DENSIDAD OPTICA (ABSORBANCIA) Y TURBIDIMETRIA PARA CUANTIFICACIN DE BIOMASA

Mtodos turbidimtricos (pticos).

Son mtodos indirectos de medicin de masa celular. La base comn de estos mtodos consiste en la medicin de
la cantidad de luz dispersada o transmitida a travs de un cultivo bacteriano.
Las suspensiones bacterianas dispersan la luz, al igual que cualquier partcula pequea suspendida en agua (efecto
Tyndall). La dispersin de la luz es, dentro de ciertos lmites, proporcional a la masa del cultivo.
a) Espectrofotmetro: Mide la densidad ptica (D.O.), es decir la absorbancia (una medida de la luz transmitida a
travs de la suspensin).
- Hay que realizar una curva estndar para relacionar los valores de A con la masa bacteriana en una
muestra problema.
- La cantidad de luz dispersada es proporcional al cociente entre el tamao de la partcula y la longitud de
onda incidente; la sensibilidad de la tcnica aumenta pues a longitudes de onda (l) cortas. La
proporcionalidad entre A y masa bacteriana slo es vlida para >107cls/ml.
b) Nefelmetro: mide la luz dispersada por una solucin de partculas. Posee mayor sensibilidad que el
espectrofotmetro
Las fases de crecimiento de una poblacin bacteriana pueden determinarse midiendo la turbidez del cultivo. Aunque
dicha turbidez no es una medida directa del nmero de clulas, su incremento es una indicacin del crecimiento
bacteriano.
El cambio de luz se registra en el espectrofotmetro como porcentaje de transmisin (cantidad de luz transmitida) y
absorbancia o densidad ptica (D.O.), valor derivado del porcentaje de transmisin, correspondiente al log del
cociente entre la intensidad de luz incidente sobre la suspensin (Io) y la de la luz transmitida por la suspensin
A = log Io/I
Turbidimetra: La turbidimetra mide la reduccin de la transmisin de luz debido a partculas de una suspensin y
cuantifica la luz residual transmitida.
Estudios tericos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de diferentes tipos de bacterias,
independientemente del tamao celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad de concentracin de peso
seco. Esto quiere decir que, en soluciones diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al peso seco,
independientemente del tamao celular del microorganismo. Sin embargo, se encuentran absorbancias muy
diferentes por partcula o por UFC cuando los tamaos de las clulas bacterianas son diferentes. Por esta razn,
para estimar el nmero de microorganismos totales o el nmero de microorganismos viables de una suspensin
bacteriana debe realizarse una "curva de calibracin" con cada tipo de microorganismo, slo de esta forma es
posible relacionar Absorbancia (Densidad ptica) con el nmero de microorganismos totales o con UFC.
Peso seco: Concentracin celular bacteriana expresada en unidades de peso seco (g/ml-mg/ml).
La relacin directa entre la absorbancia y el peso seco slo se aplica para suspensiones diluidas de bacterias. Estas
suspensiones no deben tener una absorbancia mayor a 0.3, ya que valores mayores producen desviaciones de la ley
de Beer. Sin embargo, el inconveniente de utilizar suspensiones diluidas puede involucrar un mayor error de pipeteo
y menor sensibilidad por el bajo nivel de absorcin.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL METODO DE CUANTIFICACION DE BIOMASA

Los mtodos de dispersin de la luz son las tcnicas ms utilizadas para monitorear el crecimiento de los cultivos
bacterianos. Son muy tiles y poderosos pero pueden llevar a resultados errneos. Principalmente, dan informacin
sobre el peso seco (contenido macromolecular).

Ventajas
Son mtodos rpidos.
La turbidimetra puede realizarse en espectrofotmetros de radiacin visible o UV.
La fuente de radiacin ms frecuentemente usada es la lmpara de wolframio, pero pueden utilizarse otras
fuentes de radiacin visible.

Desventajas
- Cuantificar microorganismos vivos y muertos.
- til para densidades microbianas bajas de microorganismos unicelulares y tamaos de unos cuantos
micrmetros.
- Para microorganismos ms grandes y productores de polisacridos esta metodologa no es adecuada.
BIBLIOGRAFA:
1. http://www.ucm.es/info/mfar/pdfs/guias/Guia_Indus.pdf
2. http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioRecuento.htm
3. http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/12crecimiento.htm#_Toc58934319