Separacin de pigmentos fotosintticos de la hoja de Spinacia oleracea

mediante el mtodo de cromatografa

Introduccin:
Los cloroplastos tienen varios tipos de clorofila y otros pigmentos
llamados accesorios. Estos pigmentos absorben diferentes gamas de
longitud de onda de la luz y, por este motivo, los percibimos de colores
diferentes. Los pigmentos se pueden separar por cromatografa. Cerca
de uno de los extremos de una tira de papel se coloca una pequea
muestra de pigmentos extrados del tejido foliar. Se deja que un solvente
ascienda por capilaridad a lo largo de la tira, para separar los diferentes
tipos de pigmentos.

Marco terico:
2.1. Mtodo de cromatografa
2.2. Rf
2.3. Bencina
1. Objetivos:
Principal:
-

Identificar los tipos de pigmentos fotosintticos presentes en la

hoja de Spinacia oleracea mediante el mtodo de cromatografa

Secundarios:
- Calcular el factor de retencin (Rf) de cada pigmento
- Determinar la presencia
2. Problema:
Es posible determinar la presencia de pigmentos fotosintticos por la
medicin del Rf usando el mtodo de la cromatografa?

3. Variables

4. Hiptesis:
- Las plantas poseen distintos pigmentos que podrn ser apreciables
a travs del mtodo de la cromatografa.
5. M
Tipo de Variable
Nombre
a
Variable
Los pigmentos fotosintticos presentes en la
t
Dependiente
planta
Variable Controlada
Por qu es necesario controlarlas?
e
Variable
El mtodo Es
de necesario
cromatografa
medicin
del una r
Tiempo de reposo
paray poder
obtener
Independiente
Rf
(exposicin)
solucin ms concentrada
i
Cantidad y
Es necesario , porque se evapora
concentracin de la
fcilmente
bencina
Primero refente a el uso de etanol como
Cantidad y
solvente, este es necesario porq
concentracin del
etanol como solvente
ales:
- Capilares
- Regla
- 5 tubos de ensayo
- Gradilla
- Luna de reloj
- Placa de Petri
- Gasa
- Secador de cabello
- Tapn
- Papel de Aluminio
- Mortero y piln
- Hojas de Spinacia oleracea
- Papel blanco
- Regla 05 cm
6. Reactivos:
- Bencina

- Etanol
7. Procedimiento:
1. Desmenuza una hoja de espinaca en trozos pequeos y ponlos
en el mortero.
2. Aadimos un poco de arena para la trituracin.
3. Aadimos un poco de etanol.
4. Utilizamos el piln para triturar el tejido foliar y disolver los
pigmentos.
5. Si se evapora todo el etanol, aade un poco ms.
6. Cuando la muestra se haya vuelto verde oscura, dejamos que la
arena y los otros slidos sedimenten y, a continuacin, con la
ayuda de una gasa, exprimimos los slidos de la muestra en
una placa Petri.
7. Expusimos la placa Petri al aire libre para evaporar todo el
etanol, el agua del citoplasma de las clulas para que la
muestra se concentre.
8. Utilizamos el capilar para transferir una cantidad muy pequea
de la solucin de pigmentos a la tira cromatografa. El objetivo
es poner un punto muy pequeo del pigmento en el centro de
la tira, a unos 10 mm de uno de los extremos. La mancha tiene
que ser muy oscura; esto se logra colocando repetidamente
una pequea gota en la tira y dejndola secar antes de agregar
un poco ms. Puedes acelerar el secado usan un secador de
pelo.
9. Cuando la mancha estuvo bastante oscura, introducimos la tira
dentro de un tubo de prueba que contiene el solvente (Spinacia
oleracea8). La tira lleg casi al fondo del tubo pero sin tocarlo.
Doblamos el extremo superior por fuera del tubo e insertamos
el tapn. El solvente no debe tocar la mancha, debe quedar
ligeramente por debajo.
10. Cubrimos el tubo con papel de Aluminio y lo dejamos en
reposo. Cuando el solvente llegue casi al extremo de la tira,
sacamos el corcho y la tira, marcamos con un lpiz el lugar
donde lleg el solvente. Marcamos tambin el nivel inicial de la
mancha del pigmento.
11. Dibujamos un crculo alrededor de cada una de las manchas
de pigmento y una cruz en el centro del crculo.
12. Utilizamos una regla para medir la distancia que ha
ascendido el solvente y la distancia que se ha movido cada
pigmento.
13. Calculamos el Rf de cada pigmento dividiendo el recorrido de
la mancha entre la distancia recorrida por el solvente.

8. tica y seguridad:
En cada laboratorio realizado se debe tener precauciones segn los
reactivos a utilizar as tambin se debe tener en cuenta la tica. Sin
embargo, dentro de esta prctica de laboratorio, no se hizo presente la
tica, porque no se experiment con un seres vivos (humanos), ni animales.
As tambin, se tom ciertas precauciones de ingerir y olerlos de manera
directa los reactivos. Especialmente al momento de tener contacto con la
bencina, se le coloco rpidamente el tampn al tubo de ensayo.

Datos Brutos
Datos cuantitativos: Se obtuvo la medida de la distancia de desplazamiento del pigmento y la distancia de desplazamiento
del disolvente
Tabla 1: ee
Repeticione
s

Manchas
en la
muestra
a

b
c
d
a
b
c
d
a
b
c
d
a
b
c
d

Los datos brutos fueron obtenidos de la siguiente

Distancia de
Distancia de manera:

Color
verde oliva
verde
amarillento
amarillo
amarillo claro
verde oliva
verde
amarillento
amarillo
amarillo claro
verde oliva
verde
amarillento
amarillo
amarillo claro
verde oliva
verde
amarillento
amarillo
amarillo claro

desplazamiento
de pigmentos
(mm 0,5)
10,0

desplazamiento del
disolvente ( 0,5
mm)

20,0

75,0

38,0
60,0
13,0
29,0

60,0

39,0
52,0
19,0
45,0

Extrado de:

67,0

54,0
63,0
13,0
31,0

Datos cualitativos:
67,0

44,0
54,0

Observaciones:
-

Al momento de triturar la hoja de (espinaca) fue necesario usar acido

etlico 96, en vez de usar acetona.
Fue necesario usar arena para hacer ms sencillo la trituracin de la hoja
de (espinaca)

La hoja de espinaca con la que trabajamos tena

un color verde oscuro, su hoja era un poco
redondeada y rugosa.
La temperatura ambiente de la experimentacin
fue de 22C
La bencina con la que trabajamos, se encontraba
dentro de un tubo de ensayo, el cual estaba
forrado con papel de aluminio.
Dentro de un tubo de ensayo se encontraba el

Anlisis de datos procesados

Repeticiones

Manchas
en la
muestra

Distancia de
desplazamiento
de pigmentos
(mm 0,5)

a
A

Rf

Nombre de
pigmento

10,0

0,13

Xantofila 2

20,0

0,36

Clorofila b

38,0

0,51

Clorofila s

60,0

0,80

Caroteno

13,0

0,23

Xantofila 1

29,0

0,48

Clorofila b

0,65

Clorofila s

52,0

0,86

Caroteno

19,0

0,28

xantofila 1

45,0

0,56

Clorofila s

54,0

0,81

Feofitina

63,0

0,94

Caroteno

13,0

0,19

Xanfofila 2

31,0

0,46

Clorofila b

44,0

0,66

Clorofila s

54,0

0,81

Caroteno

distanciarecorrida por el soluto

Distancia recorrida por el solvente

Ejemplo: Rf de muestra a de la repeticin A

10,00 mm
=0,13 mm
75,00 mm

60,0

39,0

Procesamiento de datos:

Rf =

75,0

Tabla 2: ejnekuguoihzxuksdfh

Rf =

Distancia de
desplazamiento del
solvente ( 0,5
mm)

67,0

67,0

Los datos obtenidos del Rf de nuestras muestras fueron comparados con la

siguiente tabla, para identificar el pigmento fotosinttico en la Spinacia
oleracea (Espinaca) resultante:

Tabla de valores Rf estndar:

Pigmento

Color

Rf

Caroteno

Naranja

0,98

Clorofila s

Verde azulado

0,59

Clorofila b

Verde amarillento

0,42

Feofitina

Verde oliva

0,81

Xantfila 1

Amarillo

0,28

Xantfila 2

amarillo

0,15