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UNIVERSIDAD DE GUANAJUATO

DIVISION DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS


DEPARTAMENTO DE BIOLOGA

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOLOGA CELULAR


Rosa Mara Garca Nieto
Juana Lpez Godnez
Myrna Sabanero Lpez
Lerida Liss Flores Villavicencio
Julio Csar Villagmez Castro

Nombre del Estudiante:__________________________________

FOTO

INDICE

Prctica 1. Manejo, cuidado y uso del microscopio ..... 3


Prctica 2. Observacin de clulas eucariticas....10
Prctica 3. Identificacin de biomolculas en alimentos...13
Prctica 4. Desnaturalizacin de protenas..18
Prctica 5. Permeabilidad celular ..22
Prctica 6. Oxidacin igual a vejez? ...25
Prctica 7. Observacin de cloroplastos, cromoplastos y amiloplastos.27
Prctica 8. Obtencin de DNA ...29
Prctica 9. Mitosis.....32
Prctica 10. Cromatina sexual X en clulas de la mucosa bucal de humano:. 36
Bibliografa general . .. 38

PRACTICA No.1
MANEJO, CUIDADO Y USO DEL MICROSCOPIO
Objetivo: Aplicar los principios tericos y lograr utilizar correctamente el microscopio para el anlisis
de las estructuras celulares que participan en los procesos biolgicos.
Fundamento
El desarrollo del microscopio, hace ms de 300 aos, mostr que la vida no est limitada a
lo que se ve por observacin directa. Aquel invento permiti descubrir niveles de complejidad
insospechados en los organismos vivos. Mediante el microscopio apareca un mundo nuevo que
los cientficos de la poca no saban cmo interpretar. Los primeros, construidos en el siglo XVII,
tenan una sola lente.
Antoni van Leeuwenhoek, un vendedor de telas holands, fue uno de los primeros
fabricantes de microscopios. Su instrumento era bien simple: una sola lente montada en una placa
de metal con tornillos para mover lo que se quisiera ver y enfocar la imagen. Bajo su lente, Van
Leeuwenhoek observ todo lo que pasaba por sus manos: polvo de diamante, lana de cordero,
pelo humano, pepita de naranja, excremento de rana, vino, restos de piel, restos de hueso,
etctera. Cientos de pequeos seres vivos totalmente desconocidos por los cientficos de la poca
aparecan con su microscopio.
Durante 50 aos, Leeuwenhoek public regularmente el resultado de sus minuciosas
observaciones en la Royal Society britnica. Al mismo tiempo, en Inglaterra, Robert Hooke, tambin
describa las maravillas que aparecan a travs de la luz del microscopio. En su libro Micrographia,
que constituy una de las primeras publicaciones sobre el tema, Hooke incluy descripciones y
dibujos detallados de diversas observaciones microscpicas y telescpicas. Si bien Hooke
describi cmo el corcho y otros tejidos vegetales estaban formados por pequeas cavidades
separadas por paredes, a las que llam clulas, su trabajo fue slo descriptivo ya que no esboz
teora alguna.
Las primeras lentes podan producir un aumento de hasta 200 veces, pero tenan varias
limitaciones. Los microscopios distorsionaban la forma y el color de los objetos y la mayora de los
cientficos vea estos instrumentos como juguetes y no como algo til para su trabajo.
Lamentablemente, la ciencia no logr avanzar demasiado con estas observaciones, ya que los
primeros microscopistas no tenan ninguna preocupacin ms que el placer de descubrir cosas
nuevas y no intentaron dar una explicacin terica a lo que vean. Tanto es as que las
observaciones de Leeuwenhoek y Hooke pasaron casi inadvertidas por los cientficos de la poca.
Esto se debe sobre todo a dos razones: Leeuwenhoek no tena educacin formal y Hooke era slo
un empleado de Royal Society, y no miembro de ella. Adems, en el siglo XVII an se valoraban
ms la observacin y la experimentacin, ideas que se continuaba desde de la Edad Media.
Slo a principios del siglo XIX, la microscopia comenz a ofrecer instrumentos adecuados
para el estudio del interior de las clulas. Aparecieron los microscopios compuestos, que en un
principio tenan dos lentes, pero, luego, con el avance de la fotografa, incorporaron una tercera
lente para acoplarle una cmara de fotos o filmadora. En la mitad del siglo XX, el invento del
microscopio electrnico constituy un gran aporte al estudio de la biologa celular, ya que permiti
conocer la tridimensionalidad de las estructuras celulares as como la distribucin espacial de los
componentes moleculares en su interior.
En la dcada de 1930, la microscopia electrnica dio un salto cuantitativo al mejorar su
resolucin. Se logr ver, por ejemplo, lo que hay adentro del retculo endosplasmtico, y por otro
lado, descubrir que las mitocondrias son organelos que estn dentro del citoplasma.

La funcin bsica del microscopio de luz o de campo claro (que se muestra en la figura 1), es la de
obtener imgenes con calidad y aumento y, esta fundamentado en los principios de transmisin,
absorcin, difraccin y refraccin de la longitud de onda de la luz.
El aumento del objeto es logrado usando dos sistemas de lentes conformados por los lentes del
ocular y del objetivo. En este aspecto, los microscopios de campo claro estn equipados con cuatro
objetivos, con un poder de aumento de 4X, 10X (bajo aumento), 40X (alto aumento) y 100X
(Inmersin). Los lentes del objetivo estn ms cercanos al espcimen a observar, produciendo la
imagen real. Esta imagen es despus proyectada hacia el tubo de los oculares, los cuales,
aumentan el espcimen observado por 10X o 12X dependiendo del ocular utilizado, produciendo la
imagen final.
En el microscopio de campo claro no es posible lograr un aumento ilimitado porque los lentes son
limitados en su aumento, por una propiedad conocida como poder de resolucin, que se refiere a la
capacidad de un lente para mostrar dos objetos separados como entidades discretas. El poder de
resolucin (d), es expresado con la siguiente formula d=0.61 /n Sen, donde alfa es la mitad del
ngulo de apertura del lente, n es el ndice de refraccin del medio circundante y es la longitud de
onda de la luz usada (para la luz blanca se asume un valor de 0.53 m). Incrementando el ndice
de refraccin del medio, ms rayos de luz entran directamente en la lente del objetivo, esto explica
porque el aceite de inmersin se utiliza cuando se trabaja con el objetivo 100X. El aceite tiene el
mismo ndice de refraccin que el vidrio y al pasar la luz por el portaobjeto, ocurre solo una mnima
difraccin de la luz y resulta una imagen ms ntida con mayor resolucin.
En la microscopia de campo claro los especmenes pueden ser fijados y teidos, al respecto
existen diferentes tcnicas que pueden ser utilizadas para teir ntegramente las clulas o
componentes especficos de ellas tales como el ncleo, aparato de Golgi, etc

Esquema de microscopio de luz

Material
Cubreobjetos
Perlas de Vidrio
Aceite de Inmersin
Azul tripano (0.4% en Agua)
Cmara hmeda (caja de petri con papel filtro)
Microscopio de Luz
Isopos de algodn
PROCEDIMIENTO
ILUMINACIN DE KHLER
1. Identifique con la ayuda de la Figura 1, las partes del microscopio y verifique su funcionamiento.
2. Abra el diafragma de iris y el diafragma de campo.
3. Suba el condensador hasta el tope, utilizando el tornillo del portacondensador (Figura 2).

4. Seleccione el objetivo de 10X.


5. Ajuste la distancia interpupilar. Enfoque una preparacin con el tornillo macromtrico. Para
realizar el enfoque fino use el tornillo micromtrico. Afine el enfoque para el ojo izquierdo con el
dipter.
6. Cierre el diafragma de campo completamente, se debe ver una luz difusa como aparece en la
Figura 3.

Figura 3. Vista del campo del microscopio con el diafragma de campo completamente cerrado.

7. Utilizando el tornillo del portacondensador, descienda el condensador hasta ver ntido el


diafragma de campo que aparecer como un polgono (Figura 4).

Figura 4. Enfoque del diafragma de campo mediante el tornillo del portacondensador.

8. Centre este polgono con los tornillos posteriores (Figura 5).

Figura 5. a) vista posterior del microscopio en donde se muestran los tornillos de centrado del condensador,
b) campo del microscopio en donde se observa el polgono centrado.

9. Abra el diafragma de campo totalmente (Figura 6).

Figura 6. a) vista lateral del microscopio en donde se muestra la apertura del diafragma de campo, b y c) se
abre el polgono hasta ocupar todo el campo.

10. Contraste la imagen con el diafragma de iris del condensador.

Figura 7. Vista lateral del microscopio en la que seala con una flecha la posicin del diafragma del iris.

11. Para observar sus muestras con el objetivo de 40X y 100X solamente afine el enfoque con el
tornillo micromtrico.
NOTAS:
a) Cada vez que observe con el objetivo de 100X, deber colocar sobre el cubreobjetos de la
preparacin, una pequea gota de aceite de inmersin, la lente del objetivo deber quedar inmersa
en el aceite para tener un mejor resultado. Al retirarlo, absorba el aceite de la lente usando papel
seda. NO OLVIDE LIMPIAR BIEN las lentes de 40X y 100X.
b) Evite que su muestra se seque agregando una gota de la solucin correspondiente por los
bordes del cubreobjetos.
Preparacin de muestras:
1. Limpie y marque 3 portaobjetos o coloque unas pocas esferas de vidrio en cada
portaobjetos sobre de esto, ponga el cubreobjeto y adicione agua (n=1.3330) a una de las
preparaciones , aceite de inmersin (n=1.5150) al segundo y deje al tercero seco (n del
aire=1.000) Observe las preparaciones al microscopio, en orden del incremento del ndice
de refraccin. Experimente con la iluminacin (diafragma y condensador). Para tener la
imagen. Note cmo el cambio en el ndice de refraccin afecta la imagen de las esferas.
2. Colecte epitelio bucal de alguno de los compaeros y colquelo en 500l de Cloruro de
Sodio al 0.9% efecte una observacin directa de la preparacin, observando entre lamina y
laminilla y, por otra parte, coloque una gota de azul de tripano sobre un portaobjetos,
despus adicione una gota de la muestra de epitelio bucal, coloque el cubreobjetos y
examine las clulas utilizando los diferentes objetivos.
3. Compare las imgenes teidas y sin teir y elabore un dibujo marcando los siguientes
componentes de las clulas que han sido observados: ncleos, nuclolo, citoplasma,
inclusiones citoplasmticas y membrana plasmtica.
4.

Tomando en cuenta los lentes, ocular y los objetivos utilizados, determine el aumento de
las imgenes observadas.

Resultados
1. Observacin de las esferas de vidrio. (fotos o dibujos).

2. Diferencias de clulas teidas y sin teir.


7

Clulas epiteliales de la boca (fotos o dibujos).

Conclusin:
A. Iluminacin de Khler

B. Esferas de vidrio
Las esferas de vidrio al observarlas son distintas entre s,

C. Clulas teidas y sin teir

Cuestionario
1. Cules son los sistemas que componen el microscopio de luz? Indica sus partes de cada
sistema.
a) ptico: -Objetivos oculares. Objetivo de aumento
b) Iluminacin: -Lmpara. Condensador. Diafragma.
c) Mecnico: -Brazo. Platina. Botn macro. Botn micro. Pinzas. Revolver.

2. A qu se le llama poder de resolucin? Distancia ms pequea entre dos puntos los cuales
pueden ser vistos como separados.
3. Cul es el lmite de resolucin del ojo humano, del microscopio de luz y el microscopio
electrnico?
8

4. Indique las caractersticas de las diferentes microscopias de luz y electrnica.


Microscopia de luz

Caractersticas

Campo claro

Es la tcnica ms comn. Generalmente se observan preparaciones fijas


o teidas con algn colorante.

Campo Obscuro

Es una tcnica de contraste donde solo la luz difractada desde el


espcimen se usa para formar la imagen. El espcimen aparece
brillante contra un fondo oscuro.

Contraste de Fases

Se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes


claras y oscuras de las clulas sin colorear. Es ideal para clulas
aisladas. El microscopio de fase ilumina el espcimen con un cono
hueco de luz estrecho y entra en el campo de visin del objetivo,
que contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la
intensidad de la luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de
la longitud de onda.

Fluorescencia

Es un microscopio de campo claro al cual se le adicionan filtros


que modifican la luz. Tambin se denomina microscopio
petrogrfico o metalrgico por su uso inicial en el estudio de
minerales, sin embargo su aplicacin se ha extendido al campo de
la biologa, medicina, qumica

Luz Polarizada

Es un microscopio de campo claro al cual se le adicionan filtros que


modifican la luz. Tiene uso inicial en el estudio de minerales, su
aplicacin se ha extendido al campo de la biologa, medicina, qumica
Ideal para la observacin de cristales.

Confocal

Emplea un sistema lser que aplica el haz de luz en forma de


barrido, en una pequea parte del espcimen. El lser aplicado a
una longitud de onda determinada en la muestra, hace que
molculas excitadas de la misma, emitan fluorescencia a una
longitud de onda mayor a la aplicada

Estereoscpico

El microscopio estereoscpico difiere del microscopio ptico


convencional, no solo en su diseo, sino adems, en el principio
de su poder de aumento y en la finalidad de su empleo.
Consistente en el ensamblaje de dos tubos pticos
independientes, diseados para que cada ojo del microscopista
observe la imagen ampliada por un lente objetivo comn, desde
posiciones diferentes, lo que propicia una visin estereoscpica o

tridimensional del objeto.

Microscopia de

Caractersticas

electrnica

Transmisin

Barrido

Es un instrumento que aprovecha los fenmenos fsico-atmicos


que se producen cuando un haz de electrones suficientemente
acelerado colisiona con una muestra delgada convenientemente
preparada. Cuando los electrones colisionan con la muestra, en
funcin de su grosor y del tipo de tomos que la forman, parte
de ellos son dispersados selectivamente, es decir, hay una
gradacin entre los electrones que la atraviesan directamente y
los que son totalmente desviados. Todos ellos son conducidos y
modulados por unas lentes para formar una imagen final sobre
una CCD que puede tener miles de aumentos con una definicin
inalcanzable para cualquier otro instrumento
Est equipado con diversos detectores, entre los que se pueden
mencionar: el detector de electrones secundarios para obtener
imgenes de alta resolucin, un detector de electrones
retrodispersados que permite la obtencin de imgenes de
composicin y topografa de la superficie, un detector de
energa dispersiva permite colectar los Rayos X generados por
la muestra y realizar diversos anlisis semicuantitativo y de
distribucin de elementos en superficies. Se pueden realizar
estudios de los aspectos morfolgicos de zonas microscpicas
Las principales caractersticas de las muestras son: muestra
slida, conductora. Caso contrario, la muestra es recubierta con
una capa de carbn o una capa delgada de un metal como el
oro para darle propiedades conductoras a la muestra. De lo
contrario, las muestras no conductoras se trabajan en bajo
vaco.

PRACTICA No. 2
OBSERVACIN DE CLULAS EUCARITICAS
Objetivo: Realizar observaciones para identificar las caractersticas de las clulas eucariticas.
Fundamento

10

Se denomina eucariotas a todas las clulas que tienen su material hereditario fundamental
(su informacin gentica) encerrado dentro de una doble membrana, la envoltura nuclear, que
delimita un ncleo celular. Igualmente estas clulas vienen a ser microscpicas pero de tamao
grande y variado comparado con las otras clulas.
La alternativa a la organizacin eucaritica de la clula la ofrece la llamada clula
procariota. En estas clulas el material hereditario se encuentra dentro de diferentes
compartimientos llamados organelos, en el seno del citoplasma. Las clulas eucariotas no cuentan
con un compartimiento alrededor de la membrana plasmtica (periplasma), como el que tienen las
clulas procariotas.A los organismos formados por clulas eucariotas se les denomina eucariontes.
Clulas animales
Estructura de una clula animal tpica:
1. Nucleolo,
2. Ncleo,
3. Ribosoma,
4. Vescula,
5. Retculo endoplasmtico rugoso,
6. Aparato de Golgi,
7. Citoesqueleto (microtbulos),

8. Retculo endoplasmtico liso,


9. Mitocondria,
10. Peroxisoma,
11. Citoplasma,
12. Lisosoma.
13. Centriolo.

Las clulas animales componen los tejidos de los animales y se distinguen de las clulas vegetales
en que carecen de paredes celulares y de cloroplastos y poseen centrolos y vacuolas ms
pequeas y, generalmente, ms abundantes. Debido a la carencia de pared celular rgida, las
clulas animales pueden adoptar una variedad de formas e incluso pueden fagocitar otras
estructuras.
Clulas vegetales
Estructura de una clula vegetal tpica:
1. Ncleo,
2. Nucleolo,
3. Membrana nuclear,
4. Retculo endoplasmtico rugoso,
5. Leucoplasto,
6. Citoplasma,
7. Aparato de Golgi,
8. Pared celular,
9. Peroxisoma,

10. Membrana plasmtica,


11. Mitocondria,
12. Vacuola central,
13. Cloroplasto,
14. Plasmodesmos,
15. Retculo endoplasmtico liso,
16. Citoesqueleto,
17. Vescula,
18. Ribosomas.

Las caractersticas distintivas de las clulas de las plantas son:

Una vacuola central grande (delimitada por una membrana, el tonoplasto), que mantiene la
forma de la clula y controla el movimiento de molculas entre citosol y savia.
Una pared celular compuesta de celulosa y protenas, y en muchos casos, lignina, que es
depositada por el protoplasto en el exterior de la membrana celular. Esto contrasta con las
paredes celulares de los hongos, que estn hechas de quitina, y la de los procariontes, que
estn hechas de peptidoglicano.

Los plasmodesmos, poros de enlace en la pared celular que permiten que las clulas de la
plantas se comuniquen con las clulas adyacentes. Esto es diferente a la red de hifas usada
por los hongos.

Los plastos, especialmente cloroplastos que contienen clorofila, el pigmento que da a la


plantas su color verde y que permite que realicen la fotosntesis.

11

Los grupos de plantas sin flagelos (incluidas conferas y plantas con flor) tambin carecen
de los centriolos que estn presentes en las clulas animales.

Material
Microscopio
Mechero
Bistur o tijeras de punta fina
Pinzas y/o palillos estriles
Cebolla
Papel de filtro
Placa de Petri
Piseta
Colorante (verde de metilo o azul de metileno)
Portaobjetos y cubreobjetos
Procedimento
Clulas vegetales (Epidermis de cebolla)
1. Se corta la cebolla por la mitad y se separa una de las capas de la misma.
2. Marca con el bistur o con las tijeras una cuadrcula de pequeo tamao (1 cm de
lado) en la parte interna o cncava de la capa.
3. Separa el fragmento de epidermis con las pinzas y colcalo en el centro del
portaobjetos.
4. Coloca el portaobjetos en la placa de Petri, aade unas gotas de colorante sobre la
muestra y djalo actuar durante cinco minutos.
5. Lava con cuidado el exceso de colorante y scalo con un poco de papel de filtro.
6. Aade una gota de agua a la muestra.
7. Coloca el cubre apoyndolo por un lado y dejndolo caer para que no queden
burbujas.
Observa la preparacin al microscopio, utilizando varios objetivos, realiza un dibujo detallado de las
clulas e indica el aumento del mismo.
Clulas animales (Epitelio de la mucosa bucal)
8. Raspa suavemente el interior del carrillo con las pinzas o con un palillo (siempre por la parte
roma, procurando no cortarse). Coloca la mucosa blanca que se obtiene en el portaobjetos.
9. Realiza una extensin (frotis) deslizando el borde de un porta sobre el que tiene la muestra.
10. Calienta suavemente con el mechero (que no llegue a quemar!) la parte inferior del porta
que contiene la mucosa.
11. El resto del procedimiento es idntico al de la epidermis de cebolla.
Resultados
Haz esquemas de las clulas que observaste, indicando el aumento usado.
partes en cada tipo de clula y marca las diferencias entre ellas.

Seala las

12

Conclusin:

13

PRACTICA No. 3
IDENTIFICACIN DE BIOMOLECULAS ORGNICAS EN LOS ALIMENTOS
OBJETIVO:
Identificacin de carbohidratos, protenas y lpidos en alimentos.
OBJETIVOS PARTICULARES
1.
Identificacin de almidn en alimentos
2.
Identificacin de azcares reductores en alimentos
3.
Identificacin de protenas en alimentos
4.
Identificacin de lpidos en alimentos
BIOMOLCULAS
De todos los elementos que hay en la biosfera, slo seis componen el 99% del mundo vivo, el C, H,
N, O, P y S. Estos no son los elementos ms abundantes en la superficie de la Tierra y, adems,
todos deben ganar al menos un electrn para completar sus niveles energticos exteriores, lo que
implica que suelen establecer enlaces covalentes, con la consiguiente formacin de molculas.En
los seres vivos es muy importante la cantidad de los tomos de carbono. Forman el 19% del cuerpo
humano, se unen por enlaces covalentes, cada tomo de carbono posee cuatro electrones en su
nivel energtico extremo, y puede compartir cada uno de estos electrones unindose, como ya se
ha mencionado, por enlaces covalentes.
El agua representa del 50% al 90% de un sistema viviente y varios iones, sobre todo el K+, Na+ y
el Ca2+, se encuentran formando el 1%. El resto se compone de molculas orgnicas, cuyo
elemento ms caracterstico es el carbono, quien puede unirse de forma covalente a otros tomos
de carbono para formar cadenas, pudiendo as, constituirse una gran variedad de molculas.
Existen cuatro tipos fundamentales de molculas orgnicas:
HIDRATOS DE CARBONO.
LPIDOS.
PROTENAS.
ACIDOS NUCLEICOS.
A. Carbohidratos
1. Concepto - Biomolculas orgnicas formadas por C, H y O
- Frmula bsica: (CH2O)n
- Qumicamente se pueden definir como polihidroxialdehdos o polihidroxicetonas
- Funciones biolgicas: energtica, estructural, sealizacin cellular (oligosacridos)
- Se pueden clasificar en glcidos sencillos (monosacridos), que no se pueden descomponer por
hidrli- sis en otros glcidos, y complejos que s se pueden descomponer. Los glcidos complejos
comprenden a los disacridos (dos monosacridos unidos), a los oligosacridos (entre tres y diez
monosacridos) y a los polisacridos (ms de diez).
B. PROTENAS
1. Concepto
- Biomolculas orgnicas formadas por C, H, O, N y S. Tambin pueden aparecer otros elementos
en menores proporciones. Son macromolculas de elevado peso molecular (5.000 - 1.000.000)
formadas por la polimerizacin de aminocidos.

- Constituyen un 50% del peso seco de un organismo.


- Son especficas de cada especie e incluso de cada organismo.
- Biolgicamente muy activas. Son las mas diversas de las macromolculas. Cada clula puede
contener miles de protenas diferentes las cuales pueden llevar a cabo una amplia variedad de
funciones. Las funciones de las protenas pueden incluir:

Componentes estructurales de clulas y tejidos

Transporte y almacn de molculas pequeas

Comunicacin entre las clulas (hormonas proteicas)

Proporcionar defensa contra infecciones (anticuerpos

Actuar como enzimas (fundamental)

Activadores de genes

Receptores y transportadores de membrana

Factores de crecimiento

Toxinas
C. LIPIDOS
1. Concepto Biomolculas orgnicas formadas por C, H y O; en algunos casos tambin P y N.
- Qumicamente heterogneos. - Insolubles en agua, pero solubles en disolventes orgnicos
apolares. - Presentan un brillo caracterstico y son untuosos al tacto.
2. cidos grasos a. Concepto - cidos monocarboxlicos de cadena larga (14 - 22C, siempre
n par). Los cidos grasos son componentes de muchos lpidos y precursores de otros.
b. Tipos
a) Saturados - No presentan dobles enlaces en la cadena hidrocarbonada. - Puntos de
fusin ms altos que los insaturados del mismo nmero de carbonos. Son ms abundantes
en grasas de animales. - Palmtico (16C), Esterico (18C).
b) Insaturados - Presentan uno o ms dobles enlaces en la cadena hidrocarbonada.
Puntos de fusin ms bajos que los saturados del mismo nmero de carbonos. Predominan
en grasas de origen vegetal. - Oleico, Linoleico , Araquidnico.
MATERIALES Y METODOS
Agua destilada
Vaso de precipitados
Tubos de ensayo
Gradilla para tubos.
Placa trmica
Bao mara
Mortero
Lugol
Fehling A: CuSO4 disuelto en H2O
Fehling B: NaOH y tartrato Na-K disueltos en agua
Reactivo de Biuret
Disolucin de almidn (maizena)
Disolucin de raspado de papa
Disolucin de glucosa
Disolucin de sacarosa (azcar de mesa)
Leche entera (gota blanca)
Leche en polvo (nido)
Clara de huevo

Aceite de cocina
Agua
1.
IDENTIFICACIN DE ALMIDN EN ALIMENTOS: REACCIN DE IODO.
Fundamento. Reaccin del Lugol: Este mtodo se usa para identificar polisacridos. El almidn en
contacto con unas gotas de Reactivo de Lugol (disolucin de yodo y yoduro potsico) toma un color
azul-violeta caracterstico.
1.
Agregar con la pipeta 2 ml de agua, leche entera, leche en polvo, clara de huevo, almidn
(maizena), sacarosa(50%), glucosa (50%) y almidn (papa), aceite de cocina en los tubos 1, 2, 3,
4, 5, 6, 7, 8 y 9 respectivamente.
2.
Aadir unas gotas de lugol. Se observan los tubos y se anotan los resultados.

- Si la disolucin del tubo de ensayo se torna de color azul-violeta, la reaccin es positiva.


2.
IDENTIFICACIN
DE AZUCARES REDUCTORES (REACCIN DE FEHLING) EN
ALIMENTOS
Fundamento: Se basa en el carcter reductor de los monosacridos y de la mayora de los
disacridos (excepto la sacarosa). Si el carbohidrato que se investiga es reductor, se oxidar dando
lugar a la reduccin del sulfato de cobre (II), de color azul, a xido de cobre (I), de color rojoanaranjado.

1.
Agregar con la pipeta 2 ml de agua, leche entera, leche en polvo, clara de huevo, almidn
(maizena), sacarosa(50%), glucosa (50%) y almidn (papa) en los tubos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8
respectivamente.
2.
Aadir a cada tubo 1 ml de Fehling A y 1 ml de Fehling B.
3.
Calentar los tubos de ensayo al bao Mara durante unos minutos hasta observar una
coloracin rojiza en alguno de ellos. Se retiran los tubos y se anotan los resultados.

- La reaccin ser positiva si la muestra se vuelve de color rojo-ladrillo.


- La reaccin ser negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-verdoso
3.

IDENTIFICACIN DE PROTENAS MEDIANTE LA REACCIN EL BIURET

Fundamento: La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la


reaccin del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a la
presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta,
debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de
electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos. . El Cu, en un
medio fuertemente alcalino, se une con los enlaces peptdicos formando un complejo de color
violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentracin de protenas.
1.
Agregar con la pipeta 2 ml de agua, leche entera, leche en polvo, clara de huevo, almidn
(maizena), sacarosa(50%), glucosa (50%) y almidn (papa) en los tubos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8
respectivamente.
2.
Adicionar 1 ml del reactivo de Biuret ( CuSO4 al 4%, Bicarbonato 2% en NaOH 0.1M,
Tartrato de Sodio/ potasio). Se observan los tubos y se anotan los resultados.

La reaccin debe su nombre al biuret, una molcula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NHCO-NH2), da positiva esta reaccin en todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces
peptdicos consecutivos en sus molculas.
TINCIN DE LPIDOS
FUNDAMENTO
Los lpidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante Sudn III.
TCNICA
1. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 1 ml de aceite, clara de huevo,
leche, agua, solucin de cacahuate.
2. Aadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solucin alcohlica de Sudn III.
3. Al otro tubo aadir 4-5 gotas de tinta roja.
4. Agitar ambos tubos y dejar reposar.
5. Observar los resultados: en el tubo con Sudn III todo el aceite tiene que aparecer teido,
mientras que en el tubo con tinta, sta se ir al fondo y el aceite no estar teido.

Resultados
Despus de realizar la metodologa indica si la identificacin es positiva (+) o negativa (-) para cada
muestra.
IDENTIFICACIN DE
Muestra
Almidn
Azcar reductor
Protena
Lpido
1
Agua
2
Leche entera
++
++
3
Leche de polvo
+++
+
+
4
Clara de huevo
+++
++++
++
5
Maizena
++++
+
6
Papa
+++
+++
7
Sacarosa
++
8
Glucosa
++++
9
Aceite de cocina
++++
10 Nueces
+
11 Salchicha
++++
+++
++
a) Almidn

b) Azcar reductor.

c) Protenas

d) Lpidos.

Almidn
Azcar reductor
Protenas
Lpidos

Se le agrega un colorante color verde para poder hacer contraste con el


Sudn III, ya que este el colorante es hidrfilico, y el Sudn III es hidrofbico
por lo que se une a los lpidos.

Conclusiones:
Las protenas a pesar de que son esenciales para el hombre no se encuentran en la mayora de los
alimentos ni en la misma cantidad.

BIBLIOGRAFIA
http://www.korion.com.ar/archivos/biomoleculas.pdf

http://www.bioygeo.info/pdf/Bioquimica.pdf
http://uni-biologia.blogspot.mx/2011/01/identificacion-de-carbohidratos.html
http://www.uniquindio.edu.co/uniquindio/ntic/trabajos/10/davidyoscar/paginas/reccarb.htm
http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.pdf
http://www.euroschool.lu/prof.montilla/ficheroactivi/actividadesbio4_6/PPROTEINAS.pdf

Prctica 4
DESNATURALIZACIN DE PROTENAS
Objetivo: Determinar el comportamiento de una protena globular hidrosoluble bajo condiciones de
desnaturalizacin.
Fundamento
Las protenas son los materiales que desempean un mayor nmero de funciones en las
clulas de todos los seres vivos. Por un lado, forman parte de la estructura bsica de los tejidos
(msculos, tendones, piel, uas, etc.) Y, por otro, desempean funciones metablicas y reguladoras
(asimilacin de nutrientes, transporte de oxgeno y de grasas en la sangre, inactivacin de
materiales txicos o peligrosos, etc.). Tambin son los elementos que definen la identidad de cada
ser vivo, ya que son la base de la estructura del cdigo gentico (ADN) y de los sistemas de
reconocimiento de organismos extraos en el sistema inmunitario.
Son macromolculas orgnicas, constituidas bsicamente por carbono (C), hidrgeno (H),
oxgeno (O) y nitrgeno (N); aunque pueden contener tambin azufre (S) y fsforo (P) y, en menor
proporcin, hierro (Fe), cobre (Cu), magnesio (Mg), yodo (I), etc...
Estos elementos qumicos se agrupan para formar unidades estructurales llamados
aminocidos. Se sabe que de los 20 aminocidos proteicos conocidos, 8 resultan indispensables (o
esenciales) para la vida humana y 2 resultan "semiindispensables".
Los pptidos y el enlace peptdico.
Los pptidos estn formados por la unin de aminocidos mediante un enlace peptdico. Es
un enlace covalente que se establece entre el grupo carboxilo de un aminocido y el grupo amino
del siguiente, dando lugar al desprendimiento de una molcula de agua. As pues, para formar
pptidos los aminocidos se van enlazando entre s formando cadenas de longitud y secuencia
variable. Para denominar a estas cadenas se utilizan prefijos convencionales como:

Oligopptidos.- si el n de aminocidos es menor de 10.


Dipptidos.- si el n de aminocidos es 2.
Tripptidos.- si el n de aminocidos es 3.
Tetrapptidos.- si el n de aminocidos es 4.
Polipptidos o cadenas polipeptdicas.- si el n de aminocidos es mayor de 10.

Estructura de las protenas


La organizacin de una protena viene definida por cuatro niveles estructurales
denominados:

Estructura primaria
La estructura primaria es la secuencia de aminocidos de la protena. Nos indica qu
aminocidos componen la cadena polipeptdica y el orden en que dichos aminocidos se
encuentran. La funcin de una protena depende de su secuencia y de la forma que sta adopte.

Estructura Secundaria.
La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de aminocidos en el espacio. Los
aminocidos, a medida que van siendo enlazados durante la sntesis de protenas y gracias a la
capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una disposicin espacial estable, la estructura
secundaria.
Existen dos tipos de estructura secundaria:
La -hlice
La conformacin . Esta estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre s misma la
estructura primaria. Se debe a la formacin de enlaces de hidrgeno entre el -C=O de un
aminocido y el -NH- del cuarto aminocido que le sigue.
Estructura terciaria
La estructura terciaria informa sobre la disposicin de la estructura secundaria de un polipptido
al plegarse sobre s misma originando una conformacin globular.
En definitiva, es la estructura primaria la que determina cul ser la secundaria y por
tanto la terciaria.
Esta conformacin globular facilita la solubilidad en agua y as realizar funciones de transporte,
enzimtica, hormonales, etc. Esta conformacin se mantiene estable gracias a la existencia de
enlaces entre los radicales R de los aminocidos.
Hay varios tipos de enlaces:
el puente disulfuro entre los radicales de aminocidos que tiene azufre.
los puentes de hidrgeno.
los puentes elctricos.
las interacciones hifrfobas.
Estructura Cuaternaria
Esta estructura informa de la unin, mediante enlaces dbiles (no covalentes) de varias
cadenas polipeptdicas con estructura terciaria, para formar un complejo proteico. Cada una de
estas cadenas polipeptdicas recibe el nombre de protmero.
Material
Clara de huevo
Etanol
Jugo de limn
Acido clorhdrico 1N
Hidrxido de sodio 1N
Sal de mesa
Procedimiento
Coloque un poco de clara de huevo en siete tubos de ensaye. A primero agrguele un poco de
etanol, al segundo un poco de jugo de limn, al tercero un poco de HCl 1N, al cuarto un poco de
NaOH 1N, al quinto sal y al sexto btalo con una varilla o vortex, el sptimo agregue solo clara de
huevo. Tape los tubos y espere 10 minutos. A medida que pase el tiempo observe lo que sucede en
cada tubo. Registre sus resultados.

Resultados
Describa las caractersticas de la albmina bajo diferentes condiciones despus de 10 minutos de
incubacin. Ordena de las condiciones de menor a mayor grado de desnaturalizacin enumerando
en la ltima columna. Completar el resultado con fotos o dibujos
Condicin

Etanol

Jugo

n
HCL 1 N

NaoH 1 N

NaCl

Presento mayor grado de desnaturalizacin y mucho ms rpido


que todas las dems. Tuvo un cambio de color a un blanco,
la consistencia tambin se ve diferente.
de Presento un grado de desnaturalizacin menor al del HCL. Cambio
de color slo por la parte superior de la muestra.
lim

(sli
6

Caractersticas

Grado de
desn
atura
lizaci
n
6

Presento un grado de desnaturalizacin mayor a todos excepto al


del etanol. Tardo ms en llegar a ese grado que el etanol.
Cambio su color a un blanco y su consistencia.
Presento un grado de desnaturalizacin menor al que se obtuvo
con el limn. Tuvo un cambio en el color, cambio a blanco.

Presento un grado de desnaturalizacin muy bajo. Tuvo un ligero


cambio en su color, pues ya no fue tan transparente.

No presento ningn estado de desnaturalizacin.


No presento tampoco ningn cambio.

da)
Agitacin
2 minutos

Nativa

Conclusiones:

Cuestionario
1. Cules son las condiciones de desnaturalizacin de protenas para someter a una
separacin por electroforesis en condiciones desnaturalizantes?

2. Mencione dos mtodos de desnaturalizacin de protenas usados cotidianamente en


casa.
Cuando se cocina un huevo.
Cuando se plancha el cabello.
3. Si quisiramos obtener protenas de un homogenado celular, qu condiciones
experimentales debemos cuidar?
Tener un amortiguador pH=7, una temperatura de 4C e inhibidores.

PRACTICA 5
PERMEABILIDAD CELULAR

Objetivo: diferencias entre difusin, dilisis y smosis.


Fundamento
La estructura y funcin de las clulas depende en forma crtica de las membranas, las cuales no
slo separan el interior de la clula de su ambiente, sino tambin definen los compartimentos
internos de las clulas eucariticas, incluyendo el ncleo y los organelos citoplsmicos. La
formacin de las membranas depende de las propiedades de los lpidos y todas las membranas
celulares comparten una organizacin estructural comn de fosfolpidos asociados a protenas.
Estas protenas de membrana son responsables de muchas funciones especializadas.
La membrana celular funciona como una barrera semipermeable, permitiendo el paso a muy pocas
molculas a travs de ella.
Los elementos fundamentales de todas las membranas son los fosfolpidos, los cuales son
molculas anfipticas, lo cual significa que tienen en su estructura una regin hidrofbica (dos
cadenas de cidos grasos) y otra hidroflica (una cabeza polar). Debido a su poca solubilidad en
agua, los fosfolpidos espontaneamente forman bicapas en soluciones acuosas con las cadenas de
cidos grasos inmersas en el interior de la membrana y las cabezas polares expuestas en ambos
lados en contacto con el agua. De esta forma la membrana est estructurada por una bicapa de
fosfolpidos con protenas asociadas.
FUNCIONES DE LA MEMBRANA PLASMTICA:
1.
Compartamentalizacin
2.
Constituyen una barrera selectivamente permeable.
3.
Transporte de solutos
4.
Respuestas a seales externas
5.
Interaccin celular
6.
Sitio de actividades bioqumicas
7.
Transduccin de energa
1) DEMOSTRACIN DE PERMEABILIDAD CELULAR
Material
Vaso de precipitado
Solucin de yodo
Solucin de almidn al 1%
Bolsa de plstico
Condn
Celofn dulce
Hilo de algodn
Procedimiento
Llene el vaso de precipitados con agua hasta el 80% de su volumen, adale 10 gotas de solucin
de yodo y agtelo.
Coloque unos mililitros de solucin de almidn en la bolsa de plstico, en el condn y en el celofn
dulce. Cierre con el hilo de algodn.
Sumerja los sacos con la solucin de yodo y espere unos 10 minutos.
Observe en dnde se form el color azul (adentro o afuera de cada saco).

2) DEMOSTRACION DE LA PRESIN OSMTICA:

Material:
Un huevo.
Un capilar,
Una esptula o cuchara de metal.
Cera
Agua
Vaso de precipitado o un frasco.
Procedimiento:
Tomar el huevo y con una esptula o cuchara, cuidadosamente darle unos golpecitos en el extremo
ms ancho, para conseguir que el cascaron se fracture.
Con los dedos quitar poco a poco el cascaron dejando un espacio cuadrado de 1.5 cm sin romper
la membrana.
En el otro extremo hacer el mismo procedimiento, pero solo quitar un poco de cscara.
En el extremo agudo, introducir con cuidado un capilar hasta que atraviese la membrana. Sellar
con cera el espacio entre el capilar y el cascaron.
Poner el agua hasta el borde en un frasco, asentar el huevo por el lado ancho y con la membrana
integra, y que est en contacto con el agua.
Dejar el huevo durante una hora y observar cada 15 minutos el capilar.

Resultados: completar con dibujos o fotos.


1. PERMEABILIDAD CELULAR

2. PRESIN OSMTICA

Conclusiones

Cuestionario
1. De acuerdo al modelo del mosaico fluido, de qu estn constituidas las membranas
celulares?

2. Qu factores afectan la fluidez de las membranas celulares?

3. Explica porque se forma el color azul en el experimento de permeabilidad (fundamento).

4. En el experimento de presin osmtica. qu determina la direccin en la cual se mueve el


agua?

4. Cuntos tipos de transporte se llevan a cabo a travs de la membrana y cul se us en el


experimento?

PRCTICA No. 6

OXIDACIN IGUAL A VEJEZ?


Objetivo: Determinar la actividad de peroxidasa (catalasa) en frutas y verduras y observar el efecto
del calor y el pH.
Fundamento
Los peroxisomas son vesculas simples limitadas por membranas con un dimetro de 0.1 a 1.0 m
que contiene un centro denso y cristalino de enzimas oxidativas. Son organelos con mltiples
funciones y contienen ms de 50 enzimas que participan en actividades tan diversas como la
oxidacin de cidos grasos de cadena muy larga y la sntesis de plasmalgenos. En este sitio se
produce perxido de hidrgeno por accin de varias enzimas peroxismicas como la Oxidasa de
Urato, oxidasas de aa. El H2O2 generado se degrada rpidamente mediante la enzima catalasa, que
est presente en grandes concentraciones en estos organelos. La actividad de esta enzima evita la
vejez y la muerte celular prematura.
Material
Amortiguador de fosfatos 50 mM pH 7.0
HCl 0.1M
NaOH 0.1M
Agua oxigenada al 30%
Bencidina 40 mM
Extracto de manzana o rbano
Procedimiento
Coloque un poco de extracto de manzana en un tubo y pngalo en un bao mara a 100C durante
al menos 10 minutos. Mientras tanto, numere cinco tubos de ensaye y agregue los reactivos en el
orden establecido en la tabla siguiente:
No. tubo
Amortiguador de

10 gotas

fosfatos
Extracto de manzana o

10 gotas

rbano
Extracto de manzana o

10 gotas

5 gotas
5 gotas

5 gotas
5 gotas

5 gotas
5 gotas

3 gotas
5 gotas
5 gotas

3 gotas
5 gotas
5 gotas

rbano hervidos
HCl * 1M
NaOH* 1M
H2O2 30%
Bencidina
40 mM

10 gotas

10 gotas

*Incube 30 segundo e inicie el revelado de la actividad adicionando a todos los tubos el H2O2 y
enseguida la Bencidina.
Agite los tubos y observe el color desarrollado en cada tubo durante 10 minutos.
Observaciones

Conclusin:

Cuestionario
1. Explica la reaccin enzimtica del experimento y el desarrollo del color.

2. En qu organelo se encuentran las peroxidasas y cual es su funcin?


Menciona algunos ejemplos.

3. Cul es el papel de la catalasa?. Escribe la reaccin enzimtica que realiza.

PRACTICA No. 7
OBSERVACIN DE CLOROPLASTOS, CROMOPLASTOS Y AMILOPLASTOS

Objetivo: Observar al microscopio y reconocer algunos orgnulos vegetales: cloroplastos,


cromoplastos y amiloplastos.
Los vegetales son seres auttrofos fotosintticos. Gracias a la clorofila son capaces de sintetizar
materia orgnica, fundamentalmente glcidos, a partir de compuestos inorgnicos como el CO2.
Los plastos son los principales orgnulos implicados en dicho proceso.
Los plastos son orgnulos citoplasmticos tpicamente vegetales. Pueden estar coloreados por
pigmentos liposolubles o ser incoloros. En el primer caso se incluyen cloroplastos y cromoplastos y
en el segundo los leucoplastos.
Los cloroplastos son los responsables de la asimilacin fotosinttica del carbono en las plantas
verdes, los cromoplastos lo son del color anaranjado o rojizo de distintas estructuras vegetales
(flores, frutos, etc.). Los leucoplastos pueden almacenar almidn, y se denominan amiloplastos;
stos se encuentran en diferentes rganos de reserva (rizomas, tubrculos).
El almidn, es un producto de reserva, que se acumula en ciertas partes de la planta, sobre todo en
las races, tubrculos y semillas y que est destinado a sustentar a la planta. Podemos extraerlo
fcilmente de la patata. En esta se va acumulando en los plastos, en capas concntricas.
MATERIALES
Microscopio ptico, portaobjetos, cubreobjetos, soporte para tinciones, cuchilla o bistur, lugol.
Material biolgico: patata, semillas de legumbres, tomates maduros, lechuga, nopales, hojas.
PROCEDIMIENTO.
CLOROPLASTOS.
Colocar sobre el portaobjetos una membrana delgada de la superficie de una hoja de lechuga o
nopal.
Aadir una gota de agua y poner el cubreobjetos.
Observar al microscopio a distintos aumentos.
CROMOPLASTOS.
Cortar o raspar con un escalpelo, finsimas porciones de pulpa de tomate maduro de la zona
situada bajo el epicarpio (piel).
Depositar la muestra ms fina que se haya obtenido sobre un portaobjetos, colocar encima el
cubreobjetos y comprimir suavemente y lentamente.
Observar al microscopio.
AMILOPLASTOS.
Partir una patata y raspar con la punta del bistur, depositando el producto obtenido en un portaobjeto.
Dejar secar completamente y teir con unas gotas de lugol o yodo. Dejar actuar dos minutos.
Poner el cubre-objeto y observar al microscopio. Con poco aumento buscar la zona de la
preparacin en la que los granos estn menos aglutinados, localizada sta, cambiar a aumentos
mayores. Observar cerrando el diafragma lo mximo permitido por el foco luminoso.
Puede rasparse tambin distintas semillas (juda, guisante, habichuela, maiz, etc), realizando el
proceso similar al del raspado de la patata. Es conveniente para poder ver el aspecto distinto de
amiloplastos en distintas plantas.
Resultados
Indica con Dibujos o fotos las diferencias estructurales de los plstidos sealando a que muestra
pertenecen.

Cloroplastos obtenidos de
una hoja verde observados
con objetivo 10X

Cloroplastos obtenidos de
una hoja verde observados
con objetivo

CROMOPLASTOS.

Cloroplastos obtenidos de
una hoja verde observados
con objetivo 40X

Cloroplastos obtenidos de
una lechuga observados
con objetivo

Cromoplastos obtenidos de una


flor (rosa) observados con
objetivo 10X.

Cromoplastos obtenidos de una


flor (rosa) observados con
objetivo 40X

Cromoplastos obtenidos de una


flor (amarilla) obervados con
objetivo 40X.

Cromoplastos obtenidos de una


flor (amarilla) observados con
objetivo 10X.

Cromoplastos obtenidos de la
piel de un jitomate.

AMILOPLASTOS

Cromoplastos obtenidos de la
pulpa de un jitomate.

Amiloplastos obtenidos de una


papa observados con objetivo
10X

Amiloplastos obtenidos de una


papa observados con objetivo
40X

Conclusin.

Cuestionario.
Cul es el pigmento que contienen los cloroplastos? Qu funcin tienen?
El cloroplasto contiene el pigmento clorofila y es un fotorreceptor responsable de la primera
etapa en la transformacin de la energa de la luz solar en energa qumica.
Qu color presentan los cromoplastos observados? Qu funcin tienen los
cromoplastos?
Presentan un color rosa y un color amarillo, sintetizan y almacenan pigmentos
carotenoides.
Qu funcin tienen los amiloplastos?
La reserva de energa.
Qu es la epidermis de una hoja y qu finalidad tiene? Porqu encontramos en ella
plastos?
Conforma el sistema de tejido drmico de las hojas, tallos, races, flores, frutos y semillas;
es usualmente transparente. Protege y cumple la funcin de revestir exteriormente todos
los rganos vegetales.
Las clulas epidrmicas poseen gran cantidad de vacuolas de pequeo tamao. Los
plastos estn en forma de protoplastos. Presentan el retculo endoplasmtico desarrollado
y muchas mitocondrias debido a que a veces tienen funcin de secrecin. A veces
acumulan pigmentos especiale
Has podido ver algn otro orgnulo celular? Cules?
No.

PRACTICA 8

OBTENCIN DE ADN
Objetivo: Obtener DNA de pltano
Los cidos nucleicos se encuentran en todas la clulas vivas y estn combinados en casi
todos los casos con ciertas protenas. Qumicamente, los cidos nucleicos (as llamados porque
dan una reaccin cida al suspenderse en agua), son enormes compuestos en forma de cintas
de gran longitud, con peso molecular de millones; en estas cintas se repite (a intervalos
regulares) la misma estructura aunque no idntica, representando los enlaces o unidades de la
cadena.
Cada uno de los cientos de unidades que componen un cido nucleico se llama
nucletido y esta constituido de un grupo fosfato y una pentosa (azcar simple con 5 carbonos) a
la cual se fija una estructura orgnica cclica llamada base, perteneciente a los compuestos
conocidos como purina y pirimidinas ( bases pricas y primdicas). Un cido nucleico simple
puede llevar varios o muchos nucletidos y entonces recibe el nombre de polinucletidos. Esto
podra compararse a las unidades de aminocidos que constituyen la cadena peptdica de una
protena.
La hidrlisis de cidos nucleicos por cidos o por cierta enzima origina una mezcla de
varios nucletidos; tal como la hidrlisis de las protenas produce una mezcla de aminocidos. El
azcar y grupo fosfato pueden considerarse como la columna vertebral de los cidos nucleicos;
mientras las bases pueden ser importantes ramificaciones laterales.
Funcin biolgica de los cidos nucleicos
La funcin biolgica de los cidos nucleicos, especficamente el DNA es la de contener la
informacin hereditaria. En 1953 Watson y Crick resolvieron su estructura molecular, dando
comienzo a una nueva era en la bioqumica y la biologa.
Existen dos clases de cidos nucleicos en todo organismo viviente:
cido ribonucleico o RNA
cido desoxirribonucleico o DNA
Por otra parte los virus contienen uno solo ya sea RNA o DNA.
Otras de las funciones biolgicas de los cidos nucleicos son las de almacenamiento,
replicacin, recombinacin, y transmisin de la informacin gentica (son las molculas que
determinan lo que es y hace cada una de las clulas vivas).
Material
Un mortero
Una probeta
Tres vasos de precipitado
Agua destilada
Embudo
Un pltano.
Etanol (95%)
Papel filtro
Detergente
Varilla de agitacin.
Un tubo de ensayo
Sal de mesa
Pipeta Pasteur
Termmetro
Azul de metileno

Procedimiento
Muele el pltano en el mortero con 30mL de agua destilada hasta que quede una pasta
homognea. En un vaso de precipitado, agrega 60mL de agua destilada, 10mL del detergente,
agtalo cuidadosamente con una varilla por dos minutos sin hacer espuma.
Al vaso de precipitado anterior, agrgale 30mL de la pasta del tejido, y luego revuelve con mucho
cuidado por 3 minutos. Coloca el vaso 10 minutos en un bao a 60 oC. Colocar el papel filtro en un
embudo, y filtra la mezcla (puede tardar varios minutos.
En un tubo de ensayo agrega etanol frio (95%). A este tubo con etanol agrega con la pipeta
Pasteur, parte del filtrado del pltano, vers un precipitado de apariencia y filamentosa, este es el
ADN sper enrollado del pltano.
Observaciones

Alcohol con platano.

Conclusiones

Cuestionario
1. Cules son los cidos nucleicos encontrados en las clulas?

2. Qu diferencias estructurales y funcionales presentan entre ellos?

3. Qu importancia tiene el DNA en la trasmisin de la informacin gentica?

4. Cmo se trasmite la informacin gentica a partir de los cidos nucleicos?

PRCTICA 9
MITOSIS
Objetivo: Observar clulas vegetales en proceso de divisin.
Introduccin
Mitosis es la divisin nuclear ms la citocinesis, lo que produce dos clulas hijas idnticas.
Este proceso se divide en varias etapas consecutivas: profase, prometafase, metafase, anafase y
telofase. La interfase es el periodo que hay entre una mitosis y otra. Frecuentemente se incluye en

discusiones sobre mitosis, aunque la interfase tcnicamente no es parte de la mitosis, esta etapa
incluye las fases cosecutivas G1, S y G2 del ciclo celular.
Interfase & mitosis. La clula est ocupada en la actividad metablica preparndose para la
mitosis (las prximas cuatro fases que conducen e incluyen la divisin nuclear). Los cromosomas
no se disciernen claramente en el ncleo, aunque una mancha oscura llamada nucleolo, puede ser
visible. La clula puede contener un par de centriolos (o centros de organizacin de microtubulos
en los vegetales) los cuales son sitios de organizacin para los microtubulos.
Profase. La cromatina en el ncleo comienza a condensarse y se vuelve visible como cromosomas
en el microscopio ptico. El ncleolo desaparece. Los centrolos comienzan a moverse a polos
opuestos de la clula y fibras se extienden desde los centrmeros. Algunas fibras cruzan la clula
para formar el huso mittico.
Prometafase. La membrana nuclear se disuelve, marcando el comienzo de la prometafase. Las
protenas de adhieren a los centrmeros creando los cinetocoros. Los microtbulos se adhieren a
los cinetocoros y los cromosomas comienzan a moverse hacia el plano central de la clula.
Metafase. Las fibras del huso alinean los cromosomas a lo largo de la parte media del huso
acromtico. Esta lnea es referida como, la placa de metafase. Esta organizacin ayuda a
asegurar que en la prxima fase, cuando los cromosomas se separen, cada nuevo ncleo recibir
una copia de cada cromosoma.
Anafase. Los pares de cromosomas se separan por la separacin del centrmero, y son jalados
mediante los cinetocoros hacia lados opuestos de la clula. El movimiento es el resultado de una
combinacin de: el movimiento del cinetocoro a lo largo de los microtubulos del huso y la
interaccin fsica de los microtubulos polares.
Telofase. Las cromtides llegan a los polos opuestos de la clula, y se forman nuevas membranas
alrededor de los ncleos hijos. Los cromosomas se dispersan y ya no son visibles bajo el
microscopio ptico. Las fibras del huso se dispersan, y la citocinesis o divisin citoplsmica de la
clula puede comenzar tambin durante esta etapa.
Citocinesis. En clulas animales, la citocinesis ocurre cuando se forma un anillo fibroso compuesto
de una protena llamada actna, alrededor del centro de la clula. Este se contrae dividiendo la
clula en dos clulas hijas, cada una con su ncleo. En clulas vegetales, la pared rgida requiere
que una placa celular sea sintetizada entre las dos clulas hijas.

Material
Cebolla con races
Frasco con agua
Navaja
Vaso de precipitados de 50 mL
Gotero
Parrilla elctrica
Portaobjetos
Cubreobjetos

Solucin A de aceto-orceina: Sol B de aceto-orceina + HCl 1N (9:1)


Solucin B de Aceto-orcenia (Caliente 45 ml de cido actico y disuelva 2 g de orceina. Deje enfriar
y agregue 55 ml de agua destilada).
Procedimiento
Obtencin de clulas de cebolla en mitosis
1. Colocar la cebolla sobre un frasco lleno de agua, de tal manera que la parte inferior del
bulbo o suela se mantenga en contacto permanente con el nivel del frasco.
2. Evitar que se seque, manteniendo el nivel del agua.
3. A los 2 o 3 das, a temperatura ambiente, las races habrn alcanzado unos tres cm. de
longitud.

Elaboracin de la preparacin microscpica


1. Cuando la raz ha alcanzado el tamao adecuado, cortar la parte ms fina y terminal (meristemo
radicular) con una tijera de punta fina. El fragmento cortado debe tener una longitud de poco ms
de medio cm. para facilitar su manipulacin
2. Coloca la punta de la raz en un vidrio de reloj. Para ablandar los tejidos e iniciar la tincin, se
cubre la raz con orcena actica y clorhdrico 1 N en la proporcin de 9:1, es decir, 9 gotas de
orcena por cada gota de HCl. (Orcena A)
3. La hidrlisis debe hacerse en caliente, a unos 60 C. Para ello, calienta el vidrio de reloj a la
llama del mechero, justo hasta que empiecen a desprenderse tenues vapores, teniendo mucho
cuidado de que no hierva (al retirar el vidrio no debe quemar la mano), aproximadamente 8
minutos.

4. Retralo para que se enfre durante 8 minutos y repite esta operacin 3 veces, aadiendo ms
orcena si hiciera falta, de modo que el lquido cubra en todo momento la punta de la raz.. Saca
la raicilla con la aguja enmangada y colcala sobre el portaobjetos.
5. Con la cuchilla corta el pice a unos 2 mm. El resto se descarta ya que las clulas
meristemticas se encuentran en el extremo, bajo la cofia.
6. Aade una gota de cido actico al 45% (orcena B) para terminar de ablandar los tejidos, incuba
durante 1 minutos. Limpia con papel de filtro los posibles residuos del colorante.

Observacin de clulas mitticas


1. Poner la preparacin en el microscopio y observar al principio con aumento moderado. Se vern
clulas dispersas por todo el campo de observacin. Hay que distinguir tres tipos de clulas:
Clulas de menor tamao, pero de grandes ncleos teidos de rosa. Tienen citoplasma
denso y estn dispuestas en filas. Son las clulas meristemticas, con gran actividad mittica.
Clulas ms grandes, alargadas y con ncleos ms pequeos. Corresponden a clulas ya
diferenciadas.
Clulas ovoideas, de ncleos pequeos, pero que se tien intensamente. Son las clulas
de la cofia.
2. Elegir la zona de clulas meristemticas y observar a mayor aumento. Conviene escoger una
regin en que las clulas no se hayan teido demasiado, y que los ncleos presentan los
cromosomas de color rojo-violceo sobre fondo sin pigmentar.
3. Reconocer clulas meristemticas en las distintas fases de la mitosis y realizar un dibujo,
indicando el aumento, de cada una de ellas.
Observaciones:

Mitosis de una cebolla, etapa


anafase (40X)

Mitosis de una cebolla, etapa


telofase (40X)

Mitosis de una cebolla, etapa


profase (40X)
Mitosis de una cebolla, etapa
anafase (40X)

Conclusiones:
La mitosis es un ciclo celular que sucede en muchas clulas. Las clulas de la raz de una cebolla
deja observar fcilmente parte del ciclo celular, tambin es fcil saber en qu etapa de la mitosis se
encuentra.
Cuestionario:
1. Explica de manera breve las fases del ciclo celular.
Crecimiento celular, replicacin del AND, distribucin de los cromosomas a las clulas hijas,
divisin nuclear y celular.
G0: Etapa latente. Es una clula terminal. Tiene una alta especialidad (funcionalidad nica)
G1: Duplicacin de organelos.
S: Sntesis del ADN
G2: Preparacin para meiosis o mitosis. Separacin nuclear.
Mitosis
Citocinesis: Separacin celuar
2. Define mitosis y explica cada una de sus etapas.
La mitosis es un ciclo celular que siempre da lugar a clulas con el mismo nmero de cromosomas,
y adems, idnticos a los de las clulas madre.
Profase: Durante la profase las hebras de ADN se condensan y van adquiriendo una forma
determinada llamada cromosoma.
Metafase: En la metafase las fibras del huso mittico se unen a cada centrmero de los
cromosomas. Estos se ordenan en el plano ecuatorial de la clula, cada uno unido a su duplicado
Anafase: En la anafase los pares de cromosomas se separan en los centrmeros y se mueven a

lados opuestos de la clula


Telofase: las cromtidas llegan a los polos opuestos de la clula y se forman as las nuevas
membranas alrededor de los ncleos hijos. Los cromosomas se dispersan
3. Explica
la
diferencia
entre
mitosis
y
meiosis.
Mitosis: se produce en las clulas somaticas, puede ocurrir en las clulas haploides o
diploides, es una sola divisin celular, se separa en cromatidas hermanas, su duracin es
corta,
su
resultado
es
dos
hijas
con
igual
informacin
gentica.
Meiosis: Slo se produce en las clulas madre de los gametos, slo se produce en clulas
diploides, son dos divisiones celulares, en la primera se separan pares de cromosomas
homlogos y en la segunda divisin se separan cromtidas, su duracin es larga, su
resultado es cuatro clulas hijas genticamente distintas, con la mitad de informacin
gentica de la clula madre.
PRACTICA No. 10
CROMATINA SEXUAL X EN CELULAS EN CELULAS DE LA MUCOSA BUCAL DE HUMANO
Objetivo: Observar el corpsculo de Barr, correspondiente a la cromatina sexual en clulas
humanas.
Fundamento
La cromatina sexual A se define como un corpsculo intranuclear, de forma planoconvexa de 0.7
a 1.2 m de dimetro. Est presente en la mayora de las clulas de mujeres normales. La
cromatina X corresponde a la condensacin de uno de los cromosomas X en la mujer. Las clulas
que contienen uno o ms grnulos (cromatinas X) se dice que son cromatina X positivas y
aquellas que no la tienen son cromatina negativas. Los corpsculos de Barr pueden ser teidos
con un gran nmero de colorantes nucleares como violeta de cresilo, tionina, hematoxilina, verde
de metilo y orcena.
Procedimiento
Enjuague su boca antes de iniciar la prctica. Con un abatelenguas realice un raspado de la
mucosa oral. Coloque el raspado en un portaobjetos y realice un frotis. Fije ste a la flama. Tia
con acetoorcena al 2 % durante 5 minutos. Lave con soluciones de alcohol primero al 70, luego
al 50%, durante 3 minutos en cada una, si se requiere. Observe al microscopio. Si las clulas
estn sobreteidas, desteir con alcohol acidulado para obtener el contraste adecuado.
Observaciones

Clulas epiteliales de hombre y


mujer teidas con Orcena B

Clulas epiteliales de mujer


vistas con 40X

Clulas epiteliales de
hombre vistas con 40X

Cuestionario
1. Qu diferencia hay entre el nucleolo y el corpsculo de Barr?
En el nuclolo se encuentra la cromatina que es un conjunto de ADN, histonas y protenas que
constituye el genoma de clulas eucariotas y el corpsculo de Barr es un tipo de cromatina sexual
X.
2. Qu significara que en las clulas de un individuo fenotpicamente masculino se
encontrara un corpsculo de Barr?
Puede tener algn tipo de sndrome como el de Klinefelter, que consiste en la existencia
de dos cromosomas X y un cromosoma Y.
3. Con qu estudio se podra corroborar el resultado anterior?
Por medio de un cariotipo. Para ello, se toma una muestra de sangre, de la cual se separan los
leucocitos o glbulos blancos, se incuban y se hace un estudio de los cromosomas para
detectar anomalas, como en este caso, la presencia de un cromosoma X extra.
4. Mencione dos sndromes en humano y si presentaran corpsculo de Barr en las
clulas de estos individuos.
Sndrome de Turner: No tienen Corpsculo de Barr
Sndrome de Doble Y: No tienen Corpsculo de Barr
Sndrome de Klinefelter: S tiene Corpsculo de Barr,

5. A qu tipo de cromatina pertenece este corpsculo?


A la cromatina sexual X.

Bibliografa
Karp, G. Biologa Celular y Molecular. 2008. McGraw-Hill Interamericana.

Alberts, B., Bray, D., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., and Watson, J.D. Molecular Biology of the
Cell. Third Edition. Garland Publishing.
Cooper, G.M. The Cell. A Molecular Approach. ASM Press, Sinauer.
Lodish, H., Berk, A., Zipursky, L.S., Matsudaira, P., Baltimore, D. and Darnell, J.E. Molecular Cell
Biology. Freeman and Company.