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ESCOLA SUPERIOR DE TECNOLOGIA EST

CURSO DE ENGENHARIA QUMICA

Disciplina: Fsico-Qumica Experimental

CROMATOGRAFIA EM PAPEL

Data da realizao do experimento: 10/03/2016


Prof. Responsvel: Sergio Duvoisin Junior

Turma: EQM_T01

Uso do professor

Aluno: Raquel Vicente Picano


Uso do professor

Aluno: Sandryelle Karolina Oliveira Plcido


Uso do professor

Manaus, AM
2016

Nota do grupo:

1. INTRODUO

A cromatografia, em todas as suas formas e variaes, constitui hoje um dos mais


importantes mtodos de separao de misturas, se no o mais importante. A cromatografia
um processo fsico de separao, no qual os componentes a serem separados distribuem-se em
duas fases: a fase estacionria e a fase mvel. A fase estacionria pode ser um slido ou um
lquido disposto sobre um suporte slido com grande rea superficial. A fase mvel. Que pode
ser gasosa, lquida ou um fludo supercrtico, passa sobre a fase estacionria, arrastando
consigo os diversos componentes da mistura. (HARRIS, 2005) (CONSTANTINO et al, 2004)
A tcnica foi descoberta pelo botnico italiano Mikhail Tswett em 1906. Tswett
separou pigmentos de plantas (clorofilas) adicionando um extrato de folhas verdes em ter de
petrleo sobre uma coluna com carbonato de clcio em p em tubo de vidro vertical.
Enquanto a soluo percolou atravs da coluna os componentes individuais da mistura
migraram para baixo em taxas de diferentes de velocidades e ento a coluna apresentou-se
marcada com gradientes horizontais de cores. A esse gradiente deu-se o nome de
cromatograma. (STROBEL, 1973)
Na tcnica cromatogrfica a mistura depositada sobre alguma fase estacionria, que
pode ser uma tira de papel de filtro, uma camada delgada de slica gel sobre uma placa de
vidro, algum outro adsorvente finamente dividido empacotado em um tubo de vidro, etc. Os
componentes de uma mistura so adsorvidos na superfcie da fase estacionria em graus
variados dependendo da natureza do componente, da natureza do adsorvente e da temperatura.
Um solvente ento passado atravs da fase estacionria, movimentando-se por gravidade,
por efeito capilar ou por presso aplicada. Quando o solvente passa sobre a amostra
depositada, os vrios componentes tendem, em graus variados, a serem dissolvidos e
arrastados juntamente com o solvente. A velocidade com a qual um componente ir mover-se
depende de sua tendncia relativa de ser dissolvido no solvente e de ser adsorvido na fase
estacionria. O efeito resultante que quando o solvente passa lentamente atravs da fase
estacionria, os componentes da mistura movem-se como zonas a velocidades diferentes uns
dos outros, ocorrendo assim a separao. Com a escolha apropriada do solvente e do
adsorvente, possvel separar os componentes de muitas misturas complexas por esta tcnica.
(CONSTANTINO et al, 2004)
A cromatografia pode ser dividida em duas classes: cromatografia em coluna e a
cromatografia planar. A cromatografia em coluna est baseada no meio fsico em que a fase
mvel e estacionria entram em contato. Nesse caso, a fase estacionria mantida dentro de
um tubo estreito e a fase mvel forada a passar sob presso. J na cromatografia planar, a
fase estacionria suportada por uma superfcie planar. A fase mvel movimenta-se por
capilaridade ou influncia da gravidade. As tcnicas existentes de cromatografia planar so: a
cromatografia em camada delgada (CCD), Cromatografia em papel (CP) e
eletrocromatografia. Cada uma usa uma camada fina e plana. (SKOOG, 2002).
Na cromatografia em camada delgada e na cromatografia em papel, quando o solvente
percorreu uma distncia L cm, o soluto, agora espalhado como uma banda ou zona difusa,
percorreu uma distncia menor, que chamaremos D cm. D/L , para uma dada substncia sob
condies especficas, uma constante, independentemente da quantidade relativa da
substncia ou de outras substncias presentes. D/L chamado valor de R f para aquela
substncia sob aquelas condies experimentais:

Rf =

D
distncia percorrida pelo soluto
=
(1)
L distncia percorrida pelo solvente

O valor Rf pode ser usado na identificao dos componentes de uma mistura em


condies determinadas. (CONSTANTINO et al, 2004)

1.1 Polaridade
As substncias movem-se a velocidades diferentes, na cromatografia, como
consequncia da combinao de dois fatores: o grau de adsoro na superfcie do adsorvente e
o grau de solubilidade no solvente. Quanto mais fortemente adsorvida for uma substncia,
mais lentamente ela se mover; e quanto mais solvel for uma substncia, mais rapidamente
ela se mover. (CONSTANTINO et al, 2004)
Pode-se conseguir uma visualizao mais clara do fenmeno encarando-o como uma
disputa, entre a fase estacionria e a fase mvel, pela posse da substncia; quanto mais a fase
estacionria vencer a disputa, mais retida ficar a substncia (movendo-se assim com menor
velocidade). Obviamente, quanto mais a fase mvel vencer a disputa, mais rapidamente se
mover a substncia. (CONSTANTINO et al, 2004)
H muitos fatores governando o grau de adsoro e a solubilidade, mas o mais
importante a polaridade. muito importante lembrar que as fases estacionrias, em geral,
tm forte afinidade por substncias polares; substncias polares so fortemente retidas,
enquanto as pouco polares so facilmente carregadas pelo solvente. Por outro lado, na
cromatografia usa-se, geralmente, um solvente que dissolve todos os componentes da mistura.
(CONSTANTINO et al, 2004)
A polaridade pode ser definida como a habilidade de uma amostra ou solvente
interagirem por combinao ou disperso, dipolos, ligaes de hidrognio e interaes
dieltricas (AHUJA, 2003). Para verificar mais exatamente a polaridade de uma ligao
covalente necessrio ter conhecimento das eletronegatividade dos elementos ligados entre
si. Quanto maior for a diferena das eletronegatividades, mais o composto polar e sua
ligao covalente se aproxima da ligao inico. Tambm pode-se trabalhar com cargas
parciais positivas ou negativas para determinar a polaridade, representada pela letra grega
juntamente com o sinal positivo ou negativo. (YURKANIS, 2006)
Como os solventes geralmente utilizados em cromatografia so capazes de dissolver
todas as substncias presentes, as diferenas de polaridade entre os componentes da mistura
tm efeito muito maior no grau de adsoro do que na solubilidade desses componentes. O
resultado que substncias mais polares so geralmente mais retidas nas cromatografias.
(CONSTANTINO et al, 2004)

2. OBJETIVOS
2.1 Objetivo geral
Realizar separao de misturas atravs do mtodo de cromatografia no papel.

2.2 Objetivos especficos

Separar pigmentos existentes em extratos de folhas com colorao roxa e de


pigmentos que compem a tinta de canetas marrom e preta;
Identificar os princpios fsico-qumicos responsveis pela separao.

3. MATERIAIS E MTODOS
3.1 MATERIAIS UTILIZADOS
1) Almofariz
2) Pistilo
3) Pipeta Pasteur
4) Pra pequena
5) Funil de separao de 100 mL
6) Funil de vidro pequeno
7) Bquer de 10 mL (2)
8) Algodo
9) Bquer de 250 mL (4)
10) Proveta de 10 mL (2)
11) Retngulos de papel de 3,0x7,5 cm
12) Placa de Petri (3)
13) Pina
14) Tubos capilares (2)
15) Rgua
16) Lapiseira

3.2 REAGENTES UTILIZADOS


1)
2)
3)
4)
5)
6)
7)

ter de petrleo P.A.


Diclorometano P.A.
Etanol P.A.
Acetona P.A.
Clorofrmio P.A.
Sulfato de sdio anidro P.A.
Folhas de planta roxas

3.3 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL


3.3.1

Preparao do extrato das folhas

Foram maceradas de 6 a 8 folhas de plantas roxas em um almofariz, at que tudo


virasse uma pasta marrom e o fundo ficasse o mais manchado possvel como mostrado na
Figura 1. Para um melhor resultado necessrio que sejam feitos movimentos circulares com
o pistilo.

Figura 1 Folhas de planta roxas maceradas.

O contedo do almofariz foi lavado com 6 mL de ter de petrleo e 4 mL de etanol,


misturando levemente com o pistilo. Esta mistura foi transferida para o funil de separao,
com o auxlio de um funil de vidro para evitar respingos, e lavou-se com 10 mL de gua
destilada. O funil foi girado vagarosamente e a fase aquosa foi descartada. Repetiu-se a
lavagem por mais duas vezes e armazenou-se o extrato obtido em um bquer de 10 mL.
Adicionou-se uma ponta de esptula de sulfato de sdio anidro, para reter a gua
contida no extrato, e agitou-se levemente. Utilizando a pipeta Pasteur, transferiu-se o etrato
para outro bquer de 10 mL e cada membro da equipe segurou o mesmo fortemente entre as
mos para que qualquer vestgio de ter de petrleo evaporasse.

3.3.2

Preparao das folhas de papel

Figura 2 Modelo do pedao de papel absorvente utilizado como cromatograma.


B

Em 6 quadrados de papel de 3,5 x 7,0 cm foram desenhadas linhas seguindo o padro


do Figura 2, colocando a linha a 1,0 cm da extremidade A e a outra a 0,5 cm da extremidade
B.

3.3.3

Desenvolvimento dos cromatogramas


Ao encostar um tubo capilar na superfcie do extrato da planta, este preenche uma

altura do tubo. Com isso, pde-se fazer pequenos pontos na linha que desenhada prximo a
extremidade A do papel, tomando cuidado para que tivessem menos de 2 mm de espessura.
Esse procedimento foi feito em 3 pedaos de papel. Com uma caneta hidrocor marrom, fez-se
pequenos pontos em outros 3 papis do mesmo modo que com o extrato.
Foram preparadas 3 cubas cromatogrficas com 3 bqueres de 250 mL: uma contendo
gua destilada, outra com clorofrmio e outra com soluo de acetona 80% previamente
preparada em um bquer de 10 mL lavado. Os bqueres de 250 mL foram preenchidos at o
lquido atingir a altura de 0,5 cm. Estas solues so os eluentes.
Foi colocado um papel, com a extremidade A tocando o lquido, contendo cada
amostra em cada cuba e estas foram tampadas com uma placa de Petri. Esperou-se at que o
eluente atingisse a marca da extremidade B. As mudanas que aconteceram foram anotadas.

4. RESULTADOS E DISCUSSO
Testar as amostras em eluentes polares e apolares tinha como objetivo descobrir a
natureza da polaridade do extrato de planta e das canetas hidrocor.
A gua mostra-se um composto polar pois, alm da diferena entre as
eletronegatividade de seus tomos ser muito grande (1,4), ao fazer a representao de suas
cargas parciais possvel notar que as foras se anulam. J o clorofrmio tem comportamento
mais prximo do apolar, pois o vetores de suas cargas parciais negativas, encontradas no
tomos de cloro, se anulam, restando apenas o vetor da carga parcial positiva do hidrognio
juntamente com a positiva do carbono, fazendo com que se torne apolar. (YURKANIS, 2006)
Figura 3 - Diagrama mostrando as cargas parciais da gua e do clorofrmio.

Os testes com as canetas hidrocor mostraram que suas tintas so polares, pois tanto a
preta quanto a marrom foram levadas pela gua que era absorvida pelo papel. A cor que
descrita no rtulo da caneta se dividiu em diversos pigmentos (roxo, vermelho, amarelo,
verde, e azul), que so os utilizados para chegar na tonalidade desejada, e pode-se notar que
eles seguem o padro do espectro visvel (Figura 4). Nota-se tambm que sempre h a
presena das cores primrias (azul, vermelho e amarelo), mostrando que as outras cores de
fato derivam apenas dessas trs.
Figura 4 Espectro de cores visvel.

O extrato da planta mostrou-se apolar, pois s foi levado pelo clorofrmio, mas
apareceu com a tonalidade mais forte apenas no final do cromatograma. Extratos de plantas
so substncias orgnicas, pois derivam das plantas, que so orgnicas. Sabe-se que molculas
orgnicas so compostas, em sua maioria, por foras dipolo induzido-dipolo induzido, que as
tornam apolares como o solvente clorofrmio que apolar em sua maioria (CAREY, 2011)

Para a cuba contendo soluo de acetona 80%, nota-se que o papel contendo a caneta
hidrocor marrom teve o resultado inverso do que continha o extrato: o primeiro subiu apenas
em alguns centmetros iniciais, mas o segundo em alguns centmetro finais do papel. Isso
causado pelo fato de a acetona ser um composto parcialmente polar, por causa da ligao C=O
que muito polarizada, mas tambm utilizada como solvente de compostos orgnicos
(CRUZ, 2010); o solvente utilizado para preparar a soluo de acetona foi a gua. A tinta ser,
ento, solvel apenas at certa parte do papel, pois chegar uma hora que a ela no ter mais
tanta afinidade com a soluo de acetona, e o mesmo vale para o extrato de planta. Uma
observao importante que, no teste com acetona, apenas os pigmentos roxos e vermelhos
subiram, mostando que sua polaridade diferente do restante deles.
Figura 5 Cromatogramas resultantes de cada amostra.

Foi possvel calcular o fator de reteno mostrado a partir equao (1) da introduo e
da medio das distncias percorridas pelas amostras, levando em conta que a distncia
percorrida pelo eluente foi 6 cm como mostram as marcaes nos papis.
Tabela 1 Distncias percorridas pela amostras.
Amostra

Solvente

gua destilada
Caneta hidrocor
marrom
Clorofrmio
Acetona 80%

Caneta hidrocor
preta
Extrato de planta

gua destilada
Clorofrmio
Acetona 80%
gua destilada
Clorofrmio
Acetona 80%

Distncia
percorrida pela
amostra (cm)
Roxo: 1,0 cm;
Vermelho: 4,5 cm;
Amarelo; 0,5 cm;
Verde: 0,7 cm; Azul:
0,7 cm
No eluiu
Roxo: 0,5 cm;
Vermelho: 0,5 cm
Roxo: 3,0 cm;
Vermelho: 2,5 cm;
Verde: 0,7 cm; Azul:
0,5 cm
Teste no realizado
Teste no realizado
No eluiu
Verde: 1,0 cm
Vermelho: 0,2 cm;

Fator de reteno
Roxo: 0,17;
Vermelho: 0,75;
Amarelo: 0,08;
Verde: 0,12; Azul:
0,12
No eluiu
Roxo: 0,12;
Vermelho: 0,12
Roxo: 0,5;
Vermelho: 0,42
Verde: 0,12;
Azul: 0,08
Teste no realizado
Teste no realizado
No eluiu
Verde: 0,17
Vermelho: 0,03;

Verde: 0,5 cm

Verde: 0,08

Analisando a equao (1), pode-se compreender que quanto maior o fator de reteno,
mais a amostra tem afinidade com o eluente, sendo tambm semelhante a ele. Partindo desse
princpio, o pigmento vermelho tanto da caneta marrom quando da preta so semelhantes
agua, assim como os pigmentos naturais da plantas no se misturam muito bem com
clorofrmio. Um motivo para o ltimo fator no ter sido adicionado muito extrato a folha de
papel, ento no foi possvel notar corretamente as cores e quando apareceram,

4.1 QUESTIONRIO

1) Qual o estado da fase mvel e da fase estacionria na cromatografia em camada


delgada (CCD)?
A fase mvel e, cada teste a gua, o clorofrmio e a soluo de acetona 80%. A fase
estacionria o papel absorvente.
2) Qual o mecanismo de separao da cromatografia em camada delgada de slica de
gel?
A slica gel ir adsorver as partes que no sero solubilizadas no eluente.
3) Com que finalidade a soluo de pigmentos lavada com gua?
Para decompor a fase orgnica da inorgnica, removendo assim a fase aquosa.
4) Por que o sulfato anidro adicionado soluo de pigmentos?
Com a finalidade de que ele solidifique a gua e separar o restante da fase inorgnica e
orgnica, ou seja, ele retm para si a gua e se converte em um sal hidratado.
5) Que se entende por fator de reteno (Rf)?
A distncia desenvolvida por cada composto utilizada em amostra, dividido pela
distncia percorrida pelo solvente denominada de fator de reteno (Rf).

Na frmula acima, dS tomado como a distncia que a substncia se deslocou a partir


do ponto em que foi aplicada e dm a distncia percorrida pela massa de solvente a partir do
ponto da amostra.

6) Dois componentes A e B foram separados por CCD. Quando a frente do solvente


atingiu, 6,5 cm, acima do ponto de aplicao da amostra, a mancha de A, estava a 5
cm, a de B a 3,6 cm. Calcular o Rf de A e de B. Desenhar esta placa, obedecendo ao
mais fielmente possvel s distncias fornecidas. O que se pode concluir sobre a
resoluo das manchas, nesta separao?
Componente A: Rf= (5/6,5) = 0,77
Componente B: Rf= (3,6/6,5) = 0,55
7) Um qumico deseja separar os compostos abaixo por cromatografia em coluna,
utilizando slica como adsorvente.

Para tal, percolou a coluna sequencialmente com os solventes I, II e III, que


formam uma srie eluotrpica. A primeira frao continha o composto X, a
segunda frao, o composto Y e a ltima frao, o composto Z. Qual dos sistemas
de solventes abaixo serve como fase lquida para justificar a ordem de eluio
encontrada?

A srie eluotrpica B, pois as polaridades dos eluentes so as mesmas das amostras a


serem analisadas.
8) A cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) um dos mtodos
cromatogrficos mais modernos utilizados em anlises (CLAE analtica) e
separao/purificao de misturas (CLAE preparativa). Abaixo so dados os
cromatogramas X, Y e Z de uma mistura de compostos presentes em analgsicos:
aspirina (A), cafena (B), fenacetina (C) e paracetamol (D), utilizando trs fases
mveis diferente, no modo isocrtico, em uma mesma coluna. Avaliando esses
cromatogramas responda as perguntas abaixo:
a) Qual a fase mvel mais apropriada para ser utilizada em escala preparativa, e a
fase mvel mais adequada para utilizao em escala analtica, considerando um
grande nmero de amostras a serem analisadas? Justifique sua resposta.

Em escala preparativa, a melhor fase mvel seria a de 40% de metanol e 60% de cido
actico, pois nesta escala o objetivo a separao completa dos analitos e o resultado deve
mostrar picos no sobrepostos.
Em escala analtica, seria a fase constituda de 60% de metanol e 40% de cido
actico, pois no contm picos sobrepostos e no desperdia solvente, mas apenas
identificando a substncias.

b) Qual o tipo de coluna (fase reversa ou fase normal) utilizada nestes trs
experimentos? Justifique sua resposta.
utilizada a coluna de fase inversa pois quando a fase estacionria mais polar que a fase
mvel, a cromatografia lquida chamada de cromatografia em fase normal. Na situao
inversa, ou seja, quando a fase estacionria apresenta menor polaridade que o solvente, a
cromatografia recebe a denominao de cromatografia em fase reversa. Os adsorventes mais
utilizados na cromatografia em fase normal so a slica e a alumina, enquanto que para a fase
reversa so empregues substncias polares quimicamente ligadas, tendo como grupos
funcionais cadeias com terminaes do tipo ciano, diol, fenil, amino ou apolares.
c) Sabendo-se que o composto mais polar elui primeiro, qual o composto de maior
tempo de reteno? Justifique sua resposta.
Em fase inversa, ser o paracetamol, pois o mais apolar entre os analitos.

5. CONCLUSO

Para criar uma tinta de caneta hidrocor, so necessrios vrios pigmentos para chegar
tonalidade desejada e estes, podem ser de natureza orgnica ou inorgnica, sendo possvel
separ-los facilmente por cromatografia em papel, mas no quantifica-los. Um extrato de
planta contm diversos pigmentos orgnicos, como clorofila (verde), sendo tambm possvel
separ-los.

7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
CONSTANTINO, M. et al. Fundamentos de Qumica Experimental. Vol. 53. So Paulo:
Editora da Universidade de So Paulo, 2004.
HARRIS, C Daniel. Anlise Qumica Quantitativa 5ed. Rio de Janeiro: LTC, 2005.
STROBEL, H. A. Chemical Instrumentation: A Systematic Approach. 2 ed. Boston:
Addison-Wesley Publishing Company, 1973.
SKOOG, D. A. Princpios de Anlise Instrumental. 5 ed. Porto Alegre: Bookman, 2002.
AHUJA, S. Chromatografy and separation Science. 1 ed. San Diego: Academic Press,
2003.
YURKANIS, P. B. Qumica Orgnica. 4 ed. So Paulo: Pearson Prentice Hall, 2006. v. 1.
690 p.
CAREY, F. A. Qumica Orgnica. 7 ed. Porto Alegre, Bookman, 2011.
CRUZ, G. L. Acetona, C3H6O. Qumica Nova Interativa. Disponvel
http://qnint.sbq.org.br/qni/popup_visualizarMolecula.php?
id=GxMKPr07VG2saYkP27BcOzN8Je-GJLTwYFIdtdBjgOQPlEzyxuxJT2CMXbWaJD_3a_GCzs0Ajh_i3jS2LxvRw==>. Acesso em 21 mar. 2016.

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