Practica # 2.

TECNICA HISTOLGICA
y
HEMATOXILINA-EOSINA.
Presenta:

Altamirano Quintero Ayde.

Arrollo Villegas Josu J.
Juan Jos Bravo Ojeda
Franco Caldern Pablo Manuel
Franco Reyes Urbano
Jasso Herrera Oscar
Velzquez Rodrguez Sergio
GRADO: 5

GRUPO: 530

Chapingo, Mxico a 18 de septiembre de 2005.

OBJETIVOS DE LA PRCTICA.

Conocer sobre la tcnica histolgica de Hematoxilina - Eosina y su empleo en

el mbito pecuario.

Practicar la deshidratacin y consecuente uso de alcoholes.

Conocer y relacionarse con los tipos de fijadores, deshidratantes, colorantes y

dems tcnicas usadas en la prctica.
INTRODUCCIN
La tcnica histolgica abarca varios procedimientos, desde la preparacin de
tejidos para su estudio microscpico, esto se logra sometiendo todo o una parte de tejido
previamente seleccionado a una serie de procesos: fijacin, deshidratacin, aclaracin,
inclusin, corte y tincin; hasta proporcionar los cortes como se conocen, montados
bajo un cubreobjeto con imgenes de estructuras contrastadas, para su estudio bajo
microscopia ptica o electrnica.
Despus de la extraccin de un tejido del organismo o cuando se quita la
irrigacin, empieza a descomponerse a consecuencia de la ausencia de oxigeno y
metabolitos esenciales, de la acumulacin de dixido de carbono y otros productos del
metabolismo celular y de la accin de diversas enzimas. Por lo tanto, para conservar el
estado natural de las clulas de los tejidos, es necesario detener cuanto antes los
procesos de descomposicin. Para ello se debe colocar el tejido extirpado en un
volumen adecuado de solucin fijadora.
Otra razn por la cual la fijacin es indispensable en cualquier tcnica
histolgica es que si las clulas no fueron fijadas puede perderse la membrana externa
que rodea el protoplasma fluido y consiste en una mezcla de solucin verdadera y
coloidal de sales, protenas, carbohidratos, lpidos, cidos orgnicos y enzimas.
La tcnica de PAS es una tincin indirecta, por lo que la accin del colorante se
intensifica con algn otro agente, llamado mordiente, el colorante solo dara una tincin
dbil o nula. El mordiente puede aadirse a la solucin colorante o utilizarse por
separado; generalmente, facilita la combinacin del colorante con los tejidos.
Si hablamos de la naturaleza de las reacciones entre tejidos y colorantes,
debemos mencionar que, en general se trata de reacciones qumicas o de fenmenos de
adsorcin, estas reacciones pueden ser relativamente inespecficas, como por ejemplo la
tincin de nucleoprotenas cidas por colorantes alcalinos, o de componentes
citoplsmicos bsicos por colorantes cidos y pueden ser especificas de grupo como en
la reaccin de PAS.
Se ha visto que dependa de ciertos grupos de tomos llamados cromforos (en
griego portadores de color), otros grupos llamados auxocromos (en griego
aumentadores) y como pueden disociarse y formar compuestos, ayudan tambin a
fijar el colorante a los tejidos; que al unirse a la molcula de colorante aumentan su
color. En este caso actan como donadores de electrones para el cromforo.

La tincin con Hematoxilina puede ser de dos tipos (progresiva y regresiva), en

la progresiva esta prosigue hasta lograr la intensidad deseada de la coloracin en los
distintos elementos tisulares. En la tincin regresiva, se aplica a los tejidos un exceso de
colorante que se elimina despus de forma selectiva, hasta lograr la intensidad deseada.
FUNDAMENTOS DE LA TINCIN CON HEMATOXILINA.
La hematoxilina es un colorante natural que se extrae del corazn o duramen del
rbol Hematoxylon campechianum. Este rbol se encontr, por primera vez, en la regin
de Campeche en Mxico, cuyos habitantes conocan bien sus propiedades colorantes.
En la actualidad existen plantaciones comerciales, sobre todo en Jamaica. Cuando
tienen unos 10 aos los rboles se cortan, se quita la corteza y la madera alburente y el
corazn se exporta en palos de alrededor de un metro, estos se cortan en pequeos
trozos para la extraccin y el colorante obtenido se utiliza no solo para microscopia sino
tambin para teir la seda y la lana. De hecho durante muchos aos la nica aplicacin
de la sustancia fue la industria textil, hasta que Waldeyer estableci firmemente su lugar
en la histologa en 1862.
El extracto natural que se obtiene del rbol no es un colorante activo; primero
debe ser oxidado para dar Hematena. En este proceso de transformacin oxidativa en
hematena el hematoxiln pierde dos tomos de hidrgeno, y uno de sus elementos se
vuelve quinona, en solucin alcohlica o acuosa, la oxidacin espontnea es muy lenta,
y puede requerir hasta un ao. Este proceso de oxidacin se llama maduracin y se
puede lograr casi instantneamente con oxidantes qumicos como el oxido de mercurio,
el yodato de sodio, el permanganato de potasio, el peroxido de hidrgeno y el
hipoclorito de calcio. Durante el proceso oxidativo se forman compuestos distintos de la
hematena, algunos tambin tienen propiedades colorantes, pero la hematena es el
principal ingrediente activo. Debe entenderse que un colorante de hematoxilina maduro
es una mezcla de hematoxilina, hematena, productos de oxidacin activa de la
hematena y hematoxiln y productos de ultra oxidacin inactivos. La oxidacin
demasiado prolongada da lugar a compuestos casi todos incoloros y sin utilidad.
MORDIENTES Y HEMATENA
Sin mordiente la hematena es casi intil, pues un colorante mbar claro que
produce una tincin mbar tambin, como un colorante bsico en una solucin cida.
Los mordientes son substancias cuya estructura fisicoqumica facilita la fijacin del
colorante sobre los tejidos. Son indispensables para la tincin con hematoxilina, con
este colorante se utilizan siempre como mordientes sales bi o trivalentes o hidrxidos
de metales. Probablemente se combinan con el colorante en forma de hidrxidos
ocupando el lugar de un tomo de hidrgeno y el resto de sus valencias permite unir el
complejo colorante-mordiente sobre la estructura tisular, principalmente los grupos
fosfatos de los cidos nucleicos, el complejo resultante de colorante, mordiente y tejido,
se llama una laca. Pueden utilizarse como mordientes sales de aluminio, hierro, cobre,
molibdeno y vanadio; tambin pueden utilizarse sales simples como sulfatos y cloruros,
pero pueden preferirse los alumbre por que eran ms fciles de conseguir en un
principio y representan ya toda una tradicin.
Adems los mordientes como el alumbre de hierro oxidan a la hematoxilina,
dando un compuesto soluble incoloro. Por consiguiente los elementos tisulares que

contienen la menor cantidad de colorante son los primeros en aclararse, y los que han
fijado mucho colorante (cromatina nuclear) siguen intensamente teidos. Esta tincin
intensa de la cromatina se debe a que los complejos colorante-mordiente son alcalinos y
se unen por preferencia a las estructuras nucleares cidas, sobre todo si el mordiente es
una sal de aluminio.
La Eosina se utiliza como colorante de fondo o de contraste en unin con los
colorantes de ncleos como la hematoxilina, la Eosina ms utilizada es la Eosina Y 44%
p/v en agua y 2% p/v en alcohol etlico. Las soluciones concentradas suelen prepararse
al 1% p/v. La eosina es el colorante citoplsmico ms utilizado en las tcnicas de
hematoxilina; pero se puede remplazar por floxina, eritrosina, azofloxina, escarlata de
biebrich o anaranjado G, que se emplean en concentraciones similares y siguiendo los
mismos pasos tcnicos.
Reactivos: Hematoxilina de Heidenhain para teir: 10 ml de solucin madre de
hematoxilina ms 90 ml de agua destilada. La solucin madre est hecha de 10 gr de
hematoxilina en 100 ml de alcohol de 96, envejecida en frasco ambar, a temperatura
ambiente, al menos durante 3 meses. Mezcla diferenciadora: 1/3 de alcohol de 70 y 2/3
de solucin saturada de cido pcrico en alcohol de 70 (Gabe, 1968; Martoja &
Martoja, 1967).
RESULTADOS
Con hematoxilina de Harris: ncleos de pardo negrusco a azul negro. Hueso y
calcio, semejante al ncleo pero mas pardo y menos intenso. Eritrocitos, msculos,
grnulos eosinfilos, rojo brillante. Citoplasma, protenas del lquido de adema, etc.,
rosa plido.
APNDICE:
Laminilla Histolgica: Superficie plana y delgada en donde se encuentra
montada una preparacin de tejido permanente. Se compone de tres partes:
PORTAOBJETOS
CORTE O TEJIDO CUBREOBJETOS
FUNDAMENTOS QUMICOS DE LA COLORACIN
La EOSINA es un colorante cido y sus propiedades tintoriales pueden ser
explicadas sobre la base de lo que se sabe acerca de la accin de las anilinas cidas. La
HEMATOXILINA aunque no es un colorante bsico, posee propiedades muy
semejantes a las anilinas bsicas.
Un colorante bsico es una molcula de anilina que tiene una o ms cargas
positivas en su porcin coloreadas y su frmula general se representa:
ANILINA+ ClLos COLORANTES BSICOS reaccionan con los GRUPOS ANINICOS de
los componentes texturales, que son los grupos fosfato de los cidos nucleicos (ADN y
RNA), los grupos SULFATO de los glucosaminoglucanos y los GRUPOS
CARBOXILO de las protenas. La reaccin de estos grupos vara segn el pH.

Como ya se menciono, la Hematoxilina no es un colorante bsico en sentido

estricto. Se la utiliza con un Mordiente (Intermediario), entre el componente textural y
la anilina, y es debido a este que la coloracin con hematoxilina se asemeja a la tincin
que produce un colorante bsico. La unin en el complejo TEJIDO MORDIENTE
HEMATOXILINA, no consiste en un simple enlace, y cuando la Hematoxilina se
coloca en agua no se disocia del tejido, sino que permanece firmemente adherida. A
causa de esto, la Hematoxilina se presta para aquellos procedimientos tintoriales en los
que a ella le sigue la Eosina u otros colorantes cidos.
Los colorantes bsicos verdaderos no suelen usarse en secuencia en donde el
colorante bsico es seguido por uno cido, por que la anilina bsica tiende a disociarse
del tejido durante los lavados posteriores en soluciones acuosas.
Un COLORANTE CIDO lleva una carga negativa en la porcin coloreada de
la molcula y su frmula general se representa:
Na+ ANILINACualquier componente de los tejidos que reaccione con un colorante bsico (o con
Hematoxilina) se dice que es BASFILO y que presenta BASOFILIA.
Hematoxilina:
Es un colorante vegetal.
Para ser utilizada debe ser oxidada previamente. Los agentes oxidantes pueden ser: el
aire (varios meses de exposicin) u oxidantes artificiales (xido de mercurio,
permanganato de potasio, dicromato potsico, etc.)
Es un colorante directo, pero en la prctica se lo utiliza en forma de lacas
hematoxilnicas (se utiliza alumbre de potasio o de sodio como mordiente para preparar
la solucin colorante), comportndose en este caso como un colorante indirecto.
Eosina:
Es un colorante artificial (se trata de derivados hidroxixantnicos halogenados con tres
grupos arilo).
Presenta auto-fluorescencia espontnea.
Se la emplea tanto en soluciones acuosas como alcohlicas.
CONCLUSIN.

La tcnica Hematoxilina-Eosina es una tcnica histolgica que permite

identificar o diferenciar las pastes de un tejido.

Hoy en da es muy til para estudiar los tejidos de los rganos y observar
anormalidades como es el caso del cncer crvico uterino (Papanicolau).

En el estudio de la anatoma animal es muy importante ya que permite observar

los tejidos de los diferentes rganos y diferenciar las estructuras de los tejidos.
BIBLIOGRAFA.

M. J. LYNCH. METODOS DE LABORATORIO. VOL.2 . 2 EDICION. NUEVA

EDITORIAL INTERAMERICANA S.A.DE C.V. MEXICO, D. F. 1988.
http://www.monografias.com/trabajos11/intecnic/intecnic.shtml#
http://www.monografias.com/trabajos11/intecnic/intecnic.shtml#RESUM