Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
Bioqumica
Enzimas
2016
20
METODOS DE
INMOVILIZACIN
DE ENZIMAS
20
ndice
Introduccin--------------------------------------------------------------------------4
Desarrollo-----------------------------------------------------------------------------5
Introduccin
20
Las enzimas son protenas especializadas en la catlisis de reacciones
bioqumicas, son catalizadores naturales, es decir, son biocatalizadores.
Destacan por ser extraordinariamente especificas con un poder cataltico mucho
mayor que el de los catalizadores elaborados por el hombre.
Los procesos catalizados por enzimas en la industria son cada da ms
numerosos, ya que presentan una serie de ventajas frente a los catalizadores
convencionales no biolgicos:
20
Desarrollo
Definicin de Inmovilizacin de enzimas
Una Enzima inmovilizada es una enzima que ha sido fijada en un material
inerte e insoluble. Este proceso puede incrementar la resistencia a cambios en
las condiciones en las que se encuentra el preparado.
La inmovilizacin de enzimas no es ms que un modo de mantener por algn
medio qumico, fsico o fisicoqumico fijas las molculas de la enzima dentro de
un sistema reaccionante sin que se alteren significativamente sus propiedades
cinticas. Posteriormente esta definicin se ha ampliado a aquel proceso por el
cual se restringen, completa o parcialmente, los grados de libertad de
movimiento de enzimas, orgnulos, clulas, etc. por su unin a un soporte
Segn su reversibilidad:
Mtodos de Inmovilizacin Irreversibles
El concepto de inmovilizacin irreversible implica el enlace de la enzima a un
soporte poroso (a excepcin del entrecruzamiento) de manera permanente o al
atrapamiento de esta en gel, fibra o capsula, por lo cual la enzima no puede ser
liberada sin destruir o modificar su actividad biolgica o el soporte o lo que la
20
tenga atrapada.
la
actividad
enzimtica
decae.
Existen
distintos
mtodo
de
20
por
prepolmeros
fotoentrecruzables
polmeros
de
tipo
20
Atrapamiento en fibras: permite el atrapamiento de enzimas en la red
formada por fibras segn estas se van formando por el procedimiento de
hilado en hmedo, con aparatos similares a los de la industria textil. Se
extrusiona el polmero solubilizado en un disolvente orgnico que est
formando emulsin con la disolucin acuosa de enzima sobre otro disolvente
orgnico, como tolueno o ter de petrleo, donde el polmero precipita,
atrapando microgotas de la solucin enzimtica en sus cavidades. Este
mtodo es mejor que el atrapamiento en gel, pues el rea de contacto redenzima es mucho mayor y las propiedades de las fibras son mejores que las
de los geles como: mayor resistencia a cidos y bases dbiles, a disolventes
orgnicos y a fuerzas inicas altas. Se pueden inmovilizar varias enzimas
(inmovilizacin multienzimtica), aunque se requiere que el sustrato o
sustratos no tengan peso molecular alto. El polmero ms usado por su
biocompatibilidad y bajo costo es el acetato de celulosa. La retencin de
actividad es alta, posiblemente porque la enzima est en un entorno acuoso
y el tiempo de contacto con los disolventes orgnicos es corto.
microencapsulacin: En este mtodo, la enzima
queda atrapada en una membrana polimrica
esfrica de dimetro comprendido entre 1 y 100
m, a travs de la cual difunden sustratos y
productos, lo que permite la coinmovilizacin de
varias enzimas. Existen varios mtodos para
realizar
la
microencapsulacin:
coacervacin
Figura 2:
Inmovilizacin por
Microencapsulacin
descripcin
microencapsulacin de enzimas:
de
algunos
mtodos
para
la
20
o coacervacin: Es un mtodo qumico de separacin de fases. El soluto
polimrico separado en forma de pequeas gotas lquidas, constituye el
coacervado. La deposicin de este coacervado alrededor de partculas
insolubles dispersas en un lquido forma cpsulas incipientes que, por una
gelificacin apropiada, da las cpsulas finales. La coacervacin puede ser
iniciada por diferentes formas: cambios de pH, temperatura o adicin de
una segunda sustancia como una sal inica; este mtodo es eficiente pero
costoso. Para el proceso de microencapsulacin algunos biopolmeros han
sido utilizados para su uso como coberturas (goma arbiga y grenetina).
o Polimerizacin interfacial (Incompatibilidad polimrica): Este mtodo
utiliza el fenmeno de separacin de fases en una mezcla de dos
polmeros qumicamente diferentes e incompatibles en un mismo solvente.
El material a encapsular interaccionar slo con uno de los dos polmeros
el cual se adsorbe en la superficie del material a encapsular formando una
pelcula que lo engloba.
20
las fuerzas involucradas en la inmovilizacin no covalente resulta en un
proceso que puede ser reversible cambiando las condiciones que influyen en
la resistencia de la interaccin. La fuerza del enlace es relativamente dbil y
sumamente sensible a cambios de pH, fuerza inica y temperatura. Estos
mtodos tienen la gran ventaja de ser sencillos. Los soportes ms usados son
polmeros orgnicos, sales minerales, xidos metlicos y varios metales
silceos o intercambiadores inicos como DEAE-Sephadex y DEAE celulosa,
aunque tambin pueden usarse soportes inorgnicos.
Se pueden usar diversas tcnicas para que la enzima entre en contacto con
el soporte: procedimiento esttico, electrodeposicin, proceso en reactor y
bafio con agitacin. La ms usada en el laboratorio es la ltima, en la que la
solucin enzimtica es puesta en contacto con el slido en un tanque
termostatizado (que se mantiene a cierta temperatura) y agitado por vibracin,
vaivn o movimiento orbital, con lo que se logra una deposicin uniforme de
enzima. La inmovilizacin se suele llevar a cabo comercialmente en reactor,
que puede ser un lecho fijo o fluidizado o un tanque agitado por hlice, paleta
o turbina, al que la solucin enzimtica se recircula o en el que se agita dicha
solucin,
respectivamente.
En
el
procedimiento
de
adsorcin
por
20
o Adsorcin fsica: Las enzimas son unidas a la matriz a travs de
puentes de hidrgeno, fuerzas de van der Waals, o interacciones
hidrofbicas
o Enlace inico: Los enlaces inicos de enzimas son producidos a travs
de uniones con sales. En este caso se usan resinas intercambiadoras de
iones, que tienen grupos superficiales que pueden sustituir su unin
inica a un catin o anin por uniones similares a radicales polares de la
enzima. Esta unin es ms fuerte que la mera adsorcin fsica, aunque
no tanto como el enlace covalente.
El principal problema asociado a este mtodo de inmovilizacin es
conseguir que la enzima se una al soporte con suficiente fuerza para que
la prdida de enzima por lavado durante la operacin del reactor que
contenga la enzima inmovilizada sea mnima. Con este objeto se
modifican qumicamente los aminocidos superficiales de las enzimas o
se modifican por Ingeniera Gentica aadindoles grupos peptdicos
muy cargados.
o Enlace metlico: Son aquellas tcnicas de inmovilizacin que utilizan la
formacin de quelatos entre metales de transicin y enzimas, Los
metales de transicin empleados con ms frecuencia son el titanio (IV) y
el zirconio (IV), ya que sus xidos no son txicos. De hecho, los cloruros
de estos metales, as como los de vanadio (III), hierro (III) y estao (IV),
forman hidrxidos en medio cido, que precipitan como geles, por lo que
pueden ser usados como soportes para la inmovilizacin de enzimas. Sin
embargo, el empleo de soportes porosos es ms adecuado por sus
propiedades mecnicas y, en este caso, la tcnica consiste en depositar
una capa de hidrxido del metal sobre la superficie de los poros.
20
condiciones muy especficas entre la enzima y los grupos reactivos del
soporte. A este tipo de enlace se aaden siempre fuerzas electrostticas que
consolidan la fijacin. La reaccin qumica de formacin del enlace covalente
debe ser poco desnaturalizante para la macromolcula biolgica; para ello, es
necesario proceder a
20
evidentemente, hay ligandos especficos para muchas enzimas que se unen a
los grupos alostricos de las mismas.
Tipos de soportes:
Se pueden dividir en orgnicos o inorgnicos
etc.)
Otros (alcohol polivinlico, poliamidas, etc.)
20
porosa rgida y definida, no son compresibles, tienen una vida til larga, son
fciles de manejar, son resistentes a los disolventes orgnicos y se pueden
regenerar mediante pirlisis. Adems, suelen ser baratos (al menos, los que
tienen posibilidad de uso industrial).
Los soportes inorgnicos pueden ser:
o Naturales: arcillas como bentonita, piedra pmez, slice, etc.
o Manufacturados: xidos de metales y vidrio de tamao de poro
controlado, vidrio no poroso, almina, cermicas, gel de slice, etc.
En cualquier caso un soporte debe cumplir con los siguientes requisitos
mnimos:
o Fsicos: resistencia mecnica, incompresibilidad en el rango de variables
de proceso utilizado, superficie intema adecuada, forma geomtrica que
facilite su manejo y empaquetamiento, permeabilidad al sustrato, densidad
mayor que el lquido, prdida aceptable de carga en el reactor.
o Qumicos: Hidrofilicidad (alta polaridad de la superficie), no reactividad
con la enzima, grupos funcionales en superficie suficientemente reactivos
o
o
o fciles de activar.
De estabilidad: mecnica y de almacenamiento.
Resistencias: al ataque por bacterias y hongos, al pH, a la temperatuira,
20
20
Aunque el agente entrecruzante ms usado es el glutaraldehido, tambin se
usan dextranos de peso molecular medio y alto, poliaminas y otros polmeros.
Estos polmeros tienen ms de dos grupos funcionales tiles para el
entrecruzamiento, por lo que se llaman agentes multifuncionales. Con ellos se
obtiene un entrecruzamiento mltiple tanto en la superficie de la enzima como de
enzima a enzima. Este entrecruzamiento suele ser ms flexible y desactiva
menos la enzima que el entrecruzamiento logrado con glutaraldehido, pero
puede bloquear o dificultar el paso de los sustratos al centro activo, por el hecho
de crear una red polimrica sobre la superficie enzimtica. Aun as, el mtodo
logra estabilizar la enzima frente a agentes desactivantes como la temperatura,
los agentes caotrpicos o el pH
proceso.
La posibilidad de disear un reactor enzimtico de fcil manejo y control
adaptado a la aplicacin de la enzima inmovilizada. Esto permite mejoras
en la separacin del producto adems de la posibilidad de aumentar la
concentracin de catalizador de forma significativa respecto a un proceso
en el que se encuentra en suspensin. Todo lleva a un aumento en
20
uniones al soporte.
Suele haber una prdida de actividad de la enzima durante la
inmovilizacin.
Los grupos reactivos del soporte reaccionan con algn aminocido que
forme parte del centro activo o que sea esencial para la actividad cataltica
de la enzima.
20
repelerse.
Impedimentos estricos o de tamao del sustrato. Se ha visto que
muchas veces la actividad posterior a la inmovilizacin se ve disminuida
para sustratos de elevado peso molecular mientras que se mantiene para
sustratos de bajo peso molecular, esto es debido exclusivamente a
efectos estricos.
Efectos de microentorno. De acuerdo a lo ya mencionado sobre el
microentorno, el efecto observado suele ser un desplazamiento en el
valor de pH ptimo de la catlisis enzimtica y, muchas veces, un
ensanchamiento del intervalo de pH en el cual la enzima puede actuar.
20
Conclusin
Cada mtodo de inmovilizacin es muy diferente uno del otro, unos utilizan
soportes para darle estabilidad, otros atrapan o encapsulan la enzima y otros
mtodos enlazan las enzimas, la eleccin del mtodo a utilizar se basa segn el
tipo de enzima, el medio en el que este o los materiales que se puedan
conseguir.
Se puede concluir que, la inmovilizacin enzimtica puede ser muy til en
procesos industriales dado que permite la reutilizacin de la enzima porque evita
que esta se pierda en las primeras reacciones, sin embargo los mtodos de
inmovilizacin deben realizarse con suma exactitud para no perder o alterar
demasiado la enzima y que esta pueda servir para realizar otras reacciones.
En todo proceso de inmovilizacin ocurre una disminucin o aumento de la
actividad enzimtica por lo tanto se debe cuidar que esta no sea perjudicial (muy
alta o muy baja) para el proceso sea costeable.
20
Bibliografia
Departamento
de
Bioprocesos
Biotecnologa.
(2007).
Ral Fajardo-Ochoa, Juan Alberto Osuna-Castro, Carlos VillaVelzquezMendoza, Pilar Escalante-Minakata y Vrani Ibarra-Junquera. (2011).
INMOVILIZACIN DE CLULAS Y ENZIMAS. AQM Acta Qumica
Mexicana, Volumen 3 No. 6, pg. 46-51
agroindustriales:
residuos
lcteos
con
-galactosidasa
https://es.wikipedia.org/wiki/Biocatalizadores_inmovilizados
https://es.wikipedia.org/wiki/Enzimas_inmovilizadas
https://es.wikipedia.org/wiki/Cinetica_enzimatica
20
http://biblioteca.ucm.es/tesis/19972000/X/0/
X0043802.pdf