UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE

SERVICIOS DE LABORATORIO: ANALISIS CLINICO II

ELABOPRADO POR: BIOQUIMICA MARLENE MEDRANO GUZMAN
GUIA PRCTICA ABRIL de 2016
CREATININCINASA MB
CK-MB
1. OBJETIVOS Determinar cuantitativamente la actividad de la isoenzima MB de la
Creatina quinasa (CK-MB) por el mtodo cintico en suero.
2. DEFINICIONES:
CPK-MB: Isoenzima que predomina en el miocardio y sus niveles se elevan
cuando existe proceso necrtico del msculo cardiaco aumentando
progresivamente segn su extensin y evolucin clnica, aparece a las 3-6
hrs., mxima intensidad 12-24 hrs. Declinando 24-72 hrs.
3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:
3.1. Fundamento: : La CK-MB cataliza la desfosforilacin de la creatina fosfato para
producir adenosina trifosfato (ATP), que reacciona con la glucosa en presencia de
la hexoquinasa (HK) formando glucosa-6-fosfato esta en presencia de la glucosa6-fosfato deshidrogenasa (G-6-PDH), es oxidada a 6-fosfogluconato (6-PG) y
reduce el NAD a NADPH. La velocidad de incremento en la absorbancia en 340
nm es proporcional a la actividad del CK-MB en la muestra.
Creatina Fosfato + ADP

ATP + Glucosa

Glucosa-6-fosfato + NADP

CK-B

HK

G-6-PDH

3.2. Muestra: Suero

3.2.1. Cantidad: 50 ul.
3.2.2. Requisitos: No hemolizado, limpio y fresco.
3.3. Equipos, materiales y reactivos:
3.3.1. Equipos:
Centrifuga
Espectrofotmetro (Stat Fax)
Bao mara a 37C
Vortex
3.3.2. Materiales:

Creatina + ATP

ADP + Glucosa-6-fosfato

6-PG + NADPH

Micropipetas :10 a 100;100 a 1000 ul

Tubos de hemolisis (tubos de Stat fax)
Reloj marcador
3.3.3. Reactivos:
Reactivos 1
Reactivo 2
3.4. Procedimiento: Enumerar los tubos de la siguiente forma:
REACTIVOS
BLANCO
STANDAR
DESCONOCIDO
Reactivo de
trabajo
Muestra

1 ml

1 ml

50 ul

Preincubar 2 min a 37C.

Leer en el STAT FAX: N de prueba .
Mezclar inmediatamente en el vortex y disparar el cronometro.
Tiempo de reaccin 5 min (Leer absorbancias a 340 nm cada 60 seg (4 intervalos).
Registrar los resultados e informar.

3.5. Valores de referencia:

Hombres y mujeres

0 - 24 U/L

4. ANEXOS:
Anexo 1: Sustancias interferentes conocidas:
Valores de bilirrubina 25 mg/dl, triglicridos hasta 600 mg/dl y hemoglobina
hasta 120 mg/dl no producen interferencias significativas.
Valores de triglicridos mayores a 600 mg/dl producen resultados falsamente
disminuidos.
Valores de hemoglobina hasta 22.5 mg/dl no producen interferencias
significativas, muestras con valores superiores pueden dar resultados
falsamente elevados.Suero o plasma con hemlisis visible o intensa.
Anexo 2:Linealidad:
La reaccin es lineal hasta 600 U/L
Para valores superiores, diluir con Sol. Fisiolgica y repetir la determinacin.
Multiplicar el resultado por el factor de dilucin empleado.
Anexo 3:Preparacin de reactivos de trabajo:
Usar Reactivo de trabajo: Para cada determinacin disolver: mezclando 4
partes Rvo. 1 (800 ul) + 1 parte del Rvo. 2 (200 ul).
Estabilidad y condiciones de almacenamiento:

El reactivo de trabajo es estable por 1 da entre 15- 25 C y 14 das entre 2-8

C, manteniendo el recipiente cerrado, mientras no suceda contaminacin
qumica o microbiana.
Para preservar su desempeo el reactivo debe permanecer fuera del
frigorfico nicamente el tiempo necesario para obtenerse el volumen a ser
utilizado. Evitar exposicin a la luz solar directa.
Una vez abiertos no deben permanecer destapados y fuera del refrigerador
durante lapsos prolongados.
Evitar exposicin a la luz solar directa, durante el manipuleo los reactivos
estn sujetos a contaminaciones de naturaleza qumica y microbiana que
puedan provocar disminucin de la estabilidad.

Anexo 4: Almacenamiento y estabilidad del suero:

La actividad enzimtica del CPK-MB es estable 8 hrs. Entre 15 25

C, 5 das entre 2-8C y 4 semanas entre 15-25C. La muestra debe
ser protegida de la accin de la luz

5. Clculos de los resultados:

CPK-MB U/L = diferencia de Abs / min x factor
Factor a 37 C = 1340
6. CONCLUCIONES E INTERPRETACION

7. CUESTIONARIO:
1. CUAL ES LA ISOENZIMA CK EN EL SUERO MAS ABUNDANTE EN
UN INFARTO DE MIOCARDIO?
2. CUAL ES LA SECUENCIA HABITUAL DE APARICION DE ENZIMAS
SERICAS DESPUES DE UN INFARTO DE MIOCARDIO?

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SERVICIOS DE LABORATORIO: ANALISIS CLINICO II
ELABOPRADO POR: BIOQUIMICA MARLENE MEDRANO GUZMAN
GUIA PRCTICA ABRIL de 2016

TROPONINA
1. OBJETIVO: Determinar cualitativamente la Troponina cTnI cardiaca en
sangre por inmunocromatografa prueba rpida un solo paso en cassette.
2. DEFINICIONES:

Troponina: Es una protena que se encuentra en el msculo cardiaco,

despus que ocurre la lesin cardiaca la troponina I es liberada en la sangre
entre 4 a 6Hrs. despus del cuadro de dolor, permanece elevada de 6-10
das. Marcador para el infarto del miocardio.

3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:

Fundamento: Inmunoensayo cualitativo de membrana esta pre cubierta de
anticuerpos anti-c-tnI, la mezcla migra hacia arriba de la membrana
cromatogrfica por accin capilar para reaccionar con el reactivo de captura en
la membrana y generar una lnea coloreada. La presencia de esta lnea de color
en la regin de la banda del examen indica un resultado positivo, mientras que
su ausencia indica negativo. Como control una lnea de color siempre aparecer
en la regin de la banda de control indicando que el volumen es el adecuado y
que la reaccin de la membrana ha ocurrido.

3.1. Muestra: Sangre total, suero o plasma.

3.2. Cantidad: 100 ul.
3.3. Requisitos: No hemolizado, limpio y fresco.
4. Equipos, materiales y reactivos:

4.1.1. Equipos:
Centrifuga
Lancetas
4.1.2. Materiales:
Micropipetas :10 a 100ul
Tubos de hemolisis (tubos de Stat fax)
Placas
Cuentagotas

Reloj marcador
4.1.3. Reactivos:
Buffer
Reactivo de captura cubierto en la membrana (cassette)
4.2. Procedimiento:
Abrir el sobre que contiene el dispositivo, retire el dispositivo el examen del sobre
Sellado y utilizarlo inmediatamente.

Coloque el dispositivo en una superficie limpia y nivelada

Para suero o plasma :Sostenga el gotero verticalmente y transferir 2 gotas de suero
o plasma (50 ul )al pozo del espcimen S y empiece a tomar el tiempo.

Para sangre total venosa o puncin dactilar: dejar caer 3 gotas colgantes (75 ul)
al pozo del espcimen S , luego aadir 1 gota (40 ul) de buffer.

Controlar el tiempo y espere por la aparicin de lnea roja C (control).

Los resultados deben ser ledos en 10 mim. .No leer el resultado despus de 20 min.

cTn1(+)

4.3. Interpretacin de los resultados:

Positivo: Aparicin de 2 lneas rojas distintas, una lnea debe estar en la regin de
la lnea de control (C) y la otra lnea roja debe estar en la regin de la lnea de
prueba (T).
Negativo: Una lnea roja aparece en la regin de la lnea de control (C). No
aparece ninguna lnea aparentemente ni roja ni rosada en la regin de la lnea de
prueba (T).

NO valido: La lnea de control (T) no aparece. Las razones mas probables para
que falle la lnea de control de control es que el volumen de la muestra sea
insuficiente, uso de mala tcnica y repita con un nuevo cassette.
Nota: la intensidad de color rojo en la regin de prueba (T) variara dependiendo de
la concentracin de troponina presente.

5. ANEXOS:
Sustancias interferentes conocidas:
Suero o plasma con hemlisis visible o intensa.
Valores de bilirrubina 6 mg/ml, triglicridos 15 mg/ml y hemoglobina hasta 10
mg/ml y albumina 110 mg/ml no producen interferencias.
Limitaciones de la prueba:
Esta prueba rpida solo indica el nivel cualitativo de cTnI no debe ser usado
como nico criterio para el diagnostico de miocardio.
No puede detectar valores menores de 0.5 ng/ml, resultado negativo no
excluye la posibilidad de infarto de miocardio.
Preparacin de reactivos de trabajo:
Permita que el dispositivo del examen, espcimen, buffer y/o controles
adquieran temperatura ambiente (15-30C) antes del examen.
Estabilidad y condiciones de almacenamiento:
Almacene de la forma que viene empacado a temperatura ambiente o
refrigerada a (2-30 C).
La prueba se puede realizar siempre y cuando se cumpla con la fecha
indicada en el empaque, la prueba debe permanecer sellada hasta su uso.
No congelar, no se debe utilizar despus de la fecha de vencimiento.
Una vez abiertos no deben permanecer destapados y fuera del refrigerador
usar inmediatamente.
Evitar exposicin a la luz solar directa, durante el manipuleo los reactivos
estn sujetos a contaminaciones de naturaleza qumica y microbiana que
puedan provocar disminucin de la estabilidad
Almacenamiento y estabilidad del suero:
Suero o plasma puede ser almacenado entre 2 a 8C hasta por 3 das, para
tiempos prolongados deben ser mantenidos a-20C.
La sangre total obtenida por puncin venosa debe ser almacenada entre 2-8C por
2 das de la coleccin.
La sangre total obtenida del dedo debe ser procesada inmediatamente