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Objetivos
Determinar el contenido de vitamina C en frutos y verduras
Caracterizar el mtodo yodomtrico para determinar vitamina C
Evaluar el contenido de vitamina C empleando el reactivo 2,6diclorofenolindofenol
Determinar el contenido de vitamina C empleando el metodo de Folin
Ciocalteu
2.
Introduccin
La vitamina C
La vitamina C, o cido ascrbico, es un compuesto hidrosoluble de 6
tomos de carbono relacionado con la glucosa. Su papel biolgico principal
parece ser el de actuar como cofactor en diversas reacciones enzimticas
que tienen lugar en el organismo. El cido ascrbico acta como coenzima
de las hidroxilasas de prolina y lisina, encargadas de hidroxilar la lisina y
prolina en el protocolgeno, modificacin necesaria para que ste pueda
formar los enlaces cruzados para formar las fibrillas de colgeno. En este
sentido, la vitamina C es importante para el mantenimiento del tejido
conjuntivo normal, para la curacin de heridas y para la formacin del
hueso, ya que el tejido seo contiene una matriz orgnica con colgeno. En
su condicin de agente reductor, el cido ascrbico posee otras propiedades
importantes, que parecen ser no enzimticas. Por ejemplo, ayuda a la
absorcin del hierro al reducirlo a su estado ferroso en el estmago; protege
la vitamina A, vitamina E y algunas vitaminas B de la oxidacin; tambin
favorece la utilizacin del cido flico ayudando a la conversin del folato en
tetrahidrofolato o mediante la formacin de derivados poliglutamato del
tetrahidrofolato. Finalmente, la vitamina C es un antioxidante biolgico que
protege al organismo del estrs oxidativo provocado por las especies
oxigeno reactivas.
La mayor parte de sntomas de la carencia de vitamina C se puede
relacionar directamente con sus papeles metablicos. Entre los sntomas de
carencias leves de vitamina C se encuentran la facilidad para producir
heridas, debido al incremento de la fragilidad de los capilares. El escorbuto
est asociado con una disminucin en la capacidad de curar heridas,
osteoporosis, hemorragias y anemia.
La vitamina C se encuentra principalmente en alimentos de origen
vegetal y puede presentarse en dos formas qumicas interconvertibles:
cido ascrbico (forma reducida) y cido dehidroascrbico (forma oxidada),
siendo ambas formas funcionales biolgicamente y mantenindose en
O
OH
HO
4
3
HO
HO
OH
5
OH
1
2
c id o d e h id r o a s c r b ic o
OH
OH
HO
CH2
OH
c id o d ic e to g u l n ic o
La vitamina C o cido ascrbico es un nutriente esencial para muchos
primates, un pequeo nmero de otros mamferos (cobayas y murcilagos
por ejemplo), unas pocas especies de pjaros y algunos peces. El hombre en
concreto, carece de la enzima que cataliza la etapa terminal de la sntesis
de cido ascrbico, la gulonolactona oxidasa, por lo que debe adquirirlo a
travs de la alimentacin, siendo esta la razn por la que en el hombre y en
otras especies el cido ascrbico adquiere el carcter de vitamina.
La vitamina C es un compuesto inestable, debido a la facilidad con la que se
oxida e hidrata. Se destruyen con facilidad en el procesamiento y
conservacin de los alimentos, por lo que es utilizada como indicador de la
prdida vitamnica de un alimento durante su procesamiento y
almacenamiento. Por otra parte, el calor y los cationes metlicos (cuidado al
cocinar en recipientes de cobre) destruyen la vitamina C. Alimentos como
los ctricos, kiwi, fresones, brcoli, lechuga, entre otros, son fuente natural
de vitamina C, y su contenido depende de la especie, rea geogrfica en las
que son cultivados, las condiciones de almacenamiento una vez recogidos y
del estado de maduracin (generalmente aumenta con la maduracin).
La vitamina C se puede reconocer mediante azul de metileno. Este
colorante cuando est oxidado es de color azul y se reduce fcilmente
formando un compuesto incoloro. Por otra parte, la cromatografa y la
titulacin volumtrica de xido-reduccin son mtodos utilizados para
cuantificar el contenido de vitamina C de un alimento. La cromatografa
lquida de alta presin (HPLC) es el mtodo ms utilizado por ofrecer una
gran precisin de los resultados. Sin embargo la tcnica de HPLC resulta
cara, por ello en esta prctica determinaremos el contenido de vitamina C
presente en la fruta, en bebidas preparadas o en complejos vitamnicos
mediante una titulacin volumtrica de xido reduccin.
Nota: las dosis recomendadas por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS)
para la vitamina C se sitan en 90 mg diarios para hombres y 75 mg para
mujeres.
Volumetras redox
La titulacin volumtrica es un mtodo de anlisis cuantitativo en el que se
mide el volumen de una disolucin de concentracin conocida (disolucin
patrn o titulante patrn) necesario para reaccionar completamente con un
compuesto en disolucin de concentracin desconocida. Para determinar
cundo se ha llegado al final de la titulacin, en la disolucin problema se
agrega un indicador que sufre un cambio fsico apreciable, como por
ejemplo cambio de color, en el punto final de la reaccin
En esta prctica determinaremos el contenido de vitamina C mediante una
volumetra de xido-reduccin, la vitamina C tiene carcter reductor y
utilizaremos una disolucin de yodo como agente oxidante que constituye el
titulante patrn.
Para que una sustancia se oxide es necesario que otra se reduzca y al
revs (Reaccin de oxidacin-reduccin; REDOX). Por lo tanto cuando al
cido ascrbico reducido le aadimos yodo, este se reducir a yoduro a
consta de que el cido ascrbico se oxide.
3.
Bureta de 50 ml
Erlenmeyer de 100 ml
Embudo
Pipeta automtica P-1000 y puntas azules
Probeta de 50 ml
Bao Mara
REACTIVOS
Disolucin de yodo 24,1 mM
Disolucin de almidn 1% (w/v) (recin preparada)
Disolver 1 g de almidn soluble en 100 ml de agua hirviendo. Homogeneizar
la suspensin. Una vez fra, filtrarla utilizando algodn.
HCl 15%
Naranja o limn y zumos comerciales
Preparado de vitamina C (comprimidos o sobres de vitamina C; 500mg/L
agua destilada)
Experiencia N 1
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Preparacin del zumo de fruta
Exprimir una naranja o limn.
Filtrarlo a travs de una gasa.
Puede utilizarse tambin zumos de fruta de venta en establecimientos
comerciales.
Para determinar el cido ascrbico de los comprimidos de vitamina C,
disolver una tableta que contenga 500 mg de cido ascrbico en un
litro de agua destilada.
Titulacin del cido ascrbico
g
Volumen yodo consumido
=0,424
L
volumen de la muestra
Donde:
El volumen de yodo consumido es es el volumen aadido al erlenmeyer
desde la bureta al titular el preparado de vitamina C.
El volumen de la muestra es el volumen de zumo que hemos puesto en el
erlenmeyer con una concentracin de vitamina C desconocida.
La produccin de vitamina C presenta dos requerimientos esenciales: que la sntesis sea quiral
debido a que slo el L-enantimero es activo biolgicamente, y que la etapa final del proceso sea
no oxidativa. (Mateos, [s.a.]).
El proceso de sntesis de Reichstein-Grssner (1934) a partir de hidratos de carbono es el mtodo
utilizado tradicionalmente, adaptado con pequeas modificaciones. Consta de varias etapas
qumicas y una conversin enzimtica.
La etapa de oxidacin desde D-sorbitol a L-sorbosa se lleva a cabo mediante Acetobacter
suboxydansen un proceso a 30-35C, con agitacin y aireacin vigorosas mediante una
concentracin inicial del 20% en una solucin nutritiva con 0,5% de extracto de levadura o lquido
de maceracin de maz y CaCO3.
El proceso de conversin tarda aproximadamente 24 horas aunque concentraciones ms altas de
sorbitol prolongan el tiempo de conversin. Se produce aproximadamente 1 kg de cido Lascrbico a partir de 2 kg de glucosa.
Se parte de la D-Glucosa cuya hidrogenacin en presencia de NIRaney conduce a la formacin de
D -Sorbitol. La oxidacin selectiva de uno de los hidroxilos del D-Sorbitol se consigue por va
enzimtica con el Acetobacter Suboxidans que proporciona L-sorbosa.
Recuperacin y Purificacin.
El producto se cristaliza y se condensa con un tratamiento de acetona. Posteriormente se oxida
a cido 2-ceto-L-gulnico (2-KLGA) como intermedio clave que finalmente es convertido a L-AA por
catlisis qumica convencional, ya sea por esterificacin o lactonizacin, preferentemente con cido
clorhdrico como catalizador.
Nuevos mtodos han sido propuestos a partir de la oxidacin de la glucosa a cido 2,5 diceto-Dglucnico (2,5-DKG), por una especie del gnero Erwinia, y una segunda etapa para la reduccin
a cido 2-ceto-L-gulnico (2-KLG) por una Corynebacterium. Finalmente, este ltimo producto es
transformado qumicamente a cido L-ascrbico con un 86% de eficacia en base a la glucosa
inicial. (Bremus, 2006).