus replicados, son rpidamente fagocitados por las clulas vecinas e irnicamente garantizan as la propagacin y la infeccin viral. O sea, la induccin de una apoptosis tarda parece ser una ptima estrategia
de propagacin para los virus que evolutivamente no desarrollaron todava defensas anti-apoptticas
u otros mecanismos de evasin inmunolgica (Roulston et al., 1999).
275
En camarones, la induccin de la apoptosis en infecciones virales viene siendo activamente

investigada en estos ltimos aos. En P. monodon infectados por WSSV (Sahtoutd et al., 2001; Wongprasert et al., 2003) o por YHV (Khanobdee et al., 2002) ocurre un aumento progresivo de la apoptosis hasta niveles muy altos, comprometiendo as varios tejidos y pareciendo ser la principal causa
de la muerte de los camarones. Tambin en M. japonicus infectados por WSSV, la incidencia de la
apoptosis se mostr muy alta, resultando en elevadas mortalidades de sus clulas y por consiguiente
de los animales (Wu y Muroga, 2004). Estos resultados sugieren que en las infecciones virales severas
en los camarones, ocurre la induccin de una apoptosis tarda, llevando a una fuerte propagacin
de la progenie viral y resultando en la muerte del camarn por exceso de apoptosis en sus tejidos.
Varias caspasas (proteasas que desencadenan la apoptosis celular) ya fueron identiicadas y
clonadas en camarones, como la caspasa efectora del tipo 3 descrita en F. merguiensis (Phongdara et
al., 2006), en P. monodon (Wongprasert et al., 2007) y en L. vannamei (Rijiravanich et al., 2008). En
los dos primeros casos, estas proteasas son inducidas durante infecciones por el WSSV. Tambin en
M. japonicus fue clonada una caspasa iniciadora (Pjcaspasa) homloga a las caspasas del tipo 8 y 10
(Wang et al., 2008) y su silenciamiento llev a una inhibicin signiicativa de la apoptosis inducida
por el WSSV, resultando en un aumento de las copias virales en el animal.
Muy recientemente fueron clonados cuatro genes codiicantes para nuevas clases de caspasas
en L. vannamei, denominadas Lvcaspase2, 3, 4 y 5 (Wang et al., 2013). El silenciamiento de las Lvcaspase2, 3 y 5 promovi un aumento signiicativo en la expresin gnica de la VP28 del WSSV, sugiriendo la participacin de estas caspasas en la defensa antiviral en camarones (Wang et al., 2013).
Estos resultados en conjunto sugieren, por lo tanto que la apoptosis es de hecho un importante
mecanismo antiviral en camarones. Sin embargo, ya fue claramente demostrado que el WSSV contiene en su genoma un gen que codiica una protena anti-apopttica denominada AAP-1 (conocida
tambin por WSSV449 o ORF 390) (Wang et al., 2004). Esta protena viral es capaz de unirse a una
caspasa efectora de P. monodon, inhibiendo su actividad pro-apopttica y demostrando as, su actividad anti apopttica (Leu et al., 2008). Estos resultados sugieren que la fuerte capacidad infecciosa
del WSSV deba estar relacionada a su efecto anti-apopttico.
Autofagia como defensa antiviral
La autofagia es la principal va intracelular de degradacin y reciclaje de macromolculas de
vida larga y de organelas defectuosas y/o inoperantes de la clula, utilizando para ello la va lisosomal. De manera semejante a la apoptosis, la autofagia es un mecanismo isiolgico ilogenticamente
antiguo y conservado, que acta en los procesos de diferenciacin, desarrollo, homeostasis y sobrevivencia de los organismos multicelulares (Mizushima, 2007; Sumpter y Levine, 2010). La autofagia
es activada en respuesta a una variedad de estmulos intra y extracelulares, incluyendo privacin
de nutrientes, tratamiento hormonal o teraputico, presencia de agregados proteicos mal doblados,
organelas inoperantes e infeccin microbiana.
Estudios recientes han demostrado que la autofagia en mamferos est ntimamente implicada
en la remocin de patgenos intracelulares, estando as asociada al sistema inmune de estos animales
(Figura 6.5.1). Actualmente se reconoce que la autofagia contribuye con el sistema inmune de tres
formas: (a) eliminacin directa de patgenos intracelulares (virus, bacterias y parsitos) a travs de su
empaque y degradacin en autolisosomos; (b) entrega de productos/componentes microbianos para
los receptores de reconocimiento patrn intracelulares, proceso referido como inversin topolgica, activando respuestas inmune efectoras y; (c) como un efector antimicrobiano, eliminando los
patgenos intracelulares a partir del reconocimiento de los PAMPs por los receptores Toll-like y otros
PRRS (Delgado et al., 2009).
276
El proceso de autofagia envuelve acciones coordinadas de varios genes denominados ATG

(autophagy-related genes). Estos genes estn primariamente implicados en el re-arreglo estructural de
las endomembranas para permitir el proceso autofgico natural de la clula (Sumpter y Levine, 2010).
Entretanto, estos genes estn tambin implicados en la proteccin in vivo contra infecciones por patgenos intracelulares del tipo bacteriano y viral. En mamferos, los ATGs pueden tanto estimular la
produccin del interfern tipo I, como tambin regular la entrega de los ssRNA al TLR7 presente en
los endsomos de las clulas dendrticas durante ciertas infecciones virales (Lee et al., 2007).
En Drosophila ya fue demostrado que los genes ATGs estn implicados en la proteccin contra
infecciones virales en insectos adultos. De hecho, cuando ciertos ATGs son silenciados (ATG 7, 12
o 18), los insectos se tornan susceptibles a las infecciones virales y mueren (Shelly et al., 2009). En
crustceos, estudios sobre el papel inmunolgico de la autofagia son todava inexistentes. Sin embargo, se piensa que, as como en los insectos y mamferos la autofagia debe estar implicada en la
defensa antiviral de camarones. Se espera que en un futuro prximo, el estudio de este proceso pueda
contribuir para una mayor comprensin de la interaccin patgeno-hospedero y para el desarrollo de
terapias alternativas que lleven a un mayor control de las virosis de camarones.
Concepto de acomodacin viral en camarones
Una forma alternativa para enfrentar los brotes virales y el control de infecciones virales en
camarones, se reiere al concepto de la acomodacin viral propuesto por Flegel en 1998 y recientemente actualizado por el mismo autor (Flegel y Pasharawipas, 1998; Flegel, 2007; 2009). Este concepto propone que los crustceos se adaptan a los nuevos virus patgenos que surgen, desarrollando
una especie de memoria inmunolgica especica. La propuesta se basa en el hecho que luego de
brotes virales graves en los cultivos de camarones, la severidad del problema regularmente se atena
de forma relativamente rpida, en trminos evolutivos (cerca de 1 a 2 aos), a pesar de haber una alta
prevalencia de estos virus en camarones de apariencia saludable. Todo indica que los camarones
supervivientes desarrollan una tolerancia a los virus y se vuelven portadores de infeccin persistente,
sin ningn efecto negativo aparente o signo de enfermedad.
Esta situacin contrasta con el concepto de resistencia viral de los vertebrados, que implica en
una eliminacin/depuracin del agente causante de la infeccin por los supervivientes que se vuelven resistentes/tolerantes a una nueva re-infeccin. La condicin de tolerancia adquirida por los camarones supervivientes, permanece por toda su vida y es transferida en baja dosis para toda su progenie que tambin desarrolla infecciones virales persistentes, sin todava desencadenar la enfermedad.
Este concepto encuentra soporte en el hecho de que infecciones virales dobles, triples y mltiples son frecuentemente detectadas en camarones de apariencia saludable. En 2007, Flegel propone que el camarn puede convivir con los virus sin haber efectos negativos, debido a un proceso
combinado virus-hospedero, que comprende la reduccin del proceso apopttico en el hospedero
inducido por los virus.
Esta hiptesis fue reforzada, al ser evidenciado que los camarones sin signos de enfermedad,
pero con infeccin viral persistente, no presentaban apoptosis en sus clulas (Wongprasert et al.,
2003). Por otro lado, durante los brotes virales, los niveles de apoptosis aumentan drsticamente en
camarones moribundos, pudiendo llegar a valores muy altos (hasta 40% de muerte celular) y que
la muerte del camarn sera una consecuencia de este exceso de apoptosis (Sahtout et al., 2001).
Sin embargo, los mecanismos moleculares subyacentes a la tolerancia a los virus patgenos por el
camarn, eran todava desconocidos y probablemente distintos de la tolerancia inmunolgica de los
vertebrados.
277
Ms recientemente, Flegel (2009) re-examina su hiptesis de acomodacin viral en camarones

y propone una nueva explicacin para este fenmeno, que en nuestra opinin es ms interesante y
persuasiva, que la supresin de la apoptosis hipotetizada anteriormente. En esta nueva propuesta, el
autor postula que, durante las infecciones virales los crustceos consiguen reconocer los RNAm virales y desarrollan un mecanismo de insercin de pequeos fragmentos aleatorios del genoma viral en
forma de DNA complementaria o cDNA) en su propio genoma. Esta insercin sera modulada por las
transcriptasas reversas (RT) e integrasas (IN) endgenas, que son abundantes en las clulas del propio
camarn. Algunos de estos fragmentos insertados generaran secuencias de RNA antisense, que Flegel denomina RNA inmunoespecico (imRNA) y seran capaces de generar dsRNA con secuencias
correspondientes al RNAm viral. Como consecuencia, los dsRNA producidos estimularan el sistema
RNAi del camarn, suprimiendo/limitando la propagacin del virus y llevando a una infeccin viral
persistente, sin sntomas de la enfermedad.
Para reforzar su hiptesis, Flegel reporta la presencia, ya demostrada, de secuencias del genoma viral (no provenientes de retrovirus) del IHHNV y del WSSV, en genomas de camarones penaedos
(Tang y Lightner, 2006; Flegel, 2009). Flegel sugiere adems, que la gran cantidad de secuencias de
RT-like expresadas en camarones favorece la posibilidad de que estas estn implicadas en un mecanismo isiolgico de reconocimiento del no-propio (PRPs/PRRs), semejante al reconocimiento de
PAMPs del sistema inmune innato. Sin embargo, diferentemente de las respuestas desencadenadas
por PAMPs, el proceso que genera el imRNA es un proceso altamente especico y supuestamente
heredable. En esta nueva proposicin, Flegel postula que caso realmente exista una heredabilidad
del imRNA, un mayor entendimiento de este proceso podra permitir desarrollar vacunas para camarones, basadas en construcciones virales apropiadas, capaces de insertarse de forma natural en sus
genomas, sin la necesidad de producir camarones artiicialmente resistentes, genticamente modiicados.
En nuestra opinin, la nueva hiptesis de Flegel (2009) para explicar el fenmeno de acomodacin viral, parece ms consistente que la anterior, basada en la supresin del proceso apopttico.
Sin embargo, cabe resaltar que la heredabilidad de esta resistencia/tolerancia por la progenie de los
camarones permanece poco fundamentada y bastante cuestionable, una vez que las secuencias virales deberan insertarse en las clulas germinativas de las gnadas de los camarones para garantizar
su transmisin. Infelizmente el autor explica poco este punto crucial de su hiptesis, que permanece
esencial para su validacin.
En caso haya efectivamente una heredabilidad en el proceso de produccin de imRNA en
camarones, una nueva clase de agentes teraputicos antivirales podra realmente ser desarrollada,
basada en construcciones virales apropiados, capaces de insertarse en los genomas de los animales.
Estos nuevos agentes teraputicos seran entonces capaces de conferir una proteccin especica y
de largo plazo a los camarones y su progenie, contribuyendo de modo importante y decisivo en el
control de las virosis de camarones, que tanto se anhela en la camaronicultura.
Cabe adems resaltar que Flegel (2009) deiende todava la ocurrencia de una inmunidad
adaptativa en crustceos, a ejemplo de lo que ocurre en vertebrados, una vez que el sistema RNAi
est basado en una respuesta celular secuencia-especica. Sin embargo, en nuestra opinin, esta
respuesta no debe ser confundida con las respuestas inmune adaptativas de los vertebrados, cuya
organizacin, complejidad y especiicidad son fenmenos claramente distintos del sistema RNAi.
Respuestas secuencia-especicas del tipo RNAi en infecciones virales son comunes en camarones y
en todos los organismos pluricelulares, incluyendo plantas y hongos y constituyen un tpico ejemplo
del sistema inmune innato.
278
Mecanismos de evasin viral

Como se ha explicado anteriormente, en los vertebrados, luego de la entrada de los virus en
el organismo, stos son generalmente reconocidos como partculas extraas e inician una serie de
respuestas inmunolgicas que tratan de impedir su entrada en las clulas, su replicacin y su propagacin. Luego de su reconocimiento, ocurre en el hospedero una cascada de respuestas celulares
y humorales ya discutidas anteriormente que incluyen la activacin de clulas NKs y de linfocitos T
citotxicos (CTLs), la produccin de anticuerpos especicos neutralizadores, la produccin de varias
citocinas sealizadoras, como los IFNs, que interactan con los linfocitos y suprimen o expanden sus
funciones inmunolgicas.
Los virus pueden utilizar diferentes mecanismos para evadirse de las defensas inmunolgicas
del hospedero en el caso de los vertebrados, siendo las principales: (1) la modulacin de las funciones del complejo mayor de histocompatibilidad que presenta los antgenos virales, (2) la inhibicin/
modulacin de diferentes quimiocinas y citocinas sealizadoras incluyendo los IFNs, (3) la evasin
de los CTLs y NKs, (4) la inhibicin de la apoptosis y (5) la interferencia la va RNAi (Abbas et al.,
2007).
En los crustceos, los mecanismos de evasin viral no son todava conocidos, aunque deben
incluir la inhibicin/modulacin de varias respuestas inmunolgicas envolviendo la activacin del
sistema proPO, la expresin de citocinas implicadas en la respuesta antiviral (molculas interferon
-like), la expresin de molculas antivirales como la PmAV y ALF, la expresin de PRPs u otros
receptores celulares utilizados en la interiorizacin del virus, la activacin de la va del RNAi y del
proceso apopttico. Muchos virus producen supresores virales de RNAi como el VSRs (del ingls, viral suppressors of RNAi) los cuales incluyen protenas supresoras de silenciamiento o SSPs (del ingls
silencing suppressor proteins) (Li y Ding 2006; Bortolamiol et al., 2008; Labreuche y Warr, 2013).
Esos VSRs son capaces de interferir en varias etapas del proceso de silenciamiento, optimizando as la
replicacin viral y propiciando la propagacin viral en el organismo hospedero. (Labreuche y Warr,
2013).
Entre los mecanismos de evasin viral en los camarones, los ms destacados actualmente son
el retardo/supresin del proceso apopttico en la clula infectada, la modulacin de la expresin
del ALF y supresin/retraso del silenciamiento de los productos gnicos virales, va-RNAi, como
mencionado anteriormente. La comprensin de los mecanismos moleculares subyacentes a estos dos
procesos est apenas en sus inicios y ciertamente debern proporcionar, herramientas tiles para el
control de las infecciones virales en los camarones en un futuro prximo.
6.6. Inmunoestimulantes
El gran inters en compuestos inmunoestimulantes surgi de la necesidad de tratar el cncer
en los humanos, buscando compuestos capaces de activar las clulas del sistema inmunolgico (macrfagos, clulas NKs, linfocitos B y T), para aumentar su capacidad de destruir los tumores. Por otro
lado, adems de proporcionar una mayor proteccin contra los tumores, la activacin de las clulas
inmunolgicas lleva todava a una mayor resistencia a las infecciones por diferentes microorganismos, como virus, bacterias, hongos y otros parsitos.
Sustancias inmunoestimulantes son obtenidas a partir de varias fuentes naturales y tambin
por sntesis qumica con base en la estructura molecular de los propios productos naturales. Entre
estos compuestos, se encuentran muchos derivados de microorganismos o de algas, destacndose los
componentes de la pared celular de diferentes bacterias, hongos, micro algas y macro algas. Los principales principios activos de estos componentes capaces de generar una inmunoestimulacin son:
279
fragmentos de PGN, LPS, lipopptidos, polisacridos sulfatados (PS), -glucanos, acil-oligopptidos y

pptidos bacterianos especicos (Song y Huang, 2000).
Con relacin a los camarones, muchas sustancias descritas como inmunoestimulantes han
sido utilizadas con el propsito de aumentar la resistencia natural, en vista de la imposibilidad de vacunar estos animales. Sin embargo, existe una falta casi completa de informacin sobre el mecanismo
de accin de estos compuestos a nivel del sistema inmune de los camarones, adems de no haber
consenso sobre su real eicacia y sobre la reproducibilidad de los resultados.
Est bien establecido que la mejor forma de prevenir las infecciones en los cultivos de camarones, depende esencialmente de las buenas prcticas de manejo, que incluyen una buena calidad
del agua, adecuada densidad poblacional, buena nutricin y reduccin de los factores ambientales potencialmente estresantes (principalmente las variaciones bruscas de salinidad, temperaturas
y oxgeno). El uso de sustancias capaces de aumentar la inmunocompetencia de los camarones, en
paralelo a un buen manejo del cultivo, apunta ciertamente como una herramienta promisoria en la
bsqueda de una mayor proteccin inmunolgica contra el desarrollo de infecciones. Existe una real
necesidad de maximizar la inmunocompetencia de los camarones cultivados, minimizando el uso de
agentes teraputicos qumicos, como antibiticos, que contaminan la carne del animal y el ambiente
y tambin inducen el aparecimiento de microorganismos resistentes.
Muchas sustancias consideradas inmunoestimulantes han sido utilizadas en los cultivos de
camarones, para aumentar su resistencia inmunolgica y sera imposible cubrir en este captulo,
la ininidad de referencias que existen a este respecto. Entre los compuestos ms utilizados en los
cultivos se destacan los -1,3/1,6-glucanos de hongos o algas, PGN de bacterias Gram-positivas, LPS
de bacterias Gram-negativas, PS de algas y algunas protenas virales (Smith et al., 2003). Entre estos
inmunoestimulantes, los -glucanos son tal vez los ms ampliamente utilizados para camarones y los
presumiblemente ms inmunoefectivos y compatibles con la prctica de la camaronicultura (Dalmo
y Bogwald, 2008).
Adems de estos compuestos de la supericie de microorganismos y de algas, otros productos
tambin se muestran aparentemente inmunoefectivos para los camarones, como los extractos de
diferentes hierbas (Citarasu et al., 2006; Balasubramanian et al., 2008; Yeh et al., 2009), bacterinas
(bacterias, principalmente vibrios, inactivadas por calor, formol o lioilizadas), probiticos (Tseng et
al., 2009) y suplementos nutricionales (astaxantina y cido ascrbico polifosfatado) (Song y Huang,
2000). Varios de estos compuestos son actualmente vendidos comercialmente, otros estn en fase
experimental y otros todava no cuentan con inanciamiento para una produccin comercial.
Los inmunoestimulantes son usualmente utilizados en los cultivos de camarones sobre formas
de bao (inmersin de los animales), como suplemento en la dieta o, ms raramente, sobre forma
de inyeccin (aparentemente ms eicaz). Se torna evidente, que entre estos mtodos, la adicin del
inmunoestimulante en la racin, es ms viable para la utilizacin en las granjas de cultivo. Las otras
dos formas de administracin (inyeccin y baos) son menos viables, pero pueden ser tiles para el
tratamiento de larvas y reproductores, o para experimentos en laboratorio cuyo principal objetivo sea
comprender el mecanismo de accin de estos compuestos.
Se debe resaltar que el efecto inmunoestimulante real de estos productos, es todava bastante
controvertido y poco fundamentado, dado que varios trabajos relatan resultados opuestos sobre el
efecto de un mismo inmunoestimulante. Los buenos resultados obtenidos en algunos casos, no son
muchas veces reproducibles. Como ejemplo entre muchos, se puede citar el uso de los -glucanos,
que en algunos casos conieren efectos benicos para los camarones tratados (aumento del desempeo e inmunoestimulacin) (Dalmo y Bogwald, 2008) y otros, no afecta o hasta perjudica a los
animales (Scholz et al., 1999; Sritunyalucksana et al., 1999b). Informaciones ms detalladas sobre el
280
efecto de diferentes inmunoestimulantes en camarones pueden ser encontradas en Dalmo y Bogwald

(2008).
La comprensin del mecanismo de accin de estos productos, es por lo tanto de crucial importancia para que su uso pueda ser efectivamente validado. Otro punto importante que debe ser
considerado, es referente a la administracin de los inmunoestimulantes en la dieta de los camarones.
La cuestin es: Cmo explicar la resistencia de estos compuestos a la digestin por las enzimas del
tracto digestivo o su absorcin aparentemente intacta por el epitelio/cutcula del intestino para llegar
a la hemolinfa a in de activar el sistema inmunolgico del camarn? Alternativamente, existen receptores especicos o molculas sealizadoras presentes en el intestino/cutcula capaces de reconocer
especicamente patrones moleculares en estos inmunoestimulantes y transmitir la sealizacin para
la hemolinfa?
Debe ser claramente observado, que la bsqueda de una activacin de las respuestas inmunolgicas en el camarn tratado con inmunoestimulantes, no es deseable como forma de prevenir
infecciones. Cul sera el propsito de activar el sistema inmune del camarn, induciendo una lisis
y/o degranulacin de sus hemocitos, con liberacin de todo su arsenal inmunolgico en un momento
inoportuno, en la ausencia de patgenos?
La presencia de tantas molculas txicas potentes, como las quinonas/hemiquinonas y los
radicales libres (ROIs y RNIs) en la ausencia de un proceso infeccioso, lleva ciertamente a una sobrecarga energtica cara e intil para los animales, adems de provocar serios daos a sus propios
tejidos. Siendo as, las referencias que reportan la activacin de estos parmetros hemato-inmunolgicos en camarones tratados con diferentes inmunoestimulantes en la ausencia de infecciones, deben
ser observadas con reserva. Lo que se busca de hecho en el cultivo de camarones, no es un sistema
inmunolgico continuamente activado como parece querer ser demostrado en varios relatos, sino un
fortalecimiento del sistema inmune capaz de generar un estado de mayor inmunocompetencia de los
animales, que les proporcione mayor capacidad y rapidez en la respuesta, cuando se presenta una
infeccin.
Otro punto crucial y cuestionable se reiere al momento y al tiempo de la administracin de
los inmunoestimulantes y al perodo de proteccin inmunolgica (memoria) otorgado. Qu sera lo
ms apropiado: administrar los inmunoestimulantes desde fases ms tempranas del desarrollo de camarones y/o inmediatamente antes de un desafo, o an luego de iniciado el desafo? Aqu tambin,
muchas publicaciones reportan resultados contradictorios y poco convincentes (Smith et al., 2003).
Algunos trabajos muestran que la administracin de inmunoestimulantes por perodos prolongados
lleva a un aumento del desempeo de los camarones y a una mayor inmunocompetencia por un
cierto perodo de das (Sung et al., 1996; Takahashi et al., 2000), aumentando la sobrevivencia de
camarones desaiados con el WSSV (Citarasu et al., 2006; Balasubramanian et al., 2008; Cantelli,
2009; Yeh et al., 2009); entre tanto, otros trabajos no reieren aumentos en el desempeo/inmunidad
de los camarones (Scholz et al., 1999).
En nuestra opinin, lo que sera deseable en la inmunoestimulacin, es poder potencializar las
defensas naturales del camarn sin costo isiolgico importante, elevando, por ejemplo, el nmero
de clulas inmunolgicas (hemocitos) y de protenas de reconocimiento y tambin modulando los
niveles de las molculas inmunoefectoras e inmunoreguladoras, de forma tal que permita dejar los
animales en una condicin ptima de inmunocompetencia para reaccionar con eiciencia a una
eventual invasin por los patgenos. En este sentido, la posibilidad actual de cuantiicar, con precisin, los niveles de expresin de diferentes inmunomarcadores por PCR en tiempo real, puede traer
una importante contribucin en la evaluacin del estado de inmunocompetencia de los animales,
mediante el tratamiento con inmunoestimulantes.
281
6.7. Parmetros hemato-inmunolgicos como indicadores de salud

Una prctica comn, en la medicina humana y veterinaria, es la utilizacin de parmetros
hematolgicos y bioqumicos para evaluar las condiciones de salud de los individuos y tambin para
auxiliar en el diagnstico de diferentes enfermedades. En la camaronicultura, estas herramientas
vienen siendo utilizadas como indicadores de salud, a pesar de la gran variedad en los valores de
referencia de estos parmetros, en una misma poblacin, en funcin del sexo, proceso de muda y
estado de desarrollo. Los parmetros hemato-inmunolgicos ms comnmente empleados en crustceos son: (1) hemogramas (conteo total y diferencial de hemocitos), (2) tiempo de coagulacin de
la hemolinfa, (3) actividad de la enzima PO, (4) ndice de fagocitosis, (5) produccin de ROIs, (6)
actividad antimicrobiana, (7) ttulo aglutinante del plasma y (8) concentracin de protenas totales
de la hemolinfa. Otros parmetros comienzan a ser implementados como la actividad de la lisozima
hemolinftica, la produccin de RNIs y la actividad del inhibidor de la proteasa 2M (Tabla 4).
Tabla 4: Principales parmetros hemato-inmunolgicos utilizados en la evaluacin del

estado de salud de camarones y otros crustceos.
Parmetro
hemato-inmunolgico
Hemogramas
ndice fagoctico
Utilidad
Determinacin
en campo*
Esencial (muy variables)
Buena
No
Produccin de ROI
Esencial
No
Produccin de RNI
Anlisis todava iniciales
No
Ncleos apoptticos
Tiempo de coagulacin
Protena total de la hemolinfa
Actividad da la PO
Actividad de otras enzimas/
protenas (SOD, lisozima, 2M,
etc.)
Actividad antibacteriana
Buena (para virus)
Buena (para animales muy estresados/enfermos)
Razonable (para animales muy estresados/enfermos)
Posible
Esencial (muy variable)
Posible
Razonable a buena (muy variable)
No
Buena
No
Actividad aglutinante del plasma
Razonable (no vara mucho)
Posible
Expresin de protenas
inmunolgicas (PCR-tiempo real)
Esencial
No
* Los anlisis viables mostrados en esta tabla pueden ser realizados por funcionarios entrenados de las propias incas de cultivo,
necesitando de infraestructura media (microscopios, espectrofotmetro, reactivos, entre otros). Los anlisis que aparecen como
no viables necesitan del apoyo de laboratorios externos (equipos y reactivos especiales) con profesionales caliicados.
Entre los parmetros citados, las alteraciones ms evidentes en los animales (principalmente
camarones) infectados/estresados se reieren a la modulacin del nmero total de hemocitos o THC
(del ingls, total hemocyte count) y la disminucin de la capacidad coagulante de la hemolinfa.
Es bien conocido, en la prctica de los cultivos, el aumento en el tiempo de coagulacin de la
hemolinfa en crustceos sobre estrs isiolgico o durante infecciones (Song et al., 2003; Sarathi et al.,
2007; Balasubramanian et al., 2008). La tcnica clsica para evaluar este parmetro, es la obtencin
de la hemolinfa con un capilar de vidrio (Sarathi et al., 2007) y registrar el tiempo de geliicacin de
la hemolinfa. Es una tcnica muy simple y si se efecta bien, puede generar informacin til sobre el
estado de salud de los animales. Como se explic anteriormente, el proceso de coagulacin envuelve
varios factores: la protena de coagulacin (CP), la enzima hemocitaria TGasa y la concentracin
282
plasmtica de Ca2+. No se conoce claramente cul de estos factores es el responsable por el aumento
en el tiempo de coagulacin en animales estresados/infectados. Evidencias sugieren que hay una
interaccin de todos estos factores. Camarones L. vannamei infectados con TSV tienen una capacidad
disminuida de coagulacin y presentan una actividad signiicativamente reducida de TGasa en los
hemocitos, adems de un decrecimiento en la concentracin de calcio plasmtico (Song et al., 2003).
Recientemente, fue demostrado que el silenciamiento pos-transcripcional tanto de la TGasa
como de la CP lleva a un aumento signiicativo en la tasa de mortalidad de M. japonicus infectados
con Vibrio penaecida o WSSV, indicando un fuerte envolvimiento de estas molculas en la respuesta
inmune de estos animales contra infecciones bacterianas y virales (Maningas et al., 2008). En otro estudio, se observ un agotamiento en la expresin de la TGasa (hasta 24 horas) despus de un desafo
con WSSV, tanto en F. chinensis (Liu et al., 2007) como en L. vannamei (Guertler, 2010), pudiendo
haber un aumento en la expresin del gene para esta enzima ms tardamente (72 horas despus del
desafo) (Guertler, 2010). Efectivamente, una disminucin de la capacidad de coagulacin es comnmente observado en camarones severamente infectados por WSSV (Sahul Hameed et al., 2006; Sarathi et al., 2007), lo que es compatible con una expresin disminuida de TGasa y/o CP. Estos resultados
sugieren que ambas protenas relacionadas al proceso de coagulacin deben ser importantes en la
defensa de los crustceos frente a las infecciones virales.
El conteo total de hemocitos circulantes (THC), de por s es uno de los inmunoparmetros ms
utilizados para expresar las condiciones de salud de los crustceos, as como ocurre con los hemogramas en los mamferos. La modulacin de la THC es utilizada en diferentes especies de camarones
sobre condiciones de estrs ambiental y/o isiolgico y durante las infecciones (Jiravanichpaisal et al.,
2006; Sarathi et al., 2007; Ai et al., 2009; Cantelli, 2009; Guertler, 2010). La THC puede aumentar o
disminuir sus valores, dependiendo del tipo y tiempo de exposicin a los agentes causantes del estrs.
Es comn que se observe una disminucin de la THC, fenmeno conocido por hemocitopenia, durante las primeras horas de un proceso infeccioso, que puede ser seguido por un aumento de hemocitos en fases ms tardas, pero solamente cuando se trata de infecciones moderadas. Esta disminucin
inicial se debe probablemente a una migracin y/o iniltracin de los hemocitos en los tejidos infectados o heridos, de una baja reposicin de las clulas por el tejido hematopoytico (Jiravanichpaisal
et al., 2006) y/o hasta muerte celular por apoptosis celular (Sarathi et al., 2007). La mayora de los
autores concuerda que un aumento en el THC debe proporcionar una mayor proteccin de los camarones contra infecciones, una vez que los hemocitos son los principales responsables por las diferentes reacciones inmunocelulares y son los sitios de expresin de las diferentes molculas de defensa.
Curiosamente, la alteracin en la proporcin de los tipos de hemocitos o DHC en camarones,
no es muy observada durante situaciones de estrs o durante infecciones (Rodrguez y Le Moullac,
2000; Vogan y Rowley, 2002). Sin embargo, en algunos casos fue referida una variacin en el porcentaje de los tipos celulares, en especial de hemocitos granulares (HGP y HGG) bajo condiciones
de estrs y/o infecciones. En L. vannamei por ejemplo, mantenidos en bajas salinidades (15 ppt) e
infectados con V. alginolyticus fueron registradas disminuciones signiicativas en el nmero de HHs
(79%) y HGs (65%) (Li et al., 2010). Tambin durante las infecciones virales, como por el WSSV, el
porcentaje de HGs puede alterarse ya en los primeros das/horas pos-infeccin (Maldonado et al.,
2003; Cantelli, 2009). Estos resultados no son sorprendentes, una vez que los HGs son las principales
clulas inmunocompetentes de los camarones, siendo selectivamente infectadas por el WSSV (Wang
et al., 2002), lo que explicara la cada de esta poblacin hemocitaria ya en los primeros das pos
infeccin.
La produccin de ROIs por los hemocitos de crustceos, medida principalmente por la produccin de aniones superxido (O2-), se ha constituido en uno de los inmunoparmetros ms utilizados para estimar el estado de inmunocompetencia de los camarones. La evaluacin de la produccin
283
intracelular de O2- por los hemocitos fagocitarios, es usualmente determinada por el mtodo de
reduccin del NBT, o por la tcnica de la quimioluminiscencia, utilizando componentes de la supericie de microorganismos, como LPS o -1,3-glucanos (laminarina, zymosan, curdlan) para estimulacin de los hemocitos in vitro. Este inmunoparmetro es tambin muy utilizado para evaluar el efecto
de sustancias inmunoestimulantes en camarones (Maldonado et al., 2003; Yeh et al., 2006; Fu et al.,
2007; Balasubramanian et al., 2008; Cantelli, 2009). La primera referencia de produccin de ROIs
en camarones fue publicada en P. monodon (Song y Hsieh, 1994), siendo realizados desde entonces
estudios con otras especies, cuyas metodologas fueron adaptadas. Existen sin embargo, diferencias
fundamentales entre los protocolos experimentales utilizados por los diferentes grupos que estudian
los crustceos, lo que resulta frecuentemente en resultados conlictivos y poco comparables. Como
ejemplo, se puede citar el trabajo de Muoz et al. (2000) en L. vannamei, que indica un porcentaje
muy bajo de estimulacin de los hemocitos por el zymosan (30%), luego de 2 horas de incubacin,
mientras que en nuestro laboratorio ocurre una alta estimulacin hemocitaria (80%) en la misma
especie, en apenas 15 minutos de incubacin con el mismo inductor (Guertler et al., 2010). En este
trabajo, nuestro grupo discute estas inconsistencias de metodologas y propone algunas estrategias
para uniformar la evaluacin de la produccin de ROIs en camarones.
Uno de los primeros estudios a evaluar la alteracin de los ROIs en camarones infectados por
bacterias fue realizado en L. vannamei desaiados con diferentes especies de Vibrio (Muoz et al.,
2000). Curiosamente, las especies V. alginolyticus y V. anguillarum fueron capaces de estimular la
produccin del anin superxido en camarn, mientras que el V. harveyi no caus ninguna alteracin
en la produccin de este radical lo que podra explicar su patogenicidad de esta bacteria para los
camarones.
Con relacin a las infecciones causadas por virus, existen relatos de disminucin signiicativa
en la produccin de ROIs en L. vannamei infectados con WSSV, as como en la actividad fagoctica,
y actividad de la SOD (Chang et al., 2003). En contraste, se observ un aumento de la produccin de
ROIs en camarones infectados con TSV (Song et al., 2003), WSSV y/o IHHNV (Sarathi et al., 2007;
Cantelli, 2009). Estos resultados parecen indicar que algunos parmetros hemato-inmunolgicos pueden alterarse de modo distinto conforme la infeccin viral.
La actividad antimicrobiana de la hemolinfa de los crustceos viene tambin siendo utilizada
como un inmunoparmetro durante las infecciones y otras situaciones de estrs (Song et al., 2003;
Costa et al., 2009). Variaciones en esta actividad en el plasma/suero de los camarones puede ser correlacionada con la presencia de infecciones o a una inmunodeplecin de los animales. En camarones
L. vannamei infectados con IMNV ocurre un aumento en la hemolinfa de la actividad antimicrobiana
contra la bacteria Gram positiva Micrococcus luteus, pero no contra la Gram negativa V. harveyi
(Costa et al., 2009). En contraste, actividad antimicrobiana contra V. harveyi aumenta en L. vannamei
infectados con TSV (Song et al., 2003).
En relacin a la capacidad aglutinante de la hemolinfa, es conocido el hecho de que las infecciones y otras situaciones de estrs, pueden resultar en la alteracin de los ttulos aglutinantes de la
hemolinfa de los crustceos que usualmente son determinados por la aglutinacin de eritrocitos de
mamferos. Como ejemplo, podemos citar el aumento de actividad aglutinante del plasma de P. monodon infectado por Vibrio vulniicus (Ratanapo y Chulavatnatol, 1992), de Macrobrachium rosenbergii y P. monodon infectados por WSSV (Pais et al., 2007) y L. vannamei por el virus de la mionecrosis
infecciosa (IMNV) (Costa et al., 2009). Por otro lado, en hembras adultas de L. vannamei, sometidas
al proceso de ablacin unilateral para la maduracin ovariana, ocurre una reduccin signiicativa del
ttulo aglutinante de su hemolinfa, probablemente en respuesta a esta prctica mutiladora (Maggioni
et al., 2004). Es importante resaltar que los niveles de la actividad aglutinante no varan siempre de
forma signiicativa en respuestas a las infecciones o situaciones de estrs; por ejemplo, en F. paulensis
284
no hubo alteracin de los ttulos aglutinantes en animales mantenidos a bajas salinidades o luego
de la ablacin (Perazzolo et al., 2002), as como en L. vannamei sometidos a una infeccin leve por
WSSV (Cantelli, 2009).
La concentracin de protenas totales del plasma de crustceos es tambin un parmetro que
puede auxiliar en la evaluacin del estado de salud de los camarones. A pesar de este parmetro poder ser afectado por factores ambientales y isiolgicos (Rosas et al., 2000; Snchez et al., 2001), por
infecciones y lesiones (Perazzolo et al., 2002; Vogan y Rowley, 2002) o por la administracin de PS
de algas (Yeh et al., 2010), el signiicado de esta variacin necesita ser todava mejor comprendido.
Debemos considerar que el pigmento respiratorio hemocianina representa cerca de 90-95% de las
protenas totales del plasma de crustceos (Rochu y Fine, 1978) y las luctuaciones en su concentracin se releja directamente en este tipo de parmetro hematolgico. A pesar de la hemocianina estar
relacionada con la inmunologa de crustceos, una vez que su clivaje pueda generar fragmentos con
funcin de PO o de pptido antimicrobiano, como se mencion anteriormente, la utilizacin de los
niveles de esta protena como inmunoparmetro debe ser todava mejor investigada.
La modulacin de la actividad de la PO representa tal vez el principal inmunoparmetro utilizado actualmente para evaluar el estado de salud de los camarones y sera imposible citar en este
captulo los innumerables trabajos que utilizan la actividad de esta enzima para expresar la condicin
inmunolgica de estos animales. Varios estudios demuestran la modulacin de la actividad de la PO
durante un estrs ambiental y/o isiolgico (Perazzolo et al., 2002; Hsu y Chen, 2007; Li et al., 2010),
o durante infecciones y lesiones (Mathew et al., 2007; Sarathi et al., 2007; Li y Chen, 2008; Li et al.,
2010).
Recientemente, la utilizacin de tcnicas de biologa molecular ha auxiliado de forma crucial
la comprensin de las respuestas inmunolgicas desencadenadas en crustceos y los mecanismos
relacionados con la interaccin patgeno-hospedero, todava poco conocidos. Estas tcnicas relacionan bsicamente la identiicacin y cuantiicacin de la expresin de diferentes molculas inmunolgicas e incluyen en especial: (1) la tcnica de la reaccin en cadena de la polimerasa en tiempo real,
(2) la SSH (del ingls, suppression subtractive hybridization), (3) la DD-PCR (del ingls, differential
display PCR) y (4) anlisis de cDNA por microarrays.
La infeccin por WSSV, por ejemplo, parece modular la expresin de varios genes en camarones, incluyendo protenas antimicrobianas y antivirales, transductores de seal intracelulares, componentes del sistema RNAi, factores de transcripcin, reguladores de apoptosis, proteasas e inhibidores
de proteasas, proPO, protenas de estrs oxidativo y molculas de adhesin celular (Rojtinnakorn et
al., 2002; Roux et al., 2002; Tonganunt et al., 2005; Ai et al., 2009; Liu et al., 2009b; Guertler 2010).
Infecciones bacterianas y por hongos tambin modulan la expresin gnica de molculas
inmunolgicas. Camarones P. monodon infectados con V. harveyi presentan un aumento en la expresin de lisozima y ALF y una disminucin de la expresin de serpinas (Somboonwiwat et al.,
2006). Por otro lado, en juveniles de L. vannamei inyectados con LPS, ocurre una disminucin de la
expresin de varios AMPs (PEN2-4 y crustinas), siendo esta disminucin dosis-dependiente (Okumura, 2007). Ya, en F. paulensis desaiado con el hongo ilamentoso Fusarium solani fue observado el
aumento signiicativo en la expresin del inhibidor de proteasa 2M (Perazzolo et al., 2011).
En un trabajo interesante, se analiz la expresin diferencial de genes en camarones L. vannamei seleccionados genticamente, en cuanto a su susceptibilidad y resistencia a la infeccin por
WSSV (Zhao et al., 2007). Varios genes fueron expresados diferencialmente en el hepatopncreas de
los camarones resistentes al WSSV. Hubo una mayor expresin constitutiva de hemocianina, lectinas CTLs, lisozimas, protenas apoptticas, enzimas oxidativas, protenas reguladoras de la ecdisis,
quitinasas, lacasas, catepsina L y zinco-proteinasas, en estos animales en relacin a los camarones
285
susceptibles. Es interesante notar que la infeccin experimental de animales resistentes a WSSV es

capaz de aumentar mucho ms la expresin de algunos de estos genes, relacionados directa o indirectamente a las respuestas inmunes.
En un estudio realizado por nuestro grupo, fueron evaluados los niveles de expresin de genes
relacionados al sistema inmune de camarones (L. vannamei) susceptibles a infecciones por el WSSV
y por el hongo F. solani (Gonalves et al., 2014). A travs de la tecnologa de PCR cuantitativa en
sistema de micro luidos (luidigm microluidics dynamic arrays), fueron caracterizadas las funciones
inmunolgicas ms afectadas en camarones durante infecciones por esos dos patgenos. Uno de los
resultados ms interesantes fue la identiicacin de irmas (signatures) de expresin gnicas comunes
a los dos patgenos, as como tambin de irmas (signatures) especicas para el virus y para el hongo.
Mientras que una infeccin letal de WSSV indujo la expresin de diferentes genes relacionados a la
respuesta antiviral, los niveles de expresin de diferentes genes del sistema inmune (especialmente
aquellos relacionados con las respuestas antimicrobianas) fueron drsticamente disminuidos en infecciones con el hongo F. solani (Gonalves et al., 2014).
Factores ambientales estresantes tambin pueden modular la expresin de ciertos genes inmunolgicos en camarones. La hipertermia parece inhibir la expresin de proPO y lisozima en juveniles
de P. monodon, lo que puede implicar una menor resistencia a las infecciones en aguas ms calientes
(de la Vega et al., 2007). La expresin de la lisozima en esta especie, tambin es inhibida cuando
los camarones son sometidos a estrs osmtico. Por otro lado, la hemocianina es sper-expresada
en estos animales con estrs osmtico y su expresin es disminuida en condiciones de hipertermia e
hipoxia (de la Vega et al., 2007).
Un punto particularmente interesante se reiere al uso de inmunoestimulantes y la expresin
de genes inmunolgicos en camarones. En un estudio con L. vannamei, Ji et al. (2009) mostraron
la modulacin de varios genes de defensa despus de la estimulacin de los animales con varios
PAMPs (laminarina, LPS y poly I:C). La estimulacin con laminarina (-1,3 glucanos), por ejemplo,
fue capaz de aumentar la expresin de una lectina y de las enzimas antioxidativas SOD y catalasa. Ya
la lisozima es modulada positivamente por los LPS de las bacterias Gram negativas, pero tambin, y
curiosamente, por el PAMP viral, poly I: C. Por otro lado, la expresin de la proPO en los hemocitos
disminuye drsticamente despus de la inyeccin de cualquiera de los PAMPs mencionados en los
camarones, lo que podra ser explicado por la disminucin de los HGs circulantes en funcin de la
presencia de los PAMPs (Ji et al., 2009). Recientemente, Yeh et al. (2010) mostraron que la inmersin
previa de L. vannamei en compuestos extrados del alga Gracillaria tenuistipitata tena la capacidad de
aumentar la resistencia de los animales a condiciones ambientales estresantes, como salinidad media
(25 ppt) y todava llevaba a un aumento signiicativo de la expresin de algunos genes inmunolgicos, como la LGBP, la peroxinectina y la 2M.
En resumen, el establecimiento de parmetros hemato-inmunolgicos como indicadores de
salud en crustceos y los anlisis moleculares de la expresin gnica de molculas inmunolgicas,
pueden proporcionar en conjunto, informaciones valiosas del estado de salud de los camarones
cultivados, as como de los mecanismos relacionados en la interaccin patgeno-hospedero. A pesar
de representar todava un campo relativamente nuevo, esta rea merece ser desarrollada y mejor
utilizada en la camaronicultura.
En los ltimos aos ha ocurrido un considerable progreso en el estudio del sistema inmune de
los crustceos, a pesar de no poder contar todava con un grupo de parmetros hemato-inmunolgicos seleccionados, realmente sensible y de respuesta inequvoca, capaces de expresar con precisin
las condiciones de salud de estos animales. Estudios de este tipo deberan ser fuertemente estimulados, en especial para crustceos de inters econmico como los camarones, que no pueden ser
vacunados. Conviene resaltar, que varios factores limitan una interpretacin segura e inequvoca de
286
los anlisis de los parmetros hemato-inmunolgicos en crustceos. Uno de los principales factores
se reiere a las enormes diferencias en los valores isiolgicos considerados normales o de referencia para una determinada especie. Estas diferencias estn posiblemente relacionadas al tipo de
ambiente en los que los animales se encuentran, la salinidad, temperatura, estado nutricional, edad,
maturacin sexual y estados de muda.
Por otro lado, no existe todava una estandarizacin de las tcnicas utilizadas para evaluar
estos parmetros en crustceos y esto tambin lleva a resultados muchas veces conlictivos lo que diiculta comparaciones dentro de la misma especie o entre especies. Sera de fundamental importancia,
buscar una padronizacin de estas tcnicas entre los diferentes grupos de investigacin que estudian
a los crustceos, para que se obtengan resultados ms homogneos y comparables.
6.8.
Conclusiones y Perspectivas
Como se ha mencionado varias veces en esta exposicin, el principal factor limitante que amenaza la sostenibilidad de la camaronicultura a nivel mundial, son las enfermedades y principalmente
las de origen viral. Se ha logrado mucho progreso ltimamente, en llegar a una mejor comprensin de
los mecanismos inmunolgicos en crustceos, destacndose la identiicacin de varias protenas de
reconocimiento de patrn (PRPs), la produccin de varias familias de antibiticos naturales (AMPs) y
los mecanismos de defensa antiviral, como la va RNAi. Falta todava aclarar muchos otros aspectos
importantes, como las bases moleculares de la sealizacin celular y de la transduccin de la seal,
mecanismos ya razonablemente aclarados en algunos artrpodos como Drosophila y limlidos, pero
todava poco conocidos en crustceos.
Las respuestas inmunolgicas contra infecciones bacterianas y hongos, ya son relativamente
bien comprendidas en crustceos, como la activacin del sistema proPO, el sistema de coagulacin y
la produccin de ROIs. Por otro lado, la reciente identiicacin de diferentes AMPs de amplio espectro antimicrobiano, como el ALF est abriendo nuevas perspectivas con relacin a los programas de
seleccin gentica (o transgnesis) de reproductores que expresan preferencialmente determinados tipos de AMPs, as como en el desarrollo de nuevos antibiticos para camaronicultura, capaces de evitar la induccin de resistencia en microorganismos y eliminar el riesgo de contaminacin ambiental.
El reciente descubrimiento del gene Dscam y su capacidad de generar una vasta diversidad
de isoformas por recombinacin somtica, mediante desafo con patgenos implica en la inesperada existencia de un sistema de reconocimiento inducido, especico y diversiicado en crustceos.
Todava no hay evidencias hasta el momento del papel de la Dscam en la memoria inmunolgica de
estos animales. En caso que esto sea verdadero, se abre la perspectiva de una vacunacin especica
y de largo plazo. Esto sera talvez uno de los principales aportes inmunolgicos para la prevencin y
control de infecciones en la camaronicultura.
En lo que se reiere a las respuestas antivirales, la deteccin reciente de un sistema RNAi y
de molculas semejantes funcionalmente a interferones de vertebrados en camarones, deber en un
futuro prximo orientar nuevas estrategias de terapia antiviral (basadas en dsDNA, por ejemplo) y en
un control ms eiciente de infecciones. Esfuerzos debern ser realizados en el sentido de desarrollar
tcnicas de administracin de dsRNA virales a los camarones (va oral o uso de sistema de vectores
plasmidiales o virales expresando hRNAs), que sean de bajo costo y compatibles con la camaronicultura, a in de estimular el sistema de RNAi de los camarones de forma continua. Por otro lado,
sera de gran inters conirmar si fragmentos gnicos virales se insertan de hecho en el genoma de los
camarones y resultan en la produccin de dsRNAs de secuencia especica, como se ha divulgado por
la hiptesis de acomodacin viral de Flegel. Sin embargo, la heredabilidad de esta condicin por la
progenie de los camarones permanece dudosa y constituye un punto frgil de esta teora.
287
Cabe nuevamente resaltar, que la ausencia de lneas celulares permanentes de crustceos,

limita seriamente la realizacin de muchos anlisis experimentales importantes, en especial los ensayos in vitro de infeccin y de actividad antiviral. Infelizmente, los esfuerzos para el desarrollo de
estas lneas celulares de crustceos, no han alcanzado todava el xito esperado. Se espera que en un
futuro prximo esta limitacin pueda ser superada y que lneas celulares de crustceos puedan venir
a sustituir deinitivamente a la de peces marinos, actualmente empleados en ensayos biolgicos de
crustceos, aun cuando no sean apropiadas.
La utilizacin de sustancias inmunoestimulantes para llegar a un estado de mayor inmunocompetencia en crustceos de inters econmico, sobresale como una herramienta valiosa, una vez
que estos animales no pueden ser vacunados. Sin embargo, el mecanismo de accin de estos compuestos es todava pobremente comprendido y su efecto no es siempre reproducible. Se espera que,
en un futuro prximo, la accin inmunolgica de estos compuestos sea mejor comprendida y que la
camaronicultura pueda disfrutar de una variedad de sustancias inmunoestimulantes realmente eicaces que puedan ser absorbidas por el intestino y ser desprovistas de efectos colaterales.
Como se ha mencionado, la evaluacin del estado de salud de los crustceos, a travs del
examen de su hemolinfa, no suele ofrecer resultados precisos y seguros, como ocurre con el examen
de sangre de mamferos. En estos ltimos, existe un patrn homogneo y coniable de normalidad,
que permite el establecimiento de valores de referencia para los diferentes parmetros hemato-inmunolgicos. Contrariamente, en los camarones, los valores de referencia de sus parmetros pueden ser
muy variables, hasta dentro de una misma poblacin, mismo sexo o mismo estado de desarrollo. Esto
diiculta sobremanera el establecimiento de ndices de referencia o de un patrn de normalidad en
crustceos, an en el caso de simples hemogramas, tan utilizados en mamferos. Como consecuencia, la comparacin de los ndices hemato-inmunolgicos de los crustceos saludables e infectados
y/o estresados, no presenta muchas veces signiicancia estadstica, lo que es frecuentemente observado en publicaciones.
La actual posibilidad de poder cuantiicar la expresin gnica de inmunomarcadores en crustceos a travs de PCR en tiempo real, puede ofrecer, a pesar de su alto costo, un cuadro ms claro y
coniable del estado de salud de los camarones durante la aparicin de brotes infecciosos o situaciones de estrs. Vale entretanto resaltar, que la cuantiicacin de la expresin de los genes inmunolgicos (transcritos gnicos bajo la forma de RNAm) no sustituye la evaluacin de los parmetros isiolgicos de la hemolinfa, una vez que la expresin de los genes (produccin de RNAm) no garantiza su
traduccin (total o parcial) en inmunoefectores.
Siendo as, es recomendable, si es posible, conjugar los anlisis moleculares (expresin gnica) y isiolgicas (parmetros inmunolgicos de la hemolinfa), a in de llegar a resultados ms coniables sobre la condicin de salud de los animales.
Desde un punto de vista aplicado, el conocimiento del sistema inmune de los crustceos
puede traer importantes subsidios y abrir nuevas perspectivas para: (1) desarrollar tcnicas de diagnstico coniables para diferentes patologas; (2) establecer marcadores inmunolgicos que indiquen
precozmente la presencia de infecciones o de condiciones ambientales adversas; (3) validar el uso
de terapias especicas para infecciones virales, bacterianas o para otras enfermedades; (4) desarrollar
compuestos inmuno-estimulantes, y (5) auxiliar programas de seleccin gentica de reproductores, a
travs de la identiicacin de animales ms resistentes a las infecciones.
Finalmente, vale resaltar, que no existe actualmente ningn genoma completo disponible de
camarones. Sera verdaderamente interesante que el camarn L. vannamei pueda ser seleccionado
como especie modelo para la secuenciacin genmica completa, al ver su importancia econmica
en la camaronicultura mundial.
288
6.9
Abbas, A.K.; Lichtman, A.H.; Pillai, S. (2007). Cellular and Molecular Immunology. 6. Saunders,
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306
Captulo 7 - Vigilancia epidemiolgica en Camaronicultura
Captulo 7
Vigilancia epidemiolgica en
Camaronicultura
307
308
Captulo 7
Vigilancia Epidemiolgica en Camaronicultura
Ignacio de Blas y Ana Muniesa

Unidad de Enfermedades Infecciosas y Epidemiologa, Laboratorio de Ictiopatologa
Departamento de Patologa Animal
Facultad de Veterinaria, Universidad de Zaragoza
Espaa
Introduccin
La camaronicultura supone una de las producciones acuticas ms importantes a nivel mundial, de forma que un foco de una enfermedad altamente contagiosa en una determinada regin
podra ocasionar graves perjuicios econmicos y sociales por las mortalidades registradas y por las
consecuencias que conllevara el cierre del comercio internacional (FAO, 2014).
La intensiicacin de la produccin camaronera, la generalizacin de los movimientos de animales y alimentos a nivel local, regional e internacional y el cambio climtico son factores que condicionan la diseminacin de las enfermedades conocidas y la aparicin de patologas emergentes. Por
lo tanto, el control de las enfermedades que afectan a la acuicultura es de vital importancia y es necesario contar con herramientas que permitan prevenir y controlar posibles brotes de enfermedad (OIE,
2013). La FAO en su publicacin Sistema de prevencin de emergencia de plagas y enfermedades
transfronterizas de los animales y de las plantas alerta sobre la importancia que tiene la prevencin
de las patologas en la acuicultura, ya que la falta de control de los movimientos comerciales de los
animales acuticos a nivel mundial est causando graves brotes de enfermedades, y una vez que se
introduce un agente patgeno y se establece en el ambiente natural es difcil tratarlo o erradicarlo.
De esta forma, el control de las enfermedades que afectan a las poblaciones acuticas se convierte en una tarea compleja que debe realizarse con criterios rigurosos, y en la que se debe optimizar
la deteccin precoz de las enfermedades de manera eiciente (Peeler et al., 2006). En un momento tan
delicado como en el que nos encontramos actualmente, es de vital importancia que se implementen
sistemas eicientes de vigilancia epidemiolgica.
La Organizacin Mundial de Sanidad Animal (OIE) es la responsable de deinir las directrices para establecer programas de control, erradicacin y vigilancia epidemiolgica de una serie de
enfermedades relevantes en acuicultura en lo que respecta a aspectos sanitarios y econmicos que
regulan el comercio internacional. Para ello publica y actualiza peridicamente dos documentos
fundamentales: el Cdigo Sanitario para los Animales Acuticos (OIE, 2013) y el Manual de Pruebas
de Diagnstico para los Animales Acuticos (OIE, 2014), ms conocidos como el Cdigo Acutico y
el Manual Acutico respectivamente.
La vigilancia epidemiolgica en acuicultura tiene dos enfoques fundamentales: la deteccin
de la enfermedad (como parte clave en los programas de deteccin precoz y de erradicacin) y el
clculo de prevalencia (para evaluar la eicacia de los programas de control). Estas actividades se
llevan a cabo frecuentemente en las explotaciones acucolas, pero desafortunadamente a nivel regional o nacional son menos habituales debido a los altos costes econmicos que conllevan y a su
complejidad.
309
7.1.
Generalidades sobre vigilancia epidemiolgica
La sanidad animal tiene una importancia creciente en la gestin de las producciones acucolas, por ello debemos conocer mejor la realidad epidemiolgica de las poblaciones acuticas, tanto
cultivadas como silvestres, ya que el estado sanitario de unas puede repercutir en el estado de las
otras (Subasinghe et al., 2004).
Hay que tener en cuenta que en la mayora de las investigaciones epidemiolgicas no resulta
eiciente ni viable trabajar con toda la poblacin por razones logsticas (duracin del estudio, disponibilidad de mano de obra, complejidad del estudio y/o difcil acceso a toda la informacin) y econmicas (elevado coste del estudio, mtodos de muestreo destructivos y/o baja rentabilidad esperada), y
en consecuencia es necesario trabajar con muestras representativas de la poblacin.
El otro factor que debemos considerar es la capacidad de diferenciar los animales sanos de
los enfermos. El diagnstico laboratorial ha evolucionado notablemente en los ltimos aos, pero no
podemos asumir que sean completamente iables, incluso en el caso de las pruebas tcnicamente
ms complejas y avanzadas.
Por tanto al disear cualquier estudio epidemiolgico deberemos llegar a un equilibrio entre
el valor terico deseable y el coste econmicamente y logsticamente viable.
Finalidad
Los estudios epidemiolgicos pueden tener mltiples objetivos: identiicar las enfermedades
presentes en la poblacin estudiada, determinar la extensin y localizacin de la enfermedad, establecer la importancia de las diferentes enfermedades que pueden afectar a una poblacin, priorizar
la utilizacin de los recursos disponibles para implementar programas de control y/o erradicacin,
disear planes de contingencia para hacer frente a la aparicin de brotes de enfermedad y disponer de informacin veraz y actualizada para comunicar a organismos internacionales como la OIE
(Klaucke et al., 1988).
A nivel oicial se habla frecuentemente de vigilancia epidemiolgica (surveillance), seguimiento o monitoreo (monitoring) y estudios epidemiolgicos observacionales (survey). En todos los casos
se trata de tcnicas de recogida sistemtica de informacin epidemiolgica que posteriormente es
analizada y utilizada para gestionar ms eicazmente las enfermedades estudiadas en una determinada poblacin (Cameron, 2002; Thrusield, 2005). As pues, se hace preciso deinir claramente cada
uno de estos trminos, aunque las bases metodolgicas expuestas posteriormente sean vlidas para
todos ellos y en todos los casos son sistemas basados en la recogida y anlisis sistemtico y continuado de informacin sanitaria en una poblacin, diieren en los objetivos planteados (Subasinghe
et al., 2004).
El objetivo especico de la vigilancia epidemiolgica es establecer que una poblacin est
libre de una determinada infeccin o enfermedad, o detectar la introduccin de una enfermedad
nueva u extica con el objetivo de establecer rpidamente medidas de control y erradicacin.
Los programas de seguimiento tienen como inalidad conocer el comportamiento y evolucin
de una determinada infeccin o enfermedad que est presente, mediante la descripcin y reporte de
brotes y la estimacin de la prevalencia y/o la incidencia.
Los estudios observacionales tienen objetivos ms amplios y buscan conocer mejor el comportamiento de la enfermedad y sus relaciones con otros factores dependientes del agente, del hospedador o del ambiente.
310
Segn los Centros de Control de Enfermedades de EE.UU. (CDC), un buen sistema de vigilancia epidemiolgica debera reunir las siguientes caractersticas: rapidez en la obtencin de resultados
(toma de datos y posterior procesado), sensibilidad y especiicidad, representatividad, aplicabilidad
de los resultados a la toma de decisiones, simplicidad y lexibilidad (Klaucke et al., 1988).
Clasiicacin de los sistemas de vigilancia epidemiolgica
Segn la intensidad de los esfuerzos realizados en la recogida de informacin podemos diferenciar entre sistemas de vigilancia pasiva y vigilancia activa (Cameron, 2002; Corsin et al., 2009).
En los sistemas de vigilancia pasiva los responsables de realizar el estudio no programan
ninguna actividad para tomar los datos, tan slo establecen mecanismos para que los productores y
otros agentes implicados (veterinarios, bilogos, tcnicos) informen de la existencia de brotes de
enfermedad o de la aparicin de sndromes y/o mortalidades anormales en las poblaciones estudiadas, tanto cultivadas como silvestres.
A pesar de que los sistemas de vigilancia pasiva presentan mltiples limitaciones derivadas de
la infranotiicacin de los brotes de enfermedad, proporcionan una importante informacin sanitaria
ya que permiten identiicar las enfermedades presentes en la poblacin (previa conirmacin laboratorial) y localizar los brotes de enfermedad para actuar frente a ellos. De esta forma, se convierten en
uno de los elementos bsicos de cualquier sistema de notiicacin de enfermedades de declaracin
obligatoria.
En el caso de la vigilancia activa los responsables del sistema llevan la iniciativa, disean y
ejecutan la recogida peridica de informacin mediante encuestas epidemiolgicas, inspecciones
sanitarias y/o toma de muestras para diagnstico laboratorial.
Cuando deseamos controlar una determinada enfermedad es necesario implementar este tipo
de sistemas de vigilancia recopilando las caractersticas de la poblacin estudiada (censos de explotaciones, movimientos de animales), as como la informacin sanitaria que deina correctamente
la situacin real de la enfermedad.
Por otra parte segn la especiicidad del estudio tambin pueden clasiicarse como sistemas de
vigilancia general o dirigida (Thrusield, 2005; Corsin et al., 2009).
Los sistemas de vigilancia general estudian de forma global cualquier enfermedad susceptible
de aparecer en la poblacin, con especial nfasis en las que iguran en las listas de la OIE, mientras
que en la vigilancia dirigida, los esfuerzos se centran en conocer el estatus de una infeccin en la
poblacin, por lo que es preciso disponer de tcnicas laboratoriales especicas y estandarizadas.
Normalmente la vigilancia pasiva suele ser general, mientras que la vigilancia activa suele ser
dirigida por lo que a veces se utilizan indistintamente ambas denominaciones como equivalentes
(pasiva-general y activa-dirigida).
Nuevos enfoques
La aplicacin de los sistemas de vigilancia clsicos en poblaciones acuticas presenta numerosas limitaciones relacionadas con la dinmica de poblaciones (movimientos comerciales y movimientos migratorios de animales silvestres), la heterogeneidad de las poblaciones (condiciones de
produccin, variabilidad en la susceptibilidad y relaciones ecolgicas complejas), la exposicin cambiante a un conjunto variable de factores de riesgo y la interaccin entre patgenos. Por esas razones,
se hace necesario mejorar los sistemas de vigilancia epidemiolgica y adaptarlos a cada situacin.
311
Entre los enfoques alternativos propuestos para aumentar la eiciencia, hay que destacar la vigilancia epidemiolgica basada en riesgo y la vigilancia sindrmica. Estos sistemas son complementarios a los sistemas existentes y no pretende sustituirlos, y buscan cubrir, en la medida de lo posible,
las lagunas que eventualmente quedan, tanto en vigilancia como en control.
Los sistemas de vigilancia basada en el riesgo (risk-based surveillance) tienen como inalidad
aumentar la vigilancia en aquellas explotaciones que tengan mayor riesgo sanitario.
Esta metodologa fue propuesta por la OIE y su implementacin ha supuesto un gran avance
en sanidad acucola. El anlisis de riesgo permite identiicar los patgenos que pueden amenazar a
una poblacin y analizar las probabilidades de que cada patgeno se introduzca en la poblacin,
se establezca y se disemine, as como sus consecuencias. En funcin del nivel de riesgo se disea
un programa de vigilancia especico para cada situacin priorizando la utilizacin de los recursos
disponibles en los eventos ms relevantes desde el punto de vista sanitario.
Segn el Cdigo Acutico (OIE, 2013), el anlisis del riesgo comprende varias fases. En primer
lugar se debe identiicar la amenaza o peligro (hazard), determinando las enfermedades que deben
ser objeto de vigilancia, as como sus consecuencias en la sanidad animal y la salud pblica. A continuacin, se proceder a la evaluacin del riesgo estimando el riesgo asociado a cada amenaza. Una
evaluacin cualitativa puede ser suiciente en la mayora de los casos, pero como mnimo se deben
identiicar y evaluar los distintos factores relacionados con los riesgos de entrada, establecimiento y
diseminacin del patgeno as como con las consecuencias biolgicas y econmicas derivadas de la
enfermedad. En funcin del nivel de riesgo estimado para cada enfermedad se propondrn medidas
de gestin del riesgo, distribuyndose los recursos disponibles de forma proporcional al riesgo de
cada enfermedad a vigilar, y se marcarn las pautas para seleccionar las poblaciones y los individuos
ms adecuados (con mayor riesgo). El ltimo elemento es la comunicacin del riesgo entre todos los
posibles involucrados.
En general este tipo de sistemas mejoran notablemente la relacin coste-beneicio, son muy
eicientes y son adecuados para la vigilancia de enfermedades emergentes y exticas. Sin embargo,
en muchas ocasiones no se dispone de la informacin suiciente, y la metodologa no est estandarizada ni validada.
Otra limitacin importante de los sistemas de vigilancia clsicos es la necesidad de diagnosticar numerosas muestras, lo que supone un alto coste econmico y requiere una importante infraestructura de laboratorios diagnsticos. Por este motivo, para determinadas enfermedades se han establecido redes de alerta sanitaria basadas en sistemas de vigilancia sindrmica (tambin denominados
de sistemas de deteccin temprana de eventos), donde se pretende identiicar la aparicin de los
patgenos, y predecir su evolucin, en funcin de variables relacionadas con el consumo de frmacos, las consultas sanitarias o la productividad. Un ejemplo de este tipo de vigilancia es el Sistema de
Alerta Epidemiolgico y de Manejo Acucola (SAEMA) desarrollado en Ecuador (Bayot et al., 2008).
Un punto importante de estos sistemas es que la deinicin del caso es deliberadamente inespecica con el in de aumentar la sensibilidad del sistema. Es decir, en la vigilancia sindrmica se
buscan sndromes en lugar de enfermedades diagnosticadas y conirmadas. Se basan en el registro
informatizado de datos que se analizan en tiempo real. Los sistemas informticos en los que se almacena la informacin detectan automticamente cambios o aberraciones en la informacin acumulada
que desencadenen una alerta del sistema.
Por tanto, una adecuada implementacin de estos sistemas permiten identiicar la aparicin
muy precoz de patgenos emergentes, predecir su evolucin y optimizar recursos (personal, diagnstico).
312
7.2.
Investigacin de brotes de enfermedad
La investigacin de un brote es un elemento fundamental de los programas de vigilancia pasiva, ya que ante cualquier notiicacin de mortalidades anmalas o crecimientos disminuidos se debe
proceder a la toma de muestras para conirmar la causa del brote y/o descartar que se trate de una
enfermedad de declaracin obligatoria.
Es importante uniicar criterios a la hora de notiicar un brote y se debe incluir informacin
relativa a tres cuestiones bsicas (tiempo, lugar y poblacin). Se deine caso, como cualquier individuo de la poblacin que presenta una enfermedad, alteracin del estado de salud o una determinada
caracterstica.
Segn el procedimiento utilizado para identiicar el caso, la deinicin puede variar, de manera que podemos basarnos en observaciones clnicas (aparicin de sntomas y lesiones), pruebas diagnsticas y/o anlisis laboratoriales, pudiendo establecer rangos de valores normales de referencia.
Con el in de estandarizar criterios a la hora de realizar la notiicacin oicial a los organismos
sanitarios correspondientes, CDC public una clasiicacin de los casos segn su deinicin (Wharton et al., 1990), de forma que se debe diferenciar entre:
Caso compatible clnicamente: cuando el individuo presenta sntomas y lesiones propias de la

enfermedad
Caso asociado epidemiolgicamente: cuando el individuo ha mantenido contacto con uno o

ms casos (actuales o pasados) o se ha expuesto a una fuente de infeccin, pudiendo existir
mecanismos de transmisin plausibles. Permiten establecer la cadena de transmisin de la enfermedad y la identiicacin del origen de la enfermedad
Caso conirmado por laboratorio: cuando se obtienen resultados positivos por uno o varios mtodos laboratoriales oicialmente reconocidos para esa enfermedad. Es necesario considerar la
iabilidad de la prueba diagnstica utilizada
Adems, a efectos de notiicacin oicial de enfermedades de declaracin obligatoria, y para

garantizar el correcto funcionamiento de los sistemas de alerta sanitaria, tambin se establecen otras
categoras:
Caso conirmado: cuando rene todos los criterios establecidos en la deinicin
Caso probable: rene bastantes criterios diagnsticos pero son insuicientes. Normalmente se
trata de individuos con fuertes evidencias clnicas y epidemiolgicas que estn pendientes de
una conirmacin laboratorial
Caso sospechoso: hace referencia al individuo que cumple alguno de los criterios y que precisa
de un estudio ms detallado para obtener ms informacin
Hay que tener en cuenta que a veces se utiliza el trmino caso para hacer referencia a la aparicin de la enfermedad por primera vez en un determinado lugar, lo cual genera confusin con las
deiniciones relativas a un individuo enfermo o infectado. Por esta razn, el trmino adecuado e internacionalmente aceptado, para referirse a la aparicin de la enfermedad (o infeccin) en un nuevo
lugar (sin casos previos) es brote epidmico (outbreak).
Mtodo de muestreo
Cuando las autoridades sanitarias son alertadas sobre un brote de enfermedad (manifestado
como un incremento anormal de la mortalidad o una disminucin del crecimiento) se debe proceder
a realizar una investigacin epidemiolgica para establecer su etiologa.
313
De forma general se recomienda realizar un muestreo no probabilstico seleccionando preferentemente camarones moribundos o enfermos, y descartando los animales muertos. La muestra
debe ser conservada en las condiciones adecuadas y remitirse a la mayor brevedad a los laboratorios
diagnsticos.
Tamao de muestra necesario
Normalmente se estima que en estas condiciones con 8-10 animales es suiciente para poder
identiicar la causa del problema, aunque no se descarta la toma de muestras adicionales en caso de
que sea necesario.
Mientras se esperan los resultados laboratoriales se implementarn medidas extraordinarias de
bioseguridad en la explotacin afectada y se restringirn completamente los movimientos de animales, tanto de entrada como de salida.
Fiabilidad diagnstica
Toda investigacin epidemiolgica requiere conocer el estado de salud o enfermedad (o de
infeccin) de los individuos de la poblacin estudiada. Tradicionalmente la diferenciacin de sanos
y enfermos se llevaba a cabo mediante la emisin de juicios clnicos basados en la observacin de
sntomas y lesiones (diagnstico clnico y anatomopatolgico); sin embargo, en los ltimos aos ha
evolucionado hacia el estudio de la infeccin, es decir, la deteccin de individuos infectados por un
determinado agente (diagnstico etiolgico). A pesar de ello se contina utilizando el trmino de
enfermedad, que la propia OIE deine como infeccin con o sin sintomatologa clnica (OIE, 2013).
Uno de los principales retos de la epidemiologa moderna es asumir que los protocolos diagnsticos son imperfectos, y que debe evaluarse su iabilidad. Los dos parmetros que determinan la
calidad del diagnstico son la sensibilidad y la especiicidad. La sensibilidad es la probabilidad de
detectar correctamente a un individuo enfermo (es decir, que no existan falsos negativos), y la especiicidad es la probabilidad de detectar correctamente a un individuo sano (es decir, que no existan
falsos positivos).
Los expertos en diagnstico de laboratorio tambin utilizan los trminos de sensibilidad y
especiicidad, pero haciendo referencia a conceptos distintos aunque relacionados. Normalmente
deinen sensibilidad de una prueba diagnstica, como el nmero de organismos patgenos que la
prueba es capaz de detectar por unidad de muestra, y en este caso sera ms apropiado hablar de
nivel umbral de deteccin. De la misma forma, deinen una prueba como especica cuando est
diseada para un patgeno concreto, y que se ha evaluado frente a patgenos similares obtenindose
resultados negativos. Efectivamente, esos ensayos dan idea de la especiicidad de la prueba diagnstica pero no cuantiican dicho valor, y adems no suelen ser los suicientemente exhaustivos para garantizar que la prueba sea completamente especica para el patgeno estudiado (de Blas et al., 2007).
Otro factor a considerar es que habitualmente slo se evala la iabilidad diagnstica de la tcnica laboratorial. Sin embargo, hay que valorar que se trata de un protocolo diagnstico en el que las
muestras para realizar la investigacin epidemiolgica son recogidas en condiciones de campo y es
necesario tener en cuenta cmo inluye el tipo de tejidos seleccionados, el transporte y conservacin
del material patolgico, as como la recepcin y posterior procesado del mismo.
Por otra parte, una adecuada prueba diagnstica debera reunir las siguientes propiedades:
reproductibilidad (que corresponde con el grado de repetibilidad y iabilidad de los resultados obtenidos al aplicarse en situaciones similares), validez (que indica la exactitud y precisin obtenida al aplicar la prueba), iabilidad (es la capacidad de la prueba para predecir correctamente la situacin del
314
individuo, es decir si el resultado se corresponde con el valor real) y aplicabilidad (es la posibilidad
de utilizar una prueba teniendo en cuenta una serie de criterios que permiten estimar su eicacia y
eiciencia como son la rapidez en la obtencin de resultados, la sencillez de ejecucin de la tcnica,
el coste econmico y la existencia de efectos secundarios) (Thrusield, 2005).
Est claro que es inevitable la utilizacin de pruebas diagnsticas en una investigacin epidemiolgica, y como hemos indicado presentan el inconveniente de que son imperfectas. En consecuencia, se deber evaluar la iabilidad de una determinada prueba y para ello necesitamos disponer
de una prueba de referencia con cual compararla, que denominamos prueba de oro (gold standard)
en la que todos los animales enfermos son diagnosticados como positivos, y todos los animales sanos
como negativos. Para el diagnstico de algunas enfermedades de los camarones se ha considerado el
diagnstico histopatolgico como prueba de oro, a pesar de que sus resultados dependen del tiempo
invertido en buscar determinadas lesiones (por ejemplo cuerpos de inclusin para WSSV) y que la
ausencia de esas lesiones no implica necesariamente la ausencia de infeccin. En los ltimos aos la
reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) se ha convertido en la prueba de oro para el diagnstico
de infeccin.
En algunos casos se puede reemplazar la prueba de oro, por un diseo experimental que nos
permita crear el grupo de animales enfermos mediante infeccin experimental, aplicando los postulados de Henle-Koch (mediante la exposicin de animales susceptibles a altas concentraciones de
un determinado patgeno en las condiciones ambientales adecuadas) y el grupo de animales sanos
utilizando camarones SPF (Speciic Pathogen Free).
Para validar o evaluar una determinada prueba diagnstica, construiremos una tabla de contingencia que resuma los resultados obtenidos al aplicar simultneamente sobre un grupo de camarones
la prueba de oro y la prueba a evaluar (Tabla 1) (Thrusield, 2005).
Tabla 1. Tabla de contingencia para la evaluacin de una prueba diagnstica.

Prueba de oro
Positivos (enfermos)
Negativos (sanos)
Positivos
Verdaderos positivos (a)
Falsos positivos (b)
Negativos
Falsos negativos (c)
Verdaderos negativos (d)
Prueba a evaluar
En esta tabla de contingencia observamos que existen coincidencias en el diagnstico (verdaderos positivos y verdaderos negativos), pero tambin pueden existir discrepancias (falsos positivos
y falsos negativos). Estos resultados incorrectos puede deberse tanto a errores en la eleccin y aplicacin de la prueba diagnstica, como en el mtodo de obtencin, seleccin y conservacin de la
muestra analizada (sobre todo en el caso de los falsos negativos) (de Blas et al., 2007).
A partir de la tabla de contingencia anteriormente descrita podemos calcular los dos parmetros principales que deinen la iabilidad de una prueba diagnstica: sensibilidad y especiicidad.
La sensibilidad es la probabilidad de detectar correctamente (diagnstico positivo) a un individuo enfermo y se puede calcular como el cociente entre el nmero de verdaderos positivos (enfermos
detectados por la prueba evaluada) y el nmero total de enfermos reales:
315
Es evidente que una prueba muy sensible dar pocos falsos negativos y por tanto tendr utilidad para descartar la presencia de enfermedad.
En el caso particular de la investigacin de brotes de enfermedad no suelen presentarse problemas de sensibilidad, ya que se suelen seleccionar camarones enfermos en fase aguda, cuyos tejidos presentan elevadas concentraciones del patgeno.
La especiicidad, es la probabilidad de detectar correctamente (diagnstico negativo) a un
individuo sano y se calcular como el cociente entre el nmero de verdaderos negativos (sanos detectados por la prueba evaluada) y el nmero total de sanos reales:
De forma anloga, una prueba muy especica tendr pocos falsos positivos y por eso permitir
conirmar la presencia de enfermedad.
En las poblaciones de animales acuticos, incluidos los camarones, es habitual encontrar coinfecciones por varios patgenos lo que puede afectar a la especiicidad del diagnstico.
A continuacin planteamos como ejemplo un experimento diseado para evaluar una nueva
prueba diagnstica frente a un determinado patgeno. En primer lugar se infectaron experimentalmente 100 camarones y tras un periodo de incubacin de 7 das se tomaron muestras de todos ellos
resultando 85 positivos y el resto negativos. Adicionalmente se procesaron 200 camarones SPF obteniendo 10 resultados positivos y 190 negativos (Tabla 2).
Tabla 2. Ejemplo de evaluacin de una prueba diagnstica.

Prueba de oro (Grupos experimentales)
Enfermos (infectados
experimentalmente)
Negativos
(SPF)
Positivos
85
10
Negativos
15
190
Prueba a evaluar
En este ejemplo la sensibilidad ser 85% (85 resultados positivos de 100 camarones enfermos)
y la especiicidad ser 95% (190 resultados negativos de 200 camarones sanos).
Para terminar este apartado, indicaremos que una estrategia frecuentemente utilizada en la
investigacin de las enfermedades, es la combinacin de varias pruebas diagnsticas con el objetivo
de incrementar la iabilidad del diagnstico inal. Se pueden aplicar dos mtodos para combinar los
diagnsticos: en serie y en paralelo (Thrusield, 2005; de Blas et al., 2007).
El diagnstico en serie tiene como objetivo reducir los falsos positivos con el consiguiente
aumento de la especiicidad, lo que permite conirmar la enfermedad (un resultado positivo ser una
evidencia muy concluyente de la presencia del patgeno ya que apenas existirn falsos positivos).
En esta estrategia, slo se consideran positivos aquellos casos que resultaron positivos por ambas
tcnicas y como negativos a todos los dems. Normalmente en este tipo de combinacin, las pruebas
diagnsticas se aplican de forma secuencial: inicialmente se utiliza la prueba diagnstica ms eco316
nmica y/o rpida, y en segundo lugar se aplica la otra prueba diagnstica (ms costosa o laboriosa)
slo a las muestras positivas. De esta forma, se logra una importante reduccin de la carga de trabajo
laboratorial y de los costes econmicos. Sin embargo, la sensibilidad se reducir.
En el diagnstico en paralelo se busca minimizar los falsos negativos de manera que se incremente la sensibilidad, y en consecuencia se pueda descartar la enfermedad (un resultado negativo
permitir airmar con gran seguridad que se trata de un animal sano, ya que el nmero de falsos
negativos ser muy bajo). En este caso, se clasiican como negativas todas las muestras que son negativas con las dos tcnicas diagnsticas, mientras que el resto se consideran positivas. A diferencia
de la combinacin en serie, la aplicacin secuencial no aporta ninguna ventaja en la combinacin
en paralelo, y es preferible aplicarlas de forma simultnea para reducir los tiempos de obtencin de
resultados. Dada la urgencia existente en el diagnstico de un brote de enfermedad, esta estrategia
sera de eleccin ya que se aumenta la sensibilidad y se obtienen resultados ms rpidamente, a pesar
de que la especiicidad empeora.
7.3.
Vigilancia epidemiolgica para detectar enfermedad
Objetivo
Todos los programas oiciales de sanidad acucola deben constar de un sistema de deteccin
precoz de enfermedades que proporcione las evidencias necesarias para la adecuada certiicacin
de los movimientos de animales y sus productos, la notiicacin de enfermedades a organismos internacionales y la veriicacin del estatus de libre de enfermedades. Adems, cualquier programa de
vigilancia epidemiolgica debe estar respaldado por un plan de contingencia para saber cmo actuar
en caso de emergencia ante un brote o la deteccin de un patgeno (Subasinghe et al., 2004).
Con el in de obtener el estatus de libre de enfermedad, y posteriormente mantenerlo, se debe
implementar un plan de vigilancia adecuado. Por una parte, se incluirn medidas de tipo pasivo general para detectar las enfermedades emergentes y exticas, as como, para monitorear los brotes de
las endmicas. Pero el componente fundamental en estos programas es la inclusin de acciones de
vigilancia activa y dirigida.
Mtodo de muestreo
El objetivo de este tipo de programas de vigilancia epidemiolgica es maximizar la posibilidad
de detectar la presencia de un determinado patgeno en los animales de la poblacin en estudio,
y su eicacia depender de que se aplique un mtodo de muestreo adecuado y se tome un nmero
suiciente de animales en las distintas poblaciones estudiadas (especialmente los nuevos lotes introducidos en la explotacin).
Los mtodos de muestreo que se deben utilizar sern de tipo no probabilstico, y se caracterizan porque cada individuo de la poblacin tiene una probabilidad desconocida y variable de formar
parte de la muestra, es decir, no hay intervencin del azar en el proceso de seleccin que puede
estar dirigido por el investigador (Cameron, 2002). Este tipo de muestreos son de ejecucin simple y
rpida, y no es preciso conocer el censo completo de los individuos de la poblacin. Sin embargo,
las muestras obtenidas no suelen ser representativas ya que estn fuertemente sesgadas y no permiten
describir adecuadamente la poblacin estudiada.
Siempre que sea posible, se aplicar un muestreo basado en criterios objetivos relacionados
con caractersticas intrnsecas del animal (especie, sexo, edad) o extrnsecas, tanto ambientales
(temperatura, salinidad, oxgeno disuelto) como zootcnicas (densidad de animales, intensiica317
cin, crecimiento). Adems, habr que tener en cuenta que podemos encontrar dos posibles situaciones en funcin de la presencia o no de camarones con sintomatologa clnica. En consecuencia,
primero deberemos seleccionar animales sospechosos con sntomas y lesiones externas compatibles
con la enfermedad estudiada, y en el caso de que no haya camarones sintomticos seleccionaremos
los animales en funcin de la presencia de factores de riesgo asociados con la infeccin por el patgeno (ejemplos: muestrear cuando la temperatura del agua sea inferior a 28C para detectar WSSV o
seleccionar camarones de peso inferior a 3 g para la deteccin del Vibrio parahaemolyticus causante
del EMS/AHPND).
Otra prctica habitual es establecer cuotas de muestreo donde se selecciona un nmero determinado de individuos perteneciente a unos estratos preestablecidos. Por ejemplo, cuando una
muestra de 150 camarones se selecciona sin tener en cuenta la poblacin de cada estanque y se
toman 30 animales de 5 estanques diferentes. En este caso, se toma el mismo nmero de animales
en un estanque con 100.000 individuos que en uno con 300.000 individuos, por lo que la muestra
no es homognea.
Adems de los mtodos de muestreo basado en criterios objetivos y por cuotas, existen otros
mtodos no probabilsticos habitualmente utilizados en camaronicultura que estn contraindicados
por distintos motivos. Uno de ellos es el muestreo de conveniencia en el que el investigador selecciona a los individuos ms accesibles, esto es lo que ocurre cuando se obtienen todos los camarones
mediante el lanzamiento de una atarraya en un mismo punto del estanque ms accesible. Otro mtodo es el muestreo de voluntarios, donde los individuos investigados deciden voluntariamente formar
parte del estudio. Un ejemplo clsico de este tipo de muestreos ocurre cuando se ofrece alimento a
los animales y se captura a los primeros que se acercan a comer. De esta forma aumentan las posibilidades de seleccionar animales sanos, que es justo el objetivo contrario al deseado.
El objetivo de este tipo de estudios es detectar la presencia de al menos un animal enfermo (o
infectado) en una poblacin donde se sospeche que una enfermedad est presente con una determinada prevalencia. En funcin de la prevalencia se puede calcular el nmero de animales enfermos
esperados en esa poblacin, como el producto de la prevalencia y el tamao de la poblacin. El
tamao de muestra estar directamente relacionado con el nmero esperado de enfermos, de forma
que, cuantos ms enfermos haya en la poblacin, ms probable es que seleccionemos a uno de ellos,
y por lo tanto disminuir el tamao de muestra necesario.
El clculo del tamao de la muestra necesario se realiza utilizando la siguiente frmula (Cannon, 2001) donde n es el tamao de la muestra necesario, NC es el nivel de conianza (habitualmente
se establece en 95%, lo que equivale a un error igual a 0.05), S es la sensibilidad de la prueba diagnstica, d es el nmero esperado de animales enfermos o infectados (se puede calcular multiplicando
la mnima prevalencia esperada y el tamao de la poblacin) y N es el tamao de la poblacin. El
resultado obtenido deber siempre redondearse al alza.
Planteamos un primer ejemplo en el que se desea determinar, con un 95% de nivel de conianza, si un tanque con 10.000 postlarvas est infectado con WSSV. Se establece una prevalencia mnima del 2% (asumimos que el virus est presente en al menos el 2% de los animales de la poblacin,
es decir, d=200). Si sustituimos esos datos en la frmula, y asumiendo que el diagnstico es perfecto
(S=1), ser necesario tomar una muestra mnima de 148 postlarvas.
318
Con el in de adquirir el estatus de explotacin autorizada (libre de determinadas enfermedades) la OIE establece que para detectar la enfermedad hay que tomar una muestra adecuada dos
veces al ao en funcin de la prevalencia esperada. En poblaciones acuticas (con miles de animales)
suele asumirse una prevalencia mnima del 2% y con un 95% de conianza por lo que se recomienda
una muestra de 150 animales (que se corresponde aproximadamente con los 148 animales calculados en el ejemplo anterior). Como resultado de aplicar esta frmula a prevalencias de 5 y 10%, se
obtienen los tamaos de muestra de 60 y 30 animales respectivamente, que con frecuencia son los
utilizados en estudios epidemiolgicos.
Es importante ser consciente de que al trabajar con poblaciones grandes el tamao de la
muestra se estabiliza de manera que la fraccin de muestreo se va reduciendo drsticamente. Esta
caracterstica es muy interesante cuando trabajamos con piscinas de engorde, pero sin embargo, se
convierte en un gran problema cuando trabajamos con reproductores ya que suelen ser grupos poco
numerosos donde la fraccin de muestreo puede alcanzar valores superiores al 50%. A menudo, esto
es inviable debido al elevado valor econmico de estos animales y a que los diagnsticos utilizados
suelen ser de tipo destructivo (requieren el sacriicio de los camarones), por eso lo ms adecuado es
tratar de detectar la enfermedad en la descendencia, ya que en las especies acuticas se caracteriza
por ser muy numerosa.
Fiabilidad diagnstica
Otro factor importante que rara vez se tiene en cuenta al disear el muestreo de los programas
de vigilancia epidemiolgica es la iabilidad diagnstica, especialmente la falta de sensibilidad. Sirva
como ejemplo la repercusin que tendra sobre el tamao muestral en el caso anterior, la utilizacin
de una prueba diagnstica con una sensibilidad del 90% donde el tamao de muestra aumentara a
164 (un incremento del 11%).
Tal y como hemos comentado anteriormente la iabilidad de la prueba diagnstica es un
factor determinante, ya que el objetivo es la deteccin del patgeno. En este caso seleccionaremos
la prueba que nos ofrezca el valor ms alto de sensibilidad para minimizar el nmero de falsos negativos, y as evitar en lo posible el riesgo sanitario que conlleva no detectar un animal infectado en
la poblacin estudiada.
Hay que tener en cuenta que determinadas prcticas diagnsticas inluyen en los resultados
inales obtenidos, por ello, hay que insistir que se debe conocer las caractersticas del protocolo
diagnstico completo (no slo de la tcnica diagnstica llevada a cabo en el laboratorio) y valorar
determinadas prcticas generalizadas en el diagnstico, como son la utilizacin de muestras combinadas (pools).
La utilizacin de pools se ha convertido en una prctica habitual en el diagnstico de enfermedades de camarones y otras especies acuticas, e incluso est recomendada por la OIE (2014). Esta
estrategia permite aumentar el nmero de muestras procesadas para detectar un patgeno, disminuyendo notablemente el tiempo de procesado y los costes econmicos.
Sin embargo, el principal problema de utilizar muestras diagnsticas constituidas por tejido
procedente de ms de un animal, es la aparicin del efecto dilucin que puede disminuir la sensibilidad de la prueba original cuando se aplica de forma individual. Este efecto puede manifestarse
cuando se trabaja con bajas prevalencias de enfermedad, cargas de patgeno reducidas (por ejemplo,
al tratarse de portadores asintomticos) o excesivo nmero de muestras en un mismo pool (Muniesa
et al., 2014).
319
En este contexto las tcnicas de diagnstico molecular contribuyen a identiicar los patgenos de forma rpida y iable, incluso cuando hay muy pocas copias del genoma del patgeno en
una muestra. A pesar del excelente nivel umbral de deteccin, hay que ser consciente de la posible
prdida de sensibilidad debida al efecto dilucin. En la Figura 1 se aprecia este efecto, y cmo para
una prueba diagnstica con un nivel de deteccin de 104 organismos/g pueden generarse falsos
negativos al reducirse la concentracin de patgenos por debajo de dicho nivel de deteccin, y en
consecuencia disminuir la sensibilidad (Corsin & de Blas, 2010). En el primer caso el resultado del
pool sera positivo, pero en el segundo caso sera negativo al ser la concentracin inal inferior a nivel
de deteccin.
105
= 104
104
= 103
Figura 1. Efecto de la dilucin en la sensibilidad de una prueba diagnstica en relacin con el nivel
de deteccin.
Clculo de resultados
En el caso de que todas las muestras de una poblacin sean negativas, no se puede airmar que
la enfermedad est ausente en dicha poblacin. Se deber calcular la mxima prevalencia aparente
posible a partir del mximo nmero de positivos (D) que pueden quedar en una poblacin, utilizando
la siguiente frmula (Thrusield, 2005):
En esta ecuacin n corresponde con el tamao de la muestra seleccionado (todas ellas presentando resultados negativos), NC es el nivel de conianza y N es el tamao de la poblacin.
Una vez obtenido el mximo nmero de positivos, lo dividiremos por el tamao de la poblacin para conocer la prevalencia mxima posible (Pmax). Como comentaremos en el siguiente apartado se trata de una prevalencia aparente, y a partir de la misma se podra estimar la prevalencia real
conociendo la sensibilidad y especiicidad de la prueba diagnstica:
Por ejemplo, en un determinado estanque se han analizado tan slo 20 camarones, ya que por
razones econmicas no se ha podido realizar ms pruebas diagnsticas. En todos los diagnsticos
se han obtenido resultados negativos de forma que al sustituir en la frmula anterior, encontramos
que con un 95% de conianza la prevalencia mxima posible podra ser todava de 13,9%, lo cual
es insuiciente para poder airmar que el estanque est libre de enfermedad (a pesar de que los 20
camarones analizados eran negativos).
320
7.4.
Vigilancia epidemiolgica para estimar prevalencia
Objetivo
Una vez que un patgeno es detectado, se requiere establecer un programa de vigilancia especico para deinir la distribucin espacial, la evolucin temporal y la magnitud del problema, con
el in de evaluar la viabilidad de las medidas de control disponibles y, donde se considere oportuno,
demostrar el xito de los programas de control y erradicacin (Subasinghe et al., 2004).
En el caso anterior, la inalidad de la vigilancia epidemiolgica era detectar la enfermedad y
los resultados posibles eran slo dos: presencia o ausencia. Sin embargo, en los sistemas de monitoreo o seguimiento, el objetivo es describir la situacin sanitaria de una poblacin mediante el clculo
de la probabilidad de que los individuos estn infectados.
Mtodo de muestreo
Cuando se desea conocer la prevalencia de una determinada enfermedad en una poblacin es
fundamental que la muestra sea representativa para que los resultados de la misma sean extrapolables
a toda la poblacin. Esta representatividad implica que la muestra cumpla dos requisitos: homogeneidad y aleatoriedad.
Una muestra se considera homognea con la poblacin cuando las caractersticas de los individuos de la muestra no diieren de las que tiene la poblacin. Es decir, si en nuestra poblacin la
distribucin por sexos es 50% machos y 50% hembras, se esperara encontrar una proporcin similar
de machos y hembras en la muestra obtenida. El otro requisito es que los individuos tienen que ser
seleccionados al azar, y por tanto todos los individuos de la poblacin tendrn igual probabilidad de
formar parte de la muestra.
Por lo tanto, para obtener una muestra representativa tendremos que seleccionar un nmero
suiciente de unidades (dependiendo del objetivo del estudio) con un mtodo de muestreo probabilstico.
Bsicamente hay dos mtodos probabilsticos: el muestreo simple o aleatorio puro y el muestreo sistemtico (Martin et al., 1990).
El muestreo simple consiste en la seleccin de las unidades de una poblacin utilizando un
sistema de loteras (o tablas de nmero aleatorios) aplicado sobre el listado completo de las unidades
de la poblacin (censo). Este mtodo es difcil de aplicar en grandes poblaciones de animales ya que
supone tener identiicados a priori e inequvocamente a todos los individuos (slo ocurrira en algunos casos con los reproductores), implica elevados costes econmicos en la obtencin de la muestra
(sobre todo con poblaciones muy dispersas) y no suele representar adecuadamente a los estratos
minoritarios de la poblacin. Sin embargo, en camaronicultura este mtodo sera el de eleccin para
seleccionar estanques en una explotacin cuando la unidad muestral sea el estanque, por ejemplo
cuando se desea conocer la proporcin de estanques infectados.
Como alternativa se puede utilizar el muestreo sistemtico que se considera un mtodo probabilstico aunque no es propiamente un muestreo aleatorio puro. Se aplica cuando no se dispone
de sistema de identiicacin individual ni listados completos de la poblacin, pero sin embargo, se
pueden ordenar los individuos (ejemplo, el orden en el que son capturados los camarones) y aplicar
un patrn peridico para seleccionar los individuos de la muestra.
El procedimiento a seguir es muy simple, en primer lugar se ordenan todos los individuos de
la poblacin (N) y se determina el tamao de muestra necesario (n). A continuacin se calcula el
321
intervalo de seleccin, dividiendo el nmero total de individuos en la poblacin por el tamao de

la muestra (N/n) y se ija el punto de inicio del muestreo eligiendo al azar un nmero comprendido
entre el 1 y el intervalo de seleccin (redondeando al entero inferior). Finalmente se procede a seleccionar el individuo inicial y se recorre la lista ordenada de individuos seleccionando un nuevo
individuo como parte de la muestra, cada N/n individuos, hasta completar la muestra.
En poblaciones con muchos individuos se puede aplicar este mtodo aprovechando determinadas prcticas de manejo (transferencias, pescas). Durante una transferencia de camarones se
puede realizar un muestreo sistemtico en funcin de la duracin del procedimiento y estableciendo
intervalos de muestreo de igual duracin (por ejemplo, 1 camarn cada 15 segundos).
A partir de estos dos mtodos bsicos se pueden disear otras estrategias de muestreo ms
complejas que pueden implicar un aumento del tamao de muestra.
Una de las variantes ms utilizadas es el muestreo estratiicado, en que se necesita conocer
a priori como se distribuyen los individuos segn los estratos utilizados (tamao, sexo, especie)
que deben ser mutuamente excluyentes (un individuo no puede pertenecer a dos estratos a la vez) y
exhaustivos (todos los individuos debe pertenecer obligatoriamente a un estrato). La muestra se distribuir proporcionalmente entre los distintos estratos segn el tamao de los estratos poblacionales, lo
que contribuye a mejorar la homogeneidad de la muestra (y por tanto garantizar su representatividad).
Este mtodo no se debe confundir con el muestreo por cuotas (no probabilstico) donde la homogeneidad de la muestra no se cumple.
Por ejemplo, si queremos conocer la proporcin de estanques infectados en una regin donde
sabemos que hay un 60% de estanques de produccin intensiva, 30% semiextensivos y 10% extensivos, y el tamao de muestra calculado es de 200 estanques, usando el mtodo estratiicado deberemos seleccionar al azar 120 intensivos, 60 semiextensivos y 20 extensivos.
Otra alternativa, es el mtodo de muestreo multietpico donde la poblacin est organizada
en distintas subpoblaciones (por ejemplo, una regin est dividida en zonas, en las que hay varias
camaroneras, que a su vez estn formadas por estanques). En este caso se seleccionarn al azar varias
zonas, dentro de estas comarcas se escoge un nmero variable de camaroneras, y de forma anloga
en cada camaronera se muestrean determinados estanques. Este mtodo permite reducir considerablemente los costes del estudio, especialmente cuando se trabaja con poblaciones muy dispersas. Sin
embargo, tiene el inconveniente de que garantizar la representatividad de la muestra es complicado,
ya que la probabilidad de seleccionar una determinada zona depender del nmero de estanques
que haya, y de igual forma al seleccionar las camaroneras.
El otro elemento importante al disear un muestreo para conocer la prevalencia de enfermedad es el tamao de muestra necesario. Tradicionalmente se utiliza una frmula derivada de la utilizada para estimar la media de una variable cuantitativa con distribucin normal (Lwanga & Lemeshow,
1991) donde el tamao de muestra necesario (n) se calcula en funcin del nivel de conianza deseado
(Z/2 que tiene un valor de 1,96 para un 95% de conianza), la prevalencia esperada (P) y el error absoluto deseado o precisin (E). En este caso tambin se debe redondear al alza el resultado obtenido.
322
Como se puede deducir de esta frmula el tamao mximo de la muestra se obtendr cuando
trabajemos con una proporcin de 0.5 (50%). Adems observamos que los tamaos de muestra para
proporciones complementarias (por ejemplo, 0.3 y 0.7) sern los mismos.
De esta forma, para calcular el nmero de camarones que hay que tomar de un estanque para
conocer la prevalencia de IHHNV (con una precisin de 5% y un nivel de conianza del 95%)
primero debemos establecer la prevalencia esperada de la enfermedad. Si sta es desconocida utilizaremos el valor del 50% (que ofrece el mximo tamao de muestra) obtendremos un tamao de
muestra de 385 camarones.
Si en nuestro ejemplo tenemos resultados preliminares que indican que esta prevalencia se
sita entre 15 y 28%, tomaremos el valor del intervalo ms prximo a 50% (es decir, 28%) de forma
que el tamao de muestra se reduce a 310.
El problema aparece cuando las prevalencias esperadas son muy bajas o muy altas, ya que sta
frmula asume que el intervalo de conianza se basa en una distribucin normal, cuando realmente
se debera calcular en funcin de una distribucin binomial. Vallejo et al. (2013) proponen un mtodo alternativo de clculo del tamao de muestra basado en el mtodo Score de Wilson (1927) que
corrige la subestimacin que se produce. Para estimar la prevalencia de la poblacin, asumiendo una
prevalencia esperada del 10%, una precisin del 5% y un nivel de conianza del 95%, el tamao de
muestra es de 139 individuos con el mtodo tradicional, cuando realmente se deberan seleccionar
como mnimo 189 individuos.
Finalmente hay que indicar que cuando se trabaja con poblaciones pequeas, puede ser que
el tamao de muestra calculado sea superior al tamao de la poblacin, ya que las frmulas asumen
muestreo con reemplazo, es decir, un mismo individuo puede ser seleccionado ms de una vez en un
mismo estudio. Con el in de ajustar el tamao de muestra (na) en un muestreo sin reemplazo (que es
el que habitualmente se utiliza ya que ningn individuo es seleccionado ms de una vez) se realiza
un ajuste siempre que la fraccin de muestreo (n/N) sea superior al 5% (Daniel, 2000):
Clculo de resultados
La presencia de enfermedades en una poblacin pueden estimarse transversalmente (generalmente referida a un momento concreto del tiempo) o longitudinalmente (durante un periodo de
tiempo deinido).
Las medidas transversales de la enfermedad que indican su importancia en una poblacin son
la morbilidad, la mortalidad y la letalidad, y nos proporcionan una valiosa informacin de carcter
pronstico (de Blas et al., 2007).
La morbilidad (tambin denominada prevalencia puntual) es la probabilidad de que los individuos de una poblacin sean considerados un caso (estar enfermos o infectados) en un momento o
periodo de tiempo determinado. Se calcula dividiendo el nmero de casos por el nmero de individuos en riesgo de convertirse en caso en ese momento o periodo de tiempo:
323
La morbilidad nos da una idea aproximada de la capacidad de propagacin de la enfermedad,

aunque existen otros parmetros ms tiles para este in, como los obtenidos en estudios longitudinales (incidencias).
La mortalidad es la probabilidad de que los individuos de la poblacin mueran a consecuencia de una determinada enfermedad en un momento o periodo de tiempo. Se calcula como el cociente entre el nmero de muertes causadas por la enfermedad en el periodo de tiempo estudiado y
la poblacin en riesgo de morir por esa enfermedad en ese mismo periodo:
La mortalidad resume el impacto de la enfermedad en la poblacin y tiene menor valor pronstico individual que la morbilidad y la letalidad, aunque es de gran importancia para evaluar las
repercusiones econmicas de la enfermedad.
La letalidad es la probabilidad de que un caso muera en un periodo de tiempo determinado,
y es el cociente entre el nmero de muertos por la enfermedad y el nmero de individuos enfermos
en un periodo de tiempo establecido:
La letalidad suele ser un parmetro constante para cada enfermedad, pudindose detectar
diferencias entre las letalidades especicas, es decir, segn caractersticas intrnsecas (edad, sexo)
o extrnsecas al individuo (estacin del ao, patogenicidad de la cepa...). Obviamente las enfermedades con letalidad alta tienen un pronstico peor.
Pongamos como ejemplo, un estanque con 20.000 camarones, donde a lo largo de una semana se han detectado 2.000 enfermos, de los cuales han muerto 500. En este caso estamos ante una
enfermedad que cursa con una morbilidad semanal del 10% (= 2.000/20.000) una letalidad del 25%
semanal (=500/2.000) y una mortalidad semanal del 2,5% (=500/20.000).
Existe una relacin entre estos tres parmetros, de forma que:
En los estudios longitudinales de enfermedad se puede calcular tanto la prevalencia como la

incidencia. La prevalencia equivale al concepto de morbilidad, pero contabilizando los individuos
enfermos al inicio del estudio y los nuevos enfermos a lo largo del periodo estudiado, y dividiendo
por la poblacin en riesgo promedio (ya que deben tenerse en cuenta las variaciones de la poblacin
a lo largo del tiempo).
La incidencia describe la velocidad con que la enfermedad se propaga en la poblacin e
indica el lujo de individuos sanos a enfermos. Se calcula como el nmero de nuevos casos de enfermedad que se presentan en una poblacin durante un periodo determinado de tiempo dividido por
la poblacin susceptible de padecer la enfermedad. Para determinar la incidencia, se deben realizar
siempre dos mediciones en la poblacin a estudiar, una medicin al principio del estudio, en la que
se determinarn los animales sanos, y una segunda durante el periodo de estudio o al inal del mismo,
324
que determinar cuantos animales inicialmente sanos han adquirido la enfermedad (nuevos casos).
En sanidad acucola, casi nunca se trabaja a nivel individual con incidencias, aunque su utilizacin
podra ser muy interesante para estudiar la aparicin de brotes considerando la piscina camaronera
como unidad de estudio.
En este punto hay que hacer una consideracin importante, como regla general los datos obtenidos a partir de estudios dirigidos a la deteccin de enfermedad (diagnosticar al menos un animal
positivo) no pueden utilizarse para estimar la proporcin de enfermedad (conocer el porcentaje de
animales enfermos), ya que el tamao de la muestra suele ser insuiciente y se utilizan mtodos de
muestreo no probabilsticos. Sin embargo, los estudios para conocer la prevalencia son vlidos para
detectar la enfermedad, aunque son menos eicientes.
Otro aspecto importante a tener en cuenta es que las pruebas diagnsticas utilizadas son imperfectas. De forma que estamos calculando una prevalencia aparente, y lo que queramos saber es
la prevalencia real (Thrusield, 2005).
La prevalencia aparente, es el porcentaje de resultados positivos, o dicho de otra forma, la
probabilidad de ser diagnosticado positivo. En ocasiones se le denomina prevalencia estimada y se
calcula dividiendo nmero total de individuos positivos por el nmero total de individuos.
La prevalencia real o verdadera, mide la frecuencia de aparicin de una enfermedad en una

poblacin y equivale al porcentaje de enfermos en la poblacin (prevalencia detectada por la prueba
de oro) o probabilidad de estar enfermo, y su clculo es el cociente entre nmero total de enfermos y
el nmero total de individuos. Tambin recibe el nombre de prevalencia terica.
La prevalencia aparente, normalmente se calcula a partir de los resultados diagnsticos proporcionados por el laboratorio, y a partir de ella es posible estimar la prevalencia real utilizando los
valores de sensibilidad y especiicidad (Thrusield, 2005):
En un estudio se han tomado 50 muestras para diagnosticar la infeccin por WSSV en un

estanque, y las hemos remitido a un laboratorio donde disponen de dos tcnicas diagnsticas (A y
B), con las caractersticas que se muestran en la Tabla 3. En el caso de la prueba A se obtienen 37
positivos mientras que con la prueba B son 27 positivos. Cmo se explica esta discordancia en los
resultados?
La razn es que ninguna de las dos pruebas diagnsticas es perfecta y lo que hemos calculado
es la prevalencia aparente, por lo que se debe calcular la prevalencia real antes de llegar a ninguna
conclusin. Efectivamente tras realizar los clculos oportunos se observa que la prevalencia real es
del 10% en ambos casos, y que al utilizar pruebas diagnsticas que no son completamente iables
estbamos sobreestimando la infeccin por WSSV en el estanque estudiado.
325
Tabla 3. Prevalencias correspondientes a dos pruebas diagnsticas.

Prueba
Prevalencia aparente
Sensibilidad
Especiicidad
Prevalencia real
18,5%
95%
90%
10%
13,5%
90%
95%
10%
Desafortunadamente apenas hay informacin disponible sobre la sensibilidad y especiicidad

de los protocolos utilizados para diagnosticar las enfermedades de los camarones.
Ya hemos establecido previamente que la medicin de la enfermedad en una poblacin suele
realizarse sobre una muestra representativa de la misma, de forma que la estimacin resultante se
pueda extrapolar a la poblacin. En funcin de los datos muestrales se pueden calcular unos mrgenes de error y establecer un intervalo de conianza deinido por unos lmites (inferior y superior) entre
los que se encontrar el valor real de la medida (por ejemplo, la prevalencia) con una probabilidad
deinida por el nivel de conianza (generalmente el 95%) (Daniel, 2000; de Blas et al., 2007).
Las medidas de enfermedad descritas son proporciones y de forma genrica se puede calcular
el intervalo de conianza en funcin de la proporcin calculada a partir de la muestra (p), el tamao
de la muestra (n) y el nivel de conianza (Z/2) (Daniel, 2000):
Sin embargo, esta frmula est basada en la distribucin normal y tiende a sobrestimar el tamao de muestra cuando la proporcin esperada est prxima al 50% (0,5) y a subestimarlo cuando
los valores estn prximos al 0 y al 100%. Por eso, es ms adecuado calcular los intervalos de conianza asumiendo una distribucin binomial mediante el mtodo Score de Wilson (1927):
Al estimar la prevalencia aparente de enfermedad en una poblacin a partir de una muestra

de 149 animales donde 3 han resultado positivos podremos comprobar la diferencia en los resultados
obtenidos por ambos mtodos. La prevalencia muestral ser del 2,01% y si estimamos la prevalencia
poblacional con el mtodo clsico se encontrara entre -0,24 y 4,27% con un 95% de probabilidad
(obsrvese que pueden obtenerse valores negativos). Sin embargo, con el mtodo Score de Wilson
estimamos que la prevalencia poblacional estara entre 0,69 y 5,75%.
Ya comentamos anteriormente que la utilizacin de pools est limitada por el efecto de dilucin, y puede alterar notablemente la sensibilidad de la prueba diagnstica. Lo habitual al diagnosticar las enfermedades vricas de los camarones es que se recomiende la utilizacin de pools de 5
10 animales (OIE, 2014), aunque en algunas pruebas basadas en la PCR se llega a recomendar la
utilizacin de muestras de hasta 50 postlarvas por pool.
Cuando se desea estimar la prevalencia de infeccin o enfermedad en la poblacin a partir
de pools surgen problemas de interpretacin de los resultados. Aparentemente el nico resultado
viable que se puede calcular es el porcentaje de pools positivos, sin embargo, existe una frmula que
326
permite estimar la prevalencia individual en la poblacin, siempre y cuando se hayan utilizado pools
de igual tamao (Kline et al., 1989).
En un estudio donde se han tomado 30 pools de 5 camarones (150 animales en total) para
hacer diagnstico de WSSV por PCR, 4 pools han resultado positivos a WSSV, es decir, el 13,3% de
los pools son positivos. Al sustituir en la frmula anterior, tendramos que la prevalencia individual
sera 2,82%, es decir, estimamos que en la poblacin estarn infectados casi el 3% de los individuos.
7.5.
Conclusin
El diseo de planes de vigilancia epidemiolgica a nivel regional puede llegar a ser una actividad muy compleja debido a la multitud de factores que se deben considerar: estructura de la poblacin, disponibilidad de datos censales de calidad, errores y sesgos en el muestreo y desconocimiento
de la iabilidad diagnstica.
Adems, la informacin obtenida debe procesarse con las herramientas estadsticas y epidemiolgicas adecuadas a cada situacin para conocer de forma idedigna el estatus sanitario de las
poblaciones estudiadas y poder realizar una correcta toma de decisiones.
7.6.
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328
Captulo 8
Buenas prcticas y bioseguridad para
el cultivo del camarn blanco Penaeus
(Litopenaeus) vannamei
(Boone, 1931)
330
CAPTULO 8 - Buenas prcticas y bioseguridad para el cultivo del camarn blanco Penaeus (Litopenaeus) vannamei
CAPTULO 8
Buenas prcticas y bioseguridad para el cultivo del camarn blanco
Penaeus (Litopenaeus) vannamei (Boone, 1931)
Jorge Cullar-Anjel1, Vielka Morales2, Cornelio Lara3 y Oscar Garca4

Camaronera de Cocl S.A. - Grupo Ad hoc del OIRSA en Sanidad Acucola
Programa Regional y Grupo Ad hoc del OIRSA en Sanidad Acucola
3
Programa de Sanidad Acucola - MIDA Grupo Ad hoc del OIRSA en Sanidad Acucola
4
Coordinador Regional de Inocuidad de Alimentos del OIRSA
1
2
Introduccin
La pesca y la acuicultura realizan contribuciones importantes al bienestar y la prosperidad de
los pases que realizan estas actividades. En los ltimos 50 aos, el suministro de productos pesqueros
destinados al consumo humano ha superado el crecimiento de la poblacin mundial; actualmente, el
pescado constituye una fuente esencial de alimentos nutritivos y protenas animales para gran parte
de la poblacin, adems de proporcionar medios de vida e ingresos, tanto directa como indirectamente.
La produccin acucola mundial ha seguido creciendo en el nuevo Milenio, aunque ms
lentamente que en los decenios de 1980 y 1990. En el transcurso de medio siglo aproximadamente,
la acuicultura ha pasado de ser casi insigniicante a equipararse totalmente a la produccin de la
pesca de captura en cuanto a la alimentacin de la poblacin en el mundo. Este sector tambin ha
evolucionado respecto a la innovacin tecnolgica y la adaptacin para satisfacer las necesidades
cambiantes (FAO, 2012).
El cultivo de camarn es el rubro de la acuicultura con ms rpido crecimiento en Asia y Latinoamrica y recientemente en frica. El 88% de los camarones (penaeidos) proviene de Asia y los
cinco mayores productores (China, Tailandia, Vietnam, Indonesia y la India) suministran el 81%. En
Centroamrica el cultivo del camarn marino corresponde a 12.8%, siendo con tilapia los de mayor
desarrollo en el sector acucola. La captura de camarn fue estratgica para Centroamrica hasta
el 2000, pero cada ao es menor debido a sobreexplotacin de la pesquera, pese a las medidas
de ordenacin implantadas. Es as que la produccin se redujo de 15,017 TM en 2000 (3.8% de la
produccin regional) a 8,775 TM en el 2007 (2% del total Regional), mientras que el cultivo de este
mismo recurso aument de 25,380 TM (5.73% de la produccin) a 72,774 TM (16.4% del acumulado
regional) durante el mismo perodo; sin embargo, la produccin disminuy de 2007 al 2010 (71,188
TM) de 11.18% a un 10.93% (Tabla 1), por problemas de enfermedad, que se iniciaron en Asia desde
2009 (FAO, 2014).
331
TABLA 1: Produccin de camarn de cultivo (TM) en pases centroamericanos

Perodo 2000-2010.
Ao
Belice *
Costa Rica El Salvador Guatemala
Honduras
Nicaragua
Panam
Totales
2000
3,637
1,300
196
1,492
12,041
5,422
1,292
25,380
2001
4,460
1,800
363
2,500
16,718
5,698
2,997
34,536
2002
4,354
4,102
372
5,400
18,149
6,102
4,768
43,247
2003
11,157
5,056
473
3,773
25,427
7,019
6,092
58,997
2004
11,065
5,081
435
3,964
27,748
7,849
6,520
62,662
2005
10,254
5,719
240
4,564
28,385
9,633
8,394
67,189
2006
7,235
5,730
336
8,436
35,811
10,860
9,317
77,725
2007
2,472
5,278
160
14,864
30,367
11,097
8,536
72,774
2008
2,280
5,269
219
17,883
17,803
14,690
7,788
65,932
2009
2,300
3,545
382
17,034
23,753
17,362
6,863
71,239
2010
6,669
3,216
394
15,944
22,273
16,587
6,105
71,188
Gran Total
65,883
46,096
3,570
95,854
258,475
112,319
68,672
---
FUENTE: FAO, 2014; * Departamento de Pesca de Belice, 2013 (entrevista personal con Claudia Beltrn-Consultora de FAO)
Las granjas de camarn deben cumplir con las regulaciones nacionales e internacionales respecto al tema ambiental, sanitario, de inocuidad, social, laboral y de tenencia de tierras. Las Buenas
Prcticas no son procedimientos cuantitativos ni estticos, no pueden ser codiicados como una regulacin permanente y pretenden guiar la actividad camaronera para maximizar su eiciencia, garantizar sostenibilidad y minimizar impactos ambientales y sociales, considerando siempre la inocuidad
del producto inal para el consumo humano.
8.1
Aspectos a considerar en las Buenas Prcticas de Manejo
Aspectos sociales
El enfoque social de las empresas camaroneras, debe estar dirigido a desarrollar y operar granjas en una forma responsable, que beneicie a la misma empresa, a las comunidades locales y al pas,
contribuyendo de manera efectiva con el desarrollo rural y, particularmente, al alivio de la pobreza
en las reas costeras, sin comprometer el ambiente.
Las granjas camaroneras estn localizadas cerca de comunidades costeras por lo que no deben
negar el acceso a miembros de estas comunidades que se han dedicado por ao a la extraccin de
algunos recursos (moluscos, pesca artesanal, madera) y deben colaborar con las autoridades competentes, las cuales tienen la responsabilidad de regular el uso de los recursos hidrobiolgicos y costeros
de estas reas. Todo trabajador de la granja camaronera debe recibir como mnimo, el salario, seguros
laborales y mdicos establecidos por ley. Deben recibir capacitacin permanente y deben contar con
un programa de asistencia mdica ocupacional, que incluya visita de mdicos, odontlogos y trabajadores sociales, dando la oportunidad al personal de ser atendido al menos una vez por ao. No
deben existir prcticas discriminatorias, polticas o de exclusin para contratar personal, ni se deben
contratar menores de edad.
332
Las granjas camaroneras deben brindar a sus trabajadores instalaciones bsicas dignas y decentes, bien ventiladas y con buenas instalaciones de duchas, baos y servicios sanitarios (letrinas en
campo), as como poder brindarles alimentos balanceados y nutritivos, fuentes de agua potable, sistemas de comunicacin a travs de telefona convencional o de radiotelfonos, transporte gratuito y
seguro desde y hasta los lugares de residencia. En cuanto a la Responsabilidad Social, las granjas deben proyectar actividades dirigidas hacia la comunidad, involucrando a sus trabajadores en la identiicacin de problemas de ndole social, ambiental, salud, educacin, sanidad y comunicacin, entre
otros. Tambin, convertirlos en actores de la bsqueda de soluciones. La empresa debe involucrarse
en actividades sociales que desarrollan las comunidades y aportan al bienestar de sus empleados.
Aspectos ambientales
La camaronicultura sostenible debe estar enfocada hacia el desarrollo de sistemas de cultivo
en forma integrada, ordenada e incluyente, articulando las capacidades econmicas, ambientales
y sociales con la tecnologa, el conocimiento, los esfuerzos institucionales y el marco jurdico normativo. Las granjas tienen la responsabilidad en la implementacin de la gestin ambiental deinida
en el Estudio de Impacto Ambiental, desde la fase de construccin y durante su establecimiento y
operacin. El sitio seleccionado para la ubicacin de la granja, debe estar en una zona donde la
operacin de la misma no cree conlictos ambientales ni sociales, de acuerdo con la planiicacin y
el marco legal y haciendo uso eiciente de los recursos agua y suelo. Se deben conservar la biodiversidad, los hbitats ecolgicamente sensibles y las funciones del ecosistema, as como reconocer otros
usos posibles del suelo y qu otras personas y especies dependen de estos mismos ecosistemas. Entre
los factores que se deben considerar a la hora de seleccionar un terreno adecuado para el cultivo de
camarn, estn los siguientes: eiciencia costo-beneicio y la salud ambiental, valor del sitio donde
se va operar una granja de camarn en relacin con el valor intrnseco previo (costo oportunidad),
efectos en la economa local y regional, cambios en el valor de otros sitios dentro del mismo ecosistema como resultado del cultivo.
La calidad del agua es esencial para cubrir los requerimientos fsico-qumicos y biolgicos de
la especie en cultivo y la seleccin del sitio debe contemplar los planes de desarrollo de la zona en
cuanto a crecimiento agrcola, industrial o turstico, entre otros. Mientras ms lejos estn las granjas
de asentamientos humanos, ms fcil ser controlar la contaminacin de patgenos que afecten la
inocuidad del producto inal. La industria camaronera, gracias al avance de la tecnologa, ha ampliado la posibilidad de utilizar no slo las reas de albinas, sino tambin reas arenosas y tierras dulces
para la localizacin de las granjas. Ante estas posibilidades del uso de tierra, se deben tener en cuenta
los impactos ambientales, como consecuencia de la construccin y operacin de las granjas.
El diseo debe incorporar elementos que protejan las estructuras de la granja de las inundaciones y que, a la vez, eviten obstruir las corrientes naturales de agua que mantienen los hbitats
circunvecinos. Se recomienda construir estanques en reas con mnima cobertura vegetal como son
las albinas (Fig. 8.1.1), pues los costos de construccin se reducen y la probabilidad de que el sitio
sea un rea ambientalmente sensitiva es menor. Para el diseo de estructuras y de canales de agua se
debe tomar en cuenta las variaciones estacionales del clima e hidrologa; en base a los estudios dimensionar las diferentes estructuras hidrulicas internas y externas de la granja. Los suelos potencialmente cidos y con sulfatos deben ser excluidos en la seleccin para la construccin de camaroneras,
al igual que aquellos con contenido de materia orgnica. Sin embargo, los suelos moderadamente
cidos pueden ser tratados para mejorar su pH, mediante el proceso de encalado con Carbonato de
calcio.
333
La textura del suelo deber ser de composicin apropiada y se debe encontrar a una profundidad de por lo menos 50 cm por debajo del fondo del estanque. Debe tener un alto contenido
de arcilla y limo, para reducir la prdida de agua por iniltracin y facilitar la compactacin de los
muros, reduciendo la erosin. Los suelos arenosos pueden seleccionarse siempre y cuando se utilice
tecnologa que impida la iniltracin del agua (liners) (Fig. 8.1.2), considerando aspectos tcnicos
apropiados. Se deben construir granjas en reas que no han sido expuestas previamente a actividades agroindustriales, as como tampoco a desarrollos urbanos o que estn sujetas a la inluencia de
drenajes agrcolas.
Las granjas de camarn cultivado no deben estar construidas dentro de los bosques de manglar, humedales o cualquier otro ecosistema frgil. Un buen conocimiento de los principios de diseo, construccin y tecnologas de cultivo, pueden ayudar con tres objetivos: proteccin de los
recursos naturales, eiciencia operativa y reduccin de los costos de construccin. En cuanto a las
estructuras de bombeo de la granja deben ser compactas, tener seguridad en su diseo para soportar
y operar el equipo de bombeo y, facilitar la logstica operativa y de mantenimiento; tambin deben ser
diseadas bajo un enfoque ambiental, que evite el derrame de hidrocarburos y otros contaminante a
las aguas estuarinas.
La seleccin del tipo de bombas a utilizar, debe tomar en cuenta aspectos de eiciencia, costo,
durabilidad (vida til) y riesgo ambiental asociado con su uso. Las bombas lubricadas por aceite, son
un riesgo potencial de contaminacin de las aguas estuarinas, por lo que es preferible utilizar las que
son lubricadas por agua. En el caso de la seleccin de motores, debe considerarse la eiciencia en el
uso y tipo de energa requerida. En la planeacin de la construccin de las granjas, los canales no
debern crear barreras a las corrientes naturales de agua, ya que alterar los cursos hdricos naturales
puede impactar reas sensibles. Por esta razn, los estudios topogricos del rea y el estudio de su
hidrologa antes de la construccin, permitirn detectar en dnde estn los cursos naturales de agua
en riesgo.
Las vas de acceso debern tener instaladas estructuras de tamao adecuado para prevenir
el estancamiento de agua dulce y la alteracin del lujo de agua salobre. A veces se hace necesario
contar con caminos altos en reas donde se construyen estanques camaroneros. Un camino puede
actuar como una represa y causar inundaciones, a menos que se asegure su drenado mediante el uso
de estructuras del tamao adecuado. En casos extremos, el camino corre el riesgo de ser barrido por
las aguas.
Figura 8.1.1. Proceso de construccin de estanque, en

zona de albina con alto contenido de arcilla y limo
para la buena compactacin de los muros. Foto cortesa del Dr. J. Cullar-Anjel.
334
Figura 8.1.2. Estanques cubiertos con liners para evitar

la iltracin por efecto de la composicin arenosa del
suelo. Foto cortesa del Ing. C. Lara.
El diseo y construccin de los canales de abastecimiento de agua, deben ser con base en la
estimacin de la demanda mxima diaria de agua de la granja, incluyendo las prdidas por evaporacin, iltracin y fugas. Debe ser estimada la carga de sedimento del agua entrante y las dimensiones
requeridas para un rea de sedimentacin o trampa de sedimento. Los canales de drenaje deben
tener en su diseo una seccin hidrulica para el eiciente manejo de eluentes de la granja y aportes
hdricos naturales. Hay que contemplar la posibilidad de hacer estructuras de control para el drenaje
y aislamiento de la inluencia de las mareas como una opcin de bioseguridad, que podra reducir
los costos de operacin. Todos los actores en las granjas deben asimilar y poner en prctica la gestin ambiental y debe haber un enfoque hacia disminuir desechos en el proceso de construccin y
durante la produccin.
El alimento balanceado requiere un adecuado manejo durante su almacenaje y distribucin
en campo, debiendo estar protegido de la humedad, luz solar directa y del ataque de plagas.
La prctica de reducir, reutilizar y reciclar, debe ser una regla en la granja en funcin del ambiente y de los costos. La granja debe contar con un sistema eiciente de control de entradas y salidas
de personal y equipo rodante con un sistema de desinfeccin para stos, diseado para que no pueda
ser obviado. Igualmente, la granja debe contemplar el diseo y construccin de infraestructura y sealizacin para la implementacin de medidas de seguridad, higiene y bioseguridad.
Aspectos del Proceso productivo
Un aspecto importante en el manejo de la granja, es que desde la primera fase se establezca
y mantengan las condiciones ambientales ptimas en el estanque, para que las postlarvas o juveniles
se desarrollen normalmente. Esto implica la implementacin de vacos sanitarios, preparacin del
fondo del estanque, una adecuada eliminacin de depredadores y competidores, reduccin de las
posibilidades de estrs y manejo de la productividad natural.
a.
Preparacin de los estanques
El vaciado sanitario aplicado en toda la granja o en una parte de esta, permite tener el tiempo
necesario para un buen secado y preparacin de los estanques. Esto contribuye al desarrollo de camarones sanos ya que favorece un equilibrio qumico, fsico y biolgico en el estanque. El drenado,
secado, manejo de sedimentos, limpieza, evaluacin del estado del fondo y encalado, son actividades que contribuyen a disminuir los riesgos de enfermedades en los estanques. El estanque debe ser
drenado totalmente una vez inalizada la cosecha. Las reas que no puedan ser drenadas totalmente
deben ser desinfectadas con hipoclorito de sodio (calcio) u xido de calcio (cal viva). Una vez inalizado el drenaje, las compuertas de entrada y salida de agua de los estanques deben ser selladas para
evitar la entrada de agua durante las mareas altas, permitiendo de esta manera que el sol y el viento
realicen el proceso de secado total. Los canales de drenaje que cuentan con estructuras de control,
deben sellarse hermticamente para evitar la entrada de las mareas y hacer efectivo el secado y preparacin del estanque luego de la cosecha.
Es necesario dejar reposar o restaurar el medio ambiente en granjas camaroneras, mediante
la interrupcin de la produccin; durante la estacin seca se puede conseguir un secado total y en
la estacin lluviosa un secado parcial dadas las condiciones del clima. Esta estrategia llamada vaco
sanitario, tiene el objetivo de romper los ciclos de reinfeccin, eliminando as las fuentes de una enfermedad en los estanques y reservorios. Las unidades de produccin y estructuras de abastecimiento
de agua, deben ser sometidas a un perodo prudente de secado por la accin del sol y viento en la
estacin seca, hasta que el fondo desarrolle cuarteaduras. Esto permite oxidar sustancias reducidas
335
(sulfuros inorgnicos presentes en el suelo del estanque), acelerar la descomposicin de la materia

orgnica y desinfectar el fondo. La presencia de materiales extraos dentro de los estanques (alambres, troncos, piedras, palos, etc.), puede afectar el buen desarrollo de las actividades de produccin,
as como la integridad fsica de los trabajadores. Por ejemplo, durante los muestreos biomtricos se
puede alterar la efectividad de las capturas con atarraya; pueden ocasionar accidentes a los operarios o, se pueden convertir en refugios de organismos que inciden en los resultados de produccin.
Luego se debe realizar la limpieza y desinfeccin de compuertas de entrada y salida, tuberas, tablas
y bastidores.
Hay que tener en cuenta en el manejo de desechos, que existen materiales que por su naturaleza o composicin fsico-qumica son fcilmente degradados por el ambiente y por lo tanto slo
necesitan tener un lugar o sitio adecuado para su disposicin. Se debe evitar la incineracin debido
a la liberacin de residuos contaminantes para el ambiente.
Se deben establecer programas rutinarios de toma de muestras de suelo para el anlisis de
laboratorio y con base en los resultados, aplicar la cantidad requerida del insumo que se necesite (cal
o fertilizante) para cada estanque. Un anlisis de suelo debe incluir informacin bsica sobre composicin de materia orgnica (%), pH, nitrgeno, fsforo, sulfatos, hierro, calcio, magnesio y potasio.
Si el suelo del estanque presenta condiciones cidas (pH<7), se debe aplicar cal agrcola (carbonato
de calcio) para subir el pH, ver tabla 2.
Tabla 2. Requerimiento de cal agrcola para tratar el fondo de los

estanques (Boyd, 1992).
pH
Carbonato de calcio (cal agrcola) (kg/ha)
<5
< 3,000
5-6
< 2,000
6-7
< 1,000
Otra evaluacin importante es el grado de contaminacin por presencia de plantas invasoras

(malezas marinas) y crustceos como el camarn fantasma o (Lepidophthalmus spp.) y Tanaidacea.
En caso de su presencia, se deben aplicar prcticas de manejo tendientes a reducirlos o eliminarlos,
pues podran afectar negativamente la produccin de camarones. El uso de plaguicidas o sustancias
qumicas para erradicar o controlar dichos organismos, deber indicarse como ltimo recurso. Esta
prctica se debe realizar de manera responsable y siguiendo estrictamente las indicaciones del fabricante, bajo el aval y direccin de las Autoridades Competentes.
Un problema mayor es la acumulacin de sedimento suelto, ya sea de fuentes externas al lugar
o del sitio mismo. Las granjas camaroneras deben almacenar o disponer de los sedimentos removidos de los estanques, canales y estanques de sedimentacin, de tal forma que no causen impacto
ambiental o de salinizacin de la tierra y aguas cercanas. Una prctica comn es extraer la capa de
sedimento acumulada en el fondo despus de varios ciclos de cultivo y usarla para restaurar las secciones transversales de los muros, mejorando los taludes, la altura y la corona. En esta operacin se
debe hacer una buena compactacin, para evitar que este material contamine el estanque por erosin
o deslizamientos.
El encalado utilizando Carbonato de Calcio, se lleva a cabo para subir el pH en el caso de
suelos cidos y para mejorar la alcalinidad del agua. Muchos suelos son cidos por naturaleza, ya que
tienen bajas concentraciones de iones bsicos o altas cantidades de materia orgnica. En el cultivo
336
de camarn, el encalado es altamente efectivo para neutralizar los cidos del suelo y se constituye
en una actividad de manejo til y econmicamente viable (Fig. 8.1.3 y 8.1.4). Es recomendable el
roturado (arado o volteado) del fondo de los estanques cada uno o dos aos, segn las condiciones
propias de cada estanque o de la empresa. Con esto, se logra dar mejores condiciones al suelo para
garantizar un ambiente apropiado para el engorde del camarn (aireacin, mineralizacin, desinfeccin y oxidacin).
Figura 8.1.3. Encalado manual de un estanque en forma

uniforme. Fotos cortesa del Ing. C. Lara.
Figura 8.1.4. Encalado mecnico de un estanque en forma uniforme en menos tiempo y con mayor seguridad.
Foto cortesa del Ing. C. Lara.
Para lograr un resultado eiciente de la operacin de roturacin del suelo, este debe tener una
adecuada humedad ya que en suelos extremadamente hmedos o excesivamente secos, no se logra
un rendimiento adecuado del equipo, ni del proceso de roturacin como tal. Se debe aprovechar la
faena de roturacin de un estanque, para incorporar cal u otros insumos destinados al mejoramiento
de las caractersticas del suelo. Esta condicin del suelo favorece la incorporacin y accin de los
insumos que son aplicados durante la preparacin; as tambin, ofrecer un fondo que facilitar algunas de las actividades isiolgicas del camarn (ej.: muda).
El proceso de llenado del estanque debe ser lento y con supervisin estricta, para garantizar
un iltrado puntual (limpieza de mallas y bolsos). Los iltros no deben ser removidos de las estructuras
de entrada y salida durante los primeros 30 das de cultivo, con el in de evitar la fuga accidental de
las postlarvas. Se debe establecer un plan de manejo de iltros y bolsos, que contemple la reduccin
de entrada de organismos no deseables al sistema de produccin, los cuales afectan los rendimientos
por ser fuentes de depredacin, competicin y contaminacin con patgenos. El buen manejo de los
iltros, evitar la necesidad de perodos cortos de remplazo por deterioro de los mismos, lo cual se
traduce en ahorro de materiales (principalmente madera) y mano de obra, as como reduccin del
riesgo de ingreso de organismos silvestres al estanque o prdida de camarones por fuga.
Durante el llenado se debe hacer un anlisis de las condiciones fsico-qumicas del agua del
estanque, con base en lo cual se establece un programa de fertilizacin. Este permitir promover
el desarrollo de itoplancton (principalmente diatomeas) y por ende zooplancton, lo cual servir
como alimento inicial a las postlarvas una vez sean sembradas. Con la fertilizacin del agua de los
estanques, se debe buscar un equilibrio inico y bioqumico que favorezca el crecimiento de la productividad natural (itoplancton, itobentos, zooplancton y zoobentos) y del camarn. Se recomienda
mantener una relacin de N: P de 8: 1 (ej.: N= 0.56 ppm y P= 0.07 ppm); la relacin de Ca:Mg:K que
sea de 1:3:1 (ej.: Ca= 400 ppm, Mg= 1,200 ppm y K= 400 ppm); el Slice se debe mantener en 1.0
ppm y la alcalinidad en >80.0 mg/L.
337
Antes de proceder con la siembra de las postlarvas, se debe realizar un anlisis microbiolgico
del agua del estanque, para determinar si es necesario aplicar melaza, probiticos u otros insumos
dirigidos a promover o corregir el crecimiento de microorganismos relacionados con el desempeo
de las postlarvas del camarn. De esta manera, promover un equilibrio microbiano en el estanque.
b.
Siembra del estanque
El proceso de siembra de los estanques, es deinitivo para el xito del cultivo y, por consiguiente, se deben tomar en consideracin todas las recomendaciones relacionadas con la fuente y calidad
de las postlarvas, aclimatacin y siembra de las mismas en los estanques. La granja debe coordinar
oportunamente con el Centro de Produccin Larval (CPL), la fecha, hora, cantidad, edad y condiciones para el transporte de las postlarvas. Cuando se ha hecho un tratamiento del agua del estanque
(ej.: fertilizacin, aplicacin de melaza, probiticos, etc.) o se ha cerrado el ingreso de agua por haber
alcanzado el nivel de operacin, se deben esperar 3 das antes de hacer la siembra de las postlarvas
para permitir que se estabilicen las condiciones del mismo. De igual manera, se debe conirmar con
anticipacin mediante monitoreos peridicos de parmetros fsico-qumicos y biolgicos, que las
condiciones del agua de los estanques son aceptables para recibir las postlarvas. La Tabla 3 presenta
los niveles sugeridos de estos parmetros que deben tener los estanques en el momento de la siembra:
Tabla 3: Parmetros fsico-qumicos y biolgicos del agua del estanque para la siembra
(Adaptado de Cullar-Anjel et al., 2010).
Parmetro
Rango
Alcalinidad
>80.0
mg/L
pH
(a.m.)
Amonio
7.0 a
8.0
<0.10
mg/L
O.D.
(a.m.)
Diatomeas
> 4.0
mg/L
>15,000
cel/mL
Bacterias
UFC/mL
TCBS
TSA
Lumi
102
103
Cero
La produccin masiva de postlarvas de alta calidad y viabilidad, es la clave para una acuicultura moderna de camarn. Se debe mantener un registro de la fuente y compra de postlarvas, cuntas
y dnde fueron sembradas. Es decir, mantener un registro de trazabilidad. Antes de sembrar, las postlarvas deben ser examinadas para detectar signos de enfermedad, evaluar su calidad y establecer su
fortaleza durante pruebas de estrs.
Las granjas deben adquirir postlarvas solamente de establecimientos que tengan vigilancia
sanitaria por parte de la Autoridad Competente. Cuando stas sean importadas, deben tener una
certiicacin sanitaria de su pas de origen, que incluya por lo menos los principales agentes patgenos tales como: Virus del Sndrome de la Mancha Blanca (WSSV), Virus de la Necrosis Infecciosa
Hipodrmica y Hematopoytica (IHHNV), Virus del Sndrome de la Cabeza Amarilla (YHV), Virus del
Sndrome de Taura (TSV), Nodavirus del Penaeus vannamei (PvNV), Baculovirus penaei (BP) y Virus
de la Mionecrosis Infecciosa (IMNV) y, bacterias como el Hepatobacter penaei causante de la Hepatopancreatitis Necrotizante (NHP), el Vibrio penaeicida y la cepa de V. parahaemolyticus causante de
la enfermedad de la Necrosis Hepatopancretica Aguda (AHPND).
Las postlarvas de buena calidad, deben estar libres de organismos infecciosos (WSSV, IHHNV,
YHV, TSV, PvNV, BP, IMNV , NHP y AHPND) y presentar un buen estado de salud general. Adems,
deben presentar un buen desarrollo branquial y tener un desarrollo morfolgico acorde con su edad
(estadio vs. longitud en mm). Es necesario conocer la historia clnica de cada lote de postlarvas a
338
comprar. Para esto se sugiere buscar el apoyo del tcnico a cargo del cultivo larvario. El comprador
debe estar en contacto con los proveedores al menos 7 das antes de que se efecte la compra de
postlarvas.
Para asegurar la calidad de las postlarvas, debe realizarse una evaluacin microscpica y
molecular, as como una revisin macroscpica para determinar tamao, presencia de deformidades, homogeneidad de tallas, actividad, contenido y movimiento intestinal, presencia de epibiontes,
opacidad muscular, desarrollo branquial, cambios de color y melanizacin de apndices. (Fig.8.1.5
y 8.1.6).
De igual manera, se debe hacer una prueba de estrs y se recomienda observar las postlarvas
en la oscuridad, con el in de detectar posible bioluminiscencia. Las variables ms importantes a
monitorear durante el proceso de aclimatacin de postlarvas de camarn, son salinidad, temperatura
y oxgeno disuelto. Durante la aclimatacin se debe evitar el estrs por cambios ambientales rpidos.
La importacin de nauplios y postlarvas deber hacerse de acuerdo con la regulacin nacional. En ausencia de una regulacin apropiada, se debern seguir los lineamientos internacionales de
la Organizacin Mundial de Sanidad Animal (OIE) (Cdigo Sanitario para los Animales Acuticos).
Se debe evitar la introduccin de enfermedades a travs de animales vivos, muertos congelados o de
subproductos.
Las postlarvas de camarn constituyen uno de los insumos ms costosos en la produccin de
camarn de cultivo. La manipulacin y manejo de las postlarvas incluyendo su cosecha, empaque en
el laboratorio, transporte, recepcin en granja, aclimatacin y siembra en los estanques, son sumamente crticos para su supervivencia. Durante el proceso de aclimatacin, se debe reducir el estrs
para evitar la mortalidad de las postlarvas mientras se adaptan gradualmente a las nuevas condiciones
de calidad de agua de los estanques. Una aclimatacin exitosa contribuye a asegurar el xito econmico del ciclo de cultivo.
Antes del inicio del proceso de siembra se debe garantizar que el estanque rena una serie
de condiciones que favorezcan un buen desarrollo del cultivo. stas se enmarcan en un nivel hdrico
adecuado del estanque, buena concentracin de itoplancton (principalmente diatomeas) y parmetros fsico-qumicos normales; esto no excluye monitorear dichos parmetros durante el proceso de
aclimatacin y en el momento de la siembra. Es importante que en la medida de lo posible, la granja
tenga su propio historial bacteriolgico para cada estanque (principalmente especies de los gneros
Vibrio, Pseudomonas, Aeromonas, Plesiomonas, Flavobacterium y Streptococcus), con lo cual tenga
establecido el rango de bacterias (unidades formadoras de colonia - UFC) frecuentes en cada estacin
Figura 8.1.5. inspeccin macroscpica del estado de las

larvas para determinar su calidad y condiciones sanitarias. Foto cortesa del Ing. H. Prez.
Figura 8.1.6. inspeccin microscpica y registro de hallazgos a partir de muestras de camarones enfermos. Foto
cortesa del Ing. C. Lara.
339
del ao (seca y lluviosa). Con base en esto, se debe veriicar la carga bacteriana de un estanque antes
de su siembra, para asegurar una buena calidad microbiolgica del agua que no ponga en riesgo la
viabilidad de las postlarvas.
Idealmente, la siembra se debe realizar durante el perodo ms fresco del da (6 a.m. 8 a.m.,
o durante la noche), cuando se encuentran las menores temperaturas y, por consiguiente, se reduce
el estrs en las postlarvas y se podra hacer menor el tiempo de aclimatacin. Se recomienda liberar
las postlarvas en los estanques tan pronto como sea posible. La determinacin de una densidad de
siembra adecuada depende de la talla y edad proyectada para cosechar, calidad del agua, diseo del
estanque, tasas de recambio hdrico, posibilidad de aireacin mecnica, experiencia del personal
y capacidad tcnica general de la granja. Cada empresa camaronera debe establecer la biomasa
sostenible para cada estanque, de acuerdo con las condiciones propias, individuales y el historial de
produccin. Bajo estas premisas y considerando el punto de equilibrio econmico de la granja y las
condiciones de mercado, se puede deinir la densidad de siembra ptima para el sistema de produccin, sin afectar los beneicios econmicos proyectados.
Deinidas las densidades a utilizar de acuerdo con el sistema de cultivo establecido y inalizado el proceso de aclimatacin, las postlarvas deben ser liberadas procurando hacerlo del lado del
estanque que est en favor del viento; de esta manera, las olas ayudarn a dispersar los animales despus de la siembra evitando su agrupacin en la orilla. Se recomienda monitorear la supervivencia
de las postlarvas sembradas a las 24 y 48 horas.
La implementacin de infraestructuras de acondicionamiento de postlarvas en las granjas, es
una actividad importante para lograr un manejo adecuado de dichos camarones antes de su siembra
en los estanques. En estas estructuras, las postlarvas pueden ser manejadas y acondicionadas por un
perodo de tiempo prudencial, de acuerdo con los protocolos de la granja, mediante una buena nutricin, hasta alcanzar un tamao apropiado para su buen desempeo en los estanques de engorde.
Este sistema tambin ayuda a reducir los ciclos de produccin y al control de enfermedades.
c.
Manejo del alimento
La nutricin del camarn est basada en alimentos artiiciales suministrados por el granjero y,
por una importante variedad de organismos (algas, pequeos invertebrados bentnicos, etc.) y detritos orgnicos, que son parte de la productividad natural y del ambiente marino.
No es recomendable almacenar alimento en la granja ms de tres meses, as como tampoco
utilizarlo para alimentar a los camarones, debido a la prdida de su calidad nutricional y a los riesgos
microbiolgicos inherentes. Esto implica que los depsitos de almacenamiento renan las condiciones mnimas que garanticen el mantenimiento de la calidad del alimento, as como el funcionamiento de un sistema de inventario separando y registrando la llegada de cada lote de alimento, as como
la salida de los mismos segn la fecha de llegada. El primero en llegar debe ser el primero en salir.
El alimento para los camarones debe estar en ptimas condiciones; todo alimento contaminado con hongos (enmohecido) que se detecte en el depsito de la granja, debe ser retirado y destruido. El suministro de alimento para camarones, debe ser racional, dosiicado, bajo determinada
frecuencia y con una correcta distribucin, para evitar el deterioro de las condiciones fsico-qumicas
y microbiolgicas del agua y del fondo del estanque. El alimento debe ser peridicamente evaluado
por tcnicos de la granja, para asegurar su calidad y evitar riesgos en su uso por deterioro fsico o
microbiolgico. Se deben tomar muestras al azar de todos los embarques de alimento enviados a la
granja y realizar inspecciones para determinar la presencia de humedad u hongos. Las muestras de
alimento deben ser enviadas peridicamente a laboratorios independientes conservando una contra-muestra, para la determinacin de su composicin nutricional y caractersticas fsicas, permitien340
do esto su comparacin con los valores suministrados por el fabricante. De cada lote de alimento
recibido en la granja, se debe retener en anaquel y refrigerar una muestra de 1 kg hasta que se haya
utilizado todo el lote, para ser usado en caso de reclamos o de anlisis de laboratorio requeridos para
pruebas especiales de calidad.
Se recomienda que las granjas implementen un programa de depsitos cerca de los estanques,
con capacidad para abastecer la racin por un mximo de tres das. De esta manera, se libera la mano
de obra y la lota de vehculos, disminuyendo el deterioro de los caminos. Se debe considerar durante
los clculos de las raciones diarias de alimento, que los camarones en estadios de pre-muda, muda
y post-muda, disminuyen notablemente el consumo y, por consiguiente, la dosis diaria debe estar
sujeta a la poblacin que se encuentra en inter-muda, para evitar el desperdicio de parte de la racin.
En el cultivo semi-intensivo, las tasas de alimentacin son usualmente bajas y la fertilizacin
por esta va no debera ser un problema. La sobrealimentacin, pueden llevar a niveles abundantes de
itoplancton, zooplancton y microorganismos no benicos y a una alta demanda de oxgeno disuelto
durante la noche.
El uso de tablas de alimentacin ha sido uno de los mtodos ms utilizados para el control
del suministro de alimento, basado en muestreos de crecimiento y de supervivencia para determinar
la biomasa del estanque. El uso de bandejas de alimentacin es una buena herramienta que sirve de
apoyo para estimar cunto estn consumiendo los camarones diariamente. Para ello, su lectura e
interpretacin de los resultados, debe ser hecha con responsabilidad y conocimiento por personal
bien entrenado.
La alimentacin debe realizarse cuando la temperatura no sea baja (mn. 26C) y las concentraciones de oxgeno disuelto en el agua del estanque sean adecuadas (mn. 4.5 mg/L). Si las
concentraciones de oxgeno disuelto son bajas durante un tiempo prolongado (das o semanas), las
raciones diarias de alimentacin son probablemente excesivas para la capacidad asimilativa de los
camarones en dicho estanque, por lo que es recomendable reducirlas o suspenderlas hasta normalizar la situacin.
Como una medida prioritaria de las empresas cultivadoras de camarn, todo el personal involucrado en el proceso de clasiicacin, pesaje, distribucin y suministro del alimento, debe ser supervisado por tcnicos responsables para asegurar que las raciones diarias sean debidamente calculadas
y aplicadas. De igual manera, el nmero de personas destinadas a estas labores, debe ser suiciente
para cumplir eicazmente con las jornadas diarias de alimentacin.
d.
Manejo de la calidad del agua
La calidad del agua del estanque, es un punto crtico en el proceso de produccin y debe
ser controlada en los parmetros fsicos, qumicos y biolgicos. En caso contrario, la poblacin de
cultivo podra pasar a tener bajo crecimiento, proliferacin de patgenos con brotes de enfermedad,
eventuales mortalidades y baja calidad del producto inal.
Es importante recordar que los estanques de cultivo de camarn son cuerpos de agua muy
dinmicos en los cuales interactan ntimamente factores fsico-qumicos como pH, salinidad, temperatura y oxgeno disuelto. De igual manera participan nutrientes orgnicos e inorgnicos afectando
a las poblaciones microbianas propias del estanque. stas son susceptibles a cambios dados entre
estos factores pudindose afectar su nmero y composicin. Algunas variables del ambiente acutico
como el pH, la temperatura y la salinidad, poseen rangos ideales para ciertas especies de bacterias.
Cambios en estos factores favorece la proliferacin de determinadas especies, alterando el equilibrio
con la consecuente dominancia de microorganismos patgenos.
341
Adicional a niveles inadecuados de parmetros fsicos, qumicos y biolgicos en el estanque,

existen contaminantes en el agua que podran comprometer la produccin de camarones. stos podran incluir hidrocarburos, plaguicidas, desechos txicos industriales, aguas servidas de poblaciones
cercanas y metales pesados, entre otros. Los monitoreos se deben realizar en las unidades de produccin (tanques o estanques), en los canales reservorios, estaciones de bombeo y fuentes de suministro
de agua (ras o estuarios).
Existen varias acciones que permiten mantener o mejorar la calidad del agua en un estanque,
entre las que se incluyen el uso de cal (xido, hidrxido y carbonato de Calcio), iltracin, fertilizacin (y otros tratamientos qumicos), uso de probiticos, prebiticos, melaza, manejo adecuado del
alimento, aireacin y recambio de agua. La granja debe contar con un plan para el monitoreo de los
parmetros fsicos, qumicos y biolgicos de los estanques, en el cual se deinan los procedimientos
a seguir con cada uno de ellos. Algunos parmetros de calidad del agua se pueden medir en el laboratorio de la granja.
Debe existir una rutina de calibracin de los aparatos utilizados para medir parmetros, con el
propsito de garantizar certeza y coniabilidad en los datos obtenidos. De manera complementaria,
es importante contar con un buen soporte tcnico para garantizar el correcto funcionamiento de los
mismos. El monitoreo de la calidad del agua debe involucrar: a) medicin de los parmetros fsico-qumicos, b) elaborar y mantener cuidadosamente registros con los valores obtenidos, c) anlisis
e interpretacin frecuente de los datos obtenidos y d) aplicacin de las conclusiones en funcin de
una mejora en las prcticas de cultivo.
Se deben establecer puntos especicos para la medicin de los parmetros en cada estanque,
con el in de mantener condiciones similares en el tiempo y que no se afecten los datos obtenidos en
los muestreos. Las muestras que van a ser sometidas a pruebas de laboratorio, deben ser manejadas
adecuadamente hasta el momento de su anlisis. Adems de monitorear los estanques, sus entradas
y salidas de agua, es til para una industria mantener un programa de monitoreo de ecosistemas
para seguir los parmetros ambientales en el tiempo y en un rango geogrico ms amplio. Esto es
particularmente til en reas donde el ambiente y por supuesto, el cultivo del camarn, pueden ser
vulnerables a otras inluencias, tales como otras industrias, la agricultura, los cambios climticos, etc.
El registro de datos es un aspecto fundamental dentro del proceso de monitoreo de los estanques, los
cuales debidamente ordenados y analizados, permitirn realizar pruebas estadsticas cuyos resultados apoyen una correcta toma de decisiones.
En sistemas de cultivo semiintensivos, los
mente necesarios para asegurar la sobrevivencia
de los camarones; de lo contrario, habr un desperdicio de energa y un incremento en los costos de produccin. La decisin para su uso, est
marcada por la concentracin de oxgeno disuelto en el estanque, misma que es dependiente
de la densidad de poblacin (biomasa), la concentracin de itoplancton y la profundidad del
estanque. Cuando se trata de sistemas intensivos
de cultivo de camarn, se debe tener en cuenta
que los aireadores deben estar encendidos casi
de manera permanente, para mantener estables
los sistemas bacterianos (lculos o biolocs) y
las condiciones fsico-qumicas requeridas por
los camarones (Fig. 8.1.7). En estos casos, el ho342
aireadores deben ser utilizados slo si son estricta-
Figura 8.1.7. Aireadores de paleta en un sistema intensivo

de cultivo, ubicados de forma que permitan una corriente
continua del agua para evita estratiicacin. Foto cortesa
del Ing. H. Prez.
rario de encendido y apagado de aireadores debe estar sujeto a los requerimientos metablicos de las
cepas bacterianas utilizadas, para mantener las condiciones ptimas dentro del estanque, aunque los
sistemas heterotricos requieren generalmente aireacin continua.
Es recomendable minimizar el recambio de agua sin afectar la produccin y manteniendo
niveles aceptables de los parmetros fsico-qumicos que se manejan durante el cultivo. Se recomienda hacer recambios de agua en un estanque, cuando las variables fsico-qumicas del agua se
encuentren por debajo de los niveles mnimos aceptables. La reduccin en el volumen del recambio
en un estanque, ayudar a reducir costos en combustible, mantenimiento de los equipos de bombeo
y cantidad de nutrientes en los eluentes.
Durante el verano, se debe reponer el agua perdida por evaporacin, para evitar que suba
demasiado la salinidad y que descienda drsticamente el nivel de operacin de los estanques. Si
algn estanque de la granja presenta problemas de enfermedades, ste deber ser manejado con cero
recambios agregando agua slo para reponer niveles perdidos por evaporacin.
La fertilizacin y manejo de la productividad debe ser utilizada bajo principios tcnicos propios de cada producto y con conocimiento del tipo de nutriente y dosis que se requiere para cada
caso. Es importante que el tipo y dosis del fertilizante a usar en los estanques, este basado en un anlisis de los niveles de nutrientes y que se busque mantener las relaciones requeridas entre ellos (ej.:
N:P:Si, Ca:Mg:K, C:N). Lo anterior, para obtener buena produccin primaria, un apropiado equilibrio
microbiano, un balance inico aceptable y un buen crecimiento de los camarones. La fertilizacin
contiene nutrientes que promueven el crecimiento del itoplancton, y la misma debe estar dirigida
a promover el crecimiento de las algas de mayor beneicio para el cultivo, como son las diatomeas
(Fig. 8.1.8).
Cuando las poblaciones de itoplancton son excesivas, la respiracin del mismo causar baja
concentracin de OD durante la noche. Tambin, por complejas razones limnolgicas, las poblaciones densas de algas pueden morir rpidamente (crash de algas), causando un alto consumo de
oxgeno por su rpida descomposicin. Este proceso reduce el oxgeno para los camarones y puede
causar mortalidades masivas por hipoxia prolongada. Ciertas especies de algas verde-azules pueden
ser txicas para el camarn y producir compuestos que dan olores y sabores no caractersticos o desagradables al producto, hacindolo inaceptable para los consumidores (Fig. 8.1.9).
Figura 8.1.8. Diatomeas, Navcula

(izquierda) y Chaetoceros (derecha).
Constituyen la principal fuente de alimento del zooplancton que es consumido por los camarones. Fotos cortesa de la Dra. E. Wright.
Figura 8.1.9. Dinolagelados, Peridinium (izquierda) y Cianitas (derecha). Productores de metabolitos que
afectan la calidad de los camarones.
Foto cortesa de la Dra. E. Wright.
343
Esto es generalmente producido por los metabolitos secundarios (2-metilisoborneol (MIB) y

geosmina (GSM), que son sintetizados por diferentes microorganismos presentes en el agua y suelo
como las cianobacterias (Oscillatoria, Anabaena y Microcystis sp.), actinobacterias (Actinomycetes,
Streptomyces y Nocardia sp.), bacilariitas, cloritas, crisitas, dinolagelados y otros microorganismos como los hongos.
Antes de hacer una aplicacin de fertilizantes, se debe veriicar que el estanque se encuentra
cerrado; es decir, sin recambio de agua en ese momento. Esto evitar prdida del producto, descargas
al ambiente y se conseguir buena efectividad del mismo en el estanque. Debe permitirse al fertilizante actuar por lo menos 24 horas, sin realizar en este tiempo recambios hdricos.
Para logar un rpido efecto, es preferible utilizar fertilizantes lquidos. Si se utilizan fertilizantes
granulados, se deber asegurar su completa dilucin antes de su aplicacin en el agua y no aplicarlos
directamente en forma granulada. En el caso de los fertilizantes fosforados, si se utilizan en forma
granulada, se precipitan hacia el fondo donde se disuelven muy lentamente y se pierde gran cantidad
de fsforo pues es rpidamente absorbido por el sedimento. Por esta razn, pasa muy poco a la columna de agua como nutriente y casi no es utilizado por las algas. En aguas con altas concentraciones
de calcio y un elevado pH, el fsforo se precipita como Fosfato de Calcio acumulndose en el fondo
sin ser aprovechado por las algas. Debido a que el fsforo es de difcil dilucin, es recomendable
aplicarlo durante varios das para un mejor aprovechamiento por parte del itoplancton. Los fertilizantes granulados pueden ser aplicados en plataformas sumergidas, disueltos en barriles o toneles y
la mezcla aplicarse a la supericie del estanque; tambin, el fertilizante puede ser colocado en bolsas
porosas colgadas en las compuertas de entrada.
El uso en estanques de fertilizantes orgnicos es menos deseable que los fertilizantes inorgnicos, ya que su contenido de nutrientes es altamente variable y su descomposicin puede causar
problemas en la calidad del agua. Si el administrador quiere usar fertilizantes orgnicos, es preferible
el uso de alimentos y productos vegetales baratos de plantas en lugar del estircol animal. Los fertilizantes deben ser almacenados en lugares limpios y secos, lejos de chispas elctricas y sus derrames
deben ser evitados. Algunos fertilizantes como el nitrato de amonio y nitrato de sodio, son altamente
explosivos y no deben estar en contacto con aceites o chispas elctricas. La humedad tiende a provocar que los fertilizantes formen terrones, por lo que se recomienda su almacenamiento en reas
seguras, limpias y secas. Si se utilizan sacos de fertilizantes granulados, estos deben estar estibados
en parrillas de madera y separados entre s. Este almacn debe estar debidamente rotulado y si es
posible, contar con una ducha de agua para cualquier peligro de intoxicacin.
En el tema de manejo de depredadores y competidores deben ser considerados los problemas
que traen en la productividad de las granjas camaroneras, ya que pueden reducir la poblacin de
camarones, propagar y difundir enfermedades, competir por el alimento de los camarones y, en casos
donde los depredadores son caimanes o cocodrilos, se pueden poner en riesgo vidas humanas. Es
preferible implementar medidas de exclusin para disminuir la presencia de depredadores y competidores en la granja. stas incluyen el uso de mallas de iltracin, cercas perimetrales, recoleccin y
destruccin de organismo muertos dentro y alrededor de la granja, no dejar alimento a la intemperie
o regado en las bordas y evitar la exposicin de basuras o desechos orgnicos, entre otras. La depredacin por aves debe ser minimizada por mtodos no letales, usando mecanismos inofensivos para
el ambiente, pero que al mismo tiempo sean eicientes.
Otra medida a considerar es prevenir las fugas de los camarones los cuales por ningn motivo
deben escapar al ambiente, siendo una medida que tiene repercusin econmica y ambiental. Para
ello las estructuras con mallas deben estar en buenas condiciones de mantenimiento y ser adecuadas
al tamao del camarn en las compuertas de entrada y salida de los estanques y de los canales de dre344
naje; para lo cual es conveniente ubicar redes o iltros en las cajas de cosecha y utilizar bolsas de captura y conos de pesaje con redes nuevas o en buen estado. Hay que estar pendientes de su revisin
y reparacin oportuna durante y despus de cada cosecha. De la misma manera, se debe contar con
reemplazos de estos implementos de cosecha, para la sustitucin inmediata en caso de ser necesario.
Uno de los mayores impactos ambientales potenciales durante la operacin de una granja de camarn, es la descarga del agua de un estanque con alta carga de nutrientes que podra producir eutroicacin
del cuerpo de agua receptor. Algunas de las tcnicas de manejo ms recientes incluyen el reciclaje o recirculacin de agua a travs de un sistema de estanques, el cual permite que el agua se depure y pueda volver a
ser usada; esta prcica de bioseguridad de la granja, permite reducir eluentes de los estanques, disminuir
la entrada de agua proveniente del estero (riesgo de introduccin de predadores, camarn silvestre y posibles enfermedades), bajar el costo de combusibles y evita la prdida de la producividad natural de los
estanques. Se debe agregar agua slo para reponer el nivel perdido por evaporacin, iniltracin o fugas.
Como un gesto de responsabilidad de los productores durante episodios patolgicos, se debe
evitar la descarga de eluentes en el momento de su identiicacin, as como inmediatamente despus
de una aplicacin de insumos destinados al control de dicho problema sanitario. De igual manera,
no se debe hacer recambio justo cuando se hacen aplicaciones de productos tendientes a mejorar
la calidad del agua de los estanques. Con la implementacin de un manejo tcnico basado en un
protocolo deinido, se tienen muchas posibilidades de mantener cerrados los estanques por mayor
tiempo durante el ciclo de produccin y disminuir considerablemente los recambios de agua con la
consecuente disminucin del volumen de eluentes. As mismo, disminuye el consumo de hidrocarburos para el bombeo de los recambios y se reducen los impactos al ambiente.
e.
Manejo de enfermedades en los camarones
La falta de evaluaciones frecuentes de la salud de los camarones puede facilitar la diseminacin de enfermedades entre estanques de la misma granja y de una granja a otra de la misma zona
o regin. La prdida casi total de una poblacin de camarones a causa de una infeccin, pudiera
incluso pasar desapercibida si no se realizan evaluaciones semanales meticulosas del estado de salud
de los camarones. Muchas enfermedades se presentan despus de perodos de estrs. Un dogma general de la acuicultura es que el ataque de enfermedades epidmicas se debe a prcticas de manejo
deicientes, las cuales debilitan la resistencia de animales cultivados. La prevencin consiste en evitar
las condiciones de estrs en el cultivo, la introduccin de enfermedades emergentes y la implementacin de buenas prcticas. Las condiciones de estrs en el estanque pueden presentarse por problemas
crnicos de la calidad del agua, tales como frecuentes niveles bajos de OD, altas concentraciones de
amonio no ionizado, altas densidades de camarn, temperaturas extremas durante el transporte o el
manejo, o una dieta deiciente.
El monitoreo de la salud de los camarones permite una temprana deteccin de las enfermedades. A la par, se deben disear e implementar procedimientos que ayuden a controlar la propagacin
de la enfermedad cuando esta se presente. La siguiente tabla 4, sugiere una gua para la interpretacin de la carga bacteriana en hemolinfa y hepatopncreas de camarones de cultivo, a partir de
siembras en agar TCBS:
345
Tabla 4: Gua para la interpretacin de resultados de crecimiento bacteriano en agar

TCBS en camarones juveniles y adultos (adaptado de Gmez-Gil, 2006).
Hemolinfa
(UFC/mL)
Tipos de UFC
Hepatopncreas
(UFC/g)
> 103
< 103
> 105
< 105
Verdes Luminiscentes 100%
Muy grave
Grave
Grave
Grave
Verdes > 50%
Grave
Serio
Serio
Serio
Verdes < 50%
Serio
Serio Normal
Serio
Serio - Normal
Amarillas
Serio
Normal
Normal
Normal
En caso de cualquier infeccin causada por virus, bacterias, hongos, parsitos u otros patgenos, se debe activar el plan de manejo sanitario de la granja aplicado para cada enfermedad en
particular, principalmente la ijacin de muestras para anlisis de laboratorio, con lo cual se podr
realizar histopatologa, prueba de la Reaccin en Cadena de Polimerasa (PCR) y anlisis microbiolgicos. Esto ayudar a identiicar las condiciones que facilitaron el surgimiento del brote. Sumado
a lo anterior, se deben tomar medidas inmediatas de bioseguridad tales como: a) notiicacin a la
autoridad competente, b) informar adecuadamente a las empresas vecinas, c) controlar la entrada y
salida de personal y de camarones a la empresa y d) minimizar el recambio hdrico y la consecuente
descarga de eluentes al ambiente. Las granjas de camarn deben contar con protocolos para el manejo de enfermedades, incluyendo planes de emergencia para enfermedades emergentes.
Se debe tener y poner en prctica un plan de manejo preventivo de las enfermedades, que
incluya monitoreos frecuentes de campo para evaluar el estado sanitario de las poblaciones, reduccin de factores de estrs, manipulacin cuidadosa, densidades de siembra segn la capacidad de la
granja, manejo de la calidad del agua, manejo apropiado de los alimentos, higiene, control de plagas
y aves y, cualquier otra entidad potencialmente transmisora de enfermedades. En caso de sospecha de
una enfermedad transfronteriza, emergente o de declaracin obligatoria de la OIE, se debe notiicar
a la autoridad competente del pas.
Es prioritario determinar la causa o agente patgeno de la enfermedad, as como su naturaleza
y extensin, para as deinir una estrategia de manejo y un plan de accin, el cual permita a los tcnicos decidir sobre la mejor alternativa o solucin para el problema. Se debe contar con laboratorios
de patologa de organismos acuticos nacionales, para que diagnostiquen las enfermedades de los
camarones, o, en caso necesario, laboratorios de referencia en el exterior.
De acuerdo con la OIE, los mtodos para la conirmacin de enfermedades que presentan
mayor sensibilidad y especiicidad, incluyen la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR por sus
siglas en Ingls). En la actualidad, existen kits comerciales de PCR para la deteccin de las principales
enfermedades infecciosas en camarones. Si se detecta un brote, se debe activar el plan de emergencia
implementado por la autoridad competente e imponer de manera inmediata restricciones al movimiento de personas y animales hacia dentro y fuera del rea afectada, mientras el contagio persista.
f.
Uso de medicamentos veterinarios, productos qumicos y biolgicos
Un gran nmero de qumicos son usados en acuicultura, pero slo unos cuantos tienen efectos
benicos. Las enfermedades de camarones con ndices altos de morbilidad y mortalidad y que son de
naturaleza viral, no se deben tratar con antimicrobianos porque stos no tienen ningn efecto sobre
346
los virus. En caso de conirmar una infeccin bacteriana secundaria, se pueden utilizar antimicrobianos para el control de dichas cepas, habiendo comprobado su susceptibilidad al producto y en la
medida en la que stos sean aprobados para tal in.
Algunos qumicos pueden causar efectos adversos a la biota de los cuerpos de agua receptores, tales como toxicidad o bio-acumulacin. El uso cuidadoso de los qumicos permitir bajar
costos y prevenir efectos dainos secundarios. El uso de medicamentos veterinarios y qumicos como
fertilizantes, plaguicidas, etc., debe hacerse para ines especicos como el control de enfermedades
acertadamente diagnosticadas o para el manejo de la calidad del agua de los estanques. Adems, las
concentraciones utilizadas no deben producir daos ambientales.
Se debe solicitar a los distribuidores de los productos qumicos y biolgicos utilizados en las
granjas, las respectivas ichas tcnicas, hojas de seguridad y certiicados de registro sanitario para
cada pas. As mismo, los productores deben seguir las recomendaciones en cuanto a dosis y manejo,
que el fabricante establece para cada presentacin. Los mismos deben usarse slo bajo prescripcin
de un mdico veterinario u otro profesional con competencias aprobadas (CAC/GL71-2009). Para
cada producto qumico o biolgico a utilizar, la granja debe contar con un plan de contingencia y
suministrar a los operarios los medios de proteccin recomendados en cada caso para evitar accidentes. Esto debe ir acompaado siempre de un perodo de capacitacin previo al uso del producto.
g.
Normativas Internacionales para medicamentos
Los sistemas de produccin de camarones deberan disearse y gestionarse para asegurar que
la exposicin a medicamentos veterinarios de los animales destinados a la produccin de alimentos,
no represente un riesgo para la salud humana. En el caso de los medicamentos veterinarios, su uso
constante (como proilctico) puede causar problemas en la salud humana, induciendo resistencia
en las bacterias que se estn tratando de combatir. Adems, la liberacin de estos productos en el
ambiente, puede afectar negativamente a otros organismos acuticos. Por esta razn, cabe recalcar
que los antimicrobianos slo se deben utilizar como tratamientos curativos cuando se conirme una
enfermedad bacteriana y nunca deben ser usados con la idea de hacer prevencin. Es mandatorio
respetar los tiempos de retiro antes de proceder con la cosecha de los camarones, so pena de estrictas
sanciones internacionales.
La lista de drogas autorizadas para su uso en acuicultura por la FDA (Food and Drug Administration) y EMEA (European Agency for the Evaluation of Medicinal Products) para ser empleados
dentro del territorio norteamericano y europeo, brindan una gua para los pases productores que
dependen de estos mercados para comercializar sus productos.
Si bien, la prohibicin legal que pueda existir para algn antibitico en los EE.UU. o en Europa, no se extiende para nuestra industria dentro de la legislacin nacional, esta inluye signiicativamente en el manejo que debe drsele al frmaco por parte de los productores y exportadores. Por
ejemplo, aquellos antibiticos prohibidos por la FDA y EMEA para su empleo en cualquier industria
productora de animales comestibles, como el cloramfenicol, nitrofuranos y luorquinolonas (ejemplos: enroloxacina, danoloxacina, etc.) no deberan ser utilizados por empresas acucolas conscientes de las nefastas consecuencias que podra tener el hallazgo de residuos de estos medicamentos en
camarn, peces o moluscos para nuestra industria acucola.
La FDA establece que es ilegal utilizar una droga no autorizada, a menos que est caliicada
como una nueva droga para investigacin animal (por sus siglas en ingls, INAD). Esta excepcin se
aplica tan slo durante el tiempo empleado para generar la informacin necesaria y obtener la aprobacin del frmaco bajo la supervisin de la FDA. Una vez completados los requisitos, se obtiene la
denominada aprobacin para una nueva droga animal (por sus siglas en ingls, NADA).
347
Los criterios sobre los cuales se evalan las medicinas veterinarias en la Comunidad Econmica Europea (CEE) son los de calidad, eicacia y seguridad. Este mismo autor caliica a la regulacin
europea y la norteamericana como muy similares, sealando que probablemente la nica diferencia
se observa en la rigidez como se establecen los lmites mximos de residuos (LMR) por parte de la
CEE, contrastando con el enfoque de niveles tolerables que se les brinda en los EE.UU.
La EMEA establece que no podr autorizarse la puesta en el mercado de un medicamento
veterinario, con excepcin de los inmunolgicos, para ser administrado a animales cuya carne o
productos sean destinados al consumo humano si no tiene establecido el correspondiente LMR (LMR:
contenido mximo de residuos resultante de la utilizacin de un medicamento veterinario autorizado
en la Comunidad como admisible en un producto alimenticio) tal y como est previsto en el Reglamento (UE) N0. 37/2010 de 22 de diciembre de 2009 relativo a las sustancias farmacolgicamente
activas y clasiicacin por lo que se reiere a los lmites mximos de residuos en los productos alimenticios de origen animal. El nuevo Reglamento UE introduce varias novedades, como son:
Se crean nicamente dos listas en lugar de los cuatro anexos anteriores: LMRs para sustancias
permitidas, y lista de sustancias prohibidas
Se introduce informacin acerca de la clasiicacin teraputica de las sustancias, as como posibles condiciones o restricciones de su utilizacin.
En la tabla 5 se presentan las Sustancias farmacolgicamente activas y su clasiicacin por lo

que se reiere a los lmites mximos de residuos (LMR)
Tabla 5. Sustancias autorizadas (del Reglamento 37/2010).

Sustancia
farmacolgicamente
Activa
Residuo
marcador
Especie animal
LMR
Tejidos diana
Otras disposiciones Reg.

470/2009
Clasiicacin
Teraputica
100 g/kg
50 g/kg
150 g/kg
150 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin
Para los peces, el LMR en el

msculo se reiere a msculo y
piel en proporciones naturales. Antiinfecciosos/
Los LMR en la grasa, el hgado Antibiticos
y el rin no se aplican a los
peces.
Amoxicilina
Todas las especies destinadas

a la produccin
de alimentos
50 g/kg
50 g/kg
50 g/kg
50 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Ampicilina

a la produccin
de alimentos
50 g/kg
50 g/kg
50 g/kg
50 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Bencilpenicilina
Bencilpenicilina

a la produccin
de alimentos
50 g/kg
50 g/kg
50 g/kg
50 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Cipermetrina
Cipermetrina
(suma de los
ismeros)
Salmnidos
50 g/kg
Msculo y piel
en proporciones Nada
normales

cido oxolnico cido oxolnico
a la produccin
de alimentos
Amoxicilina
Ampicilina
348
Antiparasitarios/
Agentes activos
frente a los ectoparsitos
Sustancia
farmacolgicamente
Activa
Residuo
marcador
Especie animal
LMR
Tejidos diana

470/2009
Clasiicacin
Teraputica
Todas las espeSuma de medi100 g/kg

cies destinadas
Clortetraciclina camento base y
300 g/kg
a la produccin
su 4-epmero
600 g/kg
de alimentos
Msculo
Hgado
Rin

peces.
Cloxacilina

a la produccin
de alimentos
300 g/kg
300 g/kg
300 g/kg
300 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Colistina

a la produccin
de alimentos
150 g/kg
150 g/kg
150 g/kg
200 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Danoloxacino
Danoloxacino

a la produccin
de alimentos
100 g/kg
50 g/kg
200 g/kg
200 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Deltametrina
Deltametrina
Peces
10 g/kg
Msculo y piel
normales
Dicloxacilina

a la produccin
de alimentos
300 g/kg
300 g/kg
300 g/kg
300 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Diloxacino
Diloxacino

a la produccin
de alimentos
300 g/kg
100 g/kg
800 g/kg
600 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Dilubenzurn
Dilubenzurn
Salmnidos
1000 g/kg
Msculo y piel
normales
Antiparasitarios/
Agentes activos
Emamectina
Emamectina
B 1a
Peces
100 g/kg
Msculo y piel
normales
Antiparasitarios/
Agentes activos
Enroloxacino
Suma de Enroloxacino
Y Ciproloxacino

a la produccin
de alimentos
100 g/kg
100 g/kg
200 g/kg
200 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin
Cloxacilina
Colistina
Dicloxacilina
Antiparasitarios/
Agentes activos

peces.
349
Sustancia
farmacolgicamente
Activa
Residuo
marcador
Especie animal
LMR
Tejidos diana

470/2009
Clasiicacin
Teraputica
Eritromicina A

a la produccin
de alimentos
200 g/kg
200 g/kg
200 g/kg
200 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Espectinomicina

a la produccin
de alimentos
300 g/kg
500 g/kg
1000 g/kg
5000 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Peces
1000 g/kg
Msculo y piel
naturales
100 g/kg
200 g/kg
2000 g/kg
300 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin
Peces
600 g/kg
Msculo y piel
naturales

a la produccin
de alimentos
300 g/kg
500 g/kg
1000 g/kg
5000 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Lincomicina

a la produccin
de alimentos
100 g/kg
50 g/kg
500 g/kg
1500 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Neomicina
(incluida Frami- Neomicina B
cetina)

a la produccin
de alimentos
500 g/kg
500 g/kg
500 g/kg
5000 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Oxacilina
Oxacilina

a la produccin
de alimentos
300 g/kg
300 g/kg
300 g/kg
300 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Oxicetetraciclina

cies destinadas
camento base y
300 g/kg
a la produccin
su 4-epmero
600 g/kg
de alimentos
Msculo
Hgado
Rin

peces.
Msculo
Hgado
Rin

peces.
Eritromicina
Espectinomicina
Florfenicol
Flumequina
Lincomicina
Paromomicina
350
Suma de
lorfenicol y de
sus metabolitos
Todas las espemedidos en
cies destinadas
lorfenicolaa la produccin
mina
de alimentos
Flumequina
Paromomicina
Todas las espe500 g/kg

cies destinadas
1500 g/kg
a la produccin
1500 g/kg
de alimentos
Antiinfecciosos/
Antibiticos

piel en proporciones naturales Antiinfecciosos/
peces
Antiinfecciosos/
Antibiticos
Sustancia
farmacolgicamente
Activa
Residuo
marcador
Saraloxacino
Saraloxacino
Salmnidos
30 g/kg
Msculo y piel
naturales
Sulfonamidas
(todas las
sustancias que
pertenecen al
grupo de sulfonamidas)
Medicamentos
base

a la produccin
de alimentos
100 g/kg
100 g/kg
100 g/kg
100 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin
Telubenzurn
Telubenzurn
Salmnidos
500 g/kg
Msculo y piel
naturales
Tetraciclina

cies destinadas
camento base y
300 g/kg
a la produccin
su 4-epmero
600 g/kg
de alimentos
Tianfenicol
Tilmicosina
Tilosina
Trimetoprima
Especie animal
LMR
Tejidos diana

470/2009
Clasiicacin
Teraputica
Antiinfecciosos/
Antibiticos

Antiinfecciosos/
piel en proporciones naturales.
QuimioterapuLos LMR en la grasa, el hgado
ticos
peces.
Antiparasitarios/
Agentes activos
Msculo
Hgado
Rin

peces.
Tianfenicol

a la produccin
de alimentos
50 g/kg
50 g/kg
50 g/kg
50 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Tilmicosina

a la produccin
de alimentos
50 g/kg
50 g/kg
1000 g/kg
1000 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Tilosina A

a la produccin
de alimentos
100 g/kg
100 g/kg
100 g/kg
100 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

peces.
Trimetoprima

a la produccin
de alimentos
50 g/kg
50 g/kg
50 g/kg
50 g/kg
Msculo
Grasa
Hgado
Rin

Antiinfecciosos/
piel en proporciones naturales.
QuimioterapuLos LMR en la grasa, el hgado
ticos
peces.
Fuente: Reglamento 37/2010.
Esta normativa 37/2010 entr en vigor a partir del 12 de Enero de 2010, quedando prohibido
el uso de medicamentos veterinarios que contengan sustancias farmacolgicamente activas mencionadas en la siguiente tabla 6 en animales productores de alimentos. Esta misma normativa es aplicable a los productos de acuicultura.
351
Tabla 6. Sustancias prohibidas

Sustancia farmacolgicamente activa
LMR
Aristolochia spp. y sus formulaciones
No puede establecerse LMR.
Cloramfenicol
Cloroformo
Clorpromazina
Colchicina
Dapsona
Dimetridazol
Metronidazol
Nitrofuranos (incluida la furazolidona)
Ronidazol
Fuente: Reglamento 37/2010.
Tabla 7. Drogas aprobadas para uso en acuicultura por la FDA.

ESPECIE
MEDICAMENTO
TOLERANCIA (LMR)
MATRIZ
Florfenicol
Bagre de canal y
salmnidos criados en
agua dulce
1,0 ppm
Msculo
Oxitetraciclina
Peces y Langosta
2.0 ppm
Msculo
Sulfamerazina
Trucha
No se permiten residuos
Sulfadimetoxina/
ormetoprim combinacin
Salmnidos y bagre
0.1 ppm por cada una
Tejido comestible
Fuente: Gua de Peligros y Controles de Pescados y de Productos Pesqueros. FDA Cuarta Edicin Abril 2011.
352
Tabla 8. Drogas PROHIBIDAS por la FDA para uso en medicacin veterinaria.

PRODUCTO
NIVEL
Medicamentos veterinarios prohibidos para su uso fuera de las indicaciones en los
animales (extra-etiqueta) - no se permiten residuos:
Cloramfenicol
Clenbuterol
Todos los peces
Dietilestilbestrol (DES)
Dimetridazole; Ipronidazole y otros Nitroimidazoles
Furazolidona; Nitrofurazone, y otros nitrofuranos
Fluoroquinolonas
Glicopptidos
Fuente: Gua de Peligros y Controles de Pescados y de Productos Pesqueros. FDA Cuarta Edicin Abril 2011.
h.
Manejo de desechos domsticos
La composicin de los desechos domsticos generados en una granja es variable y depende

de la cantidad de personas que residen y trabajan en la misma, as como de los hbitos de ellas.
Entre los desechos caractersticos se incluyen productos como pilas y otros componentes elctricos,
algunos de los pueden contener mercurio; contenedores con residuos de aceite, pinturas, materiales
custicos, agentes esterilizantes, lejas, medicinas, paales desechables, heces de animales y basura
asociada, junto con productos alimenticios desechados que se degradan rpidamente y emiten olor
desagradable.
La recogida, transporte o eliminacin de los desechos domsticos, pueden tener efectos ambientales adversos como contaminacin atmosfrica y olores desagradables; posibles peligros para la
salud por la acumulacin de agua contaminada que es medio de cra para mosquitos y atrae a moscas
y alimaas, entre otras plagas; prdida de tierra productiva debido a la presencia de productos de lenta degradacin, contaminacin del suelo y de aguas subterrneas y supericiales por lixiviacin con
los consiguientes efectos ambientales o riesgos para la salud y contaminacin del medio marino por
descarga de desechos. Las aguas servidas (o de desecho) deben ser tratadas para no contaminar las
reas circunvecinas, ya que stas contienen microorganismos que pueden ser dainos para la salud
del ser humano, animales domsticos y silvestres.
El uso de fertilizantes orgnicos no tratados y de alimentos sin una buena coccin (como alimento para los camarones) para levantar las poblaciones de itoplancton, podran causar problemas
de salud pblica por presencia de Escherichia coli, Salmonella spp. y otros organismos patgenos
para el hombre. Los sanitarios e instalaciones aines de las granjas deben tener sistemas bioseguros
de manejo para las aguas servidas, que eviten su iniltracin hacia cuerpos de agua utilizados para la
produccin de los camarones o, an peor, para consumo humano.
i.
Manejo durante la cosecha
Antes de iniciar la cosecha, se debe elaborar un plan donde quede deinido en cada paso,
quin, cundo, cmo y dnde deben cumplirse las actividades de la operacin, personal, materiales
y equipo; adems, para asegurar la preparacin de los estanques y el cumplimiento de los tiempos de
retiro de los alimentos medicados. Para proceder con la cosecha, los camarones deben reunir ciertas
condiciones tales como: tamao apropiado, buen estado sanitario (ausencia de enfermedades en ese
momento), caractersticas organolpticas apropiadas y condiciones fsicas aceptables segn las exi353
gencias del mercado. Para lograr estas condiciones, se recomienda que antes de 15 das de la fecha de
cosecha, se realicen muestreos para determinar estas caractersticas, tomando acciones anticipadas
en caso de ser necesario.
Una situacin que afecta la calidad del camarn, son las altas concentraciones de bacterias
y algas, principalmente las cianobacterias (Oscillatoria, Anabaena, Microcystis, entre otras) y actinobacterias (Actinomycetes, Streptomyces y Nocardia). Se recomienda retirar la alimentacin entre 24
y 48 horas antes de la cosecha, para evitar que la replecin por alimento en descomposicin dentro
del camarn luego de la cosecha, cause problemas en el hepatopncreas durante el procesamiento.
Durante el proceso de cosecha, es de gran importancia tener personal con experiencia y entrenado para dirigir las acciones, que no presente condiciones de salud deteriorada (heridas, infecciones
respiratorias o digestivas y otras infectocontagiosas) y llevar registros adecuados por cada recipiente
de cosecha, con respecto a la cantidad de hielo, cantidad de camarn, tiempo de llenado, tiempo
de captura por cada alzada y cantidad de metabisulito. Estos registros son parte de la trazabilidad y
permitirn hacer correcciones oportunas en caso de prdida de la calidad del producto.
Los camarones cosechados deben ser enhielados de forma inmediata y en la medida en que
van saliendo del estanque, de manera que stos mueran por choque trmico. Las dosis de metabisulito de sodio deben estar basadas en los requerimientos de los mercados de destino. En cuanto a la
degradacin del metabisulito en el ambiente, los mtodos para determinacin de biodegradabilidad
no son aplicables para sustancias inorgnicas. Sin embargo, de acuerdo con la icha tcnica del
producto, no es de esperarse una bioacumulacin en el ambiente, aunque puede tener un efecto
perjudicial sobre organismos acuticos (Fig. 8.1.10).
Las soluciones con metabisulito de sodio que han sido utilizadas en camarones as como las
que han quedado sin utilizarse, deben ser neutralizadas antes de su descarte. Para ello, se pueden
tratar con Carbonato de sodio como neutralizante, de acuerdo con las dosis de manejo que han sido
establecidas por el fabricante. Tambin se puede neutralizar el metabisulito de sodio utilizando 0.34
kg de carbonato de calcio (CaCO3) por cada kg de metabisulito presente en la solucin. Por otro
lado, se puede bajar a valores inferiores a 25% la concentracin del metabisulito de sodio antes de
descartarlo, mediante la dilucin con agua en el recipiente con el producto.
El camarn cosechado se debe manejar de manera rpida y eiciente y que muera por choque
trmico para no afectar su calidad. Adems, por ningn motivo se debe romper la cadena de fro
durante el transporte a las plantas de proceso o mercados. Todas las actividades o acciones que se
ejecuten durante la cosecha y post-cosecha de un estanque, deber estar debidamente registradas, as
como el pesaje del camarn, en un sistema de trazabilidad.
j.
Bioseguridad
Figura 8.1.10. Proceso de enhielado inmediato durante una cosecha en una granja camaronera, produciendo la
muerte de los camarones por choque trmico e iniciando de esta manera la cadena de fro. Foto cortesa del Ing. C.
Lara.
354
Las medidas de bioseguridad deben ser estrictamente aplicadas por todo el personal de la
granja, as como por personas ajenas a la granja que por alguna razn deban ingresar o pasar por
dentro de las instalaciones de la misma. Cada granja debe contar con programas de capacitacin y
tener un responsable del cumplimiento de dichas medidas, quien mediante protocolos y registros
asegure su aplicacin constante y sistemtica.
Para disminuir el riesgo de introduccin de enfermedades y facilitar la trazabilidad de un
problema de inocuidad, se debe contar con un sistema eiciente de control de entrada y salida de
personal y equipo rodante, as como un sistema de desinfeccin de los mismos diseado de manera
que no pueda ser obviado en ninguna circunstancia. Se debe tener una nica puerta de acceso, con
una caseta (garita) de control para a) el control de ingreso slo para quienes estn autorizados, b)
registro de los datos de vehculos y personas que ingresan, c) desinfeccin de stos antes del ingreso
a las instalaciones (rodiluvios y pediluvios) e) revisin respetuosa y gil de vehculos y personas que
abandonen la empresa (para evitar el hurto de materiales, equipos o camarn) y f) registro manual de
stos al salir de la granja. Las visitas deben ser dotadas de indumentaria de seguridad como botas de
caucho, gorra y bata (preferiblemente desechables), as como con un carnet de visitante que debe ser
portado en lugar visible y de manera permanente dentro de la granja.
La limpieza y desinfeccin de instalaciones de cultivo, conlleva la eliminacin total de los
camarones vivos o refrigerados y la desinfeccin de toda la instalacin. Antes de proceder con la
desinfeccin total de instalaciones, se deben tomar en cuenta lo siguientes aspectos:
Coordinacin de un plan de desinfeccin total de las instalaciones
Se debe planiicar un programa de cosechas, que permita que los camarones en cultivo alcancen
una talla comercial razonable y deinir un perodo prudencial hasta las nuevas siembras de postlarvas. Este lapso de tiempo entre cosecha y siembra, permitir implementar un vaco sanitario
en el estanque para realizar su limpieza y desinfeccin
Manejo apropiado de los camarones a desechar, que son aquellos animales vivos que quedan
enterrados o en charcos en los estanques de cultivo despus de las cosechas. Los camarones
muertos que quedan tras la cosecha, deben ser recogidos totalmente y enterrados aplicando
capas de hidrxido de calcio (cal apagada) u xido de calcio (cal viva)
Una vez que todos los camarones han sido eliminados de las unidades de cultivo, se debe
proceder a la desinfeccin, asumiendo que toda la granja est contaminada. Los siguientes desinfectantes son de uso comn en la limpieza de las instalaciones de cultivo de camarones: Cloro (como
hipoclorito de calcio o como hipoclorito de sodio). Este compuesto es altamente txico para organismos acuticos; su concentracin letal media (LC50) a 96 horas vara segn la especie entre 0.04
y 0.5 mg/L-1; yodo usado en su forma estable para desinfectar equipo; cal (como xido de calcio o
hidrxido de calcio); luz UV (ultravioleta), desecacin (luz solar), detergentes o compuestos orgnicos, entre otros.
El cloro y el yodo son muy txicos, se recomienda neutralizar estos productos con tiosulfato
de sodio (cinco moles de tiosulfato neutralizan cuatro moles de cloro). Las proporciones moleculares
son las mismas para el yodo. Por lo tanto, para inactivar el cloro, la cantidad de tiosulfato usada debe
ser 2.85 veces la cantidad de cloro (expresada en gramos): nmero de gramos de tiosulfato = 2.85
nmero de gramos de cloro. Para el yodo, la cantidad de tiosulfato debe ser 0.78 veces la cantidad de
yodo expresada en gramos: Nmero de gramos de tiosulfato = 0.78 nmero de gramos de yodo.
Tambin es posible preparar una solucin de tiosulfato al 1% por peso, en cuyo caso los volmenes
son los siguientes (en mL): para el cloro: 28.5 [nmero de litros de la solucin desinfectante concentracin de mg/litro] / 100; para el yodo: hay que multiplicar por 7.8 en vez de por 28.5.
355
Para los estanques de tierra, el vaco sanitario es una medida de desinfeccin que permite
mediante condiciones naturales (sol y viento) y con ayuda de la cal, disminuir la carga de organismos
patgenos en el fondo de los estanques. Esta es una prctica eiciente y econmica de desinfeccin,
para las granjas camaroneras. Se debe realizar un drenado completo del estanque y luego, mientras
el fondo an mantiene cierta humedad, hay que cubrir toda la supericie del fondo con cal a razn
de 1,000 kg/ha (si se usa xido de calcio) o 1,500 kg/ha (si se usa hidrxido de calcio). El estanque
debe dejarse reposar por varias semanas o al menos hasta que el fondo del estanque se haya secado
hasta el punto de presentar grietas de al menos 10 centmetros de profundidad. El estanque debe
permanecer seco hasta que la instalacin entera ha sido totalmente desinfectada.
Durante la estacin lluviosa, tambin es importante el proceso de desinfeccin de los estanques, aunque por las condiciones de humedad, el mismo se diiculta y slo se puede recurrir a un
drenado mximo posible y la posterior aplicacin de cloro en los charcos, e hidrxido u xido de
calcio sobre todo el fondo. Este mismo procedimiento de desinfeccin hay que aplicar a todos los
tanques de plstico, concreto o ibra de vidrio deben ser drenados y dejados secar. Despus, todas
las supericies interiores y exteriores deben ser rociadas con una solucin de cloro y dejadas as por
varias horas. Estas supericies deben cepillarse hasta dejarlas limpias de todo residuo adherido a sus
paredes. Los tanques deben llenarse totalmente con agua limpia, a la cual se debe agregar hipoclorito
de calcio hasta lograr una concentracin mnima de 200 ppm de cloro libre residual por toda una
noche. El agua debe luego ser drenada en su totalidad y los tanques se deben enjuagar y dejar secar.
Los equipos pueden agruparse en dos categoras: desechables y no desechables. Se consideran
desechables los equipos y utensilios relativamente baratos y de fcil adquisicin tales como mallas,
redes y mangueras aireadoras.
Todos los implementos que se puedan poner en remojo tales como tuberas removibles, piezas
plsticas de plomera, jaulas para transferencia, cajas de cosecha, mesas de cosecha, discos Secchi,
cristalera de laboratorio, etc., deben hacerlo en una solucin de 200 ppm de cloro libre residual por
24-48 horas. El equipo usado en actividades de cultivo a campo abierto, tambin debe ser puesto en
remojo en una solucin de 200 ppm de cloro libre residual y luego secado al sol. Los equipos elctricos y motorizados tales como tractores, camiones, herramientas elctricas, deben ser desinfectados
con soluciones comerciales comunes; lavados previamente y despus deben ser rociados con una
solucin de 200 ppm de yodo. Equipos pequeos tales como balanzas, bsculas, instrumentos de
medicin y pequeas herramientas elctricas deben ser limpiados con una esponja impregnada con
yodo. Los equipos de medicin electrnicos de alta precisin no deben ser expuestos al cloro ya que
la corrosin puede daarlos.
Igualmente hay que considerar la desinfeccin de oicinas cuya contaminacin comnmente
ocurre a travs del trico de personas desde reas contaminadas hacia reas administrativas. Todos
los pisos deben ser lavados con detergentes comunes y despus enjuagados con una solucin de 200
ppm de yodo, al igual que todos los mobiliarios presentes. Se deben desinfectar otras infraestructuras
de la inca, considerando limpieza previa con desinfectantes comunes, el siguiente paso consiste en
la cloracin. La persona que aplique el cloro en forma de gas, debe usar un traje impermeable, mscara anti-gas para cloro y anteojos protectores; tambin debe asegurarse de sellar todas las paredes y
secciones del techo del ediicio que pudieran permitir escapes de gas de cloro durante su aplicacin.
Las supericies que no admitan limpieza con cloro, deben ser desinfectadas con una esponja impregnada en yodo 200 ppm. Los pisos pueden ser inundados hasta una profundidad de 5 centmetros con
200 ppm de cloro libre residual, solucin que deber dejarse reposar por al menos 48 horas, para
despus ser enjuagada con agua dulce limpia.
356
Para un adecuado control y erradicacin de plagas en una granja, es importante considerar

las condiciones de higiene y limpieza en las que se mantiene el entorno de la misma. Es responsabilidad de la granja deinir un programa de control de plagas, en el cual se incluyan procedimientos,
alcances, medidas de seguridad y parmetros de control, as como un adecuado sistema de registro
y veriicacin. Para esto, se debe contratar una compaa de control de plagas certiicada y debidamente registrada ante la Autoridad Competente. El procedimiento ms relevante dentro del programa
de control y erradicacin de plagas, es la aplicacin de medidas preventivas tales como recoger
diariamente toda la basura que se genera y ubicar los desechos orgnicos en un lugar apropiado (o
ser enterrados con cal).
Todas las actividades realizadas con la bioseguridad de una granja camaronera, deben estar
documentadas mediante registros completos y actualizados. Por consiguiente, deben existir formularios diseados para la captacin de datos segn las diferentes necesidades de la granja y en funcin
de las variables monitoreadas como parte de la bioseguridad. La veriicacin debe determinar el
grado en que las actividades relacionadas con la produccin se realizan conforme a las medidas de
bioseguridad, siguiendo un calendario preestablecido que debe ser dado a conocer a los evaluadores
y evaluados con suiciente anticipacin. La veriicacin debe estar basada en un documento que
deina las buenas prcticas, el cual debe estar disponible para consulta y aplicacin del personal.
8.2.
Sistema de disposicin de desechos segn su clasiicacin y posibilidad de reciclaje
Las granjas deben implementar un plan de gestin ambiental que debe tener como principios
la cultura de reducir, reusar y reciclar. En cada rea de generacin de desechos, se deben disponer
recipientes de acuerdo con su clasiicacin y posibilidad de reciclaje. A pesar de que no existe una
clasiicacin internacional para los colores de los recipientes de los desechos segn sus caractersticas, se propone la siguiente: verdes para la colecta de vidrio, amarillos para aceites reciclables,
blancos para otro material reciclable, rojos para residuos qumicos y biolgicos peligrosos, azul para
papel y cartn y gris para materiales orgnicos (biodegradables).
La basura, desperdicios, desechos humanos y de cualquier otro tipo que se produzca en la
granja, deben ser descartados cumpliendo las disposiciones nacionales, utilizando letrinas porttiles,
rellenos sanitarios o sitios claramente deinidos para tal in, donde no se produzcan problemas de
olor o presencia de animales salvajes.
8.3.
Uso de energa
El uso de energa elctrica dentro de las granjas de camarn, es todava indispensable para su
funcionamiento y productividad. En funcin de la economa y de la proteccin del ambiente, se debe
evitar el desperdicio de la misma. El uso de combustibles hidrocarburados (gasolina o diesel) debe
hacerse de manera racional, pues en las actividades de produccin este es uno de los renglones que
ms incide en los costos de una granja camaronera.
Es importante entonces que las empresas dedicadas al cultivo del camarn, consideren la posibilidad de acceder a fuentes alternativas de energa tales como la solar, elica, geotrmica y biomasa.
8.4.
Planes de contingencia
Debe ser operativo y expresar claramente lo que hay que hacer, por quin y cundo. Los
planes de contingencia cubren situaciones principalmente en el campo operativo y ambiental; son
necesarios para minimizar daos al personal, al ambiente y a la infraestructura, ocasionados por accidentes o emergencias ocurridas dentro de la granja camaronera.
357
En caso de accidentes, como el derrame de aceite o combustible en los estanques, canales o

lagunas de sedimentacin, se debe contar con medidas de mitigacin que aseguren procedimientos
especicos a desarrollar hasta que se resuelva el problema y las actividades normales de la granja.
Dentro del plan de contingencia, deben estar especiicados los mecanismos de notiicacin oportuna
del problema a las autoridades ambientales. Tambin deben estar bien establecidos qu cargos dentro
de la empresa son los responsables de poner en marcha cada una de las fases del plan de contingencia. Un buen plan debe ser exhaustivo aunque no demasiado detallado, bien estructurado, de fcil
lectura y comprensin y, fcil de actualizar.
8.5.
Registros en una granja camaronera
Los registros del proceso de produccin desde la siembra hasta la cosecha, permiten estandarizar y rastrear los procedimientos operacionales (trazabilidad) en cada paso del proceso, as como
mantener un control de insumos y seguimiento a las variables fsicas, qumicas y biolgicas del sistema de produccin durante el ciclo de cultivo.
Los registros que se deben llevar en una granja camaronera, incluyen todos aquellos que
estn relacionados con bioseguridad, produccin (muestreos semanales de peso y supervivencia,
monitoreos sanitarios, consumo de alimento, medicaciones, aplicacin de insumos, cosecha, etc.),
almacenes (materiales, insumos, alimento, repuestos, madera, etc.), depsitos de combustible, talleres, adquisicin y mantenimiento de equipos (vehculos, bombas, cosechadoras, oxmetros, microscopios, etc.), reuniones, visitas tcnicas, capacitacin, jornadas mdicas, aspectos del personal
(incapacidades, permisos, vacaciones, promociones, evaluaciones, boniicaciones, amonestaciones,
etc.) y todas aquellas actividades que permitan hacer un anlisis retrospectivo en la empresa.
8.6.
Trazabilidad
Entre las normas de carcter horizontal, el Reglamento N178/2002, artculo 18 del Consejo
del Parlamento Europeo, sent las bases para la puesta en marcha de mtodos de trazabilidad por
parte de todos los operadores de la cadena alimentaria. Esta disposicin entr en vigor en febrero de
2002 y el artculo fue aplicable a partir del 1 de enero de 2005.
La trazabilidad debe sustentarse en un proceso iable de recopilacin y gestin de los datos
generados en todas las actividades inherentes a la inocuidad del producto cosechado, que se desarrollen en la granja. Este proceso puede basarse en registros impresos o informatizados. Su aplicacin
presenta amplias ventajas tanto para el productor, como para los consumidores y la Autoridad Competente.
La trazabilidad como herramienta para rastrear el origen del producto y sus insumos dentro
de la cadena de abastecimiento de alimentos, permite identiicar y registrar cada producto desde
su origen hasta el inal de la cadena de comercializacin. Desde el punto de vista productivo, los
sistemas de trazabilidad mejoran la gestin de la unidad productiva (CPLs, granjas, plantas de procesamiento, transporte y distribucin), al disponer de registros sistematizados y funcionales conforme a
las necesidades de cada unidad. Un buen sistema de trazabilidad en la cadena alimentaria, no slo
juega un importante papel en la proteccin de los intereses del consumidor, sino que aporta grandes
beneicios para las empresas.
358
8.7.
Referencias Bibliogricas
Bolao, M.A. (2004). Buenas prcticas de manejo en el cultivo del camarn cultivado. Fondo Mundial para la Naturaleza (WWF) PROARCA. San Jos, Costa Rica.
Boyd, C.E. (1992). Soil and sediment management review: shrimp pond bottom soil and sediment
management. In: Wyban, J. (ed). Proceedings of the Special Session on Shrimp Farming.
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360
Abreviaturas
ABREVIATURAS
Acrnimo
Nombre original
ADN
cido desoxirribonucleico
ARN
cido ribonucleico
AFA
Alcohol, formol, cido actico
A-T
Adenina - Timina
Nombre traducido
(Fijador de Davidson-AFA)
BAPNA
N-benzoil-arginina-p-nitroanilida
BCIP/NBT
(bromo-chloro-indol) dihydrogen phosphate

[BCIP] / nitro-blue tetrazolium [NBT]
Solucin BCIP/NBT utilizada para reacciones

colorimtricas
BGBP
-1,3-Glucan Binding Protein
Protena de unin al -1,3-Glucano
BP
Baculovirus penaei
BPM
Buenas prcticas de manejo
BSA/PBS
Solucin BSA/PBS [Bovine Serum Albumin /

Phosphate buffered saline]
CAIs
Cuerpos de inclusin intranucleares de

Cowdry tipo A
cc
Centmetro cbico
CDC
Centers for Disease Control and Prevention
CEE
Comunidad Econmica Europea
C-G
Citosina - Guanina
CPLs
Centros de produccin larval
BSA= albmina de suero bovino; PBS=

fosfato salino tamponado
Centro para el Control y la Prevencin de

Enfermedades
CV
Coeiciente de variacin
DIANA
rganos o tejidos target, a donde se

dirigen ataques de agentes patgenos
DIG
Digoxigenina
EDTA
Ethylenediaminetetraacetic acid
cido etildiaminotetraactico
EIA
Enzyme Immunoassays
Inmunoanlisis ligado a enzimas
ELISA
Enzyme linked immunosorbant assay
Prueba de enzimas marcadas

inmunoabsorbentes
EM
Electron Microscopy
Microscopa electrnica
EMEA
European Agency for the Evaluation of

Medicinal Products
Agencia Europea de Medicamentos
EMS
Early Mortality Syndrome
Sndrome de mortalidad temprana
EOL
Esferoides del rgano linfoide
EUA
Estados Unidos de Amrica.
FAO
Food and Agriculture Organization of the

United Nations.
FCA
Factor de conversin alimenticia
FDA
Food and Drug Administration
Agencia de Medicamentos y Alimentos
GAA
Global Aquaculture Alliance
Alianza Mundial de la Acuicultura
HACCP
Hazard Analysis of Critical Control Points
Anlisis de Riesgos y Puntos Crticos de

Control
H&E
Hematoxilina y eosina
HIS
In situ hibridization
Organizacin de las Naciones Unidas para la

Alimentacin y la Agricultura
Hibridacin in situ
361
Acrnimo
Nombre original
Nombre traducido
IHHNV
Infectious Hypodermal and Hematopoietic

Necrosis Virus
Virus de la Necrosis Infecciosa Hipodrmica

y Hematopoytica
IMNV
Infectious Myonecrosis Virus
Virus de la Mionecrosis infecciosa
INAD
Investigation New Animal Drug
Nueva Droga para Investigacin Animal
ISO
International Standards Organization
Organizacin Mundial para la

Estandarizacin
LAMP
Loop-mediated isothermal ampliication
Ampliicacin isotrmica de cidos nucleicos

[Ampliicacin isotrmica mediada por
vueltas/bucles]
LBP
Lipopolysaccharide Binding Protein
Protena de unin a los lipopolisacridos de

la pared de bacterias Gram negativas
LC50
Lethal Concentration 50
Concentracin Letal media (50%)
L-DOPA
L-3,4-dihydroxyphenylalanine
L-3,4-dihidroxifenilalanina
LMR
Lmites mximos de residuos
LPS
Lipopolisacridos
MAbs
Monoclonal antibodies
MIC
Concentracin mnima inhibitoria
MO
Materia orgnica
mL
Mililitro
Nitrgeno
NADA
New Animal Drug Application
NADPH
Nicotinamida adenina dinucletido fosfato
NaCl
Cloruro de sodio (sal pura)
NHP
Necrotizing hepatopancreatitis
NOS
xido ntrico sintasa
NSHP
Necrosis Sptica del Hepatopncreas
OD
Oxgeno disuelto
OIE
Organizacin Mundial de Sanidad Animal
OIRSA
Organismo Internacional Regional de

Sanidad Agropecuaria
OL
rgano linfoide
OPS
Organizacin Panamericana de la Salud
OSPESCA
Organizacin del Sector Pesquero y Acucola

del Istmo Centroamericano
Fsforo
PAbs
Polyclonal antibodies
Pruebas de anticuerpos policlonales
PAS
Periodic acid-Schiff
cido peridico de Shiff
Pruebas de anticuerpos monoclonales
Proceso para la aprobacin de una nueva

droga (antimicrobiano) para uso animal
Hepatopancreatitis necrotizante (causada por

Hepatobacter penaei)
pb
PCBs
Policlorbifenilos o bifenilos policlorados
PCR
Polymerase Chain Reaction
PLs
Postlarvas
POES
Procedimientos Operacionales
Estandarizados de Saneamiento
362
Reaccin en Cadena de la Polimerasa
Abreviaturas
Acrnimo
Nombre original
Nombre traducido
ppm
Partes por milln (uL/L, mg/Kg o g/Ton)
PRPs
Patrones de reconocimiento de protenas
PvNV
Penaeus vannamei nodavirus
Nodavirus del Penaeus vannamei
qPCR
Quantitative PCR/Real Time PCR
Prueba de PCR en tiempo real, cuantitativa o

reaccin en cadena cintica de la polimerasa
RDS
Runt Deformity Syndrome
Sndrome de deformidad y enanismo
RT-PCR
PCR con transcriptasa reversa
SANCO (DG
SANCO)
European Commissions Directorate-General

for Health and Consumer
SAEMA
Sistema de Alerta Epidemiolgica y de

Manejo Acucola
SENASICA
Servicio Nacional de Sanidad, Inocuidad y

Calidad Agroalimentaria
SHPN
Septic hepatopancreatic necrosis
SICA
Sistema de la Integracin Centroamericana
SPF
Speciic Pathogen Free
Libre de patgenos especicos
SPR
Speciic Pathogen Resistant
Resistente a patgenos especicos
Taq
Thermus aquaticus
Bacteria marina de profundidad que vive en

las termales submarinas
TBE
Tris/Borate/EDTA
Solucin tampn Tris Borato EDTA
TCBS
Agar tiosulfato, citrato, bilis, sacarosa
TEM
Transmission electron microscopy
Microscopa electrnica de transmisin
TNE
TNE buffer
Solucin tampn TNE
TSA
Trypticase soy agar
Agar tripticasa soya
TSV
Taura Syndrome Virus
Virus del Sndrome de Taura
UE
Unin Europea
UFC
Unidades formadoras de colonias
UV
Ultravioleta
WSSV
White Spot Syndrome Virus
Virus del Sndrome de la Mancha Blanca
YHV
Yellow Head Virus
Virus de la Cabeza Amarilla
Direccin General de Salud y Consumidores

de la Comisin Europea
Necrosis sptica del hepatopncreas (NSHP)

(causada por Vibrio spp.)
363
Glosario
Abitico
Agente no biolgico.
Abonera
Letrina.
Acelular
Signiica sin clulas y hace referencia a tejidos conformados por

capas o estructuras orgnicas sin presencia de clulas (ej: cutcula del
camarn).
cido
Compuesto orgnico o inorgnico que reacciona con un metal desprendiendo hidrgeno; reacciona con una base para formar una sal;
se disocia en disolucin acuosa dando iones hidrgeno (hidrogeniones); tiene un pH menor que 7 y neutraliza medios bsicos o alcalinos aceptando un par de electrones de la base y formando un enlace
covalente entre el cido y la base. Se dividen en cidos orgnicos e
inorgnicos minerales; orgnicos son aquellos que presentan carbono
(C) en su estructura.
Adsorcin
Propiedad de adherirse. Proceso por el cual tomos, iones o molculas son atrapados o retenidos en la supericie de un material en
contraposicin a la absorcin, que es un fenmeno de volumen. Es
decir es un proceso en el cual un contaminante soluble (adsorbato)
es eliminado del agua por contacto con una supericie slida (adsorbente). El proceso inverso a la adsorcin se conoce como desorcin.
Alatoxinas
Son toxinas producidas por el hongo Aspergilus lavus.
Aforar
Aadir disolvente (agua por ejemplo) a un recipiente que tiene una

marca que nos indica el volumen conocido y precisamente medido
que cabe en dicho recipiente hasta esa marca.
Agar
Medio de cultivo slido que se utiliza para el aislamiento de bacterias.
Agente patgeno
Es toda aquella entidad biolgica capaz de producir enfermedad o

dao en la biologa de un hospedero (humano, animal, vegetal, etc.)
sensiblemente predispuesto.
Agudo
Proceso patolgico o aparicin de enfermedad que se presenta poco

tiempo despus de la infeccin.
Alcalino
Compuesto cuyo pH es superior a 7.
Aldehdo
Son compuestos orgnicos caracterizados por poseer el grupo funcional CHO.
Aleatorio
Realizado al azar, sin hacer escogencia o seleccin de organismos.
Alcuota
Es el volumen o cantidad de masa que se va a emplear en una prueba

de plataforma o de laboratorio. Se suele medir en mililitros (mL) o
gramos diluidos (g).
Aminocido
Los aminocidos son los elementos con los que se construyen las protenas. Son molculas que contienen un grupo Carboxilo (-COO) y un
grupo amino (-NH2) libre.
364
Glosario
Anaerbico
Organismo capaz de sobrevivir, crecer o funcionar en ambientes que

no tienen oxgeno.
Anlisis histolgico
Estudio de tejidos previamente ijados y procesados mediante tcnicas estandarizadas, con el in de observar cambios microscpicos en
clulas, tejidos u rganos, causados por enfermedades infecciosas,
ambientales, txicas o idiopticas. Estos estudios se hacen a partir de
lminas histolgicas preparados en laboratorios especializados.
Anamnesis
Parte del examen clnico que rene todos los datos histricos de la
enfermedad, anteriores al brote en estudio. Es suministrada por el personal tcnico de campo o por el granjero.
Antibitico
Medicamento que se utiliza para tratar una infeccin bacteriana, y

que por su efecto, mata o impide el crecimiento de ciertas clases de
bacterias, pero que normalmente es inofensivo para el hospedero.
Anticuerpo
conjugado
Anticuerpo marcado con una enzima que le ha sido adherida como la

peroxidasa o la fosfatasa alcalina.
Antimicrobiano
Compuestos qumicos o naturales (antibiticos) obtenidos de microorganismos, plantas o por va sinttica, utilizados para matar (bactericidas) o inhibir el crecimiento (bacteriostticos) de microorganismos
como bacterias, hongos y protozoarios. Su uso en acuicultura debe
estar sujeto a la susceptibilidad del agente a tratar y a la aprobacin
que exista para ser utilizado en terapias curativas.
Antisptico
Son sustancias antimicrobianas que se aplican a un tejido vivo o sobre

la piel para reducir la posibilidad de infeccin, sepsis o putrefaccin.
Apndice
En los artrpodos, se denomina apndice a las estructuras anatmicas

pares formadas por elementos articulados entre s, que se insertan en
todos o algunos de los metmeros del cuerpo.
Apoptosis
Funcin que controla la muerte de las clulas, de forma programada.
ARN monocatenario
Es un cido ribonucleico de cadena sencilla (una sola hebra de ARN),

el cual es comn en cierto tipo de virus (ej.: TSV en camarones).
Asptico
Es la condicin libre de microorganismos que producen enfermedades o infecciones. El trmino puede aplicarse tanto a situaciones quirrgicas como mdicas. La prctica de mantener en estado asptico
un rea, se denomina tcnica asptica.
Atroia
En trminos biolgicos consiste en una disminucin importante del

tamao de la clula y del rgano del que forma parte, debido a la
prdida de masa celular.
Autoclave
Dispositivo que sirve para esterilizar material mdico o de laboratorio, utilizando vapor de agua a alta presin y temperatura.
Bacilo
Son bacterias con forma de bastn cuando son observadas en un microscopio.
Bacterias
Microorganismos unicelulares en forma de ilamentos, cocos y estructuras espirales: No poseen cloroila.

365
Bacterias Gam
negativas
Las que se tien de rosa o rojo con la tincin de Gram (violeta de

metilo-safranina).
Bacterias patgenas
Las que causan enfermedades tanto a los animales, vegetales y al

hombre.
Bactericida
Sustancia que tiene la propiedad de destruir las bacterias.
Bases (nitrogenadas)
Tambin conocidas como bases nucleicas o nucleobases, son compuestos orgnicos cclicos con dos o ms tomos de nitrgeno, que
constituyen la parte fundamental de los nucletidos, nuclesidos y
cidos nucleicos. Existen cinco bases nitrogenadas principales que
se clasiican en purnicas (derivadas de la estructura de la purina) y
pirimidnicas (derivadas de la estructura de la pirimidina). La adenina (A) y la guanina (G) son purnicas, mientras que la timina (T), la
citosina (C) y el uracilo (U) son pirimidnicas. Las cuatro primeras se
encuentran en el ADN, mientras que en el ARN en lugar de timina
existe el uracilo.
Basoflico (basilo)
Coloracin azul-morada (clara u oscura) que toman ciertas estructuras

cidas de las clulas (ej.: el ncleo), luego de ser teidas con colorantes bsicos como la Hematoxilina.
Bacteriemia
Presencia de bacterias en la hemolinfa.
Bioacumulacin
Es la acumulacin de metales pesados, hidrocarburos clorados u otras

sustaancias percistentes, en los rganos y tejidos de los organimsos
acuticos u otros seres vivos. Estos elementos se pueden encontrar en
concentraciones muy altas dentro de los tejidos, a pesar de encontrarse extremadamente diluidos en el medio acutico circundante.
Bioensayo
Experimento que se hace utilizando organismos vivos, bajo condiciones y ambientes controlados.
Biopsia
Toma y examen de una pequea parte del tejido o liquido corporal del
organismo para completar un diagnstico sobre su estado de salud.
Bioseguridad
Segn la FAO y la OIE, consiste en el estado ideal en el que se establecen medidas para prevenir la introduccin y la propagacin de la
enfermedad, o el enfoque o los principios utilizados para lograr esta
circunstancia. Las medidas de bioseguridad deben ser implementadas
para minimizar los riesgos del ingreso de enfermedades a las unidades de produccin individual (bioexclusin), as como para evitar los
riesgos de transmisin hacia afuera (biocontencin) y hacia adelante
a travs de la cadena del mercado.
Bitico
Organismos que comparten un mismo ambiente en un tiempo determinado.
Biotipo
Forma tpica de organismos vivos que puede considerarse modelo de

su especie, variedad o raza.
366
Glosario
Brote
Aparicin de dos o ms casos de una misma enfermedad, en los que

se observa una relacin con un agente etiolgico comn, establecindose esta relacin en trminos de tiempo, lugar y tipo de organismos
afectados.
Calambre
Proceso de fatiga muscular que implica una contraccin rgida del

msculo esqueltico, producida por un perodo de hipoxia prolongado.
Calidad del agua
Complejo de variables isicoqumicas del agua relacionadas con la

acuicultura.
Camaronicultura
Cultivo de camarones.
Cpside
Estructura proteica formada por una serie de monmeros llamados

capsmeros. En el interior de esta cpside se encuentra siempre el
material gentico del virus.
Cariorrexis
Fragmentacin de la cromatina y su distribucin por el citoplasma

como resultado de la desintegracin nuclear.
Cefalotrax
Cabeza del camarn; estructura que contiene rganos y tejidos propios del trax y de la cabeza.
Cepa
En microbiologa se puede deinir como un conjunto de especies bacterianas que comparten al menos una caracterstica.
Citoptico
Efecto daino o destructivo que un txico qumico o biolgico ejerce

sobre las clulas.
Citoplasma
Es la parte del protoplasma que en una clula eucariota, se encuentra

entre el ncleo celular y la membrana plasmtica.
Citosol
Tambin llamado hialoplasma, es el gel acuoso que est en el interior

de la clula y que se encuentra fuera de las membranas internas cuando estas existen. Corresponde a ms de la mitad del volumen celular y
est presenta tanto en clulas procariotas como en eucariotas.
Coagulacin
Mecanismo isiolgico utilizado por los organismos para evitar perdida de sangre o hemolinfa, mediante la activacin de factores que
detienen su salida a travs de una herida.
Coalescer
Es la posibilidad de que dos o ms materiales se unan en un nico

cuerpo.
Conspicuas
Caractersticas o condiciones (patolgicas en este caso) que son sobresalientes, llamativas o ms frecuentemente visibles.
Contingencia
Posibilidad de que algo suceda o no suceda.
Control
Muestra que se excluye de un anlisis experimental, para que sirva de

referencia en la evaluacin de resultados de la parte analizada.
Control biolgico
Es un mtodo de control de plagas, enfermedades que consiste en

utilizar organismos vivos con el objeto de controlar las poblaciones
de otro organismo.
367
Coppodo
Son una subclase de crustceos maxilpodos de tamao muy pequeo, muchas veces microscpicos, que se encuentran abundantemente, tanto en agua dulce como salada.
Cromatina
Es el conjunto de ADN, histonas y protenas no histnicas que se encuentra en el ncleo de las clulas eucariotas y que constituye el
cromosoma eucaritico.
Cromatforos
Son clulas con pigmentos en su interior que relejan la luz.
Crnico
Se llama enfermedad crnica a aquella patologa de larga duracin,

cuyo in o curacin no puede preverse claramente o no ocurrir nunca.
Cuarentena
Es la accin de aislar o apartar a animales durante un perodo de tiempo, para evitar o limitar el riesgo de que extiendan una determinada
enfermedad contagiosa.
Cutcula
Es la capa ms exterior del tegumento, inmediatamente por encima

de la epidermis (epitelio cuticular) y segregada por sta. Es una formacin rgida, acelular (sin clulas), de estructura compleja y compuesta
por quitina y calcio entre otras sustancias.
Debris
Desechos, detritos o residuos orgnicos microparticulados, como resultado de la descomposicin de una masa slida en pequeas partculas que pueden lotar en el cuerpo de agua o precipitarse al fondo.
Degradacin
Transformacin de una sustancia compleja en otra de estructura ms

sencilla.
Diagnstico
Conocimiento y estudio de los signos de una enfermedad, para la

determinacin del carcter y causa de la misma.
Diagnstico
deinitivo o
conirmatorio
Conocimiento inal sobre la o las causas de una enfermedad, obtenido despus de realizar y analizar informacin histrica y de campo,
pruebas de campo y pruebas de laboratorio.
Diagnstico
presuntivo
Es la causa probable de una enfermedad, cuyo conocimiento debe

an profundizarse ms mediante pruebas adicionales para llegar a un
diagnstico deinitivo o conirmatorio.
Diagnstico en
paralelo
Combinacin de pruebas diagnsticas en las que slo se consideran

como resultados negativos aquellos que han sido negativos para ambas pruebas, y como positivos el resto.
Digestin
Proceso de transformacin de los alimentos que son ingeridos en sustancias ms sencillas para ser absorbidos.
Ectodermis
Es el comienzo de un tejido que cubre las supericies del cuerpo.

Emerge primero y forma la capa externa de las capas germinativas.
Ectoparsito
Parasito que vive sobre la supericie del hospedero.
Ectpico
Que se produce o est fuera de su lugar habitual. En camarones sucede cuando los esferoides del rgano linfoide, se producen y maniiestan en otros rganos o tejidos diferentes.
368
Glosario
Edema
Es la acumulacin de lquido en el espacio tisular intercelular o intersticial y tambin en las cavidades del organismo, debido al incremento
en la transudacin de los lquidos capilares.
ELISA
Tcnica de inmunoensayo en la cual un antgeno inmovilizado se

detecta mediante un anticuerpo marcado con una enzima, la cual es
capaz de generar un producto detectable por cambio de color o por
algn otro tipo de reaccin medible u observable.
Encapsulacin
Formacin de una cpsula aislante alrededor de un cuerpo extrao.

Se puede dar a nivel celular o tisular.
Endmico
Una enfermedad que se presenta sistemticamente, de manera regular y sin variaciones apreciables de poblacin afectada dentro de un
segmento demogrico.
Endocitosis
Proceso mediante el cual una clula captura sustancias extracelulares

y las pasa a su interior mediante englobamiento e invaginacin de la
membrana citoplasmtica.
Endoparsito
Parsito que se encuentra en el interior de los animales.
Enfermedad
Proceso mrbido deinitivo, el cual tiene una cadena de signos caractersticos que pueden afectar el cuerpo entero o alguna de sus partes
y su etiologa, patologa y pronstico, pueden ser conocidos o desconocidos.
Enfermedad Aguda
Aquellas enfermedades que tienen un inicio y un in claramente deinidos. Generalmente son de corta duracin, aunque no hay un consenso en cuanto a que plazos deinen a una enfermedad como aguda
y cual como crnica.
Enfermedad
emergente
Designa una enfermedad grave recin identiicada, de causa determinada o an indeterminada, que puede ser propagada a y entre poblaciones, por medio del comercio de animales acuticos y/o productos
de animales acuticos. Cdigo Acutico, OIE 2009.
Enfermedad
enzotica
Consiste en una enfermedad que afecta a una o ms especies animales en un determinado territorio, por causa o inluencia local. Normalmente este tipo de enfermedades se mantiene con una prevalencia
estable dentro de una poblacin animal y dentro de un rea geogrica determinada.
Enfermedad
transfronteriza
Son aquellas de gran importancia econmica y comercial para la seguridad alimentaria en un considerable nmero de pases; se pueden
propagar fcilmente a otros pases y alcanzar proporciones de epidemia y exigen la cooperacin entre naciones para su manejo y control,
incluida su exclusin. Anteriormente eran llamadas enfermedades
exticas.
Enzima
Son sustancias de naturaleza proteica que catalizan reacciones qumicas siempre que sea termodinmicamente posible (si bien no pueden
hacer que el proceso sea ms termodinmicamente favorable). Las
enzimas sirven para controlar las reacciones qumicas, acelerndolas.
369
Eosina
Es un colorante cido de color rosado oscuro usado en preparaciones

histolgicas, cuya propiedad est basada en su polaridad negativa lo
que le permite enlazarse con constituyentes celulares de carga positiva (alcalinos).
Eosinoflico
(eosinilo)
Coloracin roja (clara u oscura) que toman ciertas estructuras bsicas

de las clulas (ej.: citoplasma), luego de ser teidas con colorantes
cidos como la Eosina.
Epicomensal
Parsito que se adhiere a la parte externa de las hospederos, utilizndoles como sustrato.
Epidemia
En su deinicin tradicional, es una enfermedad ampliamente extendida que afecta a muchos individuos en una poblacin.
Epitelio
Es el tejido formado por una o varias capas de clulas yuxtapuestas

que recubren todas las supericies libres del organismo, y constituyen el recubrimiento interno de las cavidades y rganos. Los epitelios
tambin forman el parnquima de muchos rganos.
Epizootia
Es una enfermedad contagiosa que ataca a un nmero inusual de animales al mismo tiempo y lugar y se propaga con rapidez. El trmino
epizootia est cayendo gradualmente en desuso puesto que en la actualidad se preiere el trmino epidemia.
Esclerotizacin
Es el endurecimiento y oscurecimiento de la quitina en el exoesqueleto.
Especiicidad
Capacidad de una prueba de diagnstico para determinar de coniable un agente infeccioso especico, sin riesgos mayores de reaccin
cruzada con otro patgeno distinto. Probabilidad de detectar correctamente un animal sano.
Espcimen
Es aquel individuo o parte de un individuo que se toma como muestra, especialmente el que se considera representativo de los caracteres
de la poblacin a la que pertenece.
Espermatforo
Es una cpsula o masa creada por los especimenes macho de varios

invertebrados, que contienen espermatozoides, siendo integralmente
introducida al rgano sexual femenino durante la cpula.
Esterilizacin
Procesos fsicos o qumicos mediante los cuales se elimina el 100%

de los microorganismos contaminantes presentes en un sustrato.
Estrs
Es toda demanda fsica o isiolgica que se le haga al organismo. Puede ser causada por enfermedades o ser de origen sptico, nutricional
o ambiental.
370
Glosario
Estuario
Es la parte ms ancha y profunda en la desembocadura de los ros,

en los mares abiertos o en los ocanos, en aquellas zonas donde las
mareas tienen mayor amplitud u oscilacin. La desembocadura en
estuario est formada por un solo brazo o curso luvial muy ancho y
profundo, aunque tambin suele tener a modo de playas a ambos lados en las que la retirada de las aguas permite crecer algunas especies
vegetales que soportan aguas salinas.
Etiologa
Agente o parmetros que de manera individual o conjunta, causan

una enfermedad.
Exoesqueleto
Es el esqueleto externo continuo que recubre toda la supericie de los

animales del ilo artrpodos (arcnidos, insectos, crustceos y otros
grupos relacionados), donde cumple una funcin protectora y otra
mecnica, proporcionando el sostn necesario para la eicacia del
aparato muscular. Tambin se llama exoesqueleto a la base.
Falsos negativos
Animales enfermos o infectados detectados incorrectamente por la

prueba diagnstica como negativos.
Falsos positivos
Animales sanos o no infectados detectados incorrectamente por la

prueba diagnstica como positivos.
Fagocitosis
Proceso por el cual un cuerpo extrao o un desecho celular es ingerido por clulas especiales (fagocito) mediante invaginacin. Es un tipo
de endocitosis por el cual algunas clulas rodean con su membrana
citoplasmtica a una sustancia extracelular (un slido generalmente)
y la introducen al interior celular. Esto se produce gracias a la emisin
de pseudpodos alrededor de la partcula o microorganismo hasta
englobarla completamente y formar alrededor de l una vacuola, la
cual fusionan posteriormente con lisosomas para degradar la sustancia fagocitada, la cual recibe el nombre de fagosoma.
Farmacoterapia
Tratamiento de las enfermedades mediante frmacos (medicamentos).
Fiabilidad
diagnstica
Capacidad de una prueba diagnstica para discriminar entre individuos sanos y enfermos.
Fibrosis
Proliferacin de tejido ibroso adicional o en reemplazo de zonas de

tejidos u rganos afectados por alguna enfermedad infecciosa, txica
o por algn traumatismo.
Fijacin
Preservacin de tejidos de un organismo, mediante la inyeccin y/o

inmersin del mismo en una solucin que evita cambios autolticos.
Fraccin de muestreo Proporcin de individuos de la poblacin estudiada que forman parte

de la muestra.
Genoma
Es todo el material gentico contenido en las clulas de un organismo

en particular. Por lo general, al hablar de genoma en los seres eucariticos nos referimos slo al ADN contenido en el ncleo, organizado
en cromosomas.
371
Genotipo
Conjunto de genes caractersticos de cada especie vegetal o animal.

La manifestacin visible de un genotipo en un determinado ambiente,
constituye un fenotipo (caractersticas fsicas del individuo).
Giemsa
Tincin utilizada en el examen de frotis sanguneos y otro tipo de

muestras biolgicas, que permite la coloracin diferencial de zonas
con un alto contenido de ADN y concretamente de uniones A-T. Esto
permite distinguir perfectamente en microscopio ptico el ncleo celular, los cromosomas durante la mitosis y, en algunos casos, incluso
el ADN mitocondrial.
Glutaraldehdo
Fijador utilizado para microscopa electrnica de transmisin.
Gram
Coloracin para diferenciar bacterias.
Hematopoytico
Proceso de formacin de las clulas sanguneas.
Hematoxilina
Materia colorante del palo campeche muy utilizada en histologa.
Hemocele
Canales intersticiales a travs de los cuales circula la hemolinfa Irrigando los rganos y tejidos del cuerpo del camarn.
Hemocitopenia
Disminucin en el nmero de hemocitos circulantes.
Hemocitos
Clulas plasmticas de los crustceos (como el camarn), encargadas

de funciones relacionadas con el sistema inmune.
Hemograma
Determinacin del nmero total o diferencial de hemocitos en un

camarn.
Hemolinfa
Tejido sanguneo de los camarones que irriga los rganos y tejidos

llevando oxgeno y nutrientes.
Hepatopncreas
Glndula digestiva del camarn, encargada de producir enzimas y

hormonas, principalmente.
Hibridacin dot blot
Dot Blot es una tcnica de biologa molecular para detectar biomolculas. En un dot blot las biomolculas para ser detectados no son
separadas por cromatografa. En cambio, una gota que contiene la
molcula para ser detectada se aplica directamente sobre una membrana. Esto es seguido por la deteccin por sondas de nucletidos o
anticuerpos. El dot blot slo puede conirmar la presencia o ausencia
de una biomolcula o biomolculas que pueden ser detectados por
las sondas de ADN o el anticuerpo.
Hibridacin in situ
Est basada en la capacidad que poseen los cidos nucleicos para

hibridarse entre s, es decir, la existencia de determinada secuencia
de ADN o ARN, que resulta complementaria con otra secuencia. Su
utilidad reside en la capacidad de poder demostrar mediante la utilizacin de una sonda (formada por una secuencia de ADN previamente conocida) marcada con un istopo radiactivo, la presencia de
determinada secuencia de ADN o ARN complementaria, en la muestra a estudiar.
372
Glosario
Hiperplasia
Es el aumento de tamao de un rgano o de un tejido, provocado debido a que sus clulas han aumentado en nmero. Puede producirse
en los tejidos cuyas clulas se pueden multiplicar.
Hipertroia
Es el nombre con que se designa un aumento del tamao de un rgano cuando se debe al aumento correlativo en el tamao de las clulas
que lo forman; de esta manera el rgano hipertroiado tiene clulas
mayores, y no nuevas.
Hipoxia
Es un trastorno en el cual el cuerpo por completo (hipoxia generalizada), o una regin del cuerpo (hipoxia de tejido), se ve privado del
suministro adecuado de oxgeno.
Histologa
Es la ciencia que estudia todo lo referente a los tejidos orgnicos: su

estructura microscpica, su desarrollo y sus funciones. La Histologa
se identiica a veces con lo que se ha llamado anatoma microscpica.
Histopatologa
Estudio de las lesiones celulares y tisulares mediante el uso de la histologa.
Histoqumica
Conjunto de tcnicas que permiten la identiicacin, localizacin y

cuantiicacin de una sustancia en un tejido o en una clula
Hospedero
Es a aquel organismo que alberga a otro en su interior o lo porta sobre

s, ya sea un parsito, un comensal o un mutualista.
Hospedero deinitivo
Designa un ser vivo que es imprescindible para el parsito ya que este

desarrollar principalmente su fase adulta en el anitrin.
Hospedero
intermediario
Designa a un hospedador igualmente imprescindible en el ciclo vital

del parsito, donde este desarrolla alguna o todas las fases larvales o
juveniles. A veces se confunde con el trmino vector y se considera
como hospedador intermediario al invertebrado que participa en el
ciclo vital, siendo en muchas ocasiones el hombre y los vertebrados
los anitriones intermedios, y los invertebrados los deinitivos.
Husped
Agente invasor que vive a expensas de un hospedero, parasito externo

(ectoparsito) o parasito interno (endoparsito).
Icosadrico
Es la forma que tiene la cpside (cubierta) de un virus, cuando sus

capsmeros (monmeros de tipo proteico) estn dispuestos en forma
de icosaedro (poliedro formado por 20 caras).
Idioptica
Enfermedad de origen desconocido o sin causa determinada. Hace

referencia a la irrupcin espontnea de un trastorno o una enfermedad (aparicin de signos clnicos), sin que se pueda atribuir a una
etiologa conocida. Algunas enfermedades caliicadas inicialmente
como idiopticas, pueden recibir luego un diagnstico especico
al descubrirse su etiologa.
In situ
Que se realiza en el mismo sitio.
373
Infeccin
Estado o condicin en que el cuerpo o una parte de ste es invadido

por un agente infeccioso, como bacterias, virus u hongos La infeccin
no implica necesariamente que el organismo est enfermo, puesto
que enfermo se reiere a mostrar signos clnicos.
Infestacin
Es la invasin de un organismo vivo por agentes parsitos externos

(ectoparsitos) o internos (endoparsitos). Por esta razn, el trmino
infeccin debe restringirse slo a la accin de bacterias, virus y
hongos. La infestacin puede incluir ectoparsitos como protozoarios
y artrpodos y endoparsitos como metazoarios y algunos protozoos.
Iniltracin
hemoctica
Migracin de hemocitos a un tejido en donde hay presencia de un

agente patgeno.
Inlamacin
Reaccin de los tejidos a daos caracterizados por tumefaccin, enrojecimiento y dolor; se maniiesta por dilatacin, hiperhemia, acumulacin de hemocitos, exudacin del luido y depsito de ibrina.
Iniciadores
Tambin llamados cebadores o primers, son pequeas cadenas de

nucletidos a partir de las cuales la ADN polimerasa inicia la sntesis
de una molcula nueva de ADN. Se utilizan principalmente en pruebas de reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
Inmune
Protegido contra ciertas enfermedades.
Inmunologa
Es una rama amplia de la biologa y de las ciencias biomdicas que

se ocupa del estudio del sistema inmunitario en todos los organismos,
entendiendo como tal al conjunto de rganos, tejidos y clulas que
en los vertebrados o invertebrados tienen como funcin biolgica el
reconocer elementos extraos o ajenos dando una respuesta inmune.
Integumento
Es el sistema orgnico ms extenso de un animal ya que lo recubre

por completo, tanto externamente, como numerosas cavidades internas. Su funcin es la de separar, proteger e informar al animal del
medio que le rodea; en ocasiones acta tambin como exoesqueleto.
Intervalo de
conianza
Rango de valores en el que se incluye el valor real del parmetro estudiado con una cierta seguridad (nivel de conianza).
Intracitoplasmtico
Cuya ubicacin es dentro del citoplasma.
Invaginacin
Es doblar hacia adentro los pseudpodos luego de estar envuelto en

un cuerpo extrao. Esto ocurre en las clulas. Como ejemplo tenemos
las crestas mitocondriales.
Kit
conjunto de materiales y reactivos que se venden en conjunto, para

la realizacin de una o varias pruebas de laboratorio. Algunas veces
estn autoabastecidas para la ejecucin completa de la prueba y otras
veces requieren de equipos o elementos adicionales no incluidos en
el kit.
Lamela
Ramiicacin secundaria de los branquias de los camarones.
374
Glosario
Larva
Animal en estado de desarrollo, cuando ha abandonado las cubiertas

del huevo y es capaz de nutrirse por s mismo o de su vitelo, pero an
no ha adquirido la forma y la organizacin propia de los adultos de
su especie.
Larvicultura
Fase del cultivo de camarn relacionado con el desarrollo de larvas

y postlarvas.
Lesin
Dao o detrimento corporal causado por una herida, un golpe o una

enfermedad.
Lesin multifocal
Que se encuentra localizada en mltiples rganos y tejidos de un

mismo animal enfermo.
Letalidad
Probabilidad de que un caso (enfermo o infectado) muera en un determinado periodo de tiempo.
Letargia
Condicin presente en varias enfermedades nerviosas, infecciosas o

txicas, caracterizada por un estado de somnolencia profunda y aletargamiento. Conduce en camarones a perdida del relejo de huda.
Ligando
Es una molcula, compuesto o ion capaz de formar enlaces qumicos

con un receptor o de ser reconocida por otra molcula, provocando
una respuesta biolgica. Un ejemplo de ligandos son las hormonas
implicadas en la sealizacin intercelular, o los ligandos que actan
como reguladores de la actividad enzimtica unindose a las enzimas
que modulan. En los enlaces se emplean nicamente los electrones
del ligando; en la transmisin de informacin biolgica mediante el
reconocimiento molecular, el ligando es el agente pasivo.
Lipopolisacrido
Azcar propio de la membrana celular de las bacterias.
Lisis
Ruptura de las clulas a causa de agentes qumicos o fsicos.
Macerado
Es un proceso de extraccin slido-lquido. El producto slido (materia prima) posee una serie de compuestos solubles en el lquido
extractante que son los que se pretende extraer.
Macroscpico
Hallazgo que se puede observar a simple vista.
Maduracin
Trmino utilizado en camaronicultura para hacer referencia a los procesos de manutencin de reproductores en cautiverio y obtencin de
larvas de camarn a partir de cruces controlados o indiscriminados
entre stos.
Melanina
Pigmento de color negro o pardo negruzco en forma de grnulos que

existe en el protoplasma de ciertas clulas de los vertebrados; en invertebrados es producto de la activacin del sistema inmune (cascada
proPO) y se da para encapsular a un agente agresor (melanizacin).
Metabolismo
Es el conjunto de reacciones y procesos fsico-qumicos que ocurren

en una clula. Estos complejos procesos interrelacionados son la base
de la vida a nivel molecular y permiten las diversas actividades de las
clulas: crecer, reproducirse, mantener sus estructuras, responder a
estmulos, etc.
375
Metazoarios
Animal formado por una gran cantidad de clulas (pluricelulares), algunos de ellos microscpicos pero la gran mayora se pueden observar a simple vista, al menos en su estado adulto. Se distinguen entre
s por su forma, estructura y funcin. Incluyen los platelmintos, nematelmintos y artrpodos, entre los que se encuentran los vertebrados,
moluscos, gusanos, etc. Tambin se conocen como metazoos.
Micosis
Enfermedad producida por algn tipo de hongo.
Microbiologa
Ciencia que estudia los microorganismos y su organizacin.
Microscpico
Es un objeto que por su tamao, es imposible verlo a simple vista, se

necesitan aparatos como microscopios para poder verlo o detectarlo.
Micrtomo
Es un dispositivo mecnico que permite la elaboracin de cortes inos

de muestras para su observacin al microscopio.
Morbilidad
Probabilidad de que un individuo de una poblacin sea un caso en

un momento dado.
Mortalidad
Probabilidad de que un individuo muera como consecuencia de cierta enfermedad en un periodo de tiempo.
Muda
Desprendimiento peridico de la cubierta externa, como el exoesqueleto en Artrpodos (camarones, cangrejos, langostas), para permitir
el crecimiento (aumentar en tamao) de los tejidos blandos internos.
Despus de la muda, los especimenes son especialmente vulnerables
a la depredacin.
Muestra
Subconjunto representativo de la poblacin estudiada que se selecciona para obtener informacin.
Muestreo aleatorio o
probabilstico
Mtodo de seleccin donde cada individuo de la poblacin tiene la

misma probabilidad de formar parte de la muestra y esta probabilidad
es conocida.
Muestreo no
probabilstico
Mtodo de seleccin donde cada individuo de la poblacin tiene una

probabilidad desconocida y variable de formar parte de la muestra.
Mutacin
Es una modiicacin que se produce en los datos genticos de un

organismo viviente. Dicha alteracin, que puede resultar hereditaria,
implica una modiicacin de sus caractersticas.
Mysis
Estado intermedio de larva pelgica entre la protozoea (zoea) y los

estados de postlarva.
Nauplio
Primeros estados larvales de un crustceo; exhibe el tipo ms simple

de regin anterior con tres pares de apndices, primera antena unirrama, segunda antena birrama y mandbulas. Aunque la larva nauplius
es tpica, no aparece en todos los crustceos. Es comn en las formas
inferiores, pero en muchas de las formas superiores ocurre durante el
desarrollo en el huevo, y los juveniles eclosionan ya diferenciados y
larvas ms avanzadas.
376
Glosario
Necrobiosis
Muerte natural y isiolgico del los clula de un organismo, por envejecimiento de las mismas.
Necrosis
Es la muerte patolgica de un conjunto de clulas o de cualquier

tejido del organismo, provocada por un agente nocivo que ha provocado una lesin tan grave que no se puede reparar. Una vez que se ha
producido y desarrollado la necrosis, es irreversible.
Neutralizar
Debilitar el efecto o hacer neutra una sustancia qumica, mediante la

adicin de otra sustancia diferente u opuesta. Los cidos se neutralizan con sustancia alcalinas y viceversa.
Nivel de conianza
Probabilidad de que el valor real de la poblacin se encuentre dentro

de ciertos lmites (intervalo de conianza).
Nivel de deteccin
Sensibilidad de una prueba diagnstica deinida como el nmero de

patgenos que la prueba es capaz de detectar por unidad de muestra
patolgica.
Ndulo
Pequea protuberancia situada en diversos tejidos.
Nucleocpside
Material gentico envuelto en su cpside. La cpsida o cpside vrica es una estructura proteica formada por una serie de monmeros llamados capsmeros. En el interior de esta cpside se encuentra
siempre el material gentico del virus. Puede estar rodeada por una
envoltura. Cada capsmero puede estar constituido por una o varias
protenas distintas.
Nucletidos
Monmeros de los cidos nucleicos, integrado por la combinacin

de una base nitrogenada (purina o pirimidina), un azcar (ribosa o
desoxirribosa) y un grupo fosfato. Se obtiene como producto de la
hidrlisis de cidos nucleicos por accin de nucleasas. Los nucletidos se conocen como ribonucletidos cuando el azcar es la ribosa,
o como desoxirribonucletidos cuando el azcar es la desoxirribosa.
Osmorregulacin
Capacidad de los seres vivos para mantener en sus tejidos y luidos

corporales una determinada presin osmtica, mediante un proceso
isiolgico que regula el equilibrio del agua y los electrolitos.
Patognesis
Origen y evolucin de una enfermedad con todos los factores que

estn involucrados en ella.
Patogenicidad
Capacidad de un agente patgeno, de causar dao en un hospedero

susceptible.
Patgeno
Es toda aquella entidad biolgica capaz de producir enfermedad o

dao en la biologa de un hospedero (humano, animal, vegetal, etc.)
sensiblemente predispuesto. El mecanismo de la patogenicidad ha
sido muy estudiado y tiene varios factores, algunos de los cuales son
dependientes del agente patgeno y otros del hospedero.
Patognomnico
Signo clnico que caracteriza y deine una determinada enfermedad,

diferencindolo del resto de patologas.
377
Patologa
Es la parte de las ciencias mdicas, humanas y animales encargada

del estudio de las enfermedades en su ms amplio sentido, es decir,
como procesos o estados anormales de causas conocidas o desconocidas.
Patlogo
Especialista en patologa o enfermedades.
Pediluvio
Estructura destinada a contener una solucin desinfectante para el

lavado del calzado en instalaciones que manejan programas de bioseguridad.
Penaeido
Nombre comn para los miembros de la familia de crustceos Penaeidae, comnmente denominados camarones o gambas. Un cultivo econmicamente importante originario de aguas marinas y salobres de reas tropicales o subtropicales. Ciclo vital caracterizado por
varias etapas iniciales del desarrollo de las cuales nauplios (5 etapas
sucesivas), zoea (3), mysis (3) y postlarva (hasta 22).
Pereipodos
Apndices motrices (patas) de los camarones utilizados para caminar sobre supericies slidas; debido a que el camarn tiene 10, se le
llama decpodo.
Perodo de
incubacin
Es el lapso de tiempo que transcurre desde que se presenta una invasin de un microorganismo patgeno (virus, bacteria, protozoo) en un
hospedero, hasta el comienzo de la manifestacin de signos clnicos
de la enfermedad causada por dicho microorganismo en el hospedero.
Per os
Va oral, por la boca. Suele usarse este mtodo cuando se hace una
infeccin experimental de camarones y son alimentados va oral con
tejido infectante de otros camarones enfermos.
Picnosis
Compactacin de la cromatina nuclear como parte del proceso de

necrosis (muerte celular).
Polisacridos
Son biomolculas formadas por la unin de muchos monosacridos.

Se encuadran entre los glcidos, y cumplen funciones diversas, sobre
todo de reserva energtica y estructural.
Pool
Grupo de muestras que son obtenidas y/o procesadas de forma combinada para reducir el tiempo de procesado y el coste econmico.
Postlarva
Estado que ocurre despus del estado larval, parecido al juvenil pero
an le faltan algunas caractersticas. Para crustceos: el estado siguiente a la metamorfosis de larva zoea a juvenil. En camarones penaeidos, normalmente se cuentan los das despus de la aparicin de
las caractersticas de postlarva. Ej., PL12 indica que la postalarva ha
vivido 12 das desde su metamorfosis desde el estado de mysis.
Post-mortem
Cambios naturales que ocurren a nivel bioqumico y morfolgico en

un organismo despus de su muerte.
Postmuda
Fase del proceso de muda de los crustceos que sigue a la ecdisisi o

muda.
378
Glosario
Prevalencia
Es la proporcin de individuos de un grupo o una poblacin que presentan una caracterstica o evento determinado en un momento, o
periodo de tiempo (prevaleca de periodo), determinado.
Prevalencia aparente
Proporcin de individuos positivos en una poblacin, o probabilidad

de ser diagnosticado como positivo.
Prevalencia real
Frecuencia de aparicin de una enfermedad en una poblacin, o prevalencia detectada con una prueba de oro.
Probitico
Se considera alimento probitico aquel que contiene microorganismos vivos presentes en un alimento que permanecen activos en el
intestino y ejercen importantes efectos isiolgicos. Ingeridos en cantidades suicientes tienen efecto muy beneicioso, como contribuir al
equilibrio de la lora bacteriana intestinal del hospedero y potenciar
el sistema inmunolgico. Son capaces de atravesar el tubo digestivo,
recuperarse vivos en las heces y adherirse a la mucosa intestinal. No
son patgenos.
Proilaxis
Procedimientos que buscan prevenir una infeccin.
Progenie
Descendencia, organismos derivados de una pareja de progenitores

o de organismos con capacidad de reproduccin mediante partenognesis.
Protozoarios
peritrchidos (o
pertricos)
Organismos unicelulares que poseen una hilera de cilios alrededor de

la boca, tienen cuerpo en forma de vaso o de campana y se adhieren
a un sustrato slido o a un hospedador animal mediante un tallo,
pudiendo crecer solos o en colonia; algunos poseen una ibra retrctil
(mionema) que les da movimientos de contraccin para atrapar el
alimento.
Prueba de oro
Prueba diagnstica de referencia que no registra falsos positivos ni

falsos negativos.
Pseudpodos
Elongaciones de la membrana de las clulas que se asemejan a extremidades.
Quitinosis
Melanizacin multifocal de la cutcula de origen bacteriana.
Relacin costobeneicio
Es el anlisis de ingresos y egresos de un proyecto para determinar

cules son los beneicios por cada unidad monetaria que se invierta.
Replecin
Cantidad de heces que se encuentran en el intestino medio de un

camarn.
Respiracin
Se entiende al proceso isiolgico indispensable para la vida de organismos aerbicos, consistente en capturar O2 del medio y en eliminar
CO2.
Respuesta innata
Tambin conocida como inmunidad inespecica; consiste en un sistema de mecanismos de defensa con el que cuenta un organismo y
que lo protege contra bioagresores. Impide que ingrese a los tejidos,
materiales daios u organismos patgenos.
379
Rodiluvio
Estructura destinada a contener una solucin desinfectante para el

lavado de las llantas de los vehculos en instalaciones que manejan
programas de bioseguridad.
Sensibilidad
Capacidad de una prueba de diagnstico para detectar un agente (microorganismo) de inters que est presente en mnimas cantidades
en una muestra. Probabilidad de detectar correctamente un animal
enfermo.
Septicemia
Se deine ya sea como la presencia de organismos patgenos o sus

toxinas en la sangre y los tejidos o el estado de envenenamiento que
resulta de la presencia de grmenes patgenos o sus toxinas. Tambin
se le conoce como Sepsis.
Sptico
Que produce putrefaccin o es causado por ella, por presencia de

bacterias.
Signo
Se entiende por signo clnico a cualquier manifestacin objetivable

consecuente a una enfermedad o alteracin de la salud, y que se hace
evidente en la biologa del organismo enfermo.
Sndrome
Es un cuadro clnico o conjunto sintomtico con cierto signiicado y

que por sus caractersticas posee cierta identidad; es decir, un grupo
signiicativo de sntomas y signos, que concurren en tiempo y forma,
caracterizando un estado morboso determinado o enfermedad.
Sntoma
Es la referencia subjetiva que da un organismo enfermo por la percepcin o cambio que puede reconocer como anmalo o causado por un
estado patolgico o enfermedad.
Sistmico
Enfermedad que se encuentra en todo el cuerpo.
Sonda gentica
Fragmento de ADN que es complementario a una parte del genoma

de un organismo y es utilizada para la deteccin genmica de dicho
organismo en una muestra.
Taxonoma
En su sentido ms general, la ciencia de la clasiicacin. Por lo general, se emplea el trmino para designar la taxonoma biolgica, la
ciencia de ordenar a los organismos en un sistema de clasiicacin
compuesto por una jerarqua de taxones anidados.
Txico
Es toda sustancia qumica que, administrada a un organismo vivo,

tiene efectos nocivos. El estudio de los venenos es conocido como
toxicologa.
Transmisin
horizontal
Forma de transmisin de una enfermedad mediante el canibalismo

entre organismos o ingesta de alimento infectado.
Transmisin vertical
Transmisin de una enfermedad de padres a sus progenies.
Trofozoito
Es la forma vegetativa activada que se alimenta generalmente por

fagocitosis y se reproduce, a diferencia del quiste, el cual es la forma
vegetativa infectante y de resistencia, en el ciclo de vida de los parsitos protozoarios, como los gregarinas.
380
Glosario
Urpodos
Son la parte inal del cuerpo de los crustceos; estn a continuacin

del abdomen o pleon y normalmente son laminares o aplanados, presentando forma de abanico por lo que se le denomina abanico caudal.
Vacuolas lipdicas
Glbulos de grasas almacenados en el hepatopncreas de crustceos

y utilizados como reserva de energa.
Verdaderos negativos Animales sanos o no infectados detectados correctamente por la prueba diagnstica como negativos.
Verdaderos positivos
Animales enfermos o infectados detectados correctamente por la

prueba diagnstica como positivos.
Vibriosis
Enfermedad bacteriana causada por especies del gnero Vibrio, que

afecta a los crustceos y que es favorecida en condiciones de estrs.
Vigilancia
Designa una serie de investigaciones que se llevan sistemticamente

a cabo en una poblacin de animales acuticos determinada para
detectar, a efectos proilcticos, la presencia de enfermedades y que
pueden consistir en someter a prueba una poblacin (Cdigo Sanitario para los Animales Acuticos, OIE 2013).
Viremia
Condicin donde virus entran al torrente sanguneo (hemolinfa) y logran as una fcil diseminacin por todo el organismo.
Virin
Partcula vrica morfolgicamente completa e infecciosa. Virus completo.
Virulencia
Designa el carcter patognico, nocivo y violento de un microorganismo, como una bacteria, hongo o virus, o en otras palabras, la capacidad de un microbio de causar enfermedad. Virulencia deriva del
latn virulentus que signiica lleno de veneno.
Virus
Es una entidad biolgica capaz de autorreplicarse utilizando la maquinaria celular. Es un agente potencialmente patgeno compuesto
por una cpside (o cpsida) de protenas que envuelve al cido nuclico, que puede ser ADN o ARN.
Zooplancton
Es la fraccin animal del plancton, constituida por seres que se alimentan mediante ingestin, de materia orgnica ya elaborada. Incluye protistas, fagtrofos que engloban el alimento fagocitndolo, larvas
de esponjas, gusanos, equinodermos, moluscos, crustceos y de otros
artrpodos acuticos, as como pequeos alevines (peces jvenes
muy pequeos).
381
382
La Gua Tcnica Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos, 1era edicin, fue creada gracias al Programa Iberoamericano
de Ciencia y Tecnologa para el Desarrollo (CYTED) a travs de su
RED VANNAMEI. La presente actualizacin y publicacin de la 2da
edicin de esta Gua Tcnica, ha sido posible gracias al Organismo
Internacional Regional de Sanidad Agropecuaria (OIRSA) con el
apoyo incondicional de los mismos autores de su primera edicin y
la contribucin de nuevos autores, logrando as un documento
actualizado, moderno y con nuevas enfermedades incorporadas,
como es el caso de la Enfermedad de la Necrosis Aguda del Hepatopncreas (AHPND o EMS) en algunos pases de Asia, as como
otras patologas similares en ciertos pases de Amrica Latina. Esta
Gua servir como material bsico de consulta para estudiantes,
profesores, profesionales acucolas, investigadores, empresas
privadas o mixtas y entidades estatales, que se dediquen al cultivo
de camarones marinos.

Guia Técnico Patologia e Imunologia de Camarões Penaeideos

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GUA TCNICA

Gua Tcnica - Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos

Los editores agradecen a la Coordinacin Regional de Inocuidad de Alimentos del OIRSA, en

Gua Tcnica - Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos

EFRAN MEDINA GUERRA

Gua Tcnica - Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos

Coordinadora del Programa

Camaronera de Cocl, S.A. y

Gua Tcnica - Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos

Resea de los Editores y Autores

1.2 Examen clnico

1.3 Microscopa directa (anlisis en fresco)

1.4 Montajes en fresco (Mara Soledad Morales-Covarrubias)

1.7 Pruebas con anticuerpos

1.8 Mtodos moleculares

1.9 Parmetros inmunolgicos

1.10 Microscopa electrnica de transmisin

1.12 Referencias bibliogricas

Captulo 2 Enfermedades virales del camarn (Carlos R. Pantoja y Donald V. Lightner)

2.1 Principales enfermedades y mtodos de diagnstico.

2.2 Virus de la necrosis hipodrmica y hematopoytica infecciosa (Infectious

2.4 Virus del Sndrome de Taura (Taura syndrome virus, TSV)

Virus del sndrome de la cabeza amarilla (Yellow head syndrome virus,

2.6 Virus de la mionecrosis infecciosa (Infectious myonecrosis virus, IMNV)

2.7 Mionecrosis infecciosa viral IMNV y sus implicaciones en el cultivo de

2.8 Penaeus vannamei nodavirus (PvNV)

2.9 Referencias bibliogricas

Captulo 3 Enfermedades bacterianas de camarones (Mara Soledad Morales-Covarrubias y Bruno Gomez-Gil)

3.1 Sndrome de la Mortalidad Temprana (EMS) o Enfermedad de la Necrosis

3.2 EMS/AHPND Descripcin de la enfermedad en Asia y Amrica (Carlos R.

3.3 Necrosis sptica del hepatopncreas (NSHP)

3.4 Hepatopancreatitis necrotizante (NHP)

3.5 Sndrome de Zoea II

3.6 Enfermedad de luminiscencia

3.7 Erosin bacteriana del caparazn

3.9 Spiroplasma penaei (Carlos R. Pantoja y Donald V. Lightner)

3.10 Referencias Bibliogricas

4.6 Referencias bibliogricas

Captulo 5 Enfermedades causadas por hongos (Carlos R. Pantoja y Donal V. Lightner)

5.3 Referencias bibliogricas

6.1 Sistema circulatorio, hemolinfa y coagulacin

6.2 Las clulas del sistema inmune

6.3 Mecanismos de reconocimiento y sealizacin celular

6.4 Mecanismos lticos y microbicidas

6.5 Defensas antivirales

6.7 Parmetros hemato-inmunolgicos como indicadores de salud

Gua Tcnica - Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos

6.8 Conclusiones y Perspectivas

6.9 Referencias bibliogricas

Captulo 7 Vigilancia epidemiolgica en Camaronicultura (Ignacio de Blas y Ana

7.2 Investigacin de brotes de enfermedad

7.3 Vigilancia epidemiolgica para detectar enfermedad

7.4 Vigilancia epidemiolgica para estimar prevalencia

7.6 Referencias bibliogricas

8.1 Aspectos a considerar en las Buenas Prcticas de Manejo

8.2 Sistema de disposicin de desechos segn su clasiicacin y posibilidad de

8.3 Uso de energa

8.4 Planes de contingencia

8.5 Registros en una granja camaronera

8.7 Referencias Bibliogricas

Resea de los Editores

Gua Tcnica - Patologa e Inmunologa de Camarones Penaeidos

Resea de los Autores

BRUNO GMEZ GIL R.