I N ST I T U T O P O LI T CN I C O N AC I O N A L

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE INGENIERA CAMPUS GUANAJUATO

MTODOS CUANTITATIVOS / MTODOS ANALTICOS E INSTRUMENTALES
PRCTICA 9
SEPARACIN DE LOS PIGMENTOS DE LA HOJA DE ESPINACA MEDIANTE
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA Y COLUMNA
OBJETIVO
Introducir al alumno al estudio de la tcnica de separacin analtica de
cromatografa en capa fina aprendiendo los fundamentos de sta, los factores
que en ella intervienen y su aplicacin en la purificacin e identificacin de
sustancias. Aplicar los conceptos de la cromatografa en capa fina para
determinar los valores del factor de particin para varias sustancias
correlacionando este concepto con la seleccin adecuada del eluyente.
FUNDAMENTO
La cromatografa en capa fina (CCF) es una tcnica basada en fenmenos de
adsorcin slido-lquido que constituye una herramienta importante en la
qumica orgnica para el anlisis rpido de muestras pequeas (10 -9 g).
Frecuentemente se usa para el seguimiento del progreso de una reaccin o
para el control y seguimiento de las separaciones que se producen mediante
una cromatografa en columna preparativa.
Para realizar el anlisis de una muestra por CCF se utiliza un adsorbente slido
como gel de slice (

Si O2 x H 2 O ) o almina ( Al 2 O 3 ), soportados en una

placa rectangular de vidrio o plstico; el adsorbente sirve de fase estacionaria.

La muestra se aplica en disolucin con un capilar de vidrio en un extremo de la
placa, pero no sobre el mismo borde. La figura 1 muestra un esquema de una
placa cromatogrfica, donde el tanque cerrado conteniendo un disolvente o
mezcla de disolventes (fase mvil), de manera que la placa quede apoyada
sobre el fondo y el punto con la muestra, por encima del nivel del lquido. La
fase mvil asciende por capilaridad, de forma que se produce un avance de los
componentes de la mezcla, segn su polaridad. El coeficiente obtenido entre la
distancia recorrida por el compuesto entre la distancia recorrida por el
disolvente en la fase estacionaria se le conoce como factor de particin (R f).

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Figura 1. Esquema para CCF y clculo de Rf.

MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO

Cantida
d
1
1
1
1
6
1
2
1
3
1
1
3
1
1
1
1
2

Material y equipo
Descripcin
Mortero con pistilo
Pipeta (5 mL)
Pipeta (1 mL)
Probeta (50 mL)
Tubos de ensaye con tapn
Gradilla
Pipeta Pasteur con bulbo de
ltex
Propipeta
Papel Filtro
Esptula
Charola
Tubo capilar
Pizeta
Pinzas
Pinzas de tres dedos
Soporte universal
Vaso de precipitados (100
mL)

DESARROLLO EXPERIMENTAL
A) Extraccin de pigmentos

Reactivos
Agua destilada
Slica gel 60 (SiO2)
Hexano (C6H12)
Etanol (C2H6O)
Acetona (C3H6O)
Cloroformo (CHCl3)
Sulfato de sodio anhidro (NaSO4)

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1. En un mortero, colocar una hoja de espinaca fresca en trozos con una
mezcla de 8 mL de hexano y 4 mL de etanol, machacar suavemente para
obtener un extracto cristalino.
2. Con una pipeta Pasteur transferir el extracto cristalino de hexano (superior)
a un tubo de ensayo.
3. Adicionar aproximadamente la mitad del volumen de extracto de agua
destilada y agitar con suavidad evitando la formacin de emulsiones.
4. Transferir la fase orgnica a un tubo de ensayo y aadir Na2SO4 para
eliminar el agua.
B) Preparacin de la placa de cromatografa
1. Con la ayuda de un lpiz marcar levemente los dos puntos en donde se va
depositar la muestra.
2. Con un capilar, depositar un poco de la muestra sobre la placa de
cromatografa; para evitar que la mezcla difunda por la placa, vaciar el
contenido del capilar poco a poco sobre un mismo punto (3-5 veces), y
soplar suavemente para secar el disolvente.
C) Desarrollo de la placa
1. Preparar 10 mL de los siguientes disolventes y mezclas de los mismos.
-

Hexano
Cloroformo
Acetona
Etanol

- Hexano/cloroformo (1:1)
- Cloroformo/acetona (1:1)
- Hexano/acetona (1:1) - Cloroformo/etanol (1:1)
- Hexano/acetona (7:3) - Acetona/cloroformo (1:1)
- Hexano/etanol (1:1)
- Acetona/etanol (1:1)

2. Preparar y cortar placas de papel para cada una de las fases mviles.
3. Correr la cromatografa y marcar con lpiz los resultados obtenidos para
cada una de las fases mviles.
4. Determinar los colores presentes en cada una de las separaciones y calcular
el Rf para cada uno.
5. Reportar los resultados obtenidos en la separacin para cada una de las
mezclas utilizadas como eluyentes en trminos de los pigmentos separados,
posiblemente:

Pigmento
Caroteno
Clorofila A
Xantofilas
Clorofila B

Color
Naranja
Verde azulado
Amarillo
Verde

6. A partir de los valores de Rf determinados y comparados con los reportados

en la bibliografa, indicar cul sera la fase mvil ms adecuada para realizar
la separacin.

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7. Una vez seleccionada la fase mvil, repetir la cromatografa en una placa de
capa fina.
D) Preparacin de columna Cromatogrfica
1. Para empacar la columna, colocar un trozo pequeo de algodn en la parte
inferior de una jeringa de 5 mL a manera de tapadera, agregar slica gel
hasta un 80% de la capacidad de la jeringa y compactarla; colocar otro
tapn de algodn en la parte superior de la jeringa.
2. Agregar etanol para humectar la columna y evitar que esta se fracture.
3. Una vez permeado todo el etanol, agregar la muestra y dejar que se difunda
a travs del algodn hasta que alcance la slica gel.
4. Agregar la fase mvil con la cual se observ la mejor separacin por
cromatografa en capa fina y recolectar los pigmentos obtenidos en tubos
de ensaye (uno para cada pigmento).
BIBLIOGRAFA

Ayres, G.H. (1970). Anlisis Qumico Cuantitativo, segunda Edicin, editorial

Harla, Madrid.
Harris, D.C. (2001). Anlisis Qumico Cuantitativo, tercera edicin, editorial
Revert, Barcelona.
Skoog, D.A., West, D.M., Holler, F.J., Crouch, S.R. (2005). Fundamentos de
Qumica Analtica, octava edicin, editorial Thomson, Mxico.
Prcticas de Tcnicas de Anlisis Qumico (s.f.) recuperado el 31 de octubre
de 2009 de: www.slideshare.net/mancillamartin/prcticas-de-tcnicas-deanlisis-qumico-ii-presentation.