Evoluo paralela em peixes esgana-gatas revelada por novo estudo genmico

Os peixes esgana-gatas so um dos mais poderosos modelos para o estudo da evoluo

morfolgica e adaptativa j que em poucos milhares de anos vrias populaes de esgana-gatas
de trs espinhos (desde a ltima glaciao, 10000 anos atrs) recolonizaram, repetidas vezes,
ambientes de gua doce. A forma ancestral do esgana-gatas de trs espinhos (Gasterosteus
aculeatus) de gua-doce, portanto, era um peixe marinho coberto por uma "armadura" ssea
protetora, mas cujos descendentes, em seus novos habitats de gua doce, por diversas vezes e
de maneira independente, evoluram novas adaptaes morfolgicas e fisiolgicas, como a perda
do revestimento sseo e dos espinhos, alm de mudanas na tolerncia salinidade
O estudo dos genomas desses animais tm revelado algumas mutaes que parecem ter
permitido a vrias populaes dessas populaes uma rpida evoluo adaptativa que foi
necessria na mudana do ambiente marinho para o de gua doce.
A velocidade da evoluo desses peixes impressionante, j que em cerca de 10 geraes os
esgana-gatas marinhos podem perder suas armaduras e espinhos defensivos, substituindo-os por
uma estrutura corporal mais leve e mais adequada vida em gua doce.
Muitos dos trabalhos feitos usando os esgana-gatas vem sendo conduzidos pelo bilogo
evolutivo David Kingsley e seu grupo. Eles tm identificado as diferenas genmicas entre as
variedades marinhas e de gua doce, muitas das quais parecem ser as mesmas, ou pelo menos
muito semelhantes umas s outras, tendo ocorrido de maneira independente muitas vezes nos
diversos eventos de colonizao.
Kingsley e seu grupo recentemente sequenciaram os genomas completos de 21 esgana-gatas
ocenicos e de gua doce provenientes de trs continentes diferentes, publicando-os em um
abrangente artigo na revista Nature.
O estudo de autoria de Jones e colaboradores envolveu o sequenciamento total de alta
qualidade de todo o genoma de um esgana-gata do Alasca - em que cada nucletido de DNA,
presente nas sequncias de leituras utilizadas para montar a sequncia do genoma, foi
sequenciado, em mdia, nove vezes (cobertura de 9x do genoma). Adicionalmente, a equipa de
investigadores tambm produziu sequncias completas, com cobertura de 2,3 vezes, de outros
20 peixes esgana-gata de populaes adicionais espalhadas pelo mundo: 10 em gua doce e 10
em ambientes marinhos, o que, sem dvida, permitiu uma anlise bastante completa de como
adaptaes genticas semelhantes podem ter surgido repetidamente em populaes isoladas.
Por meio do detalhado genoma de referncia obtido a partir do espcime do Alasca, os bilogos
evolutivos identificaram um conjunto de loci (genes) em todo o genoma, cujas diferenas
estavam, consistentemente, associadas a divergncia entre populaes marinhas e de gua
doce. Esse estudo revelou que, em grande parte de seus genomas, os esgana-gatas de gua doce
eram bem mais similares s variedades ocenicas de esgana-gatas vizinhas mais prximas do
que a outros esgana-gatas de gua doce, vivendo em ambientes semelhantes, o que
consistente com a origem comum. Porm, em alguns trechos especficos dos seus genomas,
cerca de 150 sequncias de DNA (exatamente as associadas ao crescimento da 'armadura' e ao
processamento de sal pelos rins), os esgana-gatas das populaes de gua doce e de salgada
eram mais parecidas com as de suas contrapartidas em ambientes similares ao redor do mundo.
Isto , nesses trechos os esgana-gatas de gua doce eram mais parecidos com outros esganagatas de gua doce, enquanto esses mesmos trechos em esgana-gatas de gua salgada eram mais
parecidas com as de outros esgana-gatas de gua-salgada, mesmo eles sendo menos
aparentados.

Greg Wray, pesquisador na Universidade Duke em Durham, Carolina do Norte, no envolvido na

pesquisa, afirmou:
"So uma srie de adaptaes que afetam muitos aspetos do organismo: a forma do peixe, o seu
comportamento, a dieta e as preferncias de acasalamento".
Isto acaba por confirmar um princpio muito geral da evoluo biolgica, j que baseado nessas
semelhanas especficas entre os peixes de gua-doce derivados de populaes independentes,
parece claro que os esgana-gatas no evoluram novas funes a partir do zero, cada vez que os
seus ancestrais entravam em novos ambientes, mas, ao invs disso, alguns poucos peixes
ocenicos mantinham antigas adaptaes genticas a gua doce que lhes permitem colonizar
novos stios, com as primeiras geraes, aps a incurso em novo ambiente, exibindo
caractersticas mistas ou intermedirias, mas, que eventualmente, acabam por ser superadas
pelas caractersticas que favorecem a adaptao gua doce. Em conjunto esses resultados
indicam, portanto, que os esgana-gatas reutilizam a variao gentica compartilhada
globalmente j existente - o que inclui at inverses cromossmicas - e estas, de modo geral,
parecem ser muito importantes para a manuteno de ectipos divergentes durante as fases
iniciais de isolamento reprodutivo.
Estudos anteriores, muitos deles conduzidos pelo prprio Kingsley, j haviam mapeado algumas
dessas mutaes em alguns genes, mas uma polmica ainda dividia (e divide) a comunidade
cientfica em relao ao tipo de mutaes que predominariam neste tipo de evoluo
adaptativa. Porm, este novo estudo traz evidncias que esclarecem a situao - pelo menos,
em relao aos esgana-gatas e aponta formas de decidi-la em relao a outros modelos de
evoluo adaptativa. A polmica, a evoluo gentica previsvel? Parte II ou Alm da gentica
parte I, diz respeito a contribuio de mutaes ocorridas nas regies regulatrias dos genes
(como elementos promotores, sequncias amplificadoras/reforadores e outros elementos cisregulatrios) em contraste com a contribuio de mutaes em regies codificadoras que
codificam protenas envolvidas no controle da expresso gnica, como os fatores de transcrio,
elementos trans-ativos, que se ligam a sequncias regulatrias de outros genes, ligando ou
desligando-os em tecidos e momentos especficos e controlando os nveis dos seus produtos.
A figura abaixo esquematiza um gene eucaritico tpico cujas sequncias codificadoras dos
aminocidos, os exons, esto inter-espaadas por sequncias no codificadoras, os introns, que
precisam ser removidos aps a transcrio para formar os RNAs mensageiros (mRNA) maduros
cujos codons sero 'lidos' pelos ribossomas e traduzidos em uma sequncia polipeptdica. So
tambm mostradas as regies regulatrias proximais e distais, como promotores e
reforadores/amplificadores, em que se ligam fatores de transcrio e outras protenas
regulatrias e repressoras e associadas ao complexo de transcrio.

O novo estudo publicado feito pelo grupo de Kingsley mostrou que cerca de 80% das alteraes
genticas associadas as adaptaes a gua doce so provavelmente situados em regies
regulatrias, com apenas, cerca de 20%, afetando diretamente as regies codificadoras dos
genes, potencialmente alterando as protenas por eles codificadas. A abordagem utilizada foi
bastante simples, como explica a biloga evolutiva Hopi E. Hoekstra, da Universidade de
Harvard, em um artigo comentrios sobre o trabalho de Jone et al (2,3),caso no houvessem
regies codificadoras nas pores variantes analisadas, ento as mutaes causais ali eram
consideradas 'regulatrias', com o grupo de Kingsley encontrando mutaes desse tipo em 41%
dos casos. Por outro lado, caso a regioanalisada e detectada como variante contribuinte para a
divergncia oceano-gua doce contivesse tanto regies codificadoras como no-codificadoras,
mas se ainda assim no existisse nenhuma diferena na composio de amino-cidos do
polipeptdeo codificado consistente entre populaes marinhas e de gua doce, estas eram
consideradas, como susceptveis de serem regulatrias", o que constitua 43% dos casos. E, por
fim, caso as mutaes fossem nessas mesmas pores, mas consistentes com diferenas nos
amino-cidos codificados, os autores classificavam-nas como "codificadoras" (17% dos casos) (3).

Este tipo de mutao em regies regulatrias teria uma vantagem ao no interferir na protena
codificada, mas apenas no seus padres de expresso tecido e tempo especficos, sendo portanto
mais suportveis de um ponto de vista adaptativo e potencialmente mais circunscritas a uma
fase do desenvolvimento ou tecido em particular, especialmente, se envolvesse, como muitas

envolvem, a extino da expresso em uma regio ou momento particular. Essas mudanas

regulatrias poderiam, portanto, acelerar a adaptao dos esgana-gatas, com cada mutao
controlando a expresso do gene nos mltiplos tecidos associados ao elemento regulatrio
afetado Veja mais informaes sobre as consequncias de mutaes em "Como distorcer a
gentica e a biologia evolutiva: Muita ignorncia ...".
O estudo tambm mostra que a evoluo dos esgana-gatas ocorre mais pela existncia de
variao gentica prvia, do que por novas mutaes aleatrias surgidas de novo, como enfatiza
o bilogo Greg Wray. Portanto, a variabilidade gentica de uma populao mesmo que a afaste
de um timo adaptativo local pode ser fundamental para a evoluo futura, equilibrando assim
fatores seletivos com a presso de mutao e processos estocsticos e contingentes que no
permitem a total substituio de variantes menos vantajosas por mais vantajosas, o que
contribui para tornar as populaes mais variveis mais adaptveis e exemplificando a complexa
interao de fatores qe acontece durante a evoluo adaptativa.
Hopi E. Hoekstra - que defende a importncia de mutaes codificadoras e que trabalha com a
evoluo adaptativa de pelagem de roedores - reconhece a pertinncia dos novos dados (1):
"Acho que o artigo muito bom, e estou convencido pelos dados"
Porm, acrescenta:
"Poderia ser muito diferente - em termos da frao de mutaes que so codificadoras ou
regulatrias em um organismo que tenha um genoma muito mais simples, ou que tenha se
adaptado muito mais lentamente."
O ponto principal, entretanto, que o mesmo mtodo pode ser aplicado a outros organismos que
evoluram vrias vezes em resposta a alteraes ambientais semelhantes, como afirma Wray.
Este estudo abre novas questes e ajuda a construir uma agenda para pesquisas futuras sobre
esta questo que vo desde descobrir se este padro se repete em outros organismos vivos em
situaes semelhantes at determinar, nos casos que isso ocorra, por que elas ocorrem em
determinadas regies mais do que em outras, de forma paralela e repetitiva.
Algumas dessas perguntas j possuem algumas respostas provisrias como as oferecidas por
pesquisadores como David Stern e Virginie Orgogozo . A partir de seus estudos em Drosfilas
[veja por exemplo " a evoluo gentica previsvel? Parte I"] e outros feitos em nematodes,
alguns cientistas defendem que evoluo paralela deve ocorrer por causa do menor impacto de
mutaes em certos stios que teriam papeis mais circunscritos e menos pleiotrpicos, portanto
com menos risco de interferirem com vrios sistemas ao mesmo tempo (o que chamei de
caminhos mutacionais de menor resistncia), como o caso dos quimiorreceptores srg-36 e 37
em nematides [Veja por exemplo, "O verme que veio do espao ou a evoluo gentica
previsvel? Parte III"]. Alm disso, genes que ocupassem um nvel hierrquico intermedirio e
integrador, em termos da arquitetura das redes gnicas e bioqumicas a que pertencem, o que
Stern e Orgogozo chamam de 'genes de input-output' (como o gene 'shavenbaby' emD.
melanogaster e D. simulans) tambm seriam outros fortes candidatos a serem mais bem
sucedidos caso mutados, j que tambm teriam menos efeitos colaterais negativos e
contribuiriam para mudanas consonantes em mais de um lugar ao mesmo tempo por serem uma
espcie de circuito mestre integrador de mltiplas vias 'acima 'e com mltiplos alvos 'abaixo' mas
cuja atuao se d em uma caracterstica particular, modular.
Estudos como esse, apoiados na novas, rpidas e mais baratas plataformas de sequenciamento e
re-sequenciamento - associadas a outras engenhosas metodologias como a 'sntese funcional' que
permitem 'ressuscitar protenas ancestrais', de Joe Thornton- prometem responder a essas, e a
outras questes, nos dando um panorama cada vez mais completo do processo de evoluo.

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Shen, Helen Stickleback genomes reveal path of evolution Nature | News 04 April 2012
doi:10.1038/nature.2012.10392.
Jones FC, Grabherr MG, Chan YF, Russell P, Mauceli E, Johnson J, Swofford R, Pirun M, Zody MC,
White S, Birney E, Searle S, Schmutz J, Grimwood J, Dickson MC, Myers RM, Miller CT, Summers
BR, Knecht AK, Brady SD, Zhang H, Pollen AA, Howes T, Amemiya C; Broad Institute Genome
Sequencing Platform & Whole Genome Assembly Team, Baldwin J, Bloom T, Jaffe DB, Nicol R,
Wilkinson J, Lander ES, Di Palma F, Lindblad-Toh K, Kingsley DM. The genomic basis of adaptive
evolution in threespine sticklebacks. Nature. 2012 Apr 4;484(7392):55-61. doi:
10.1038/nature10944. PubMed PMID: 22481358.
Hoekstra, Hopi E. Genomics: Stickleback is the catch of the day Nature 484, 4647 05 April 2012
doi:10.1038/484046a Published online: 04 April 2012
http://www.nature.com/nature/journal/v484/n7392/full/484046a.html.
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*Outro estudo com esgana-gatas, mas desta vez usando pares de populaes aparentadas prximas, ambas
descendentes de populaes marinhas, investigou os padres de adaptao especfico a ambientes de
gua-doce lacustres e de corredeiras. Os pesquisadores Marius Roesti, Walter Salzburger, Daniel Berner,
todos da Universidade Basel (em Vesalgasse, na Sua) e Andrew P. Hendry (da universidade McGill, no
Canad) publicaram tambm recentemente no peridico Molecular Ecology um artigo em que
identificaram diferenas em mltiplas regies, bem separadas ao longo dos genomas, correlacionadas com
o nvel de divergncia morfolgica em mltiplos pares dessas populaes descendentes de ancestrais
comuns de esgana-gatas que haviam sofrido seleo divergente e adaptando-se a ambientes lacustres e de
corredeiras.
Dentro dos pares, a divergncia genmica total estava associada com a magnitude da divergncia entre os
fentipos que j sabia-se estarem sob seleo divergente. Esse padro de diversificao genmica
crescente, torna-se cada vez mais enviesado em direo ao centro de cromossomas em oposio s regies
mais perifricas. Os autores do artigo atriburam este padro cromossmico variao na extenso do
efeito carona - em que variantes neutras prximas aos genes realmente vantajosos e que sofrem um
processo de varredura seletiva (selective sweep) e que, por isso, aumentam rapidamente de frequncia
na populao, arrastando as variantes - principalmente nas regies onde h menos recombinao como o
caso dos centros dos cromossomas. Ao corrigir para este efeito, entretanto, tornou-se mais claro que um
grande nmero de genes, amplamente distribudos por todo o genoma, esto envolvidos na divergncia
entre populaes que habitam lagos vs as que habitam corredeiras. Alm desse resultados, os cientistas
analisando pares extras de populaes aloptricas e conseguiram mostrar que a forte divergncia em
algumas regies genmicas tem sido impulsionada, tambm, por seleo no-relacionada s diferenas
entre ambientes de corredeira e lagos. Esse estudo destaca a importante contribuio da grande variao
na taxa de recombinao que gera padres de divergncia genmica heterogneos, indicando que a base
gentica de divergncia adaptativa pode ser mais complicada do que atualmente reconhecido. [Adaptado
do texto j publicado em nosso Facebook]
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Roesti M, Hendry AP, Salzburger W, Berner D. Genome divergence during evolutionary diversification as
revealed in replicate lake-stream stickleback population pairs. Mol Ecol. 2012 Mar 2. doi: 10.1111 j.1365294X.2012.05509.x. [Epub ahead of print] PubMed PMID: 22384978.

Reino:

Animalia

Filo:

Chordata

Classe:

Actinopterygii

Ordem:

Gasterosteiformes

Famlia:

Gasterosteidae

Gnero:

Gasterosteus

Espcie:

G. aculeatus

18 DE JUNHO DE 2009
Cientistas revertem evoluo e devolvem barbatanas a peixe
Os criacionistas costumam dizer que Darwin est errado porque nunca viram uma
espcie se transformar em outra. Pois cientistas americanos acabam de fazer quase
isso: transformaram um peixe de gua doce no seu ancestral marinho, revertendo a
evoluo.
A pesquisa, indita, foi apresentada no ltimo dia 27 nos EUA a uma plateia de
cientistas pelo bilogo David Kingsley, da Universidade Stanford. Foi um dos pontos
altos do 74 Simpsio de Cold Spring Harbor sobre Biologia Quantitativa.
O resultado culmina um esforo de 11 anos de Kingsley e seus colegas para decifrar o
mais novo animal-modelo da biologia, o peixinho esgana-gata (Gasterosteus
aculeatus).
O que os pesquisadores fizeram foi devolver a esgana-gatas de gua doce, que
habitam lagos nos EUA, um par de barbatanas plvicas em forma de espinho. Essas
estruturas esto nas populaes marinhas do bicho, mas foram perdidas em algumas
populaes de lagos nos ltimos 10 mil anos.
O grupo tambm devolveu aos peixes lacustres as placas sseas externas que
caracterizam os esgana-gatas marinhos, mas que igualmente se perderam na gua
doce.
Reverso
"Ns revertemos dois grandes traos morfolgicos", disse Kingsley Folha. "Ganho ou
perda de um membro um grande trao. o tipo de coisa com base na qual os
zologos classificam organismos em diferentes categorias."
Ambas estruturas so usadas para defesa dos esgana-gatas, que so refeio de
diversos predadores no mar.
Os espinhos, na pelve e no dorso, ferem predadores de boca mole, como trutas. Em
alguns dos lagos em que os peixinhos ficaram presos no fim da Era Glacial, porm, os
maiores inimigos dos esgana-gatas so insetos. Eles agarram suas vtimas justamente
pelos espinhos da pelve.
Onde h presso de insetos e pouco clcio na gua, a evoluo acabou por eliminar os
espinhos. Quanto armadura ssea, ela se perdeu em todos os esgana-gatas de gua
doce. "Isso d mais flexibilidade e velocidade de nado", afirmou Kingsley. Restava
descobrir de que forma isso aconteceu -o mecanismo molecular da perda- e, por fim,
tentar emular a ao da seleo natural.
Modelo espera

Kingsley decidiu estudar o esgana-gata em 1998. "Havia milhares de trabalhos sobre

ele, mas ningum havia feito sua gentica molecular. Era um animal-modelo
esperando para acontecer", recorda-se.
Os cientistas comearam coletando animais de vrias populaes de mar e de lago,
com caractersticas diferentes (presena ou no de espinhos plvicos ou armadura), e
cruzando-os. Observando os traos em milhares de filhotes e analisando o seu DNA,
mapearam os genes que respondiam por eles.
O gene que controla quase toda a formao dos espinhos plvicos, por exemplo, foi
identificado: era o Pitx1. Mas Kingsley e colegas ainda precisavam saber o que
acontecia no gene para fazer a diferena entre a presena da pelve no animal marinho
e sua ausncia no esgana-gatas de gua doce.
Para isso, eles sequenciaram o Pitx1 dos dois peixes. A veio a surpresa: "No havia
diferena alguma na parte codificante do gene", conta Kingsley. "Isso faz sentido,
porque o Pitx1 est envolvido na formao da glndula pituitria e da mandbula. No
d para zoar com todas as funes de um gene desses."
O segredo estava nas sequncias de DNA que no trazem a receita para a fabricao
de nenhuma protena (e que at algum tempo atrs eram consideradas mero "lixo"
gentico), mas que controlam a intensidade com que o gene se liga em certos tecidos
e em certas fases do desenvolvimento.
Para descobrir que sequncias eram essas, o grupo quebrou o DNA em pedacinhos e
injetou cada pedacinho em um embrio de peixe para ver no que dava. A busca levou
anos.
Finalmente, a equipa chegou "regio mgica" de controle. Os peixes de lago tiveram
em sua evoluo um trecho de DNA apagado que estava intacto nos ancestrais
marinhos. O tamanho do bloco deletado variava entre as populaes, mas a regio era
sempre a mesma.
A prova final foi feita por um aluno de Kingsley, Frank Chan: pegar o trecho de DNA do
peixe marinho e injet-lo no lacustre. "Ficamos maravilhados em ver que isso
funciona", disse o bilogo. "A regio de controle do Pitx1 do peixe marinho gera um
peixe que tem uma estrutura plvica de novo." O mesmo foi feito para a sequncia
reguladora do gene Ectodysplasin, que controla a armadura.