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(a) Cabeza. Es el n
ucleo, con ADN super enrollado, gracias a las protenas denominadas protaminas
que sustituyen a las histonas en otros tipos celulares, con una envoltura nuclear (EN) de la cual se
han removido durante la espermiogenesis los complejos de poro nuclear (CPN), con excepcion de algunas especies que las presentan. El citoesqueleto
participa en el soporte de la membrana plasm
atica y de la membrana acrosomal y algunos de sus
elementos son termosensibles. El principal elemento del citoesqueleto de la cabeza del espermatozoide es la teca peri nuclear (TP), que es una capsula rgida que cubre el n
ucleo del espermatozoide de
mamferos y tiene como funcion la uni
on de las membranas espermaticas y la preservaci
on de su integridad. La TP est
a subdividida en dos regiones: las capas subacrosomal (sirve para anclarlo a las vesculas derivadas del aparato de Golgi) y postacrosomal.
* Departamento
de Biologa de la Reproducci
on
en Biologa
*** Licenciatura en Biolog
a Experimental; Divisi
on de
Ciencias Biol
ogicas y de la Salud. Universidad Aut
onoma
Metropolitana-Iztapalapa editharenas2000@yahoo.com.mx
** Maestr
a
pa subacrosomal del espermatozoide de toro, carnero y cobayo, se ha detectado una subestructura llamada subestructura de la teca perinuclear (STP); el
segmento ecuatorial, que es un complejo s
uper doblado de TP; la membrana acrosomal interna (MAI)
y -membrana acrosomal externa (MAE) que transportan moleculas receptoras involucradas en la uni
on
esperma-ovocito; la vaina post acrosomal (VPA), la
cual se cree que tiene un complejo de se
nales de protenas (CPS) o factores activadores del ovocito.
b) Flagelo. Es la parte encargada del movimiento, se divide en cuatro regiones; la pieza de conexion, que une a la cabeza con el flagelo, la pieza media, que es tambien llamada cuello y donde se encuentran las mitocondrias en un arreglo helicoidal,
la pieza principal que abarca la mayor parte del flagelo utilizado en la propulsi
on, y la vaina fibrosa o
parte terminal de la cola (Fig. 1). Cada regi
on tiene funciones especficas en el movimiento, reconocimiento del ovocito y la fecundacion (Sutovski y Manandhar 2007).
A pesar de que al momento aun falta mucho por conocer acerca de los mecanismos que inducen la capacitacion, se sabe que hay modificaciones lipoproteicas membranales que:
a) permiten la exteriorizaci
on de receptores,
b) activan canales i
onicos que intervienen en la activaci
on de mecanismos de transduccion (flujo de calcio, sntesis de AMPc, fosforilacion-desfosforilacion
de protenas, etc.)
c) cambian el metabolismo energetico que conducen a la desestabilizaci
on de la membrana plasm
atica a nivel de la regi
on acrosomica y la hper activaci
on del movimiento flagelar. Estos cambios permiten al espermatozoide responder a inductores especficos y experimentar la reaccion acrosomal al fin
de la capacitacion (figura 2).
P
erdida de los factores descapacitantes
Los factores descapacitantes son moleculas que se
originan en las secreciones testiculares, epididimarias y seminales y que funcionan protegiendo a los
espermatozoides durante su periodo de almacenamiento en la regi
on caudal del epiddimo, estabilizando el acrosoma o inhibiendo la uni
on con la
zona pel
ucida (ZP) del ovocito, por lo que es importante su remocion antes de la fecundacion, pues
se ha sugerido que estos factores act
uan bloqueando a los receptores o grupos electrostaticos localizados en la membrana. Cabe se
nalar que la cara externa de la membrana plasm
atica es rica en carbohidratos cargados electricamente (glicocaliz), en
esta cara se encuentran los carbohidratos absorbidos o polisacaridos unidos a la membrana por uniones superficiales no covalentes. As los factores descapacitantes, son susceptibles de enmascarar los si-
tios de la uni
on de receptores i
onicos o de activaci
on
celular.
Cambios membranales
Bioqumicamente la membrana del espermatozoide
est
a constituida por una bcapa lipdica y protenas
unidas por interacciones no covalentes, los lpidos
est
an dispuestos en forma de una doble capa continua de 4 a 5 nm de grosor. Las protenas que est
an
incluidas en la bicapa lipdica realizan diversas funciones, como son: el transporte de las moleculas especficas hacia el interior y exterior de la celula; mismas que act
uan como enzimas o catalizadores de
las diversas reacciones y funcionan como receptores en la transduccion de se
nales. Adem
as de lpidos y protenas, la membrana tambien contiene carbohidratos, que en la mayora de los casos son cadenas de az
ucares simples o polisacaridos.
Los lpidos componen entre el 30 y el 50 % de la
membrana y de alg
un modo se encuentran anclados
a su posicion. Aspecto que resulta importante para la fertilizaci
on pues la fusion de los gametos masculino y femenino, requiere la participaci
on particular de un microambiente de lpidos. Se ha determinado que en la superficie de la membrana del espermatozoide existe un alto nivel de fosfatidiletanolamina, fosfatidilcolina, difofatidilglicerol, esterol
y lpidos neutros, representando el 70-80 %, as como un alto nivel de
acidos grasos y algunos glucolpidos, que al parecer tienen una funcion importante,
aunque no son tan abundantes como los fosfolpidos o esteroles, sumamente importantes para el espermatozoide, pues adem
as se ha observado que el
cambio en la composicion de lpidos de la membrana plasm
atica es una de las principales caractersticas de la maduracion espermatica, demostr
andose,
que el total de lpidos en esta celula disminuye con
el paso a lo largo del conducto epididimario, considerando que la fosfatidilcolina se encuentra estable en las tres principales regiones del epiddimo
(cabeza, cuerpo y cola) y las cantidades de fosfatidiletalonamina, fosfatidilserina y fosfatidilinositol
declinan significativamente hasta llegar a la regi
on
caudal.
Asimismo, la distribuci
on de las protenas en la
membrana tambien cambia marcadamente entre la
cola, pieza media y el acrosoma, y cuando se compara las protenas de la membrana espermatica con las
de otros tipos celulares, los espermatozoides, probablemente exhiben el mas alto grado de polaridad, reportandose entre las protenas especficas de la mem-
a) Acrosomal, presenta balsas lipdicas de composicion ordenada de colesterol y esfingolpidos, anclados a caveolinas, inmersas en una membrana de
composicion desordenada, b) Subacrosomal, rica
en fosfolpidos.
Las balsas lipdicas son importantes en la compartamentalizacion hecha durante la espermatogenesis
para la se
nalizaci
on en regiones especficas de la celula. La capacitacion in vitro cambia el patr
on de fijacion de estas moleculas a partir de caveolinas, protenas especializadas en la regionalizacion de estas
en sitios adecuados para un rearreglo de la capa superficial de las glucoprotenas, dejando libre la regi
on acrosomal; este reacomodo parece deberse al intercambio de glucoprotenas provenientes de las secreciones propias del aparato genital femenino y la
membrana espermatica.
Se ha demostrado que los cambios le generan la capacidad fertilizante a los espermatozoides, son iniciados por la fosforilacion dependiente de AMPc y simult
aneamente por los cambios de los lpidos membranales (Gadella, 2008). Un ejemplo claro de los
cambios superficiales se ve con los grupos sulfhidrilo y amino. Si se bloquean estos sitios se interfiere con la reaccion acrosomal. La composicion de
los fosfolpidos y su relaci
on molar con el colesterol que regulan la fluidez y la permeabilidad i
onica en las membranas cambia durante la capacitacion, este fenomeno est
a asociado a protenas captadoras de esteroles en el medio (T
opfer-Petersen y
col., 2008).
Hiper activacion
Son los cambios en la movilidad espermatica, caracterizado en:
a) aumento en el movimiento y flexion del flagelo,
b) gran amplitud del desplazamiento lateral de la
cabeza y
c) trayectoria curva y tortuosa.
Genera la fuerza requerida para la penetracion de
la capa de celulas de la granulosa y la inserci
on
inicial del espermatozoide con el ovocito (Tulsiani,
2006). Para inducirla se requiere Ca++ extracelular, elevaci
on intracelular de AMPc y disminucion
del pH intracelular. La hiper activaci
on del flagelo se debe al Ca++ que se une a protenas fijadoras en el brazo externo de la dinena (en la parte interna del flagelo) induciendo el movimiento asimetrico (Inaba, 2003). Este Ca++ proviene de varias
fuentes:
a) Reservas intracelulares mediada por los receptores de inositol 1,4,5 trifosfato (IP3),
b) Mitocondria,
c) o el que ingresa por sistemas de transporte
Na+ /H+ y Na+ /Ca++ ( Gadella et. al, 2008 ).
Transporte de iones
Los espermatozoides mantienen gradientes i
onicos
precisos a traves de su membrana plasm
atica, mismos que son regulados por ATPasas dependientes de
NA+ /K+ y Ca++ , as, la alteracion en la concentracion i
onica activa adenilato ciclasas, enzimas de origen acrosomal y enzimas relacionadas con los cambios en la movilidad (Gadella, 2008).
Se ha reportado que una ATPasa dependiente de
Ca++ en la membrana acrosomal externa, estimula
la reaccion acrosomal, y cuando esta u
ltima es inducida, se genera la desaparici
on del potencial de membrana. Se ha visto tambien que, la exocitosis es inhibida por una alta concentracion de Ca++ y un aumento en la captacion de Ca++ y Na+ , as como la liberaci
on de H+ /K+ .
En mamferos, se ha demostrado in vitro que un aumento en la relaci
on K+ /Na+ en el medio, aumenta la tasa de fecundacion; aunque en otras especies el
K+ extracelular inhibe la capacitacion, posiblemente porque la ATPasa funciona permitiendo el intercambio Na+ /K+ y manteniendo una baja concentracion intracelular de Na+ .
La zona pel
ucida (ZP) se une al menos con dos diferentes receptores en la membrana plasm
atica del espermatozoide. Uno es el G1 o tirocin cinasa, que activa la fosfolipasa C1; el otro es un receptor tirocin cinasa acoplado a fosfolipasa C. La uni
on con el re-
ceptor podra regular la adenilato ciclasa provocando el aumento del AMPc y la activaci
on de la proten
cinasa, misma, que activa los canales de Ca++ dependientes de voltaje en la cara externa de la membrana acrosomal, la cual libera Ca++ desde el citosol del acrosoma. Este es el primer aumento de
Ca++ , el cual promueve la activaci
on de la fosfolipasa C. Los productos de la hidrolisis del fosfatidil inositol bifosfato por la fosfolipasa C, diacilglicerol e inositol-trifosfato, promueven la traslocacion
de la proten cinasas y su activaci
on. La proten cinasa abre un canal de Ca++ dependiente de voltaje en la membrana plasm
atica, provocando un segundo aumento de Ca++ . El G1 puede tambien activar la fosfolipasa A2 para generar
acido araquid
onico a partir de fosfolpidos de membrana. El acido araquidonico sera convertido a prostaglandina y leucocitotrienos por las enzimas, ciclooxigenasas y lipooxigenasas, respectivamente. El aumento de Ca++ y el
pH, sumado con lo anterior, provocan la fusion membranal y la exocitosis acrosomal.
Actividad enzimatica
El inicio y mantenimiento de la movilidad espermatica, est
an asociados con la activaci
on de sistemas
enzim
aticos, hay evidencias de que la actividad de
la adenilato ciclasa aumenta durante la capacitacion, la cual eleva la concentracion intracelular de
AMPc. Estos cambios favorecen la movilidad vigorosa y estimulan la actividad de las cinasas dependientes de este nucle
otido. La fosforilacion de protenas es inducida por AMPc e induce cambios fisiol
ogicos de la membrana, a traves de modificar las
estructuras de las protenas presentes en ella. La actividad de la fosfolipasa A est
a asociada con los eventos de fusion caractersticos de la reaccion acrosomal. La accion de esta enzima sobre los fosfolpidos de la membrana provoca la acumulacion de lisofosfolpidos, que son compuestos capaces de producir fusion y lisis membranal (Flesch y Gadella, 2000).
La reacci
on acrosomal
Es especie especfica, e implica la existencia de
moleculas para el reconocimiento entre los gametos masculino y femenino y generar la repuesta fisiol
ogica adecuada. Se sabe de la presencia en el fluido oviductal de factores para se
nalizaci
on extracelular y para el reconocimiento del ovocito. La reaccion
acrosomal puede ocurrir espont
aneamente, y es posible inducirla in vitro. Es indispensable para la fecundacion y se genera como resultado de la accion de inductores adecuados (Rosado, 1988).
Morfologicamente, el acrosoma es parecido a un capuchon con una gran cantidad de enzimas hidrolitcas, se deriva del aparato de Golgi durante la espermiogenesis y por su origen, estructura y funcion
celular, es comparable a un lisosoma (figura 4; Gadella y col., 2008). Pero a diferencia de este, presenta exocitosis regulada por el metabolismo de fosfoinostidos, interaccion de nucle
otidos endogenos y
ex
ogenos, Ca++ , calmodulina, microt
ubulos y microfilamentos. Hay fusion de membrana plasm
atica y
acrosomal externa en varios sitios, formando vesculas que se desprenden, quedando la membrana acrosomal interna ahora como nueva membrana de superficie (figura 5). Las vesculas liberan su contenido a medida que el espermatozoide penetra a traves
de la ZP. A partir del modelo de reaccion acrosomal han sido numerosos los grupos de investigacion que han trabajado en este aspecto, sin embargo, no se conoce en la actualidad de manera precisa, la cascada de eventos que ocurren antes de la fusion de la membrana. Hay evidencias que se
nalan que
la reaccion acrosomal in vivo comienza con la estimulacion de un agonista natural como es la progesterona o la ZP. Este estmulo provoca una entrada de Ca++ al espermatozoide. Por otro lado, se sabe que es posible inducir la reaccion acrosomal con
el ionoforo A23187, el cual provoca la entrada de
Ca++ . Se ha propuesto un modelo en el que intervienen ATPasas de membranas cuya funcion es mantener bajos niveles de Na+ y Ca++ y altos niveles
de K+ .
Figura 4. Im
agenes con microscopa electr
onica de la reacci
on acrosomal; imagen tomada de:
http://www.google.com.mx/imgres?imgurl=
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/veterinaria/
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