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ISTOPOS ESTVEIS EM BIOLOGIA- CEN-0225

Prof. Helder de Oliveira

Laboratrio de Istopos Estveis


CENA-USP

Mdulo 2: Espectrometria de
Massas

Espectrometria de Massa

Tcnica analtica, utilizada para identificar e


quantificar compostos conhecidos e elucidar

a estrutura e a propriedade qumica de


molculas

Espectrometria de Massa

Instrumento que mede as massas de molculas


individuais carregadas (ons)
1 u.m.a. = (1,66054 x 1027 Kg) = 1/12 12C

ons so separados de acordo com suas razes


(m/q)

Espectrometria de Massa

Fornece

informaes

valiosas

profissionais de diversas

mdicos, agrnomos,

para

reas:

qumicos, bilogos,

gelogos, farmacuticos, fsicos, astrnomos,

etc.

Espectrometria de Massa - Usos


Detectar e identificar o uso de esterides em
atletas
Anlises judiciais (abuso de drogas)
Determinar como as drogas so usadas pelo
corpo
Monitorar a respirao de pacientes por

anestesistas durante a cirurgia

Espectrometria de Massa - Usos


Verificar adulterao de alimentos e bebidas
(mel, vinho, vinagre, cerveja e outros)
Monitorar processos de fermentao em
indstrias biotecnolgicas

Seqnciar biopolmeros
Identificar a estrutura de biomolculas

Espectrometria de Massa - Usos

Localizar depsitos de petrleo


Determinar a idade e origens de espcimes
na geoqumica e arqueologia
Determinar

composio

de

moleculares encontradas no espao

espcies

Espectrometria de Massa - Usos


Anlise de poluentes ambientais
Estabelecer

composio

elementar

de

matrizes vegetais, animais e minerais


Identificar

quantificar

compostos

misturas orgnicas complexas


Anlise de compostos inorgnicos

em

Origem e Evoluo

Origem e evoluo da Espectrometria


de Massa para determinaes de Razo
Isotpica de Elementos Leves (IRMS)

Origem e Evoluo
Descoberta dos Istopos: partir dos Radioistopos
1 LEI DO DESLOCAMENTO DA RADIOATIVIDADE
DEDUZIDA POR SODDY E FAJAN (1913)

UI

238
92

4
2

U x1

234
90

U x2

234
91

234
92

U II

:UI e UII Idnticos quimicamente no sendo possvel

separ-los por Processos Qumicos

Origem e Evoluo
234
92

UII 42

230
90 o

(Inio istopo-Th) 232 Th


90

Como foi descoberta a radioatividade?

1898: Ernest Rutherford tela fluorescente


detectou radiaes de material radioativo placas
metlicas eletricamente carregadas descobriu: dois
tipos de radiao (alfa e beta).

1909: Rutherford mostrou que as partculas alfa so


ons de hlio bipositivos
Rutherfor (1920) p+ e- reao ntima n

1871-1937
(66 anos)

Geiger e Rutherford

Origem e Evoluo
PROUST (1816) Pesos atmicos nos inteiros

mltiplos do Hidrognio (deduo de qquer


elemento era a partir do H)

Problema cloro (

35,46
17

Cl )

Soluo - frente ASTON (1920)


ESPECTRGRAFO DE MASSAS

Origem e Evoluo
CROOKES (1886) Palestra Seo de Qumica

- BRISTISH ASSOCIATION - (Presidente)


Peso Atmico do Ca (40)
no existem somente ts de 40Ca,
podem existir ts com massas
atmicas diferentes, por exemplo
42, 41, etc. Para a maioria das
espcies a P.A. relativo

40
20 Ca

hoje

40 96,97%

42 0,64 %

43

2
,
06
%

44 0,003%

48

0
,
185
%

ELEMENTOS SO MISTURAS DE VRIOS ISTOPOS

Origem e Evoluo
HEISENBERG (1932) Formulou a hiptese p+ - n

n partculas no ncleo (p + n) igual nmero


de massa (A)
n prtons dado pela carga nuclear Z

n nutrons (A-Z)
- Consistncia com o Fenmeno Radioatividade A
A

e
Z
Z1

n e- + p+ + energia (excesso de nutrons) emissor p+ n + e- + energia (dficit nutrons)

Origem e Evoluo
CHADWICH (1932) Descoberta do nutron
pesquisas transmutao de ncleos por partculas

9
4

Be C n
4
2

12
6

1
0

Revelou que o ncleo constitudo


por prtons e nutrons

Origem e Evoluo
- Qumica Isotpica -

A anlise de raios positivos existncia de istopos


Eugen GOLDSTEIN (1850-1930) fsico alemo
(1886) Descobriu os raios positivos
Provocou descargas eltricas num tubo de gs com
presso e usou um ctodo perfurado

Origem e Evoluo
Observou a propagao de um feixe luminoso

no sentido oposto aos raios catdicos,


chamou esse feixe de raios canais ou
raios positivos
Esses raios variam em funo do gs

(Photo Deutsches Museum)

Origem e Evoluo

alta
voltagem

ctodo

(raios: propagao
linha reta)

ons de H+

feixe
luminoso

nodo
gs

Origem e Evoluo
Joseph John THOMSON

(1856-1940)
fsico ingls

(1897) Descobrimento do eltron

Origem e Evoluo
Tubo de raios catdicos
y

Fonte: Science Museum

+
ctodo
( )

H
z

Y1

(experincia determinao da razo e/m)

Origem e Evoluo
Tubo de raios catdicos

ctodo

E
D

+
+
Alta tenso

(experincia determinao da razo e/m)

Origem e Evoluo
E

F Feltrica

ma qE
F
q

qE
m

d a t2
2

1
2

q L2
E 2
m v

q 2 d v2

m E L2
d

q 2 d E
2 2
m B L

Feltrica Fmagntica
qEq vB
v

E
B

Origem e Evoluo

q 2 d E
2 2
m B L

Thomson: 1,7 x 1011 C kg-1


atual: 1,7589 x 1011 C kg-1

(1856-1940)

Origem e Evoluo

1906: Prmio Nobel (construo do 1o


espectrmetro espectrgrafo de parbola)

para a determinao das razes


massa-carga dos ons

Modlo atmico pudim de passas

Origem e Evoluo

(descargas eltricas de gases)

(1912) Analisador de raios positivos


Fonte: Science Museum

Origem e Evoluo

Nenio

19Ne

20Ne

90,51 %

21Ne

0,21 %

22Ne

9,22 %

23Ne

17,22 s

37,2 s

Origem e Evoluo

l
M

P1
vx

vz

vy

P2 (20Ne)
P3 (22Ne)

Origem e Evoluo

z
x

Origem e Evoluo
Arthur J. DEMPSTER

(1886-1950)
fsico norte americano

1919: Instrumento de deflexo magntica com


focalizao simples
Photo, courtesy Arthur & Elizabeth Dempster, Cambridge, Massachusetts]

Espectrgrafo de Massa de Dempster


90o (S3)

S3 S2

+ 20000
CAMPO
ELTRICO

S1 + 20000

PLACA FOTOGRFICA

S4
90o (S4)
CAMPO
MAGNTICO

setor magntico = 180o

Espectrgrafo de Massa de Dempster

Espectrogramas de massa de vrios istopos

Origem e Evoluo
Francis William ASTON

(1877-1945)
fsico ingls

1922: Prmio Nobel (novo espectrmetro de massa


de maior resoluo ons dispersos pela massa e
focalizados pela velocidade)

Origem e Evoluo

10 vezes melhor aparelho de Thomson


Estabeleceu as bases Massas Atmicas
Similar aos modernos

Melhoria da resoluo: (disperso/separao feixes)


ou m: (aumento raio) atualmente: assimetria

simtricos

assimtricos

Espectrmetro de massa de NIER (1940)


Alfred Otto Carl NIER

(1911 - 1995)

Fsico norte americano


Nier e seu espectrmetro de massa que foi usado para separar amostras de 235U,
utilizado na fabricao da 1a bomba atmica
Fotos extradas de: http://www.hcc.mnscu.edu/programs/dept/chem/abomb/page_id_28519.html
http://www.alumnicenter.umn.edu/Library/honoringourheritage.pdf

Origem e Evoluo
Aston (1932): relaes isotpicas
16O

: 17O : 18O = 536 : 0,24 : 1


18

Sendo a razo:

O
1

16
O 536
18

Nier (1950) obteve:

O
1

16
O 489

Com a seguinte abundncia isotpica:

16O

: 17O : 18O = 99,759 : 0,0374 : 0,2039

Origem e Evoluo
ANOS 50: Desenvolvimento e aplicaes dos IRMS
ANOS 60 - 70: Aperfeioamento (alta preciso e
velocidade analtica ; produo escala
comercial IRMS)
ANOS 80 - 90: (avano da eletrnica, tecnologia de
vcuo e computacional): Excelentes melhorias:

automao (partes mecnicas e vlvulas), e


informatizao (sistema de coleta de dados)

ESPECTRMETRO DE MASSAS

um instrumento que separa ons, positivos


ou negativos, produzidos a partir de tomos

ou molculas de acordo com a razo


massa/carga (m/q)

Parmetros de desempenho
Resoluo (R): habilidade do aparelho para
separar feixe de ons de diferentes razes (m/q)
m
R
m
m = massa do 1o pico ou a massa mdia de dois

picos

m = diferena nas massas ou nmeros de massa dos


feixes dos ons

Parmetros de desempenho
R < 100 baixa resoluo

US$ 150,000

100 R < 500 mdia resoluo

Custo
equipamento

R > 500 alta resoluo

US$ 500,000

Exemplo: Nitrognio (A= 14,0067630258)


14N

(A = 14,003074; p1 = 99,63%)

15N

(A = 15,000108; p2 = 0,37%)

massa mdia ponderada = 14,003074 x 0,9963 +

15,000108 x 0,0037 =

14,0067630258
http://www.webelements.com/

Na

Nb

14N

15N

14N 15N
15N

14N

14N

14N

14N 14N

15N

15N

15N 15N

N2

14N14N
14N15N

28,006
29,003

CO2

N2

O C O

CO
O C

12C16O16O

= 28

14N

14N

= 28

14N

15N

= 29

15N

15N

= 30

12C

Nmero de massa (A):


(44 - 45 - 46 - 47 - 48 - 49)

16O

13C

17O

18O

14N14N

28,0134

12C16O

27,9994

14N

= 14,0067

12C

= 12,0000 (1 u.m.a. = 1/12 12C)

16O

= 15,9994

Qual dever ser a resoluo de um MS para separar os


feixes de ons dos gases de N2 e CO?
m
28,0134
R

R 2000,9571 (alta resoluo )


m
28,0134 27,9994

Para se ter habilidade em separar os dois feixes ons, depende de


R$ ou se contorna problema (preparo eficiente amostra)
Qual seria o valor de R para separar os feixes de ons 14N14N e 14N15N?

Intensidade relativa do on em funo


da razo (m/q)
100
Intensidade relativa (%)

(14N14N)+

80
60
40
20
(14N15N)+
(15N15N)+

0
0

10

15

20

25

30

35

40

45

m/q

50

Parmetros de desempenho (Preciso)

Preciso: refere-se reprodutibilidade de uma


medida de abundncia ou razo isotpica
Expressa em termos de erro relativo (e.r.) ou CV

S 2
e.r. 10
m

sendo : S (DP)

2
i (x i x)
n

Parmetros de desempenho (Exatido)


Exatido: avalia-se por comparao com um
padro
HIDROGNIO 2D (Deutrio)
Padro Internacional: Padro Primrio - SMOW
(Standard Mean Ocean Water)

CARBONO 13C
Padro Internacional: Padro Primrio - PDB
(Carbonato de clcio da formao
Pee-dee da Carolina do Sul-EUA)

Parmetros de desempenho
OXIGNIO 18O
guas: SMOW
Carbonatos: PDB

NITROGNIO 15N
Padro Internacional: Padro Primrio N2 do ar atmosfrico

ENXOFRE 34S
Padro Internacional: Padro Primrio - CDT
(Canyon Diablo Troilite)
Sulfeto de Ferro (FeS)

Exatido

Preciso

Exatido e Preciso

Parmetros de desempenho (Sensibilidade)

Sensibilidade: mnimo de amostra requerida

para uma anlise, com certa preciso

ESPECTRMETROS DE MASSAS NO CENA

Prof. Dr. Eichi Matsui (IPEN/CNEN): Desenvolveu


trabalhos metodolgicos no CENA
Atualmente os laboratrios de LIE e LEI do CENA
trabalham com determinaes isotpicas
(D; 13C; 15N; 18O; 34S)
LIE: Laboratrio de Istopos Estveis
LEI: Laboratrio de Ecologia Isotpica

ESPECTRMETROS DE MASSAS DO CENA


FININIGAM MAT 230 (DIIRMS) N - LIE
ATLAS-MAT mod. CH4 (Fluxo molecular: anlises
absolutas) N/S/B - LIE
ANCA-SL (CF-IRMS) C/N - LIE

ANCA-GSL (CF-IRMS) C/N/S - LIE


Varian MAT mod. GD 150 (DIIRMS) D - LEI

FINNIGAN MAT mod. DELTA E (DI-IRMS)


D/C/O - LEI
FINNIGAN MAT mod. DELTA PLUS (CF-IRMS;
DI-IRMS) C/O/N - LEI

Espectrmetro de massas de setor magntico com


ionizao por impacto de eltrons IRMS
(ATLAS MAT CH4)
sistema de admisso simples
fluxo molecular e um coletor
no necessita de padro

(anlise absoluta)

CONSTITUIO BSICA DE UM ESPECTRMETRO DE MASSAS DE


SETOR MAGNTICO COM IONIZAO POR IMPACTO DE
ELTRONS (IRMS)

gs

Sistema de
admisso

Fonte de
ionizao

Analisador

Detector

magntico
Molculas

Molculas:
ons

Alto vcuo

Fonte: Ducatti, 1973

ons

ons: Impulsos
eltricos

Sistema de entrada ou admisso de amostras

Reservatrio de amostra

Cmara de ionizao

Passagem
(leak)

gs
Folha de ouro
dimetro
(0,013 0,050 mm)

Escoamento
molecular

P1

P2

102 a 10-2 mm Hg

10-4 mm Hg

Sistema de entrada ou admisso de amostras


Escoamento molecular
Q

r2 p
K

2MkT
M

Sendo:
Q = taxa de escoamento das molculas de um gs
M = peso molecular
p = presso parcial do gs (lado do reservatrio)
k = constante de Boltzman

T = temperatura em Kelvin
K = constante generalizada

Q = 1/ M Freqncia vibracional ()

Sistema com fluxo molecular


Gs com 50% Mp e 50% Ml (Mp > Ml)

analisador

reservatrio de gs ( R )

fonte de ionizao ( fi )
molecular leak

Sistema com fluxo molecular


Escoamento molecular
Se: Mp > Ml ento: QMp < QMl

Ocorre o fracionamento entre massas, enriquecendo


o gs no reservatrio na molcula de menor fluxo
ou de maior massa (Mp)

Sistema com fluxo molecular


Imediatamente aps o leak (folha de ouro com
furos de (10-50 m) e depois de ser atingido o

equilbrio no fluxo do gs (t > 0):

Mp

Ml R

Mp


M l fi

Mp

M l R

Mp

K 1
M l fi

K1 > 1

(A)

Sistema com fluxo molecular

Para um t, o ts/molculas no fi, ser Mp > Ml


Mp

Ml f

Mp


Ml analisador

Mp

K 2
Ml f

Mp


K2 > 1
Ml analisador

(B)

Sistema com fluxo molecular


Supondo: K1 = K2 de (A) e (B) temos:
Mp

M l R

Mp

K 1
M l fi

Mp

K 2
M l fi

Mp


M l analisador

Mp

Ml R

Mp


Ml analisador

Sistema simples de admisso (reservatrio gs: V=5,0 L)

Sistema com fluxo viscoso

No h fracionamento no escoamento pelo leak


(longo capilar)

No ocorre alterao na razo (Mp/Ml)R

Sistema com fluxo viscoso

Mp

K 2
Ml fi

Mp

Ml R

Mp


Ml fi

Mp

Ml fi

Mp


Ml analisador

(C)

Mp


Ml analisador

Mp
Mp
Mp

K 2

Ml R
Ml analisador
Ml det er min ado

Sistema com fluxo viscoso


Mp

M l det er min ado


Mp

Ml R

K2

(D)

Como exemplo:

15

N ( / )

15

R amostra det erm. R padro det er min .

N ( / )

R padro det er min .


K 2 R amostra K 2 R padro
K 2 R padro

103

103

(E)

Sistema com fluxo viscoso

N ( / )
15

R amostra

R padro

Rpadro

103

Sistema duplo de admisso (amostra e padro)

(F)

Sistema de entrada ou admisso de amostras

Amostra real (balo)


I29
I28

ons que entram no analisador

Amostra aps os leak na fonte de ons

tempo

Fluxo molecular (folha de ouro com = 10-50 m)

Sistema de entrada ou admisso de amostras

Razo isotpica determinada na amostra


I29
I28

Razo isotpica real da amostra

tempo

Fluxo viscoso (capilar)

Energia vibracional (En)


E0

Eleve

Epesado (H218O) < Eleve (H216O)

Epesado

Gs com 50% Mp e 50% Ml (Mp > Ml)

Ecintica (leve) > Ecintica pesado)

Sistema de entrada ou admisso de amostras

Reservatrio de amostra

Cmara de ionizao

Passagem
(leak)

gs
Folha de ouro
dimetro
(0,013 0,050 mm)

Escoamento
molecular

P1

P2

102 a 10-2 mm Hg

10-4 mm Hg

Cmara de ionizao (parte 1)


gs

Filamento
(Re, Ir, W)

eeeeee-

200 oC

- 80 V
(E:acelerao dos eltrons)

placa
repelente ons

e80 eV

Fonte de ionizao (molculas ons)

Ar
10
(escala arbitrria)

Probabilidade de ionizao

Probabilidade de ionizao

N2
6

Ne

He
50

100

150

Energia dos eltrons (eV)

Cmara de ionizao (parte 1)

ep- (80 eV) + N2 N2+ + es- + ep- (< 64,5 eV)


ep- = eltron primrio
es- = eltron secundrio

Ction excitado (N2+) tem uma energia no estado fundamental de

15,6 eV > molcula original de N2

Cmara de ionizao (parte 2)

analisador
magntico
ons

gs
400 V

4000 V

acelerao de ons
1 molcula em 1000 convertida em on positivo
Fontes de ionizao: simples, estveis e confiveis

E potencial Ecintica
1
q V m v 2 (1)
2

Epotencial de um on de um elemento ou molcula pesada (mp) =


Epotencial de um on de elemento ou molcula leve (ml)
mp > Ecintica
ml < Ecintica

Fmagntica Fcentrpeta

E potencial Ecintica

m v2
qvB
(2)
R

1
q V m v 2 (1)
2

De (2):
BqR
v (3)
m

De (3) em (1):
1 B2 q2 R 2
qV m
2
m2

q=1
R2 K

m V
q B2

em: baixa resoluo (< 100)


( 4 )

mA

Analisador magntico de ons

r1
F1

F1
F1

F1

coletor
GS
detector
Coletor: copo de Faraday (corrente de 10-11 a 10-8 A)

Espectrmetro de massa de NIER (1940)


Ee = q V

Fmagntica = Fcentrpeta

Ecin = mv2

Fe = Ecin

Fmagntica q v B sen
Fcentrpeta

m v2

B2 R 2
m
k
q
V

Sendo:

r = raio da trajetria

Espectrmetro baixa resoluo

m = massa do on

q = carga do eltrica do on

A
q

V = potencial de acelerao dos ons


B = induo magntica

MAT CH4: Anlise por varredura (variao de B)

ionizao

m/q 16

m/q 12
12

m/q 20

M+

amostra
gasosa

resultado
grfico

m/q 17
absoro excesso
energia

gs

m/q 32

32

Sistema de
admisso
molculas

Fonte de
ionizao
molculas:
ons

decomposio
unimolecular do M +

Analisador
magntico
ons

anlise
dos ons

Detector
ons: Impulsos
eltricos

Alto vcuo
Fonte: Ducatti, 1973

Espectrmetro de Massas Atlas Mat CH4 (LIE)

(vista parcial)

LiOBr

N2
(NH4)2SO4

H2O
Br2

armadilha criognica

- 196 oC

Espectrmetro de Massas Atlas Mat CH4 (LIE)

Anlise de razo isotpica IRMS


(ANCA-SL e Finnigan MAT Delta Plus: D/C/O)
sistema de admisso simples/duplo

fluxo viscoso e trs coletores


necessita de padro
(anlise relativa)

30

N2

ANCA-SL

29
28
CG

CG

adaptado (Barrie & Prosser, 1996)

entrada amostras
(simples)

amostrador

tubo de combusto

automtico

CG

MgClO4

(a) Carbosorb

perclorato de magnsio
(reter H2O)

(b)

CG

CO2 caminho (a)


N2 caminho (b)

CO2: polar
N2: apolar

* reter oxignio

Porqu reter o CO2?

ANCA-SL
pulso O2

Fios
(CuO)

Catalisador
(Cr2O3)

Oxidao

L de Ag

Reteno S-SO2
halognios
(F, Cl, Br, I, At)

hidrocarbonetos

1000 oC

1700 oC

ANCA-SL
1700 oC

600 oC

H2O(v)

CO2

N2

Cobre
metlico

NOx

Reduo: Cu + NOx N2 + CuO

excesso

FINNIGAN MAT DELTA PLUS

30

N2

29

entrada amostras
(dupla)

28
CG

CG

Gs
referncia

FINNIGAN MAT DELTA PLUS


Sistema duplo de admisso (IRMS-DIS)
DIS (duplo sistema de admisso)

P1

AX()

AX()

A1

RA1

R m (P1+P2)

1 103

P2
A2
P3
A3

P4
A4

R m (A1+A2)
RP2

1 103

FINNIGAN MAT DELTA PLUS


P4

A4
P5

A5

AX()

R m (A5+A6)

1 103

RP6

P6
A6

mdio

AX()

1 + 2 + ... + 10
10

Sendo: m = preciso analtica

sada de resultados

30

N2

45

29

44

28
processamento de dados
triplo coletor

fonte de ons

46

CO2

m permanente

Fluxo Viscoso H: fixo +s estvel


Vacelerao: Varivel (2000 a 8000 V)

ANCA-SL (LIE)

ANCA-SL (LIE)

ANCA-SL (LIE)

Marya Sklodowska Curie (1867 - 1934)

"...em cada poca podemos viver uma vida interessante e til. O


indispensvel no desperdiarmos a vida e podermos dizer: " Fiz
o que pude." Aqui est tudo quanto o mundo tem o direito de exigir
de ns, a nica coisa que nos dar um pouco de felicidade."
(extrado de uma carta de Marie Curie sua sobrinha Hanna Szalay

em 6 de Janeiro de 1913).

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