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UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHO


CENTRO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLOGIA
DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA

QUANTIFICAO DE PROTENAS

Larissa Machado de Assis


Mauro Romero Abreu Sousa Junior
Profa. Dra. Alexandra M. S. Soares

So Lus MA,
2016

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SUMRIO
1 INTRODUO..............................................................................................................3
2. MATERIAIS E MTODOS..........................................................................................3
2.1 Materiais utilizados......................................................................................................3
2.2 Reagentes utilizados.......................................................................................,............4
2.3 Preparao do extrato de protena...............................................................................4
2.4 Procedimento experimental.........................................................................................4
3. RESULTADOS E DISCUSSO.................................................................................4
4. CONCLUSO.............................................................................................................5
5. REFERNCIAS..........................................................................................................6

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1. INTRODUO
A palavra protena deriva do grego proteios, que significa ocupar o primeiro
lugar. As protenas contm C (50 a 55%); H (6 a 8%); O (20 a 24%); N (15 a 18%) e S
(0,2 a 0,3%). Quimicamente so polmeros de alto peso molecular, cujas unidades
bsicas so os aminocidos ligados entre si por ligaes peptdicas formando longas
cadeias, em vrias estruturas geomtricas e combinaes qumicas para formar as
protenas especificas, cada qual com sua prpria especificidade fisiolgica [1].
Assim, com o decorrer do desenvolvimento de pesquisas na rea de bioqumica
dos alimentos, inmeros estudos comparativos de metodologias espectrofotomtricas
para a determinao de protenas totais sempre foram de grande interesse para
profissionais, tanto ligados indstria de alimentos, laboratrios de anlises clnicas,
como para pesquisadores de diversas reas [2].
Dentre estes vrios mtodos de quantificao proteica, destaca-se o mtodo
colorimtrico de Bradford. Este mtodo uma tcnica para a determinao de protenas
totais que utiliza o corante de Coomassie brilliant blue BG-250 onde ocorre a
interao entre o corante BG-250 e macromolculas de protenas que contm
aminocidos de cadeias laterais bsicas ou aromticas. No pH de reao, a interao
entre a protena de alto peso molecular e o corante BG-250 provoca o deslocamento do
equilbrio do corante para a forma aninica, que absorve fortemente em 595 nm [3].
Portanto, a partir do exposto, este relatrio tem por objetivo principal a
quantificao de protenas atravs do mtodo colorimtrico de Bradford a partir da
extrao da folha da embada encontrada na rea verde da Universidade Federal do
Maranho (UFMA) campus Bacanga.

2. MATERIAS E MTODOS
2.1 Materiais utilizados
Espectrofotmetro;
Almofariz e pistilo de gata
Centrfuga refrigerada;
Tubos de ensaio;
Pipetas;
Ponteiras;
Estantes;
Cubetas de plstico
2.2 Reagentes utilizados

Reagente Bradford (Coomassie brilliant blue BG-250);


gua destilada;
Soluo tampo de acetato de sdio e cloreto sdio pH 5,2.
Amostra do extrato (folha de embada e soluo tampo).
2.3 Preparao do extrato de protena
A preparao do extrato de protena deu-se atravs do corte da folha da planta

embada. Utilizando a proporo 1:5, pesou-se 0,5g de amostra (embada) em uma


balana semi-analtica. Em seguida, adicionou-se 2,5 ml de soluo tampo (acetato de
sdio e cloreto de sdio) a amostra e macerou-se durante um certo com o auxlio do
almofariz e pistilo de gata at que se obtivesse um soluo homognea.
2.4 Procedimento experimental
Inicialmente identificaram-se os tubos de ensaio que seriam utilizados no
experimento. Em seguida, colocou-se 100

l de gua destilada com mais 2500

do reagente Bradford BG-250, em triplicata. Preparou-se novamente a mistura descrita


anteriormente e colocou-se em tubo de ensaio. Levou-se a mistura preparada (gua
destilada e reagente Bradford) a centrifuga refrigerada durante 10 minutos em rotao
contnua. Logo em seguida, pegou-se o tubo de ensaio que continham a mistura e levouse ao espectrofotmetro para fazer o zero do aparelho para 100% de transmitncia.
Adicionalmente a isto, adicionou-se aos outros trs tubos que continha a mistura
previamente preparada uma amostra da extrao de folha de embada. Levou-se esta
mistura (mistura padro e extrato da folha da embada) a leitura no espectrofotmetro
realizado com a absorbncia de 595 nm, em triplicata. Anotaram-se os dados obtidos
para fazer as suas respectivas anlises.
3. RESULTADOS E DISCUSSO
Com base nos ensaios realizados para a quantificao da protena da folha da
embada utilizando o mtodo de quantificao de Bradford, pode-se fazer a leitura da
absorbncia do extrato de protena. Assim, o valor mdio obtido em triplicata foi de
0,104Abs. Assim, utiliza-se a seguinte equao para calcular a concentrao de
protenas solveis:

5
| mdio| F
100
C=
onde, C a concentrao de protenas solveis, Abs mdio (absorbncia mdio
obtido na leitura do espectrofotmetro para a concentrao especifica de protenas da
embada) e F que o Fator de calibrao obtido para este estudo em questo e
calculado previamente.
Utilizando-se o Abs mdio de 0,104, F=43,67, tem-se o seguinte resultado da
concentrao de protenas solveis da embada usando a proporo 1:5.
C=

0,104 43,67
100

C=0,0454168 mg/ml
Pode-se observar que a concentrao de protenas solveis obtido para este
mtodo de quantificao de protenas foi extremamente baixo, estando este resultado
compatvel com o aspecto visvel da soluo de protenas com o reagente Bradford onde
no foi possvel observar a alterao da cor marrom predominante em soluo sem
protena cor azul com protena da embada j presente. Vale se ressaltar que inmeras
situaes podem ser analisadas para este resultado, onde o pH da soluo tampo, a
parte da embada utilizada, o processo de extrao, a proporo de amostra para tampo
(1:5) ou at mesmo erros experimentais podem estar associados a este resultado. Assim,
necessita-se que esta amostra estudada deve ser analisada com outros mtodos ou
variando-se as condies de operao utilizadas neste experimento.
4. CONCLUSO
A partir dos ensaios realizados nesta prtica, foi possvel quantificar a
concentrao de protenas solveis na folha da embada, encontrando-se um valor, de
aproxidamente, 0,045mg/ml utilizando uma proporo de 1:5 em relao a amostra
/soluo tampo. Este resultado mostra um valor relativamente baixo de protenas
solveis na folha da embada. Alm disso, no foi possvel observar as mudanas
colorimtricas visveis para o mtodo Bradford, sendo necessrio novas anlises por
este mtodo modificando-se as condies de ensaio ou at mesmo utilizar-se outro
mtodo de quantificao de protenas solveis para assim ter uma estimativa do real
valor de protena solveis na folha da embada.

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REFERENCIAS
1. Vicenzi, R. Qumica Industrial de Alimentos UNIJUI - Captulo 8 Protenas,
2000.
2. Zaia, D.A.M. Determinao de protenas totais via espectrofometria: vantagens e
desvantagens dos mtodos existentes; Qumica Nova, 21(6), 1998.
3. Compton, S. J.; Jones, C. G.; Anal. Biochem. 1985, 151, 369.;