27/04/2015

Curso: Farmcia
Prof. Jeandre Augusto Jaques

*Ou Ciclo do cido tricarboxlico ou Ciclo de Krebs.

No sentido fisiolgico ou macroscpico mais

amplo, respirao alude captao de O2 e
eliminao
de
CO2
por
organismos
multicelulares.
O processo denominado respirao celular
remete ao processo molecular por meio do
qual as clulas consomem O2 e produzem
CO2.

1
Molculas
combustveis
orgnicas glicose, cidos graxos e
alguns aminocidos so oxidadas
para produzirem fragmentos de dois
carbonos, na forma do grupo acetil
da acetil-coenzima A (acetil-CoA).
2 - Os grupos acetil entram no ciclo
do cido tricarboxlico, que os oxida
enzimaticamente a CO 2; a energia
liberada

conservada
nos
transportadores
de
eltrons
reduzidos NADH e FADH2.

Os eltrons so transferidos ao O2
o aceptor final de eltrons por
meio de uma cadeia de molculas
transportadoras
de
eltrons,
conhecida como cadeia respiratria.
No curso da transferncia de
eltrons, a grande quantidade de
energia liberada conservada na
forma de ATP, por um processo
chamado de fosforilao oxidativa.
4

1.

2.

3 - Essas coenzimas reduzidas so

oxidadas, doando prtons/hdrons
(H+) e eltrons.

A converso do piruvato a grupos acetil e,

ento, a entrada destes grupos no ciclo do
cido ctrico;
As reaes do ciclo do cido ctrico e as
enzimas que as catalisam;

3.

Reaes anaplerticas, de reposio;

4.

Regulao do ciclo.

Em organismos aerbicos, glicose e outros acares,

cidos graxos e a maioria dos aminocidos so
oxidados a CO2 e H2O pelo ciclo do cido ctrico e
pela cadeia respiratria.
Antes de entrarem no ciclo do cido ctrico, os
esqueletos de carbono dos acares e cidos graxos
so convertidos ao grupo acetil da acetil-CoA, a
forma na qual a maioria dos combustveis entra no
ciclo.
Os carbonos de muitos aminocidos tambm entram
no ciclo desta maneira, embora alguns aminocidos
sejam convertidos a outros intermedirios do ciclo.

27/04/2015

O piruvato, derivado da gliclise, oxidado a

acetil-CoA e CO2 pelo complexo da piruvatodesidrogenase (PDH), um grupo de enzimas
localizado nas mitocndrias de clulas eucariticas
e no citosol de bactrias.
Descarboxilao oxidativa

O NADH formado nesta reao doa um on

hidreto (:H-) para a cadeia respiratria, que
transferir os dois eltrons ao oxignio ou, em
micro-organismos anaerbicos, a um aceptor
de eltrons alternativo, como nitrato ou
sulfato.
A transferncia de eltrons do NADH ao
oxignio gera, ao final, 2,5 molculas de ATP
por par de eltrons.

Oxidao irreversvel
7

1.
2.
3.
4.
5.

O grupo tiol (-SH) da molcula de

mercaptoetilamina forma um tioster com o acetato
para formar a acetil-coenzima A (Acetil-CoA).
9

A
combinao
da
desidrogenao
e
descarboxilao do piruvato ao grupo acetilCoA requer a ao sequencial de trs diferentes
enzimas e cinco diferentes coenzimas ou
grupos prostticos:
Tiamina pirofosfato (TPP); (B1)
Dinucleotdeo de flavina-adenina (FAD); (B2)
Dinucleotdeo de nicotina-adenina (NAD); (B3)
Coenzima A; (B5)
Lipoato.

10

Piruvato-desidrogenase (E1) Ligado ao TPP;

Diidrolipoil-transacetilase (E2);

Diidrolipoil-desidrogenase (E3) Ligado ao FAD.

O complexo da PDH conduz as cinco reaes

consecutivas
para
a
descarboxilao
e
desidrogenao do piruvato.
1) Descarboxilao oxidativa do piruvato.
2) Oxidao/desidrogenao do grupo hidroxietil ao nvel de um cido
carboxlico (acetato).
Esterificao do grupo acetil a um dos grupos SH do lipoil
3) Transesterificao a CoA
4 e 5) As reaes remanescentes so transferncias de eltrons
necessrias para a regenerao da forma oxidada (dissulfeto) do grupo
lipoil de E2, preparando o complexo para um novo ciclo de oxidao.

11

12

27/04/2015

(4 e 5) Regenerao

-Destino da molcula de piruvato em cor de rosa.

(1) Piruvato reage com o pirofosfato de tiamina (TPP) ligado piruvato
desidrogenase (E1), sendo descarboxilado ao derivado hidroxietil.
(2) A E1 catalisa a transferncia de 2 eltrons e do grupo acetil a partir do
TPP para a forma oxidada do grupo lipoil lisina do centro do complexo, E2,
formando o acetil-tioster do grupo lipoil reduzido.

13

(3) Transesterificao na qual o grupo SH da CoA substitui o grupo SH

de E2, produzindo acetil-CoA e a forma completamente reduzida (ditiol) do
grupo lipoil.
(4) A E3 promove a transferncia de dois tomos de hidrognio dos grupos
lipoil reduzidos de E2 ao grupo prosttico FAD de E3, restaurando a forma
oxidada do grupo lipoil-lisina de E2.

14

(4 e 5) Regenerao

(5) O FADH2 reduzido de E3 transfere um on hidreto ao NAD, formando

NADH.

O complexo enzimtico est agora pronto para outro ciclo cataltico.

15

Atravs das 8 reaes do ciclo do cido ctrico a

molcula de acetil-CoA oxidada;
Em cada rodada do ciclo entra um grupo acetil (dois
carbonos) na forma de acetil-CoA, e so removidas
duas molculas de CO2;
Uma molcula de oxaloacetato utilizada para a
formao do citrato e uma molcula de oxaloacetato
regenerada;
4 das 8 etapas desta via so oxidaes, nas quais a
energia
de
oxidao

conservada
muito
eficientemente na forma das coenzimas reduzidas
NADH e FADH2;

16

As etapas 1, 3 e 4 so essencialmente irreversveis na

clula; todas as outras so reversveis.

Condensao de acetil-CoA (2C) e oxaloacetato

(4C) para a formao do citrato (6C).
A CoA liberada reciclada para participar da
descarboxilao oxidativa de outra molcula de
piruvato pelo complexo PDH.
Enzima:

citrato-sintase.

17

18

27/04/2015

Isomerizao;
Reconhecimento como substrato na prxima
etapa;

Descarboxilao oxidativa do citrato;

Enzima: isocitrato-desidrogenase;

Enzima: aconitase.

19

Nesta reao perde-se 1 carbono.

20

Descarboxilao oxidativa do -cetoglutarato;

Enzima: -cetoglutarato-desidrogenase;

Transfere eltrons para o NAD+;

Nesta reao perde-se 1 carbono.

21

Quando uma molcula recebe a coenzima A, ela

tem um potencial excitatrio e tende a transferlo. Esta transferncia energtica ocorre na
prxima etapa, convertendo GDP a GTP;
A succinil-CoA possui uma ligao tioster com
uma energia livre padro de hidrlise grande e
negativa.
A energia liberada pelo rompimento desta
ligao utilizada para impelir a sntese de
GDP/GTP.

22

23

2 Isoformas - transfere eltrons para o

NAD+/NADP+;

Enzima: succinil-CoA-sintetase;
Transferncia do potencial excitatrio para o
GDP/ADP, produzindo GTP/ATP;
2 isoformas (afinidade para GDP/ADP);
Fosforilao no nvel do substrato;
Reversvel;

Enzima: succinato-desidrogenase;
Transfere 2 eltrons para o FAD;
3 reao com transferncia de eltrons;
Em eucariotos, a enzima est firmemente ligada
membrana mitocondrial interna;

24

27/04/2015

Enzima: fumarase.
Adiciona gua para iniciar a regenerao do
oxaloacetato.

25

Enzima: malato-desidrogenase;

4 reao onde h transferncia de eltrons.

26

Produtos de uma rodada do ciclo do cido ctrico:

Reduo de 3 NAD+ 3 NADH;

Reduo de 1 FAD 1 FADH2;
1 GDP/ADP 1 GTP/ATP;
2 CO2.
Oxaloacetato
regenerado no final.

27

A maioria das reaes so reversveis;

Embora o ciclo do cido ctrico gere
diretamente somente um ATP por rodada, as
quatro etapas de oxidao do ciclo abastecem
a cadeia respiratria, via NADH e FADH2, com
um grande fluxo de eltrons e, assim, levam
formao de um grande nmero de molculas
de ATP durante a fosforilao oxidativa.
Na fosforilao oxidativa, a passagem de 2
eltrons do NADH ao O2 impele a formao de
aprox. 2,5 ATP, e a passagem de 2 eltrons do
FADH2 ao O2 rende cerca de 1,5 ATP.

28

Estequiometria da reduo das coenzimas e formao de ATP na oxidao

aerbica da glicose via: Gliclise, Complexo da Piruvato Desidrogenase, Ciclo
do cido Ctrico, e Fosforilao Oxidativa
Reao

N de ATP/enzima
reduzida formado(s)
diretamente

N de ATP
formados
terminalmente*

Glicose Glicose-6-fosfato

- 1 ATP

-1

Frutose-6-fosfato Frutose 1,6-bifosfato

- 1 ATP

-1

2 Gliceraldedo-3-fosfato 2 1,3-bifosfoglicerato

2 NADH

3 ou 5

2 1,3 Bifosfoglicerato 2 3-fosfoglicerato

2 ATP

2 Fosfoenolpiruvato 2 piruvato

2 ATP

2 Piruvato 2 acetil-CoA

2 NADH

2 Isocitrato 2 -cetoglutarato

2 NADH

2 -cetoglutarato 2 succinil-CoA

2 NADH

2 ATP (ou 2 GTP)

2 Succinato 2 fumarato

2 FADH2

2 Malato 2 oxaloacetato

2 NADH

2 Succinil-CoA 2 succinato

TOTAL
29

Em organismos aerbicos, o ciclo do cido

ctrico uma via anfiblica, ou seja, que serve
a processos catablicos e anablicos.
Alm
do
catabolismo
oxidativo
de
carboidratos, cidos graxos e aminocidos, o
ciclo fornece precursores para muitas vias de
biossntese.

5
30 a 32
30

27/04/2015

Intermedirios do ciclo so desviados como

precursores de muitas vias biossintticas.
Em vermelho as reaes anaplerticas que
repem os intermedirios do ciclo esgotados.

31

Sob circunstncias normais, as reaes pelas

quais os intermedirios so desviados para
outras vias e aquelas pelas quais eles so
repostos esto em um equilbio dinmico, de
maneira
que
as
concentraes
dos
intermedirios do ciclo do cido ctrico
permanecem quase constantes.

32

Reaes anaplerticas comuns

Enzima

Reao

Tecido

Piruvato
carboxilase

Piruvato + HCO3- + ATP

oxaloacetato + ADP + Pi

Fgado, rim

PEP-carboxicinase

PEP + CO2 + GDP

oxaloacetato + GTP

Corao, msculo
esqueltico

PEP-carboxilase

PEP + HCO3
Oxaloacetato + Pi

Plantas superiores,
levedura, bactrias

Enzima mlica

Piruvato + HCO3- + NAD(P)H

Malato + NAD(P)+

Amplamente distribuda em
eucariotos e bactrias

33

A reao anaplertica mais importante no

fgado e nos rins de mamferos a
carboxilao reversvel do piruvato pelo CO2
para a formao de oxaloacetato, catalisada
pela piruvato-carboxilase.
Quando o ciclo do cido ctrico est deficiente
em
oxaloacetato
ou
qualquer
outro
intermedirio, o piruvato carboxilado para
produzir mais oxaloacetato.
A adio enzimtica de um grupo carboxil ao
piruvato requer energia, suprida pelo ATP.

34

35

Conforme os intermedirios do ciclo do cido

ctrico so removidos para servirem como
precursores na biossntese, eles so repostos
por reaes anaplerticas;

A piruvato-carboxilase uma enzima regulatria

e essencialmente inativa na ausncia de acetilCoA, seu modulador alostrico positivo.

Sempre que a acetil-CoA, o combustvel do ciclo

do cido ctrico, est presente em excesso, ela
estimula a reao da piruvato-carboxilase para a
produo de mais oxaloacetato, permitindo que
o ciclo utilize mais acetil-CoA na reao da
citrato-sintase.

A reao da piruvato-carboxilase requer a

vitamina biotina, que um transportador
especializado dos grupos de um carbono.

A regulao de enzimas-chave em vias metablicas,

por meio de efetores alostricos e modificao
covalente, garante a produo dos intermedirios
nas taxas necessrias para manter a clula em um
estado de equilbrio estvel enquanto evita o
desperdcio de uma superproduo.
O fluxo de carbonos que entram no ciclo est sob
constante regulao em dois nveis:
1) A converso de piruvato a acetil-CoA, o material de partida
do ciclo (piruvato-desidrogenase);
2) Entrada da acetil-CoA no ciclo (citrato-sintase).

36

27/04/2015

Regulao alostrica

O complexo da PDH de mamferos fortemente

inibido por ATP, aceti-CoA e NADH, os produtos da
reao catalisada pelo complexo;

A inibio aumentada quando AGs de cadeia

longa esto disponveis;

A enzima ativada novamente quando a

demanda de energia est alta e a clula
necessita de um maior fluxo de acetil-CoA para
o ciclo do cido ctrico.

AMP, CoA e NAD+ se acumulam quando muito

pouco acetato flui para dentro do ciclo, ativando
alostericamente o complexo da PDH.

37

38

Regulao covalente (fosforilao)

Regulao alostrica da PDH: Feedback

Regulao alostrica da Quinase da PDH

Neste segundo nvel de regulao, uma protena

cinase fosforila e, desta maneira, inativa E1.
A cinase alostericamente ativada por ATP:
quando a [ATP] est elevada (refletindo um
suprimento de energia adequado), o complexo
da PDH inativado pela fosforilao de E1.
Quando [ATP] diminui, a atividade da cinase
diminui e a ao da fosfatase remove o grupo
fosfato de E1, ativando o complexo.

39

40

Trs fatores controlam a velocidade do fluxo

no ciclo:

1) Disponibilidade de substrato;
2) Inibio pelos produtos acumulados;
3) Inibio alostrica por retroalimentao das
enzimas que catalisam as etapas iniciais do ciclo.

41

Portanto, esta enzima desativada quando o

combustvel est disponvel em grande
quantidade, na forma de Ac. graxos e aceti-CoA
e quando as razes celulares [ATP]/[ADP] e
[NADH]/[NAD+] esto elevadas;

As trs etapas fortemente exergnicas do ciclo aquelas

catalisadas
pela
citrato-sintase,
isocitratodesidrogenase e -cetoglutarato-desidrogenase
podem tornar-se a etapa limitante da velocidade;
Nos msculos dos vertebrados, Ca2+, o sinalizador para
a contrao e o aumento concomitante na demanda de
ATP, ativa a isocitrato-desidrogenase e a cetoglutarato-desidrogenase, assim como ativa o
complexo da PDH.
A velocidade da gliclise vinculada velocidade do
ciclo do cido ctrico no apenas por meio da inibio
pelos altos nveis de ATP e NADH, os quais so comuns
a ambos os estgios da oxidao da glicose, mas
tambm regulada pela concentrao de citrato
(inibidor alostrico da PFK-1).

42

27/04/2015

43