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Microorganismos que intervienen en la generacin de biogs

Karla Cristel Cmara Moguel, Jos Ramn Laines Canepa, Jos Aurelio Sosa Olivier
josra_2001@yahoo.com.mx

Resumen
La digestin anaerobia es un proceso biolgico degradativo en el que a travs de sus fases
consecutivas y con ptimos parmetros fisicoqumicos, diversos complejos enzimticos generan
biogs. La hidrlisis, primera fase elemental, se da cuando las enzimas celulolticas, proteolticas y
lipolticas degradan las biomolculas del sustrato a sus monmeros correspondientes para ser
utilizados por microorganismos de la siguiente fase hasta la metanognesis. En la Universidad
Jurez Autnoma de Tabasco se desarrolla un proyecto cuyo objetivo es conocer las poblaciones
microbianas de la digestin anaerobia del rumen gstrico de ganado bovino y su correlacin con los
gases que stas generan durante la produccin de biogs en un biodigestor de cpula tipo Batch.
Para dicho estudio se tomaron muestras de cuatro puntos del biodigestor durante 45 das, los
parmetros fisicoqumicos se analizaron cada tercer da, los microbiolgicos y la concentracin de
gases, cada semana. Se utiliz el medio de cultivo EMB para identificar bacterias de la familia
Enterobacteriaceae; los gases se determinaron por cromatografa y los parmetros fisicoqumicos
con un conductor elctrico marca Hanna HI9828. Las bacterias halladas fueron Escherichia coli,
Klebsiella pneumoniae, Enterococcus faecalis, Proteus mirabilis, Shigella flexneri. El volumen de
CH4 fue 59.34%, CO2 30.95%, N2 7.349% y 2.361% de O2; de H2S 15.451 ppm. La temperatura y
el pH no presentaron diferencias significativas (p>0.05); el oxgeno disuelto present un efecto
estadsticamente significativo (p=0.0396) entre los puntos de muestreo 1 y 4; en slidos disueltos no
se encontr diferencias significativas (p>0.05, Kruskal-Wallis).

Palabras Clave: bacterias, biodigestor, bioqumica, digestin anaerobia, enzimas


1. Introduccin
El desarrollo tecnolgico e industrial y la elevada densidad poblacional generada al final del siglo
XX, han ocasionado considerables volmenes de residuos slidos urbanos (RSU) a nivel nacional e
internacional, constituyendo uno de los principales problemas ambientales de la sociedad
contempornea, adems de contribuir en la generacin de focos de infeccin que perjudican la salud
humana como consecuencia de la falta de control, de alternativas de tratamiento y la ausencia de
leyes reguladoras. Investigaciones realizadas en Amrica Latina para tratar estos residuos,
utilizando mtodos fisico-qumicos, qumicos y biolgicos han demostrado que estos ltimos son
los ms adecuados, siendo el de mayor perspectiva la digestin anaerobia (DA). La aplicacin de
esta tecnologa es considerada una de las ms eficientes para el tratamiento de los RSU, debido a
que en la mayora de los pases latinoamericanos el contenido de Fraccin Orgnica (FO) representa
entre un 40 75% [1]. La DA que se genera de manera natural en los rumiantes, involucra diversos
microorganismos, ms de 200 tipos de bacterias y 20 tipos de protozoos ayudan a la vaca a usar los
nutrientes y son capaces de degradar materia orgnica en diferentes fases hasta producir una mezcla
de gases [2]. Debido a la fermentacin ruminal, se producen diferentes gases cerca de 30-50
litros/hora en un bovino adulto, los cuales son eliminados a travs del eructo. El contenido del
rumen y retculo es de aproximadamente de 30 a 60Kg en bovinos [3]. La DA es un proceso
complejo desde el punto de vista microbiolgico; al estar enmarcado en el ciclo anaerobio del
carbono, es posible en ausencia de oxgeno, transformar la substancia orgnica en biomasa y
compuestos inorgnicos en su mayora voltiles: CO2, NH3, H2S, N2 y CH4 [4]. El objetivo del
Hacia la sustentabilidad: Los residuos slidos como fuente de energa y materia prima
2011 pp 640-644 ISBN 978-607-607-015-4

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presente trabajo fue entender la interaccin de los microorganismos hidrolticos del rumen en la
primera fase de la DA con la generacin de biogs.

2. Materiales y Mtodos
2.1 rea de estudio
El biodigestor se encuentra ubicado en la Divisin Acadmica de Ciencias Biolgicas (DACBiol)
de la Universidad Jurez Autnoma de Tabasco (UJAT) en la ciudad de Villahermosa Tabasco,
Mxico. El rumen utilizado, fue transportado del frigorfico de la Unin Ganadera de la ciudad de
Villahermosa a la DACBiol. Para la fermentacin del rumen gstrico se utiliz un biodigestor en
forma de cpula tipo Batch con una capacidad de DA de 67m3, con un volumen total de sustrato de
7,300Kg.
2.2 Muestreo
Nomenclatura de las muestras. Muestra 1 (M1), a la entrada del influente, primer da. Las Muestras
2 a la 6 (M2-M6), se nombran en razn de los das de muestreo: M2-20 das, M3-35 das, M4-42
das, M5-49 das y M6-56 das.
Lugar de muestreo para M2-M6. Tubos de recirculacin y extraccin de slidos de PVC de 6
colocados tangencialmente a lo largo del biodigestor (Celda).
Tamao de submuestra para M2-M6. 4 de 2L cada una.
2.3 Anlisis fisicoqumicos

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Se determin a cada submuestra, los siguientes parmetros: pH, temperatura (C), slidos disueltos
(SD, ppt) y oxgeno disuelto (OD, ppm). El equipo utilizado fue un medidor multiparamtrico
porttil con receptor GPS, modelo HANNA HI 9828, cada tercer da desde la alimentacin del
biodigestor hasta llegar a su capacidad de DA.
2.4 Preparacin de diluciones y siembra en Agar Eosina y Azul de Metileno (EMB)
Muestra representativa. De las 4 submuestras, que conformaban cada una de las muestras, se le
aplic el mtodo de cuarteo hasta tener una muestra de 0.5L.
Diluciones. A tubos de cultivo que contenan un volumen de 9ml de solucin de NaCl 0.85%
estril, se les agreg 1ml de la muestra representativa de rumen, realizando diluciones seriadas de
1:10 (10-1) hasta 10-10.
Siembra. Se procedi a realizar las siembras de las muestras en cajas Petri con medio de cultivo
EMB, despus de la siembra se incubaron durante 48h a 37C. La siembra se hizo para las seis
muestras tomadas de rumen del biodigestor con dos repeticiones por dilucin. Para el conteo de
colonias, se utiliz el mtodo directo en placa.
2.5 Anlisis de gases
Semanalmente se tomaron tres muestras de biogs, en bolsas de Tedlar (Keika Ventures, Chapel
Hill, North Caroline, USA) de 10 L, bolsas apropiadas para el muestreo de gases debido a sus
durabilidad y a que el material de construccin de stas (fluoruro de polivinilo) es qumicamente
inerte a los componentes del biogs. Estas muestras se enviaron al laboratorio del complejo
Procesador de Gas (CPG) Cactus l de PEMEX, donde se determin la composicin del biogs
utilizando un cromatgrafo de gases Varian, modelo GC-450 .
2.6 Diseo estadstico
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Para los resultados de los parmetros medidos (Temperatura, pH, SD, OD) se utiliz un diseo
completamente aleatorizado ANCOVA (una va) tomando como covariable el tiempo. El estudio
estadstico de las bacterias cultivadas en medio EMB fue realizado por conteo directo tomando un
mnimo de microorganismos de 30 por placa. Para el anlisis estadstico se utilizo el paquete
estadstico STATGRAPHICS 5.1. Para el diseo de las graficas se utiliz el programa
SIGMAPLOT 11.0.

3. Resultados y discusin
3.1 Anlisis microbiolgicos
Hubo crecimiento de bacterias que fermentan lactosa as como microorganismos que no fermentan
lactosa en las muestras M1, M2, M3, M5 y M6. En la nica muestra que no se encontr bacterias
que no fermentan lactosa fue en la M4.
Dentro del complejo mundo bacteriano del rumen, la bacteria ms abundante en esta investigacin
fue Klebsiella, bacteria que fermenta lactosa adems de producir gases; seguida de E. coli que
tambin fermenta lactosa y glucosa con produccin de gas y cidos orgnicos; Enterobacter
aerogenes fermenta lactosa con produccin de gas H2; Shigella no fermenta lactosa y no produce
H2S. Las bacterias menos abundantes fueron Proteus mirabillis, Salmonella y Candida spp. en
orden descendente teniendo las dos primeras la misma proporcin (Figura 1).
La mayor actividad bacteriana en el biodigestor se dio en el punto cuatro de muestreo para las
muestras M2 y M4 (Figura 2). En la M4, muestra tomada a los cuarenta y dos das hubo el mayor
crecimiento bacteriano (2.27E+05 cel/ml) seguido de M2, muestras que fueron tomadas a los veinte
das (1.22E+05 cel/ml). El menor crecimiento bacteriano se dio en las muestras que se tomaron a
los treinta y cinco das (M3) teniendo crecimiento solo en el punto de muestreo cuatro. Las
muestras M5 y M6 tuvieron su mayor actividad microbiana en los puntos uno y tres
respectivamente para descender su actividad cataltica en el punto cuatro.

3e+5

Abundancia (cel/ml)

3e+5

2e+5

2e+5

1e+5

5e+4

le
bs
ie
lla
K

nt
er
ob
ac
te
r

sp
p

Bacterias

al
m

an
di
da

on
el
la

ol
i
.c
E

hi
ge
lla
S

ro
te
us

Figura 1. Abundancia de enterobacterias que forman la microbiota del rumen de ganado bovino fermentado
en un biodigestor tipo Batch

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2.5e+5
M2
M3
M4
M5
M6

Microorganismos cel/ml

2.0e+5

1.5e+5

1.0e+5

5.0e+4

0.0

Puntos de muestreo

Figura 2. Crecimiento bacteriano de cinco muestras de rumen (de M2 a M6) tomadas en los cuatro puntos de
muestreo del biodigestor

3.2 Anlisis fisicoqumicos

0.7
0.6

0.5

OD (ppm)

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La concentracin de oxgeno disuelto (OD), fue mayor en el punto de muestreo cuatro (0.5ppm) y
menor en el uno (0.1ppm) presentando un efecto estadsticamente significativo (p=0.0396,
ANCOVA) entre ambos puntos (Figura 3); el pH y la temperatura no presentaron diferencia entre
los cuatro puntos de muestreo manteniendo valores entre 6.4 - 6.5, 28.4 - 29.3 C respectivamente
(ANCOVA p>0.05), El rango ptimo del pH para lograr una mayor eficiencia en la biodigestin es
entre 6.6 a 7.6 [5]. El equilibrio cido-base que tiene lugar en la operacin de los biodigestores
anaerobios es muy importante por la presencia de los diversos tipos de microorganismos que estn
en el medio y que requieren ser neutralizados para restituir el pH [6]. Los slidos disueltos tuvieron
concentracin de 2.2 2.5ppt, no presentaron diferencias significativas (Kruskal-Wallis p>0.05).

0.4
0.3
0.2

ab

ab

0.1
0.0
-0.1
0

Puntos de muestreo

Figura 3. La concentracin de oxgeno disuelto fue medida al sustrato (rumen de ganado bovino) durante su
fermentacin en cuatro puntos del biodigestor. Letras desiguales muestran diferencias significativas, letras
iguales no presentan diferencias.

3.3 Composicin de biogs


La tabla 1 muestra la composicin de biogs obtenido en la fermentacin de rumen de ganado
bovino en un biodigestor de cpula tipo Batch con un tiempo de retencin de 63 das con
recirculacin cada tercer da. Grant et al., reportan un rendimiento de CH4 entre 47 y 64% de una
mezcla de estircol de pollo y vaca con un tiempo de retencin de 60 das, y de 41 a 72% con una

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mezcla de estircol de pollo y cerdo [7]. La Comisin Nacional de Energa (CNE) reporta que la
composicin promedio de CH4 en la generacin de biogs es de 50-79% [8].
Tabla 1. Composicin del biogs
Gases
Metano (CH4)
Bixido de carbono (CO2)
Nitrgeno (N2)
Oxgeno (O2)
cido sulfhdrico (H2S)

Composicin
59.34%
30.95%
7.35%
2.30%
15.45 ppm

4. Conclusin
La diferencia significativa encontrada en los puntos de muestreo 1 y 4 para la concentracin de
oxgeno disuelto se debi a la pendiente del terreno, sin embargo esto no afect ni la produccin de
gas metano ni la actividad hidroltica de las bacterias debido a que en este punto del biodigestor se
encontr la mayor actividad cataltica. Las bacterias con mayor actividad hidroltica (Klebsiella, E.
coli y Enterobacter aerogenes) son microorganismos capaces de fermentar lactosa y producir gases
H2S y H2; Shigella bacteria abundante en las ltimas muestras no fermenta lactosa y no produce
cido sulfhdrico. Este dato adems de la buena recirculacin que se le dio al biodigestor podra ser
la causa de la baja concentracin de H2S que se obtuvo.

Referencias Bibliogrficas
[1] Sandoval C. J., Carreo M., Fernando E., Vergara M. Caracterizacin microbiolgica de lodos
anaerobios utilizados en el tratamiento de la fraccin orgnica de los residuos slidos urbanos.
Scientia et Technica Ao XIII, No 35, Agosto de 2007. Universidad Tecnolgica de Pereira. pp.
509-510.
[2] DeLaval, 2006. Fisiologa Bsica. Consultada marzo 2011. [Online]. Disponible:
http://www.delaval.es/Dairy_Knowledge/EfficientFeeding/Basic_Physiology.htm
[3] Nava C. y A. Daz. 2001. Introduccin a la Digestin Ruminal. Departamento de Nutricin
Animal. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia UNAM. Consultada marzo 2011. [Online]
Disponible: http://www.veterin.unam.mx/fmvz/enlinea/Ruminal/digest_ruminal.htm
[4] Soria M., Ferrera R., Etchevers J., Alcntar G., Trinidad J., Borges L., Pereyda G. Produccin
de biofertilizantes mediante biodigestin de excreta liquida de cerdo. Revista de divulgacin
cientfica, Terra volumen 19, No. 4, 2001. pp.354.
[5] McCarty, P.L. 1964. Anaerobic waste treatment fundamentals. Part two, Environmental
Requirements and Control. Chemistry and microbiology. Vol. 95, No. 10. 1964. pp. 122-123.
[6] Meja M., G. 1996. Digestin anaerobica. Folleto Tcnico 1. Universidad Autnoma de
Yucatn. Mrida, Yuc., Mxico.
[7] Grant S., Marshalleck A., Brown N. La produccin de la energa y la mitigacin de
contaminacin en las granjas avcolas de Jamaica y Pensilvania. Fourth LACCEI International
Latin American and Caribbean Conference for Engineering and Technology (LACCET2006).
Mayagez, Puerto Rico. 2006. pp.6-8.
[8] Comisin Nacional de Energa. Consultada abril 2011. [Online]. Dsiponible:
http://www.cne.cl/cnewww/opencms/03_Energias/Otros_Niveles/biocombustible_tipoenergia/bioga
s.html.

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