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CURSO TERICOTERICO-PRCTICO DE
ESPECTROMETRA DE MASAS
Dra. Pilar Blasco
Dr. Pablo Candela
VOLATILIZACIN
FRAGMENTACIN?
C6H5COCH5+
C3H3+
120
39
C6H5CO+
CH3CO+
105
C6H5+
43
77 C H +
4
51
Abundancia
Qu ocurre en el Analizador?
m/z
04/12/2012
04/12/2012
Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
7
1900
1946 Tiempo de
vuelo
1949 ICR
2000 Orbitrap
1974 FT-ICR
1950
1918 Enfoque
simple (sector)
1950 FT-MS
2004 LITs
2000
1978 Triple Quads
04/12/2012
Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
10
Sector Magntico
m1 < m2 < m3
IN EN UN CAMPO MAGNTICO
m1
ECUACIN FUNDAMENTAL
m
z
B2R2
2V
m2 m3
Fc = mv2 /R
Fm = zvB
EC = mv2 = zV
zvB = mv2 /R
v2 = 2zV/m
11
Sector Magntico
m
z
B2R2
2V
12
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Sector Magntico
m
z
MODOS DE TRABAJO:
B2R2
2V
B y V CONSTANTES, R VARIABLE
R CONSTANTE, B o V VARIABLE
VARIABLE B (BARRIDO MAGNTICO)
VARIABLE V (BARRIDO ELCTRICO)
PEAK-MATCHING
13
Sector Magntico
m/z =74
m/z =87
m/z =143
t0
m
z
B2R2
2V
BARRIDO
VoB
t1
t2
t3
tSCAN
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Sector Magntico
RESOLUCIN: es baja debido a la gran dispersidad de energas
cinticas de los iones formados en la fuente.
Solucin:ANALIZADOR ELECTROSTTICO
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04/12/2012
Sector Magntico
GEOMETRAS:
ENFOQUE SIMPLE
DOBLE ENFOQUE GEOMETRA NIER-JOHNSON
DOBLE ENFOQUE GEOMETRA INVERSA
TRIPLE ENFOQUE
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Sector Magntico
CARACTERSTICAS
Sector Magntico
En la unidad de Espectrometra de Masas de los SSTTI
04/12/2012
Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
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Cuadrupolar
IN EN UN CUADRUPOLO
20
Cuadrupolar
IN EN UN CUADRUPOLO: en la PRCTICA
Cada pareja de barras opuestas estn conectadas entre s. Una
de las parejas toma polaridad positiva y la otra negativa.
Las barras positivas actan
paso alto,
como un filtro de p
filtrando las masas que
tienen un valor de m/z por
debajo del valor deseado.
Las barras negativas actuan
como un filtro de paso bajo,
filtrando las masas que
tenga un valor de m/z por
encima del valor deseado.
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04/12/2012
Cuadrupolar
ECUACIN FUNDAMENTAL
Ecuaciones de Mathieu.
Cuadrupolar
DIAGRAMAS DE ESTABILIDAD
Lnea de barrido
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Cuadrupolar
MODOS DE TRABAJO:
S/N ~1559.4
BARRIDO
S/N ~18630.2
SIM
BARRIDO (SCAN)
o Informacin estructural
o Comparacin con libreras
SELECCIN DE IONES (SIM o SIR)
o Mejor Sensibilidad (S/N)
o Mayor Selectividad
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04/12/2012
Cuadrupolar
CARACTERSTICAS
Cuadrupolar
MULTIPOLOS
Los CUADRUPOLOS cuando trabajan SOLO con RF no filtran iones,
actan como transmisores de iones. Para este fin tambin son usados
HEXAPOLOS y OCTAPOLOS.
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Cuadrupolar
En la unidad de Espectrometra de Masas de la UA los equipos de
GC/MS de baja resolucin presentan este tipo de analizador (5
en total).
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04/12/2012
Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
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Trampa de iones
IN EN UN TRAMPA DE IONES
29
Trampa de iones
ECUACIN FUNDAMENTAL
30
10
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Trampa de iones
DIAGRAMAS DE ESTABILIDAD
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Trampa de iones
MODOS DE TRABAJO:
La Trampa de Iones trabaja por ETAPAS:
1. ACUMULACIN de Iones en la Trampa
2. CIERRE de la trampa
3. EXPULSIN
Secuencial de los Iones atrapados hacia el detector o
SELECCIN de In para su aislamiento.
4. FRAGMENTACIN del in Seleccionado.
5.
32
Trampa de iones
MODOS DE TRABAJO:
BARRIDO (SCAN)
Expulsin en el lmite de estabilidad
Expulsin resonante
SELECCIN DE IONES
TRANSICIONES (MRM)
EXPERIMENTOS MS/MS o MSn
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11
04/12/2012
ION PRECURSOR
Trampa de iones
210
210
MODOS DE TRABAJO:
222
268 280
165
BARRIDO (SCAN)
170
210
250
290
190 210
1. AISLAMIENTO
2. FRAGMENTACIN
3 AISLAMIENTO
3.
SELECCIN DE IONES
158
TRANSICIONES (MRM)
191
190
160
2
158
150
191 210
170
190
210
IONES PRODUCTO
TRANSICIONES
210 158
210 191
34
Trampa de iones
3-Excitacin
1-Acumulacin
2-Aislamiento
In
Precursor
La energa de
Fragmentacin se aplica
selectivamente. Slo la
recibe el In Precursor o
rango de iones que interese
fragmentar
4-Fragmentacin
He
He
5
6
6-Deteccin
Espectro
MSn
MS/MSMS/
5-Acumulacin
de Fragmentos
Espectro
de Masasn
(n=1-11)35
Trampa de iones
CARACTERSTICAS
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Trampa de iones
TRAMPAS LINEALES (2D)
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Trampa de iones
En la unidad de Espectrometra de Masas de la UA
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Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
39
13
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Tiempo de vuelo
IN EN UN TIEMPO DE VUELO (TOF)
ACELERACIN
de los iones
DETECCIN
VELOCIDADES
TIEMPOS
40
Tiempo de vuelo
ECUACIN FUNDAMENTAL
EC = zV = 1/2 mv2
m/z = 2V / v2 = 2Vt2 / L2
41
Tiempo de vuelo
IONIZACIN
RETARDO
EXTRACCIN
ACELERACIN
ANLISIS (VUELO)
DETECCIN
42
14
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Tiempo de vuelo
RESOLUCIN.
La resolucin de iones se obtiene a partir de dt, por ello los iones deben
abandonar la fuente al mismo tiempo (pulsos de nanosegundos).
Distribuciones temporales
Distribuciones de E.Cintica inicial
Distribuciones espaciales.
REFLECTOR
s/REFLECTOR
c/REFLECTOR
43
Tiempo de vuelo
MODOS DE TRABAJO:
BARRIDO (SCAN)
MALDI-TOF
100 fmol digerido de BSA
44
Tiempo de vuelo
CARACTERSTICAS
45
15
04/12/2012
Tiempo de vuelo
En los SSTTI, actualmente en la Unidad de Protemica de la UA,
disponemos de un equipo MALDI-TOF.
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Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
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ECUACIN FUNDAMENTAL
48
16
04/12/2012
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Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
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Orbitrap
o Trabaja solo con DC.
o FT.
CARACTERSTICAS
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Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
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Sistemas hbridos
9 COMBINAR varios analizadores.
9 Para FAVORECER las VENTAJAS de cada uno, y EVITAR los
INCONVENIENTES.
9 Se simbolizan mediante la combinacin de las ABREVIATURAS en
su orden.
9 Es posible casi CUALQUIER COMBINACIN.
9 Permite realizar anlisis de MS/MS en el ESPACIO.
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04/12/2012
Sistemas hbridos
CLASIFICACIN de los ANALIZADORES
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Sistemas hbridos
CLASIFICACIN
Instrumentos Hbridos Beam-Beam
QqQ, QTOF, BEBE, BEqQ o EBqQ,
p
Instrumentos Hbridos Beam-Trap
QIT, QqLIT, Q/FTICR,
Instrumentos Hbridos Trap-Beam
QIT/TOF, LIT/TOF, QTRAP,
Instrumentos Hbridos Trap-Trap
LIT/FT-ICR, LIT/Orbitrap,
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04/12/2012
Sistemas hbridos
ALGUNOS EJEMPLOS
QqTOF
(QTOF)
QqQ
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Sistemas hbridos
ALGUNOS EJEMPLOS
QqTRAP
(QTRAP)
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EJERCICIO
(BE o EB)
Cuadrupolo
Tiempo de vuelo
FT-ICR
20
04/12/2012
EJERCICIO
Trampa de iones
Cuadrupolo
QTOF
QTrap
FT-ICR
Tiempo de Vuelo
61
RESUMEN
62
63
21
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Qu ocurre en el detector?
REGISTRO Y
AMPLIFICACIN
HAZ IONICO
SEAL
+
+
+
I (V)
QUADS
E.M. VOLTS (CDEM)
(-1200V TO -3000V)
Diagrama de Barras
Abundancia vs m/z
64
9 AMPLIFICACIN
9 RANGO de MASAS
9 SENSIBILIDAD
9 VELOCIDAD de ADQUISICIN
65
Consideraciones generales
Sensibilidad, tiempo de respuesta y precisin son los factores que
determinan el detector ms adecuado.
La sensibilidad est determinada por los iones que alcanzan el detector/
molculas introducidas y por la ganancia.
Algunos detectores son tan sensibles como para detectar un simple in.
Puede ser deseable una posterior amplificacin de la seal en el
detector. Tambin podemos diferenciar entre aquellos detectores que
permiten una medida directa de las cargas que alcanzan el detector, como
son las placas fotogrficas y la Copa de Faraday, de aquellos que aumentan
la intensidad de la seal como los detectores multiplicadores de electrones
o fotones y los detectores array.
Los detectores de iones pueden situarse en el eje del haz de iones o
fuera de ste, dependiendo del diseo del instrumento.
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04/12/2012
Clasificacin
Los detectores de iones pueden dividirse en dos clases:
aquellos que detectan la llegada de todos los iones de forma
secuencial en un punto (detector de iones puntual) y aquellos
que detectan la llegada de iones de forma simultnea a lo
largo de un plano (detector array).
67
Detectores
Placa Fotogrfica
Copa de Faraday
Multiplicador de Electrones
de Dinodos Discretos
Channeltron
Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo
Multicanal
Microchannel Plate
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Placa Fotogrfica
9 Empleado en los primeros espectrmetros
9 Detector simultaneo
9 No cuantitativo
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04/12/2012
Detectores
Placa Fotogrfica
Copa de Faraday
Multiplicador de Electrones
de Dinodos Discretos
Channeltron
Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo
Multicanal
Microchannel Plate
70
Copa de Faraday
9 Gran sencillez y robustez
9 Baja sensibilidad
9 Puede trabajar a presiones relativamente altas
9 Gran linealidad de respuesta
9 Combinado con un SEM
9 Muy precisos. Respuesta independiente de la energa, de
la masa y de la naturaleza del in
9 Baja velocidad de barrido
9 Situado en el eje ptico del haz de iones
71
Detectores
Placa Fotogrfica
Copa de Faraday
Multiplicador de Electrones
de Dinodos Discretos
Channeltron
Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo
Multicanal
Microchannel Plate
72
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Multiplicador de Electrones
a) Multiplicador de electrones secundarios (SEM) de
dinodos discretos
73
Multiplicador de Electrones
b) Detector Channeltron (CEM)
74
Multiplicador de Electrones
9 El ms empleado en MS
9 Tanto para iones positivos como negativos
9 Amplificacin del orden 106-108
9 Requiere alta tensin y mejor vaco
9 Detector de vida limitada
9 Robustos y seguros
9 Ganancias elevadas
9 Dinodos de conversin
9 Tiempos de respuesta (ns)
75
25
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Detectores
Placa Fotogrfica
Copa de Faraday
Multiplicador de Electrones
de Dinodos Discretos
Channeltron
Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo
Multicanal
Microchannel Plate
76
Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo
9 Elevada sensibilidad
9 Larga duracin
9 Elevada velocidad de respuesta
9 Buena estabilidad
9 Deteccin fuera del eje ptico
9 Consta de dinodo, pantalla fosforescente y tubo
fotomultiplicador.
77
Detectores
Placa Fotogrfica
Copa de Faraday
Multiplicador de Electrones
de Dinodos Discretos
Channeltron
Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo
Multicanal
Microchannel Plate
78
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04/12/2012
Multicanal
9 Detector simultneo
9 Elevada sensibilidad
9 Medida rpida
9 Amplificacin (104-107)
9 Diferentes configuracines
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Detectores
Placa Fotogrfica
Copa de Faraday
Multiplicador de Electrones
de Dinodos Discretos
Channeltron
Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo
Multicanal
Microchannel Plate
80
Microchannel Plate
9 Elevada sensibilidad
9 Se pueden conectar varios placas
9 Amplificacin 108
9 Acta como un NICO detector puntual que conecta
todos los multicanales.
81
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Detectores
DETECTORES
SECUENCIAL
(puntual)
SIMULTNEA
(array)
medida directa
COPA FARADAY
PLACA FOTOGRAFICA
con amplificacin
SEM
CENTELLEO
DETECTORES MLTIPLES
MCP
Analizadores
Q, Sector, TOF, IT
Sector
82
CONCLUSIN:
Todos los E. de
Masas no son
i
iguales.
l
Seleccin del
instrumento que
necesitamos para
nuestro anlisis.
83
28