FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

DIVISION DE ESTUDIOS SUPERIORES

UTILIZACION DE CASCARA DE NARANJA

PARA PRODUCCION DE PROTEINA
UNICELULAR

QUE COMO REQUISITO PARCIAL PARA OPTAR AU

GRADO ACADEMICO DE MAESTRO EN CIENCIAS
CON ESPECIALIDAD EN MICROBIOLOGLA
INDUSTRIAL
P R E S E N T A

MARGARITA XIOMARA CORNEJO MONTENEGRO:

MONTERREY, N. II

DICIEMBRE DE 19*4

;!!

: I

tini ! .17./. " ' J 1 i

):/>)

i),

r,,

/ A J '< I W P M ^ A

J a n :;ft n

\:>V\YW

r:.
()}

'.?:():/ >. il K< )l i,, : i t /

'.{. :.a ;

i-
m

)' $
T UC---- 3-.

. - , I :

>Tv

i-. I

"

'/:

, j. ,! } : jxi;.;;

m w x A

. '

S 3' K M ' B L
<' '

'

! ' W p r

' '"'.''5 -

Seor c o o r d i n a d o r

de l a m a e s t r a en c i e n c i a ,

la tesis

ela-

borada por l a L i c e n c i a d a en B i o l o g a M a r g a r i t a Xiomara

nejo Montenegro,

Cor-

intitulada

UTILIZACION DE CASCARA DE NARANJA PARA PRODUCCION

DE

PRO-

TEINA UNICELULAR.

Ka s i d o a c e p t a d a como r e q u i s i t o

parcial

para o p t a r e l

grado

acadmico de m a e s t r o en c i e n c i a s , e s p e c i a l i d a d fcn M i c r o b i o l o ga

Industrial.

En v i r t u d

de haber c u m p l i d o I n t e g r a m e n t e

de t e s i s v i g e n t e y a l a vez s o l i c i t a m o s
cin

con e l

r e g amento-

a usted la

aproba-

final

COMITE DICTAMINADOR DE LA TESIS

SINODAL

SINODAL

SINODAL

M.C. LUIS GALAN WUNG

VoBo

WJT.

eJM-ft
A E. V l L L A f t f t E A L

JE G .

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NUEVO LEON

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
DIVISION DE ESTUDIOS SUPERIORES

UTILIZACION DE CASCARA DE NARANJA PARA PRODUCCION DE*

PROTEINA UNICELULAR

TESIS
QUE COMO REQUISITO PARCIAL PARA OPTAR AL GRADO ACADEMICO DE MAESTRO EN CIENCIAS CON ESPECIALIDAD EN MICRO
BIOLOGIA INDUSTRIAL PRESENTA
MARGARITA XIOMARA CORNEJO MONTENEGRO

MONTERREY N . L .

DICIEMBRE 1984

RESUMEN

Se hace un a n l i s i s

de l a s

de l a c i s c a r a de n a r a n j a ,
de un medio de c u l t i v o
mentativo proporcione
de p r o t e l n a .

caractersticas
para c o n s i d e r a r l o s

que u t i l i z a d o

nutricionales
como

en un proceso

un p r o d u c t o con una nayor

de m a t e r i a l e s

en medio de c u l t i v o

pectfnicos.

fer-

cantidad

En e s t e p r o c e s o de f e r m e n t a c i n se

zaron cepas de P e n i c i l 1 ium p . y un A s p e r g i l l u s

bos a i s l a d o s

parte-

utilis_p., am-

El uso de

stos

con c s c a r a de n a r a n j a , conduce a l a

o b t e n c i n de un p r o d u c t o con un 20% de i n c r e m e n t o en
c o n t e n i d o de p r o t e n a s

respecto

al m a t e r i a l

Tambin se d e t e r m i n a n e x p e r i m e n t a l m e n t e
ptimos de f e r m e n t a c i n ,

s i n fermentar.

los parmetros

como pH y r e l a c i n

el

slido-liquido.

INDICE GENERAL

pgina

A.-

Introduccin

B.-

Materiales

I.-

y Mtodos

A i s l a m i e n t o y s e l e c c i n de m i c r o o r g a n i s m o s

II.-

Identificacin

III.-

Identificacin

de l o s M i c r o o r g a n i s m o s
de m i c r o o r g a n i s m o s

pecti-

nolticos
IV.- Material

de desecho i n d u s t r i a l

como s u s t r a t o
V.-

Composicin del

VI.-

IX.-

medio de c u l t i v o

Mtodo de i n o c u l a c i n

VIII.-

*
8

Proceso de e s t e r i l i z a c i n

VII.-

utilizado

Proceso de f e r m e n t a c i n

Mtodos de a n l i s i s

8
10
10
11
11

C.-

Resultados y observaciones

13

D.-

Conclusiones

17

E.-

Referencias

F.-

A p n d i c e de t a b l a s

G.-

A p n d i c e de g r f i c a s

31

H.-

Biografa

35

bibliogrficas

de l a a u t o r a

>

19
21

INDICE DE TABLAS

Pgina

I.ti.-

Composicin q u m i c a de la cascara de n a r a n j a
Parmetros u t i l i z a d o s
croorganismos

para l a s e l e c c i n de mi.

en a g a r c s c a r a de n a r a n j a

I I I . - Observacin macroscpica del

en e l medio de e s p o r u l a c i n
IV.-

22

23

P e n i c i l l i u B sp.

de Czapeck.

Observacin macroscpica del A s p e r g i l l u s

24
sp.

en e l medio de e s p o r u l a c i n de Czapeck.
V.-

VI.-

Constituyentes

qumicos

25

de l a c s c a r a de naran.

ja

26

Composicin q u m i c a d e l medio de c u l t i v o

27

V I I . - Composicin de compuestos carbonados y

nitroge

nados de l a c s c a r a de n a r a n j a seca
VIII.- Caractersticas
IX.-

microscpicas

Caractersticas microscpicas

del Aspergi11uS
del

P e n i c i l 1.1 un s p .

28
.

29
30

INDICE DE GRAFICAS

Efecto del

|>H d e l medio de c u l t i v o

p r o d u c c i n de

sobre

la

proteina

Curva de p r o d u c c i n de p r o t e f n a en f u n c i n
del

tiempo

Variantes

en e l

proceso

A.-

INTRODUCCION

A la b i o t e c n o l o g a m i c r o b i a n a ,

se l e d e s c r i b e como l a

cienta

das con su gran p o t e n c i a l

tecnolgica

para a l t e r a r

la

de n u e s t r o s

f i s o n o m a de Ta i n d u s t r i a

que r e d u n d a r a en b e n e f i c i o

de la

Ceni-

de n u e s t r a

poca

sociedad.

Los a n t e c e d e n t e s

a c e r c a de l a u t i l i z a c i n

nismos como agentes de b i o s n t e s i s

c i n animal

Mundial

a la alimenta-

o humana, emergen de l o s e s t u d i o s

de D e l b r u c k , -

de B e r l n ,
( 1 ).

Al

ces c i e n t f i c a s

Instituto

hablar

de e s t o s a n t e c e d e n t e s
es r i g u r o s o

de l a b i o t e c n o l o g a

g l o X I X , cuando L o u i s

biolgicos

f o r m a r o n l a base de d i v e r s o s
al

re-

las r a i -

los orgenes micro-

de Koch, J e n n e r ,

que han c o n t r i b u i d o

se

que t u v o Tugar en e l s i -

Pasteur e s t a b l e c i

Las c o n t r i b u c i o n e s

que

considerar

b i anos y l a d i f e r e n c i a e n t r e f e r m e n t a d n

investigadores

de Fermen-

d u r a n t e l o s aos de l a Primera Guerra

montan a l a poca de G u e r r a ,

{ 2 ).

microorga-

aplicables

Hayduck y Wohl, l l e v a d o s a e f e c t o en e l
taciones

de l o s

putref accinFleming y
procesos

otros
micro-

d e s a r r o l l o y progreso

del

hombre.
Entre las especialidades

de l a B i o t e c n o l o g a

se puede -

considerar

que en l a l t i m a d c a d a , ha s u r g i d o un renovado

i n t e r s en l o s
organismos;
se u t i l i z a
teico

denominada p r o t e i n a

p r o t e i c a por

unicelular,

g e n r i c a m e n t e para a p l i c a r l o

p r o c e d e n t e de m i c r o o r g a n i s m o s

Bacterias,

En l o s

procesos de b i o s n t e s i s

algas,

pases

hongos y

este

trmino

a l c o n c e n t r a d o pro-

unicelulares

como son:

levaduras.

industrializados

t e n materiales subproductos

micro-

y en v a s de d e s a r r o l l o exis-

n a t u r a l es , que pueden s e r

tiles

como complemento de l a d i e t a a n i m a l . Estos subproductos,,

su c o n t e n i d o

residual

de m a t e r i a l e s

asimilables y

con-

fermete*

ci bles

( polmeros

de c a r b o n o ,
sntesis.

como agentes de

Es e v i d e n t e que l a t e c n o l o g a m i c r o b i a n a
de l a s s o l u c i o n e s

poblacional

( residuales,

como son:

industriales,

bioenerga,

alimentacin,

de p r o t e i n a

unicelular.

Entre los m a t e r i a l e s
pleados corno s u s t r a t o
contramos a l g u n o s
bagazo de c a a ,
gunos r e s i d u o s
lla

) son t i l i z a d o s como f u e n t e

empleando m i c r o o r g a n i s m o s

proveer algunas
c i miento

carbonados

de c e r e a l e s

pueda

a l o s problemas d e l

La r e u t i 1 i z a c i n de

municipales

control

bio-

),

creaguas

p r o d u c c i n de -

de i n s e c t o s y

produccin

de desecho que son comunmente em-

para p r o d u c i r

industriales;

protena

unicelular

como l a s mezclas de a z c a r ,

r e s i d u o s de papel y e l s u e r o de l e c h e .
agrcolas
y plantas

en-

como f r u t a s
desrticas,

tropicales,

Al-

cascari-

y se i n c l u y e n tambin

algunas
solpo

fracciones

de p e t r l e o coso Tas q u e r o s i n a s y el ga-

( 1

Los desechos v e g e t a l e s ,
tes y b a r a t o s ,

e n t r e estos

que es u t i l i z a d a

abundan-

tenemos l a cSscara de n a r a n j a

g e n e r a l m e n t e como a l i m e n t o

nado, s i e n d o una f u e n t e
contenido

resultan relativamente

para aves y ga-

p o t e n c a luiente s i g n i f i c a t i v a

de p r o t e T n a de o r i g e n u n i c e l u l a r

si

en

como s u s t r a t o .

Al

hablar

el

es sometida a

un proceso f e r m e n t a t i v o , ya que l a c s c a r a de n a r a n j a
t i e n e una c a n t i d a d de c a r b o h i d r a t o s ,

con-

que l a hace

atractiva

de cSscara de n a r a n j a ,

se hace r e *

ferencia

a todo el

desecho s o b r a n t e en el

j u g o con p r e v i a e x t r a c c i n
sus c a r a c t e r s t i c a s

procesamiento

de l o s a c e f t e s e s e n c i a l e s

pueden a c t u a r como

forma g e n e r a l

En el

topectina,

presentes

pectina,

En l o s

esenciales.

celulosa,

se

tejidos.

pigmentos c.aro.t,enoEn e l Albedo o Meso-

carbohidratos

s o l u b l e s , pro-

peet i na, a m i n o c i d o s y v i t a m i n a s y en l o s segmen-

t o s que cubren l o s
lulosa,

de cada uno de sus

Flavedo o E d i c a r p o encontramos

carpo e s t n

no

s i n embargo, se conocen en -

los constituyentes

ides, vitaminas y aceites

que por

bactericidas.

La c o m p o s i c i n q u m i c a de l a cSscara de n a r a n j a ,
ha e s t u d i a d o con d e t e n i m i e n t o ,

del

sacos de j u g o se ponen en e v i d e n c i a

azcares,

procesos

aminocidos y m i n e r a l e s

b i o t e c n o l g i c o s generalmente se

ce-

3.).

involucra

la presencia
polmeros

de enzimas e x t r a c e l u l a r e s

carbonados de a l t o peso m o l e c u l a r , y en e l

del m a t e r i a l

que en s t e nos ocupa, l a s p e c t i n a s a s

gran i m p o r t a n c i a .
cin aislada

Tales

enzimas se f o r m a n . e b i d o

o en c o n j u n t o

pectinesterasas,

producidas

d i um^Pseudomonas y a l g u n o s
11 i um y A s p e r g i l l u s , l a s
hongos y l e v a d u r a s ,

las

por a l g u n o s b a c i l l u s ,

son

de

a l a ac-

hongos como e l

F u s a r i um,

Penici-

p o l i g a l a c t u r o nasas p r o d u c i d a s
poligalacturonato-1iasas

por -

producidas

Erwi n a s y

generalmente

las
por

( 4 ).

potencial

riales

caso

por algunos gneros de C l o s t r i -

Aeromonas, Xantomonas,

Esta i n v e s t i g a c i n
lor

los

de una s e r i e de enzimas como las

p o l i m e t i 1 g a l a c t u r o n a t o - 1 i asa p r o d u c i d a s
hongos

que h i d r o l i z a n '

de l a

e s t encaminada a d e t e r m i n a r

la actividad

de A s p e r g i 11 us s p . y o t r a
teriales

pcticos.

va-

c s c a r a de n a r a n j a como f u e n t e de mate-

que por b i o t r a n s f o r m a c i n

l a r , y de e v i d e n c i a r

el

generen p r o t e l n a
pectinoltica

de P e n i c i 11 ioim sp.

unicelu-

de una cepa

aisladas

de ma-

B.-

I.-

MATERIALES Y METODOS

A i s l a m i e n t o y S e l e c c i n de M i c r o o r g a n i s m o s :

El

aislamiento

de l o s m i c r o o r g a n i s m o s

en una r e l a c i n de 1 0 : 5 v / v .
tejidos

infectados

diluyndolo
actividad

con h i s o p o

Para a i s l a r

infectados.

estril,

cepas con p a s i b l e

se e s c o g i r e a s e s p e c f i c a s

infectadas y tejidos

a cabo -

infectadas y -

p e c t i n o l T t i c a y c a p a c i d a d de a s i m i l a r

t o s de h i d r l i s i s ,
naranjas

Para n a r a n j a s

se tom de l a m u e s t r a

en agua e s t r i l .

se l l e v

l o s produccomo s u e l o s ,

Para

determinar

l a s e l e c c i n de l o s m i c r o o r g a n i smos que se emplearon en e s t a

investigacin,

s t o s se i n o c u l a r o n en un medio de

que c o n t e n a cascara de

naranja

En l a t a b l a

como f u e n t e de e n e r g a

b l a No. I

).

utilizado

en l a s e l e c c i n de e s t o s

El c r e c i m i e n t o

No. I I ,

se d e s c r i b e e l

ranja,

de l o s m i c r o o r g a n i s m o s

crecieron profusamente,

a una t e m p e r a t u r a

criterio

microorganismos.

se observ por un

tiempo mximo de 72 h o r a s , s i n embargo, a l g u n a s

en 24 h o r a s

cultivo,

de "las cepas;

en agar c s c a r a

de

na-

de 28C.

Conjuntamente con e s t e mtodo de c r e c i m i e n t o . s e

observ

el d e s a r r o l i o
similar

al

de l a s

anterior,

mes de t r e s
agitacin

cepas en un medio n u t r i t i vo
donde se

cms. de l a cscara

disminuy

colocaron porciones
( 8% p / v

por ocho das en m a t r a c e s

de m u e s t r a a 28C; a l
la

Se h i c i e r o n

liquidounifor-

) , y se mantuvo en

de 250 m i . , c o n 100 mis.

c u a r t o d a de a g i t a c i n a 200

p o r c i n de l a c s c a r a

r.p.m.,

con f o r m a c i n de micelios.

pruebas para l a d e t e r m i n a c i n de p r o t e i n a

t r n d o s e una c a n t i d a d s i g n i f i c a t i v a

encon-

en una de l a s cepas

in-

vestigadas .

Se a i s l a r o n

un t o t a l

de 15 c e p a s , de s t a s ,

se e s c o g i e -

ron dos que se e v a l u a r o n de a c u e r d o a su d i s p o s i c i n

de ere

cimiento,

proce-

c a n t i d a d de p r o t e i n a

so f e r m e n t a t i v o .

En l a s cepas t r a b a j a d a s

de a s p e c t o de hongos y

l o s gneros A s p e r g i l l u s

seleccionados,

sp. y P e n i c i l l l u m

pectinolticas

pectina

Para comprobar s i

por

las

posiblemente
sp.,

se emplearon

a la

utilizacin

los microorganismos,

de n a r a n j a s

de

con

biodegradade l o s

pro-

uno a i s l a d o

del

ambos.

infectadas,

ni o s a m e n t e , se h i c i e r o n c r e c e r
durante

conducira

con l a p o s t e r i o r

ductos c a t a b o l i z a d o s

suelo y o t r o

predominaron

proceso c o n s i d e r a n d o que el m i c r o o r g a n i s m o

caractersticas
c i n de l a

al

levaduras.

Los dos m i c r o o r g a n i s m o s

unidos en e l

presente p o s t e r i o r

podran t r a b a j a r

armo-

en agar c s c a r a de n a r a n j a

24 h o r a s a 28C s i n o b s e r v a r

inhibicin.

II.-

Identificacin

Para l a

de l o s

identificacin

Microorganismos.

de l a s

cepas se l l e g

gnero s i n a b a r c a r l a e s p e c i e , se emple p a r a v s u
c i n l o s mtodos c l s i c o s

hasta el

identifica-

con l o s que se c u e n t a :

Observa-

cin macroscpica, observacin microscpica y preparacin

con a z u l

de l a c t o f e n o l .

Para l a o b s e r v a c i n m a c r o s c p i c a

se hace r e f e r e n c i a a l a s t a b l a s

III.-

Identificacin

de

No.

III

y IV

Microorganismos

una vez que se e s t e r i l i z

crecimiento

Pectinaliticos:

el

pH a 7 , se observ

acetil

bromuro de amonia conocida como

El C e t a v l o n TM es un agente o p a c o ; e l

de l a zona c l a r a g e n e r a l m e n t e se r e l a c i o n a

con el

nismo que . p o t e n c i a l m e n t e descompone l a p e c t i n a

El promedio de l a

zona de p r e c i p i t a d o

mtodo de i d e n t i f i c a c i n
mos que i n c l u a n

aliz

sin

se e n c o n t r

se u t i l i z

comenta que e l

embargo,

en l a

que v a r i a b a

rangos que o s c i l a b a n

el

t i e m p o de

TM se prob a d i v e r s a s

concentraciones

microorga-

( 6 y 7 ).
Este

microorganisLa

C e t a v l o n se d e j a de

investigacin

de 45 m i n u t o s

Ce-

f u e de 0 . 5 cms.

con c i n c o

dimetro

e l As p e r g i 1 1 u s s p . y Peni c i T1 i um s p .

1 i tera tura c i e n t f i c a
a 30 m i n u t o s ,

citada y

de l a s cepas y a l a s 48 horas se l e agreg

la placa p e t r i l ,
t a v l o n TM.

se a j u s t

--

( 5 ),

El medio se prepar de acuerdo a l a l i t e r a t u r a

el

20

que se

re-

incubacin

con

hora.

El

encontrndose

Cetavlon
que

en

la s o l u c i n o r i g i n a l

era como actuaba

satisfactoriamente (6, 7).

IV.-

Material

de Desecho I n d u s t r i a l

Utilizado

COBO

Sustrato:

La c s c a r a de n a r a n j a p r o c e s a d a , f u e e s u s t r a t o
do en l a

investigacin,

zer a cinco minutos

obtener

partculas

se p u l v e r i z

en l a

licuadora

empleaOsteri-

en baja r e v o l u c i n y c i n c o en a l t a ;
u n i f o r m e s se l l e v

La muestra p u l v e r i z a d a

a cabo l a

tanlzacin.

se prob a c o n c e n t r a c i o n e s

3 5 , 40 y 45% p / v e n c o n t r n d o s e que l o s m e j o r e s

para

de 2 5 ,

30,

resultados

se o b t e n a n a 202 p / v .

V.-

C o m p o s i c i n del Medio de
Se a c e p t a en t r m i n o s

t a c i n se d e s a r r o l l a
bases c i e n t f i c a s
bioqumicas
generales

Cultivo:

generales

que el medio de f e r m e n -

con una mezcla de a r t e y c i e n c i a .

se a f i a n z a n

en el

c o n c e p t o de l a s bases

de l o s m i c r o o r g a n i s m o s ,

organismo en

e n c o n t r n d o s e que son -

a un buen nmero de e s p e c i e s .

re cuando se desconocen l o s

Las

detalles

El a r t e se r e q u i e -

especficos

del

micro-

de un medio de

culti-

estudio.

Para e l a b o r a r

la parte c i e n t f i c a

v o , es n e c e s a r i o tomar en c u e n t a :

).11).i i i ). -

La c o m p o s i c i n q u m i c a
Necesidades
Estudio

importantes
tores

del

nutricionales

sustrato

utilizar

de l o s o r g a n i smos

de l o s compuestos empleados como f a c t o r e s

para e s t i m u l a r

la accin c a t a b l i c a .

son f u n d a m e n t a l e s ya que t i e n e n

influencia

Estos facsignifica-

t i v a sobre el

s i stema b i o q u m i c o del

La c i s c a r a
requieren

de n a r a n j a

proceso.

posee compuestos q u m i c o s que

para l a f e r m e n t a c i n ,

se

segn puede o b s e r v a r s e en -

l a T a b l a No. V, l o que se tom en cuenta para l a e l a b o r a c i n

del medio de c u l t i v o .

En l a Tabla No. VI

se observa

la

c o n c e n t r a c i n de carbono que es i m p o r t a n t e tomando en cuent a que e n t r e l o s

esta

la f i b r a

micelulosas,
tudiar

aportadores

principales

cruda compuesta
etc.

de:

celulosa,

En l a l i t e r a t u r a

las d i s t i n t a s

de e s t o s

p e n t o s a n a s , he-

cientfica

se pueden es-

c o n c e n t r a c i n es de l a f i b r a

s e n t e en mayor o menor c a n t i d a d en l o s p r o d u c t o s
En l a t a b l a

No. V I I

es de un 30.
compuestos,
son:

pH.

el

sealar

que pueden s e r v i r
pectina,

fosfato

Hay c i e r t o s

en el

elementos

utilizada

vegetales.

p r e s e n c i a de

otros

de e n e r g a como -

fue f o s f a t o

de

amonia

proceso como e s t a b i l i z a d o r
que son e s e n c i a l e s

proceso.

de l a s

enzimas

calcio,
necesarias

En l a T a b l a No. V se c o n s i -

dera l o s puntos de e s t e medio t i l i z a d o en l a

con t r a z a s

del

para e l c r e c i -

cobre, magnesio,

z i n c , y t a m b i n como a c t i v a d o r e s
en e l m e t a b o l i s m o d e l

la

como f u e n t e

m i e n t o de l o s hongos como s o n :

En l a s o l u c i n

pre-

etc.

La f u e n t e de n i t r g e n o
sirviendo

cruda

se o b s e r v a que en l a c a s c a r a de n a r a n j a

Es i m p o r t a n t e

Almidn,

carbonos

de e l ementos, el

investigacin.

cloruro

de -

c a l c i o se d i s o l v i

a p a r t e ya que presentaba d i f i c u l t a d en -

su c l a r i f i c a c i n ;

el

no p r e c i p i t a r a

r e s t o de l a s o l u c i n .

el

c l o r u r o de Zinc se a c i d i f i c

para

que

La p r e s e n c i a

de ex-

t r a c t o de l e v a d u r a en e l medio fue para p r o > e e r a l o s

orga-

nismos de f u e n t e s

de v i t a m i n a s y

se conoce l a e x i s t e n c i a

aminocidos , porque

de e s t o s compuestos en l o s

de l a c a s c a r a no se c o n t con un dato e x a c t o a l

VI.-

Proceso de

muestras

tejidos

respecto.

Esterilizacin:

La e s t e r i l i z a c i n
peraturas

aunque

debido a l a
inclusive

se prob a d i v e r s a s

p r e s i n es y

tem-

resequedad que se observaba e n * l a s

a 0 . 7 0 3 Kg/cm

y 110C d u r a n t e

e n c o n t r n d o s e que no haba a l t e r a c i n

15

lnn.,

en el medio cuando

la

esterilizacin

de l l e v a b a

a 114C por 45 m i n u t o s .
t o d o de e s t e r i l i z a c i n
lizados

a e f e c t o a 0 . 5 6 3 kg/cm

Para p r o b a r l a e f e c t i v i d a d d e l
utilizada

se d e j a r o n a t e m p e r a t u r a

Mtodo de

de 28 y 37C d u r a n t e

o disminuir

para l a g e r m i n a c i n

crecimiento.

l a f a s e de l a t e n c i a

requerida

de e s p o r a s , se c o l o c s u s p e n s i n de ca-

cepas en un matraz de 250 m i .

muestra empleada en l a
cara de n a r a n j a

10 -

Inoculacin:

Para e l i m i n a r

da una de l a s

m-

todos l o s matraces e s t e r i -

d a s y en ninguno de l o s casos se o b s e r v
VII.-

de presin

investigacin,

con 100 m i .

sustituyendo

por g l u c o s a como f u e n t e de c a r b o n o ,

1 a^

de
cSs-

( 8 ).

Se c o l o c en a g i t a c i n

por 24 horas a 200 r . p . m .

a 28C, -

para l e e r en e l e s p e c t r o f o t m e t r o Beckman J n i o r
500 nm emplendose una t u r b i d z e q u i v a l e n t e
mitancia.

De e s t a m u e s t r a se tom 5 m i ,

para e l

proceso de f e r m e n t a c i n .

VIII.-

Proceso de

al

cultivo

a 66% de t r a n s -

respectivamente

Fermentacin:

En m a t r a c e s de 250 m i ,
temperatura

II

con 100 m i .

de s o l u c i n

de 28C y a g i t a c i n a 250 r . p . m .
sumergido.

se di

El tiempo de f e r m e n t a c i n

una

inicio

f u e de volumen

s e i s d a s a pH 6, s i n o b s e r v a r s e d i s m i n u c i n en e l

d e l medio y l e v e s v a r i a c i o n e s
s e r v a r o n cambios f s i c o s
comprob a l

tercer

l u c i n de f o s f a t o s

IX.-

Mtodos de

A.-

visibles,

al

a una d i l u c i n

se

pH p t i m o .

A los

los

15 m i n u t o s

cido c l o r h d r i c o ,

La c u r v a de c a l i b r a c i n

na grado 1 , con una s o l u c i n

de 1 : 3 5 , a 10 m l . -

de l a s o l u c i n

102 para s o l u b i l i z a r

se agreg el

emple c a l o r .

pH

Total:

agreg 1 m i .

como p e c t a t o de s o d i o .
lucin,

del

Anlisis:

de l a muestra se l e
sodio

No se ob-

a g r e g n d o l e una so-

para m a n t e n e r l o en e l

D e t e r m i n a c i n de P e c t i n a

de

la v a r i a c i n

d a cuando b a j a 5 ,

La muestra se t r a b a j

do

en l a t e m p e r a t u r a .

de

hidrxi-

compuestos

pcticos

se f i l t r a b a

la

so-

y posteriormente
se t r a b a j

p a t r n de l g .

se

con p e c t i -

x 1000 m i . (

9 ).

B.-

Anlisis

de

Carbohidratos:

Las m u e s t r a s se t r a t a r o n
determinacin

C.-

cuantitativa

Determi n a c i n de

de B i u r e t

e x t r a c e iones

Para l a

de c a r b o h i d r a t o s

de p r o t e n a

se t r a b a j

llamada de Robinson-Hodgen,

con h i d r x i d o de s o d i o 1 . 0 N ( 10

identificacin

de l o s

carbohidratos

en e l

proceso de f e r m e n t a c i n se u t i l i z

papel

por e l

mtodo d e s c e n d e n t e ,

l a d o una s o l u c i n
en e t a n o l

al

la

).

con l a

modi-

haciendo

las

).

presentes

cromatografa

emplendose para el

p - a n i s i d i n a 0 . 1 M y cido f t l i c o

de reve-

0.1 M -

96% ( 11 y 12 } .

El p r o c e s o de secado se r e a l i z
a -0.84

( 10

para

Protena:

En l a d e t e r m i n a c i n
ficacin

por el metodo de Fenol

Kg/cm 2 a 80C, por 48 Hs.

en una e s t u f a

de

vaco

C.-

Los m i c r o o r g a n i s m o s
se mencionan en l a s

RESULTADOS

utilizados,

cuyas c a r a c t e r s t i c a s

tablas V I I I y IX, fueron

de acuerdo a su c a p a c i d a d de c r e c i m i e n t o s
cara de n a r a n j a ,
t a s de l a s

cuales

considerndose

seleccionados

sobre el a g a r cs-

que haba 15 cepas

I I y l a comprobacin

el medio de f e r m e n t a c i n de l a p r e s e n c i a de p r o t e n a
en c a n t i d a d

una buena a s i m i l a c i n

sustratos

vas, s i

caractersticas

c u l a r o n en un medio c o n t e n i e n d o

rillas,

no a s

por l o s

tres

a 20C.

La cepa de A s p e r g i l l u s

p e c t i n o l t i cas

pectina

A s p e r g 11 us s_p. c r e c i
el

das

de -

biotransformar

significati-

tomamos en cuenta que ambos m i c r o o r g a n i s m o s

El

unice-

principalmente

c a p a c i d a d para

carbonados en p r o t e n a s .

de c a r b o n o .

en

sp. y P e n i c i l l i u m sp. conducen a

de c a r b o h i d r a t o s ,

e v i d e n c i a n do su

sp. m a n i f i e s t a

aceptable.

La cepa de A s p e r g i l l u s

la glucosa,

distin-

s o l o dos se e s c o g i e r o n de acuerdo a l o s

p a r m e t r o s mencionados en l a T a b l a

lular

se

ino-

como n i c a f u e n t e
en forma de

Peni c i 1 1 i um que no p r e s e n t

esfe-

crecimiento

en que se mantuvo en a g i t a c i n

200

r.p.m.

Adicional
tiene

a e s t a etapa en e l proceso de f e r m e n t a c i n se

la fase del

oxigeno s o l u b i l i z a d o

de a i r e

durante la a g i t a c i n ,

control

adicional

por d i f u s i n

simple-

en l a que no se emple

debido a la l i m i t a c i n

de.4os

ningn

instrumentos

u t i 1 izados.

Esta a g i t a c i n se l l e v
h a s t a donde se

acabo a 250 r . p . m .

pudiera la oxigenacin del

para

proveer

proceso.

La t e m p e r a t u r a f u e mantenida a 28C ya que se comprobque t r a b a j a b a s a t i s f a c t o r i a m e n t e

el

proceso de

a la

vez que

escalamiento.

En l o s e x p e r i m e n t o s
dad p e c t i n o l t i c a

realizados

para d e m o s t r a r

se e n c o n t r a r o n halos

promedio de 0 . 5 cm en e l
pone en e v i d e n c i a

con

lo

cual

cualidades

como b i o d e g r a d a d o r

c a r b o n a d o s , a s i como de b i o t r a n s f o r m a d o r
en

( pectina

polmeros

cantidades

una de e l l a s

carbonados

con

p r e s e n t e s en e l

) y l a buena c a p a c i d a d de ambas para a s i -

l o s p r o d u c t o s de h i d r l i s i s

obtener

polmeros

de 1 os p r o d u c t o s

de 2 cepas m i c r o b i a n a s ,

c a p a c i d a d de h i d r o l i z a r

milar

de l o s

excelentes

protena.

La u t i l i z a c i n

sustrato

la a c t i v i -

de p r e c i p i t a d o

caso del A s p e r g i 1 Tus s p . ,

que e s t a cepa t i e n e

para s e r usada t a n t o

de h i d r l i s i s

simplificara

apreciables

aumenta l a p o s i b i l i d a d

de p r o t e n a

unicelular.

de

Las pruebas r e a l i z a d a s
liquido

p t i m a para l a p r o d u c c i n de p r o t e l p a ,

r e s u l t a d o que s i
p/v,

para d e t e r m i n a r l a r e l a c i n

la

slido-

d i e r o n como

c s c a r a de n a r a n j a se a d i c i o n a a l

l a s mayores c o n c e n t r a c i o n e s

de p r o t e l n a * f u e r o n

20%

obteni-

das, las o t r a s

c a n t i d a d e s , probadas m o s t r a r o n problemas

de

esterilizacin

ya que l a muestra al s a l i r

se

mostraba p a s t o s a , y se h a c i a d i f c i l

del

autoclave

l a a g i t a c i n y en con-

s e c u e n c i a se p r e s e n t a b a una a e r e a c i n d e f i c i e n t e
clarar

Cabe a-

a q u que en e s t o s casos l a e s p o r u l a c i n se

present

ms tempranamente.

En l a
tena

grfica

unicelular

No. 1 se muestran l o s r e s u l t a d o s
obtenidas

del medio de f e r m e n t a c i n ,

haciendo v a r i a c i o n e s

a pH 6.

Esto nos da una idea clara

en e l

nen su mxima a c t i v i d a d a pH 1 i g e r a m e n t e

grficas

fermentacin,

unicelular

detectndose

da de i n c u b a c i n

a 28C.

proceso

la curva

en f u n c i n del

con una c l a r a d i s m i n u c i n en l a v e l o c i d a d
mientras

que e l

5o

3 puede t a m b i n ob-

s e r v a r s e que el mximo de p r o d u c c i n de p r o t e n a

de c a r b o h i d r a t o s ,

de

tiempo de

un mximo de p r o d u c c i n a l
En l a f i g u r a

tie-

cidas.

2 y 3 , se puede o b s e r v a r

i n c r e m e n t o de p r o t e i n a

puede

de p r o d u c c i n de p r o -

a que l a s enztnas i n v o l u c r a d a s

En l a s

pH -

en un rango de pH que va de 5 a 7 -

con un mximo o b s e r v a b l e
respecto

eji e l

en l a mencionada g r f i c a

n o t a r s e que l o s m e j o r e s r e n d i m i e n t o s
tena fueron obtenidos

de p r o -

coincide

de a s i m i l a c i n

pH se m a n t i e n e

constante

durante

todo el p r o c e s o .

s e n t a un i n c r e m e n t o

La c u r v a de protena

c o n s i d e r a b l e entre el

d a de f e r m e n t a c i n

l o cual

soluble

p r i m e r o y segundo

I n d i c a que l a mayor

de p e c t i n a s a s o c u r r e en ese l a p s o de tiempo,-'
con l i g e r o

En e l
al

i n c r e m e n t o en l o s d a s

anlisis

cromatogrfico

produccin

mantenindose

posteriores.

del

c a l d o de f e r m e n t a c i n

5 da de i n c u b a c i n se d e t e c t que l a g l u c o s a

do consumida c a s i en so t o t a l i d a d ,
bohidratos

se p r e s e n t a r o n en e l

cido g a l a c t u r n i c o ,
teratura

cientfica

sis t o t a l ,
el cual

nico confirma
en el medio de

m i e n t r s que o t r o s

anlisis

por l o

cual

car-

La

li-

hiSrli-

(cido poli galacturnico)

en

por cada r e s i d u o

-r

l a p r e s e n c i a de c i d o

l a p r e s e n c i a de una a c t i v i d a d
fermentacin.

si-

como por e j e m p l o

menciona que l a p e c t i n a en su

hay un grupo c a r b o x i l o

galacturnico,

haba

ramnosa, a r a b i n o s a y g a l a c t o s a .

rinde cido pctico

pre-

de c i d o

galactur-

pectinoltica

D. -

DISCUSION Y CONCLUSIONES

Las dos cepas del pro ceso conducen a un i ncremento

p o r t a n t e de l a

protena u n i c e l u l a r ,

posteriormente

en procesos con una c o n c e n t r a c i n

sustrato,

que puede

considerarse-

tomando en cuenta l a s c a r a c t e r s t i c a s

cas de uno de l o s dos m i c r o o r g a n i s m o s

im-

mayor

de

pectinolti-

que p o d r a n l l e v a r

la h i d r l i s i s
t e en e l

total

sustrato

de l a p e c t i n a o de o t r o p o l m e r o
slido.

La a d i c i n de g l u c o s a en e l
datos

proceso p o d r a l l e v a r n o s

i n t e r e s a n t e s , ya que f u e l a de mayor a s i m i l a c i n ,

consideramos
el

presen-

que hay una c a n t i d a d de g a l a c t o s a p r e s e n t e

cromato grama a l f i n a l

de la 6 i o t r a n s f o r m a c i n ,

a
si
en

s i n embar-

go , l o s mi c r o o r g a n i s m o s t i l i z a dos t i e n e n c a p a c i d a d de c r e cer a s i m i l a n d o

galactosa

En l o s m a t r a c e s
varon r e s i d u o s

del

inoculados
sustrato

fueron biodegradados
sidual,

lignina

La t c n i c a

como f u e n t e de c a r b o n o .

en l a

i n v e s t i g a c i n se obser-

( como p u n t o s o s c u r o s

que pueden p e r t e n e c e r

) que no-

a la c e l u l o s a re-

o hemicelulosa.

de e v a p o r a c i n parece recomendable en

alter-

n a t i v a a una f i l t r a c i n
en el

para r e c u p e r a r

la protena

desuelta

s o b r e n a d a n t e ya que como se o b s e r v a en la grfica No. 3

es de i m p o r t a n c i a en e l

proceso.

El p r o d u c t o procesado se o b t i e n e con buena t e x t u r a y

olor

penetrante

pero a g r a d a b l e con un p o r c e n t a j e de

na de aproximadamente el 30% en base s e c a , s i n l l e g a r

t e r m i n a r s e su d i s p o n i b i l i d a d

como a l i m e n t o para aves jr ganado

No se r e a l i z

adecuadamente a l a s

las fases

necesidades.

considerando

a m b i e n t e y en un p r o -

l o que se a s p i r a es r e d u c i r

de o p e r a c i n y o p t i m i z a r

emplea

temperaturas

s i s t e m a , s i n embargo,

que l o s hongos t r a b a j a n a t e m p e r a t u r a
ceso b i o t e c n o l g i c o

a de-

vacuno.

un e s t u d i o de l a s d i v e r s a s

que p o d r a n o p t i m i z a r e l

protel-

como a l i m e n t o b a l a n c e a d o , e l

c o n t e n i d o de l a c s c a r a s i n su b l o t r a n s f o r m a c i n se

de l a

los

gastos

biotransformacin

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1.-

Casas Carni p i I l o

C. ;

2.~

Da S i l v a E. J . ,

'Process Biochemistry;

3.-

Joseph 6 . H . ,
pp.

195.

tural
4.-

Smith G. ,

38.

Sinclair

(1976).

( 1981 )
B. )

Dlvison of

--

Agricul-

{ 1961 ) .
Process B i o c h e m i s t r y p p .

Introduccin a la Micologia
Acribia,

Jayasankar, N . P . ,

Hankin L . ,
logy;

8.-

of C a l i f o r n i a ,

11:124

13

).

Microbiology;
7.-

Alimen.,

( Editor

F o g a r t y VI.M. and Ward O . P . ,

Editorial
6.-

The Orange

University

Sciences

( 1972
5.-

Rev. T e c n o l .

Hockenhull

1 6 : 1 0 2 1 ( 1970

Canadian J o u r n a l

171

of

).

Z u c k e r M . , and Sands D . C . ,

D. J . ,

pp.

Mxico
and Graham P . H . ,

8 : 9 8 ( 1968

Industrial

Appiied

Microbio-

).
Progress

in I n d u s t r i a l

Microbiology;

8 : 9 8 ( 1968 ) .
9.10.-

Monselise J . J . ,

Israel

Hebert D . , S t r a n g e R . E . ,
Ribbons
( 1972

Journal

Methods i n M i c r o b i o l o g y ,

D.W. and N o r r i s J . R . ,
).

of Technology; 7:271

5B

(1969).

Editorial

Academic P r e s s , New York

11.-

P e l t e r s e n N. ;

Biotechnology

12.-

Schwartz, D.,

Analytical

Bioeng. ;

C h e m i s t r y pp.

Ed. Academic P r e s s , N.Y. ( 1963

13.-

Slncall

B.,

University
ces
14.-

The Orange;
of

( 1961

Litchfield

XVII:361
1069

(1975),

Heltes

L.

).

Ed. S i n c l a i r

B.

pp. 129.

C a l i f o r n i a , D i v i s i o n of A g r i c u l t u r a l

-Scien-

).
J.H.;

Agricultural

Overbeck R. C . t

and Food C h e m i s t r y ;

1 5 . - F r a z l e r W. C.
Third Edition.

and Davidson R. S . ;
11:2

Food M i c r o b i o l o g y ,
14

{ 1967

).

( 1963

).

Ed. John Wiley & Sons

APENDICE DE TABLAS

TABLA No.

Composicin Qumica de Agar Cascara de Nar a n j a para s e l e c c i n de m i c r o o r g a n i s m o s - peci n o l 1 t i eos.

Cascara de N a r a n j a

B%

F o s f a t o de P o t a s i o

Monobsico

0.2

Fosfato

de P o t a s i o

Dibsico

0.2

Cloruro

de Sodio

0.1

Sulfato

de Magnesio

0.1

Cloruro

de Ca1 c i o

0.1

Extracto
Agar

de Levadura

0.3
3%

p/v
g/1

Parmetros

utilizados

Microorganismos

para l a S e l e c c i n de

en Agar Cscara de N a r a n j a

a).-

Tfempo de

crecimiento

b).-

O b s e r v a c i n m a c r o s c p i c a de l a

ce-

pa ( Abundancia en c r e c i m i e n t o

so-

bre l a s u p e r f i c i e

c}.-

Area de

).

crecimiento.

( T o t a l , mediana, p a r c i a l

<o

T3
i<o
O.

V1

t.
vi)
Q

"O
i0)
>

S_
o

O
c

r
01
u

e
3

Q_

O
I
-

i-

r
U

W
)
ai

S
o
0)

>

i.

T
3

ta

TS

o
O
)

ra

t-

3
V)

O
(
c

OI
a

w
<
e
T

S
LU

s
-

<J

U)
O

o
Or

/>

u
Vf

CT

r-

ra

na

ta

ai
s

<u
c
a*
o

o
(J

i
o
(O
e

<
0

T3
<0
O)
o
o

u
E
ra

<
o
+
J
c
ai

iO
c

s
0)
u

a>
i.

.a
E

O
O
o
fc.
1CJ

0)
o
E
UJ

AS

u
C
V3 X
vQj
L>
O
3
XJ
O
iL.
U
es a
s.
c o
E
V
) U
J

O
i+J
s
u

o
0)
L.
va;
(0
o
r
f
i;
(j
E
01
c
<U
o
in
c
a>
+J
c
r
0)
"O
J>

o
e
o

"O

>

c
<o
Tu
o
4-1
c
0)
E
o>
T
Q.
a
t4->
(A

E
O
c
o
M
L.
+J
tf)
3
u
r
0J

C
A>

VI

10
C

o
t
o
o

U
F"

o.
Q_

V)

<a
i-

0
o
<0
a

O
r
o
u
E

s_
o
o.
4)
+J
C'
4i
S
01
E

1_
O
<4C

4
U

i-

if

3
"O
C

"3
C
O
+J
a
T5
A3
r
XI
e
<0
u
o
c
o
ai

ra

CTI
O
O
o
s
(O

O
U
u
a
o
o
r-

L.

i.

<<J

a>
O

VI

LLI

T3

ta o
u
J= o
*-> +J
p >p
E T
3

CO Lkl

Constituyentes

Qumicos de l a Cscara de

Naranja.
% en Peso seco

M a t e r i a seca

80%

Ceni zas

2.91%

Ca1 c i

0.64%

Magnesio

0.11%

Potasio

0.46%

Sodi o

0.02%

Sulfato

0.23%

Fosfato

0.19%

Carotenos

265 j j g / g

V i t a m i n a Complejo B

Trazas.

Rockland,

L.t

The Orange

The U n i v e r s i t y
Agricultural

Ed. S i n c l a i r , w

of C a l i f o r n i a ,

Science

Division

( 1961 ) .

of

Composicin Qumica del

( 14

Medio de C u l t i v o

).

20

Cscara de N a r a n j a

F o s f a t o de Amonia
F o s f a t o de P o t a s i o

Monobsico

0.5

F o s f a t o de P o t a s i o

Dibsico

0.5

Solucin

con Trazas de Elementos

S u l f a t o de Magnesio
Cloruro

de Sodio

100
20

C l o r u r o de C a l c i o

S u l f a t o de Manganeso

C1oruro de H i e r r o

0.5

S u l f a t o de Cobre

0.05

Cloruro

0.005

Extracto

de Z i n c
de

g/1

levadura

0.5

g/1

TABLA No,

VII

Composicin de Conpuestos Carbonados y Nitrogenados

Fibra

con l a Cscara de Naranja -

Azucares

reductores

Pectinas

(. como P e c t a t o de

Calcio

30

cruda

8.0

Nitrgeno

8.5X

total

5.9X

TABLA No.

VIII

Caractersticas

Microscpicas

Tus

).

SP.

( 5 , 15

Conidiforos

Conidios

de Aspe_rgi 1 -

no septados

alargados

en cadenas

S e p a r a c i n de l o s c o n i d o s en
la

vescula

S m i t h , G., n t r d u c c i n a la Micologia I n dustrial pp171 E d i t o r i a l A c r i b i a , M x i c o .

TABLA Ho.

IX

C a r a c t e r s t i c a s Microscpicas
1ium sp.

( 5 , 15

Conidiforo

de Peni c i 4 -

).

septado

Cadena de c o n i d i o s

unidos al

ester-

i gma

S i n s e p a r a c i n de i o s c o n i d i o s

en l a

veslcula

Smith, G., Introduccin a la micologia Ind u s t r i a l pp. 171 E d i t o r i a l A c r i b i a , M x i c o .

APENDICE DE GRAFICAS

T I E M P O ( DIAS)

0
A

GRAFICA

Ffprtn

Hel

ii

H1

nmHin

rie

PH
PM
PH
PH
PH
PH

6
s 7
a 9

rultvft

(/\Kre

1a

nrn.

Tiempo

(das)

O - C O N C E N T R A C I O N DE PROTEINA
DE MUESTRA SECA.

GRAFICA

Curva de p r o d u c c i n
tiempo.

UNICELULAR

EN MG/flf.

de p r o t e T n a en f u n c i n

del

120

7
65

65J
5

PH

(A
tai

O
3
a

'200

tal

tal

<
e
<

lil

O
M

tai
o
o

o
o

100

O-

CONCENTRACION DE PROTEINA UNICELULAR

O -

CONCENTRACION DE CARBOHIDRATOS

A CONCENTRACION DE PROTEINA
*

TA

CONTROL DE

PH

- Var1nn + AC cn A 1

(SOBRENADANTE)

SOLUBLE

H,-

BIOGRAFIA DE LA AUTORA

La a u t o r a ,
naci el

originarla

de Panam, RepbTca de Panam,

4 de mayo de 1 9 4 5 , es h i j a

de C r i s p i n C o r n e j o He-

neses y de I l u m i n a d a Montenegro de C o r n e j o , m a t r i m o n i o
mado por dos hermanos
la Instruccin

ms;

for-

Rolando Anel y M a r c e l a J u d i t h ,

p r i m a r i a f u e r e c i b i d a en e l

Colegio

Interna

cional

de M a r a

realizados
Panam.

en e l

De a 11f

Inmaculada,

Al

trial,

en l a

recibir

estudios

el T i t u l o ,

inici

cur-

l a d o c e n c i a en l a

afio 1979, que v i n o a

de M a e s t r a en M i c r o b i o l o g a

F a c u l t a d de C i e n c i a s

Actualmente t r a b a j a

en B i o l o g a con e s p e c i a l i d a d en Tecnolo-

Q u m i c a s , de l a

dad Autnoma de Nuevo Len, f i n a l i z a n d o

Biologa,

fueron

pas a l a U n i v e r s i d a d de Panam, para

U n i v e r s i d a d de Panam h a s t a e l
rrey, a iniciar

secundarios

C o l e g i o antes m e n c i o n a d o , de l a c a p i t a l ,

sar l a L i c e n c i a t u r a
ga Mdica.

los estudios

de P r o f e s o r Temporal

MonteIndus-

Universi-

en mayo de 1 9 8 2 .
en l a Escuela de -

U n i v e r s i d a d de Panam, en el rea de

Microbiologa.