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especiales de
investigacin y/o
diagnostico.
1. CUTIVO DE TEJIDOS:
Podemos decir que un cultivo de tejidos, es el conjunto de tcnicas que nos permiten
mantener clulas in vitro con una gran aproximacin a sus propiedades y funciones in
vivo. Dependiendo del grado de preservacin de la estructura del tejido u rgano de
origen y del tiempo de su duracin distinguimos diferentes tipos de cultivos: de rganos,
explantes, primarios, secundarios, etc. El trmino cultivo de tejidos suele ser usado
como un trmino genrico que incluye el de cultivo de rganos y el de cultivo de
clulas.
-----1.1 Equipamiento del laboratorio, instrumental y material:
En el rea de preparacin: refrigerador, balanzas, potencimetro, plancha
elctrica con agitador magntico, frascos Erlenmeyer, botellas y material de
vidrio o plstico.
En el rea de lavado y esterilizacin autoclave manual o automtica, destilador
de vidrio, gradillas para secado, bandejas de aluminio y de plstico de varios
tamaos, recipientes de plsticos grandes, estufas para esterilizacin y secado.
En el rea de transferencia: gabinete de flujo laminar, microscopio de diseccin
con luz incidente e instrumentos de diseccin: cuchillas, mangos para cuchillas,
agujas de diseccin, pinzas, tijeras, navaja de afeitar. Tambin se necesitan
frascos con alcohol, mechero de alcohol, mascaras, guantes, marcadores a
prueba de agua, bandeja para desechos.
En el rea de incubacin: un cuarto con temperatura, iluminacin y humedad
relativa controlada, estanteras con iluminacin para los cultivos, bandejas,
termmetros de mxima y mnima y gradillas para tubos de varios tamaos.
En el rea de exanimacin: microscopio estereoscopio, microscopio compuesto,
lentes de aumento y elementos pticos complementarios
En el rea de crecimiento in vivo: macetas, suelo, bandejas, cmaras de alta
humedad.
Otros equipos tiles incluyen: microscopio invertido, microscopio compuesto
con objetivo de inmersin, agitador para cultivos en suspensin, centrifuga de
mesa, sistema de filtracin para producir agua tipo reactivo, filtros para la
esterilizacin de medios de cultivo, gabinete para secado por aire caliente,
lavadora de pipetas, desionizador de agua, pipetas Pasteur, horno de microondas,
cmaras de crecimiento controladas, etc.
1.2 Tcnica asptica:
Es una serie de medidas preventivas contra los microbios y va de infeccin objetivo
tomada. Para prevenir y evitar la infeccin postoperatoria, con el fin de garantizar el
xito de la ciruga
(WWW.JUSTDOCUMENT.COM)
Calor seco: Los recipientes de vidrio seco que se utilizan para operaciones
estriles se pueden esterilizar por medio de aire caliente; para el efecto se coloca
en una estufa de aire caliente a una temperatura mnima de 170C,
preferiblemente durante dos horas.
Es obvio que todos los materiales esterilizados mediante calor seco debern de
estar limpios
Vapor bajo presin (autoclave): es muy eficiente para destruir todas las formas
de bacterias y hongos y sus esporas, y es el mtodo ms utilizado para esterilizar
diferentes materiales incluyendo los medios de cultivo.
La autoclave ms utilizada actualmente en el laboratorio es la contraparte de
mayor tamao de la olla de presin comn. Es necesario extraer todo el aire
antes de empezar el proceso de esterilizacin, esto se logra automticamente al
permitir que el vapor expulse el aire el aparato , antes de cerrar la vlvula
correspondiente. La temperatura de la autoclave se regula mediante la presin y
es directamente proporcional a esta.
1. Medios de cultivo:
Son necesarios para el aislamiento, mantenimiento, la reproduccin y la identificacin
de los microorganismos.
pH adecuado
2. Incubacin:
Depende del metabolismo del microorganismo a cultivar.
Tiempo.
Temperatura.
Reactivos:
El laboratorio debe asegurarse que la calidad de los reactivos utilizados sea apropiada
para los ensayos realizados.
(http://www.scientificainc.com/)
2. CITOMETRIA DE FLUJO:
La citometra de flujo es una tecnologa biofsica basada en la utilizacin de luz lser,
empleada en el recuento y clasificacin de clulas segn sus caractersticas
morfolgicas, presencia de biomarcadores, y en la ingeniera de protenas. La citometra
de flujo es una tcnica utilizada en forma rutinaria en muchos centros de salud para el
diagnstico y seguimiento de muchas enfermedades
Un rayo de luz monocromtico, usualmente de luz lser, es dirigido hacia un finsimo
chorro de lquido hidrodinmicamente enfocado. Se coloca una serie de detectores en el
punto en el que el chorro de lquido atraviesa el rayo de luz. Cada una de las partculas
suspendidas que atraviesan el rayo de luz lo dispersan, y las sustancias qumicas
fluorescentes que se encuentran dentro o adheridas a la partculas son excitadas hasta
emitir luz a una longitud de onda mayor que la de la fuente de luz. Esta combinacin de
de luz dispersada y fluorescencia es recogida por los detectores, y por medio de un
anlisis en la fluctuacin de la intensidad luminosa recogida por cada detector, es
posible derivar varios tipos de informacin acerca de la estructura fsica y qumica de
cada partcula individual.
El detector frontal o FSC brinda informacin acerca del volumen de la partcula,
mientras que los detectores laterales o SSC brindan informacin acerca de la
complejidad interna de la misma. Esto es debido a que los componentes internos de las
clulas dispersan la luz.
Los citmetros de flujo modernos son capaces de analizar varios miles de partculas por
segundo, y pueden separar y aislar activamente partculas de acuerdo a propiedades
especficas. Los citmetros de flujo ofrecen una cuantificacin automtica de una serie
de parmetros con altsima calidad.
Un citmetro de flujo tiene cinco componentes principales:
Un sistema de medicin
II.
III.
Se puede reproducir solo parte del genoma en donde se conoce por lo menos una
mnima secuencia.
transferencia Southern
transferencia Northern
La transferencia en ranura
transferencia puntiforme
hibridaciones Grunstein