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TESIS
para optar al grado acadmico de Magster en Recursos Vegetales y
Teraputicos
AUTOR
Carmen Cusco Vsquez
ASESOR
Pablo Enrique Bonilla Rivera
Lima-Per
2009
enseanza
para
culminar con xito
la meta trazada.
Carmen Cusco
Vsquez
INDICE
RESUMEN SUMMARY
I.
Introduccin
II.
Generalidades
2.1
2.2
2.3
Menopausia
16
2.4
Estrgenos
19
III.
Parte Experimental
22
3.1
Materiales
22
3.2
Metodologa
22
23
24
Resultados
25
V.
Discusin
29
VI.
Conclusin
35
VII.
Referencias bibliogrficas
36
VIII. Anexos
39
RESUMEN
Se realiz una investigacin fitoqumica y farmacolgica del extracto metanlico de
Mauritia flexuosa L. Aguaje, con el objetivo de determinar compuestos fenlicos
que posee el fruto de esta especie y su actividad estrognica, la cual fue colectada en la
ciudad de Tarapoto en la Regin San Martn. Alrededor de esta
planta
se
han
(2:1)
espectroscopia
UV
utilizando
reactivos
de
4-metoxi-5-hidro-7-O-R-flavona
5,7-dihidroxi-4-
SUMMARY
methanolic
3,4',7-trimethoxy-5-hydroxy-flavone
,4-metoxi-5-hidroxi-7-O-R-flavona
I.
Introduccin
poseer
hormonas femeninas que hacan que tanto hombres como mujeres desarrollaran
caractersticas fsicas femeninas pronunciadas. Pero en realidad es el soporte de la
cadena alimenticia de animales y humanos, en medio de la selva por lo que los
antiguos nativos yaguas, los que sobreviven lo llaman "la madre de la floresta" y
el "rbol de la vida", considerndolo un smbolo de la inmortalidad.
l,2,33-34
Estudios han demostrado una relacin entre el consumo de comidas ricas en soya,
y la baja frecuencia de ciertas entidades como la enfermedad cardiovascular,
algunos cnceres hormonodependientes, como el cncer de mama, endometrio,
prstata y colon, la osteoporosis, sintomatologa menopusica, y alteraciones del
ciclo menstrual, dada la asociacin hormonal de estas enfermedades, han sido
Las isoflavonas son compuestos fenlicos con similitudes estructurales con los
estrgenos naturales (l7-estradiol). Se encuentran en una gran variedad de
plantas, especialmente cereales (arroz, trigo, avena, cebada), legumbres (granos de
soya, garbanzos), hortalizas (alfalfa y las coles, brcoli, coliflor).
4,5
II.
2.1 .
Generalidades
Aspectos botnicos
Clasificacin sistemtica
La clasificacin sistemtica de la planta se realiz en el Museo de historia Natural
de la Universidad Nacional de San Marcos, segn el sistema de clasificacin de
Cronquist (l988), como sigue:
Divisin: Magnoliophyta
Clase: Liliopsida
Orden: Arecales
Familia: Arecaceae
Genero: Mauritia
Especie: Mauritia flexuosa L.
Nombre Vulgar: Aguaje
(Anexo l)
Descripcin botnica
El aguaje es una palmera polgama dioica, tiene una copa esfrica, y en
condiciones naturales puede alcanzar una altura de 35m , el tallo en plantas
adultas, es coronado por hasta 30 hojas pinnadas de tamao mximo de 8m. de
longitud y hojas muertas colgando por algn tiempo debajo de la corona, dndole
un aspecto peculiar a la especie. El tallo es recto, liso, cilndrico, columnar con
DAP 30-60cm. de dimetro, con cicatrices conspicuas de hojas prominentes en
arreglo espiral. Se han observado generalmente, numerosos hijuelos alrededor del
tallo principal, hasta en nmero de 20. Las races primarias profundizan hasta
60cm. y luego desarrollan horizontalmente hasta 40m, tienen races secundarias
aerferas o neumatforos que le permiten respirar a las races en condiciones
hidromorfas. Las hojas son compuestas, flabeladas, de 5-6m de longitud,
agrupadas en nmero de l0-20 en la parte terminal del tallo formando la copa; la
lmina tiene 80-90cm. de dimetro y se prolonga en el pecolo.
l,33
cremoso-amarillento.
Mesocarpio
carnoso,
suave,
amilceo
l,34
2,33
Componentes
33
100 g de pulpa
Energa
283,0 Kcal.
Agua
53,6 g
Protenas
3,0 g
Lpidos
2l,l g
Carbohidratos
l8,l g
Fibra
l0,4 g
Ceniza
0,9 g
Calcio
74,0 mg
Fsforo
27,0 mg
Hierro
0,7 mg
Vitamina A (Retinol)
l062,0 mg
Tiamina
0,l2 mg
Riboflavina
0,l7 mg
Niacina
0,30 mg
Vitamina C
26,0 mg
www.regionloreto.gob.pe/anazonia/libros/5l/5l00000.(l993)
8-l0
9,l0
ll,l2
8,l0
ll
8-l0
.Figura 1
Los flavonoides presentan una clasificacion muy extensa, pero el objetivo de este
estudio corresponde solamente a las flavonas e isoflavonas
En las flavonas el ciclo A se encuentra, en ms del 90% de los casos, sustitudo
por dos hidroxilos fenlicos en C5 y C7.Estos hidroxilos se pueden encontrar
9
R=H, apigenol
R=OH, luteolol
Figura 2. Flavonas
Las principales actividades biolgicas de flavonoides es atribuida a los
flavonoides es la de ser venoactivos, es decir ser capaces de disminuir la
permeabilidad de los capilares sanguneos y aumentar sus resistencia. Los
flavonoides y las preparaciones a base de flavonoides son objeto (Francia,
Alemania, Espaa o Italia) de amplia prescripcin, de frecuentes recomendacin
farmacutica y de una importante automedicacin en el terreno de patologas
circulatorias menores. Adems algunas molculas de estos grupos, al menos en
posologas elevadas, han podido mostrar una cierta eficacia clnica. Actualmente,
interesa sobre todo la interaccin de los flavonoides con radicales y sus posibles
consecuencias en trminos preventivos asimismo la actividad celular de estas
molculas y los sistemas implicados en la respuesta inmunitaria y en la
inflamacin, estn siendo estudiadas.
3,l8,l9
las
Figura 3.
Figura 3. Isoflavona
La actividad biolgica de la isoflavonas radica en su estructura isoflavonoidica lo
que le proporciona actividad de fitoalexinas, es decir sustancias producidas por las
plantas como respuesta a una infeccin por un agente patgeno, normalmente de
naturaleza fngica.
5,l2,20-23
Las isoflavonas poseen capacidad para unirse a los receptores estrognicos, hecho
del que derivan muchas de sus acciones tisulares. Desde un punto de vista
estructural, respecto a la posibilidad de unin de estos compuestos con los
receptores estrognicos, ha de tenerse en cuenta que el receptor estrognico (RE)
se liga a molculas de distinta naturaleza, sean o no de estructura esteroide. En la
capacidad de unin de cualquier ligando al RE son importantes, entre otras
5, l2,l9
.Figura 4
l0
5,l2,22
. Figura 5
ll
5,l2,22
5,l2
. Figura 6
l2
2+
2+
l2
l2
y lignanos
tambin modulan la
produccin
de globulina
l2
l3
enzimtica
se
extiende
tambin
la
regulacin
de
la
cerebral
l2
expensas
del
NO
(xido
ntrico),
incrementando
la
l4
l2,22
Las isoflavonas estn presentes principalmente en las hojas, los frutos y las
semillas de gramneas y de leguminosas. Tambin se encuentran en granos
ntegros de cereales, en semillas bayas y nueces. Aunque las isoflavonas no son
nutrientes esenciales, pueden ayudar a reducir la incidencia de varias
enfermedades.Las semillas de soya tostada tienen el mayor contenido de
isoflavonas: Aproximadamente l67 mg. por una racin de 3.5 onzas. El tempeh
(un pastel de semillas de soya fermentadas) es el siguiente, con 60 mg., seguido
por la harina de soya con 44 mg. Los productos de soya procesados como la
protena de soya y la leche de soya contienen aproximadamente 20 mg. por
racin. Las mismas isoflavonas que se encuentran en la soya tambin estn
contenidas en ciertos productos de trbol rojo.
5,23,24
l0,23,24
l5
vasomotores
l9
Menopausia
de
fracturas,
de
problemas
cardiovasculares,
como
ms
apreciados
isoflavonas,
sustancias
que
difieren
l8
l6
de
25
l7
estrgeno
25
una
mayor
predisposicin
hacia
osteoporosis
hacia
sus
l8
25
25
22
Estrgenos
25,28
l9
l0,28
Figura 7,8,9
Figura 7. Estradiol
Figura 8. Estrona
Figura 9. Estriol
l0,25,28
20
Esta hormona, al igual que otros casos, circula por el torrente sanguneo unido a
una protena portadora, y son inactivadas principalmente en el hgado mediante
procesos de sulfoconjugacin y de glucoronoconjugacin. Sin embargo, los
niveles plasmticos de estrgenos pueden ser medidos con suficiente exactitud
actualmente, al igual que su utilizacin urinaria en forma de conjugados, lo que
permite inferir el comportamiento ovrico en un ciclo normal de una mujer sana.
En ese caso, los niveles estrognicos llegan a un pico en la preovulacin, y es
seguido de un pequeo descenso y una nueva elevacin durante la aparicin del
cuerpo luteo. La produccin diaria de estradiol y estrona oscila, segn el da del
ciclo, entre 0,l y 0,5 mg. por 24 horas. Los niveles plasmticos varias de 0 a 500
g/mL.
29
2l
III.
3.1.
Parte experimental
Reactivos y materiales
Equipos
Reactivos
Reactivos de
solubilidad
N-hexano Q.P , acetato de etilo Q.P, cloroformo Q.P, isobutanol Q.P, Nbutanol Q.P, metanol Q.P, etanol Q.P, agua destilada
Reactivos de caracterizacin
Reactivo Shinoda Q.P, reactivo Mayer Q.P, reactivo Nihindrina Q.P,
reactivo Gelatina Q.P, reactivo Cloruro Ferrico Q.P, reactivo 2,4dinitrofenilhidrazina Q.P, reactivo Dragendorf Q.P, reactivo Molish Q.P,
reactivo Lieberman Q.P, NaOH 5%, Q.P, NaCl , Formol 80%.
Estudio farmacolgico
24 ratas albinas raza
Holtzmann
Sexo:
Hembra
Edad: 2 semanas (jvenes)
29 gr. extracto metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje
3.2
3.2.1
Metodologa:
Estudio fitoqumico.
22
23
Resultados
Reaccin de Shinoda
Reaccin de Dragendorff
Reaccin de Mayer
Reaccin Lieberman
l3,
3,8,l6
Estudio Farmacolgico
31
30-32
Procedimiento
Se utilizaron veinticuatro ratas albinas hembras raza Holtzmann de dos
semanas de vida y peso aproximado de 200 gr. de peso, las ratas albinas
utilizadas para este ensayo se mantuvieron en condiciones de 45 a 50 % de
humedad a una temperatura ambiental de 23C, agua filtrada y alimento
comercial. Se agruparon aleatoriamente en cuatro grupos de seis individuos
cada uno, el primer grupo recibi suero fisiolgico 5 mL/Kg. (grupo control) ,
al segundo grupo se le administr El Mauritia flexuosa L. 25 mg/Kg. (el
extracto fue diluido en l00 mL de agua); al tercer grupo se administr E 2
Mauritia flexuosa L 50 mg/Kg. (el extracto fue diluido en l00 mL de agua); al
cuarto grupo se le administr E3 Mauritia flexuosa L 500 mg /kg (el extracto
fue diluido en l0 mL de agua ). Se administr el extracto por va oral una vez
por da durante 30 das. Luego se procedi a extraer muestras de sangre por
puncin cardiaca, previo adormecimiento de las ratas en estudio con
anestsico, se coloc la muestra tomada en tubos de ensayo con epinefrina y
se llevaron al laboratorio de Anlisis clnico del Hospital 2 de Mayo para
30-32
IV.
Resultados
Estudio fitoqumico
Los resultados de la marcha de solubilidad del extracto metanlico total de
Mauritia flexuosa L aguaje se muestran en la Tabla 3.
Tabla 3. Solubilidad del extracto metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje.
Solvente
Solubilidad
n-hexano
++
Parcialmente soluble
Acetato de etilo
Poco soluble
Cloroformo
Poco soluble
Isobutanol
Poco soluble
n-butanol
Poco soluble
Metanol
++
Parcialmente soluble
Etanol
+++
Soluble
Agua
++
Parcialmente soluble
Metabolitos secundarios
Resultados
Aminocidos libres
Taninos
++
Compuestos fenlicos
+++
Rvo. Dragendorff
Alcaloides
++
Rvo. Mayer
Alcaloides
++
Compuestos carbonilo
Rvo. Shinoda
Flavonoides
++
Rvo. 1a-naftol
Glucsidos
Esteroides , terpenoides
Quinonas
Rvo. Nihindrina
Rvo. gelatina
Rvo. FeCl3
Rvo. Lieberam-Burchard
Rvo. NaOH 5%
Anlisis cromatogrfico
Del extracto metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje se realiz cromatografa
en capa fina con mezcla de solventes Diclorometano-Metanol (2:l), del cual se
obtuvieron 7 fracciones. Tabla 5.
Rf
FeCl3
Dragendorf
H2SO4
0.04
Marrn
Marrn verdoso
Marrn
Leve rosado
II
0.08
Marrn
No se observa
Marrn
Marrn
III
0.10
Marrn
No se observa
Marrn
Marrn
IV
0.13
Fluorescencia celeste
No se observa
Marrn
Marrn
0.20
Fluorescencia azul
No se observa
Marrn
Marrn
VI
0.25
Fluorescencia celeste
No se observa
Marrn
Marrn
VII
0.42
Azul
No se observa
Anaranjado
Marrn
: 268, 332
nm;
EtOH
mx
: 268, 332
nm;
Metox.Na
mx
AlCl
mx
: 268, 332
nm;
: 268,332 nm
+ AlCl +
HCl mx
EtOH
3
EtOH +
Actato mx
M2:
: 273,327
nm;
: 273,327 nm;
Metox.Na
mx
EtOH
mx
:273,327 nm;
EtOH +
AlCl
mx
: 273,327 nm;
: 273,327 nm
EtOH + AlCl +
mx
HCl
3
EtOH +
Actato mx
M3:
: 256,282,325nm;
:256,292,325nm;
Metox.Na
mx
EtOH
mx
AlCl
mx
: 256, 282,325
nm;
+ AlCl +
HCl mx
EtOH
3
: descomposicin
EtOH +
Actato mx
M4:
EtOH + AlCl
Metox.Na
EtOH
mx
:270,282,325 nm;
EtOH +
: 260, 320
nm;
: 265, 360
nm;
mx
+
EtOH
AlCl
+ HCl
mx
M5:
mx
: descomposicin
: 258, 325
nm;
EtOH +
Actato mx
: 285, 325
Metox.Na nm;
mx
EtOH
mx
EtOH +
AlCl
mx
: 270, 325
nm;
: descomposicin.
+ AlCl +
HCl mx
EtOH
3
EtOH +
Actato mx
M6:
: 255, 330
nm;
: 270, 330
Metox.Na nm;
mx
EtOH
mx
AlClEtOH +
3
mx
EtOH + AlCl +
mx
HCl
: 263, 330
nm;
: 255, 330 nm
EtOH +
mx
Actato
Metox.Na
mx
EtOH
mx :;
M7:
: 258,285, 323 nm;
EtOH + AlCl3 +
HCl
EtOH
mx
283,360 nm;
:;
AlClEtOH +
:;
+ AlCl + HCl
EtOH
:;
mx
3
: 270,
EtOH +
EtOH +
Actato
: 270,283, 360
nm;
mx
EtOH +
mx
Actato
mx
mx
AlCl
mx
:258,285,323 nm
Estudio farmacolgico
El anlisis de las muestras sanguneas tomadas de ratas albinas tratadas con
extracto metanlico Mauritia flexuosa L aguaje di los siguientes
valores.
Tabla 6.
Tabla 6. Valores sanguneos de estradiol en ratas albinas hembras tratadas con
extracto metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje
N
Tratamiento
Dosis mg/Kg.
Grupo
Estradiol UI/Kg
ll3.3
l00.7
64.9
ll2.3
2l4.6
l00.8
88.9
87.9
1
2
3
4
5
Control
(suero
fisiolgico)
5ml/Kg
l07.4
10
Extracto 1
25mg/Kg
90.6
l47.9
12
ll6.8
13
90.4
14
l25.2
60.6
11
15
Extracto 2
50 mg/Kg
82.5
17
l23.4
18
l04.8
19
8l.3
20
70.l
92.3
16
21
Extracto 3
500 mg/Kg
7l.2
23
l06.3
24
ll0.9
22
Anlisis estadstico de los datos obtenidos en ratas albinas hembras que recibieron
Mauritia flexuosa aguaje durante 30 das por va oral. Tabla 7 y figura 10.
Tabla 7. Anlisis estadstico de datos hormonales de ratas albinas hembras tratadas
con extracto metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje
N
Tratamiento
Valor
Error
medio
estndar
Lower Bound
Upper Bound
117.8
20.7
64.7
170.9
106.6
9.5
82.1
131.1
97.8
10.2
71.6
124.1
88.7
701
70.4
107.0
Sum of Squares df
Mean Square
Between Groups
2774.4
3.0
924.8
0.9 0.451
Within Groups
20180.2
20.0
1009.0
Sig.
V.
Discusin
estructuras
por
correlacin
espectral
con
los
reactivos
de
batocrmico de 40 nm, que al ser tratado con el cido no se rompe por lo que no
regresa a su valor original. Al tratarlo con acetato de sodio se observa
descomposicin.
M5
Segn el espectro en etanol el esqueleto bsico que corresponde a esta fraccin, es
de una flavona (Anexo 3), pues al tratarlo con metxido de sodio hay un efecto
batocrmico de 27 nm, lo que nos indicara que el compuesto tiene hidroxilos
libres, al hacer reaccionar con tricloruro de aluminio se observa un efecto
batocrmico de l5 nm, que luego al tratarlo con HCl no regresa al valor anterior,
esto nos indica la presencia de hidroxilo libre en las posicin 5 ; en la posicin 5
existe un OH libre que forma un complejo con el tricloruro de aluminio que al ser
tratados con el cido no se rompe por lo que no regresa a su valor original. Al
tratarlo con acetato de sodio no se observa descomposicin.
M6
Segn el espectro en etanol el esqueleto bsico que corresponde a esta fraccin es
de una flavona (Anexo 3), pues al tratarlo con metxido de sodio hay un efecto
bactocromico de l5 nm lo que nos indicara que el compuesto tiene hidroxilos
libres, en este caso en posicin 7 estara sustitudo. Al hacer reaccionar con
tricloruro de aluminio se observa un ligero efecto batocrmico de 7 nm., que
luego al tratarlo con HCl se mantienen las seales, esto nos indica que en posicin
5 existe OH libre para que forme un complejo con el tricloruro de aluminio, en
tanto en 4 habra un grupo metoxilo. Al tratarlo con acetato de sodio no se
observa descomposicin.
M7
Segn el espectro en etanol el esqueleto bsico que corresponde a esta fraccin es
de una isoflavona (Anexo 4), pues al tratarlo con metxido de sodio hay un efecto
batocrmico de 7 nm lo que nos indicara que el compuesto tiene hidroxilo libre
en posicin 7, al hacer reaccionar con tricloruro de aluminio se observa efecto
batocrmico de 37 nm, que al tratarlo con HCl no hay variacin en las seales,
esto nos indica presencia de hidroxilos libres en las posiciones 5 y 7 en tanto que
en 4 habra un grupo metoxilo, al tratarlo con acetato de sodio no se observa
descomposicin.
3l
las
L.
3,l8,l9
32
el
l2
Las isoflavonas son capaces de actuar sobre otras muchas enzimas, tales como las
topoisomerasas I y II, que catalizan cambios topolgicos en el ADN, y que son
necesarias en la replicacin del mismo. En este caso, las isoflavonas actan sobre
el complejo topoisomerasa-ADN induciendo la apoptosis o muerte celular
programada, tal y como se ha observado en lneas celulares de cncer de mama.
l2
l2
de
pulpa,
lo
cual
ayudara
en
la
reparacin
de
los
tejidos,
VI. Conclusiones
VII.
Referencias Bibliogrficas
1.
2.
Portal
Agrario.
Ministerio
de
Agricultura.
Per.l998.
www.ming.gob.pe/rrnn/rrnn_aguaje.shtml.
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Editorial
OMEGA
S.A.
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12.
13.
Sw,
familia
fluido.Huanuco l999.
Malvaceae).
Estandarizacin
del
extracto
14.
15.
16.
17.
18.
l025-5583.Disponible
en
la
World
Wide
Web:
<http://www.scielo.org.pe/scielo.
19.
del
Rosario.
Endocrinologa
Ginecolgica,
Instituto
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22.
23.
Sabes
que
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isoflavonas.
Review
Borrad.29
July, 2008.
http://wwwcarmenvip.com
24.
25.
Interamericana
l99l,p,2066-2068,2080.
Mc.Graw-Hill.
Inc.
Atlampa-Mxico
D.F.
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27.
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30.
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32.
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www.regionloreto.gob.pe/anazonia/libros/5l/5l00000.(l993)
34.
www.insitu.or.pe/webiwnsitu/aguaje.html.(l998)
VIII. Anexos
ANEXO 2
M1:
: 268, 332
nm
EtOH
mx
Metox.Na
mx
EtOH + AlCl
mx
Glu - O
O
O
CH3
: 268, 332
nm
: 258, 332nm
EtOH + AlCl3 +
HCl mx
EtOH +
Actato mx
H3 C
: 268, 332
nm
: 268,332
nm
CH3
M2
: 273,327
nm
EtOH
mx
Metox.Na
mx
EtOH + AlCl
mx
: 273,327
nm
EtOH + AlCl3 +
HCl mx
CH3
H3
C
: 273,327
nm
: 273,327
nm
O
EtOH +
mx
Actato
: 273,327
nm
H3 C
HO
HO
M3
: 256,282,325nm
EtOH
mx
: 256,292,325nm
Metox.Na
mx
: 270,282,325 nm
EtOH + AlCl
mx
O
CH3
EtOH + AlCl3 +
HCl mx
EtOH +
mx
Actato
: 256, 282,325
nm
H3C
:
Descomposicin
4,5-di-O-metoxi-6,7-dihidroxi flavona
40
ANEXO 3
M4
: 260, 320 nm
: 265, 360 nm
EtOH
mx
HO
Metox.Na
mx
CH3
EtOH + AlCl
mx
: 305, 360 nm
EtOH + AlCl
mx
HCl
3+
: 305, 360 nm
EtOH +
mx
Actato
OH
: Descomposicin
M5
: 258, 325 nm
EtOH
mx
Metox.Na
mx
CH3
: 285, 325 nm
EtOH + AlCl
mx
EtOH + AlCl3 +
HCl mx
EtOH +
mx
Actato
O
O
: 270, 325 nm
CH
: 270, 325 nm
3O
: 258, 325
nm.
OH
CH3
3,4,7-trimetoxi-5-hidroxi-flavona
M6
EtOH
mx
Metox.
Na mx
EtOH +
AlCl
m
x
EtOH
+AlCl
+ HCl
mx
EtOH
+Actato
mx
: 255, 330 nm
: 270, 330 nm
: 263, 330 nm
: 263, 330 nm
R-O
O
OH
O
CH3
: 255, 330 nm
4-metoxi-5-hidroxi-7-O-R- flavona
4l
OH
ANEXO 4
HO
M7:
: 258,285, 323
nm
EtOH
mx
Metox.Na
mx
EtOH + AlCl
mx
EtOH + AlCl
mx
HCl
3+
EtOH +
mx
Actato
: 265, 292,323
nm
O
: 270, 283,360
nm
CH3
5,7-dihidroxi-4-metoxi isoflavona
: 270,283, 360
nm
: 284, 330 nm
42