ISSN 0104-8945

Ministrio da Agricultura e do Abastecimento

Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria-EMBRAPA
Agrobiologia

N25, dez./98, p.1/3

COMUNICADO
TCNICO

DESCONTAMINAO DE SUBSTNCIAS TXICAS: FENOL E BROMETO DE

ETDIO.
Ktia Regina dos Santos Teixeira1
Wanderley de Oliveira Pires2
Jos Ivo Baldani1
A prtica de processos referentes a biossegurana so essenciais para a manuteno da
sade das pessoas que lidam diretamente com organismos vivos e substncias txicas para o
organismo humano. No caso dos microrganismos essencial o uso de fluxos laminares ou outras
tcnicas de conteno (como o uso do bico de Bunsen) que impeam a sua disperso durante a
manipulao. Outra prtica muito importante que todos os materiais derivados de cultivos de
microrganismos devem ser submetidos a esterilizao (por exemplo autoclavagem) antes de
serem descartados. Por outro lado, tambm importante eliminar ou minimizar os riscos de
contaminao do ambiente, solues, bancadas, equipamentos, utenslios (pinas, esptulas, etc.)
ou vidrarias por substncias txicas para o organismo humano.
O processamento de substncias com alto potencial txico ou mutagnico, como o
Brometo de Etdio (EtBr) e Fenol, tem sido um dos grandes problemas da maioria dos
laboratrios. O Brometo de Etdio (EtBr) comumente utilizado nos laboratrios para corar
cidos nuclicos submetidos a eletroforese em gel de agarose ou a gradiente de Cloreto de csio.
A ao do EtBr como corante se deve a sua capacidade de intercalar entre as bases dos cidos
nuclicos e fluorescer sob luz Ultra Violeta. Este caracter intercalante do EtBr tambm o
responsvel pelo seu alto potencial mutagnico pois pode gerar alteraes na estrutura do DNA
as quais podero ser perpetuadas durante o processo de duplicao. Dessa forma a leitura errada
das sequncias de bases do DNA pode resultar em mutao. O Fenol por sua vez requer que a sua
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Auxiliar Operacional III da Embrapa Agrobiologia

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manipulao ocorra em capela de exausto devido a sua caracterstica de volatilizao. Os gases

liberados so altamente txicos, irritantes de pele e mucosa podendo resultar em queimaduras ou
at mesmo srios problemas respiratrios. Uma das formas de minimizar o problema de descarte
dessas substncias o tratamento qumico para inativar

essas molculas pelo rompimento

qumico do anel aromtico, pelo uso de substncias ativadas como resina e carvo ou mesmo pela
queima em fornos de alta temperatura de resduos acumulados em papis (Lunn & Sansone,
1987, 1989; Quillardet & Hofnung, 1988; Bensaude, 1988).
No Laboratrio de Gentica e Bioqumica da Embrapa Agrobiologia tem-se buscado
resolver o problema de descarte de EtBr e Fenol da seguinte forma:
1 - Tratamento de resduos de Fenol.
Todos os resduos derivados de Fenol, utilizado em uma das etapas de extrao de cidos
nuclicos para eliminar protenas e restos celulares, so descartados separadamente em um
frasco. Posteriormente, a este resduo adicionado Carbonato de Clcio suficiente para formar
uma pasta. Em seguida, esta pasta deixada em repouso por mais de 6 meses at que a mistura
possa ser incinerada eliminando a emisso de gases txicos.
2 - Tratamento de solues concentradas de EtBr (at 10 mg/ml).
Existem vrias tcnicas para o tratamento de descontaminao do EtBr. A mais simples e
fcil de ser aplicada na rotina baseda no tratamento de solues de EtBr com Permanganato de
Potssio em condies de acidez. Durante este tratamento haver a oxidao do EtBr pelo
Permanganato resultando na formao de um precipitado marrom escuro. Posteriormente, esta
mistura neutralizada com NaOH e descartada (Sambrook et al., 1989). O protocolo, como
descrito em Sambrook et al. (1989) o seguinte: Adicionar, se necessrio, gua na soluo
concentrada at diluir a concentrao de Et Br para 0,5 mg/ml. Em seguida adicionar KMnO4 0,5
M equivalente a 1 volume da soluo que ser descontaminada. Misturar cuidadosamente e, em
seguida, adicionar 1 volume de HCl 2,5 M. Misturar cuidadosamente e deixar descansando por
vrias horas temperatura ambiente. Para finalizar, neutralizar esta mistura adicionando 1
volume de NaOH 2,5N. Misturar cuidadosamente e a soluo poder ser descartada diretamente
na pia sob gua corrente.
Este mtodo de descontaminao de solues concentradas de EtBr (10 mg/ml) capaz de
reduzir a atividade mutagnica em at 3000 vezes como foi descrito por Quillardet & Hofnung
(1988).

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OBS.: No caso da gua usada no descoramento dos gis, onde existe uma baixa concentrao de
EtBr, utilizar Hipoclorito de sdio (gua sanitria comercial) na proporo de 1:2, antes de
descartar na pia. Os resduos slidos (gis e papis) so secos a temperatura ambiente e
posteriormente incinerados em forno de alta temperatura.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS:
BENSAUDE, O. Ethidium bromide and safety - readers suggest alternative solutions. Letters to
editors. Trends in Genetics, Amsterdam, v.4, p.90, 1988.
LUNN, G.; SANSONE, E.B. Ethidium bromide: destruction and decontamination solutions.
Analytical Biochemistry, New York, v.162, p.453-458, 1987.
LUNN, G.; SANSONE, E.B. Decontamination of Ethidium bromide spills. Applied Industrial
Hygiene, Glenway, v.4, p.234-237, 1989.
QUILLARDET, P.; HOFNUNG, M. Ethidium bromide and safety - readers suggest alternative
solutions. Letters to editors. Trends in Genetics, Amsterdam, v.4, p.89, 1988.
SAMBROOK, J.; FRITSCH, E.F.; MANIATIS, T. Molecular cloning: a laboratory manual.
New York: Cold Spring Harbor, 1989. 3v.