EL ESTADO ACTUAL DE LA RESISTENCIA

A HERBICIDAS EN EL MUNDO
Bernal E. Valverde1,2 y Ian M. Heap3
Investigacin y Desarrollo en Agricultura Tropical (IDEA Tropical)
P.O. Box 2191, Alajuela 4050, Costa Rica. E-mail: ideatrop@ice.co.cr
2
Faculty of Life Sciences, The University of Copenhagen
Hojebakkegaard All 13, Taastrup, DK-2630, Denmark. E-mail: bev@life.ku.dk
3
Weedsmart, P.O. Box 1365, Corvallis, OR 97339, U.S.A. E-mail:
IanHeap@weedsmart.com
1

Resumen: Actualmente hay 332 biotipos de malezas resistentes a herbicidas

pertenecientes a 189 especies (113 dicotiledneas y 75 monocotiledneas) en 60 pases.
Nueve de ellos (Alemania, Australia, Brasil, Canad, Espaa, Estados Unidos, Francia,
Israel, y el Reino Unido) contribuyen el 60% de los casos de resistencia registrados. Por
muchos aos las malezas resistentes a triazinas constituyeron el grupo ms numeroso de
malezas que evolucionaron resistencia a herbicidas pero fueron sobrepasadas por aquellas
que evolucionaron resistencia a los herbicidas inhibidores de la enzima acetolactato
sintasa (ALS), con un total de 102 biotipos. Otros modos de accin o grupos de
herbicidas relevantes para los cuales un nmero importante de malezas se han vuelto
resistentes son los inhibidores de la acetil coenzima A carboxilasa (ACCasa), las auxinas
sintticas, bipiridilos, reas y amidas, y el herbicida derivado de glicina, glifosato. Slo
unos pocos herbicidas no han sido afectados por el problema de la resistencia. El modo
de accin ms reciente se introdujo hace 18 aos y las compaas de agroqumicos
carecen de modos de accin novedosos que puedan alcanzar el mercado en un futuro
cercano. Las regulaciones ms estrictas para el registro de plaguicidas limitan la
disponibilidad de herbicidas con modos de accin alternativos para combatir la
resistencia. Se debe realizar esfuerzos mayores para preservar los herbicidas disponibles
y para evitar y contener la diseminacin de malezas resistentes a herbicidas.
Palabras claves: malezas resistentes, modo de accin, resistencia cruzada, resistencia
mltiple, presin de seleccin.
Summary: Current Status of Herbicide Resistance in the World. Currently there are 332
herbicide resistant weed biotypes belonging to 189 species (113 dicotyledonous and 75
monocotyledonous) in 60 countries. Nine of them (Australia, Brazil, Canada, France,
Germany, Israel, Spain, United Kingdom and United States) contribute 60% of the
herbicide resistance cases registered. For several years, triazine-resistant weeds
comprised the largest group of weeds evolving herbicide resistance but they were
surpassed by weeds resistant to herbicides that inhibit the acetolactate synthase (ALS)
enzyme (currently 102 biotypes). Other relevant modes of action or herbicide groups to
which an important number of weeds have become resistant are Acetyl Coenzyme-A
Carboxylase (ACCase) inhibitors, synthetic auxins, bipyridiliums, ureas and amides, and
the glycine herbicide glyphosate. Only a few herbicides have not been affected by

having resistant weeds. The newest herbicide mode of action was introduced 18 years
ago and no new modes of action are in the pipeline of agrochemical companies for near
future introduction. More stringent registration also limits the availability of herbicides
with alternative modes of action to combat resistance. Major efforts should be devoted to
preserve available herbicides and to prevent and contain the spread of herbicide resistant
weeds.
Keywords: cross resistance, mode of action, multiple resistance, resistant weeds,
selection pressure.

Introduccin
Los herbicidas constituyen el 45% del mercado de plaguicidas valorado en USD 35.000
millones (UTTLEY, 2009). Sin duda alguna estos agroqumicos, entre cuyos primeros
representantes selectivos estuvieron el 2,4-D y MCPA introducidos a mediados de los
1940s, revolucionaron el control de malezas y han contribuido aumentar el rendimiento
de las cosechas y a acrecentar el bienestar general. En la actualidad, unos 260
ingredientes activos, pertenecientes a 70 familias qumicas, con unos 13 modos de accin
reconocidos, contribuyen a la produccin agrcola (QUADRANTI, comunicacin
personal). Su uso generalizado y gran dependencia para el control de malezas, sin
embargo, no ha estado exento de problemas, en particular por la seleccin de malezas
resistentes. En este trabajo se documenta la situacin actual de las malezas resistentes a
herbicidas en el mundo.

Resistencia a herbicidas
La definicin de resistencia ha sido objeto de mucha discusin. Se entiende por
resistencia la capacidad evolucionada de una poblacin de una maleza anteriormente
susceptible a un herbicida de soportarlo y completar su ciclo de vida cuando el herbicida
se emplea a su dosis normal en una situacin agrcola (HEAP and LEBARON, 2001).
Esta definicin tiene un carcter general y de uso prctico que sirve de base para la
inclusin de casos de resistencia en el Registro Internacional de Malezas Resistentes a
Herbicidas (International Survey of Herbicide-Resistant Weeds) disponible en
www.weedcience.org. La Weed Science Society of America define resistencia como la
capacidad hereditaria de una planta de sobrevivir y reproducirse despus de ser expuesta
a una dosis de herbicida que normalmente es letal para el tipo silvestre. En una planta, la
resistencia puede ocurrir de forma natural o inducida por tcnicas como la ingeniera
gentica o la seleccin de variantes producidas por cultivo de tejidos o mutagnesis
(WSSA, 1998).
Con mucha frecuencia se emplean los trminos resistencia y tolerancia indistintamente.
Sin embargo, es pertinente hacer la distincin. De nuevo, la Weed Science Society of
America define tolerancia como la capacidad hereditaria de una especie de sobrevivir y
reproducirse despus del tratamiento con un herbicida. Esto implica que no hubo
seleccin o manipulacin gentica para hacer la planta tolerante; la planta es

naturalmente tolerante (WSSA, 1998). La tolerancia tiene una relacin directa con la
selectividad de los herbicidas. En el desarrollo de estos agroqumicos se procura
seleccionar compuestos que no afecten a los cultivos pero que sean letales a las malezas.
Otros trminos relevantes son los de resistencia cruzada y resistencia mltiple. La
resistencia cruzada ocurre cuando un mecanismo de resistencia individual confiere
resistencia a varios herbicidas. La resistencia cruzada de sitio activo est conferida por
una modificacin en el sitio de acople comn (enzima o protena especfica) a varios
herbicidas, como en el caso de los herbicidas pertenecientes a las familias qumicas de las
sulfonilreas, imidazolinonas, triazolopirimidinas y piridinil benzoatos que inhiben la
enzima acetolactato sintasa (ALS). Dependiendo de la mutacin presente en la enzima
ALS, as se observarn distintos patrones de resistencia cruzada a estas familias de
herbicidas o a herbicidas individuales dentro de cada familia (LAPLANTE et al., 2009).
Tambin puede presentarse resistencia cruzada fuera del sitio activo en cuyo caso un
nico mecanismo confiere resistencia a diversos herbicidas con distintos modos de
accin. Estos mecanismos de resistencia usualmente no tienen relacin con el
mecanismo de accin del herbicida y ms bien dependen de la capacidad acrecentada de
la maleza para metabolizar al herbicida, por ejemplo a travs de citocromos P450 o
mediante la participacin de transferasas de la glutationa (GRAY et al., 1996;
SIMINSZKY, 2006). Aunque no se ha documentado todava, es probable que
mecanismos que involucren transportadores tipo ABC (BUSS and CALLAGHAN, 2008;
CABRITO et al., 2009; ITO and GRAY, 2006; YAZAKI et al., 2009) puedan conferir
resistencia cruzada fuera del sitio activo a diversos herbicidas sistmicos, tal como
sucede con la resistencia mltiple a medicamentos (LINTON, 2007; PORCELLI et al.,
2009). La resistencia mltiple se presenta cuando una planta o poblacin acumula dos o
ms mecanismos de resistencia. Cuantos ms mecanismos estn presentes, mayor
diversidad de familias qumicas y modos de accin resultarn ineficaces para controlar la
maleza. Por ejemplo, un biotipo de Lolium rigidum de Australia es resistente a glifosato
debido a que al transporte limitado de este herbicida en la planta y a herbicidas
inhibidores de la enzima acetil coenzima A carboxilasa (ACCasa) y ALS por
metabolismo acelerado de los herbicidas que involucra distintas enzimas del grupo de los
citocromos P450 (YU et al., 2009). En Oregon, EE.UU., se encontr un biotipo de
Bromus tectorum resistente a triazinas (por la mutacin Ser264Gly del sitio de accin,
protena D1) que tambin es resistente a herbicidas ALS (primisulfurn, sulfosulfurn,
propoxicarbazone-sodio e imazamox) por metabolismo acelerado. Este biotipo, adems,
fue moderadamente resistente etofumesate, cletodim, fluazifop, diuron, y terbacil (PARK
and MALLORY-SMITH, 2005; PARK et al., 2004; PARK and MALLORY-SMITH,
2004). Un caso extremo es el de otro biotipo de L. rigidum que evolucion resistencia a
nueve clases de herbicidas despus de ser tratado por 21 aos con cinco herbicidas
pertenecientes a distintas familias qumicas. Las plantas de este biotipo son resistentes a
reas sustituidas (diurn y clorotolurn), inhibidores de ALS (incluidos clorsulfurn,
triasulfurn, sulfometurn, imazaquin e imazapir), triazinas simtricas (atrazina, simazina
y ametrina) y la asimtrica metribuzina, e inhibidores de ACCasa (varios ariloxifenoxipropanoatos incluido el diclofop y ciclohexanedionas como tralkoxidim y
setoxidim). El biotipo tambin es resistente a metolaclor y propaclor (cloroacetamidas) y
ligeramente resistente a paraquat (bipiridilo) y a tridifano (BURNET et al. 1994;

BURNET et al.,1994). Necesariamente varios mecanismos confieren resistencia a

herbicidas en este biotipo. Una forma resistente de ACCasa provee resistencia a
diclofop, fluazifop y haloxifop pero no a tralkoxidim y setoxidim; la planta tambin
metaboliza rpidamente al diclofop y tralkozidim, a los inhibidores del Fotosistema II
clorotolurn y simazina y al inhibidote de la ALS clorsulfurn. Aproximadamente el 5%
de la poblacin tambin posee una ALS resistente (PRESTON et al. 1996).
Evolucin de la resistencia a herbicidas
Varios factores determinan la evolucin de resistencia a herbicidas en las malezas. El
herbicida, en virtud de su eficacia biolgica, ejerce presin de seleccin sobre las
poblaciones de malezas de modo que los individuos que naturalmente poseen un
mecanismo que les permite soportar el efecto del producto sobreviven y se reproducen.
Conforme pasan las generaciones expuestas al herbicida, el nmero de individuos
resistentes se incrementa hasta que llegan a estar en mayor proporcin en la poblacin
hacindose entonces notoria la falta de eficacia del herbicida. La aplicacin de dosis
altas y el uso frecuente del mismo herbicida o de productos que poseen el mismo
mecanismo de accin o de metabolizacin en la planta o ambos tiende a seleccionar
poblaciones resistentes por sitio activo. Los herbicidas persistentes, al permanecer
activos en el suelo por largos perodos ejercen mayor presin de seleccin que los que
rpidamente se inactivan al entrar en contacto con los coloides del suelo. Sin embargo, el
uso persistente de un herbicida sin efecto residual surte el mismo efecto: rpidamente
selecciona individuos resistentes en la poblacin. Por tal razn hay 24 especies de
malezas resistentes a paraquat. Algunos herbicidas son ms propensos que otros a
seleccionar poblaciones resistentes. Se destaca en el grupo de los ms propensos los
inhibidores de la ALS y la ACCasa. Otros, como los inhibidores de la protoporfiringeno
oxidasa (Protox) y el glufosinato de amonio tienen menor riesgo de seleccionar malezas
resistentes. Aunque la aplicacin de dosis bajas disminuye la presin de seleccin de
resistencia por sitio activo, selecciona plantas con niveles bajos de resistencia que pueden
proliferar paulatinamente y acrecentar su grado de resistencia gracias a la hibridacin y
recombinacin y a la acumulacin de varias mutaciones. En estos casos, la resistencia
puede ser conferida por varios genes (resistencia polignica), cada uno con un efecto
parcial, por amplificacin de genes o por mutaciones secuenciales en alelos de un mismo
gene, cada uno adicionando incrementos en la resistencia. Para referirse a este tipo de
resistencia se propuso el trmino resistencia multifactorial (GRESSEL, 2002).
Individuos susceptibles de L. rigidum sometidos a seleccin recurrente con dosis bajas de
glifosato progresivamente aumentaron su nivel de resistencia al herbicida, duplicndolo
tan solo despus de tres generaciones. La polinizacin cruzada fue un factor
determinante en el incremento del nivel de resistencia mediante la acumulacin de
posibles genes que confieren apenas un nivel bajo de resistencia al herbicida (BUSI and
POWLES, 2009). En biotipos de Conyza canadensis y C. bonariensis la resistencia a
glifosato se asocia con un transporte alterado del herbicida y un incremento en los niveles
de transcripcin de la EPSPS (DINELLI et al., 2008; DINELLI et al., 2006). Las dosis
bajas tambin podran propiciar un incremento en las tasas de mutacin, incluidas las que
confieren resistencia (GRESSEL, 2009).

Las caractersticas de la especie de maleza tambin influyen sobre la evolucin de la

resistencia. Uno de los atributos de las malezas es su variabilidad gentica, la cual
comprende la presencia de mutaciones, incluidas las que pueden conferir resistencia a
herbicidas. Las mutaciones responsables de la resistencia a herbicidas no son inducidas
por el herbicida sino que ocurren de forma espontnea (JASIENIUK et al., 1996). La
frecuencia inicial de estas mutaciones determina el nmero de generaciones requeridas
para que la resistencia sea evidente. La frecuencia de las mutaciones que confieren
resistencia a herbicidas depende de varios factores incluidos el nmero de genes
(monognicas versus polignica y nivel de ploida), mecanismo de herencia, tipo de gene
y naturaleza de la modificacin del gene (WARWICK, 1991). As, esta frecuencia no es
la misma para todos los herbicidas o modos de accin ni para todas las especies de
plantas. La gran propensin de los inhibidores de ALS a seleccionar poblaciones
resistentes se relaciona con la frecuencia con que el gene nuclear que codifica la enzima
puede mutar, la cual se estima en alrededor de 10-6, y a la posibilidad de que distintas
mutaciones semi-dominantes, pero funcionalmente dominantes en condiciones de campo,
puedan alterar el sitio de acople del herbicida en la enzima y confieran resistencia
(DELYE et al., 2009; LAPLANTE et al., 2009; TRANEL and WRIGHT, 2002;
GRESSEL, 2002). La frecuencia de individuos resistentes a sulfometurn-metilo y a
imazapir vari entre 2.2 x 10-5 y 1.2 x 10-4 y entre 1.0 x 10-5 y 5.8 x 10-5,
respectivamente, en tres poblaciones de L. rigidum nunca antes expuestas a herbicidas
inhibidores de la ALS (PRESTON and POWLES, 2002). La resistencia de sitio activo a
las triazinas se hereda de manera recesiva en el ADN del cloroplasto. La mutacin que
confiere esta resistencia por ser cloroplstica aparece con frecuencias mucho ms bajas,
posiblemente del orden de 10-20 (GRESSEL, 2002). Esto, junto con el hecho de que su
transmisin es predominantemente materna, ayuda a explicar por qu la resistencia a
inhibidores de ALS apareci mucho ms rpido que la resistencia a triazinas. Para
algunos herbicidas como los inhibidores de las elongasas de los cidos grasos de cadena
muy larga (VLCFAE), entre los que se incluyen los tiocarbamatos, cloroacetanilidas y
cloroacetamidas, no se conoce la frecuencia de posibles mutaciones que confieran
resistencia. Al menos 21 genes codifican VLCFAEs y estos herbicidas inhiben ms de
una elongasa, las cuales tambin difieren en su sensibilidad a dichos productos
(TRENKAMP et al., 2004). Esta situacin explica por qu la tasa de evolucin de
resistencia a estos herbicidas es baja dado que probablemente se requiera mutaciones en
varios genes que codifican elongasas (GRESSEL, 2009). Un caso nico de resistencia de
sitio activo es el de la resistencia a inhibidores de Protox en A. tuberculatus (=A. rudis),
conferido no por una mutacin en el sitio de accin del herbicida sino a la prdida por
completo de un aminocido (Gly210) que provoca un cambio en la conformacin del
sitio de acople del herbicida (PATZOLDT et al., 2006; HAO et al., 2009).
La manera en que se hereda de la resistencia tambin influye en su tasa de evolucin y
establecimiento. Una mutacin dominante es ms proclive a establecerse en la poblacin
de la maleza despus de la aplicacin del herbicida que un alelo recesivo (JASIENIUK et
al., 1996). De hecho, de las mutaciones que confieren resistencia a los herbicidas son
pocas las que tiene carcter recesivo. Uno de estos casos es el de la resistencia a
dinitroanilinas en Eleusine indica. La resistencia, asociada con la modificacin de un

aminocido en la -tubulina (ANTHONY et al., 1998), est controlada por nico gene
nuclear recesivo (ZENG and BAIRD, 1997).
Las plantas que son muy prolficas, de polinizacin cruzada y que ocupan grandes
extensiones a altas densidades son ms propensas a evolucionar resistencia a herbicidas.
Un ejemplo de una especie que rene estas caractersticas es L. rigidum, la cual ha
evolucionado resistencia a herbicidas en cinco continentes y presenta los problemas ms
serios de manejo por la evolucin de resistencias mltiples.
La presencia de un banco de semillas en el suelo es una caracterstica de las malezas que
afecta la tasa de evolucin de la resistencia y la dinmica de las poblaciones resistentes si
se deja de emplear el herbicida selector. Las semillas almacenadas en el suelo cumplen
una funcin amortiguadora por cuanto antes de la aplicacin recurrente del herbicida
corresponden predominantemente a plantas susceptibles. Plntulas susceptibles que
emerjan de este banco de semillas despus de aplicado el herbicida y perdido su efecto
(ausencia de persistencia) diluyen la frecuencia de individuos resistentes en la
poblacin. El manejo de los herbicidas en funcin de la dinmica del banco de semillas
es fundamental para la prevencin y mitigacin de la resistencia. En un estudio de cuatro
aos realizado en Canad con la maleza del trigo Thlaspi arvense, se comprob el
impacto de la mezcla y rotacin de herbicidas en la prevencin de la resistencia al
inhibidor de ALS etametsulfurn (BECKIE and REBOUD, 2009). Los tratamientos
consistieron en la aplicacin una vez por ao de etametsulfurn o una mezcla formulada
de bromoxynil ms MCPA en rotacin, considerando todas las posibles combinaciones
en el tiempo (desde la aplicacin del inhibidor de ALS en uno de los cuatro aos hasta en
tres de ellos complementado segn correspondiera en los otros aos con el la mezcla de
herbicidas alternativos). Adems se incluyeron los tratamientos correspondientes a
etametsulfurn y bromoxynil ms MCPA aplicados anualmente por cuatro aos (ausencia
de rotacin), ambos herbicidas en mezcla de tanque en cada uno de los cuatro aos
(tratamiento de mezcla) y dos testigos para comparaciones (absoluto y deshierbado
manualmente). El banco de semillas de T. arvense inicialmente tena un 5% de
individuos resistentes a etametsulfurn. El porcentaje de control de la maleza decreci de
un 92% con una aplicacin de la sulfonilrea (independientemente del ao en que se
aplic) a un 31% luego de la aplicacin consecutiva por cuatro aos. Cuando los
herbicidas se aplicaron en mezcla o slo se us el tratamiento alternativo se obtuvo un
control promedio del 96% al 97% por ao. La produccin total de semilla aument
conforme se increment el nmero de aplicaciones anuales de etametsulfurn y la
proporcin de plntulas resistentes proveniente de semilla producida por la maleza
expuesta a la sulfonilrea se increment de un 2% cuando no se utiliz el etametsulfurn
a 60% despus de una sola aplicacin y a 92% si se aplic dos o ms veces. Cuando se
aplic el etametsulfurn en mezcla con el tratamiento alternativo la proporcin de semilla
resistente a la sulfonilrea fue de un 3%; en ausencia de herbicidas, se mantuvo en el 5%
original. De manera similar pero reflejando un grado importante de amortiguamiento por
la semilla susceptible, la proporcin de individuos resistentes en el banco de semillas del
suelo aument con el incremento en el uso del etametsulfurn de un 29% a un 85%
despus de una o cuatro aplicaciones, respectivamente. El nivel de resistencia en el
banco de semillas permaneci invariable cuando se aplic la mezcla de los herbicidas o

solo el tratamiento alternativo por la duracin del experimento. Bajo las condiciones de
este estudio se demostr cun rpidamente puede evolucionar la resistencia a inhibidores
de ALS y se dedujo que las mezclas son ms tiles para mitigarla que las rotaciones.
La adaptabilidad al medio o fitness es la capacidad que tiene un genotipo de establecerse,
sobrevivir y reproducirse exitosamente en competencia con el biotipo normal o silvestre
en un ambiente particular (MENCHARI et al., 2008; GRESSEL, 2002). Esta
adaptabilidad est determinada por la distribucin de recursos a la supervivencia y
reproduccin a travs del ciclo de vida de la planta. En algunas malezas, la mutacin que
confiere resistencia acarrea efectos pleiotrpicos que pueden afectar su desempeo en el
campo en ausencia del herbicida. Los primeros estudios comparativos sobre fitness se
realizaron con malezas resistentes y susceptibles a las triazinas. Puesto que la mutacin
que confiere resistencia a estos herbicidas reduce la tasa de transferencia de electrones en
el Fotosistema II, los biotipos resistentes a triazinas poseen tasas fotosintticas reducidas
que los ponen en desventaja competitiva. Aunque la idea de que las mutaciones que
confieren resistencia causan prdida de adaptabilidad en las malezas se generaliz,
diversos estudios han demostrado que en muchos otros casos los efectos pleiotrpicos
asociados con la resistencia tienen poco significado prctico en el campo y que deben
estudiarse por separado en cada caso (HOLT and THILL, 1994). Tambin es importante
recalcar que en muchos estudios se mide la productividad de plantas que crecen
individualmente (en ausencia de competencia) y se infiere y generaliza sin el sustento
apropiado acerca de su adaptabilidad. Genes o mutaciones diferentes pueden asociarse
con costos de adaptabilidad diferentes y el nivel de dominancia de la resistencia como
atributo no est necesariamente relacionado con el nivel de dominancia de la posible
penalizacin en fitness (ROUX et al., 2004). En un trabajo reciente, (MENCHARI et al.,
2008) estudiaron los efectos pleiotrpicos asociados con tres alelos mutantes que causan
las sustituciones Ile1781Leu, Ile2041Asn y Asp2078Gly en la ACCasa de A.
myosuroides. Para lograr un fondo gentico homogneo se emplearon poblaciones
segregantes de la maleza. La biomasa, altura y produccin de semilla de las plantas con
ACCasa Leu-1781 y Asn-2041 fue similar a la de las plantas silvestres, mientras que las
plantas con ACCasa homozigota para Gly-2078 sufrieron notorias reducciones (42%, 6%
y 36%, respectivamente) en dichas caractersticas.
En muchos casos de resistencia a inhibidores de la ALS, la penalizacin en adaptabilidad
al medio resultante es mnima (TRANEL and WRIGHT, 2002). Por tal razn no es
sorprendente que los alelos de resistencia persistan en las poblaciones que dejan de
exponerse al herbicida. Tal es el caso del Ixophorus unisetus que evolucion resistencia
a imazapir a finales de los 1980s en Costa Rica (VALVERDE et al., 1993). Estudios en
proceso indican que las poblaciones resistentes conservan dichos alelos despus de ms
de 15 aos de que se dej de emplear el herbicida (VALVERDE, datos no publicados).
En contraste, una penalizacin severa en adaptabilidad al medio puede anular la ventaja
conferida por la mutacin responsable por la resistencia en la persistencia del alelo
resistente (PARIS et al., 2008). El impacto de la resistencia a herbicidas sobre la
adaptabilidad de las malezas es tratado en detalle por (VILA-AIUB et al., 2009).
Todos los factores que determinan la resistencia discutidos en esta seccin interactan de
manera compleja en el campo dictando la direccin que sigue el proceso evolutivo. Un

modelo reciente predice que el tiempo requerido para que una poblacin evolucione
resistencia depende del tipo de reproduccin y de la dominancia del alelo de resistencia
en presencia del herbicida, as como del costo en adaptabilidad al medio y la dominancia
de este costo (ROUX et al., 2008).
Resistencia sin presin de seleccin impuesta por el herbicida
En la evaluacin del riesgo como requisito previo a la introduccin de cultivos resistentes
a herbicidas o con otros atributos novedosos, uno de los temas que ha acaparado la
discusin es la posible diseminacin de estos genes novedosos, particularmente los
transgenes (los cultivos resistentes a herbicidas producidos por induccin de mutaciones
estn exentos de este anlisis de riesgo en la mayora de los pases) a especies
emparentadas compatibles (malezas y silvestres e incluso otras variedades del cultivo).
Diversas publicaciones tratan el tema del flujo de genes (WARWICK et al., 2009;
CHANDLER and DUNWELL, 2008; CHAPMAN and BURKE, 2006; ELLSTRAND,
2003; POPPY and WILKINSON, 2005), el cual est fuera de alcance de este trabajo. De
hecho, el factor principal que ha limitado la liberacin de arroz transgnico resistente a
herbicidas (ntese que el arroz resistente a imidazolinonas comercializado bajo el nombre
de arroz Clearfield se origina de induccin de mutaciones) es el riesgo de que tales
genes se diseminen al arroz maleza que es conespecfico con el arroz cultivado
(GRESSEL and VALVERDE, 2009a). Muchas de estas malezas conespecficas son
formas no completamente domesticadas o cultivos que se de-domesticaron a sus formas
ferales (GRESSEL, 2005). Los casos de resistencia en malezas emparentadas con
cultivos que se originan del flujo de genes desde cultivos resistentes o estas malezas
como puente para transferir el gene a otras no directamente expuestas al cultivo resistente
no se incluyen en el Recuento. Sin embargo, es pertinente mencionar que hay casos de
relevancia comercial, en particular, el flujo de genes del arroz Cleafield al arroz maleza
(OLOFSDOTTER et al., 2000; MADSEN et al., 2002; VALVERDE and GRESSEL,
2005; GRESSEL and VALVERDE, 2009a; GRESSEL and VALVERDE, 2009b;
SHIVRAIN et al., 2007; BURGOS et al., 2008).
El flujo de genes tambin puede contribuir a la aparicin y diseminacin de la resistencia
en malezas en ausencia de la presin de seleccin impuesta por el herbicida y no puede
descartarse a priori aun en malezas que crecen en cultivos tratados con herbicidas
(ASHIGH et al., 2008). Por ejemplo, se determin que los genes de resistencia de L.
rigidum se pueden mover hasta 3 km a plantas receptoras de la misma especie (BUSI et
al., 2008). Esto podra contribuir a la aparicin de plantas con resistencia mltiple o con
resistencia a herbicidas nunca antes usados en ese lote o predio en particular. Otro caso
muy interesante es el de A. tuberculatus. Esta especie que hasta hace pocos aos pasaba
desapercibida se ha convertido en un serio problema en reas productoras de soya en
EE.UU. Hay poblaciones de A. tuberculatus con resistencia mltiple por acmulo de
varios mecanismos de sitio activo, incluida la ya mencionada resistencia a herbicidas
Protox (PATZOLDT et al., 2005). Se ha propuesto que A. tuberculatus puede obtener
genes de resistencia de otras especies de Amaranthus con las cuales establece un
intercambio de genes unidireccional. As, A. hybridus puede fcilmente transferirle

alelos a A. tuberculatus pero el intercambio recproco es prcticamente nulo aun cuando

las dos especies coexistan en el mismo campo (TRUCCO et al., 2009).
L. multiflorum y la especie emparentada, Festuca rubra pueden hibridar en forma natural.
F. rubra es naturalmente tolerante a graminicidas pues su ACCasa es insensible a estos
herbicidas (PRICE et al., 2003; HERBERT et al., 1996) en contraste con F. arundinacea
que es susceptible a setoxidim y haloxifop (STOLTENBERG et al., 1989). La ACCasa
de F. rubra tiene un codn Leu1781 que se conoce la torna insensible a graminicidas en
algunas malezas que han evolucionado resistencia de sitio activo en lugar de Ile1781
presente en la ACCasa susceptible (DELYE and MICHEL, 2005). En un estudio
realizado en Argentina, se sembr L. multiflorum, proveniente de un pastizal nunca
tratado con herbicidas, en monocultivo y en mezcla con F. rubra y sometidas a dosis
crecientes de diclofop en cada ciclo cuando tenan 2-3 hojas Dos aos despus, se
encontr una alta incidencia de Lolium resistente a diclofop proveniente de parcelas con
las dos especies en mezcla y asperjadas con dosis bajas del herbicida, las cuales fueron
suficientes para seleccionar las plantas resistentes que posiblemente se originaron por
hibridacin (MARTINEZ-GHERSA et al., 1997). El experimento se continu hasta
completar cinco aos y los materiales expuestos a las distintas condiciones de seleccin
se sembraron en forma individual en pequeas parcelas durante tres aos ms. Al
finalizar este perodo, se recolect semilla y las plntulas obtenidas a partir de ellas se
trataron con diclofop para determinar su resistencia al herbicida. Las selecciones
presentaron variacin en sus niveles de resistencia; sin embargo, stos no se relacionaron
directamente con el nivel de exposicin histrica al herbicida ni a la presencia o ausencia
de F. rubra en las parcelas de L. rigidum por lo que los resultados no fueron concluyentes
(GUNDEL et al., 2008).
Registro histrico de la resistencia a herbicidas
Heap (HEAP, 1997; HEAP, 1994) present relatos detallados de cmo se inici el
registro histrico de los casos de resistencia a herbicidas en el mundo. Despus de que se
document el primer caso de resistencia a herbicidas (RYAN, 1970) iniciaron
investigaciones para determinar por qu Senecio vulgaris era capaz de sobrevivir despus
de recibir dosis elevadas de simazina. Estudios pioneros de Radosevich determinaron
que una alteracin en el sitio de accin era el mecanismo de la resistencia a triazinas en S.
vulgaris y otras especies resistentes que aparecieron poco despus (RADOSEVICH and
DEVILLIERS, 1976; RADOSEVICH, 1977).
En la dcada de los 1970s se
documentaron muchos otros casos de malezas resistentes a triazinas las cuales en 1980
sumaban 26 especies de hoja ancha y 6 gramneas. A mediados de los 1970s el Dr.
Homer LeBaron de Ciba-Geigy, con quien Radosevich haba tenido contactos desde el
inicio de sus investigaciones, se involucr de lleno en el tema de la resistencia
organizando actividades cientficas, recopilando informacin y promoviendo la
investigacin. En 1982 public junto con el Dr. Jonathan Gressel el libro Herbicide
resistance in plants (LEBARON and GRESSEL, 1982) que puso en perspectiva el
conocimiento acumulado a la fecha y contribuy al avance de la investigacin en esta
importante rea de la malherbologa. Durante dos dcadas, el Dr. LeBaron recopil
informacin acerca de casos reconocidos de resistencia. En 1990 inform que el nmero

de especies resistentes a triazinas haba aumentado a 40 dicotiledneas y 15 gramneas.

Adems, sus registros ya daban cuenta de casos de resistencia a otros herbicidas incluidos
11 especies resistentes a paraquat, cinco a clortolurn, cuatro a diclofop-metilo, y un
incipiente problema de resistencia a inhibidores de ALS con seis casos reconocidos, para
un total de 99 especies resistentes (HOLT and LEBARON, 1990).
Registro Internacional de Malezas Resistentes a Herbicidas. En 1995 y 1996 se
enviaron 430 cuestionarios a investigadores y extensionistas de 53 pases para determinar
cules especies haban evolucionado resistencia a herbicidas. La informacin requerida
inclua especie y herbicida involucrado, fecha y lugares en que se identific, mtodo de
confirmacin de resistencia, cultivo o condicin en la que se present la resistencia,
nmero de localidades, rea infestada e importancia econmica (HEAP, 1997). Con base
en las respuestas obtenidas ms la informacin recopilada previamente por LeBaron, el
co-autor de este trabajo elabor una base de datos que dio inicio al Registro Internacional
de Malezas Resistentes a Herbicidas (International Survey of Herbicide-Resistant
Weeds), disponible en forma electrnica en www.weedscience.org. La informacin
presentada aqu en relacin con la situacin actual de la resistencia a herbicidas en el
mundo, se origina de esta fuente.
Criterios para inclusin en el Registro. Para que un caso de resistencia sea incluido en
el Registro, debe de cumplir con varios criterios descritos en detalle y disponibles en su
portal (HEAP, 2005):

Cumplir con la definicin de resistencia a herbicidas de la WSSA descrita

previamente.
Confirmacin de la resistencia empleando protocolos cientficos reconocidos.
Para la confirmacin inicial de resistencia se prefiere los bioanlisis comparativos
(posible resistente versus susceptible conocido) empleando plantas enteras. Las
verificaciones posteriores rutinarias pueden hacerse con mtodos ms rpidos y
apropiados para el manejo de un nmero elevado de muestras. Cada caso se
valora cuidadosamente, especialmente aquellos en los que se informan niveles
bajos de resistencia siendo importante proveer informacin que verifique que los
biotipos que exhiben este tipo de respuesta ofrecen problemas de control en el
campo.
La resistencia debe ser hereditaria.
Demostracin de impacto prctico en el campo. Si no hay problemas de control
con las dosis recomendadas en el campo, el caso no se incluye en el Registro.
La planta debe de ser una maleza reconocida e identificada a nivel de especie. En
el Registro no se incluyen plantas resistentes seleccionadas deliberadamente como
las plantas espontneas de los cultivos resistentes a herbicidas. Por el momento,
tampoco se incluyen malezas emparentadas con estos cultivos que se han vuelto
resistentes por flujo de genes.

10

Situacin actual de la resistencia a herbicidas en el mundo

A septiembre de 2009, el Registro lo componen 332 biotipos resistentes a herbicidas en
60 pases (Cuadro 1). Es importante aclarar que un biotipo resistente se registra la
primera vez que una especie de maleza evoluciona resistencia a uno o ms herbicidas
pertenecientes a un grupo especfico. Por ejemplo, C. bonariensis resistente a bipiridilos
en tres pases se registra como un nico biotipo resistente; la misma especie resistente a
glifosato (grupo denominado como glicinas) en seis pases se registra como otro biotipo
resistente. Hay 189 especies (113 dicotiledneas y 76 monocotiledneas) que han
evolucionado resistencia a herbicidas en unos 300.000 predios.
Cuadro 1. Biotipos de malezas resistentes a herbicidas de acuerdo con el grupo a que
pertenece el producto qumico.
Grupo de herbicida
Inhibidores de ALS
Inhibidores de
Fotosistema II
Inhibidores ACCasa
Auxinas sintticas
Bipiridilos
reas y amidas
Glicinas
Dinitroanilinas y otras
Tiocarbamatos y otros
Triazoles, reas,
isoxazolidionas
Inhibidores de Protox
Cloroacetamidas y otros
Inhibidores de biosntesis
de carotenoides
cidos
arilaminopropinicos
Nitrilos y otros
Inhibidores mitticos
Inhibidores de sntesis de
celulosa
Desconocidos
Organoarsenicales
Total

Cdigo
de
HRAC1

Ejemplo

Biotipos resistentes
Dicot.

Monocot.

Total

No. de
pases

Clorsulfurn

65

37

102

34

C1

Atrazina

47

21

68

26

A
O
D
C2
G
K1
N

Diclofop-metilo
2,4-D
Paraquat
Clorotolurn
Glifosato
Trifluralina
Trialato

0
21
16
8
9
2
0

36
7
8
13
7
8
8

36
28
24
21
16
10
8

30
15
13
27
14
6
6

F3

Amitrol

E
K3

Oxifluorfn
Butaclor

3
0

0
3

3
3

2
5

F1

Flurtamone

Flamprop-metilo

C3
K2

Bromoxinil
Profam

1
0

0
1

1
1

1
1

Diclobenilo

Z
Z

(cloro) - flurenol
MSMA

0
1

1
0

1
1

2
1

175

157

332

Clasificacin de los herbicidas segn el Herbicide Resistance Action Committee. Disponible de HRAC:
www.hracglobal.com/Publications/ClassificationofHerbicideModeofAction/tabid/222/Default.aspx.
2
Un mismo pas puede ser contado en ms de un grupo de herbicidas por lo que esta columna supera los
60 pases indicados en el texto en los que ha evolucionado la resistencia a herbicidas.

11

Nueve pases (Alemania, Australia, Brasil, Canad, Espaa, Estados Unidos, Francia,
Israel, y el Reino Unido) contribuyen el 60% de los casos de resistencia registrados. Slo
los Estados Unidos, Australia y Canad, con la mayor incidencia de casos, contribuyen el
35% de los registros (Cuadro 2). Esta misma proporcin exista en 1995, excepto que
Brasil, el pas latinoamericano que tiene el mayor nmero de casos de resistencia, no
figuraba entre los pases con ms casos (HEAP, 1997).
El incremento cronolgico en el nmero de casos de resistencia a herbicidas en el mundo
se ilustra en la Figura 1. Despus del descubrimiento de resistencia a triazinas en S.
vulgaris y hasta finales de la dcada de los 1970s se reportaba en promedio un caso por
ao. Desde entonces el incremento promedio ha sido de 10 casos anuales pero su
composicin ha variado puesto que a partir de 1998 la supremaca de la resistencia a las
triazinas fue cedida a los inhibidores de ALS y otros grupos tambin se hicieron ms
notorios (Figura 2).
Cuadro 2. Distribucin de casos de resistencia a herbicidas por pas.
Pas

No

Pas

No

Pas

No

Pas

No

Alemania
Arabia Saudita
Argentina
Australia
Austria
Blgica
Bolivia
Brasil
Bulgaria
Canad
Chile
China
Colombia
Corea del Sur
Costa Rica

21
1
3
53
2
18
3
21
4
46
7
9
6
10
5

Dinamarca
Ecuador
Egipto
El Salvador
Eslovenia
Espaa
Estados Unidos
Etiopia
Fiji
Filipinas
Francia
Grecia
Guatemala
Holanda
Honduras

3
1
1
1
1
31
126
1
1
3
32
6
1
7
1

Hungra
India
Indonesia
Irn
Irlanda
Israel
Italia
Japn
Kenya
Malasia
Mxico
Nicaragua
Noruega
Nueva Zelanda
Panam

1
3
1
7
1
23
19
16
1
16
3
1
5
10
1

Paraguay
Polonia
Portugal
Reino Unido
Repblica Checa
Sri Lanka
Sudfrica
Suecia
Suiza
Tailandia
Taiwn
Tnez
Turqua
Venezuela
Yugoslavia

2
10
2
24
16
2
14
2
14
5
1
1
3
1
6

La predominancia inicial de casos de resistencia a triazinas es producto de su gran

eficacia y amplio uso, principalmente de atrazina en maz y simazina en cultivos de
plantacin. A inicios de la dcada de los 1980s las malezas resistentes a las triazinas
contribuan el 67% de los casos documentados de resistencia; entre 1985 y el 2000 este
grupo represent slo el 11% de los nuevos casos ingresados al Registro, mientras los
inhibidores de la ALS aportaban el 38% de los casos nuevos. Otros grupos que
adquirieron mayor relevancia por su aporte de casos nuevos en este perodo fueron los
inhibidores de ACCasa (13%), fenilreas/amidas (10%), bipiridilos (8%), y auxnicos
(8%).
12

Nmero de biotipos resistentess

Grupos de herbicidas ms importantes. En la actualidad, los grupos ms importantes de

herbicidas que se ven afectados por el problema de la resistencia, por nmero de casos,
son los inhibidores de ALS, inhibidores de Fotosistema II, inhibidores ACCasa, auxinas
sintticas, bipiridilos, reas y amidas, y el glifosato.

350
300
250
200
150
100
50
0
1960

1970

1980

1990

2000

2010

Ao

Figura 1. Incremento cronolgico en el nmero de casos de resistencia a

herbicidas en el mundo.
Inhibidores de ALS. Las sulfonilreas, primera familia de herbicidas inhibidores de la
ALS, fueron descubiertas por DuPont en 1975 y se empezaron a comercializar en trigo y
cebada en 1982. Su gran eficacia a dosis extremadamente bajas, gran selectividad a
diversos cultivos y baja toxicidad para mamferos las convirti en uno de los grupos ms
importantes de herbicidas en el mercado. Muchas compaas desarrollaron herbicidas
pertenecientes a esta familia; ms de 20 de ellas lograron patentar herbicidas de este
grupo qumico. Su importancia comercial se mantiene. Desde 1995 se han
comercializado ms de una docena de nuevas sulfonilreas y otras estn en proceso de
desarrollo (ORT, 2007). En la misma dcada, American Cyanamid trabajaba en el
desarrollo de las imidazolinonas, un grupo de herbicidas tambin muy potentes y de
amplio espectro, partiendo de una molcula sintetizada en los aos 1950s por un qumico
de su Divisin Mdica que trabajaba en productos anticonvulsivos. A travs de la
exploracin y optimizacin se desarrollaron estos herbicidas que, teniendo una estructura
qumica diferente a las sulfonilreas, tambin inhiben la ALS (SHANER et al., 2007).
Ingresan en el mercado en 1986. Ms recientemente (a mediados de los 1990s) se unen
las triazolopirimidinas y pirimidinil(oxi/tio)benzoatos a los herbicidas que tienen este
mecanismo de accin.
La alta presin de seleccin impuesta por estos herbicidas tan eficaces y la propensin de
su sitio de accin a mutar, hicieron que rpidamente aparecieran malezas resistentes. El

13

crecimiento exponencial del nmero de casos de resistencia es muy notorio (Figura 2),
superando el centenar y abarcando 34 pases, entre los que se destacan los EE.UU. con
126 casos, Australia con 53 y Canad con 46. La resistencia a inhibidores de ALS ha
ocurrido en cereales, rotaciones de maz/soya, arroz, bordes de carretera y plantaciones
forestales. En Amrica Latina es uno de los principales grupos a los que las malezas han
evolucionado resistencia, con 16 especies confirmadas.

Nmero de especies resistentes

120

100

80

60

Inhibidores de ACCasa
Inhibidores de ALS
Triazinas
Ureas, Amidas
Bipiridilos
Glicinas
Dinitroanilinas
Auxinas sintticas

102

68

40

36
28
24
21
16
10

20

0
1960

1970

1980

1990

2000

2010

Ao

Figura 2. Incremento cronolgico en el nmero de malezas resistentes a

herbicidas pertenecientes a distintos grupos.
Inhibidores del Fotosistema II. La principal familia de herbicidas pertenecientes al grupo
C1 de herbicidas inhibidores del Fotosistema II (inhibidores del transporte fotosinttico
de electrones) es la de las triazinas. La mayora de las malezas resistentes a este grupo de
herbicidas (48 especies) son malezas dicotiledneas que evolucionaron resistencia
principalmente en el cultivo de maz en EE.UU. y Europa y en huertos en Europa. Entre
las malezas ms importantes se encuentran nueve especies de Amaranthus, seis de
Polygonun y cinco de Chenopodium. Senecio vulgaris, la primera maleza resistente a
triazinas, se registra en 10 pases, incluidos cuatro estados de los EE.UU. La especie
resistente que se presenta en ms pases (18) es C. album seguida de A. retroflexus
presente en doce pases.
Inhibidores ACCasa. Los herbicidas que poseen este mecanismo de accin pertenecen a
las familias qumicas denominadas ariloxifenoxipropanoatos (fops), ciclohexanodionas
(dims) y fenilpirazolinas (dens, representada por el pinoxaden). Los dos primeros
14

grupos ingresaron al mercado a finales de los 1970s. Estos herbicidas se emplean en el

control de malezas gramneas en cultivos de dicotiledneas y cereales. En algunos casos,
cuando se destinan a cereales, se les agrega antdotos o safeners en la formulacin para
mejorar su selectividad al cultivo. Tal es el caso del pinoxaden, introducido al mercado
en 2006, que incluye al cloquintocet-mexilo para mejorar su selectividad en trigo y
cebada (HOFER et al., 2006; MUEHLEBACH et al., 2009).
Treinta y seis gramneas han evolucionado resistencia a inhibidores de la ACCasa
(Cuadro 1); los primeros casos se asociaron con el uso del diclofop-metilo en trigo. La
resistencia a estos herbicidas tiene gran importancia econmica en virtud de su
distribucin a travs de grandes reas y por las limitaciones de controlar econmicamente
las gramneas resistentes con herbicidas alternativos. Lolium spp. han evolucionado
resistencia a diclofop-metilo u otros inhibidores de ACCasa en 15 pases: Alemania,
Arabia Saudita, Australia, Canad, Chile, EE.UU., Espaa, Francia, Grecia, Irn, Israel,
Italia, Reino Unido, Sudfrica, y Tnez. En varios de estos pases, notablemente en
Australia, hay biotipos de Lolium spp. con resistencia mltiple. En Australia el primer
caso de resistencia que se confirm fue el de L. rigidum resistente a diclofop (HEAP and
KNIGHT, 1982). Actualmente, la resistencia de L. rigidum a estos herbicidas es
generalizada. Una evaluacin reciente basada en ms de 3000 muestras representativas
de la zona triguera del sur de Australia que cubre 40 millones de ha determin que el
77% era resistente a fops y el 22% a dims. Hubo poca correlacin de resistencia cruzada
entre ambos grupos a pesar de que comparten el mismo mecanismo de accin. Sin
embargo, el 95% de los biotipos resistentes a dims tambin lo fueron a fops. En el grupo
de los dims el 78% de los biotipos probados con tralkoxidim (160 anlisis) fueron
resistentes, mientras que slo el 50% (de 117 pruebas) y 17% (de 2670 pruebas) de los
biotipos probados con setoxidim y cletodim resultaron resistentes (BROSTER and
PRATLEY, 2006). De manera similar, Avena spp. (principalmente A. fatua) ha
evolucionado resistencia a inhibidores de ACCasa en trece pases (Australia, Blgica,
Canad, Chile, EE.UU., Francia, Irn, Israel, Italia, Mxico, Reino Unido, Sudfrica y
Turqua), diez de ellos en comn con Lolium spp. Varios biotipos, principalmente los
canadienses, exhiben resistencia mltiple. Un censo de malezas resistentes en 786
campos en las Praderas Canadienses, cuya superficie cultivada es de 39 millones de ha,
realizado entre 2001 y 2003 determin que 565 (72%) tenan A. fatua resistente a
herbicidas. De ellos, el 15% (83 campos) estaban contaminados con A. fatua resistente a
herbicidas inhibidores de ACCasa, predominantemente resistentes a herbicidas de las dos
familias principales (fops y dims). En 16 campos se encontr poblaciones de esta maleza
resistentes tanto a inhibidores de ACCasa como de ALS (BECKIE et al., 2008).
En Latinoamrica, se ha confirmado 16 malezas gramneas resistentes a inhibidores de
ACCasa, la mayora en cultivos de cereales (Valverde, 2007). En Chile, se estima que un
25% de las 400.000 ha sembradas de trigo tienen malezas resistentes a inhibidores de
ACCasa, incluyendo L. rigidum y L. multiflorum (75.000 ha), A. fatua (40.000 ha) y
Cynosurus echinatus (25.000 ha), seleccionadas principalmente por el empleo recurrente
de diclofop. Es interesante que muchos de estos biotipos resistentes pueden ser
controlados con herbicidas del grupo de los dims como cletodim y tepraloxidim (N.
Espinoza, comunicacin personal). Otros casos importantes en la regin son los de

15

Phalaris paradoxa, P. minor y A. fatua en cereales en Mxico. Completa la lista

Brachiaria plantaginea, Digitaria ciliaris y Eleusine indica en Brasil, Eriochloa
punctata, tres sorgos maleza o maicillos (Sorghum verticilliflorum, S. saccharatum y S.
sudanense) y Rottboellia cochinchinensis en Bolivia, y malezas asociadas al arroz:
Echinochloa colona en Amrica Central, Colombia y Venezuela, e Ischaemum rugosum
en Colombia (VALVERDE, 2007).
Auxinas sintticas. Los herbicidas auxnicos, introducidos a finales de la dcada de los
1940s, fueron los primeros herbicidas orgnicos selectivos y como tales revolucionaron el
control de malezas, principalmente el de especies de hoja ancha en cereales. Pocas
malezas han evolucionado resistencia a estos herbicidas si se toma en consideracin que
continan siendo usados ampliamente despus de ms de 60 aos.
En el Registro se incluyen dos casos de resistencia a 2,4-D reportados antes de que se
diera a conocer la resistencia a las triazinas. En Canad (sur de Ontario), se inform
acerca de poblaciones de Daucus carota resistentes a 2,4-D en bordes de carretera en
1957, las cuales al ser tratadas experimentalmente con 2,4-D a dosis elevadas fueron
poco afectadas. El 2,4,5-T solo o en mezcla con 2,4-D provoc la muerte de las plantas.
Estudios de invernadero corroboraron los resultados: todas las plantas del biotipo
resistente tratadas con 2,4-D sobrevivieron mientras que la mortalidad de plantas testigo
alcanz el 85% (SWITZER, 1957). En un estudio subsiguiente, tanto las plantas
susceptibles como las resistentes desarrollaron sntomas de toxicidad severos despus de
ser tratadas con herbicidas auxnicos, pero el biotipo resistente logr recuperarse
posteriormente (WHITEHEAD and SWITZER, 1963). En 1957 tambin se inform
acerca de poblaciones de Commelina diffusa en plantaciones de caa de azcar en Hawaii
resistentes a herbicidas auxnicos. Una de estas poblaciones tena un nivel de resistencia
de cinco veces en comparacin con la poblacin susceptible (HILTON, 1957).
Adems de estos dos casos de importancia histrica, el Recuento incluye otras 26
especies con biotipos resistentes a herbicidas auxnicos. La mayora de ellas tiene un
solo biotipo reportado en un nico pas. Ningn caso es considerado como crtico desde
el punto de vista econmico puesto que su distribucin es limitada y porque hay
herbicidas alternativos que permiten su control.
Un nuevo tipo de herbicida con efecto auxnico y representante de la famila de los cidos
quinolinecarboxlicos se introdujo en 1989 con el nombre de quinclorac. Este producto
tiene la particularidad de controlar gramneas selectivamente en el cultivo del arroz,
aunque tambin es eficaz en un nmero limitado de especies de hoja ancha
(GROSSMANN, 1998). Tres especies de Echinochloa (E. colona, E. crus-galli y E.
crus-pavonis) asociadas al cultivo del arroz, Digitaria ischaemum en cspedes
(ABDALLAH et al., 2006) y la rubicea Galium spurium han evolucionado resistencia a
este herbicida.
Bipiridilos. A pesar de que los bipiridilos (paraquat y diquat) no son persistentes, el uso
persistente de ellos ha provocado la seleccin de biotipos de malezas resistentes. En
1980 se report resistencia a paraquat en tres especies de Conyza (C. canadensis, C.

16

philadelphicus y C. sumatrensis) y en la tambin astercea, Youngia japonica en huertos

en Japn. A la fecha, un total de 24 malezas son resistentes a estos herbicidas, en su
mayora seleccionadas por el paraquat. Biotipos de dos especies resistentes Arctotheca
calendula y Monochoria korsakowii fueron seleccionados por diquat, mientras que siete
especies fueron seleccionadas por ambos. En Latinoamrica no se informa ninguna
especie resistente a estos herbicidas.
reas y amidas. Los herbicidas pertenecientes a estas dos familias, al igual que las
triazinas, tambin son inhibidores del transporte de electrones en el Fotosistema II.
Dieciocho especies han evolucionado resistencia a las fenilreas y tres especies de
Echinochloa al propanil (amida). La mayora de los casos de resistencia a fenilreas se
han presentado en Europa, seleccionados principalmente por el clorotolurn e
isoproturn. Los documentados en Amrica mayoritariamente han tenido al linurn y
diurn como selectores. Entre los casos ms importantes sobresalen los de Alopecurus
myosuroides en varios pases europeos y el de Phalaris minor en India.
A. myosuroides evolucion resistencia a clorotolurn en Espaa, Holanda y el Reino
Unido y a isoproturn en Blgica y Suiza. Adems, hay poblaciones con resistencia
mltiple (principalmente fenilreas ms inhibidores de ACCasa) en varios de estos
pases. Esta especie es considerada como la maleza resistente ms importante en Europa;
Inglaterra, Francia y Alemania son los pases ms afectados. El mecanismo principal de
resistencia es la metabolizacin acelerada del herbicida, lo que le confiere a las plantas
que lo poseen la capacidad de evitar el dao de un amplio grupo de herbicidas; la
resistencia de sitio activo a herbicidas inhibidores de ACCasa tambin se presenta
ampliamente (MOSS et al., 2007). Esta situacin se torna ms seria en virtud de que ya
se ha encontrado una poblacin de esta especie en Inglaterra que tambin posee
resistencia de sitio activo (mutacin Pro197Thr) a inhibidores de ALS, puesto que la
mezcla formulada de mesosulfurn ms iodosulfurn , en combinacin con el antdoto
mefenpir-dietil, se emplea ampliamente como tratamiento alternativo desde 2003 (MOSS
et al., 2007; MARSHALL and MOSS, 2008).
P. minor, la principal maleza del trigo en India, tradicionalmente se ha controlado con
isoproturn. A partir de 1990, sin embargo, los agricultores empezaron a quejarse de la
falta de control con este herbicida. Estudios con biotipos selectos confirmaron la
resistencia a isoproturn evolucionada principalmente en los sistemas de rotacin arroztrigo del noroeste de la India en los que por 10-15 aos se haba usado el herbicida a
dosis inferiores a las recomendadas, aplicado tardamente al voleo en mezcla con arena y
rea como fertilizante (MALIK and SINGH, 1995; SINGH et al., 1998a). Para finales de
la dcada de los 1990s, unas 800.000 ha de trigo estaban infestadas con P. minor
resistente a isoproturn en los estados de Haryana y Punjab (SINGH et al., 1999). Las
infestaciones han sido tan severas que los productores se han visto forzados a cosechar
sus campos antes de que el trigo alcance su madurez y utilizarlos para alimentacin
animal (CHHOKAR and SHARMA, 2008). La resistencia a isoproturn en P. minor en
India no es de sitio activo sino metablica. Los inhibidores de monooxigenasas
citocromo P450, 1-aminobenzotriazol (ABT) y butxido de piperonilo (PBO) aumentan
la fitotoxicidad del isoproturn en biotipos resistentes al disminuir su degradacin

17

metablica acelerada, que es el mecanismo que confiere resistencia al herbicida (SINGH,

1998a; SINGH et al., 1998b). A finales de los 1990s, los productores comenzaron a
depender del inhibidor de ALS sulfosulfurn y de los inhibidores de ACCasa,
principalmente clodinafop, as como de fenoxaprop, y tralkoxidim, para el control de P.
minor resistente a isoproturn. La presin de seleccin ejercida por estos dos grupos de
herbicidas en la mayora de los campos por 6 a 8 ciclos de cultivo result en la seleccin
de biotipos de la maleza con resistencia mltiple. Se han encontrado biotipos con niveles
bajos de resistencia a sulfosulfurn y muy altos a clodinafop y fenoxaprop. Biotipos
altamente resistentes a clodinafop tambin son altamentente resistentes a fenoxaprop pero
solo tienen resistencia marginal al pinoxaden (CHHOKAR and SHARMA, 2008). La
resistencia mltiple en P. minor limita sustancialmente las opciones de manejo qumico
de esta especie en trigo. Las poblaciones que son resistentes a las cuatro familias
qumicas (fenilreas, sulfonilreas, fops y dens todava mantienen su susceptibilidad a
triazinas y dinitroanilinas de uso en el cultivo.
El propanil es el herbicida selectivo que por ms tiempo ha permanecido asociado al
cultivo del arroz en todo el mundo. E. colona evolucion resistencia a propanil en las
Amricas y E. crus-galli en tres continentes (VALVERDE et al., 2000; VALVERDE and
ITOH, 2001). Echinochloa es la maleza ms problemtica por ser muy competitiva con
el arroz y por lo difcil y oneroso que resulta su control, especialmente en los casos en
que ha evolucionado resistencia mltiple a herbicidas (GRESSEL and VALVERDE,
2009b).
Glifosato. La resistencia a glifosato se document por primera vez en 1996 en L. rigidum
en Australia en una poblacin expuesta al herbicida por 15 aos (Pratley et al., 1999;
Pratley et al., 1996), irnicamente al mismo momento en que se sugera que la naturaleza
difcilmente sera capaz de lograr lo que con tanta dificultad haba realizado el hombre
con el desarrollo de los cultivos resistentes a glifosato (BRADSHAW et al., 1997).
Pronto se descubri E. indica resistente a glifosato en Malasia (LEE and NGIM, 2000) y
en adelante otras gramneas y malezas de hoja ancha para alcanzar las 16 especies (7
poceas y 9 dicotiledneas) incluidas en el Recuento hasta la fecha (Cuadro 3). L.
multiflorum resistente se ha reportado en Argentina, Brazil, Chile, EE.UU. y Espaa.
Otra gramnea resistente que debe destacarse es S. halepense en Argentina, la cual infesta
muchas localidades en el rea productora de soya en Argentina. Detalles acerca de cmo
evolucion la resistencia y su diagnstico inicial pueden obtenerse de (VALVERDE and
GRESSEL, 2006). En 2006, cuando el S. halepense resistente a glifosato se haba
confirmado slo en las provincias de Salta y Tucumn en el Norte de Argentina, su rea
de dispersin se estim en 91.700 ha, con un rea de infestacin propiamente dicha de
17.000 ha. En la actualidad los biotipos resistentes se encuentran en ocho provincias
(Buenos Aires, Chaco, Crdoba, Corrientes, Salta, Santa Fe, Santiago del Estero,
Tucumn) productoras de soya transgnica Roundup Ready. La situacin actual de la
resistencia a glifosato en el mundo ha sido revisada recientemente (POWLES and
PRESTON 2006; POWLES, 2008); en el caso de Amrica Latina de discute en detalle en
(VALVERDE, 2010). Otros casos importantes son los de Amaranthus spp. en EE.UU. y
de Conyza spp. principalmente en Amrica. En el Cuadro 3 se citan tres casos ms de

18

resistencia que aun no se incluyen en el Recuento: E. indica en Bolivia y Costa Rica y

Paspalum paniculatum en Costa Rica.

19

Cuadro 3. Malezas que han evolucionado resistencia a glifosato

Especie

Pas

Ao1

Cultivo o condicin

Poceas

Especie

Pas

Ao

Cultivo o condicin

Dicotiledneas

Digitaria insularis

Paraguay
Brasil

2006
2008

soya
soya

Amaranthus palmeri

EE.UU.

2005

Algodn, soya,
maz, huertos

Echinochloa colona

Australia

2007

Barbechos qumicos

A. tuberculatus (=A. rudis)

EE.UU.

2005

Maz, soya

Eleusine indica

Malasia
Colombia
Bolivia2
Costa Rica2

1997
2006
2007
2007

Palma de aceite)
Caf
Soya
Pejibaye para palmito

Ambrosia artemisiifolia

EE.UU.

2004

Soya

A. trifida

EE.UU.

2004

Soya, algodn

Conyza bonariensis
Chile

2001

Sudfrica
Espaa
Brasil

2003
2004
2005

Brazil
EE.UU.
Espaa
Argentina

2003
2004
2006
2007

Viedos, barbecho
qumico (trigo)
Huertos, soya
Huertos, soya, algodn
Huertos
Barbecho qumico

Colombia
EE.UU.

2006
2007

Huertos y viedos
Huertos
Maz, frutales, soya,
trigo, huertos
Caf
Bordes de carretera,
viedos

Australia

1996

EE.UU.

2000

EE.UU.
Sudfrica
Francia

1998
2001
2005

Brasil

2005

Espaa
Italia

2006
2007

Sorgo, trigo, huertos,

viedos, vas frreas
Huerto almendras
Viedos
Esprragos, huertos,
viedos
Huertos
Huertos, viedos

China
Espaa
Rep. Checa

2006
2006
2007

Soya, algodn, maz,

arroz, borde de
carretera, viveros
Frutales, huertos,
soya
Huertos
Huertos
Vas frreas

Paspalum paniculatum

Costa Rica2

2007

Pejibaye para palmito

Euphorbia heterophylla

Brasil

2006

Soya

Sorghum halepense

Argentina
EE.UU.

2005
2007

Soya
Soya

Parthenium hysterophorus

Colombia

2004

Frutales

Australia

2008

Sorgo, trigo

Plantago lanceolata

Sudfrica

2003

Huertos y viedos

Lolium multiflorum

L. rigidum

Urochloa panicoides
1
2

C. canadensis

Ao de confirmacin del primer caso en el pas.

Com. pers. de P. Franco (E. indica, Bolivia) y datos no publicados (E. indica, Bolivia y Costa Rica y P. paniculatum, Costa Rica).
20

En la gran mayora de casos de resistencia a glifosato, los niveles de resistencia

observados son relativamente bajos, con ndices de resistencia usualmente menores de
cinco. En algunos biotipos resistentes, la resistencia a este herbicida se debe a la
contribucin de varios mecanismos. Por ejemplo, la resistencia a glifosato en un biotipo
de L. rigidum de Sudfrica la confiere una mutacin (Pro106Ala) en la EPSPS y el
transporte limitado del herbicida dentro de la planta. Para agravar el problema, este
biotipo es tambin resistente a paraquat y a inhibidores de ACCasa (YU et al., 2007).
Cultivos que contribuyen ms a la resistencia a herbicidas. Los casos de resistencia
ms importantes se presentan en los cultivos de trigo, maz, arroz y soya (Cuadro 4). El
trigo y el maz contribuyen 96 y 76 biotipos resistentes, respectivamente, en ambos
pertenecientes a 53 especies. En el arroz, el 60% de los biotipos resistentes son plantas
acuticas. Los factores ms relevantes en relacin con la resistencia de malezas en estos
cultivos en particular son tratados en detalle en sendos captulos del libro Herbicide
Resistance and World Grains editado por (POWLES and SHANER, 2001).
Cuadro 4. Casos de resistencia a herbicidas en los
cultivos ms importantes1.
Cultivo

No. de biotipos

No. de especies

Trigo
Maz
Soya
Arroz
Huertos
Pasturas
Hortalizas

96
76
60
51
50
33
30

53
53
41
35
35
24
21

No agrcola

45

32

Compilado de (HEAP, 2009).

La resistencia a herbicidas tambin se presenta en reas no agrcolas, las cuales aportan

45 biotipos resistentes pertenecientes a 32 especies.

Malezas resistentes ms perniciosas

Como se ha mencionado, algunas malezas tienen una mayor propensin a evolucionar
resistencia que otras. En el Cuadro 5 se listan las 10 peores malezas resistentes del
mundo. La lista se deriva de analizar y sopesar varios factores, incluidos el nmero de
pases afectados, modos de accin a los que la especie ha evolucionado resistencia, rea
que infesta y sistemas de cultivo en que se la encuentra. Las malezas L. rigidum y A.
fatua continan a la cabeza de la lista comparada con hace ocho aos. Estas malezas son
21

particularmente problemticas en cultivos de cereales puesto que han evolucionado

resistencia generalizada a herbicidas inhibidores de las ACCasa y ALS en una docena de
pases. Amaranthus palmeri y Conyza canadensis han crecido en importancia en aos
recientes debido a las amplias reas infestadas con biotipos resistentes a glifosato.
Chenopodium album ha disminuido en importancia aunque existe mucha preocupacin de
que poblaciones de esta especie pronto evolucionen tambin resistencia a glifosato, lo
que puede volver a ubicarla en un sitio preponderante.
Cuadro 5. Relacin de las diez peores malezas resistentes a
herbicidas en el mundo.
Posicin Especie

Familia

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Poaceae
Poaceae
Poaceae
Amarantaceae
Asteraceae
Amarantaceae
Amarantaceae
Poaceae
Chenopodiaceae
Chenopodiaceae

Lolium rigidum
Avena fatua
Echinochloa crus-galli
Amaranthus palmeri
Conyza canadensis
Amaranthus rudis
Amaranthus retroflexus
Eleusine indica
Chenopodium album
Kochia scoparia

Perspectivas
Est demostrado que las malezas tienen la capacidad de evolucionar resistencia a
herbicidas, sin importar su modo de accin, cuando se someten a suficiente presin de
seleccin bajo condiciones apropiadas. Sin embargo, tambin es claro considerando la
prevalencia de algunos modos de accin sobre otros en la evolucin de resistencia que
hay algunos que tienen un menor riesgo. Por ejemplo, dos de los grupos ms antiguos de
herbicidas, las triazinas y los auxnicos, se han empleado comercialmente en millones de
ha de maz y cereales por ms de medio siglo, muchas veces en ausencia de rotacin. Sin
embargo, 68 especies evolucionaron resistencia a triazinas y solo 23 lo ha hecho a las
auxinas sintticas (excluido el quinclorac). Pocas especies han evolucionado resistencia a
cloroacetamidas y inhibidores de Protox. Sin embargo, una especie que evolucion
resistencia al segundo grupo, lo hizo por un mecanismo que no se conoce en organismo
alguno resistente a un xenobitico: prdida por completo de un codn (PATZOLDT et
al., 2006; GRESSEL and LEVY, 2006). La resistencia a glifosato que se consideraba
improbable ahora ocupa la atencin de decenas de cientficos y nos ensea formas
novedosas de evitar el dao por un herbicida. Hasta ahora, ninguna maleza ha
evolucionado resistencia al glufosinato de amonio.

22

Los agricultores han sido muy afortunados hasta ahora por contar con herbicidas
alternativos que les permite controlar las malezas resistentes. Sin embargo, las
perspectivas de que en los prximos aos se comercialicen herbicidas con modos de
accin totalmente novedosos son nfimas. De hecho, el ltimo modo de accin
descubierto que permiti la comercializacin de herbicidas novedosos se introdujo en
1991 con los inhibidores de la hydroxifenil piruvato dioxigenasa (HPPD) entre los que se
encuentran la sulcotriona y mesotriona (RUEGG et al., 2007). La tendencia de la
agroindustria en aos recientes ha sido la de desarrollar productos similares a los ya
existentes (los llamados me too) que imponen presin de seleccin adicional sobre
sitios de accin sujetos a ella por aos. El aumento en la regulacin de los plaguicidas,
principalmente en Europa, hace disminuir la disponibilidad de herbicidas y con ello
limita las posibilidades de rotacin y mezcla de herbicidas con modos de accin
diferentes.
Las reas dedicadas a la produccin de cultivos transgnicos resistentes a glifosato
continan en aumento (James, 2008) y no se vislumbra la introduccin de cultivos
resistentes a herbicidas novedosos. Como se ha discutido, las reas dedicadas a la
siembra de cultivos transgnicos resistentes a glifosato, en especial aquellas donde la
produccin adems se realiza en regmenes de labranza de conservacin, han brindado las
condiciones adecuadas para que evolucione la resistencia a glifosato. La resistencia a
glifosato, sin embargo, ha estimulado a las compaas de agroqumicos a posicionar
productos con antiguos modos de accin alternativos como opciones para el combate de
la resistencia en mezcla con otros herbicidas y hasta con el mismo glifosato o en nuevas
formulaciones o presentaciones. En un afn por descubrir nuevos productos, las
compaas de agroqumicos hacen ahora un mayor uso de las herramientas que provee la
biotecnologa y de sistemas de escrutinio de alta capacidad. De su xito va a depender la
posibilidad de que se ponga a disposicin de los agricultores herbicidas con nuevos
modos de accin; pero es en los agricultores en quienes recae la responsabilidad de hacer
un uso racional de los productos existentes y de los nuevos que logren ingresar al
mercado para no agravar aun ms los problemas causados por las malezas resistentes.

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A EXPERINCIA DOS CULTIVOS TRANGENICOS RESISTENTES AO

GLIFOSATE E SEU IMPACTO NA AGRICULTURA BRASILEIRA

P. J. Christoffoleti
ESALQ Universidade de So Paulo Brasil, Av. Pdua Dias, 11 CEP 13.418-900
Piracicaba SP Brasil. e-mail: pjchrist@esalq.usp.br

Resumo: O cultivo de culturas resistentes ao glifosate (CRG) no Brasil foi feito em 15,8
milhes de hectares com sementes de soja e algodo transgnico em 2008, com um
crescimento de 5,3% em relao ao ano anterior. bem provvel que com a liberao do
milho resistente a glifosate no pas, que ocorreu em 2008, a tendncia que o Brasil
ultrapasse em rea cultivada com transgnicos a Argentina, ficando apenas atrs dos Estados
Unidos da Amrica do Norte. Apesar dos constantes debates acalorados, os cultivos
denominados transgnicos so uma realidade, e no possuem retorno, dada a gama de
vantagens que podem proporcionar aos produtores, consumidores e meio ambiente, desde que
tomados os cuidados inerentes a toda inovao tecnolgica. O sistema de produo agrcola
sustentvel no Brasil est baseado em sistemas de plantio direto, com CRG sendo o principal
componente. Dentre os benefcios sociais trazidos pelo uso do glifosate nos sistemas de
produo, inclui-se maior uso de cultivo conservacionista que reduz eroso do solo e carga de
pesticidas, nutrientes, e sedimento no ambiente. No entanto, a dependncia no glifosate e
sistemas de produo mais simples tm incrementado o risco de seleo de plantas daninhas
tolerantes ao glifosate (PDTG) atravs da mudana de flora, e de bitipos de PDRG. Delinear
estratgias com herbicidas ou sem herbicidas, que efetivamente retarda e/ou maneja a seleo
de PDRG e de PDTG em sistemas de produo baseados no uso recorrente de glifosate um
desafio no Brasil. Os objetivos deste trabalho foram de (i) descrever alguns aspectos que
influenciam a seleo de PDRG e PDTG no Brasil; (ii) discutir a viabilidade da rotao de
culturas e/ou culturas de cobertura como medida integrada de sustentabilidade do sistema e
preveno e manejo da seleo de resistncia; (iii) sumarizar os resultados de uma pesquisa
feita sobre a percepo dos produtores brasileiros de soja sobre os problemas de PDRH e
PDTG, e o nvel de adoo de boas prticas agrcolas a fim de prevenir ou manejar estas
plantas.
Palavras clave: Glifosate, resistncia a herbicidas, mudana da populao, culturas resistentes
a herbicidas.
Resumen: La experiencia de los cultivos trangnicos resistentes a glifosato y su impacto en la
agricultura brasilea. En 2008 la superficie con cultivos resistentes a glifosato (CRG) en Brasil
alcanz a 15.8 millones de hectreas de soya y algodn, lo que representa un incremento de
5,3% con respecto al ao anterior. Es muy probable que con la liberacin del maz resistente a
glifosato, lo que ocurri en 2008, la superficie cultivada con trangnicos en Brasil sea superior
a la de Argentina, y slo levemente inferior a la de EE.UU. A pesar de los constantes debates
en torno a los cultivos denominados trangnicos, esto es una realidad sin retorno, debido a
las numerosas ventajas que pueden proporcionar a los productores, consumidores y al medio
ambiente, aunque deberan considerarse los cuidados inherentes a cualquier nueva tecnologa.

El sistema de produccin agrcola sustentable en Brasil se basa en la siembra directa, siendo el

CRG el principal componente. Dentro de los beneficios sociales del uso de glifosato en este
sistema se incluye el mayor uso de la labranza conservacionista, mediante la cual se reduce la
erosin del suelo, cantidad de pesticidas, y se evita la prdida de nutrientes y sedimentos del
medio ambiente. Por otra parte, la dependencia del glifosato y de sistemas de produccin ms
simple ha incrementado el riesgo de seleccin de malezas tolerantes a glifosato (PDTG) y de
biotipos resistente a glifosato (PDRG). El desarrollo de estrategias con o sin uso de herbicidas,
para retardar y/o manejar eficazmente la seleccin de PDRG y PDTG en sistemas de
produccin basados en el uso frecuente de glifosato, es un desafio en Brasil. Los objetivos de
este trabajo fueron: (i) describir algunos aspectos que influencian la seleccin de PDRG y
PDTG en Brasil; (ii) discutir la viabilidad de rotar de cultivos y/o cultivos de cobertura como
medida integrada de sustentabilidad del sistema, y de prevencin y manejo de la resistencia;
(iii) resumir los resultados de una investigacin hecha sobre la percepcin de los productores
brasileros de soya en relacin a los problemas de malezas resistentes a herbicidas (PDRH) y
PDTG, y el nivel de adopcin de nuevas prcticas para prevenir o manejar estas plantas.
Palabras clave: glifosato, resistencia a herbicidas, cambio en la poblacin y cultivos resistentes
a herbicidas.
Summary: The experience of cultivation of resistant crop to glyphosate and its impact on the
Brazilian Agriculture. The cultivation of resistant crop to glyphosate in Brazil was 15.8
million of hectares in 2008, with an increase of 5.3% compared to the previous year. It is very
likely that with the release of the permission to cultivate corn resistant to glifosate in 2008, the
tendency is that Brazil will grow more RCG than Argentina. Despite the constant debates, the
transgenic are a reality with no return, due to the several advantages that the it can bring to
producers, consumers and environment, but some care must be taken related to all new
innovative technology. The major sustainable agricultural system in Brazil is based on a notillage cropping system with glyphosate-resistant crops (GRCs) predicted as a major
component. Societal benefits of glyphosate in the system include greater use of conservation
tillage which reduces soil erosion and associated loading of pesticides, nutrients, and
sediments into the environment. However, over-reliance on glyphosate and simpler cropping
systems has increase the risk to select tolerant weed species through weed shift (WS) and
herbicide-resistant weed (HRW) biotypes to glyphosate. Designing herbicide and nonherbicide strategies that effectively delay and/or manage HRWs to glyphosate selection and
WS to tolerant weeds to glyphosate in cropping systems based on recurrent glyphosate
application is a challenge in South America. The objectives of this paper are (i) to overview
some aspects that influence of WSs and HRW to glyphosate in South America, especially in
Brazil, Argentina and Paraguay soybean cropped areas; (ii) to discuss the viability of using
crop rotation and/or cover crop that might be integrated with forage crop in a sustainable
economically and environmentally system. (iii) to summarize the results of a survey about the
perceptions of the Brazilian farmers to problems with WSs and HRWs to glyphosate, and the
level of adoptions of good agricultural practices in order to prevent or manage it.
Key words: Glyphosate; herbicide resistance; herbicide tolerance; weed population shifts,
herbicide tolerant crops.

Introduo
As plantas daninhas so organismos evolutivos em resposta a mudanas no ambiente e/ou
stress. Sendo assim, o intenso uso de herbicidas na agricultura, sendo um processo intensivo
de distrbio, proporciona presso de seleo nas comunidades de plantas daninhas, resultando
em seleo intra-especfica de bitipos de plantas daninhas para produzir plantas daninhas
resistentes aos herbicidas (PDRH) e seleo inter especfica para causar mudana de flora
entre espcies, weed shift (WS) devido ao controle efetivo e seletivo. Outras importantes
foras seletivas so a escolha do herbicida, sistemas de cultivo, escolha da cultura, padres de
mudanas climticas e a introduo de novas espcies de plantas daninhas (CARDINA et. al.,
2002; SHANER, 2000).
Para a prtica de agricultura em plantio direto, o herbicida glifosate uma ferramenta
fundamental para promover a proteo do solo atravs da palhada obtida da vegetao nativa
ou de culturas de cobertura cultivada durante o perodo invernal (TRIGO y CAP, 2003). Esta
prtica tem sido adotada por muitos dos produtores brasileiros conscientes da conservao dos
recursos naturais. No entanto, alguns problemas com o uso intensivo e repetitivo do glifosate
tm ocorrido tais como a seleo de PDRG e WS para espcies tolerantes ao glifosate, que
pode impor certas limitaes no uso da tecnologia. Portanto, os produtores devem prestar
ateno para fatores que impe esta presso de seleo, e delinear estratgias herbicidas e no
herbicidas que efetivamente retarda ou maneja as PDRG e WS na comunidade de planta
daninha.
Pesquisas esto sendo desenvolvidas com o objetivo de melhor entender os fatores que
impem a seleo para fazer recomendaes para retardar a emergncia de PDRG e WS
(SEVERINO et al., 2005; JAKELAITIS et al., 2005). Dentre as propostas est a integrao
lavoura-pecuria de rotao de cultura e intercalar com culturas forrageiras, aumentando
assim a diversidade do sistema, portanto minimizando as mudanas para espcies tolerantes
ao glifosate e a evoluo de bitipos de PDRG, e assim tornando o glifosate e culturas
resistentes ao glifosate viveis aos produtores por mais tempo.
Existe uma grande preocupao a nvel mundial em relao ao uso intensivo do glifosate e de
culturas resistentes ao glifosate (CRG) e seus efeitos na WS e especialmente na evoluo de
PDRG (OWEN, 2001). H preocupao tambm para os impactos no uso de glifosate alm
das CRG. Extensionistas, cosultores agrcolas e produtores esto todos interessados em saber
como ser a evoluo futura de PDRG pode afetar a sustentabilidade do glifosate na
agricultura brasileira.

Sistemas de produo conservacionistas no Brasil e o glifosate

Atualmente, no Brasil, cerca de 22 milhes de hectares so ocupados pelo sistema de plantio
direto, com expectativa de expanso da rea agrcola sob esse sistema (CHRISTOFFOLETI et
al., 2007a). Esse fato deve-se s inmeras vantagens decorrentes da utilizao do plantio
direto, como a sustentabilidade agrcola devido conservao dos recursos naturais e
preservao da biodiversidade do solo, podendo aumentar a produtividade das culturas, alm,
segundo GAJRI et al. (2002), da possibilidade de contribuir para a reduo do aquecimento

global mediante o seqestro de carbono. Entretanto, para o estabelecimento do sistema de

plantio direto so necessrios cuidados especficos de gerenciamento, dentre os quais se
destaca o eficiente controle das plantas daninhas.
A avaliao das necessidades de controle das plantas daninhas funo da taxa de emergncia
das espcies presentes no banco de sementes do solo, e deve ser estabelecida para cada
sistema de manejo da cultura implantada (VOLL et al., 2003). Alm disso, seria praticamente
impossvel estabelecer o sistema de plantio direto como uma prtica economicamente vivel e
ecologicamente correta sem a integrao dos mtodos de controle das plantas daninhas.
Conforme RUEDELL (1995), o sucesso dessa operao depende principalmente do
planejamento na propriedade, levando-se em conta um sistema de rotao de culturas e no
apenas uma cultura isoladamente.
A conservao dos recursos naturais no Brasil prioridade nacional nos sistemas de produo
adotado na agricultura, especialmente nas reas de soja da regio sul e central do pas. A
sociedade tem influenciado produtores a adotar sistemas de produo conservacionistas, e
assim reduzindo os danos ao ambiente agrcola de produo (agroecossistemas) como um
todo. Estes sistemas so baseados na cobertura do solo com resduos de culturas (palhada),
com o mnimo possvel de distrbio do horizonte superficial do solo. Estes sistemas, quando
comparado com sistemas convencionais, reduzem variaes de temperatura do solo diurna e
noturna, diminui a evaporao de gua da superfcie do solo, aumenta o contedo de matria
orgnica e atividade dos microrganismos, e na camada superficial de solo, aumenta tanto as
propriedades fsicas quanto qumicas, proporcionando assim melhor controle da eroso, e
reduzindo a infestao de plantas daninhas.
Uma das discusses inevitveis na agricultura brasileira est relacionada com o potencial de
aumento de rea plantada com CRG (culturas resistentes ao glifosate) no pas e o uso do
herbicida glifosate em larga escala (CHRISTOFFOLETI et al., 2005). Esta discusso no se
restringe ao uso de glifosate em reas com CRG, mas estende se desde o uso intensivo de
glifosate nas reas de sistemas de plantio direto, at reas onde o uso de glifosate feito para
o controle no seletivo de plantas daninhas, tais como em fruticultura e florestas.
Recentemente, o primeiro caso de uma PDRG (planta daninha resistente ao glifosate) no
Brasil foi relatado com a planta daninha azevm (Lolium multiflorum L.)
(CHRISTOFFOLETI e LOPEZ-OVEJERO, 2003; ROMAN et al., 2004). Duas espcies de
buva foram tambm relatadas como resistente ao glifosate no Brasil. Curvas de dose-resposta
foram publicadas para Conyza canadensis L. Cronq. e C. bonariensis L. Cronq. Selecionadas
em reas de citrus, foram tambm conduzidos experimentos para indicar tratamentos
alternativos para estes bitipos (CHRISTOFFOLETI et al., 2007b). Populaes de bitipos
resistentes ao glifosate de ambas as espcies foram encontradas, cada uma com diferentes
nveis de resistncia.
A adoo de um sistema de cultura de cobertura intercalar cultura principal com certeza
uma das prticas de sustentabilidade do sistema, que tem sido adotada no Brasil (Tabela 1). O
objetivo de reduzir a infestao de plantas daninhas, e aumentar a diversidade da flora
atravs da reduo da presso de seleo (TSUMANUMA, 2004). O sistema est baseado no
uso de culturas de cobertura intercalares ao milho ou na soja, sendo que a cultura de cobertura
depois utilizada como forrageira para alimentao do gado, ou como cobertura do solo

depois da dessecao por um herbicida (MERCANTE, 2003). O sistema vivel para as

regies sudeste e centro-oeste do Brasil, e traz diversos benefcios agronmicos de seu uso: (i)
incremento da material orgnica no sistema, (ii) maior reteno de gua no solo, (iii)
supresso e diversificao da infestao de plantas daninhas, (iv) seqestrao do carbono do
ambiente, (v) reduo da compactao do solo e (vi) aumento da produtividade e
sustentabilidade do sistema.
Tabela 1. Densidade das plantas daninhas (plantas m-2) na intereao entre os tratamentos
com culturas forrageiras e especies de plantas daninhas, intercalada com a cultura de milho 60
dias aps a semeadura. Adaptado de Severino et al. (2006).
Densidade da planta daninha (plantas m-2)
I. grandifolia
A. hybridus
D. horizontalis
18,8 bB
5,6 bC
33,52 aA
Brachiaria decumbens
3,6 cA
4,3 cA
3,4 bA
Brachiaria brizantha
12,4 bA
3,6 cB
4,3 bB
Panicum maximum
36,3 aB
72,2 aA
37,3 aB
No intercropping1
C.V. (%)3
13,08
1
2
Testemunha sem cultura intercalar e plantas daninhas; Nmeros seguidos de letras distintas,
maiscula nas linhas e minsculas nas colunas, diferem entre si ao nvel de 5% de
significncia, de acordo com o teste de Tukey; 3 Coeficiente de variao do experimento.
Gramneas forrageiras

Percepes dos produtores de soja Brasileiros sobre a influncia das CRG na

sustentabilidade do glifosate
Apesar do fato de que o Brasil oficialmente aprovou o cultivo da soja resistente ao glifosate
(CRG) no final de setembro de 2003, logo aps o incio do perodo de plantio daquele ano, a
adoo de CRG pelos produtores brasileiros pode sem dvida aumentar o potencial de seleo
de plantas daninhas tolerantes ao glifosate e/ou populaes de PDRG, portanto importante a
entender como os produtores esto agindo e as percepes sobre PDRG e tolerantes ao
glifosate. Isto essencial para guiar futuras pesquisas e aes para informar os produtores das
melhores alternativas para controle de plantas daninhas em sistemas de cultivo
conservacionistas. Portanto, foi conduzida uma pesquisa no Brasil durante os meses de
Janeiro e Fevereiro de 2007, baseado em um questionrio aplicado para produtores de soja
nos estados do Mato Grosso do Sul e So Paulo. Este levantamento de informaes foi
baseado nas questes e resultados obtidos no trabalho desenvolvido com milho e soja no
estado da Indiana, Estados Unidos da Amrica do Norte, durante o inverno de 2003/2004 para
acessar suas percepes sobre a importncia de plantas daninhas resistentes ao glifosate e
tticas de manejo para prevenir o desenvolvimento de populaes resistentes.
Um questionrio de duas pginas foi diretamente preenchido pelos consultores de soja de duas
regies no Brasil, Navira MS, localizada na regio central do pas, na rea de Cerrado (28
questionrios foram preenchidos), e Orlndia SP, localizada na regio Sudeste do Brasil,
estado de So Paulo (96 questionrios preenchidos). Nove questes foram perguntadas sobre
aspectos agronmicos que poderiam afetar a seleo de PDRH e espcies tolerantes ao

glifosate, e questes sobre o sistema de produo usado, desenvolvimento e percepo dos

produtores. Algumas das respostas so analisadas neste artigo.
Os resultados mostraram que a maioria dos produtores relataram alto potencial de risco de
seleo de PDRG, e que varivel de acordo com a o tamanho da rea do produtor (tamanho
da propriedade), cujos resultados so semelhantes aqueles obtidos no levantamento feito em
Indiana. Os produtores com reas de soja <100 ha no esto muito preocupados com o
problema de PDRG (50,5%), no entanto em mdia 94,2% dos produtores com reas maiores
tem no mnimo algum nvel de preocupao sobre PDRG em suas propriedades (Tabela 2). A
partir destes resultados pode ser concludo que os produtores com reas mais extensivas
podem estar mais conscientizados do impacto que PDRG, e isso provvel ser devido ao
nvel de tecnologia e informao que no est disponvel para produtores de soja menores.
Tabela 2. Nvel de preocupao relatado sobre PDRG de acordo com o tamanho da rea de
soja cultivada no Brasil.
Tamanho da area de soja cultivada
(ha)
<100
100 - 200
201 - 500
501 - 1000
>1000

Nvel de preocupao sobre PDRG (%)

Alto
Moderado
Baixo
Nenhum
18,2
16,1
15,2
50,5
50,0
27,3
18,2
4,5
52,6
26,3
10,5
10,6
19,3
53,8
23,1
3,8
54,2
33,3
8,3
4,2

As principais razes dos produtores adotarem CRG, independentemente da rea de soja

cultivada esto na Tabela 3. A mesma importncia foi dada para trs fatores que influenciam a
adoo de CRH: experincia com a tecnologia pela primeira vez (21,8%); devido ao manejo
de PDRH (20,2%) com as sulfonilurias, imidazolinonas e inibidores da ACCase com o
glifosate como herbicida alternativo; reduo de custos (36,3%), maior flexibilidade e
simplicidade da tecnologia comparado com o cultivo convencional e poucos por outras razes
foram listadas pelos produtores.
Tabela 3. Principais razes para os produtores adotarem a tecnologia de CRG
independentemente do tamanho das propriedades no Brasil.
Razes
%*
Experimentando a technologia
21,8
Manejo de PDRH
20,2
Reduo de custos
36,3
Maior flexibilidade
23,4
Outras razes
5,7
No cultiva soja resistente ao glifosate
27,4
* % do total de todas as razoes maior que 100% pois pois foi permitido que os entrevistados
respondessem mais de uma razo.

Um outro fator que influencia a resposta dos produtores de reas pequenas de soja a
porcentagem de rea na propriedade que semeada com CRG, que muito maior em
produtores que cultivam > 1000 ha que pequenos produtores (Tabela 4).
Tabela 4. rea cultivada com CRG de acordo com o tamanho da propriedade no Brasil.
rea de soja cultivada de
% de soja cultivada com CRG
acordo com o tamanho da
0
<10 10-20 20-50 50-70 70-100
propriedade (ha)
<100
54,5
9,1
9,1
0,0
0,0
27,3
100 - 200
50,0
9,1
4,6
9,0
9,1
13,7
201 - 500
48,7
5,1
12,8
15,4
7,7
10,3
501 - 1000
37,1
7,4
14,8
29,7
0,0
11,1
>1000
4,2 16,7
20,8
25,0
12,5
16,7
* Porcentagem de produtores que recusaram a responder o questionrio.

Sem
resposta*
0,0
4,4
0,0
0,0
4,1

As plantas daninhas tolerantes ao glifosate selecionadas devido ao uso repetitivo de glifosate

em reas causando a mudana de flora tambm uma preocupao dos produtores que
cultivam mais de reas extensivas (Tabela 5). Os produtores que cultivam reas com > 1000
ha com soja tem alta a moderada preocupao neste aspecto. Portanto, no Brasil a seleo de
espcies de plantas daninhas tolerantes pelo glifosate uma preocupao muito maior para
produtores que plantas PDRH, especialmente para produtores que cultivam a cultura em reas
extensivas, pois o sistema baseado mais em herbicidas que nas reas de pequenos
produtores. As maiores propores de pequenos produtores que no responderam o
questionrio provavelmente pelo fato de no estarem conscientes do problema e no
compreenderam a diferena entre PDRH e plantas daninhas tolerantes ao glifosate.
Tabela 5. Nvel de preocupao relatado sobre plantas daninhas tolerantes ao glifosate de
acorodo com o tamanho da propriedade cultivada no Brasil.
Nvel de preocupao sobre plantas daninhas
Sem
tolerantes ao glifosate (%)
respostas*
Alto
Moderado
Baixo
Nenhum
<100
27,3
27,7
18,2
0,0
26,8
100- 200
68,2
22,7
4,6
0,0
4,6
201- 500
64,1
23,1
2,6
5,1
5,1
501 - 1000
44,4
40,8
11,1
0,0
3,7
>1000
75,0
25,0
0,0
0,0
0.0
* Produtores que no responderam o questionrio principalmente porque no sabia diferenciar
PDRG de plantas tolerantes ao glifosate.
Tamanho da
propriedade (ha)

Uma outra questo perguntada foi sobre as razes para a medidas de no adoo de preveno
e manejo de bitipos de PDRH e/ou tolerantes ao glifosate (Tabela 6). Surpreendentemente
pequenos produtores responderam que eles adotam na taxa de 5,6% do total das propriedades,

e que somente 27,3% tem restries com relao ao custo, e que somente 9,1% no acredita
que em suas propriedades seriam selecionadas PDRG. Nenhum dos grandes produtores
responderam que eles adotam medidas de preveno ou manejo na propriedade com um todo
sendo que os altos custos a razo para isso, no entanto, surpreendentemente 20,8% dos
produtores que cultivam soja em reas de > 1000 ha no acreditam na possibilidade de seleo
de PDRG em suas propriedades, e isso evidencia o problema da falta de conscientizao que
deveria ser dada a fim de dar suporte aos produtores, e que requer aes efetiva dos servios
de extenso, consultores agrcolas que trabalham com manejo de plantas daninhas.
Tabela 6. Razes de no adotarem medidas de preveno em manejo de PDRG de acordo com
o tamanho da propriedade cultivada com soja no Brasil.
Tamanho da area da propriedade
1
2
3
4
5
6
cultivada com soja (ha)
<100
27,3
9,1
18,2
9,1
54,6
18,2
100- 200
22,7
40,9
18,2
0,0
0,0
18,2
201- 500
41,0
15,4
0,0
5,1
0,0
38,5
501 - 1000
51,8
14,8
7,4
3,7
0,0
22,2
>1000
50,0
20,8
8,3
8,3
0,0
12,5
1: Alto custo para a adoo.
2: Produtores no acreditam na possibilidade de seleo de PDRG em reas cultivadas.
3: Quando PDRG forem selecionadas na area, a indstria de agroqumicos e os services de
extenso encontraro maneiras para resolver o problema.
4: J adota medidas em parte para preverno e manejo em suas reas de soja.
5: J adota medidas em toda a propriedade.
6: Marcou mais de uma alternative.

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ESTADO DE LA RESISTENCIA A HERBICIDAS EN TRIGO Y OTROS

CULTIVOS EXTENSIVOS EN EL SUR DE CHILE
N. Espinoza1, J. Daz1, R. Galdames1, C. Rodrguez1, N. Gaete1 y R. De Prado2
1
INIA Carillanca, Temuco, Chile, email: nespinoz@inia.cl
2
Universidad de Crdoba, Crdoba, Espaa

Resumen: En el sur de Chile, principal zona productora de trigo, cebada, avena, lupino y
canola (36 a 42 lat. Sur), el surgimiento de biotipos de malezas gramneas resistentes
a herbicidas ha sido un proceso muy frecuente a partir de la dcada del noventa,
inicialmente la resistencia fue a los inhibidores de ACCasa, posteriormente a los
inhibidores de ALS y ms recientemente a glifosato. A la fecha, se han descrito 50
biotipos de malezas gramneas resistentes a herbicidas, correspondientes a cuatro
especies, especficamente a ballica (Lolium multiflorum y L. rigidum), avenilla (Avena
fatua) y cola de zorro (Cynosurus echinatus). Todos los biotipos se originaron en
campos de agricultores ubicados en diferentes localidades de las regiones Del Bio Bio,
La Araucana, Los Rios y Los Lagos, cuyo sistema de cultivo se caracteriza por un uso
intensivo del suelo con cultivos anuales, principalmente trigo, siembra con labranza
cero y una alta dependencia del herbicida glifosato antes de la siembra y de los
herbicidas ACCasa y ALS despus de la siembra. En los biotipos de A. fatua la
resistencia es a herbicidas ACCasa, mientras que en los bitipos de C. echinatus y L.
rigidum la resistencia es a herbicidas ACCasa y ALS, y en los biotipos de L.
multiflorum la resistencia es a herbicidas ACCasa, ALS y glifosato.
Palabras claves: avenilla, ballica, cola de zorro, resistencia, biotipos.
Summary: Status of herbicide resistance in wheat and others extensive crops in South of
Chile. In the south of Chile, the main area for wheat, oat, barley, lupine and canola
cropping (36 a 42 lat. Sur), the presence of resistant weed to herbicide has become
frequent since de nineties. Initially the resistance was to the herbicides inhibitors of the
ACCasa, then to the inhibitors of the ALS and more recently to glyphosate. Up to day
more than 50 byotipes of gramineae resistant weed, belonging to four species,
specifically to ryegrass (Lolium multiflorum y L. rigidum), wild oat (Avena fatua) and
hedgehog (Cynosurus echinatus). All the biotypes have their origin in farms located in
the regions of Del Bio Bio, La Araucana, Los Rios y Los Lagos, that have a crop
system characterized by an intensive use of the soil with annual crops mainly wheat,
non-tillage and high dependency of glyphosate before seeding and ACCasa and ALS
herbicides after the seeding. In the biotypes of A. fatua the resistance is to ACCasa
herbicides, while in the biotypes of C. echinatus and L. rigidum the resistance is to
ACCasa and ALS herbicides, and in the biotypes of L. multiflorum the resistance is to
ACCasa, ALS and glyphosate.
Keywords: wild oat, ryegrass, hedgehog dogtail, resistance, biotypes.

Introduccin
Las malezas son un continuo problema en la agricultura en el mundo. La introduccin
de los herbicidas selectivos a fines de la dcada del 40 facilit significativamente el
trabajo de los agricultores para controlarlas. Sin embargo, la alta dependencia de los
herbicidas se tradujo en cambios en la flora de malezas y en el surgimiento de biotipos
resistentes (DELYE, 2005). Se entiende por resistencia a la habilidad heredable de una
poblacin o biotipo de maleza para sobrevivir y reproducirse despus de la aplicacin
de un herbicida en la dosis a la que la poblacin original era sensible (POWLES et al.,
1997; GRESSEL, 2002). Desde que se report el primer caso de resistencia a herbicidas
en el mundo (RYAN, 1970), esta se ha expandido con rapidez. As, a la fecha, se han
confirmado 332 biotipos resistentes pertenecientes a 189 especies de malezas, de las
cuales 113 son dicotiledneas y 76 monocotiledneas (HEAP, 2009).
En el sur de Chile, el surgimiento de biotipos resistentes a herbicidas ha sido un proceso
muy frecuente a partir de la dcada de los noventa. Los primeros casos de resistencia se
confirmaron a los herbicidas ACCasa y en las malezas gramneas L. rigidum, L.
multiflorum y A. fatua (ESPINOZA y ZAPATA, 2000; ESPINOZA et al., 2003).
Todos estos biotipos fueron colectados en cultivos anuales extensivos, principalmente
trigo, en la zona sur. A partir de esta fecha la resistencia ha sido creciente, ya que se ha
expandido a otras reas y confirmado en otra especie gramnea como C. echinatus
(ESPINOZA et al., 2005; VALVERDE, 2007) y a otros herbicidas como los ALS y a
glifosato (ESPINOZA et al., 2008). En el presente trabajo se presenta el estado de la
resistencia a herbicidas ACCasa, ALS y glifosato en las 4 especies de malezas
gramneas antes sealas en el sur de Chile.

Importancia de las especies de malezas gramneas resistentes

En el sur del pas, la evolucin de resistencia en avenilla (A. fatua), ballica (L.
multiflorum y L. rigidum) y cola de zorro (C. echinatus) (Figura 1), tiene gran
importancia por diversas razones. Las especies A. fatua y L. rigidum constituyen las
malezas ms importantes en muchas reas de cultivos en el mundo (LORRAINECOLWILL et al., 2001; YU et al., 2009). HEAP (2009) incluye a ambas entre las 10
especies de malezas resistentes a herbicidas ms importantes econmicamente en el
mundo (Tabla 1). En Canad, la avenilla es la gramnea anual ms nociva en la regin
Northern Great Plain (BECKIE y KIRKLAND, 2003). En Australia, L. rigidum es la
que ocasiona los mayores daos econmicos en la agricultura (ALEMSEGED et al.,
2001; LLEWELLYN y POWLES, 2001; LORRAINE-COLWILL et al., 2001). En
EE.UU., L. multiflorum es considerada la maleza ms problemtica en diversas regiones
del pas (LIEBEL y WORSHAM, 1987). Cola de zorro (C. echinatus), al contrario de
lo ocurre en Chile, no es una maleza importante en la agricultura en el mundo, lo que
probablemente explica que todos los biotipos de cola de zorro resistentes reportados a
la fecha sean chilenos (HEAP, 2009; VALVERDE, 2007). Sin embargo, de las cuatro
especies, actualmente la ms importante en el sur del pas es L. multiflorum, debido a su
mayor distribucin (MATHEI, 1995), se presenta ms frecuentemente y en mayores
densidades en trigo y otros cultivos extensivos (Figura 2) y porque la superficie
comprometida con biotipos resistentes es mayor. Se estima que del total de la superficie
sembrada con trigo, avena, cebada, canola y lupino en el pas, aproximadamente 100

mil hectreas se encuentran infestadas con biotipos resistentes de avenilla, ballica y

cola de zorro (ESPINOZA y DAZ, 2005).

Ballica (Lolium multiflorum y L. rigidum)

Avenilla (A. fatua)

Cola de zorro (C. echinatus)

Figura 1. Malezas gramneas que ha desarrollado resistencia a herbicidas en el sur de
Chile.

Las cuatro malezas gramneas que han desarrollado resistencia en el sur del pas,
corresponden a especies anuales de invierno, por lo que su presencia en los cultivos
sembrados en esta poca, es casi obligada, presentndose en algunos casos como nica
especie de maleza y en otros casos, asociadas, dependiendo de la localidad
(PEDREROS, 2001). Su presencia ao tras ao en los cultivos, se debe a que la
mayora producen una gran cantidad de semillas, lo que bajo las condiciones
edafoclimticas de la zona sur se ha estimado en 1.700 semillas por planta de ballica (L.
multiflorum), 600 semillas por planta de cola de zorro y 330 semillas por planta de
avenilla. La ballica (L. multiflorum y L. rigidum) (BOSQUE et al., 2002) y avenilla
(NAYLOR, 1983) presentan una amplia variabilidad gentica, lo que les permite una
mayor capacidad de adaptacin y supervivencia. Adems, ambas especies de ballica
presentan polinizacin cruzada (TERRELL, 1968), lo que implica que la resistencia
puede trasmitirse no slo a travs de la semilla sino que tambin mediante el polen
(WAKELIN, 2004). Esto no ocurre en avenilla (RUNZHI, 2007) y cola de zorro por
tratarse de especies de autofecundacin.

Tabla 1. Principales especies de malezas resistentes a herbicidas en el mundo. (HEAP,

2009).
Especie
Lolium rigidum
Avena fatua
Amaranthus retroflexus
Chenopodium album
Setaria viridis
Echinochloa crus-galli
Eleusina indica
Kochia scoparia
Conyza canadensis
Amaranthus hybridus

Tipo
Gramnea
Gramnea
Hoja ancha
Hoja ancha
Gramnea
Gramnea
Gramnea
Hoja ancha
Hoja ancha
Hoja ancha

N de biotipos
resistentes
36
37
36
42
15
26
14
33
41
23

100
90
80

Frecuencia(%)

70
60
50
40
30
20
10
0

Figura 2. Frecuencia con que se presentan diversas malezas gramneas en trigo y otros
cultivos extensivos en el sur de Chile. (DAZ y ESPINOZA, 2006). Los datos fueron
obtenidos de una encuesta realizada a agricultores con malezas gramneas resistentes en
sus campos de las regiones Del Bio Bio, La Araucana, Los Rios y Los Lagos.

Distribucin de los biotipos resistentes

Durante 1998-2007 se colectaron semillas de avenilla (Avena fatua), ballica (Lolium
multiflorum y L. rigidum) y cola de zorro (Cynosurus echinatus), desde campos de
agricultores ubicados en diferentes localidades de las regiones Del Bio Bio, La
Araucana, Los Rios y Los Lagos, en los que se sospechaba la existencia de resistencia.
Del material colectado, 14 biotipos correspondieron a A. fatua, 17 biotipos a C.

echinatus, 15 biotipos a L. multiflorum y 4

biotipos de L. rigidum. Posteriormente, los
biotipos se caracterizaron en trminos de
su resistencia a los herbicidas inhibidores
de ACCasa, inhibidores de ALS y a
glifosato, encontrndose que todos todos
los biotipos (50 biotipos) presentaron
resistencia a uno o ms herbicidas.
La mayora de los biotipos provino de las
regiones de La Araucana (68%) y Del Bo
Bo (22%), lo que sugiere que en estas
regiones la resistencia est ms
ampliamente distribuida. Adems, ambas
regiones aportaron ms diversidad en
cuanto al nmero de especies de malezas
gramneas con biotipos resistentes. As, la
regin Del Bio Bio aport con biotipos de
A. fatua, C. echinatus y L. rigidum,
mientras que la regin de La Araucana
con biotipos de A. fatua, C. echinatus y L.
multiflorum (Tabla 2). En las regiones Del
Bo Bo, La Araucana y Los Lagos,
respectivamente, la resistencia se concentra
en la Precordillera Andina, Valle Central y
Litoral (Figura 3), reas que se caracterizan
por el uso intensivo del suelo con cultivos
anuales, principalmente trigo, y siembra
con labranza cero durante un periodo
relativamente largo de tiempo, en algunos
casos, por ms de veinte aos, lo que
probablemente explica el mayor aporte de
biotipos.

Figura 3. Distribucin de los

biotipos resistentes.

Tabla 2. Origen de los biotipos resistentes.

Maleza
gramnea

Del Bio Bio

36 a 38 lat S

La Araucana
38 a 39 lat S

A. fatua
C. echinatus
L. multiflorum
L. rigidum
Total/regin

2
5
0
4
11 (22%)

10
12
12
0
34 (68%)

Los Ros
39 a 40 lat S
0
0
1
0
1

Los Lagos
40 a 44 lat S
2
0
2
0
4 (8%)

Biotipos/
especie
14
17
15
4
50

Resistencia de los biotipos a herbicidas selectivos

Avenilla (A. fatua) y cola de zorro (C. echinatus). En bioensayos realizados en plantas,
con 14 biotipos de avenilla (AF-1, AF-2, AF-3, AF-4, AF-7, AF-8, AF-12, AF-13, AF14, AF-17, AF-18, AF-21, AF-22, AF-23) y aplicando cada herbicida inhibidor de
ACCasa e inhibidor de ALS en una dosis superior al 50% de la recomendada, se
encontr resistencia slo a los ACCasa. La resistencia a los ACCasa se caracteriz
porque un alto porcentaje de los biotipos de avenilla present resistencia a los
herbicidas del grupo qumico de los FOP como diclofop, clodinafop y haloxyfop,
mientras que un bajo porcentaje fue resistente a tepraloxydim (grupo qumico DIM) y
pinoxaden (grupo qumico DEN) (Tabla 3). En bioensayos de dosis respuesta y
utilizando el modelo de regresin log-logstica propuesto por SEEFELDT et al. (1995)
y los biotipos de avenilla AF-2, AF-3 y AF-14, se confirm en todos la resistencia a los
herbicidas ACCasa clodinafop y haloxyfop. Por otra parte, ningn biotipo present
resistencia a tepraloxydim y pinoxaden y al herbicida ALS flucarbazone (Tabla 4).
Estos resultados indican la existencia de diferentes patrones de resistencia cruzada a los
herbicidas ACCasa. Respecto a los niveles de resistencia a los ACCasa, se encontr que
los tres biotipos de avenilla exhibieron alta resistencia a clodinafop y baja resistencia a
haloxyfop (Tabla 4). Estos resultado son similares a los obtenidos en A. fatua por
MANSOOJI et al. (1992); SEEFELDT et al. (1994); COCKER et al. (2000); BECKIE
et al. (2002), quienes encontraron que la resistencia fue ms generalizada a FOP que a
DIM. En EE.UU., ULUDAG et al. (2008), trabajando con 5 biotipos de A. fatua, tres
herbicidas FOP, tres herbicidas DIM y un DEN, encontraron que todos los biotipos
fueron resistentes a los FOP y sensibles a los DIM y DEN, excepto un biotipo que fue
resistente a todos. Los resultados obtenidos en los biotipos de avenilla provenientes del
sur del pas, sugieren que la resistencia ha evolucionado bsicamente a los ACCasa del
grupo qumico FOP, razn por la que herbicidas ACCasa de grupos qumicos distintos
como los DIM y DEN deberan ser herramientas eficaces para controlar los biotipos
resistentes a FOP.
En cola de zorro, trabajando con 17 biotipos (CE-3, CE-4, CE-6, CE-7, CE-10, CE-12,
CE-13, CE-14, CE-15, CE-16, CE-17, CE-18, CE-19, CE-20, CE-21, CE-22, CE-23)
y aplicando tambin cada herbicida inhibidor de ACCasa e inhibidor de ALS en una
dosis superior al 50% de la recomendada, se encontr resistencia a ambos mecanismos
de accin. La resistencia se caracteriz porque un alto porcentaje de los biotipos de cola
de zorro presentaron resistencia a los tres herbicidas ACCasa evaluados, esto es, a
clodinafop (FOP), haloxyfop (FOP) y a tepraloxydim (DIM), y al herbicida ALS
flucarbazone (Tabla 3). En bioensayos de dosis respuesta en los biotipos de cola de
zorro CE-10, CE-17, CE-18 y CE-19, se confirm en todos la resistencia a los
herbicidas ACCasa clodinafop haloxyfop y tepraloxydim, y al herbicida ALS
flucarbazone (Tabla 4). Sin embargo, mientras los biotipos exhibieron alta resistencia a
clodinafop y a haloxyfop, el nivel de resistencia a tepraloxydim fue variable segn el
biotipo, fluctuando entre baja y alta y la mayora de los biotipos presentaron una baja
resistencia al herbicida ALS flucarbazone (Tabla 4). Los resultados obtenidos en estos
biotipos de cola de zorro sugieren que la resistencia a herbicidas ACCasa est ms
extendida a los FOP que a DIM y que ha evolucionado menos a los ALS. No obstante,
de continuar desarrollndose a los ACCasa y ALS, podra llegar a significar una
disminucin importante de los herbicidas disponibles para su control.

Tabla 3. Porcentaje de los biotipos de avenilla y cola de zorro resistentes a los

herbicidas inhibidores de ACCasa y ALS.
ACCasa
Maleza
gramnea
A. fatua
C. echinatus

dic
100
n.e

FOP
clo
71
100

hal
64
94

ALS
DIM
tep
7
94

DEN
pin
14
n.e.

SU

ST

iod+mes
0
n.e.

flu
0
94

dic: diclofop; clo: clodinafop; hal: haloxyfop; tep: tepraloxydim; pin: pinoxaden;
iod+mes: iodosulfuron+mesosulfuron; flu: flucarbazone; n.e: indica no evaluado.

Tabla 4. ndices de resistencia de los biotipos de avenilla y cola de zorro a los

herbicidas inhibidores de ACCasa y ALS.

A. fatua
Sensible
AF-2
AF-3
AF-14
C. echinatus
Sensible
CE-10
CE-17
CE-18
CE-19

clodinafop
DL50
IR
11
>216
> 20
>216
> 20
>216
> 20
DL50
IR
12,3
187
15
>216
>18
176
14
>216
>18

ACCasa
haloxyfop
tepraloxydim
DL50
IR
DL50
IR
18,1
9,8
71,4
3,9
42
2,2
84,8
4,7
14
1,4
90,6
5,0
12
1,2
DL50
IR
DL50
IR
18
32
198
11
150
4,7
265
14,7
448
14
252
14
269
8,4
254
14,1
307
9,6

pinoxaden
DL50
IR
11
29
2,6
14
1,3
18
1,6
DL50
IR
-

ALS
Flucarbazone
DL50
IR
7,3
7,7
1,1
6,2
0,8
6,4
0,9
DL50
IR
13,6
27,2
3
65,3
5,8
20,4
2,5
68,4
2,9

DL50: dosis letal media; IR: ndice de resistencia

Ballica (L. multiflorum y L. rigidum). En ballica, trabajando con 15 biotipos de L.
multiflorum ( LM-6, LM-16, LM-19, LM-20, LM-22, LM-26, LM-27, LM-28, LM-29,
LM-30, LM-31, LM-33, LM-34, LM-45, LM-54) y 4 de L. rigidum (LR-10, LR-23, LR24, LR-25) y aplicando cada herbicida inhibidor de ACCasa e inhibidor de ALS en una
dosis superior al 50% de la recomendada, se encontr resistencia a ambos grupos de
herbicidas (Tabla 5).
La mayora de los biotipos de L. multiflorum presentaron resistencia a los herbicidas
ACCasa del grupo FOP diclofop, clodinafop y haloxyfop, aproximadamente la mitad
present resistencia a los herbicidas del grupo DIM tepraloxydim y clethodim, mientras
que un bajo porcentaje de biotipos fue resistente a pinoxaden (grupo DEN). Ms de la
mitad de los biotipos de L. multiflorum tambin present resistencia a los ALS, aunque
fue ms generalizada a los herbicidas iodosulfuron y iodosulfuron+mesosulfurons del
grupo de las sulfonilureas que al herbicida flucarbazone del grupo de las
sulfonilcarbonil-triazolinonas (Tabla 5). En bioensayos de dosis respuesta en los
biotipos de L. multiflorum LM-16, LM-19 y LM-20, se confirm en todos la resistencia
al herbicida ACCasa clodinafop (FOP), sin embargo todos fueron sensibles a
tepraloxydim (DIM) y slo uno de los tres biotipos fue resistente a pinoxaden (DEN).
Por otra parte, dos de los tres biotipos fueron resistentes a los herbicidas ALS
flucarbazone y iodosulfuron+mesosulfuron. El nivel de resistencia fue alto a diclofop y

flucarbazone y ms bajo a iodosulfuron+mesosulfuron, mientras que leve a pinoxaden

(Tabla 6). KUK et al. (2008) trabajando con 25 biotipos de L. multiflorum provenientes
del Sur de EE.UU. encontraron que la mayora de los biotipos fueron resistentes a los
FOP, un 20% a pinoxaden (DEN) y sensibles a los DIM. Slo un biotipo fue resistente a
ALS.
En los biotipos de L. rigidum tambin se encontr resistencia a los ACCasa y ALS. Sin
embargo, los cuatro biotipos fueron resistentes a los herbicidas ALS flucarbazone y
iodosulfuron+mesosulfuron y a los herbicidas ACCasa diclofop (FOP) y haloxifop
(FOP) (Tabla 5). En bioensayos de dosis respuesta en los biotipos de LR-10 y LR-25, se
confirm en ambos la resistencia a diclofop, flucarbazone y iodosulfuron +
mesosulfuron. Cabe destacar que el biotipo LR-25 present un alto nivel de resistencia
a todos los herbicidas ACCAsa y ALS evaluados (Tabla 6). HEAP y KNIGHT (1990)
sealan que una caracterstica de la resistencia en L. rigidum, es la resistencia cruzada a
herbicidas con otro modos de accin. BROSTER y PRATLEY (2006), en la principal
zona productora de trigo en el sur Australia, encontraron que la mayora de los biotipos
de L. rigidum (77%) fueron resistentes a FOP y un porcentaje menor (22%) resistente a
DIM.
Los resultados obtenidos en los biotipos de L. multiflorum y L. rigidum provenientes de
la zona sur tienen gran importancia, ya que de continuar la evolucin de resistencia a
ACCasa y ALS, las opciones de herbicidas disponibles para controlar los biotipos
resistentes podran llegar a ser muy limitadas en el corto plazo en trigo y otros cultivos
extensivos.

Tabla 5. Porcentaje de los biotipos de ballica resistentes a los herbicidas inhibidores de

ACCasa y ALS.
ACCasa
Maleza
gramnea
L. multiflorum
L. rigidum

dic
85
100

FOPs
clo
92
75

hal
100
100

DIMs
tep
cle
57
60
50
50

DEN
pin
33
50

ALS
Sulfunilureas
iod
iod+mes
80
73
100
100

ST
flu
50
100

dic: diclofop; clo: clodinafop; hal: haloxyfop; tep: tepraloxydim; cle: clethodim; pin:
pinoxaden; iod: iodosulfuron; iod+mes: iodosulfuron+mesosulfuron; flu: flucarbazone.
n.e: indica no evaluado.

Tabla 6. ndices de resistencia de los biotipos de ballica a los herbicidas inhibidores de

ACCasa y ALS.

L. multiflorum
Sensible
LM-16
LM-19
LM-20
L. rigidum

Sensible
LR-10
LR-25

diclofop
DL50
IR
26,2
>3360
128
>3360
128
2470
94
DL50
IR

28

>3360

128
128

>3360

ACCasa
tepraloxydim
DL50
IR
7,08
6,3
0,9
5,6
0,8
4,8
0,7
DL50
IR

pinoxaden
DL50
IR
6,6
12,6
1,9
25,0
3,8
13,6
2,1
DL50
IR

Flucarbazone
DL50
IR
2,6
2,9
1,1
>632
>243
>632
>243
DL50
IR

Iod+mes
DL50
IR
2,5
2,76
1,1
21,4
8,6
96,6
39
DL50
IR

14,5
20,6
740

16,6
18,6
>300

1,2
18

37,2
130
>632

7,2
>144
37

ndice

de

resistencia;

DL50:
dosis
letal
media;
iodosulfuron+mesosulfuron.

1,4
51

IR:

ALS

3,5
17

5,1
20

iod+mes:

Resistencia a glifosato
Antes de la siembra de los cultivos, el herbicida ms utilizado durante muchos aos para
controlar malezas gramneas y hoja ancha, anuales y perennes, ha sido glifosato, un
inhibidor de la enzima 5-enolpiruvilshikimato-3-fosfato sintasa (EPSFs) introducido a
fines de los setenta. La inhibicin de la EPSFs reduce la sntesis de los aminocidos
aromticos (fenilalanina, tirosina y triptfano), lo cual altera la produccin de protenas
y previene la formacin de compuestos secundarios. Durante muchos aos se pensaba
que la resistencia a glifosato nunca iba a ocurrir, atribuible a sus propiedades nicas,
tales como mecanismo de accin, metabolismo, estructura qumica y falta de actividad
residual en el suelo (BRADSHAW et al, 1997). Sin embargo, desde que se confirm el
primer caso de resistencia a glifosato en Lolium rigidum, en Australia (PRATLEY et
al., 1996), se han reportado nuevos casos en 16 especies de malezas en diversos pases
(HEAP, 2009). En Chile, se han documentado siete biotipos resistentes a glifosato,
todos en ballica (L. multiflorum). Los primeros biotipos (dos) se detectaron en viedos
en la zona central (PREZ y KOGAN 2003) y en barbecho qumico (uno) para cereales
en la zona sur (ESPINOZA et al., 2005). Los otros biotipos (cuatro) se detectaron en
cultivos de trigo en la zona sur (ESPINOZA et al., 2008) (Tabla 7).
En la zona sur, el primer biotipo de L. multiflorum resistente a glifosato fue Vil-1,
detectado en la localidad de Vilcn, Regin de La Araucana, desde un sitio con un
historial de aplicaciones reiteradas de glifosato (12 veces durante el periodo 19892001), antes de sembrar trigo o avena con labranza cero y mnima. En bioensayos de
dosis respuesta este biotipo present resistencia a los herbicidas ALS iodosulfuron y
flucarbazone (ESPINOZA et al., 2005; VALVERDE, 2007). Los ltimos biotipos de L.
multiflorum resistente a glifosato corresponden al LM-30, LM-33, LM-45 y LM-54
(Tabla 7). En bioensayos de dosis respuesta realizados en LM-30, LM-33, LM-45, se
encontr que los tres biotipos fueron resistentes a haloxyfop, dos biotipos fueron
resistentes a tepraloxydim y un biotipo fue resistente a clethodim. Los tres biotipos
fueron resistentes al ALS iodosulfuron, aunque la resistencia fue baja, excepto en un
biotipo. Ninguno de los biotipos fue resistente a la mezcla de herbicidas ALS
imazamox+imazapyr. La resistencia mltiple a glifosato y a herbicidas con otros

mecanismos de accin les confiere a estos biotipos de L. multiflorum chilenos una

caracterstica particular, ya que en el mundo no se ha reportado (HEAP, 2009).

Tabla 7. Biotipos de L. multiflorum resistentes a glifosato en el sur de Chile.

Biotipo
Vil-1
LM-30
LM-33
LM-45
LM-54

Ubicacin
Vilcn, Regin de La
Araucana
Purranque, Regin de
los Lagos
San Juan de la Costa,
Regin de Los Lagos
Perquenco, Regin de
La Araucana
Lautaro, Regin de
La Araucana

Situacin
de colecta
Barbecho
qumico
Trigo

Ao de
colecta
2000

Ao de
confirmacin
2002

Nivel de
resistencia
4,6

2006

2008

> 68

Trigo

2006

2008

22

Cebada

2007

2008

Trigo

2007

2008

9,2

Tabla 8. ndices de resistencia a herbicidas inhibidores de ACCasa y ALS de los

biotipos de ballica (L. multiflorum) resistentes a glifosato.
Biotipo
Sensible
LM-30
LM-33
LM-45

haloxyfop
DL50
IR
13,3
>248
71
>248

>19
5,4
>19

ACCasa
tepraloxydim
DL50
IR
14
63
15
134

4,5
1,1
9,6

ALS
clethodim
DL50
IR
18,4
205
20
140

11
1,1
7,4

iodosulfuron
DL50
IR
3.5
10.1
9.6
21.1

2,9
2,8
6

Imax+imar
DL50
IR
0.2
0.23
0.28
0.2

1,2
1,4
1,1

DL50: dosis letal media; IR: ndice de resistencia; imax+imar: imazamox+imazapyr

Principales causas
Sistema de cultivo. El sistema de cultivo practicado por los agricultores durante las dos
ltimas dcadas, se ha caracterizado fundamentalmente por un uso intensivo de cultivos
anuales, tendencia al monocultivo de cereales principalmente trigo y siembra con
labranza cero (Figura 5). Esto ha implicado una dependencia absoluta del herbicida
glifosato para controlar malezas antes de la siembra y de los herbicidas ACCasa y ALS
despus de la siembra. Lo anterior ha significado incrementar la frecuencia de uso de
los mismos herbicidas o con igual modo de accin para controlar malezas gramneas.
En Chile, el trigo es el cultivo anual ms importante, sin embargo la superficie
sembrada se concentra entre las regiones del Bio Bio y La Araucana (Figura 6),
cultivndose casi en su totalidad bajo condiciones de secano. En la actualidad, la
superficie sembrada alcanza las 280.00 ha (ODEPA, 2009).

10

100
90
80

Frecuencia(%)

70
60
50
40
30
20
10
0
Labranza

Cerolabranza

Mixto

Figura 5. Sistema de siembra ms utilizada en los ltimos 5-10 aos en el sur de Chile.
(DAZ y ESPINOZA, 2006). Los datos fueron obtenidos de una encuesta realizada a
agricultores con malezas gramneas resistentes en sus campos de las regiones Del Bio
Bio, La Araucana, Los Rios y Los Lagos.

Trigo

Avena

Cebada

Raps

Lupino

Superficieconcultivosanuales(Hectreas)

120000
100000
80000
60000
40000
20000
0

DelBoBo

LaAraucana

LosRios

LosLagos

Figura 6. Superficie sembrada con cultivos anuales en la zona sur. Cifras obtenidas del
VII Censo nacional agropecuario.

11

Caractersticas de los herbicidas ACCasa y ALS. En muchos casos, las malezas han
evolucionado resistencia a los herbicidas inhibidores de la enzima acetil-CoA
carboxilasa (ACCasa) e inhibidores de la enzima acetolactato sintasa (ALS), despus
de cinco e incluso menos aos de uso (MALLORY-SMITH et al., 1990; TARDIF,
1993). Durante los ltimos 27 aos se han reportado 36 especies de malezas gramneas
resistentes a herbicidas ACCasa en el mundo (HEAP, 2009). Por otra parte, en slo 22
aos, 102 especies desarrollaron resistencia a ALS, de las cuales 21 son gramneas. El
gran nmero de especies y la velocidad con que se ha desarrollado resistencia a los
ACCasa y ALS explican que estos herbicidas sean considerados de alto riesgo para el
desarrollo de resistencia (MOSS, 2007). Segn FISHER et al. (2008) la resistencia a
ACCasa y ALS es frecuente y rpida de seleccionar debido a que son posibles muchas
mutaciones.
Desde su introduccin, a fines de los 70, los herbicidas ACCasa se han utilizado
ampliamente para el control pos-emergente de malezas gramneas en trigo, cebada,
lupino y canola en el pas (Tabla 9). Antes de que se confirmara la resistencia a ellos,
los ms utilizados en trigo fueron diclofop y clodinafof, y en cultivos de dicotiledneas
como canola y lupino fueron haloxyfop y fluazifop butil, entre otros ACCasa. Los
herbicidas ALS con accin de control de malezas gramneas en pos-emergencia y
recomendados en trigo y otros cereales, son de reciente introduccin, ya que el primero
fue iodosulfuron, introducido recin en 2001 (Tabla 10). Los ALS tambin se han
empleado masivamente desde su introduccin al pas debido a que representan una
alternativa para el control eficaz de biotipos de malezas gramneas resistentes a los
ACCasa. Lamentablemente, las malezas gramneas no slo han evolucionado resistencia
a ALS sino que tambin ms rpidamente. Al respecto, es importante sealar que en el
sur del pas tard aproximadamente 10 aos de uso continuado para que se desarrollara
resistencia a ACCasa en ballica y avenilla. Por el contrario, antes de la comercializacin
del ALS iodosulfuron, ya existian algunos biotipos de ballica resistentes a l.
Tabla 9. Herbicidas ACCasa utilizados en cereales y otros cultivos.
Nombre
comn
diclofop
haloxyfop
fluazifop
clodinafop
clethodim
tepraloxydim
pinoxaden

Nombre comercial
Cascabel 28 EC, Iloxan 28 EC
Galan Plus
Hache Uno 2000 175 EC
Topik 240 EC, Hummer 240 EC
Centurin 240 EC
Aramo
Axial 050 EC

Grupo
qumico
FOP
FOP
FOP
FOP
DIM
DIM
DEN

Ao de
introduccin
1978
1985
1987
1990
1998
2005
2007

12

Tabla 10. Herbicidas ALS utilizados en cereales.

Nombre
Nombre
Grupo qumico
comn
comercial
iodosulfuron metil sodio Hussar 20 WG,
Sulfunilureas (SU)
Ovassion 5.26 WP
flucarbazone
Vulcano 70% WG Sulfonil-aminocarboniltriazolinona
iodosulfuron metil sodio Cossack 150 WG Sulfunilureas (SU)
+ mesosulfuron
imazamox+Imazapyr
Eurolightning
Imidazolinonas (IMI)
pyroxulam
Admitte
Triazolopirimidinas

Ao de
introduccin
2001
2002
2004
2008
2008

Caractersticas de las malezas. Las caracteristicas inherentes a cada especie de msaleza

gramnea (A. fatua, L. multiflorum, L. rigidum y L. multiflorum), las que ya fueron
analisadas, han contribuido tambin de modo importante en la evolucin de resistencia.

Agradecimientos
Parte de los trabajos realizados fueron financiados por el Proyecto FONDEF D04i1022.

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16

MECANISMOS DE RESISTENCIA DE LAS MALEZAS A LOS HERBICIDAS

J. L. De Prado, H. Cruz-Hipolito y R. De Prado

Universidad de Crdoba, Campus de Rabanales, Crdoba, Espaa qe1pramr@uco.es

Resumen: La introduccin de las auxinas sintticas fue una revolucin en la agricultura

mundial para controlar las malas hierbas dicotiledneas en cereales. A partir de ese
momento las compaas de agroqumicos invirtieron cuantiosas sumas en producir
nuevos herbicidas para controlar diferentes especies de malas hierbas en distintos
cultivos. Sin embargo, una de las desventajas del uso de estos productos es la evolucin
de malas hierbas resistentes a herbicidas. La ltima revisin realizada por el Dr. Ian
Heap (2009) seala 331 biotipos resistentes pertenecientes a 189 especies, de las cuales
113 son dicotiledneas y 76 monocotiledneas, distribuidas en ms de 300.000 campos.
El conocimiento de los procesos biolgicos responsables de la resistencia a herbicidas
en una determinada mala hierba es fundamental para el diseo de una estrategia de
control. Dependiendo del tipo de mecanismo de resistencia detectado, la mala hierba
presentar un patrn especfico en su tolerancia a herbicidas que podr variar desde un
alto grado de resistencia a determinados compuestos de una misma familia qumica, a
una moderada resistencia a un amplio espectro de herbicidas. La resistencia a herbicidas
puede deberse a dos mecanismos bsicos, aquellos referidos al sitio de accin por
prdida de afinidad entre la protena de enlace y el herbicida o por una sobreexpresin
de esa protena. El segundo grupo de mecanismos bsicos pertenecen a aquellos donde
no est involucrado el sitio de accin, tambin llamados mecanismos por exclusin del
herbicida, principalmente debido a un incremento de la detoxificacin metablica del
herbicida en productos no txicos y en una falta de absorcin / penetracin del herbicida
y posterior prdida de transporte va xilema / floema del herbicida a la protena de
enlace. En el presente capitulo se realiza una revisin de los mecanismos involucrados
en la resistencia de las plantas a los herbicidas, haciendo mayor referencia a aquellos
que no estn involucrado al sitio de accin.
Palabras clave: Resistencia, herbicidas, malezas, mecanismos, sitio de accin.
Summary: Mechanism of herbicide resistance in weeds. The introduction of synthetic
auxins caused a revolution in the agricultural world in the effective and economic
control of broad-leaved weeds in cereals. From that moment on, agrochemical
companies invested huge sums in producing new herbicides to control different weed
species in different crops. However, one of the disadvantages of the continued use of
these products was the evolution/selection of weeds tolerant/resistant to herbicides. The
last review made by Dr. Ian Heap (2009) pointed to 331 resistant biotypes belonging to
189 species, 113 of which are dicotyledons and 76 monocotyledons, distributed over
more than 300,000 places in the world. Knowledge of the biological processes
responsible for resistance to herbicides in a specific weed is fundamental for the design
of a control strategy. Depending on the type of resistance mechanism detected, the
weed will present a certain pattern in its tolerance to herbicides, which may vary from a
high degree of resistance to specific compounds of a chemical family to a moderate
resistance to a wide spectrum of herbicides. Herbicide resistance may be due to two
basic mechanisms; those referring to the target site, either from a loss of affinity
1

between the linking protein and the herbicide, or from an overexpression of that protein.
The second group of basic mechanisms belong to those in which the target site is not
involved, also called herbicide exclusion mechanisms, mainly because of an increase in
the metabolic detoxification of the herbicide in non toxic products and of a lack of
absorption/penetration of the herbicide and a subsequent loss of transport via the
xylem/phloem of the herbicide at the linking protein. In this chapter a review of the
mechanisms involved in the resistance of plants to herbicides is made, making a greater
reference to those not involved in the target site.
Key words: Resistance, herbicides, weeds, mechanisms, target sites.

Introduccin
Durante la dcada de 1940, la introduccin de los herbicidas auxnicos, mostr a los
agricultores el potencial de los herbicidas para controlar las malas hierbas de hoja ancha
en cultivos herbceos. El uso de estas auxinas sintticas indujo a las compaas de
agroqumicos, a invertir en investigacin para sintetizar nuevas molculas para distintos
cultivos y malas hierbas. La comprobada eficacia de los herbicidas modernos les
permite a los agricultores producir sus cultivos de forma reiterada y rentable en los
mismos terrenos y optimizar sus ingresos. Sin embargo, una de las desventajas del uso
de estos productos es la evolucin de malas hierbas resistentes a herbicidas.
Aunque existen un nmero de herbicidas generales o totales que resultan activos frente
a cualquier tipo de planta, no cabe duda que, hoy da, los ms importantes tanto
cualitativa como cuantitativamente, son los herbicidas especficos o productos capaces
de controlar un amplio espectro de malas hierbas sin afectar a los cultivos a los que se
aplican. La selectividad puede deberse a causas fsicas o, ms frecuentemente,
bioqumicas (JGER, 1983), siendo en este ltimo caso consecuencia de las diferencias
genticas existentes entre distintas especies vegetales. Tal accin selectiva supone que
determinadas especies de plantas cultivadas, y tambin de malas hierbas, son capaces de
vivir y crecer a las dosis recomendadas de aplicacin agrcola del herbicida, aunque
puedan ser controladas a dosis varias veces superiores. Este tipo de respuesta se conoce
generalmente como tolerancia natural y ha sido definida por la HRAC (Herbicide
Resistance Action Committee) como la habilidad/aptitud heredable de una especie
vegetal a sobrevivir y reproducirse despus de un tratamiento, pudiendo considerarse
como una caracterstica a nivel de especie. Sin embargo, la variabilidad gentica puede
darse de forma intraespecfica. Debido a este hecho y como consecuencia de la presin
selectiva impuesta por la aplicacin continuada de herbicidas que caracteriza a los
modernos sistemas de produccin agrcola, es posible el desarrollo de biotipos de malas
hierbas que dejan de ser controlados por un determinado producto al que originalmente
eran susceptibles. Tal respuesta se conoce generalmente como resistencia, siendo una
caracterstica adquirida por una poblacin (biotipo) de una especie que careca de ella y
ha sido definida por la HRAC como la habilidad/aptitud heredable de una especie
vegetal a sobrevivir y reproducirse despus del tratamiento de un herbicida a dosis
normalmente letales para la misma especie susceptible. En una planta, la resistencia
puede ocurrir de una forma natural o puede ser inducida por tcnicas como la
ingeniera gentica o seleccin de variantes resistentes obtenidas por cultivos de tejidos
o mutagnesis. Esta definicin, bastante completa en s, presenta el problema de que se
asume que la resistencia est asociada nicamente a factores de tipo fisiolgico y/o
morfolgico (MAXWELL y MORTIMER, 1994). A diferencia de las plantas tolerantes,

las resistentes suelen sobrevivir no slo a las dosis de aplicacin agrcola del herbicida
sino a otras bastante superiores (DE PRADO et al., 1996).
El trmino de tolerancia se usa frecuentemente no slo para referirse a variaciones
entre especies, sino tambin en relacin con la variabilidad dentro de una especie
(LEBARON y GRESSEL, 1982). En este caso, tolerancia y resistencia son expresiones
que denotan diferencias en intensidad de un mismo fenmeno, considerndose la
resistencia como un caso extremo y menos frecuente de tolerancia (HOLT y
LEBARON, 1990) o considerando la tolerancia un mecanismo polignico y la
resistencia uno monognico (GRESSEL, 1985).
El trmino resistencia suele ir adjetivado con diversos modificadores que hacen alusin
a la posible pluralidad existente tanto en los mecanismos de resistencia que posee un
individuo como en los herbicidas a los que ste es resistente. Surgen as los conceptos
de resistencia cruzada y resistencia mltiple. Dependiendo de los autores
consultados, estas definiciones se asociarn a mecanismos de resistencia (JUTSUM y
GRAHAM, 1995):
-

Resistencia cruzada: Aquella por la que un individuo es resistente a dos o ms

herbicidas debido a un solo mecanismo de resistencia.

Resistencia mltiple: Aquella por la que un individuo posee ms de un mecanismo

de resistencia a uno o varios herbicidas.

La resistencia cruzada negativa se refiere a aquellos casos en que un biotipo resistente

a un herbicida exhibe un aumento en la sensibilidad a otros herbicidas con distinto
modo de accin o de degradacin (DE PRADO et al., 1992). Por ltimo, los cultivos
resistentes a herbicidas, son cultivos que poseen genes insertos que les confieren
resistencia a cierto herbicida al que haban sido previamente sensibles.
Las caractersticas de las malas hierbas y del herbicida influyen en la tasa de evolucin
de la resistencia. En el caso de la mala hierba, las caractersticas ms importantes son la
frecuencia de genes, el tamao y la viabilidad del banco de semillas del suelo y la
adaptabilidad al medio. En el herbicida se deben considerar factores como eficacia,
dosis, frecuencia de aplicacin y persistencia en el suelo. La importancia relativa de
estos factores se ha tratado de determinar mediante el uso de modelos (GRESSEL y
SEGEL, 1990; MORRISON y FRIESEN, 1996). Estos modelos y la experiencia
prctica indican que el factor principal en la evolucin de la resistencia es la presin de
seleccin impuesta por el herbicida. En la prctica, la presin de seleccin depende de la
dosis de herbicida utilizada, su eficacia y la frecuencia de aplicacin. Por lo tanto, se
puede disminuir la presin de seleccin mediante la aplicacin de mezclas de herbicidas
con distintos mecanismos de accin y degradacin que sean eficaces contra el mismo
espectro de malas hierbas (WRUBEL y GRESSEL, 1999). La rotacin de herbicidas
basados en estos mismos criterios tambin atena la presin de seleccin. Los
herbicidas persistentes imponen una mayor presin de seleccin que los no persistentes.
La disminucin de la dosis de herbicida puede agravar los problemas en vez de
disminuirlos porque puede propiciar la seleccin de resistencia polignica, es decir la
resistencia que depende de ms de un gen y se manifiesta como un incremento
progresivo en el grado de resistencia de la planta de una generacin a la siguiente
(COUSENS y MORTIMER, 1995).

Cada especie tiene una constitucin gentica particular y se considera que los genes de
resistencia estn presentes en las poblaciones silvestres, aunque en una proporcin muy
baja. Si la presin de seleccin asociada a la frecuencia de uso es la misma para dos
herbicidas, entonces la frecuencia inicial de genes influir sobre el tiempo requerido
para que se detecten individuos resistentes. Se estima que la frecuencia de genes de
resistencia a las triazinas, que se heredan a travs del genoma de los plstidos, es de
aproximadamente 10-8 (GRESSEL, 1991), mientras que la de las sulfonilureas es de
alrededor 10-6 (CHALEFF y DAY, 1984). Esta proporcin se incrementa conforme la
presin de seleccin aumenta por el uso continuado del mismo herbicida o de
compuestos que pertenecen a la misma familia qumica o que comparten el mismo
modo de accin, o de herbicidas que son metabolizados de manera similar en la planta.
A medida que aumenta la tasa de mortalidad obtenida con el herbicida, aumenta
tambin la presin de seleccin. El tiempo requerido para que se reconociera la
resistencia a clorsulfurn y simazina en el campo fue de 3-5 aos y 10 aos,
respectivamente, lo que refleja la estimacin inicial de la frecuencia de genes
(MAXWELL y MORTIMER, 1994).
La ltima revisin realizada por HEAP (2009) (www.weedscience.com) seala 331
biotipos resistentes pertenecientes a 189 especies, de las cuales 113 son dicotiledneas y
76 monocotiledneas distribuidas en ms de 300.000 campos (Tabla 1).
Tabla 1. Resumen de malezas resistentes a herbicidas (HEAP, 2009).
Grupo de herbicidas

Modo de Accin

Inhibidores de la ALS

Inhibicin de la acetolactato
sintetasa ALS (acetohidroxicido
sintetasa AHAS)
Inhibicin de la fotosntesis en el
fotosistema II
Inhibicin de la acetil coenzima
carboxilasa (ACCasa)
Auxinas sintticas (como la accin
del cido indolactico AIA)
Desviacin del flujo electrnico en
el fotosistema I
Inhibicin de la fotosntesis en el
fotosistema II
Inhibicin de la EPSP sintasa
Inhibicin de la unin de los
microtbulos en la mitosis
Inhibicin de la sntesis de los
lpidos (no ACCasa)
Decoloracin: inhibicin de la
sntesis de los carotenoides (punto
desconocido)
Inhibicin de la protoporfiringeno
oxidasa (PPO)
Inhibicin de la divisin celular

Inhibidores del
Fotosistema II
Inhibidores de la
ACCasa
Auxinas Sintticas
Bipiridilos
Ureas y Amidas
Glicinas
Dinitroanilinas y
otros
Tiocarbamatos y
otros
Triazoles, Ureas,
Isoxazolidionas
Inhibidores de la PPO
Cloroacetamidas y
otros

Grupo
HRAC
B

Ejemplo de
Herbicidas
Clorsulfuron

Total
101

C1

Atrazina

68

36

Diclofopmetil
2,4-D

Paraquat

24

C2

Clorotoluron

21

G
K1

Glifosato
Trifluralina

16
10

Trialato

F3

Amitrol

Oxifluorfen

Butaclor

K3

28

Inhibidores de la
biosntesis de
Carotenoides
Acidos
arilaminopropinicos
Nitrilos y otros
Inhibidores de la
Mitosis
Inhibidores de
celulosa
Desconocido

Decoloracin: inhibicin de la
sntesis de los carotenoides a nivel
de la fitoeno desaturasa (PDS)
Desconocido

F1

Flurtamon

Inhibicin de la fotosntesis en el
fotosistema II
Inhibicin de la mitosis

C3

Flampropmetil
Bromoxinil

K2

Profam

Diclobenil

(cloro) flurenol
MSMA

Inhibicin de la sntesis de la pared

celular (celulosa)
Desconocido

Organoarsenicales
Desconocido
Nmero total de biotipos resistentes.

1
331

El conocimiento de los procesos biolgicos responsables de la resistencia a herbicidas

en una determinada mala hierba es fundamental para el diseo de una estrategia de
control (FISCHER, 2008; POWLES, 2009). Dependiendo del tipo de mecanismo de
resistencia detectado, la mala hierba presentar un patrn especfico en su tolerancia a
herbicidas que podr variar desde un alto grado de resistencia a determinados
compuestos de una misma familia qumica, a una moderada resistencia a un amplio
espectro de herbicidas. Asimismo el conocimiento de estos mecanismos nos permitir
prever la posible respuesta de la poblacin resistente al conjunto de mecanismos
qumicos/mecnicos/culturales seleccionados para su control, la efectividad a corto y
largo plazo de los mismos y la posible aparicin de nuevos problemas. Actualmente hay
ms de 900 plaguicidas y casi 600 ingredientes activos en el mercado (HALL et al.,
2001). Millones de toneladas de plaguicidas se aplican anualmente, se ha estimado que
un pequeo porcentaje de estos productos alcanzan el organismo diana depositando el
resto en el suelo y en otros organismos, as como a la atmsfera y al agua (PIMENTAL
y LEVITAN, 1986).
La degradacin abitica es debida a una transformacin qumica y fsica del plaguicida
por procesos como la fotlisis, hidrlisis, oxidacin y reduccin. Adems, los
plaguicidas pueden no estar disponibles biolgicamente debido a la
compartimentalizacin que ocurre como resultado de una adsorcin del plaguicida al
suelo y a los coloides sin alterar la estructura original de la molcula plaguicida.
Sin embargo, las reacciones enzimticas que son principalmente el resultado de
procesos biticos mediados por plantas y microorganismos es la ruta de detoxificacin
ms importante. Existen al menos cinco mecanismos generales, no necesariamente
excluyentes que podran justificar la resistencia a herbicidas (SHERMAN et al., 1996).
De todos los mecanismos detectados en malezas el/los cambio/s aminoacidico/s que
conlleva un cambio estructural en el sitio de accin (protena) y una perdida de afinidad
por el herbicida, es el mecanismo ms determinante en malezas resistentes (Figura 1).
La sobreexpresion de esta protena no es un mecanismo bien conocido y de forma
natural no ha sido detectado en malezas. Sin embargo si ha sido utilizado en OMG
(Organismos Modificados Genticamente), en cultivos resistentes a glifosato.

Figura 1. Mecanismos de resistencia de las plantas a los herbicidas dependiente del

sitio de accin. En la figura:
representa la protena diana,
la protena diana
modificada y
la molcula herbicida.
La figura 2 muestra el diferente comportamiento de un herbicida entre una planta
sensible y una resistente (R), pudindose observar que en la maleza R cambios
fisiolgicos (cambios en la cutcula y/o menor movimiento del herbicida va xilema o
floema) y/o una mayor actividad enzimtica capaz de inactivar el herbicida hacen que la
maleza sobreviva al herbicida.

Figura 2. Mecanismos de resistencia de las plantas a los herbicidas independiente del

sitio de accin.

Resistencia de sitio de accin

Prdida de afinidad por el sitio de accin. Los herbicidas resultan letales para las
plantas debido a su actuacin sobre un sitio de accin primario, generalmente una
protena, de especial relevancia biolgica (Figura 3 y 5). Este sitio primario suele ser
especfico y la accin del herbicida sobre l (efecto primario), suele conducir al
desarrollo de efectos secundarios, de naturaleza mucho ms general que normalmente
acaban produciendo la muerte de la planta (CORBETT et al., 1994). Una o varias
mutaciones en la secuencia aminoacdica del sitio primario de accin pueden resultar en
una prdida de afinidad del herbicida por ste, imposibilitando la unin efectiva de
ambos e impidiendo as la continuidad del proceso vital mediado por dicho sitio
(GRONWALD, 1994, DLYE et al., 2005, WHALEY et al., 2007). Este tipo de
mecanismo, caracterizado en la mayora de los biotipos resistentes descritos hasta el
momento, se caracteriza por conferir un alto grado de resistencia al herbicida empleado,
pudindose extender sta a otras molculas pertenecientes a la misma familia qumica
(CRUZ-HIPOLITO et al., 2009a).

Resistencia fuera del sitio de accin

Metabolizacin a compuestos no txicas. La degradacin de los herbicidas a
compuestos no fitotxicos es la base de la selectividad que presentan muchas materias
activas en cultivos tolerantes frente a las malas hierbas sensibles (Figura 3). En los
procesos de detoxificacin metablica, entendido como aquellos procesos biolgicos en
los que las molculas fitotxicas son metabolizadas a compuestos inocuos o menos
txicos, los biotipos resistentes son capaces de degradar el herbicida antes de que ste
cause daos irreversibles. La velocidad de degradacin enzimtica puede variar con
factores endgenos y exgenos, tales como el estado de crecimiento de la planta y las
condiciones climticas.

Figura 3. Esquema de secuencias de la entrada de un herbicida desde su absorcin /

penetracin hasta la unin a la protena de enlace y posterior muerte de la planta
(Adaptado de DEVINE et al., 1993).
Los procesos de detoxificacin metablica de herbicidas en tejidos vegetales pueden
dividirse en tres fases (SHIMABUKURO, 1985; HATZIOS, 1991) (Tabla 2). En la fase
I (conversin) las propiedades iniciales del plaguicida de partida son transformadas a
travs de reacciones de oxidacin, reduccin o hidrlisis para producir un compuesto
ms soluble en agua y menos txico. La segunda fase implica la conjugacin del
herbicida o sus metabolitos con un azcar, aminocido o glutatin, incrementando su
solubilidad en agua y reduciendo la toxicidad del compuesto. Generalmente, los
metabolitos formados en la fase II tienen poca o nula fitotoxicidad y pueden ser
almacenados en orgnulos celulares. La fase III implica la transformacin de los
metabolitos de la fase anterior a conjugados secundarios con nula fitotoxicidad
(HATZIOS, 1991). Esta divisin no constituye una regla general dado que alguna de las
fases puede no estar presente en los procesos de detoxificacin; o la molcula herbicida
puede ser un pro-herbicida inactivo que debe ser enzimticamente convertido en un
compuesto activo; o a veces ciertos procesos de conjugacin son de carcter reversible,
por lo que slo afectan de manera parcial a la cantidad de herbicida libre intracelular.

Tabla 2. Resumen de las tres fases del metabolismo de plaguicidas (Adaptado de

SHIMABUKURO, 1985; DE PRADO et al., 2004)
Caractersticas

Fase I

Fase II

Fase III

Reacciones

Propiedades
iniciales
Compuesto inicial

Oxidacin,
hidrlisis,
reduccin

Conjugacin

Conjugacin
secundaria o
incorporacin a
biopolmeros

Solubilidad

Lipoflico

Anfoflico

Hidroflico

Hidroflico o
insoluble

Fototoxicidad

Txico

Modificado o
menos txico

Muy reducida o
no txico

No txico

Movilidad

Selectiva

Modificada o
reducida

Limitada o
inmvil

Inmvil

Fase I o conversin. Si bien algunos herbicidas pueden ser conjugados directamente,

muchos otros no poseen sustituyentes disponibles en sus molculas (grupos amino,
hidroxilo, sulfihidrilo, etc.) que pueden reaccionar para formar conjugados con
constituyentes celulares. Dichos herbicidas debern ser convertidos en metabolitos
mediante algunas de las siguientes reacciones:
1. Hidrlisis: Estas reacciones estn catalizadas por enzimas hidrolticas
(esterasas, fosfatasas o amidasas, dependiendo del sustrato). En las transformaciones
hidrolticas se rompen los enlaces de un sustrato por adicin a cada producto de H u OH
proveniente del H2O. Hay muchas enzimas hidrolticas capaces de metabolizar una gran
variedad de sustratos particularmente aquellos que contienen grupos funcionales amida,
carbamatos o ster. Estas enzimas pueden estar compartimentalizadas o ser
extracelulares y las reacciones pueden ocurrir tanto en condiciones aerobias como
anaerobias. La hidrlisis de enlaces ster de herbicidas han sido ampliamente estudiadas
y revisadas en plantas y microorganismos (INCLEDON y HALL, 1997; HOAGLAND
y ZABLOTOWICZ, 2001). La hidrlisis del enlace ster es llevada a cabo por esterasas
y en menor medida por lipasas y proteasas. Con respecto a la hidrlisis de enlaces
amida el propanil es el herbicida ms estudiado. La base de la selectividad del arroz
(Oryza sativa L.) es debida a los altos niveles que posee de la enzima aril acilamidasa,
las cuales rompen el enlace amida formando cido propinico y 3,4-dicloroanilina
(FREAR Y STILL, 1968).
2. Reducciones: La metabolizacin reductora de herbicidas es un proceso que
raramente se da en plantas, pudindose destacar nicamente la desaminacin reductora
de las s-triazinonas (metamitrona y metribuzina), en cultivos tolerantes y malas hierbas
resistentes (FEDTKE, 1983).
3. Oxidaciones, oxigenaciones e hidroxilaciones: Todas ellas se pueden incluir
dentro del grupo denominado transformaciones oxidativas. La oxigenacin es el primer
paso ms frecuente en la biotransformacin de herbicidas siendo las hidroxilaciones las
ms observadas en plantas. La detoxificacin por hidroxilacin y la posterior formacin

de un conjugado glicsido son especialmente importantes como mecanismo de

selectividad y resistencia a herbicidas en monocotiledneas. Muchas de estas reacciones
estn mediadas por enzimas oxidativas por ejemplo. citocromo P450, que son las
enzimas ms importantes en la primera fase del metabolismo de un herbicida
(BARRETT, 2000) (Figura 4). La regulacin y expresin de P450 no se conocen bien en
plantas, principalmente porque en las clulas que no estn expuestas a ningn tipo de
estrs fisicoqumico, fisiolgico o xenobitico las cantidades que se encuentran de esta
enzima son muy pequeas. Los agroqumicos pueden influir en los sistemas citocromo
P450 actuando como efectores, modificando o regulando as el metabolismo de los
herbicidas en una planta.

Figura 4. Ruta metablica de detoxificacin de isoproturon en Lolium rigidum.

Adems de las enzimas citocromo P450 las plantas producen otras enzimas oxidativas
(peroxidasas, polifenoloxidasas, lacasas y tirosinasas) las cuales catalizan la
polimerizacin de varias anilinas y fenoles (DEC y BOLLAG, 2001). Por ejemplo, las
peroxidasas que median el metabolismo de herbicidas que funcionan de manera similar
a las P450 incluye descarboxilaciones, oxidaciones sulfricas, N-desmetilaciones,
hidroxilaciones del anillo y oxidaciones aromticas del grupo metilo (LAMOUREUX y
FREAR, 1979). En plantas, a menudo las enzimas peroxidasas funcionan en la tercera
fase del metabolismo por ejemplo. formacin de residuos ligados. Amorocia
lapathifolia Gilib. contiene en las races gran cantidad de peroxidasas.
Fase II conjugacin. Los conjugados suelen ser los metabolitos finales en los procesos
de detoxificacin de herbicidas. La naturaleza de estos conjugados suele ser muy
diversa, con azcares, aminocidos, pptidos y lignina como grupos orgnicos y enlaces
de tipo ster, ter, tioter, amida o glicosdico.
1. Conjugacin con glutatin: Constituye un mecanismo de detoxificacin de
gran importancia en muchos tejidos vegetales. Se trata de una sustitucin nucleoflica en
el que el anin glutatin GS- sirve de nuclefilo, actuando los grupos cloro, p-nitrofenol
o alquil-sulfxido como posibles grupos a sustituir en la molcula herbicida
(LAMOUREUX y FREAR, 1987).

10

La conjugacin con glutatin est catalizada por una familia de enzimas glutatin-Stransferasas ms o menos especficas que se encuentran de manera constitutiva o
inducible en muchos tejidos vegetales (DEVINE et al., 1993) (Figura 5).

Figura 5. Ruta metablica de detoxificacin de fenoxaprop-etilo en Lolium rigidum.

2. Conjugacin con aminocidos: De forma general, la hidrlisis del glutatin
en este tipo de conjugados suele producir un conjugado de cistena, el cual puede ser
posteriormente malonizado. Sin embargo, en el caso del herbicida clorfemprop slo el
conjugado de cistena y no el de glutatin ha sido descrito en trigo (PONT Y COLLET,
1980), siendo posible que la cstena pueda actuar como nuclefilo en una reaccin de
conjugacin similar a la descrita en el glutatin.
3. Conjugacin con azcares: Los conjugados glicsidos ms frecuentemente
encontrados en plantas son los -D-glucopiransidos, junto con los N-glicsidos, Oglicsidos y steres de glucosa (Fig. 6). Este tipo de reacciones est catalizada por
glucosil-transferasas que utilizan UDP-glucosa como donante de glucosa (MANSAGER
et al., 1983). De todas estas reacciones, la formacin de O-glucsidos es la ms comn,
la cual sigue normalmente a la introduccin de grupos hidroxilo en la molcula
herbicida por monooxigenacin.

11

Figura 6. Ruta metablica de detoxificacin de pendimetalina en Lolium rigidum

resistente a dinitroanilinas.

Fase III o deposicin. La ruta metablica seguida por un herbicida afecta de gran
manera el uso final de los metabolitos terminales y conjugados. Los conjugados
glicsidos son depositados en la vacuola donde quedan almacenados, mientras que los
conjugados de origen aminoacdico son excretados a la pared celular donde se integran
en el componente de lignina de stas, formando un residuo insoluble (PILLMOOR et
al., 1984) (Figura 7). Si bien estos procesos de deposicin no son completamente
irreversibles, la reentrada de los aglicones herbicidas o sus productos de conversin en
el pool de herbicida activo intracelular es muy lenta (DEVINE et al., 1993). Como
puede observarse en la figura el herbicida una vez que entra en la planta puede ser
metabolizado (activando o desactivando el herbicida) y posteriormente pasar a la
vacuola como material de deshecho o bien directamente pasar a la vacuola donde queda
secuestrado y lentamente degradado.
La resistencia a herbicidas por detoxificacin es un proceso muy frecuente. Sin
embargo, este mecanismo suele venir asociado a fenmenos de resistencia cruzada, lo
que implica que un mismo individuo tiene la capacidad de metabolizar molculas muy
diferentes pertenecientes a diversas familias qumicas. Esta moderada resistencia a un
amplio espectro de productos hace extremadamente difcil el control de estos biotipos
de malas hierbas mediante el slo uso de mtodos qumicos.
Resistencia asociada a procesos de secuestracin o compartimentacin. Los
fenmenos de compartimentacin entendidos como la secuestracin del herbicida o sus
metabolitos en un lugar especfico de la clula, son mecanismos de
resistencia/tolerancia poco conocidos debido a que las evidencias que los apoyan son en
muchos casos circunstanciales (COUPLAND, 1991; OWEN, 1991). Los escasos casos
en la bibliografa relacionan este tipo de mecanismos de resistencia con herbicidas de
accin hormonal e inhibidores del fotosistema I, justificando la resistencia tanto en
lneas de cultivos celulares como en plantas enteras como un incremento en la
capacidad de secuestrar el herbicida o los metabolitos potencialmente fitotxicos dentro
de la vacuola celular (Figura 7). Sin embargo, los procesos subyacentes a estos
mecanismos de secuestracin son todava desconocidos.

12

Figura 7. Rutas metablicas de detoxificacin de herbicidas en malezas (Adaptado de

DE PRADO y FRANCO, 2004). A: reacciones no sintticas (oxidacin, reduccin,
hidrlisis); B: reacciones sintticas (naturaliza qumica del herbicida se modifica); C:
secuestracin del herbicida. Cyt P450: Citocromo P450; GT: glicosil transferasas; GST:
glutatin-S-transferasas;
: Molcula herbicida.

Reduccin de la concentracin de herbicida en el sitio de accin. Una condicin

necesaria para lograr la efectividad de un herbicida es que ste alcance su sitio de accin
en una concentracin suficiente como para que su efecto sea letal. La falta de
movimiento de un herbicida posibilitar reducir la concentracin de ste en el sitio de
accin, lo que permitir al ltimo mantenerse funcional. Estas bajas concentraciones
pueden lograrse ya sea mediante una reduccin en la penetracin, absorcin o
translocacin o por la existencia de fenmenos de secuestracin en orgnulos celulares
ms o menos translocables. La falta de absorcin/penetracin/translocacin de
herbicidas es bsicamente un mecanismo de tolerancia existente en numerosos cultivos
y algunas malas hierbas (HESS, 1985; DE PRADO et al., 2001; MICHITTE et al.,
2004; RUIZ-SANTAELLA et al., 2006; CRUZ-HIPOLITO et al., 2009b) (Tabla 2 y
Figura 8). Aun cuando pueden estudiarse por separado, estos mecanismos resultan
difciles de diferenciar entre s, dado que una absorcin diferencial suele implicar una
translocacin diferencial, y una translocacin diferencial puede derivar de la diferente
degradacin del herbicida en el sitio de absorcin, la cual resulta en metabolitos ms o
menos translocables.

13

Figura 8. Penetracin y translocacin de 14C-glifosato en plantas sensibles (izquierda) y

tolerantes (derecha) a glifosato (CRUZ-HIPOLITO et al., 2009b). Las zonas coloreadas
en rojo indican el movimiento de 14C-glifosato.

Reparacin de efectos fitotxicos. Algunos herbicidas ariloxifenoxipropanoatos

(inhibidores de la enzima acetil coenzima A carboxilasa), como diclofop-metil y
haloxifop, despolarizan el potencial de la membrana plasmtica en clulas
parenquimticas de Avena sativa, Triticum aestivium, Lolium rigidum, etc. La capacidad
despolarizadora del diclofop-metil se atribuye al flujo especfico de protones que este
compuesto produce hacia el interior de la clula (SHIMABUKURO y HOFFER, 1997)
(Figura 9). Recientemente han sido identificados biotipos de malas hierbas cuyo
mecanismo de resistencia al diclofop-metil parece ser debido a la capacidad de recobrar
el potencial de membrana una vez que se ha retirado el herbicida causante de la
despolarizacin (DE PRADO et al., 1999).

14

Figura 9. Representacin grafica de los mltiples efectos ocurridos en gramneas

tratadas con diclofop-metil (Adaptado de SHIMABUKURO y HOFFER, 1997).

Agradecimientos
Este trabajo ha sido financiado por el M.E.C (proyecto AGL2007-0835). Parte de este
capitulo pertenece a la Tesis Doctoral de Don Jos L. De Prado Ruiz-Santaella.

Bibliografa

BARRETT, M. (2000). The role of cytochrome P450 enzymes in herbicide metabolism.

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COUSENS, R. ; MORTIMER, M. (1995). Dynamics of weed populations, Cambridge
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COUPLAND, D. (1991). The role of compartmentation of herbicides and their
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15

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SE RELACIONA LA EVOLUCIN DE LOS MECANISMOS MULTIFACTORIALES

DE RESISTENCIA A HERBICIDAS CON LA TOLERANCIA AL ESTRS?

Albert J. Fischer1; Danijela Pavlovic2; Hagai Yasuor1; Aldo Merotto Jr3.

1
University of California, Davis - Department of Plant Sciences, One Shields Ave., Davis, CA
95616, ajfischer@ucdavis.edu
2
Institute for Plant Protection and Environment, Teodora Drajzera 9, Belgrade;
3
UFRGS - Faculdade de Agronomia. Av. Bento Gonalves, 7712. Cep 90501-970. Porto Alegre,
RS.

Resumen: La Echinochloa phyllopogon es una de las principales malezas resistentes a herbicidas en

cultivos de arroz en Califrnia. Esta resistencia ocurre simultneamente para diferentes herbicidas
tiocarbamatos e inhibidores de la ACCasa y ALS. Los biotipos resistentes tambin presentan
elevada tolerancia a la inundacin, resistencia baja a clomazone y menor susceptibilidad a paraquat.
Un biotipo de Chenopodium album sobrevivente a atrazina en campos de maz de Serbia expresa
tolerancia al estrs hdrico y resistencia baja a atrazina. Ambos tipos de estrs causan dao
fotooxidativo en plantas. La resistencia a herbicidas en estos biotipos es causada por mecanismos
multifatoriales ajenos al sitio activo (ASA) que confieren elevada capacidad de detoxificacin de
herbicidas y posiblemente por otros mecanismos. Los sistemas cloroplsticos de fotoproteccin y
las enzimas detoxificadoras pueden conferir proteccin cruzada a estreses causados por el ambiente
y por compuestos xenobiticos fotooxidativos. Por esto se hipotetiza que estos complejos
mecanismos de resistencia ASA pueden representar una sobre regulacin de las respuestas a estrs
en biotipos adaptados a diversos ambientes estresados. Esta tolerancia cruzada puede estar sujeta a
un control gentico complejo, y bajos niveles de resistencia en plantas individuales pueden
incrementarse por acumulacin de genes menores o amplificacin gnica bajo seleccin recurrente
a dosis subletales de herbicida. El manejo de malezas en ambientes estresados debe contemplar
estrategias a priori a fin de contener la evolucin de la resistencia causada por mecanismos ASA y
para evitar que se evolucione de resistencias de bajo nivel hacia elevados niveles de resistencia
ASA a herbicidas.
Palabras clave: Echinochloa phyllopogon, Chenopodium album, tolerancia a la inundacin,
detoxificacin, bajo nvel de resistencia.
Summary: Can the evolution of multifactorial herbicide resistance relate to stress tolerance?
Echinochloa phyllopogon represents one of the worst herbicide resistance cases in a major crop
weed and seriously compromises rice production in California. Resistance occurs simultaneously
for several thiocarbamate, ACCase and ALS inhibitors. These R biotypes also exhibit enhanced
submergence tolerance, low-level clomazone resistance, and low paraquat sensitivity. Moisture
stress tolerance and low atrazine sensitivity was documented in a Chenopodium album biotype
surviving in Serbian atrazine-treated corn fields. Both types of stresses cause photooxidation
damage to plants. These multifactorial non target-site (NTS) herbicide resistances result from
enhanced detoxification and possibly other mechanisms. Chloroplast photoprotective systems and
stress-inducible detoxifying enzymes can confer cross-protection to both environmental and
xenobiotic photooxidative stresses. Therefore, it could be hypothesized that these complex NTS
resistances may represent a general up-regulation of stress tolerance responses in biotypes adapted
to various environmental stresses. These cross tolerances may involve complex genetic control,
and low level-resistance endowed by multiple genes can evolve higher resistance levels under
repeated treatment with sub-lethal herbicide rates. Weed management in stressful environments
should a priori contemplate strategies to delay NTS resistance evolution and to avoid low-level
resistance evolution into higher NTS resistance levels.
1

Keywords: Echinochloa phyllopogon, Chenopodium album, submergence tolerance, enhanced

detoxification, low-level resistance.

Introduccin
Setenta aos de monocultivo continuo en California ha llevado a serias infestaciones de ciertas
malezas muy dainas de las cuales la Echinochloa phyllopogon (Stapf) Koss, E. oryzoides (Ard.)
Fritsch y E. crus-galli (L.) Beauv. var. crus-galli son las ms competitivas y difciles de controlar.
El control de malezas en arroz ha dependido fuertemente en el empleo repetido de los pocos
ingredientes activos disponibles, lo cual ha llevado a la evolucin de resistencia en la mayora de
las especies problemticas. La resistencia de E. phyllopogon hacia la mayora de los herbicidas que
la pueden controlar representa uno de los problemas ms graves para la produccin de arroz en
California (FISCHER et al., 2000). Varios niveles de resistencia son observables y bajos niveles de
resistencia son frecuentes con clomazone que mata a las plantas al exponer a los cloroplastos a
dao fotoactivo (tal como el que causan las formas de oxgeno reactivo, FOR) (FERHATOGLU y
BARRETT, 2006). Recientemente se ha documentado resistencia de bajo nivel a la atrazina (cuya
toxicidad es generada por dao de FOR) en Chenopodium album L. (PAVLOVIC et al., 2008), lo
cual podra sugerir elementos en comn con el caso de E. phyllopogon. Discutiremos aqu (a)
mecanismos de resistencia ajenos al sitio activo (ASA) en E. phyllopogon proveniente de arrozales
de California b) resistencia a herbicidas generadores de FOR en E. phyllopogon y C. album, y c) la
hiptesis de que la resistencia tipo ASA y la tolerancia a estreses ambientales puede estar
relacionada y tener implicancias para el manejo de la resistencia a herbicidas.

Generacin de la informacin
Se investigaron mecanismos de resistencia en E. phyllopogon mientras se realizaban estudios
paralelos relacionando caractersticas morfo-fisiolgicas con sensibilidad a la atrazina en un biotipo
de Chenopodium album con tolerancia a atrazina colectado en campos de maz en Serbia. Estos
trabajos involucraron estudios de anlisis de crecimiento, cuantificacin de absorcin y
translocacin de herbicidas marcados con 14C, estudios de respuesta a dosis en plantas, ensayos
enzimticos de sensibilidad en el sitio activo (ALS, ACCasa) y de metabolismo de herbicidas
(actividad y contenido de citocromo P450, perfiles metabolmicos). La diseminacin de biotipos de
E. phyllopogon con resistencia a mltiples herbicidas en California se estudi usando marcadores
AFLP. Para estudiar la resistencia a herbicidas fotooxidativos se cuantificaron niveles de pigmentos
foliares y la emisin de fluorescencia cloroflica (Fv/Fm). Los procedimientos detallados de estos
estudios aparecen en la bibliografa oportunamente citada en este trabajo.

Principales resultados y sus implicaciones

Resistencia en Echinochloa phyllopogon. Varios niveles de resistencia simultnea a tiocarbamatos
(molinato, tiobencarbo), inhibidores de ACCasa (cihalofop y fenoxaprop), inhibidores de ALS
(bispiribac, penoxsulam, bensulfuron, orthosulfamuron), y clomazone estn presentes en biotipos
de E. phyllopogon (FISCHER et al., 2000). Propanil controla a la E. phyllopogon resistente (R)
con menor eficacia que a los biotipos susceptible (S). Elevadas tasas de detoxificacin mediatizadas por actividad P450- le confieren resistencia a bispiribac-sdico (la cual se detect
incluso antes de que el herbicida estuviera disponible en California) as como tambin bajos niveles
de resistencia a penoxsulam. Tasas metablicas incrementadas (P450, conjugacin con glutatin y
cistena), as como quizs tambin bajas tasas de absorcin foliar, confieren resistencia a R-E.
phyllopogon (E. phyllopogon resistente) contra herbicidas inhibidores de la ACCasa (BAKKALI et
2

al., 2007; RUIZ-SANTAELLA et al., 2006). Resistencia a nivel del sitio de accin (SA) an no se
haba encontrado, pero recientes estudios con quinclorac sugieren que R-E. phyllopogon tiene poca
elevacin de la biosntesis de etileno en respuesta a quinclorac. Esto puede estar relacionado con
alteracin de la percepcin y transduccin de la seal auxnica de este herbicida; R-E phyllopogon
tambin tiene elevada actividad de la enzima -cianoalanina sintetasa encargada de detoxificar al
cianuro resultante de la biosntesis de etileno y tambin una elevada capacidad de detoxificar
quinclorac via P450. Es decir R-E. phyllopogon exhibe una verdadera resistencia multifactorial tipo
ASA hacia este herbicida (MILAN et al., 2009). El metabolismo de tiocarbamatos involucra
bioactivacin mediatizada por P450 hacia una forma ms txica previa detoxificacin final de este
herbicida via conjugacin (USUI, 2001). Estudios metabolmicos sugieren importantes diferencias
fisiolgicas entre biotipos R y S (Figura 1) (YASUOR y FISCHER, 2008). Dado que los biotipos
R-E. phyllopogon se habran originado de una nica introduccin fundacional de acuerdo a un
estudio efectuado usando marcadores AFLP (TSUJI et al., 2003), todas esas plantas exhiben los
mismos patrones de resistencia conferidos por esos diversos mecanismos enzimticos
mencionados, entre las que se destaca la actividad inducible de diversas isoenzimas P450 altamente
activas y con especificidad hacia mltiples sustratos que son capaces de detoxificar a diversos
herbicidas (YUN et al., 2005) (Tabla 1). Los bajos niveles de resistencia a clomazone en R-E.
phyllopogon (Figura 2) reflejan de forma similar su baja sensibilidad al paraquat ( Figura 3) lo que
resultaba en menores daos cloroplsticos en plantas R comparadas con plantas S (YASUOR et al.,
2008). La presumible falta de metabolismo de paraquat en plantas no puede explicar estas
respuestas. La adicin de glutatin aliviaba el dao de paraquat en las plantas S mucho ms que en
las R, lo cual sugera que proteccin contra fotooxidacin por FOR lograda a travs del ciclo
acorbato/glutatin podra estar involucrada en la baja sensibilidad al paraquat del biotipo R
(FISCHER et al., 2008). La menor efectividad del propanil sobre R-E. phyllopogon ciertamente
involucra mayor actividad P450 dado su participacin en el metabolismo parcial de este herbicida y
sera lgico tambin pensar que los sistemas de proteccin elevada contra FOR podran estar
tambin operando en este caso tambin.

Figura 1. Grfico de anlisis cannico discriminante resultante del anlisis RP-LC-MS/MS de

plantas de Echinochloa phyllopogon tratadas con clomazone (50M) mostrando la clara separacin
del metaboloma de un biotipo susceptible (S) y otro resistente (R) a clomazone y a mltiples
herbicidas (YASUOR y FISCHER, 2008).

Tabla 1. Metabolismo incrementado e inducido por pre-tratamiento con herbicidas: actividad de

monooxigenasas P450 en fracciones microsomales aisladas de tallos de plantas E. phyllopogon
susceptibles y resistentes a mltiples que fueran previamente tratadas con bispiribac-sdico, o
fenoxaprop-etilo, o con tiobencarbo. (Adaptado de YUN et al., 2005).
Actividad P450 c
Sustrato
(pmol mg-1 protein min-1) (SE)
plantas R
plantas S
Bispiribac-sdico *
33.3 0.5b
11.0 0.2a
BispiribacFenoxaprop-etilo
0.0a
0.0a
sdico
Tiobencarbo
0.0a
0.0a
Bispiribac-sdico
0.0a
0.0a
FenoxapropFenoxaprop-etilo *
246.7 5.7d
143.3 14.9b
etilo
Tiobencarbo *
37.5 1.1b
22.7 5.3a
Bispiribac-sdico
0.0a
0.0a
Tiobencarbo
Fenoxaprop-etilo
0.0a
0.0a
Tiobencarbo *
297.1 5.5e
245.2 2.6c
a
Las plantas fueron pre-tratadas con 1M de cada herbicida durante 24h antes de ser muestreadas.
b
Bispiribac-sdico, fenoxaprop-etilo y tiobencarbo (0.1, 0.25 and 0.25 mM, respectivamente)
fueron agregados al medio como sustratos de hidroxilacin. Asteriscos (*) indican significancia
estadstica entre un par de medias R y S dentro de una hilera segn la mnima diferencia
significativa protegida de Fisher para P < 0.05.
c
Dentro de cada column alas medias seguidas por una misma letra no difieren estadsticamente
segn la diferencia honestamente significativa de TukeyKramer para P < 0.05.
Pre-tratmiento
Herbicida a

Figura 2. Respuesta a dosis de clomazone por una accesin de Echinochloa phyllopogon

susceptible y otra resistente a mltiples herbicidas. Cada punto representa una media ES (n =
10). Lneas punteadas representan el ndice de confianza al 95% de las ecuaciones de regresin.

Figura 3. Respuesta a dosis de paraquat en un biotipo de Echinochloa phyllopogon susceptible

(S) y otro resistente (R) a multiples herbicidas que fueran tratados hidropnicamente con el
herbicida al estado de 2-3 hojas (YASUOR et al., 2008)
Baja sensibilidad a la atrazina y tolerancia al estrs hdrico en Chenopodium album. La atrazina
era capaz de suprimir sustancialmente a este biotipo de C. album colectado en Serbia (VC), no
obstante su altura, emisin Fv/Fm, y su transpiracin slo se reducan en un 60% comparado con
0% y 100% para los testigos S y R, respectivamente (PAVLOVIC et al., 2008). El fuerte
decrecimiento inicial de la emisin del cociente de fluorescencia cloroflica Fv/Fm ces en el
biotipo VC tres das despus del tratamiento con atrazina (Figura 4), lo cual sugera que el proceso
de detoxificacin de atrazina o de proteccin contra FOR facilitara la sobrevivencia del biotipo VC
en campos de maz tratados con atrazina. A su vez, esta mitigacin de la fotoinhibicin por atrazina
se aunaba a una adaptacin al estrs hdrico, que seguramente este biotipo deba sufrir bajo la
competencia del maz, mediante la limitacin del rea foliar expuesta a la demanda
evapotranspiratoria, bajas tasas transpiratorias, y un mayor control del cierre estomtico (Tabla 2).
La evolucin de resistencia a mltiples herbicidas en E. phyllopogon se asocia a un uso prolongado
de herbicidas tiocarbamato bajo estrs de submergencia dadas las condiciones del cultivo de arroz
en California, donde la inundacin permanente se implementa para suprimir malezas. Estos
biotipos resistentes tambin presentan baja sensibilidad o resistencia hacia ciertos herbicidas
fototxicos (paraquat, clomazone). Se sabe que la resistencia a paraquat puede conferir a ciertas
7

plantas una tolerancia cruzada al estrs fotooxidativo proveniente de la accin de herbicidas o de

efectos ambientales; sistemas enzimticos protectores o activos transportadores de membrana
pudieran estar implicados en esta tolerancia cruzada (GRESSEL, 2002). La baja sensibilidad a
atrazina observada en C. album, que recin comentamos, tambin coincida con una adaptacin al
estrs ambiental evolucionada como adaptacin a condiciones clidas con probables limitaciones
de humedad. E. phyllopogon ha co-evolucionado en Asia con el arroz bajo estrs de inundacin
por muchos aos y posee un elevado nivel de tolerancia a la anoxia por sumersin comparado con
otras especies del mismo gnero u otras malezas del arroz; recientemente hemos observado tambin
que biotipos R de esta maleza tienen mayor tolerancia a la submersin que plantas S (FISCHER,
datos sin publicar). Ambos tipos de estrs (sumersin y sequa) exponen a las plantas al dao por
fotooxidacin (SANTOSA et al., 2007). Sistemas enzimticos inducidos por estrs para detoxificar
FOR, transportadores de membrana, enzimas P450 y de conjugacin pueden estar involucrados en
conferir proteccin cruzada hacia estrs fotooxidativo, tanto el que proviene del ambiente como el
que es causado por ciertos herbicidas (WERCK-REICHHART et al., 2000; TAKEZAWA et al.,
2002). Por esta razn puede ser lgico plantearse la hiptesis de que estas resistencias tipo ASA a
herbicidas comentadas puedan representar una situacin de sobre-regulacin general de respuestas
al estrs en biotipos que han evolucionado adaptacin a determinados estreses ambientales.
Transportadores de membrana (como los cassettes ligados al ATP o transportadores ABC) pueden
incluso conferir tolerancia a mltiples herbicidas tal como se observa en E. phyllopogon
(GRESSEL, 2002). Es posible que estos mecanismos puedan estar bajo el control de varios genes.
Dosis sub-letales de herbicidas aplicados recurrentemente pueden seleccionar por resistencia tipo
ASA cuando individuos que sobreviven al tratamiento merced a un nivel bajo de resistencia son
portadores de genes menores de resistencia, los cuales se acumulan en sus progenies gracias a la
segregacin y recombinacin gentica que ocurre cuando plantas vecinas logran hibridar (NEVE y
POWLES, 2005; BUSI y POWLES, 2009). De forma similar, la resistencia multifactorial ASA
puede ocurrir en especies autgamas como consecuencia de duplicaciones y amplificacin gnica a
lo largo del tiempo (GRESSEL, 2002).
Los mecanismos existentes de resistencia cruzada entre agentes xenobiticos y estreses
ambientales sugieren que el manejo de malezas en ambientes estresados debe contemplar medidas
para retardar la evolucin de resistencia ASA de tipo multifactorial. La resistencia de bajo nivel es
ignorada con frecuencia y es posible de evolucionar hacia niveles ms elevados de resistencia ASA
bajo el efecto de recurrentes dosis herbicdicas subletales, tal como puede ocurrir cuando se omite
el control de especies de emergencia tarda al tiempo que los residuos de herbicida (pre-emergente)
en el suelo han declinado, cuando se aplican herbicidas fuera de tiempo sobre plantas ya demasiado
grandes (equivale a aplicar una dosis subletal), cuando no se calibran bien los equipos aspersores, o
cuando se implementas programas de control a baja dosis. Por otra parte, sera vlido preguntarse
si la seleccin hacia resistencia a herbicidas (por uso recurrente de herbicidas) podra favorecer al
mismo tiempo la evolucin de biotipos altamente tolerantes a los estreses ambientales y por
consiguiente con mayor efecto nocivo de maleza? Estudios metabolmicos podran permitirnos
descubrir relevantes rutas metablicas que estuvieran involucradas en la tolerancia a estreses y en la
resistencia a herbicidas y, as, sugerir nuevas estrategias de manejo de malezas y tambin conducir
al desarrollo de nuevos y ms efectivos herbicidas. El conocimiento adicional sobre los
mecanismos de resistencia ASA podra guiarnos hacia mejores formas de manejar la resistencia
mediante la rotacin de herbicidas, buscando aquellos que no slo difieran en su modo de accin
sino que tambin se detoxifiquen o sean secuestrados en la planta por mecanismos diferentes. A
su vez, este conocimiento tambin podra ser til para el desarrollo de cultivos con amplio espectro
de resistencia a herbicidas, o para modificar plantas para uso en bioremediacin y detoxificacin
ambiental de sustancias xenobiticas (MORANT et al., 2003; INUI y OHKAWA, 2005; YAZAKI ,
2006). La gran complejidad de la resistencia tipo ASA en plantas (YAZAKI, 2006; YUAN et al.,
2007) y en animales (HIGGINS, 2007) revela el rol esencial que cumple el manejo integrado de

malezas, con menor dependencia en herbicidas, para retrasar la evolucin de biotipos de malezas
con resistencia a herbicidas.

Figura 4. Mximo rendimiento cuntico de fluoredescencia cloroflica (Fv/Fm) medido en tres

biotipos de Chenopodium album (S = susceptible a atrazina, R = resistente a atrazina, y VC =
proveniente de Veliki Crljeni, Serbia) varios das posteriores a un tratamiento con 2 kg i.a. ha-1 de
atrazina. Las barras verticales en cada punto son error estndar de la media. (Adaptado de
PAVLOVIC et al., 2008).
Tabla 2. Anlisis de varianza y contrastes ortogonales para variables de crecimiento, mnima
resistencia estomtica a la difusin del vapor de agua (MRD) y tasas transpiratorias medidas 22
das despus de plantar tres biotipos de Chenopodium album (S = susceptible a atrazina, R =
resistente a atrazina, y VC = proveniente de Veliki Crljeni, Serbia).

Biotipo

N de hojas
planta-1

rea foliar
(cm2 plant-1)

MRD
(s cm-1)

Tasa de traspiracin
(micro g cm-2 s-1)

S
VC
R

8.250.96 a a
6.500.58 b
7.500.31 ab

24.502.52 a
18.001.63 b
23.001.18 a

0.630.14 b
2.821.26 a
0.670.04 b

8.771.67 b
5.981.32 c
17.150.63 a

P>F
0.038
0.011
0.003
<0.0001
Error estndar
0.400
1.230
0.367
0.767
G.L. del error= 9
a
Medias (ES) seguidas por una misma letra no difieren estadsticamente segn contrastes
ortogonales efectuados para P = 0.05, los cuales se condujeron solamente cuando el efecto del
factor biotipo result significativo (P 0.05) en la prueba del anlisis de varianza.

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ESTRATEGIAS DE MANEJO DE MALEZAS GRAMNEAS RESISTENTES A

HERBICIDAS EN TRIGO Y OTROS CULTIVOS EXTENSIVOS EN EL SUR
DE CHILE

N. Espinoza1, J. Daz1, R. Galdames1 y C. Rodrguez1

INIA Carillanca, Temuco, Chile, email: nespinoz@inia.cl

Resumen: En el sur de Chile, principal zona productora de trigo (Triticum aestivum),

avena (Avena sativa), cebada (Hordeum vulgare), raps canola (Brassica napus) y
lupino (Lupinus angustifolius), el desarrollo de resistencia en malezas gramneas como
ballica (Lolium multiflorum y L. rigidum), avenilla (Avena fatua) y cola de zorro
(Cynosurus echinatus) hacia los herbicidas ACCasa y ALS ha sido creciente a partir de
la dcada del 90. La resistencia a glifosato en L. multiflorum es ms reciente, sin
embargo est aumentando rpidamente. Es muy probable que la resistencia contine
incrementndose, de no existir cambios que signifiquen uso de rotaciones adecuadas de
cultivos, rotaciones o mezclas de herbicidas con diferentes mecanismos de accin, pero
principalmente una menor dependencia de los herbicidas antes y despus de la siembra.
Para esto es fundamental que los agricultores no sigan considerando la labranza cero
como algo absoluto, que nunca puede modificarse, crean ms en las bondades de los
herbicidas pre-emergentes para controlar malezas gramneas como ballica y cola de
zorro, incluyendo los biotipos resistentes, y que los agricultores estn realmente
dispuestos a implementar programas de prevencin y control integrado de malezas en
sus campos.
Palabras claves: avenilla, ballica, cola zorro, herbicidas, resistencia.
Summary: management strategies of weeds grasses resistant to herbicides in wheat and
others extensive crops in south of Chile. In the south of Chile, the main area for wheat
(Triticum aestivum), oat (Avena sativa), barley (Hordeum vulgare), canola (Brassica
napus) and lupine (Lupinus angustifolius), the resistance development of grass weed
like ryegrass (Lolium multiflorum y L. rigidum), wild oat (Avena fatua) and hedgehog
dogtai (Cynosurus echinatus) toward the herbicides ACCasa and ALS has been frequent
since the nineties. In recent years, the development of L. multiflorum resistant to
glifosato is acquiring a growing importance. It is very likely that the resistance continue
to rise in the absence changes mean that use of appropriate rotations crop rotations, or
mixtures of herbicides with different mechanisms of action, but mainly less dependence
on the herbicides before and after seeding. It is also essential that farmers do not
continue considering the zero tillage as something absolute, which can never be
amended, create more in the virtues of herbicides pre-emerging to control weeds grasses
and ryegrass and hedgehog, including biotypes resistant and farmers are really willing
to implement prevention programs and integrated control of weeds in their fields.
Keywords: wild oat, ryegrass, hedgehog dogtail, herbicides, resistance.

Introduccin
En los sistemas de cultivos de altos insumos alrededor del mundo, generalmente los
agricultores no adoptan medidas preventivas para evitar o retrasar el desarrollo de
resistencia a herbicidas. Comnmente, stas son adoptadas slo despus que la
resistencia se ha desarrollado (BECKIE y GILL, 2006). Lo anterior es debido a que los
costos y esfuerzos para prevenir o retrasar el desarrollo de la resistencia a herbicidas son
percibidos como similares a los relacionados con el manejo de una resistencia ya
confirmada. Tambin puede deberse al inters por parte de los agricultores de optimizar
en el corto plazo el retorno econmico o simplemente por la incapacidad para evaluar
los riesgos asociados con las malezas resistentes (ROTTEVEEL et al., 1997). La baja
adopcin de prcticas de manejo tambin puede deberse a la ausencia de herbicidas
alternativos o con diferente mecanismo de accin o de diferentes grupos qumicos, para
controlar las malezas problemas o por expectativas poco realistas en el sentido de que
nuevas tecnologas de herbicidas podran estar disponibles en el futuro (LLEWELLYN
et al., 2002). El costo de prevenir la resistencia es significativamente menor al costo de
manejarla una vez que se ha desarrollado totalmente, principalmente cuando la
resistencia se presenta a diferentes grupos de herbicidas o cuando quedan pocos
herbicidas disponibles para controlar las malezas resistentes (ORSON, 1999). El
principal costo directo de la resistencia puede ocurrir durante el primer ao de
deteccin, debido al deficiente control de la maleza resistente y la consecuente prdida
de rendimiento del cultivo (PETERSON, 1999). Malezas con alto potencial para
producir semillas como ballica (L. rigidum, L. multiflorum) (BOSQUE et. al., 2002),
pueden incrementarse rpidamente en el campo como consecuencia de un deficiente
control debido a la resistencia y, por lo tanto, ocasionar prdidas importantes en el
rendimiento de trigo. La resistencia dificulta el manejo adecuado de las malezas y
adems de incrementar los costos de produccin, aumenta la carga ambiental de
herbicidas cuando el deficiente control de la maleza resistente obliga a usar dosis ms
altas o repetir la aplicacin.
En el sur de Chile, principal zona productora de trigo, avena, cebada, raps canola y
lupino, el desarrollo de resistencia en malezas gramneas como ballica (Lolium
multiflorum y L. rigidum), avenilla (Avena fatua) y cola de zorro (Cynosurus echinatus)
hacia los herbicidas ACCasa y ALS ha sido creciente a partir de la dcada del 90. Por
otra parte, en los ltimos aos tambin se ha confirmado la resistencia en L. multiflorum
al herbicida glifosato (Espinoza et al 2005; Espinoza et al 2008). En el presente trabajo
se analizan los factores de riesgo para el desarrollo de resistencia a herbicidas y las
estrategias para prevenirla o atrasarla, con nfasis en el manejo de herbicidas para la
agricultura con cultivos extensivos del sur del pas.

Factores que determinan un rpido desarrollo de la resistencia a los herbicidas

El factor ms importante en la evolucin de resistencia de las malezas a los herbicidas
es un sistema de manejo en el cual el uso repetido de un solo herbicida o de varios
herbicidas con el mismo sitio de accin, proporcionan una continua presin de seleccin
(JASIENIUK et al., 1996). Por lo tanto, para evitar o retrasar la evolucin de
resistencia, es necesario limitar la presin de seleccin, controlar las plantas resistentes
antes que ellos se dispersen y disminuir la proporcin de individuos resistentes del
banco de semillas del suelo. Otros factores, tales como las caractersticas de los

herbicidas y la biologa de las malezas tambin juegan un importante rol en determinar

la rapidez de la resistencia.

Caractersticas de los herbicidas

Herbicidas con un solo sitio de accin. Los herbicidas que tienen un solo sitio de accin
tienen ms probabilidades de que se genere resistencia a ellos en relacin a aquellos que
afectan a varios procesos. Por ejemplo, en muchos casos las malezas han evolucionado
resistencia a los herbicidas inhibidores de ACCasa e inhibidores de ALS despus de
cinco e incluso menos aos de uso (MALLORY-SMITH et al., 1990). Esto contrasta
con los antiguos herbicidas reguladores del crecimiento tipo auxinas con sitios de
accin menos especficos, lo que se ha traducido en poca resistencia a ellos, despus de
un uso prolongado (HEAP, 2009).
Herbicidas muy eficaces para controlar las malezas. Cuando el nivel de control de las
malezas susceptibles es alto, la presin de seleccin tambin aumenta y, por lo tanto, la
probabilidad de que escapen individuos resistentes. Por ejemplo, al aplicar un herbicida
que controla un 95% de las plantas susceptible mantendr pocas de ellas para la
siguiente generacin, en comparacin con un herbicida que controla un 70%. Esto
mismo ocurre con herbicidas que tienen un largo efecto residual (POWLES et al.,
1997).
Aplicacin frecuente. El riesgo de resistencia es mayor cuando se emplea el mismo
herbicida repetidamente en el mismo cultivo, mismo potrero y las mismas malezas por
un largo tiempo (GRESSEL y SEGEL, 1990). La prdida de los beneficios normales de
la labranza del suelo favorece el desarrollo de malezas resistentes, debido a que la
labranza elimina a las malezas resistentes que escapan a las aplicaciones de herbicidas y
proporciona un mecanismo para mezclar y diluir semillas resistentes con la poblacin
original de malezas (susceptibles) (VILA-AIUB et al., 2005).

Biologa de la maleza
Ciclo de vida. La resistencia de los herbicidas aparece ms frecuentemente en malezas
anuales. Debido a que las malezas anuales slo se reproducen por semillas el potencial
para transferir la resistencia a la prxima generacin es relativamente alta (OWEN,
2001). Las malezas anuales se caracterizan tambin por producir un elevado nmero de
semillas por planta, lo que aumenta el material gentico que est presente en el banco de
semillas y, por lo tanto, la probabilidad a que aparezca un gen mutado).
Longevidad de la semilla. Si el suelo es cultivado, las semillas de vida larga de
poblaciones susceptibles que estaban enterradas diluirn la poblacin de semillas
resistentes y la resistencia podr ser atrasada. Por otra parte, las semillas que
permanecen en la superficie del suelo y tienen una vida corta (con o sin dormancia)
morirn o germinarn dentro de unos pocos aos. Por esta razn, en los sistemas con
cero labranza que dejan semillas de malezas en la superficie del suelo, estas
corresponden principalmente a semillas resistentes, ya que las susceptibles germinan y
son controladas con el herbicida.

Practicas de manejo para prevenir o minimizar la seleccin de malezas resistentes

a herbicidas
Las prcticas de manejo siguientes ayudaran a reducir la presin de seleccin ejercida
por la aplicacin de un solo herbicida o de herbicidas con el mismo mecanismo de
accin:
Alternando mtodos no qumicos de control de malezas con herbicidas. Ayuda a
reducir la presin de seleccin de los herbicidas. Sin embargo, las prcticas de control
no qumicas de malezas pueden ser limitadas en nmero y/o traducirse en resultados
poco eficaces de control de malezas.
Mezclando herbicidas con diferentes mecanismo de accin. Las mezclas de herbicidas
en el estanque del aspersor o el tratamiento secuencial (el mismo ao) de herbicidas con
diferentes mecanismo de accin retarda el desarrollo de resistencia (DIGGLE et al.,
2003). Las plantas que escapan a un herbicida ser controlado por el otro herbicida. Para
implementar esta prctica se asume que ambos herbicidas tienen accin de control sobre
la maleza objetivo.
Rotando herbicidas con diferentes mecanismos de accin. La rotacin de herbicidas
con diferente mecanismo de accin ao a ao puede retrasar la resistencia. Sin embargo,
esta tcnica puede ser menos eficaz que el uso de mezclas en el estanque y/o las
aplicaciones secuenciales en el mismo ao, ya que parte la poblacin sobrevivir el ao
en la que se usa el otro herbicida con diferente mecanismo de accin (DIGGLE et al.,
2003; POWLES et al., 1997).
Rotando cultivos. Puede retrazar la resistencia siempre y cuando los herbicidas usados
tengan diferentes mecanismos de accin y los otros mtodos de control difieran para
cada cultivo (POWLES et al., 1997).
Conteniendo la infestacin resistente en cuanto aparezca. Una maleza resistente
presenta la misma amenaza que una maleza nueva e invasora y al no ser controlada se
favorece su diseminacin. Las prcticas de control diferentes a la aplicacin estndar
del herbicida, como por ejemplo arrancar a mano y aplicar en manchas (forma
localizada) con otros herbicidas ayudarn a eliminar las plantas que escaparon.
Otras prcticas. Las siguientes prcticas culturales tambin pueden hacer muy tiles
para prevenir o atrasar la resistencia. Incluye el: uso de semilla certificada; limpieza de
todo tipo de maquinaria agrcola, tanto de preparacin del suelo como de cosecha, para
evitar el transporte y dispersin de las semillas de malezas de un campo a otro; retraso
en la siembra para que puedan emerger las malezas y poder controlarlas en una o ms
oportunidades, ya sea con herbicidas y/o mecnicamente; quema de rastrojo, donde sea
recomendable y permitido, para reducir la viabilidad de las semillas de malezas
existentes en el suelo.
Un resumen de los principales factores que afectan la evolucin de resistencia de las
malezas a los herbicidas, se incluyen en la Tabla 1.

Tabla 1. Prcticas agrcolas y su relacin con los riesgos de desarrollo de resistencia a

los herbicidas. Espinoza, N. Adaptado y traducido de HRAC. (Comit Accin de
Resistencia a Herbicidas. 2002.
Prcticas Agrcolas
Rotacin de herbicidas o
mezclas de herbicidas
empleadas

Riesgo de resistencia
Bajo
Moderado
Alto
Con ms de 2
Con 2
Con 1
mecanismos de mecanismos de mecanismo de
accin
accin
accin

Mtodos de control de malezas

utilizados

Cultural*,
mecnico y
qumico

Cultural y
qumico

Solamente
qumico

Frecuencia de uso de herbicidas

con el mismo mecanismo de
accin por temporada

Una vez

Ms de una vez

Varias veces

Rotacin de cultivos utilizada

Rotacin
amplia

Rotacin
limitada

Monocultivo

Referencia sobre la resistencia a Desconocida

ese mecanismo de accin

Limitada

Frecuente

Nivel de infestacin de malezas Bajo

en los potreros o cultivos

Moderado

Alto

Control en los ltimos 3 aos

Disminuyendo

Deficiente

Bueno

* El control cultural puede implicar labranza del suelo, quema de restrojos, cultivos competitivos, semilla
certificada, etc.

Deteccin de malezas resistentes en el campo

Para verificar la presencia de malezas resistentes en campo, debe ponerse especial
atencin a las posibles fallas ocurridas durante la aplicacin del herbicida, ya que
normalmente tienen un patrn definido. Es lo que ocurre cuando no hay un cubrimiento
completo del objetivo entre una pasada y la siguiente del equipo aspersor (Figura 1) o
por la ausencia de traslape entre los abanicos de aspersin entre boquillas como
consecuencia del atascamiento de las boquillas, barra porta boquillas demasiado baja o
boquillas con un ngulo muy pequeo. Por otra parte, debe conocerse el espectro de
control y la eficacia del herbicida, ya que el deficiente control podra deberse a que la
maleza es tolerante. Si hay escapes, es importante observar si algunas plantas de la
misma especie estn afectadas y otras que estn alrededor no. Cuando la resistencia esta
comenzando es comn encontrar entre plantas vecinas de la misma especie algunas
severamente afectadas por el herbicida y otras no (Figura 2). La resistencia tambin
puede manifestarse como la capacidad de rebrote de las plantas moderadamente

afectadas, por lo tanto, es importante que la visita al campo se haga en el momento

oportuno.

Figura 2. Plantas de ballicas sensible

(color caf) y resistente (color verde).
Figura 1. Franja de avenilla en trigo debido a la falta
de traslape durante la aplicacin del herbicida

Herbicidas selectivos disponibles para controlar malezas gramneas en trigo y

otros cultivos clasificados segn su mecanismo de accin
La rotacin de herbicidas como estrategia para manejar la resistencia, se basa en que no
deben usarse todos los aos en el mismo campo o potrero, herbicidas con igual
mecanismo de accin para controlar las mismas malezas. Por lo tanto, esta estrategia es
altamente dependiente de que exista disponibilidad y diversidad de herbicidas para los
agricultores. En Chile los herbicidas recomendados para controlar malezas gramneas en
trigo, cebada, avena, triticale, lupino y raps canola, agrupados segn su mecanismo de
accin, se indican en el Tabla 2. Esta clasificacin es la propuesta por el HRAC
(Herbicide Resistance Action Committee). Algunos herbicidas como los del grupo A
(herbicidas ACCasa) controlan solamente malezas gramneas, mientras que los
herbicidas del grupo B (herbicidas ALS), grupo N (inhibidores de la sntesis de cidos
grasos, no ACCasa), grupo C1 (inhibidores de la fotosntesis en el fotosistema II), grupo
C2 (inhibidores de la fotosntesis en el fotosistema II), grupo K1 (inhibidores de la unin
de los microtbulos en la mitosis) y grupo K3 (inhibidores de la divisin celular)
controlan malezas gramneas y de hoja ancha.
De acuerdo a la informacin contenida en la Tabla 2, en trigo hay ms posibilidades de
rotar herbicidas con diferentes mecanismos de accin para controlar malezas gramneas
que en el resto de los cereales, ya que en trigo hay seis grupos de herbicidas de los
cuales elegir, mientras que en cebada y triticale hay cuatro grupos de herbicidas, y en
avena slo un grupo. Es importante sealar que, exceptuando los grupos A (ACCasa) y
B (ALS) que corresponde a herbicidas pos-emergentes, el resto de los grupos (N, C1,
C2, K1 y K3) corresponde a herbicidas pre-emergentes. Otro aspecto importante es que
los grupos A y B estn representados por numerosos herbicidas, por el contrario el
grupo N por slo prosulfocarb, el grupo C1 por simazina, el grupo C2 por diuron e
isoproturon, el grupo K1 por trifluralina y pendimetalina y el grupo K3 por flufenacet.
En avena, al contrario del resto de los cereales, no se recomiendan herbicidas del grupo
6

A y B o pos-emergentes, y el nico herbicida recomendado con accin en malezas

gramneas es diuron del grupo C2.
En cultivos de hoja ancha o dicotiledneas como raps canola y lupino, hay dos y tres
grupos de herbicidas disponibles, respectivamente (Tabla 2). Especficamente en raps
canola pueden utilizarse herbicidas de los grupos A, K1 y K3. El grupo K1 est
representado por trifluralina, empleado de presiembra e incorporado en el suelo y de
pre-emergencia, mientras que el grupo K3 est representado por metazachlor,
recomendado en pre y pos-emergencia temprano. En lupino pueden utilizarse herbicidas
del grupo A y C1. El grupo C1 est representado por simazina recomendado en preemergencia.
En la zona sur, la resistencia de malezas gramneas a los ACCasa es ms generalizada a
los herbicidas del grupo qumico FOP que a los DIM y DEN. Por esta razn, la
alternancia de herbicidas de grupos qumicos distintos tambin podra ser una estrategia
til para prevenir o atrasar la resistencia. En la Tabla 3, se incluye la clasificacin de los
herbicidas ACCasa y ALS segn su grupo qumico.

Tabla 2. Herbicidas disponibles para controlar malezas gramneas en trigo y otros cultivos extensivos agrupados segn mecanismo de accin.
TRIGO
diclofop metil
clodinafop propargil
pinoxaden

CEBADA

AVENA

TRITICALE

GRUPO A (ACCasa). Pos-emergentes

diclofop metil

diclofop metil
pinoxaden

LUPINO
Clethodim
fluazifop-p-butil
haloxyfop metil
propaquizafop
quizalofop-p-etil
trepaloxydim

RAPS CANOLA
clethodim
fluazifop-p-butil
haloxyfop metil
propaquizafop
quizalofop-p-etil
trepaloxydim

GRUPO B (ALS). Pos-emergentes

idosulfuron metal-Na

idosulfuron metil-Na

idosulfuron metil-Na

idosulfuron metal-Na+
mesosulfuron metil

idosulfuron metil-Na+
mesosulfuron metil

flucarbazone sdico
imazamox + imazapyr
pyroxulam
GRUPO N (Pre-emergentes)
prosulfocarb
prosulfocarb+(metribuzina, C1)

prosulfocarb
GRUPO C1 (Pre-emergentes)
simazina
GRUPO C2 (Pre-emergentes)

diuron
isoproturon

diuron

diuron

GRUPO K1 (Pre-emergentes)
trifluralina (pre)
pendimetalina
GRUPO K3 (Pre-emergentes)
flufenacet+(metribuzina, C1)
flufenacet+(metribuzina, C1)
pre: recomendado en pre-emergencia; pos: recomendado en pos-emergencia; psi: recomendado en pre-siembra e incorporado en el suelo.
trifluralina (pre)
pendimetalina

trifluralina (pre y psi)

metazachlor (pos)

Tabla 3. Clasificacin de los herbicidas ACCasa y ALS segn grupo qumico.

Mecanismo
de Accin

Grupo
qumico

Nombre comn

Nombre comercial

Cultivo

Clodinafop-propargil

Topik 240 EC

Trigo

Clodinafop-propargil

Hummer 240 EC

Trigso, cebada

Diclofop-metil

Cascabel 28 EC

Trigo, cebada

Diclofop-metil

Iloxan 28 EC

Trigo, cebada

Fluazifop -p-butil

Hache Uno 2000 175

EC

Canola, lupino

Haloxyfop-metil

Galant Plus

Canol, lupino

Propaquizafop

Agil 100 EC

Canola, lupino

Clethodim

Centurin 240 EC

Canola, lupino

Clethodim

Centurin Super

Canola, lupino

Tepraloxydim

Aramo

Canola, lupino

Pinoxaden

Axial 050 EC

Trigo

Iodosulfuron metil-Na

Hussar 20 WG

Trigo, cebada, triticale

Iodosulfuron metil-Na

Ovassion 5.26 WP

Trigo, cebada, triticale

Iodosulfuron metil-Na+
mesosulfuron metil

Cossack 150 WG

Trigo, triticale

Flucarbazone

Vulcano 70% WG

Trigo

Flucarbazone

Everest

Trigo

IMI

Imazamox + Imazapyr

Eurolightning

Trigo, raps clearfield

TP

Pyroxulam

Admitt

Trigo, cebada

FOP

ACCasa

DIM

DEN

SU

ALS
SCT

FOP: ariloxifenoxipropionatos; DIM: ciclohexanodionas; DEN: fenilpirazolines; SU: sulfonilureas;

SCT: sulfonil-aminocarbonil-triazolinona; IMI: imidazolinonas; TP: triazolopirimidinas.
Eficacia y espectro de control de malezas gramneas de los herbicidas disponibles
Un aspecto que conviene destacar es que en un mismo grupo de herbicidas, por ejemplo
ACCasa (igual mecanismo de accin) o entre grupos de herbicidas, por ejemplo
ACCasa y ALS (diferente mecanismo de accin), pueden existir diferencias importantes
en el nmero de especies de malezas gramneas que controlan (espectro de control) y en
el nivel de control de cada una (eficacia). Por otra parte, estas diferencias tambien
pueden darse entre los herbicidas pre-emergentes o aplicados al suelo antes de la
emergencia de las malezas y los cultivos.

Herbicidas ACCasa y ALS. Se observa que todos los herbicidas ACCasa controlan
eficazmente la avenilla y ballica, y la mayora controla eficazmente cola de zorro y
tembladerilla (Tabla 4). Por otra parte, la mayora de los herbicidas ACCasa no
controlan vulpia. Respecto a los ALS (Tabla 5), todos controlan eficazmente avenilla y
ballica, sin embargo, slo algunos herbicidas controlan eficazmente cola de zorro y
vulpia.
Tabla 4. Eficacia de algunos herbicidas ACCasa en distintas malezas gramneas.
Herbicidas ACCasa
Maleza
gramnea

FOP
DIM
DEN
clod
dicl
flua
halo
prop
clet
tepr
pino
Avenilla
S
S
S
S
S
S
S
S
Ballica
MS-S
S
S
S
S
S
S
S
Cola zorro
S
T
S
S
S
S
S
T
Vulpia
T
T
T
T
T
MSS
MS-S
T
Tembladerilla
T
MS
S
S
S
S
S
MS-S
clod: clodinafop; dicl: diclofop; flua: fluazifop; halo: haloxyfop; prop: propaquizafop; clet: clethodim;
tepr: tepraloxydim; pino: pinoxaden; FOP: ariloxifenoxipropionatos; DIM: ciclohexanodionas; DEN:
fenilpirazolines.
S = susceptible, 91 a 100% control.
MS = moderadamente susceptible, 71 a 90% de control.
MT = moderadamente tolerante, 50 a 70% de control.
T = tolerante, control inferior a 50% o sin control.

Tabla 5. Eficacia de algunos herbicidas ALS en distintas malezas gramneas.

Herbicidas ALS
Maleza
gramnea

SU
ST
IMI
TP
iodo
iodo+meso
flua
imaz+imar
pyro
Avenilla
MS-S
S
S
S
S
Ballica
S
S
MS-S
S
S
Cola zorro
T
T-MT
MS-S
MS-S
MS-S
Vulpia
T-MT
MS-S
MT
S
MT-MS
Tembladerilla
MS
S
MT-MS
S
MS
iodo: iodosulfuron; iodo+meso: iodosulfuron+mesosulfuron; flua: flucarbazone; imaz+imar:
imazamox+imazapyr; pyr: pyroxulam; SU: sulfonilureas; ST: sulfonil-aminocarbonil-triazolinona IMI:
imidazolinonas; TP: triazolopirimidinas.
S = susceptible, 91 a 100% control.
MS = moderadamente susceptible, 71 a 90% de control.
MT = moderadamente tolerante, 50 a 70% de control.
T = tolerante, control inferior a 50% o sin control.

Herbicidass pre-emergentes. Ninguno de los herbicidas pre-emergentes controla

satisfactoriamente avenilla, excepto matazachlor, el cual es recomendado en raps
canola. Por el contrario, la mayora de los herbicidas pre-emergentes se destacan por su
alta eficacia en ballica, cola de zorro y vulpia (Tabla 6). Es una excepcin el herbicida
diuron, cuya eficacia en ballica y cola de zorro es baja.

10

Tabla 6. Eficacia de algunos herbicidas pre-emergentes en distintas malezas gramneas.

Herbicidas pre-emergentes
Maleza
gramnea

diur

isop

fluf+
metr

meta

pend

pros

pros+
meto

sima

trif

MT-MS

Ballica

T-MT

MS

MT-MS

MS

MS-S

MT-MS

MS-S

Cola zorro

T-MT

MS

MT-MS

MT-T

MT-MS

MT-MS

MS-S

MS-S

MS-S

Avenilla

Vulpia

diur: diuron; isop: isoproturon; fluf+metr: flufenacet+metribuzina; meta: metazaclor; pend:

pendimetalina; pros: prosulfocarb; pros+meto: prosulfocarb+metolacloro; sima: simazina; trif:
trifluralina.
S = susceptible, 91 a 100% control.
MS = moderadamente susceptible, 71 a 90% de control.
MT = moderadamente tolerante, 50 a 70% de control.
T = tolerante, control inferior a 50% o sin control.

Estrategias de manejo de los biotipos resistentes a glifosato

En el sur de Chile, la nica especie de maleza en que se ha confirmado resistencia a
glifosato es ballica (L. multiflorum). La resistencia de ballica a glifosato est
significando el uso de otros herbicidas previo a la siembra para controlar las plantas
resistentes, adems de glifosato, lo que implica un aumento de los costos del control de
malezas. En la zona sur, normalmente las plantas de ballica maduran antes que la de los
cultivos de creales, por lo que gran parte de las semillas provenientes de las plantas que
no son controladas caen al suelo y permanecen en la superficie durante el verano y
otoo (aproximadamente tres meses), para comenzar a germinar con las primeras lluvias
de otoo. Por lo tanto, antes, durante o despus de la germinacin de las semillas de
ballica sensibles y resistentes a glifosato, se pueden realizar diversas prcticas de
control mecnico o qumico, las que en su mayora estn siendo adoptadas por los
agricultores.
Antes de la siembra
Uso de glifosato. Por las caractersticas de glifosato y el amplio uso de la labranza cero,
an existiendo resistencia de ballica a este herbicida, su aplicacin antes de la siembra
es una prctica obligada para poder controlar las plantas de ballica sensibles y otras
especies de malezas.
Uso de clethodim y tepraloxydim. A la fecha, los biotipos de ballica resistentes a
glifosato son sensibles a los herbicidas ACCasa clethodim y tepraloxydim. Esto ha
significado que en campos con resistencia a glifosato clethodim y tepraloxydim sean
usados en barbecho qumico y principalmente en mezcla de estanque con glifosato. El
uso de clethodim y tepraloxydim permite controlar las plantas resistentes a glifosato y
decrecer la evolucin de resistencia a l.
Uso de paraquat. Los biotipos de ballica resistentes a glifosato son sensibles a paraquat.
Sin embargo, por tratarse de un producto de contacto las plantas de ballica deben quedar

11

bien mojadas con el producto y ser tratadas preferentemente antes del estado de
macolla, de lo contrario el control de las plantas no es total.
El grupo de trabajo para la continuidad de glifosato de Australia (GSWG) recomienda la
rotacin de glifosato y paraquat antes de la siembra de los cultivos o el uso de la tcnica
del doble golpe, es decir, la aplicacin en secuencia de glifosato primero y paraquat
despus, durante la misma temporada. Lo anterior ha permitido controlar eficazmente
malezas resistentes a glifosato en Australia y a otros herbicidas comnmente utilizados
(WEERSINK et al., 2005).
Retraso en la siembra. El retraso en la fecha de siembra hace posible que exista ms
tiempo para la emergencia de plantas de ballica resistentes y poder controlar ms de una
vez, ya sea con herbicidas y/o mecnicamente.
Cultivacin el suelo. Permite una mayor y ms rpida emergencia de las malezas y por
lo tanto, aumenta la posibilidad de poder controlarlas antes de la siembra.
Despus de la siembra
Herbicidas pre-emergentes. En los ltimos aos, este tipo de herbicidas ha tenido una
amplia aceptacin entre los agricultores. Los resultados de trabajos recientes indican
que todos los herbicidas pre-emergentes recomendados en trigo y otros cultivos
extensivos y, que naturalmente poseen accin de control de Lolium, pueden controlar
los biotipos resistentes a glifosato (Tabla 7). En esta investigacin, se utilizaron los
biotipos de L. multiflorum resistentes aglifosato LM-30, LM-33 y LM-45 y diversos
herbicidas pre-emergentes recomendados en trigo, tales como diuron, isoproturon,
flufenacet+metribuzina y prosulfocarb, cada uno aplicado en la dosis tcnica y en otra
dosis un 50% ms alta. Se encontr que todos los herbicidas disminuyeron
significativamente el peso verde de la parte area de los diferentes biotipos de ballica en
relacin al tratamiento testigo sin herbicida, exceptuando diuron. El deficiente control
de los biotipos con diuron, no debera atribuirse a resistencia, ya que tambin control
deficientemente el biotipo sensible incluido como referencia.
Tabla 7. Disminucin (%) del peso verde de los biotipos LM-30, LM-33 y LM-45 con
herbicidas aplicados en pre-emergencia en la dosis tcnica y otra dosis un 50% mayor.
Diuron
Isoproturon
Flufenacet +
Prosulfocarb
Metribuzina
Biotipo de
1.000
g ha-1

1.500
g ha-1

2.000
g ha-1

3.000
g ha-1

120+88
g ha-1

180+132
g ha-1

4.000
g ha-1

6.000
g ha-1

Sensible

29

28

100

96

72

85

79

76

LM-30

30

100

100

80

90

69

65

LM-33

15

33

96

100

64

96

74

76

LM-45

24

74

99

100

81

89

87

92

ballica

Agradecimientos
Parte de los trabajos realizados fueron financiados por el Proyecto FONDEF D04i1022.
12

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14

TEST DE GERMINACIN in vitro PARA DETECTAR MALEZAS RESISTENTES

A HERBICIDAS.
Jorge Daz S. , N. Espinoza N. y R. Galdames G.
INIA-Carillanca, Casilla 58-D, Temuco, Chile. e-mail: jdiaz@inia.cl

Resumen:
Los herbicidas constituyen la principal herramienta de control de malezas en los cultivos
extensivos, sin embargo, la variabilidad gentica y presin de seleccin por la continua
aplicacin tiene como consecuencia el desarrollo de malezas resistentes (biotipos R). Este
fenmeno de caractersticas evolutivas, estara afectando en diferentes magnitudes a unas
100.000 ha en Chile con biotipos R de ballicas (Lolium multiflorum Lam., L. rigidum
Gaudin), avenilla (Avena fatua L.) y cola de zorro (Cynosurus echinatus L.). Los
herbicidas a los que se est generando resistencia son a diclofop y clodinafop (inhibidores
de ACCasa), iodosulfuron y flucarbazone (inhibidores de ALS) y glifosato (inhibidor de
EPSFs). La prevencin mediante una precisa y oportuna deteccin es el primer y ms
importante paso en el manejo de los biotipos R, orientando las estrategias de control y
evitando su diseminacin. Diversas metodologas han sido desarrolladas, las que
consideran evaluaciones de la planta entera, pasando por determinadas estructuras
vegetativas y reproductivas, midiendo la actividad de la enzima blanco del herbicida hasta
modernas tcnicas biotecnolgicas, todas ellas con el fin de agilizar el diagnstico de
biotipos R. En este trabajo, se discuten y comparan las principales bondades de cada uno
de los mtodos, prestando especial atencin a bioensayos que utilizan semilla. Este ltimo
ha permitido detectar respuestas diferenciales entre biotipos sensibles y resistentes en un
perodo corto para varios grupos de herbicidas. Se describen los principales aspectos en el
desarrollo y puesta punto de un test de germinacin in vitro para ballicas, avenilla y cola de
zorro. Los factores considerados fueron viabilidad, dormancia, condiciones de germinacin
de la semilla, y su respuesta a concentraciones de herbicidas y su correlacin con la
respuesta en planta. Finalmente, se concluye que el test cumple con ser preciso, rpido,
simple de ejecutar y evaluar, caractersticas apropiadas para constituirse como un servicio
de deteccin de biotipos R en un nmero importante de herbicidas inhibidores de ACCasa,
ALS y EPSFs.
Palabras clave: bioensayo, biotipos R, ballica, avenilla, cola de zorro.
Summary: Seed testing for detect weeds resistant to herbicides.
Herbicide constitutes the main tool of weed control in the cereal crops, nevertheless, the
genetic variability and pressure of selection by the continuous application has consequently
developed resistant weeds (biotypes R). This phenomenon of evolutionary characteristics,
is affecting in different magnitudes around 100,000 has in Chile with biotypes R of
ryegrass (Lolium multiflorum Lam., L. rigidum Gaudin), wildoat (Avena fatua L.) and
crested dogtailgrass (Cynosurus echinatus L.). The herbicides to which resistance is being
generated are diclofop and clodinafop (inhibiting of ACCasa), iodosulfuron and
flucarbazone (inhibiting of ALS) and glyphosate (inhibiting of EPSFs). The prevention by
early detection is the first and more important stage of biotypes R management, orienting
the control strategies and avoiding its dissemination. Diverse methodologies to detect its
presence have been developed, those that consider evaluations of the whole plant,
vegetative and reproductive structures; others that determined the activity of target enzyme

of herbicide up to biotechnological techniques, all of them with the purpose of making

make agile the diagnosis of biotypes R. In this work, characteristics of the methods is
discussed and compared, rendering special attention to seed bio-tests. This last one has
allowed the detection of differentials answers between susceptible and resistant biotypes in
a short time for several herbicides groups. The main aspects in the development of
germination test for ryegrass, wildoat and crested dogtailgrass are described. The factors
considered were viability, dormancy, conditions of seed germination, and their answer to
concentrations of herbicides and their correlation with plant response. Finally, it is
concluded that the test fulfills the following attribute precise, fast, simple to execute and to
evaluate, and appropriate to be used in a routine service for biotypes R detection in
important number of ACCase, ALS and EPSPs inhibitors herbicides.
Key words: bioassay, biotype R, ryegrass, wildoat, crested dogtailgrass.
Introduccin
Para los agricultores es trascendente el oportuno y adecuado control de las malezas, siendo
los herbicidas una de las principales herramientas por su eficacia, fcil aplicacin, bajo
costo y flexibilidad agronmica. Sin embargo, un inadecuado manejo de esta herramienta
esta favoreciendo el desarrollo de malezas resistentes a los herbicidas (biotipos R),
particularmente a malezas gramneas (DAZ et al., 2006; ESPINOZA et al., 2006).
Trabajos realizados por INIA Carillanca han constatado una cantidad prxima a 50
biotipos de malezas gramneas resistentes a diversos herbicidas inhibidores de ACCasa,
ALS y EPSFs (DAZ et al., 2005; DAZ et al., 2008a; DAZ et al., 2008), y que estn
afectando una superficie agrcola en torno a las 100.000 ha dedicadas principalmente al
cultivo de trigo (ESPINOZA & DAZ, 2005). En este contexto, la deteccin es considerada
un paso fundamental en el manejo de los biotipos R para adoptar medidas preventivas y
correctivas en el uso y manejo de los herbicidas, pero tambin como una herramienta de
monitoreo en la distribucin y propagacin geogrfica del problema.
En la actualidad se han desarrollado diversos bioensayos basados en el estudio de planta
entera, rganos vegetativos, parte de tejidos, semilla, polen, actividad y mutacin de la
enzima blanco de los herbicidas. Cada uno de estos mtodos muestran ventajas para
determinadas situaciones, pero lo ms importante es que deben ser precisos, rpidos y de
bajo costo. En este trabajo se revisan y comparan los diversos mtodos de diagnsticos, y
se presenta los principales aspectos en el desarrollo de un test rpido con semilla para
detectar biotipos R de malezas gramneas.

Mtodos de Deteccin
Uno de los mtodos ms empleado consiste en medir las diferencias en el desarrollo de las
plantas sometidas a diferentes dosis de herbicidas. Estos estudios de dosis-respuesta han
representado, en muchos casos, el paso inicial en la determinacin de biotipos resistentes.
El estudio se inicia con la colecta de semilla, para luego obtener plantas que se hacen
crecer bajo condiciones de invernadero o campo, cuantificando el efecto del herbicida
varias semanas despus de su aplicacin (MOSS, 1995; BECKIE et al., 2000). Si bien es
un mtodo preciso tiene como principales desventajas el largo tiempo de respuesta, altos
requerimientos de espacio fsico, muy demandante en mano de obra, y consecuentemente
de alto costo.

Tambin se han desarrollado mtodos a partir de plantas enteras o de rganos vegetativos

que han sobrevivido al tratamiento de control en campo, las que son trasplantadas a
macetas para luego ser sometidas a evaluacin con diferentes herbicidas (VALVERDE et
al. 2000; BOUTSALIS, 2001). Si bien son mtodos que requieren un equipamiento simple,
son laboriosos y demoran aproximadamente unas 4 semanas en la respuesta.
Otras tcnicas estn basadas en determinadas estructuras de la planta como el polen y hoja.
El polen, para lo cual se debe esperar a la floracin de las plantas, se hace germinar en un
medio de cultivo que contiene herbicida (LETOUZ & GAZQUEZ, 2000). Es un mtodo
que requiere de tiempo y de personal con mayores habilidades tcnicas en comparacin a
los anteriores. El bioensayo que utiliza tejido foliar slo detecta resistencia al herbicida
glifosato (SHANER et al., 2005), teniendo como principales limitaciones el ser aplicable a
un tipo de herbicida, requiere de personal altamente calificado y de un equipamiento ms
sofisticado que las tcnicas mencionadas anteriormente.
De forma paralela se han desarrollado bioensayos que miden la sensibilidad de la enzima
blanco de los herbicidas. Los herbicidas resultan letales para las plantas debido a que
actan sobre un sitio de accin primario, generalmente una enzima de especial relevancia
biolgica para el desarrollo y crecimiento de la maleza. En esta relacin tan especfica
entre enzima y herbicida, cualquier modificacin en la estructura de la enzima (mutacin),
resulta en una prdida de afinidad por su sitio de accin y consecuentemente una
disminucin en la eficacia del herbicida. En estos bioensayos se considera la extraccin y
evaluacin in vitro de la actividad de enzimas como la acetolactato sintasa (ALS) y la
enolpiruvil shiquimato sintasa (EPSFs) (SIMPSON et al., 1995; LOVELL et al., 1996;
SINGH & SHANER, 1998). La aplicabilidad de estos bioensayos con fines prcticos tiene
la desventaja de ser muy especfico en el anlisis del mecanismo de resistencia.
ltimamente se est desarrollando mediante marcadores moleculares la deteccin de
mutaciones en la enzima blanco de los herbicidas, tcnica que se describe en otro captulo
del libro.

Bioensayos con semilla para detectar biotipos R.

Como alternativa a los mtodos y tcnicas anteriores se han desarrollado bioensayos con
semilla que se caracterizan por su relativa rapidez y bajo costo operativo. La semilla se
dispone sobre un sustrato inerte impregnado del herbicida, y se determina la respuesta
midiendo parmetros como longitud de coleoptilo (HEAP & KNIGHT, 1986; BOURGOIS
et al., 1997; SIXTO et al., 1997; DAZ et al., 2005), longitud de raz (BECKIE et al.;
1990; COLLAVO et al., 2008), longitud del primordio foliar o de hoja (DE LA
CARRERA et al., 1999; LETOUZ & GAZQUEZ, 1999; PREZ & KOGAN, 2002;
DAZ et al., 2005), combinacin de parmetros (TAL et al., 2000); sobrevivencia o
germinacin (MURRAY et al., 1996; PREZ-JONES et al., 2007). Estos bioensayos han
demostrado ser una importante herramienta para un numeroso grupo de malezas y
herbicidas, considerndose su alto potencial para utilizarse como un servicio de deteccin
de malezas resistentes (DAZ et al., 2005).
En los Cuadros 1, 2 y 3 se presenta una revisin a nivel mundial de bioensayos con semilla
en malezas gramneas, para detectar biotipos resistentes a herbicidas inhibidores de
ACCasa, ALS y EPSFs. Para los inhibidores de ACCasa existe informacin para unos 7
herbicidas de un total de 16 productos tcnicos (HRAC, 2000) en especies del gnero
Avena y Lolium, dando cuenta de las concentraciones que permiten discriminar entre un

biotipo sensible (S) del biotipo R, de los parmetros de medicin y tiempos de respuesta
que no superan las dos semanas (Cuadro 1). En el caso de los inhibidores de ALS, grupo
conformado por 47 productos tcnicos (HRAC, 2000), la informacin para especies del
gnero Lolium, indican las concentraciones que permiten discriminar entre biotipo S y R
para 3 productos, los parmetros de medicin, y tiempos de respuesta que no superan los
10 das (Cuadro 2). Para L. multiflorum y el herbicida glifosato (Cuadro 3), tambin se
cuenta con antecedentes de las concentraciones del herbicida, parmetros y tiempos de
respuesta que permiten discriminar entre un biotipo R del S. Es importante destacar que en
relacin a los tiempos de respuesta, no est sealado o considerado tratamientos para la
ruptura de dormancia de la semilla.
Cuadro 1. Principales caractersticas de bioensayos con semilla para detectar resistencia de
malezas gramneas a herbicidas inhibidores de la ACCasa
HERBICIDA

Fenoxaprop-p
Setoxidim
Clethodim
Clodinafop
Tralkoxidim
Clodinafop
Pinoxadem
Clethodim
Fenoxaprop-p
Diclofopcido.

MALEZA
A. fatua
A. fatua
A. fatua
A. fatua
A. fatua
A. sterilis
A. sterilis
A. sterilis
Avena spp
L. rigidum

CONCENTRACIN
DISCRIMINATORIA
Cantidad
Basado en
(M)
10
DL biotipo S
5
DL biotipo S
1,5
>80% inh. biotipo S
3
>80% inh. biotipo S
5
>80% inh. biotipo S
1
CL50
0,5
CL50
0,25
CL50
21
No indica
31
Umbral de 20 mm

Parmetro

Tiempo
respuesta

Sobrevivencia
Coleoptilo
Coleoptilo
Coleoptilo
Coleoptilo
Raz
Raz
Raz
Brote
Coleoptilo

S/I
S/I
S/I
S/I
S/I
13 das
13 das
13 das
14 das
S/I

L. rigidum
29,1mg/L CL50
Raz y brote
Diclofopcido.
L. rigidum
0,06 mg/L CL50
Raz y brote
Clodinafopcido
L. rigidum
1,15 mg/L CL50
Raz y brote
tralkoxidim
L.
multiflorum
32
No
especifica
Brote > 1 cm
Diclofop
Lolium
spp
1
CL
Sobrevivencia
Clodinafop
50
Lolium spp
0,2
CL50
Sobrevivencia
Pinoxadem
Lolium
spp
0,05
CL
Sobrevivencia
Clethodim
50
DL: Dosis Letal; CL50: Concentracin Letal media; S/I: sin informacin

REFERENCIA

S/I

Murray et al, 1996

Bourgois et al, 1997
Bourgois et al, 1997
Bourgois et al, 1997
Bourgois et al, 1997
Collavo et al. 2008
Collavo et al. 2008
Collavo et al. 2008
Moss, 2000.
Letouz et al, 1997
Letouz & Gasquez
1999
Tal et al., 2000

S/I

Tal et al., 2000

S/I
14 das
10 das
10 das
10 das

Tal et al., 2000

Moss, 2000
Collavo et al., 2008
Collavo et al., 2008
Collavo et al., 2008

Cuadro 2. Principales caractersticas de bioensayos con semilla para detectar ballicas

resistentes a herbicidas inhibidores de ALS.
HERBICIDA

MALEZA

CONCENTRACIN
DISCRIMINATORIA
Cantidad (M)

Sulfometuron

L. rigidum

Iodosulfuron
Flucarbazone

L. multiflorum
L. multiflorum

0,027
0,9 mg /L
3,6 mg /L

Parmetro

Tiempo
respuesta

hoja > 1cm

No indica

Coleoptilo
Coleoptilo

6-10 das
6-10 das

REFERENCIA

Basado en

>DL biotipo
S
CL50
CL50

Burnet et al.,
1994.
Daz et al, 2005
Daz et al, 2005

Cuadro 3. Principales caractersticas de bioensayos con semilla para detectar resistencia en

L. multiflorum al herbicida glifosato (EPSFs).
CONCENTRACIN
DISCRIMINATORIA
Cantidad (mg /L)
Basado en
31,56 39,4
CL50
84,1
CL50
73,8 160,3
CL50

PARMETRO

Tiempo
respuesta

Longitud Brote
Longitud hoja
Germinacin

8 das
6-10 das
7 das

REFERENCIA
Prez y Kogan, 2002
Daz et al, 2005
Prez-Jones et al, 2007

Estudios realizados para desarrollar un test de germinacin in vitro.

En la puesta a punto del mtodo se debieron considerar varios aspectos crticos
relacionados con la semilla, tales como la viabilidad, dormancia, condiciones de
germinacin, y relacionar la respuesta en semilla a los herbicidas con estudios en planta.
Estudios en planta. Primeramente se caracteriz la respuesta de un amplio nmero de
biotipos sospechosos de resistencia en ballicas, avenilla y cola de zorro colectados entre la
VIII y X Regiones. Estos estudios se realizaron en invernadero con herbicidas inhibidores
de ACCasa (diclofop y clodinafop), inhibidores de ALS (iodosulfuron y flucarbazone) e
inhibidor de EPSFs (glifosato). Los herbicidas se aplicaron en una cabina de aplicacin
experimental a dosis crecientes de 0, X/2, X, 2X, 4X y 8X (X = dosis tcnica de campo).
La respuesta se evalu entre los 18 a 21 das (Figura 1), determinndose el peso seco de la
parte area (60 C durante 72 h). Los datos se analizaron con el modelo log-logstico
(SEEFELDT et al., 1995), para determinar los valores de DL50 (Dosis Letal media) para el
biotipo resistente y sensible, y los factores de resistencia (FR = DL50 R/ DL50 S). Los
resultados (Cuadros 4, 5 y 6) arrojaron un total de 8 biotipos R en ballicas al herbicida
diclofop, 7 a clodinafop, 8 a idosulfuron, y 4 a glifosato. En avenilla se determinaron 2
biotipos R a diclofop y clodinafop. En cola de zorro 3 biotipos R a diclofop y clodinafop y
1 a flucarbazone. Con estos biotipos caracterizados se procedi a la ejecucin de los
estudios de germinacin en semilla.

Figura 1. Curvas de dosis-respuesta del biotipo R de ballica (LM-20) y sensible (cv. Tama).

Estudios en semilla. Para estos estudios se requiere de semilla viable y sin dormancia.
Una semilla es dormante cuando no tiene la capacidad para germinar en un periodo
especfico de tiempo bajo cualquier combinacin de factores fsicos ambientales normales
que sean favorables para su germinacin. La semilla de malezas no escapan a esta
situacin y es conocida la dormancia innata de duracin variable en especies del gnero
Avena y Lolium. En la literatura se describe varios tipos de dormancia, como fisiolgica,
morfolgica, morfofisiolgica y fsica (FINCH-SAVAGE & LEUBNER-METZGER,
2006), y para lo cual existen diversos tratamientos qumicos y fsicos con el fin de

incrementar la germinacin (ISTA, 1976; ELLIS et al., 1985; CFIA, 1997; DAZ et al.,
2007).
La viabilidad de la semilla se determin mediante el test de tetrazolium (ISTA, 1976;
AOSA, 2000). Los resultados indicaron ndices de viabilidad de 92 a 100% para la semilla
de ballica, avenilla y cola de zorro. La Figura 2 presenta una semilla de avenilla viable
(embrin coloreado) y otra inviable (embrin no coloreado). Posteriormente, se evalu la
germinacin, determinndose que en semilla colectada durante la temporada fue la que
present los mayores porcentajes de dormancia. Para la ruptura de la dormancia de la
semilla se evaluaron diferentes tratamientos fsicos (fro y descascarado) y qumicos
(KNO3 y cido giberlico) (ISTA, 1976; ELLIS et al., 1985; CFIA, 1997). Se lograron
adecuadas respuestas para todas las especies, cuando se utiliz una combinacin ptima en
base a un pre-tratamiento fsico seguido de otro qumico que fue coaplicado durante la
prueba de germinacin. Estos ensayos se realizaron en una cmara de germinacin
calibrada con ciclos trmicos, fotoperiodo y humedad, descritos en la literatura para
ballicas y avenilla; y para cola de zorro se utilizaron los de ballica (ISTA, 1976; CFIA,
1997).

Figura 2. Test de tetrazolium en avenilla, mostrando semilla (caripside) viable con embrin de
color rojizo (izquierda) e inviable con embrin sin coloracin (derecha).

Resuelto los aspectos ms crticos de la germinacin, se procedi a la ejecucin de los

bioensayos, evalundose una amplia gama de concentraciones (8 a 10 en progresin
geomtrica) de los herbicidas diclofop, clodinafop, iodosulfuron, flucarbazone y glifosato.
Las evaluaciones se realizaron en dos momentos, 6 y 10 das en ballica, 10 y 15 das en
avenilla, y 10 y 21 das en cola de zorro. De cada semilla se evaluaron la longitud del
coleoptilo y raz, ajustndose los datos al modelo de regresin log-logstica (SEEFELDT et
al., 1995), cuya expresin matemtica es Y=C+((D-C)/1+(x/ CL50)b). Para estimar los
parmetros del modelo, los datos se sometieron a un anlisis de regresin no lineal con un
intervalo de confianza de 95% que inclua al cero y los coeficientes de determinacin (R2)
de cada regresin (programa SigmaPlot 8.0). El factor de resistencia se calcul mediante el
cuociente de la concentracin requerida para lograr una reduccin del 50% (CL50) del
parmetro evaluado versus la requerida para lograr este mismo efecto en el biotipo sensible
(FR = CL50R/ CL50S). Se estableci como limite un valor igual o superior a 1,5 en el factor

de resistencia para designar a un biotipo como resistente. En los Cuadros 4, 5 y 6 se

presentan los factores de resistencia obtenidos en planta y semilla, comprobndose la
concordancia entre ambos tipos de estudio para detectar biotipos R.
Los resultados obtenidos indican que las condiciones que se dieron para el manejo de la
dormancia (4 das con un pre-tratamiento de fro), y posteriormente durante la germinacin
con un tratamiento qumico para ruptura de dormancia junto a condiciones de temperatura,
humedad y fotoperiodo, permitieron detectar biotipos R frente a determinadas
concentraciones de herbicidas. El tiempo requerido por el test en ballica fue de 14 das para
los herbicidas diclofop, clodinafop, iodosulfuron y glifosato; en avenilla el tiempo de
respuesta alcanz a 19 das para los herbicidas diclofop y clodinafop, y de 25 da en cola
de zorro para los herbicidas diclofop, clodinafop y flucarbazone. En la Figura 3 se presenta
un flujo con las principales etapas del test de germinacin in vitro.

Figura 3. Flujo del test de germinacin in vitro: pre-tratamiento de fro (1); cmara de germinacin
con semilla de biotipo R y S en placas petri (2); evaluacin (H: hoja; C: coleoptilo) (3) y anlisis
estadstico (4).

Cuadro 4. Factores de resistencia (FR = DL50(R)/DL50(S)) en ballicas (LM: L. multiflorum

y LR: L. rigidum) con herbicidas ACCasa, ALS y EPSFs.
Biotipo
LM-16
LM-19
LM-20
LM-22
LM-26
LM-30
LM-32
LM-33
LM-34
LM-45
LM-54
LR-25

Diclofop
FR (P) FR (S)
7,3
1,6
14,5
2,4
20,6
3,6
7,2
11,2
20,6
4,0
2,1
2,1
5,0
4,9
5,3
27,6

Clodinafop
FR (P)
FR (S)
28,5
8,9
88,2
7,7
20,7
7,7
33,8
7,7
3,8
8,3
5,9
3,9
2,7
188,0

Iodosulfuron
FR (P) FR (S)
1,5
1,6
21,0
3,4
22,4
4,4
6,0
4,7
2,0
9,5
2,3
2,1
1,5
1,8
5,7
2,0

Glifosato
FR (P)
FR (S)
17,0
68,0
102,0
22,0
1.680
9,0
1.520
9,2
-

FR (P): factor de resistencia en planta; FR(S): factor de resistencia en semilla.

Cuadro 5. Factores de resistencia (FR = DL50(R)/DL50(S)) en avenilla (AF) con herbicidas

ACCasa.
Biotipo
AF-1
AF-2

Diclofop
FR (P)
10,6
8,2

Clodinafop
FR (S)
2,7
3,3

FR (P)
2,7
2,2

FR (S)
14,9
10,7

FR (P): factor de resistencia en planta; FR(S): factor de resistencia en semilla.

Cuadro 6. Factores de resistencia (FR = DL50(R)/DL50(S)) en cola de zorro (CE) con

herbicidas ACCasa y ALS.
Biotipo
CE-3
CE-4
CE-10

Diclofop
FR (P)
FR (S)
17,2
14,9
12,9
17,4
9,2
6,8

Clodinafop
FR (P)
FR (S)
1,8
11,9
7,8
81,0
3,2
71,0

Flucarbazone
FR (P)
FR (S)
1,5
1,8

FR (P): factor de resistencia en planta; FR(S): factor de resistencia en semilla.

Conclusiones
Para los biotipos de ballicas, avenilla y cola de zorro y herbicidas evaluados, se comprob
que existe una buena correlacin entre la respuesta de germinacin in vitro con la
respuesta en planta para la identificacin de resistencia. El test con semilla tiene un
adecuado nivel de sensibilidad, dado que detecta biotipos con bajos niveles de resistencia
en planta. Tambin se comprob la rapidez de respuesta, ya que se pudo identificar la
resistencia en un plazo de 14, 19 y 25 das para ballicas, avenilla y cola de zorro,
respectivamente. En consecuencia, se considera que este test cumple con las caractersticas
de precisin, rapidez, simplicidad de ejecucin y evaluacin, y bajo requerimiento de
espacio fsico en comparacin al bioensayo con planta. Todo lo anterior revela que este test
incorpora caractersticas apropiadas para implementarse como servicio rutinario en la
deteccin de ballicas, avenilla y cola de zorro resistentes a un nmero importante de
herbicidas inhibidores de ACCasa, ALS y EPSFs.
Agradecimiento
Este trabajo fue financiado por el Proyecto FONDEF D04I1022.

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BASES MOLECULARES DE LA RESISTENCIA A HERBICIDAS Y TEST

MOLECULAR PARA DETECTAR RESISTENCIA A HERBICIDAS EN BALLICAS
(Lolium multiflorum y L. rigidum)
R. Galdames, J. Daz y N. Espinoza.
INIA, CRI-Carillanca Temuco - Chile. e-mail: rgaldame@inia.cl

Resumen. La agricultura moderna se ha hecho dependiente de los herbicidas trayendo

consigo la aparicin de biotipos R de malezas. Alrededor de un 31 % y un 11% de los
biotipos R conocidos a nivel mundial, que alcanzan a 332, han sido descritos para dos
importantes grupos de herbicidas; los inhibidores de la ALS y ACCasa, respetivamente. En
Chile esta situacin pareciera no ser muy distinta, ya que recientemente se ha confirmado
la presencia de 47 biotipos R. Hoy en da, importante conocimiento se ha acumulado
respecto de los mecanismos involucrados en el fenmeno de la resistencia, especialmente a
nivel molecular. A pesar que diversos mecanismos pueden estar asociados a la resistencia
de una planta a un herbicida, aqu se describen aquellos conocidos como asociados al sitio
activo, donde ciertos polimorfismos o mutaciones existentes en regiones crticas de los
genes que codifican para la ALS o ACCasa explican mayoritariamente el fenotipo de
resistencia. Mediante el empleo de herramientas basadas en la tecnologa del ADN y
particularmente mediante la tcnica conocida como PCR (reaccin en cadena de la
polimerasa) es posible diagnosticar rpidamente la presencia de biotipos R, lo cual se
considera fundamental para disear y/o implementar adecuadas estrategias de manejo de la
resistencia. Un test de diagnstico es descrito con ese fin.
Palabras clave: Resistencia, herbicidas, malezas, mutaciones, ACCasa, ALS, sitio de
accin.
Summary: Modern agriculture has become depend of herbicides and thus have appeared the
resistant biotype of weeds. About 31% and 11% of the resistant biotypes known worldwide,
have been described for two important groups of herbicides: ALS- inhibitors and ACCase
inhibitors, respectively. In Chile this situation seems not to be very different, as recently
confirmed the presence of 47 resistant biotypes. Nowadays, important knowledge has been
accumulated regarding the mechanisms involved in the phenomenon of resistance,
especially at the molecular level. Although various mechanisms may be involved in the
resistance of plants to herbicides, here are described those known as associated with the
target site, where polymorphisms or mutations in critical regions of the genes coding for
ALS or ACCasa, largely explain the resistance phenotype. Through the use of tools based
on DNA technology, particularly using the technique known as PCR(polymerase chain
reaction) can rapidly diagnose the presence of resistant, which are considered essential to
design and / or implement appropriate strategies resistance management. A diagnostic test
is described for this purpose.

Keywords: Resistance, herbicides, weeds, mutations, mechanisms, ALS-Inhibitors,

ACCase-inhibitors, target sites.

Introduccin
La agricultura moderna se ha hecho dependiente de los herbicidas por las reconocidas y
diversas ventajas que ofrecen. Sin embargo, el uso continuo a travs de los aos, propio de
una condicin de monocultivo, se traduce normalmente en la aparicin de biotipos
resistentes (biotipos R). Lo anterior se considera particularmente cierto, para aquellos
herbicidas en que su selectividad depende de un blanco nico en la planta, como aquellos
que inhiben la enzima Acetilcoenzima A carboxilasa (ACCasa) y la enzima acetolactato
sintasa o cido acetohidroxi sintasa (ALS o AHAS). Herbicidas graminicdas
comercialmente muy importantes y muy efectivos se caracterizan por ser potentes
inhibidores de la ACCasa y ALS.
La aparicin de biotipos R ha tenido un crecimiento exponencial durante estas ltimas
dcadas. Del total de biotipos R descritos a la fecha, que alcanza a 332 (HEAP, 2009,
http://www.weedscience.com), alrededor de un 31 % presentan resistencia a herbicidas
inhibidores de la ALS y un 11% a inhibidores de la ACCasa. Estos biotipos se encuentran
distribuidos en 60 pases, concentrndose mayoritariamente en Estados Unidos, Australia,
Canad, Francia y Espaa (HEAP, 2009). La situacin en Chile pareciera no ser diferente.
Datos generados estos ltimos 3 aos han permitido confirmar, la existencia de al menos
47 biotipos R de gramneas (ballicas, avenilla y cola de zorro) a herbicidas empleados
normalmente en el control de malezas en trigo.
A nivel mundial y de manera simultnea a la aparicin de biotipos R, se ha ido acumulando
conocimiento de los diversos mecanismos bioqumicos y moleculares asociados al
fenmeno de la resistencia. Entendiendo que los mecanismos que gobiernan la resistencia
pueden ser mltiples, aqu se revisa y describen aquellos conocidos como asociados al sitio
activo, para diferentes malezas gramineas a nivel mundial y lo que se ha logrado determinar
en Chile en torno a biotipos R de ballicas en trigo. Simultneamente, se describe un test
molecular que est diseado para identificar rpidamente los biotipos R de ballicas respecto
a los sensibles, de tal forma de apoyar al agricultor, idealmente dentro de la misma
temporada del cultivo para minimizar su impacto y reducir su dispersin.

Resistencia a herbicidas inhibidores de la acetil-CoA carboxilasa (ACCasa).

Los herbicidas Ariloxifenoxipropionatos (FOPs) y Ciclohexanodionas (DIMs), son fuertes
inhibidores de la enzima acetyl-CoA carboxilasa (ACCasa) y se reconocen como excelentes
graminicidas postemergentes. La ACCasa cumple un rol esencial en la sntesis y
metabolismo de cidos grasos y en la sntesis de importantes metabolitos secundarios, por
lo que la inhibicin de su actividad conduce eventualmente a la muerte de la planta. La
actividad de la enzima en la planta, ocurre tanto en plstidos (se realiza la sntesis primaria
de cidos grasos) como en el citosol (sntesis de cadenas largas de cidos grasos y de

flavonoides). La selectividad a estos herbicidas se debe a los diferentes tipos de ACCasa

plastdicas. Las del tipo multidominio encontrada en el citosol de todas las plantas, y la del
tipo multisubunidad encontrada en plstidos de dicotiledneas, son resistentes a los
herbicidas FOPs y DIMs. Por el contratio, la ACCasa plastdica de los pastos son sensibles
a estos herbicidas. An cuando esto se considera la base primaria de la selectividad entre
gramneas y dicotiledoneas (Devine and Shukla,2000), algunas gramneas dentro de las que
se incluyen cereales, como el trigo, son tolerantes a estos herbicidas debido a su capacidad
de metabolizar estos herbicidas a compuestos inactivos (Devine and Shimabukuro,1994).
La informacin disponible indica, que la regin que comprende el dominio carboxil
transferasa (CT) de la ACCasa plastdica posee los principales determinantes de
sensibilidad a herbicidas FOPs y DIMs (NIKOLSKAYA et a.l, 1999). Evidencias
adicionales sealan que estas molculas herbicidas se unen al dominio CT de la ACCasa,
lo cual ha sido inferido de la estructura tridimensional del complejo ACCasa de levadura
con haloxyfop (ZHANG et al, 2004). Recientemente, fue modelada la estructura 3D del
dominio CT de plantas normales y mutantes de A. myosuroides acomplejada con
clodinafop, indicando que la sustitucin de algunos residuos aminoacidicos normales
resulta en una disminucin por la afinidad del herbicida con su sitio de unin (ZHU et al.,
2009)
Desde principio del ao 2000, diferentes sustituciones aminoacidicas en el dominio CT de
la ACCasa plastdica, han sido implicadas en la resistencia a herbicidas FOPs y DIMs en
distintas especies de malezas gramneas, las que incluyen: Lolium rigidum (ZAGNITKO et
al., 2001; DELYE et al., 2002; BROWN et al., 2002; TAL & RUBIN, 2004; ZHANG
AND POWLES, 2006; DELYE et al.,2003; ZHANG AND POWLES,2006 ), L.
multiflorum (WHITE et al., 2005); Avena fatua (CHRISTOFFERS et al.,2002), A. sterilis
(LIU et al.,2007), Setaria viridis (DELYE et al., 2002) y Alopecurus myosuroides
(DELYE et al., 2002, 2002; BROWN et al.,2002; DELYE et al.,2003; DELYE et al.,2005).
Algunas de las mutaciones identificadas correlacionan directamente con resistencia para
herbicidas FOPs y DIMs y en otros casos slo con resistencia a representantes de algunos
de ellos (Cuadro 1).
En biotipos R de ballicas (L. multiflorum y L. rigidum) detectados en Chile, se ha logrado
confirmar la presencia de 7 diferentes mutaciones, sin embargo, dos no han sido descritas
previamente (GALDAMES et al., 2008), por lo que su implicancia en conferir resistencia a
diversos herbicidas FOP y DIM an no ha sido determinada. Biotipos que muestras
elevados niveles de resistencia a herbicidas FOPs, muestran una reducida sensibilidad al
herbicidas diclofop, lo cual correlaciona directamente con la presencia de mutaciones
(DAZ et al., 2008).

Cuadro 1.
Sustituciones aminoacidicas en la ACCasa plastdica, descritas a nivel
mundial en diferentes malezas gramneas y que estn asociadas a resistencia para uno o
ms herbicidas inhibidores de la ACCasa, determinadas mediantes bioensayos con plantas
completas.
Aminocido
y posicin1

Sustitucin

Especies de
maleza

Herbicidas

Gln-1756

Leu

L. rigidum

FOP y DIM

ZHANG & POWLES, 2006

Leu

A. myosuroides

FOP y DIM

BROWN et al, 2002; DELYE et al.,

2002 ;MOSS et al.,2003

Leu

A. fatua

FOP y DIM

CHRISTOFFERS et al, 2002

Leu

S. viridis

FOP y DIM

L. rigidum

FOP y DIM

Asn
Asn

L. multiflorum
A. sterilis
A. myosuroides
L. rigidum
A. sterilis
A. myosuroides
A. sterilis

Asn

L. rigidum

FOP y DIM
FOP
FOP
DIM
FOP
FOP
FOP
FOP

ZHANG AND DEVINE, 2000; DELYE et

al., 2002
ZAGNITKO et al. 2001; DELYE et al.,
2002; ZHANG AND POWLES. 2006
WHITE et al., 2005
LIU et al., 2007
DLYE et al.,2005
QIN YU et al., 2007
LIU et al., 2007
DLYE et al.,2005
LIU et al., 2007
DLYE et al.,2003; ZHANG AND
POWLES, 2006
DLYE et al.,2003
QIN YU et al., 2007
LIU et al., 2007
DLYE et al.,2005
QIN YU et al,.2007
QIN YU et al.,2007
DLYE et al.,2005

ILe-1781

Trp-1999
Trp-2027

ILe-2041

Val
L. rigidum
FOP
Gly
L. rigidum
DIM
Gly
A. sterilis
FOP y DIM
Gly
A. myosuroides
FOPs y DIMs
Gly
L. rigidum
DIM
Cys-2088
Arg
L. rigidum
DIM
Gly-2096
Ala
A. myosuroides
FOPs
Posicin aminoacidica de acuerdo a la secuencia de A. myosuroides
Asp-2078

Leu
Leu
Cys
Cys
Cys

Referencias

Resistencia a herbicidas inhibidores de la enzima acetolactato sintasa o cido

acetohidroxi sintasa (ALS o AHAS).
La enzima ALS o AHAS cataliza el primer paso en la sntesis de aminocidos ramificados
en las plantas (valina, leucina e isoleucina), y es el blanco de herbicidas como las
Sulfonilureas e Imidazolinonas, los cuales actan como potentes y especficos inhibidores
(DUGGLEBY et al., 2003).
Diversas caractersticas de los herbicidas inhibidores de la ALS han determinado que estn
dentro de los ms ampliamente empleados en el mundo. Lamentablemente, se han

caracterizado adems, por su habilidad para seleccionar biotipos R de malezas (TRANEL

& WRIGHT.,2002). Los casos de resistencia a este tipo de herbicidas se han incrementado
en forma alarmante estos ltimos aos, correspondiendo mayoritariamente a malezas
dicotiledneas (TRANEL et al., 2009).
Varias mutaciones o cambios nucleotdicos en el gen que codifica para la ALS han sido
asociadas a resistencia a herbicidas inhibidores de la ALS. Hasta ahora, mutaciones que
conducen a sustituciones en una de 7 posiciones aminocidicas (Ala-122, Pro-197, Ala205, Asp-376, Trp-574, Ser-653 y Gly-654), han sido implicadas en el fenotipo de
resistencia en distintas malezas (TRANEL et al, 2009).
A nivel mundial se han descrito biotipos R para 6 especies de gramneas, las que incluyen:
Bromus tectorum (PARK AND MALLORY.,2004), Scirpus juncoides (UCHINO et
al.,2007), Hordeum leporinum (YU et al.,2007), Lolium rigidum (YU et al.,2008; TAN et
al.,2007), Alopecurus myosuroides (DLYE Y BOUCANSAUD.,2008) y Setaria viridis
(TAN et al.,2007; LAPLANTE et al.,2009). En estas especies, se han detectado
sustituciones aminoacidicas en 4 posiciones, de las cuales cambios en Pro-197 y Trp-574
son los nicos descritos en L. rigidum.
En gramneas, las mutaciones correlacionan mayoritaramente con resistencia a
sulfonilureas y en menor grado con imidazolinonas, pyrimidinyl-(thio)-benzoatos y
sulfonylamino-carbonyl-triazolinona (Cuadro 2).
En una poblacin resistente de L. rigidum encontrada en Australia, se identificaron cinco
mutaciones que conducen a sustituciones en Pro-197 y una en Trp-574; todas aquellas
asociadas a Pro-197 confirieron resistencia a herbicidas sulfonylurea, en cambio la de Trp574 confiri resistencia tanto a sulfonylurea como a imidazolinonas (YU et al, 2008).
En biotipos R de ballicas (L. multiflorum y L. rigidum) detectados en Chile, se han logrado
determinar la presencia de tres diferentes mutaciones, todas ellas conducen a sustituciones
en Pro-197, de las cuales una no ha sido descrita previamente. No todos lo biotipos R
estudiados presentan mutaciones en el gen de la ALS, lo cual sugiere la existencia de otro
mecanismo involucrado. (GALDAMES et al., 2008).

Cuadro 2.
Sustituciones aminoacidicas descritas a nivel mundial en diferentes malezas
gramneas y que conducen a un fenotipo de resistencia en uno o ms herbicidas inhibidores de
la ALS.
Aminocido
y posicin1
Pro 197

Trp 574

Ser 653

Gly 654

Sustitucin

Especie de maleza

SU

IMI

PTB

SC
T

Ser
His
Ser
Leu
Ser
Ser
Ala
Leu
Gln
Thr
Arg
Leu
Leu
Leu
Ile
Asn
Thr

Bromus tectorum
Scirpus juncoides
Scirpus juncoides
Scirpus juncoides
Hordeum leporinum
Lolium rigidum
Lolium rigidum
Lolium rigidum
Lolium rigidum
Alopecurus myosuroides
Lolium rigidum
Lolium rigidum
Scirpus juncoides
Alopecurus myosuroides
Setaria viridis
Setaria viridis
Setaria viridis
Setaria viridis

R
R
R
R
R
R
R
R
R
R
R
R
R
R
r
r
r
r

S
S
S
S
S
S
S
S
S
ND
S
R
R
ND
R
R
R
R

ND
S
S
S
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
R
ND
R
R
S
S

R
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
r
r
r
r

Referencia
PARK AND MALLORY
UCHINO et al.,2007
UCHINO et al.,2007
UCHINO et al. ,2007
YU et al.,2007
YU et al.,2008
YU et al.,2008
YU et al.,2008
YU et al.,2008.
DLYE AND BOUCANSAUD.,2008
YU et al.,2008
TAN et al.,2007
UCHINO et al.,2007
DLYE AND BOUCANSAUD.,2008

LAPLANTE et al.,2009
LAPLANTE et al.,2009
LAPLANTE et al.,2009
TAN et al.,2007

1. Posicin aminoacidica de acuerdo a la secuencia de Arabidopsis thaliana ; S = Biotipo susceptible; r =

Resistencia moderada (< 10 veces respecto al bitipo sensible); R = Resistencia alta (> 10 veces); ND =
No determinada; SU = Sulfonylureas; IMI = Imidazolinones; PTB= Pyrimidinylthiobenzoates; TP=
Triazolopyrimidines; SCT=Sulfonylaminocarbonyltriazolinone

Test molecular para el diagnstico de biotipos R.

Muchas tcnicas de diagnstico han sido desarrolladas para detectar y/o confirmar la
presencia de biotipos R, con la finalidad de implementar adecuadas estrategias de manejo
de la resistencia. Normalmente los bioensayos con plntulas o pruebas in vitro que miden
actividad enzimtica, arrogan resultados confiables, pero son laboriosos y /o extenuantes
por lo que normalmente no permiten ofrecer respuestas en la misma temporada de
desarrollo del cultivo.
Dado que un nmero importante de casos de resistencia son debidos a mutaciones o
polimorfismos nucleotdicos conocidos, hoy en da es posible, mediante el empleo de
herramientas basadas en la tecnologa del ADN y particularmente mediante la tcnica
conocida como PCR (reaccin en cadena de la polimerasa) identificar rpidamente biotipos
R. De hecho, usando esta herramienta han sido identificados biotipos R para herbicidas
inhibidores de la ALS (DLYE AND BOUCANSAUD,2007) como para herbicidas

inhibidores de la ACCasa (DLYE et al.,2002; KAUNDUN AND WINDASS,2006; LIU

et al., 2007).
Para fines de diagnstico molecular existen muchas variantes de la tcnica PCR, que
permiten discriminar entre un alelo mutado y el normal, las que incluyen: PCR-alelo
especifico (discrimina mediante el diseo de partidores especficos), RFLP- PCR o CAPPCR (amplificacin del fragmento de ADN donde est presenta la mutacin y luego se
corta con enzimas restriccin) y dCAPS-PCR (variante del mtodo anterior donde se crea
artificialmente un sitio de reconocimiento para una enzima para luego cortar).
La reproducibilidad, robustez y rapidez son atributos bsicos requeridos en el mtodo de
diagnstico a aplicar. De acuerdo a los alelos identificados y que son predominantes en
biotipos R de Lolium (L. multiflorum y L. rigidum) en el sur de Chile, se ha implementado
una variante de la tcnica dCAPS-PCR, que consta de cuatro pasos principales: 1)
Amplificacin por PCR de la (s) regin (es) que abarcan los sitios que incluyen las
mutaciones conocidas, 2) PCR semi-anidado con partidores dCAPS, 3) Digestin con
enzima de restriccin, y 4) Revelado de alelos normales y/o mutados en gel de agarosa.

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Descripcin de un servicio de deteccin de malezas gramneas resistentes a

herbicidas (SEDBIR).
Jorge Daz S., Rafael Galdames G. y Nelson Espinoza N.
INIA-Carillanca, Casilla 58-D, Temuco, Chile. e-mail: jdiaz@inia.cl

Resumen
Se describen las principales etapas de los test de deteccin molecular y de germinacin in
vitro, y una base de datos con herbicidas alternativos para el control de biotipos R, los
cuales conforman un servicio de deteccin de malezas gramneas resistentes a herbicidas
(SEDBIR).
Palabras claves: test molecular, test de germinacin in vitro, ballica, avenilla, cola de zorro.
Summary
It describes the main steps of molecular and in vitro germination test, and a database of
alternative herbicides to control biotypes R, which form a detection service of resistant
grass weeds (SEDBIR).
Key words: molecular test, in vitro germination test, ryegrass, wildoat, crested
dogtailgrass.
Introduccin.
La resistencia a herbicidas es un problema cada vez ms creciente, estimndose que del
total de la superficie sembrada con trigo, cebada, avena, lupino y raps en el pas,
aproximadamente 75 mil hectreas estn infestadas con biotipos resistentes (biotipos R) de
ballicas, 40 mil ha con biotipos R de avenilla y 25 mil ha con biotipos R de cola de zorro.
Enfrentar el problema de la resistencia exige de herramientas que permitan detectar
biotipos R en forma rpida y precisa, de manera de implementar medidas oportunas de
control. Las herramientas que conforman un Servicio de Deteccin de Biotipos R
(SEDBIR) son un test molecular, que en un plazo no mayor a 48 horas entregar
informacin sobre la existencia o no de ballicas resistentes, un test de germinacin in vitro
para ballicas, avenilla y cola de zorro, con un tiempo de respuesta de 2 a 4 semanas, y una
base de recomendacin con herbicidas alternativos para el control de biotipos R
detectados. Los usuarios directos de este servicio sern los productores de trigo y de otros
cultivos extensivos, tcnicos, profesionales y empresas que proveen de insumos a estos
rubros productivos.
Descripcin de los test.
Test molecular. La aplicacin de este test, diseado hasta el momento slo para ballicas
(L. muliflorum y L. rigidum), incluye las siguientes etapas: colecta de plantas en campo,
envo a laboratorio, recepcin de la muestra para su procesamiento, anlisis molecular e
informe final.
Colecta de plantas: Dos procedimientos de colecta son sugeridos. Para una situacin de
campo donde existen focos o manchones de plantas sobreviviendo a una aplicacin, se
recomienda la toma directa en ese sector (Figura 1A). En una situacin previa a un
tratamiento de control donde existe una distribucin amplia de malezas, se sugiere realizar
un muestreo aleatorio y que sea representativo del potrero. Se recomienda tomar plantas
frescas individuales. Se requieren 100 plantas/ha, las que deben ser colectadas en grupos

110

de 10. Una vez realizada la colecta se recomienda enviar la muestra lo ms pronto posible
y dentro de bolsas de papel. Si no es posible su envo inmediato, almacenar a 4 0C hasta su
despacho.
Envo a laboratorio: La muestra debe ir acompaada con una hoja de ingreso que contenga
informacin bsica como el historial de manejo del potrero (cultivos, herbicidas usados,
frecuencia, dosis, niveles de control) y breve opinin del agricultor sobre la eficacia de los
tratamientos en temporadas anteriores (Figura 1B).
Recepcin y anlisis: Una vez en el laboratorio, las plantas se sometern a extraccin de su
ADN (Figura 1C), para efectuar los rondas de amplificacin PCR, digestin con enzimas
de restriccin y revelado en gel de agarosa de mutaciones especficas asociadas a
resistencia a herbicidas inhibidores de la ACCasa y ALS (Figura 2).
Informe final: Se entregarn los resultados de presencia de mutaciones especficas y su
frecuencia, indicando una recomendacin de control con herbicidas alternativos dentro de
48 h de recibida la muestra.

Figura 1. Colecta de plantas (A), envo a laboratorio (B) y extraccin de ADN (C).

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Figura 2. Reaccin PCR, digestin con enzimas, corrida electrofortica y revelado en gel
de agarosa (planta 3, 7 y 8 presentan una mutacin especfica).

111

Test de germinacin in vitro. El procedimiento general de este test para malezas

gramneas (avenilla, ballicas y cola de zorro), considera las etapas de colecta de la semilla
en campo, despacho a laboratorio, recepcin y preparacin de la semilla, anlisis e
interpretacin de resultados y entrega de informe final.
Colecta de semilla: Recorrer el sitio (Figura 3A) y seleccionar puntos de muestreo (Figura
3B) en sectores donde se tenga sospecha de la presencia de malezas resistentes (muestreo
dirigido). Se debe evitar aquellos sectores que no han sido pulverizados, tambin los
deslindes, orillas de camino y en general cualquiera que no sea representativo del
problema. La calidad de la muestra es esencial, para lo cual la semilla debe estar madura, y
colectarse desde plantas que estn en pie. La remocin debe ser directa desde la
inflorescencia a una bolsa (Figura 3C). El tamao de la muestra para una superficie de 1 a
10 ha es de 1.000 a 3.000 semillas (20-60 g avenilla, 4-12 g ballica y 2-8 g cola de zorro)
(Figura 4). Se debe evitar la colecta en momentos de alta humedad por que puede afectar a
la calidad de la semilla, y enviarse lo ms pronto posible al laboratorio. Si requiere ser
almacenada por un periodo prolongado, utilizar bolsas de papel y en condiciones de
refrigeracin (4 5 C).
Envi a laboratorio: La muestra debe ir acompaada con una hoja de ingreso (Figura 5)
que contenga informacin bsica como el historial de manejo del potrero (cultivos,
herbicidas usados, frecuencia, dosis, niveles de control) y breve opinin del agricultor
sobre la eficacia de los tratamientos en temporadas anteriores.
Recepcin y preparacin de la muestra: La muestra se limpia descartando restos o residuos
vegetales y se selecciona la semilla eliminndose toda las daadas y vana. Previo al
anlisis, la semilla se desinfecta y se le somete a un tratamiento de fro.
Preparacin y ejecucin del test: Un aspecto esencial es contar con semilla sensible a
herbicida (biotipo S). El test se inicia con la aplicacin del herbicida y de un tratamiento
qumico para la ruptura de la dormancia. Las muestras del biotipo R y S se hacen germinar
bajo condiciones reguladas de temperatura y fotoperiodo segn especie de maleza. Los
herbicidas que se utiliza son diclofop y clodinafop (inhibidores de ACCasa), iodosulfuron
y flucarbazone (inhibidores de ALS) y glifosato (inhibidor de EPSFs).
Evaluacin e interpretacin de resultados: Se mide la respuesta de la semilla, se procesan
los datos y se someten a un anlisis computacional (Figura 6).
Informe final: El resultado de presencia o ausencia de resistencia demora entre 2 a 4
semanas segn la especie de maleza (14 das para ballicas, 19 das para avenilla y 25 das
para cola de zorro), y se entregar acompandolo de una recomendacin de control con
herbicidas alternativos.

C
Figura 3. Recorrido del sitio (A); punto de muestreo (B) y toma de muestra (C).

112

Figura 4. Semilla de ballicas (a y

b); cola de zorro (c) y avenilla (d).

Figura 5. Hoja de envo a laboratorio.

Figura 6. Evaluacin e interpretacin de resultados.

Base de datos con opciones de control.

Es un catlogo de uso de herbicidas como pauta para prevenir y controlar biotipos R. Esta
base de datos contiene un listado de los biotipos R asociados al cultivo de trigo y a otros
cultivos extensivos importantes en la zona sur, tales como raps y lupino, avena y triticale
confrontado con un listado de herbicidas a los cuales se ha generado resistencia y con un
listado de herbicidas alternativos para su control. El listado de biotipos R contiene una
descripcin de las principales caractersticas como el rea geogrfica (regin), cultivo en
que se colecto, sistema de siembra, rotacin de cultivos y herbicidas a los que se ha
generado resistencia, y sensibilidad a herbicidas alternativos (Tabla 1). Los biotipos R
identificados por los test de deteccin, se confrontan con la base de datos para obtener las
opciones o alternativas de herbicidas para su control.

113

Tabla 1. Ejemplo de base de datos con las principales caractersticas del biotipo resistente
(X) y las alternativas de control.
Biotipo
X

Ao
Deteccin
2006

Regin
La Araucana

Situacin de
colecta
Trigo

Sistema de
siembra
Cero labranza

Rotacin de
cultivos
Trigo-avena

Continuacin Tabla 1.
Biotipo

Resistente a
ACCasa
ALS
diclofop,
flucarbazone
clodinafop,

Sensible a
ACCasa:
tepraloxydim
EPSFs: glifosato

Otras alternativas de
control
ALS: iodosulfuron +
mesosulfuron, imazamox +
imazapyr

Flujo general del SEDBIR.

En la Figura 7 se presenta el flujo del SEDBIR destacndose los pasos generales y tiempos
de respuesta de cada test. Los resultados generados por los test se confrontan con una base
de datos que contiene un listado de herbicidas alternativos para el control de biotipos R,
incluyndose en el informe final la(s) alternativa(s) ms adecuada(s) para el control del
biotipo R detectado.

Figura 7. Flujo que describe el SEDBIR.

Agradecimiento
Este trabajo fue financiado por el Proyecto FONDEF D04I1022.

114