AO DE LA CONSOLIDACIN DEL MAR DE GRAU

Universidad Nacional de Trujillo

Facultad De Medicina
Escuela De Medicina
Escuela acadmico profesional de Medicina
Departamento de Morfologa
SECCIN DE HISTOLOGA

TEMA:

ASPECTOS COGNITIVOS EN EL CURSO DE HISTOLOGA

ALUMNOS:

- DAZ MUOZ, FANNY LIZBETH

- COSTTA SALDAA, RENATO FERNANDO
- ESPEJO MENDOZA, INGRID LISSETH
- ESPINOLA RIVERA, CYNTHIA KATHERINE
- GRADOS ARANDA, GEORDI MAIKEL

GRUPO:

N 02

AO DE ESTUDIOS:

2 AO ACADMICO

FECHA:

29 de Marzo del 2016

DOCENTE:
MC. SCAR AL FLORES ARMAS

PROMOCIN LIV
TRUJILLO-PER

2016

ASPECTO COGNITIVO
1. Definir conceptos bsicos relacionados a las tcnicas histolgicas.
1. FIJACIN: Es el primer paso para la preparacin de un tejido u rgano, para
conservar su estructura (1) . La fijacin se refiere al tratamiento del tejido con
sustancias qumicas que no solo retardan las alteraciones hsticas posteriores
a la muerte sino tambin conserva su configuracin normal (2).
2. INCLUSIN: Con objeto de distinguir entre s las clulas superpuestas en un
tejido y matriz extracelular, se debe incluir a los tejidos un medio apropiado
para poder seccionarlos en cortes finos (2).
La inclusin por parafina es el mtodo estndar para preparar los cortes finos
de tejido de material biolgico para su estudio histolgico con microscopio
ptico. La parafina acta como un soporte fsico de la muestra, permitiendo
que se pueda cortar en secciones finas sin deformar su estructura celular y su
arquitectura.
(3).
3. DESHIDRATACIN: Debido a que el agua representa una gran porcin del
tejido, se aplica gradualmente una serie gradual de baos de alcohol, primero
alcohol al 50% y despus con alcohol al 100% para eliminar el agua (2).
Para la deshidratacin de un tejido, este pasar por una serie de soluciones
acuosas de etanol en concentraciones crecientes, hasta llegar al anhdrido (4).
4. ARTEFACTO: Son cambios no deseados que se presentan en el corte
histolgico, producto de accidentes, un error o de una tcnica histolgica
deficiente, sin control de calidad. (5) (6) Distorsiones de la arquitectura celular
e hstica. (7)
5. PREPARADO HISTOLGICO: Es un fragmento de tejido de muy escaso
espesor que est dispuesto para su observacin microscpica, que se
secciona de un bloque o masa de tejido incluido en un medio de
homogenizacin (parafina) y que se fija a una superficie plana (portaobjetos).
(8)
6. LAMINA HISTOLGICA: Seccin fina de algn tejido, previamente teida,
adherida a una lmina portaobjetos y cubierta por una lmina cubreobjetos.
7. MONTAJE: Este procedimiento consiste en colocar encima del corte
coloreado y diafanizado una gota de una sustancia adherente, diluida,
generalmente en xilol y encima de ellos, una laminilla cubreobjetos, cuidando
que no queden burbujas de aire entre la resina.(9)
8. HIDRATACIN: Consiste en elevar el nivel de agua en un material en
concreto. Permite la penetracin de los colorantes hidratando la muestra en
soluciones de etanol diluidas progresivamente (100%> 95%> 80%> 70%)
hasta el lavado final con agua destilada.(10)
9. TALLADO: Para eliminar exceso de parafina. Se elimina la parafina con un
cuchillo, en forma de pirmide truncada, con el objeto de que no ofrezca
resistencia al ser cortado en el micrtomo.(11)

2. Precisar las diferencias entre lmina histolgica, preparado histolgico y

obtencin de la muestra.
3. Indicar secuencialmente los pasos a seguir para la obtencin de una lmina
histolgica.
CRITERIO 1:
TCNICA HISTOLGICA
PROCEDIMIENTOS MEDIATOS O POSTVITALES
Tienen por finalidad preparar clulas, tejidos y rganos procedentes de seres en los
que los procesos vitales se han detenido y es necesario conservar la estructura que
tenan en vida. De manera general, para alcanzar este objetivo es necesario realizar
los siguientes pasos:
a) Toma de la muestra
Existen diversos procedimientos que permiten obtener muestras de tejidos y rganos
para conseguir preparaciones histolgicas de buena calidad.
- Mediante la biopsia: (del griego bios = vida y opsis = visin), consiste en la toma de
un fragmento de tejido u rgano de un ser vivo.
- Mediante la necropsia: las muestras se obtienen de seres muertos: En este caso es
recomendable que los tejidos y rganos se obtengan inmediatamente despus de
producida la muerte.
b) Fijacin.
Es un procedimiento cuya finalidad, al aplicarlo es detener la vida de las clulas e
impedir las modificaciones post morten que pueda sufrir la clula (procesos
autolticos), manteniendo la estructura morfolgica de clulas y tejidos sin que
ocurran cambios notables en ellos.
Esto se consigue inmovilizando (por coagulacin o precipitacin) las molculas
protenicas e inhibiendo principalmente las enzimticas hacindolas insolubles. Esta
accin garantiza la integridad de las clulas y tejidos; se efecta por mediante
agentes qumicos denominados fijadores.
c) Inclusin
Los tejidos fijados adquieren cierta consistencia y dureza, pero no la suficiente para
que, de ellos, se obtengan secciones delgadas. Estas secciones, del orden de
algunas milsimas de milmetro (5 a 10 m), se conseguirn cuando los tejidos se
infiltren con sustancias denominadas de inclusin y adquieran tal dureza que
sometidos al filo de una navaja produzcan secciones, cortes o lminas sumamente
delgados y transparentes.
Las sustancias de inclusin tienen la propiedad de incorporarse e infiltrarse al interior
de las clulas y tejidos con la finalidad de servirles de soporte. As los tejidos y la
sustancia de inclusin forman un bloque homogneo en dureza y consistencia, a
pesar que sus componentes tuvieron originalmente distinta dureza.

Existen una serie de sustancias de inclusin que se han empleado o se utilizan

actualmente. Unas son solubles en agua (gelatina, carbowax, glicol metacrilato)
otras, solubles en solventes orgnicos (parafina, celoidina, resinas epxicas).
Inclusin en parafina. Despus de la fijacin y el lavado de las muestras, stas se
encuentran embebidas en agua o en alcohol, por lo que resulta imposible que se
infiltren con parafina, medio de inclusin insoluble en agua y alcohol. Por lo tanto,
para que los tejidos puedan ser incluidos en parafina se requiere deshidratarlos e
infiltrarlos con el solvente de la sustancia de inclusin. Los pasos a seguir para la
inclusin de las muestras en parafina son:
a) Deshidratacin. Significa extraer o remover el agua de los tejidos fijados. La
deshidratacin debe ser completa porque, de lo contrario, el solvente no acta
de forma adecuada y el bloque de inclusin no alcanza la dureza requerida.
Para tal fin se utilizan lquidos deshidratadores en los cuales se sumergen los
tejidos. Los deshidratadores ms usados son el alcohol etlico, el alcohol
isoproplico, el dioxano y el cloroformo. En el caso de la inclusin en parafina,
las muestras se deshidratan en baos sucesivos en soluciones de
concentracin crecientes de alcohol etlico.
b) Diafanizacin. Las muestras deshidratadas se encuentran totalmente
embebidas en alcohol etlico absoluto; pero la parafina tampoco es soluble en
alcohol por lo que es necesario reemplazarlo por sustancias que sean
capaces, simultneamente, de mezclarse con el alcohol y disolver la parafina.
Estas se denominan lquidos diafanizadores o intermediarios. Ejemplos: xilol,
tolueno, benceno, y el cloroformo.
c) c) Inclusin y formacin del bloque de parafina. Las parafinas son
hidrocarburos saturados provenientes de la destilacin del petrleo.
Generalmente son sustancias slidas a temperatura ambiente. Existen
diferentes tipos de parafina que se caracterizan por sus puntos de fusin.
Estos oscilan entre 40o y 60o C. La parafina hierve a 300o C. y emite vapores
que son muy inflamables
d) Microtoma (obtencin de los cortes)
En esta etapa, los tejidos y la parafina integran un solo bloque que, posee la dureza
y la consistencia suficientes para obtener secciones delgadas y transparentes.
Las secciones delgadas o cortes se obtienen utilizando instrumentos mecnicos
diseados para que en forma ms o menos automtica, seccionen el bloque de
parafina en cortes delgados y de grosor uniforme. Los instrumentos se denominan
microtomos.
e) Coloracin o tincin
Los cortes de los tejidos adheridos a los portaobjetos estn listos para ser
coloreados. El procedimiento de coloracin o tincin consiste en que una estructura
celular o tisular adquiere especficamente un color bajo la accin de una sustancia
colorante. Se considera que una estructura se ha coloreado o teido cuando al ser
lavada con el lquido que disuelve al colorante, no se decolora. El proporcionar color
a las estructuras que constituyen un tejido o un rgano se hace con la finalidad de
distinguirlas entre s y facilitar su observacin.
f) Montaje

Concluido el proceso de la tincin de los cortes, stos se deben colocar en

condiciones de proteccin y de poderlos utilizar infinidad de veces sin que se
deterioren. Para alcanzar tales propsitos se recurre al ltimo procedimiento que es
el montaje.
Este procedimiento consiste en colocar encima del corte coloreado y diafanizado una
gota de una sustancia adherente, diluida, generalmente en xilol (resina natural como
el blsamo de Canad o resinas sintticas, cuyos ndices de refraccin son similares
a los del vidrio) y encima de ellos, una laminilla cubreobjetos, cuidando que no
queden burbujas de aire entre la resina. A continuacin se deja que el xilol se
evapore, y la resina adquiera solidez suficiente; para ello las lminas se colocan en
una platina caliente ( 45 o 50o C) durante 24 a 48 horas y estarn listas para ser
observadas. (A)
CRITERIO 2:
1. Obtencin del material: se efecta mediante biopsia, necropsia o autopsia.
Biopsia: consiste en tomar un trozo de tejido de un ser vivo.
Este procedimiento de uso frecuente en medicina requiere el mismo
cuidado de asepsia, antisepsia, etc., que se utiliza en todo acto quirrgico
menor o mayor.
Necropsia: es el procedimiento en el cual se extrae material
de un cadver
Autopsia: consiste en el estudio analtico y sistemtico completo,
macroscpico y microscpico de los rganos, aparatos y sistemas de
un cadver. Se realiza para establecer causas de muerte.
2. Fijacin: una vez obtenido el material que se desea estudiar por cualquiera
de los procedimientos descriptos se procede a su fijacin con lo que se evita
la destruccin o lisis celular. Es un proceso fsico-qumico complejo por el cual
se mantiene a las estructuras orgnicas en el estado ms parecido al que
posean en vida.
3. Deshidratacin:
se coloca
la muestra en
alcoholes
de concentracin
creciente para eliminar el agua que contenga ya que la parafina no es miscible
con agua. Se utiliza etanol 70%, 80%, 96% y 100%.
4. Aclaracin: son solventes que producen transparencia en los tejidos, adems
de solubilizar la parafina. Entre ellos se encuentran. xilol. toluol. acetona,
benceno. El ms usado es el Xilol.
5. Inclusin en parafina: la parafina es una mezcla de hidrocarburos saturados
que tienen diferentes puntos de fusin. Parafina blanda funde a 44 48C y la
parafina dura a 56 58C. LA parafina se pone en estufa de cultivo a unos
grados
por
encima de su punto de fusin.
Se sumerge la muestra, se lleva a estufa unos
minutos
para que la parafina
penetre en los tejidos. Luego se enfra bruscamente colocando el recipiente en
hielo.
6. Preparacin del taco:
se corta un
trozo
de parafina que
contiene la muestra en forma de pirmide truncada, de manera tal
que la misma quede sobre la base menor. Se pega la base mayora un taquito
de madera que servir para sostenerlo en el micrtomo.

7. Corte: se realiza mediante el uso del micrtomo. El micrtomo

de congelacin permite cortar el
tejido
despus de
fijarlo
por fro,
congela con dixido de carbono y lo endurece para que luego pueda ser cortado.
Es un mtodo rpido y por eso se usa para el diagnstico de biopsias obtenidas
en el acto quirrgico para que el cirujano proceda segn este informe.
8. Colocacin sobre portaobjeto: efectuados los cortes se colocan en
agua tibia para que se extiendan y luego se recogen con un pincel y se los
extienden en el portaobjetos y se dejan secar para su posterior coloracin.
9. Desparafinizacin:
se debe extraer
todo
la parafina del
tejido
y
aclararlo nuevamente. Se utiliza Xilol.
10. Hidratacin: se debe hidratar el tejido ya que la mayora de los colorantes
son de base acuosa. Para ello se coloca el portaobjeto en soluciones de etanol
de concentraciones decrecientes. Etanol 100%, 96%, 80%, 70% y
Agua destilada.
11. Coloracin: es un completo complejo fsicoqumico que le confiere color a los
tejidos durante tiempos prolongados. Las molculas de colorantes tienen un
grupo que es el que le confiere el color: cromforo y otro que lo fija auxocromo.
12. Deshidratacin: para preparar los preparados por tiempo prolongado.
Se sumerge el preparado en soluciones de etanol de graduacin crecientes
(70%, 80%, 96%, 100%).
13. Aclaracin: se utiliza xilol o benzol, y sirve para diluir la resina adhesiva
utilizada para pegar el cubre objeto.
14. Colocacin de cubreobjeto: se cubre el corte con un delgado vidrio (el
cubreobjeto) que se adhiere con resina (blsamo de Canad) y permite su
uso prolongado.(B)

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
(1). Ross, M. and Pawlina, W. (2015). Histologa. L'Hospitalet de Llobregat: Wolters
Kluwer.
(2). Gartner L, Hiatt J, Araiza M, Seplveda Saavedra J. Texto atlas de histologa.
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(10). Eynard A, Valentich M, Rovasio R. Histologa y embriologa del ser humano.
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(A) MONTALVO ARENAS C. TCNICA HISTOLGICA [Internet]. 1st ed. 2016

[citado 29 marzo 2016]. Disponible en:
http://histologiaunam.mx/descargas/ensenanza/portal_recursos_linea/apuntes/3_tecn
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(B) Tcnica histolgica [Internet]. 1st ed. Facultad de Ingeniera U.N.S.J; 2016
[citado 29 marzo 2016]. Disponible en: http://dea.unsj.edu.ar/biologia1/th.pdf