CARACTERIZACIN CUALITATIVA DE CARBOHIDRATOS

Estudiantes cuarto Semestre del Programa de Ingeniera Agroindustrial Universidad de

Nario, San Juan de Pasto, Colombia
26 de septiembre de 2014
RESUMEN
En esta prctica se analiz las propiedades caractersticas de una de las principales
macromolculas que
correspondieron
a
los
carbohidratos y se realizaron
algunas reacciones qumicas especficas que permiti la identificacin de dicho grupo.
Las
propiedades
bioqumicas
y
las reacciones
caractersticas
de
las
diferentes biomolculas dependen de los distintos grupos funcionales que las constituyen.
Los carbohidratos se definen como polihidroxi-aldehidos, polihidroxi-cetonas o aquellos
compuestos
que
por
hidrlisis
los
producen.
Los carbohidratos se clasifican, con base en su estructura qumica, por el nmero de
carbonos presentes, los grupos que se pueden encontrar en su estructura o la unin de
varios de estos expresndose as como: monosacridos, oligosacridos y polisacridos.
La inmensa diversidad estructural posible de los carbohidratos es una caracterstica clave
de estas molculas en su funcin de mediadores de las interacciones celulares.
Dentro de la prctica se llev a cabo reacciones destacadas como son la reaccin de
benedict, de fehling y de seliwanoff, con las cuales se pudo hacer un reconocimiento y
confirmacin de la presencia de azucares reductores en la estructura y composicin del
suero de la leche, el cual fue tratado a partir de la leche para su obtencin. Cuando se
trabaj con reactivos puros para analizar el comportamiento de la mezcla cuando resulta
positiva o negativa, los indicativos de estas reacciones fueron notorios y rpidos,
mientras que para que los mismos resultados se dieran en el suero, hubo la necesidad de
disponer de ms tiempo, pues era un factor dominante para que una reaccin se exprese
como negativa o positiva.
En sntesis los resultados fueron los esperados y con base a los indicativos necesarios
para as poder determinar de que el desarrollo del laboratorio fue todo un xito, se
encontr una gran notoriedad y actividad de azucares reductores en el suero de la leche,
lo que permiti un correcto, adecuado y placentero desarrollo de la prctica.
Palabras clave: Coloracin, Reactivos, Indicativo
INTRODUCCIN
Los carbohidratos estn distribuidos
ampliamente en vegetales y animales en
los cuales tiene participacin estructural,
funcional y metablica. Ellos son

componentes fundamentales de muchos

alimentos y su degradacin durante el
proceso de digestin genera la energa
necesaria para las funciones vitales del
organismo. Cuando se encuentran
combinados con otras biomolculas, dan
origen a molculas ms complejas cuyas
funciones pueden ser estructurales o de
soporte celular y tisular, de comunicacin
entre clulas, de reconocimiento o de
sealizacin.
Los carbohidratos tambin llamados
azucares, osas o sacridos, son
polihidroxi-aldehdos
o
polihidroxiacetonas o compuestos polimricos que
por hidrolisis producen polihidroxialdehdos o polihidroxi-acetonas.
Segn el nmero de unidades sencillas de
azucares que posean se clasifican en:
MONOSACRIDOS
o
azcares
sencillos, que a su vez pueden ser aldosas
cuando contienen el grupo aldehdo o
cetosas cuando contienen el grupo cetona.
Los monosacridos naturales pertenecen a
la serie D de los azcares y pueden tener
entre tres y hasta siete tomos de carbono.

azcar reductor o no lo es, si es de cinco

tomos de carbono (pentosa) o de seis
tomos de carbono (hexosa), si es
disacrido o polisacrido.
Para la identificacin de carbohidratos
como la glucosa, fructosa, sacarosa,
ribosa y manosa existen diferentes
mtodos para determinar y caracterizar
los carbohidratos tales como el reactivo
de Fehling el cual identifica la presencia
de azucares reductores, prueba de Bial la
cual identifica pentosas, la prueba de
Benedict
que
reconoce
azucares
reductores los cuales son aquellos
azcares con un grupo carbonilo libre y
Seliwanof reactivo que conlleva a la
identificacin de la fructosa y cetosas.
Todos estos reactivos permiten el
reconocimiento de carbohidratos por
medio de reacciones coloreadas de
carcter cualitativo, pero en esta prctica
solo se utiliz tres de ellas, las cuales nos
sern de utilidad para reconocer los
azucares presentes en el suero de la leche,
estos mtodos fueron, seliwanoff,
benedict y fehling.
OBJETIVOS

DISACRIDOS que estn formados por

dos monosacridos unidos entre s por
enlaces glucosdicos.

Conocer y aplicar pruebas que nos

permitan identificar carbohidratos,
pentosas, y hexosas.

OLIGOSACRIDOS que tienen entre

tres y diez monosacridos unidos tambin
por enlaces glucosdicos.

Identificar las reacciones que

presentan los carbohidratos de
acuerdo a la prueba de Benedict,
Seliwanoff y Fehling.

Diferenciar las reacciones de

carbohidratos de acuerdo a cada
reactivo agregado.

POLISACRIDOS que son polmeros

naturales con varios miles de unidades de
azcar sencillo ligadas entre s.
De acuerdo con lo anterior adems de
reconocer si un compuestos pertenece,
a la familia de los carbohidratos, es
necesario diferenciar si se trata de un
monosacrido tipo aldosa o cetosa, si es
fcilmente oxidable o no, es decir si es un

MATERIALES

Reactivos

Para los siguientes pasos se trabaj con el

suero obtenido.

Ca2(OH)
HCl, 0.5N
Reactivo Benedict
Reactivo Fehling
Reactivo Seliwanoff
Solucin de Glucosa
Solucin de Sacarosa
Solucin de Fructosa al 5%.
Leche

Materiales

Vasos de precipitado,
Pipeta
Frasco lavador
Probeta
Agitador de vidrio
Embudo de filtracin
Erlenmeyer
Tubos de ensayo
pH-metro
Papel Filtro
PROCEDIMIENTO

1. OBTENCION DEL SUERO

Se tom 200 ml de leche de cantina sin
hervir, a continuacin se calent a 30C y
se mantuvo constante. Con la ayuda de un
pH-metro se ajust su pH a 4.6 - 4.8
agregando despacio HCl, 0.5N con la
ayuda.
Como siguiente paso se agito durante 2
minutos y se deja quieta la solucin
durante 10 minutos.
Una vez hecho este paso se filtr
cuidadosamente a travs de papel filtro y
se lav varias veces este filtrado con agua
destilada.

2. OBTENCION DE LOS AZUCARES

DEL SUERO
Se adiciono Ca (OH), al 5%, al suero
obtenido agitando suavemente hasta
obtener un pH de 6.2. Luego calentando
subsecuentemente hasta ebullicin, con
suave y continua agitacin, luego se
decant y filtro en papel filtro. Con el
suero obtenido y se realiz las pruebas de
coloracin.
3. PRUEBAS COLOREADAS
Benedict:
En un tubo de ensayo se coloc: 2 ml de
suero, 3 ml de Reactivo de Benedict. Se
agito y calent durante 5 minutos.
Fehling:
En un tubo de ensayo colocamos: 1 ml de
Solucin A de Fehling, 1 ml Solucin B
de Fehling, 5 ml de Agua destilada, 5 ml
de Suero, Se dispone el tubo en una
solucin de agua hirviendo por 5-10
minutos. Posteriormente se repite el
procedimiento, usando una solucin de
glucosa y sacarosa.

Seliwanoff:

En un tubo de ensayo agregamos 5 ml de

Suero, 5 ml Reactivo de Seliwanoff, y se
caliente a bao Mara, Mas tarde se repite
el procedimiento pero reemplazando el
suero por 5 ml de fructosa al 5%.
RESULTADOS
Antes de iniciar con la agregacin de
reactivos colorantes se debe realizar un
buen procedimiento para la obtencin del
suero, en donde se pueden hallar
inconvenientes por un mal uso del pH-

metro o la falta de control al adicionar los

cidos que ayudaran a obtener el suero de
la leche.
Para ello fue un factor de gran necesidad
el uso de extractores al vaco y un estricto
control en temperaturas y pH.
Leche
Calentar 200 ml de leche a 30C
pH Inicial

5.95

Adicin de HCL 0.5N (basto con 15ml

para tener el pH deseado)
pH Final

4.74

Filtrar con la ayuda de extractor de vaco

y obtener el suero de la leche
Una vez obtenido el suero:
Suero
Adicionar Ca (OH), al 5%,
pH Inicial

4.9

Calentar hasta ebullicin con una suave

y continua agitacin
pH Final

6.2

Decantar y filtrar en papel filtro, luego

con esta sustancia hacer las pruebas de
coloracin.
Se realiza todas estas pasos con la leche
con el fin de obtener un suero con las
condiciones idneas para las pruebas de
coloracin adems.
Prueba de Benedict:
La prueba se considera exitosa cuando se
puede observar la aparicin de un
precipitado rojizo, amarillo rojizo o
coloracin verde.

Reaccin de Benedict
Se toman 2 ml de suero
Se agregan 3 ml de Reactivo de
Benedict.
Se agito y calent durante 5 minutos.
Se not una coloracin amarillo
intensa al transcurrir pocos segundos.
Prueba de Fehling:
La prueba se considera exitosa cuando se
puede observar si hay formacin de un
precipitado rojo indicativo de los azcares
reductores.
Reaccin de fehling
Suero
Sacarosa
Glucosa
En un tubo de ensayo se dispone
1 ml de
suero

1 ml de
sacarosa

1 ml de
glucosa

Se agrega a cada tubo 1 ml de Solucin

A de Fehling, 1 ml Solucin B de
Fehling, y 5 ml de Agua destilada,
Posteriormente se llevan los tubos a bao
mara con agua hirviendo
SI se
NO se
SI se
present
present
present
una
una
una
coloracin coloracin coloracin
roja al
roja al
roja al
finalizar el finalizar el finalizar el
proceso.
proceso
proceso
Prueba de seliwanoff:
La prueba se considera exitosa cuando se
puede observar si hay formacin de un
color rojo intenso indicativo de cetosas
como fructosa.
Reaccin de seliwanoff
Suero
Fructuosa

Se agrega 5 ml de Se agrega 5 ml de
suero a un tubo de fructuosa a un tubo
ensayo
de ensayo

cobre y por ultimo formar el hidroxi-metil

furfural:

Agregue 5 ml del Reactivo de Seliwanoff

caliente a bao Mara
SI se present una SI se present una
coloracin roja al coloracin roja al
finalizar el
finalizar el
proceso, sin
proceso
embargo hubo
que esperar
mucho ms
tiempo para que
se notara el color.
ANALISIS RESULTADOS
Prueba de Benedict:

Que indica esta prueba?

La formacin de precipitado color

amarillo rojizo en el tubo de ensayo, es
prueba de que se cuenta que con azucares
reductores.
Al finalizar la prueba se encontr que la
prueba resulto positiva pues se obtuvo
una coloracin amarilla intensa, lo cual
confirma la presencia de azucares
reductores; esta coloracin fue causada
por el xido cuproso formado en la
reaccin.

La prueba se considera exitosa cuando se

puede observar la aparicin de un
precipitado rojizo, amarillo rojizo o
coloracin verde.

Fundamento qumicos de la
prueba - De donde se obtiene el
color obtenido? :

El reactivo de Benedict contiene

soluciones de carbonato de sodio, sulfato
de cobre, y citrato de sodio. El Na2CO3
confiere a la solucin un pH alcalino
necesario para que la reaccin pueda
llevarse a cabo. El citrato de sodio
mantiene al ion Cu2+ en solucin ya que
tiene la propiedad de formar complejos
coloreados poco ionizados con algunos de
los metales pesados. Se obtiene entonces
un azcar oxidado y dos iones Cu+.
Posteriormente el Cu+ producido
reacciona con los iones OH- presentes en
la solucin para formar el hidrxido de

Debido a la formacin de xido de cobre

Prueba de Fehling:
La prueba se considera exitosa cuando se
puede observar si hay formacin de un
precipitado rojo indicativo de los azcares
reductores.

Fundamento qumicos de la
prueba - De donde se obtiene el
color obtenido? :

Los carbohidratos reductores se oxidan a

sales de cidos aldnicos cuando el Cu 2+
del reactivo de fehling se reduce a Cu 1+.
El reactivo de Fehling, es una disolucin
descubierta por el qumico alemn
Hermann von Fehling el cual se utiliza
como reactivo para la determinacin de
Azcares
Reductores.
Sirve
para
demostrar la presencia de Glucosa, as
como para detectar derivados de esta tales
como la sacarosa o la fructosa.
Al hacer esta prueba la reaccin de
fehling se basa en el carcter reductor de
los monosacridos y de algunos
disacridos
excepto
la
sacarosa.
En este ensayo presenciamos azucares
reductores (Fructosa, Glucosa). El cual se
trata de una reaccin redox en la que el
grupo aldehdo (reductor) de los azcares
es oxidado a grupo cido por el Cu2+ que
se reduce a Cu+. Tanto los monosacridos
como
los
disacridos
reductores
reaccionan con el Cu2+ dando un
precipitado rojo de xido cuproso. La
prueba de Fehling no es especfica; otras
sustancias que dan reaccin positiva son
los fenoles, amino fenoles, cido rico,
cido frmico, etc.

Que indica esta prueba?

La coloracin es un indicativo de, al igual

que la prueba de benedict, confirma la
presencia de azcares reductores.
En este procedimiento la sacarosa en esta
prueba da negativa porque, ambos grupos
OH de los carbonos carbonilos participan
en
el
enlace
o-glucosdico.

Los dems carbohidratos como la

Glucosa y la Fructosa, contenida en el
suero si reaccionaron con este reactivo ya
que al ser azcares reductoras puede
oxidarse. Por ejemplo, al hacer reaccionar
glucosa con Br2/H2O, reactivo de
Fehling, se transforma el aldehdo en
cido carboxlico. En esta reaccin la
glucosa se oxida (acta como reductor) y
reduce al reactivo aadido.

Glucosa

Suero Sacarosa

Prueba de seliwanoff:
La prueba se considera exitosa cuando se
puede observar si hay formacin de un
color rojo intenso indicativo de cetosas
como fructosa.
Para esta prueba fue de gran importancia
el utilizar ms tiempo del debido con el
suero, ya que este necesito de intenso
calor para que sus estructuras se
rompieran e hicieran reaccin con los
distintos reactivos que se le agrego.

Fundamento qumicos de la
prueba - De donde se obtiene el
color obtenido? :

Las cetohexosas y aldohexosas se

deshidratan en medio cido dando lugar,
en cualquiera de los casos, a 5hidroximetilfurfural, el cual se condensa
con resorcinol para dar lugar a un
producto rojo oscuro. Pero reacciona con

ms rapidez con las cetohexosas. Los

disacridos que contienen fructosa; como
la sacarosa, dan positiva esta prueba si se
deja correr la reaccin durante un tiempo
prudencial para permitir la hidrlisis
cida.
Los carbohidratos se clasifican como
cetosas o aldosas. Vale decir, que las
cetosas en el carbono 2 tienen una
funcin cetona, que en presencia de un
cido fuerte producen rpidamente
derivados furfricos que reaccionan con
un di fenol llamado resorcina que est
contenido en el reactivo de Seliwanoff.
Reactivos como la sacarosa (un
disacrido formado por glucosa y
fructosa) y la inulina (un polisacrido de
la fructosa) dan positiva la reaccin, ya
que el HCl del reactivo provoca en
caliente la hidrlisis del compuesto
liberando fructosa (responsable de la
reaccin positiva).
La fructuosa al producir compuestos
derivados furfricos que reaccionan con
un di fenol llamado resorcina que est
contenido en el reactivo de Seliwanoff,
producir esta coloracin roja intensa, por
lo que dar positiva.
Mientras que el suero necesita de un
calentamiento a ms de 15 minutos para
producir la isomerizacin de la DGlucosa (aldosa) (componente del suero)
en D-Fructosa (cetosa), por lo que el
suero da prueba positiva.

Suero

Fructuosa

CONCLUCIONES

De acuerdo a lo establecido en la
prueba de Benedict, que se
establece
como
prueba
determinadora
de
azucares
reductores, si los resultados
presentan color ladrillo son
positivas y corresponden a altas
concentraciones de azucares, si
presentan un color verde hay poca
concentracin de azucares y si el
color es azul quiere decir que es
negativa; con respecto a los
anlisis
realizados
en
el
laboratorio se encontr que el
suero tenia componentes que
correspondan
a
azucares
reductoras.

Al igual que en la prueba de

benedict, la prueba de fehling fue
exitosa
al
demostrar
su
funcionalidad
como
prueba
determinadora
de
azucares
reductores,
presentando
un
esquema similar al de benedict a
la hora de calificar la coloracin
como indicativo positivo o
negativo, siendo as que la prueba
fue positiva para la glucosa y el
suero, y negativa para la sacarosa;
a pesar de que fue negativa para la
sacarosa, existen mtodos como la

hidrolisis acida que rompe la

estructura de la sacarosa a
fructuosa y glucosa y generando
as
un
resultado
positivo.

lo que permiti un correcto,

adecuado y placentero desarrollo
de la prctica.
BIBLIOGRAFIA

Con la prueba de Seliwanoff las

soluciones de fructosa, y suero
reaccionaron
positivamente
tornndose de un color rojo oscuro
para la fructuosa, puesto que esta
reacciono directamente con el
reactivo, y un color rojo suave
para el suero pues necesito de ms
tiempo para que este pudiese
reaccionar con el reactivo de
seliwanoff, as que a partir de las
dos sustancias que se trataron se
puede deducir que la fructuosa es
un azcar reductor y en la
composicin del suero de la leche
tambin
se
encuentran
componentes con las propiedades
reductoras.
En sntesis los resultados fueron
los esperados y con base a los
indicativos necesarios para as
poder determinar de que el
desarrollo del laboratorio fue todo
un xito, se encontr una gran
notoriedad y actividad de azucares
reductores en el suero de la leche,

http://es.scribd.com/doc/10944378
0/Informe-de-practica-delaboratorio-sobre-caracterizacione-identificacion-carbohidratos

http://angelabioqumica.blogspot.com/2011/11/
determinacion-cualitativa-de.html

http://biokimik2011.blogspot.com/
2011/12/determinacioncualitativa-de-los.html

http://www.buenastareas.com/mat
erias/determinacion-cualitativade-carbohidratos/0

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-de-carbohidratos.html