EXAMEN DE MANCHAS DESCONOCIDAS

(SANGRE)

En las ciencias forenses, las manchas son evidencias comnmente evaluadas. Por
mancha se entiende toda modificacin de color, toda suciedad, toda adicin de una
materia extraa, visible o no, en la superficie

del cuerpo humano, sobre

instrumentos, o sobre un objeto cualquiera, determinada por el depsito de un

producto lquido, blando y algunas veces slido, de cuyo estudio se pueden
establecer relaciones de la intervencin o participacin de una persona o cosa en
un hecho delictivo.
La sangre es la evidencia ms comn y conocida, quiz una de las ms importantes
en criminologa, su presencia en la mayora de los casos liga generalmente al
sospechoso o a la vctima a una u otra escena.
Los patrones de la mancha de sangre hablan mucho de la posicin y del
movimiento durante el crimen, qu sucedi primero, de qu manera, y cuntas
veces. El aspecto de la mancha de sangre vara con la antigedad, cantidad y el
soporte sobre el que recaen. En los tejidos absorbentes y claros las manchas
recientes presentan un color rojo oscuro, que con el tiempo tiende a ennegrecerse
ms. Si las manchas han sido lavadas con agua, el color se hace rosa y el pigmento
difunde al tejido, si bien de un modo irregular, con lugares ms densos que otros.
El aspecto de la mancha, como de haber sido lavada, debe poner en guardia al
perito, porque las lejas y los cidos modifican las caractersticas estructurales de
los componentes de las manchas, dando lugar a causas de error en la
investigacin.

Para obtener un resultado confiable al realizar el anlisis a estas manchas de sangre,

es necesario contar con tcnicas validadas, si esto no se lleva a cabo, podran
generarse grandes perjuicios, no solo a los sujetos procesales, sino a la institucin y
al profesional encargado.

En la investigacin de manchas de sangre lo que se plantea es lo siguiente:

A.

Bsqueda de las posibles manchas de sangre.

B.

Recoleccin y traslado de las muestras al laboratorio.

C.

Anlisis de las muestras remitidas.

D.

Redactar el informe pericial.

2.1)

Definicin de mancha: Es toda modificacin de una superficie, ya sea por una

alteracin del color o el depsito de una sustancia extraa a la misma.

Pueden ser de sangre, semen, saliva y de la ms variada naturaleza.
Concepto de sangre: La sangre del ser humano contiene
principalmente lquido sanguneo (plasma) y glbulos rojos y blancos. La sangre de un
hombre sano tiene aproximadamente 1/13 de su peso total. De ello se deduce que un
cuerpo de adulto contiene ms de cinco litros de sangre.
Los glbulos rojos dan a la sangre su color caracterstico, conteniendo el pigmento
hemoglobina.
En los pulmones la hemoglobina se satura de oxgeno, pasa a los vasos que la
distribuyen por todo el cuerpo y cuando esta, finalmente, regresa al corazn es pobre
en oxgeno. Por esta razn su color es ms brillante en las arterias que en las venas.

2.2)

Inspeccin Ocular

La bsqueda debe hacerse en el escenario del delito, revisando todas las superficies y
los objetos que en l se encuentren. Las manchas pueden hallarse en la vctima, en el
piso, en los huecos, entre las tablas, en las paredes, sobre alfombras o debajo de
ellas, en cortinados, en los muebles, detrs de estos, en armas, herramientas, etc.

A veces se encuentran fcilmente estas manchas o no, puede resultar difcil su

ubicacin, debido a que no son claramente visibles, ya que se pudieron haber
removido o lavado, o por el color de superficie sobre la cual se hallan (manchas sobre
paredes empapeladas o pintadas de colores oscuros). La iluminacin con diferentes
luces y a distintos ngulos puede ayudar a la ubicacin.

El empleo de la luz ultravioleta es til, porque puede aparecer la sangre oscura,

mientras que el soporte sobre el cual se encuentra puede tener un color distinto, de
contraste permitiendo localizar y delinear la mancha.
Cuando se ubica una posible mancha de sangre, se debe efectuar una descripcin de
su color, forma, posicin, direccin de la salpicadura, altura estimada de cada,
cantidad encontrada, etc.
Para conservar la mancha se sigue un ordenamiento, evitando de esta manera alterar
los resultados, y tener una clara evidencia de lo encontrado.
El primer oficial que llegue a la escena protege la misma en su totalidad. Se incluyen
los fluidos para evitar su contaminacin, posible prdida o destruccin. Si estn
expuestos a las inclemencias del tiempo se deben cubrir con un recipiente de metal.
El mejor mtodo de conservar las manchas es la toma de posesin del objeto sobre el
cual fueron hallados. La sangre se sostiene firmemente sobre las telas, papel y
madera; pero no sobre superficies barnizadas o pintadas, metales pulimentados, etc.
En este ltimo caso llega a perderse cuando se seca, y puede caerse al ms ligero
roce. Si esto sucede, para conservarla se coloca encima un trozo de papel
transparente humedecido con una solucin de goma acacia, antes de mover el objeto.
El segundo en ingresar es el fotgrafo, para registrar la escena del delito y sus
adyacencias en el estado en que se encuentra y antes de que se toque o remueva
algo.
El tercero que debe ingresar es el planista, para poder planimetrar la escena,
plasmando de esta manera los objetos en el lugar del hecho antes de que los mismos
se han tocados.
El cuarto en ingresar es el dactiloscopo, para la revelacin de los rastros papilares
latentes y el aprovechamiento de los visibles, con registros fotogrficos de todos ellos.
El scopomtrico es el quinto en ingresar a la escena, para la recoleccin de todo
aquello que conduzca a la identificacin de cosas, escritos relativos a expresiones de

ltima voluntad, al cumplimiento de venganza o a diatribas

contra la autoridad,

evidentes en papeles, paredes, etc., huellas de efraccin en puertas, ventanas,

muebles para la individualizacin del elemento empleado.
Perforaciones

producidas por proyectiles de armas de fuego, estableciendo la

direccin y distancia del disparo, as tambin como huellas de impactos para

determinacin de trayectorias, el calibre, marca y modelo de las armas empleadas.
Los qumicos legales y toxicolgicos son los sextos en ingresar e intervienen en el
levantamiento y aprovechamiento de toda clase de manchas, pelos, residuos lquidos,
et. Para luego efectuar el anlisis, aplicar reactivos, establecer calidades, extraer
elementos identificatorios y por ltimo informar sobre la existencia de sustancias
txicas, etc.
El odontlogo legal es el ltimo en entrar a la escena. Interviene en el estudio, anlisis
y documentacin de huellas de mordidas y su posterior adjudicacin. Tambin analiza
el examen de la implantacin dentaria en los cadveres de identidad desconocida,
para extraer elementos que conduzcan a su posterior identificacin.

Finalizando el tema de inspeccin ocular, decimos que la existencia de sangre nos

permitir:

Ubicar la escena del crimen

Determinar la posible comisin de un crimen
Identificar el arma empleada
Probar o refutar la coartada de un sospechoso
Eliminar sospechosos

2.3) Color de las manchas de sangre

Una mancha de sangre seca, pero relativamente fresca, tiene un color rojizo y brillo.
En capas muy finas el color puede ser verde grisceo.El brillo desaparece bajo la
accin de la luz solar, calor y diferentes condiciones atmosfricas, o si se ha tenido la

intencin de lavar la mancha. Sobre tejidos, el brillo es menos visible. Al final, el color
se vuelve gris.

Sin embargo las manchas de sangre pueden tener otros colores, desde el rojo al
castao o negro, o pueden aparecer verdes, azules o blanco-grisceas.
El color y tambin el tiempo que requiere para el cambio, depende del material en que
se encuentre. El cambio es ms rpido en superficies de metal y ms lento sobre
tejidos.

En unos tipos de telas la sangre penetra en las fibras, y en otros queda encima de la
trama.
El brillo superficial es con frecuencia menos marcado sobre telas.
Las manchas de sangre sobre el papel de pared pueden aparecer con colores
sorprendentes, por tomar la sangre color del papel. Otras manchas compuestas de
pigmento, oxidaciones metlicas, tabaco, rap, orines, heces, caf, etc. Se confunden
con facilidad con manchas de sangre.
Las manchas no deben clasificarse por su color y aspecto, ya que una mancha
cualquiera puede componerse de sangre, y otra mancha que parece de sangre no lo
es.
2.4) Formas y posiciones de las manchas
La superficie de choque, ya sea piso de madera, linleo, piso de piedra, etc. en la cual
caen las gotas influye, pero no del todo como para que determinen la forma de las
mismas.
La forma de las manchas producidas por goteo permite estimar el ngulo de impacto y
la distancia de cada desde el punto de origen, hasta la superficie sobre el cual se
encuentran las mismas.

Cuando ms burda y spera es la superficie, mayor es la posibilidad de que la

gota se rompa y desparrame.
Cuando las gotas caen verticalmente sobre una superficie

lisa, a una

altura menor de 50 cm., su forma es circular con los bordes, lisos y bien
definidos.

 Cuando su altura se comprende entre los 50cm y 100cmlas gotas son redondas
y su periferia est rodeada de picos (bordes festoneados). Las proyecciones son
al principio densas y distantes, pero cuando aumenta la altura de cada se
afirman y aproximan unas a otras.

Cuando la altura va desde los 100cm hasta los 150cm son ms aguzados,
producindose proyecciones radiales a una mayor altura.

Cuando la altura de cada supera los 150cm las proyecciones son finas y tienen
salpicaduras radiales que se extienden hasta unos 30cm del centro de la gota.
Pequeas gotitas pueden aparecer rodeando la gota principal o separada de
ella.

Una gota de sangre al chocar con una superficie en ngulo recto, produce un aspecto
casi circular.
Si el ngulo decrece, la mancha adquiere una forma ms ovoidal, y es ms alargada
cuando ms chico es el ngulo de impacto.
La forma que adopte la gota de sangre y las salpicaduras, varan de acuerdo a la
velocidad con que caigan.
Si el ngulo en que cae la gota es muy pequeo y se desprende una pequea gotita,
la forma de la mancha es similar a la del signo de exclamacin.

Una pequea gota puede proyectarse libremente a una gran distancia, formando como
una raya bajo un signo de admiracin. Esta raya o el extremo puntiagudo de la
salpicadura sealan la direccin del camino recorrido por las gotas.

2.5) Morfologa de las manchas

La imagen hemtica puede aportar datos importantes, relacionados con las
circunstancias del hecho que se investiga.
I. Manchas de proyeccin: Gotas y salpicaduras.
II. Manchas de escurrimiento: Charcos, regueros y rebabas.
III. Manchas por contacto: Impresiones sangrantes de manos, pies, etc.
IV. Manchas por impregnacin: Producida por la imbibicin 1 de la sangre en tejidos
textiles.
V. Manchas de limpieza: Quedan sobre telas en que se limpi un arma, de las
manos de un puo, etc.
VI. Manchas recientes: De color roja, luego parduscas y por ltimo, negruzcas.

2.6) Velocidad:
El impacto de baja velocidad es afectado por la fuerza de gravedad. Su cada es de
forma horizontal y puede producir goteo sobre sangre.

El impacto a velocidad moderada puede ser producido por un objeto contuso o

punzante. Pueden producir flujo o charco arterial.

Cuando la arteria es lesionada la sangre sale disparada hacia la pared o cualquier

objeto que se encuentre cerca. Eventualmente baja debido a la fuerza de gravedad. El
impacto de alta velocidad puede ser producido por un arma de fuego o explosivos.
Cuando la arteria venosa es lesionada, la sangre es de color oscuro y casi no tiene
potencia, y slo se produce cuando la hemorragia es leve.

Una caracterstica que debemos tener en cuenta es que la sangre ante morten se
coagula entre 5 y 8 minutos posterior a su salida del cuerpo, lo que nos indica que la
vctima no muri inmediatamente.

La post morten no se coagula, y su forma, direccin y estado de las manchas puede

indicar los movimientos posteriores de la vctima, si existi lucha o forcejeo, si estaba
con vida, si fue encontrada en su posicin original o movida.

2.7) Clasificacin de los patrones de sangre

Para clasificarlos, hay que tener en cuenta:
1. El grado de salpicadura lo determina la textura de la superficie y no la distancia
de cada.
2. Las manchas en forma de lgrima (extremos puntiagudos) indican la direccin
del recorrido. Las gotitas ms pequeas y ms largas exhiben sus extremos
puntiagudos apuntando a las manchas ms grandes de donde provienen.
3. Cuanto ms pequeas las gotas, mayor la energa de impacto.
4. El ngulo de impacto de una mancha de sangre puede ser estimado por la
geometra de la mancha.
Se clasifican en tres grupos

Pasiva: Se crea cuando la fuerza que la produce acta sobre su gravedad.

Puede ser patrn producido por goteo o flujo.

Proyectadas: son aquellas que son creadas cuando sale la sangre expuesta
por un objeto en accin o una fuerza mayor que la de gravedad. El tamao, la
figura y el nmero que resultan de la mancha van a depender del tipo de fuerza
que se utilice para hacer brotar la sangre.

 Transferidas: Se produce cuando un objeto con sangre entra en contacto con

la superficie de otro que no tiene sangre

2.8) Edad de las manchas de sangre

Determinar si una mancha de sangre es antigua o reciente es muy difcil, depende de
la alteracin sufrida por los pigmentos de la sangre. Por ejemplo si la hemoglobina se
ha cambiado en hematina, la mancha no es reciente.
Sin embargo la rapidez del cambio depende de muchos factores, el carcter del
material en el cual se ha depositado la sangre, la consistencia y color de la luz, grado
de humedad, etc.
Para saber la edad aproximada, las pruebas deben realizarse qumica y espectrogrficamente. Se fundan en una comparacin efectuada con sangre de la misma o
similar capa subyacente en semejantes condiciones, de este modo se sabe el tiempo
con bastante aproximacin. Es necesario disponer de una cantidad abundante.

En este diagrama podemos observar lo que sucede cuando un reactivo produce una
reaccin positiva. El oxgeno combinado en el reactivo queda libre en contacto con
una peroxidasa, y acta sobre el reactivo para producir una coloracin.

2.9) Interpretacin geomtrica de las manchas de sangre

Cuando se comete un delito en el que surgen huellas o manchas de sangre, se debe
tener suma atencin en el registro de la ubicacin, forma, direccin, medida y
superficie del rea de impacto de tal elemento.
Cuando esta informacin se aplica a las caractersticas fsicas de la sangre, el
investigador podr:
a. Saber el origen de la sangre
b. La distancia entre el rea de impacto y el origen al momento de ocurrencia.
c. El tipo y la direccin del impacto
d. Posicin de la vctima durante el ataque
e. El movimiento y direccin del sospechoso y de la vctima durante y despus
de la efusin de sangre.

2.10) Anlisis de las muestras remitidas

Los ensayos de sangre nos pueden brindar la siguiente informacin:
a) Identificacin de manchas como correspondientes a sangre: los anlisis que se
hacen es para identificar positivamente la sangre.

b) Determinacin de sangre humana o animal.

c) Determinacin del grupo de sangre.
Recoleccin y envo al laboratorio
El mejor mtodo para preservar manchas de sangre es enviarla al laboratorio para su
anlisis, sobre el objeto en el cual, se encuentran. Si hay riesgo de que la sangre no
se adhiera fuertemente a superficies pintadas o lustradas, metales pulidos, etc. Se
puede humedecer un trozo de papel transparente delgado y colocarlo sobre la mancha
antes de mover el objeto. Si las manchas estn secas, sobre objetos que no pueden
ser trasladados, la forma de preservarla es enumerando cada una de las manchas,
despus de haber tomado nota de su posicin y forma.
La sangre ser raspada con una hoja de afeitar, escalpelo o bistur, sobre un trozo de
papel blanco limpio. Este papel se pliega de forma tal de minimizar la prdida de
sangre. Si una mancha se encuentra en un material, parcialmente absorbente, y esta
no puede ser raspada, se coloca sobre la mancha un trozo de algodn humedecido
con agua destilada o solucin fisiolgica; tambin se puede usar papel de filtro
humedecido comprimindolo sobre la zona manchada.
Sangre lquida: Se colectan 2 ml en pipeta limpia y se colocan en un tubo de ensayo
con solucin salina al 0.9%. Se tapa el tubo y se invierte dos o tres veces para
mezclar. Tambin se puede usar para su recoleccin papel de filtro, hisopos o trozos
de algodn.
Sangre seca: Raspado con una hojilla de afeitar o de bistur, y el polvillo se recoge en
una hoja de papel.
Ropas manchadas: Se secan a temperatura ambiente o por corriente de aire fro y
lejos de la luz directa del sol. Lo ideal es mandar la ropa u objeto completo. Se
evitarn doblar para que la sangre no se transfiera de un sector a otro.
Especificar lugar de procedencia, dimensiones y caractersticas de la mancha.
En ningn caso se agregarn agentes preservadores sobre las manchas.
Todas las muestras remitidas al laboratorio deben llevar en su embalaje, etiquetas con
los siguientes datos:

Contenido

Nombre de la vctima

Fecha del hecho

Calificacin del hecho

Comisara actuante

Juzgado y secretara que corresponde actuar

2.11) Anlisis en el laboratorio

El anlisis en el laboratorio puede dividirse en cinco etapas:
I. Observacin de las muestras
II. Ensayos preliminares
III. Ensayos confirmativos
IV. Investigacin de la especie
V. Tipificacin de la mancha de sangre humana

2.12)Observacin de las muestras

El material recibido, ser sacado de su envoltorio con sumo cuidado y esparcido sobre
una amplia superficie, utilizando guantes de ltex.
Si se llegara a encontrar insectos se coloca la muestra en una bolsa plstica, se
adicionan unas gotas de formiato de etilo y se cierra hermticamente. Luego de una
hora, tiempo considerable para exterminar los insectos, se retira el material de la bolsa
y se somete al examen.
Se observan

detenidamente, se describen y dibujan los objetos recibidos; por

ejemplo: una camisa, un cuchillo, etc. Indicando las manchas que contienen con el
mayor detalle posible. Durante el examen se tomar nota del dao causado por
proyectiles, cortes con arme blanca, etc. Se sealar la posicin de los mismos en un
esquema correspondiente.
Todos aquellos elementos extraos se separan, pueden ser fibras, pelos, fragmentos
de vidrio, astillas de madera, partculas vegetales, etc. La extraccin de este material
se realiza con pinzas o un micro-aspirador y se coloca en bolsitas, pequeos tubos o
cajas de Petra, debidamente etiquetados.

Si la mancha no es tan evidente, se marcar el contorne de la misma, aprovechando

el contraste con la luz ultravioleta. La marcacin puede hacerse con tiras de papel
adhesivo de color, lpiz o tiza de sastre.
Por ltimo se procede a numerar las manchas.
Ensayos preliminares
Los ensayos preliminares son pruebas rpidas basadas en la actividad de peroxidasa
que posee el grupo HEMO de la hemoglobina de la sangre y que, en presencia de
agua oxigenada y de ciertos reactivos orgnicos, dan lugar a la

aparicin de

coloraciones o luminiscencia que orientan sobre la posible existencia de sangre en las

muestras analizadas.
Estos ensayos tienen valor como ensayos de orientacin, pero no aseguran la
presencia de sangre en la mancha que se est estudiando.
Todos los ensayos que se describirn, sufren en mayor o menor grado la interferencia
de las peroxidasas de secreciones biolgicas y peroxidasas vegetales. Tambin
interfieren agentes fuertemente oxidantes, algunos metales y sales metlicas.

El reactivo de Van Denn (1861): consiste en tintura de resina de guayaco

disuelta en alcohol etlico. En presencia de sangre y agua oxigenada desarrolla
un color azul. Se disuelven 0,05 g de resina en 10 ml de alcohol de 80, debe
prepararse en el momento.

El reactivo de Adler (1904): Ofreci grandes ventajas por su gran

sensibilidad. Consiste en solucin actica de bencidina disuelta en cido
actico glacial o en mezclas de alcohol etlico y cido actico. Da color azul
verdoso en presencia de sangre y agua oxigenada. Se disuelven 0,01-0,05 g

de bencidina en 10 ml de cido ctico. No se recomienda su uso por sus

propiedades carcinognicas2

El reactivo de Medeinger: Consiste en solucin actica de la leucobase del

Verde de malaquita disuelta en solucin de cido actico. Se observa color
verde en presencia de sangre y agua oxigenada. Se disuelven 0.05 g de la
leucobase en 2,5 ml de cido actico y luego se agregan 7,5 ml de agua
destilada, debe prepararse en el momento del uso.

El reactivo de Kastle Meyer: Consiste en el empleo de fenolftaleina reducida

con cinc en medio alcalino y luminol (3-aminooftalhidrazida). La alta
sensibilidad en medio lquido de la reaccin con fenolftaleina reducida (1 en
1.000.000), se puede observar en la localizacin de sangre en soluciones muy
diluidas, como son las muestras recogidas en lavabos, caeras, etc. Se
disuelve en un matraz, 20 g de hidrxido de potasio en 100 ml de agua
destilada. Se agregan 2 ml de fenolftaleina y unos 10-30 de polvo de cinc.
Se coloca en un refrigerante a reflujo y se calienta a ebullicin hasta la
decoloracin de la mezcla, una vez fra se decanta y se incorporan 20 ml de
alcohol etlico absoluto.
Al agregar gotas del reactivo y agua oxigenada en la

sangre, va a presentar

una coloracin rosada intensa.

La reaccin con luminol: Es muy sensible (1 en 5.000.000). Esta prueba es

ideal para aplicarla en grandes superficies, como pisos o escaleras que hayan
sido

lavados

con

la

intencin

de

remover

la

sangre.

La reaccin positiva se manifiesta por la aparicin de luminiscencia, por lo que

debe ser observado en la oscuridad.
En el momento del uso, se disuelven 10 ml en agua destilada, 0,5 g de
carbonato de sodio y 0,01 g de luminol.

Tcnicas
Van a variar segn el tipo de muestra que se analice:

1) Telas blancas con supuestas manchas de sangre: Se corta una mnima

porcin de cada mancha y se macera con unas gotas de solucin fisiolgica en
un pequeo tubo de ensayo rotulado. Para ayudar a la disolucin de la mancha
2

se usa una varilla de vidrio. Se hacen toques con la solucin obtenida, sobre el
papel de filtro.
En cada uno de ellos se agrega primero una gota de los
reactivos que se desean ensayar, se espera unos segundos por si hubiera
oxidantes presentes- y si no hay reaccin, se agrega una gota de agua
oxigenada. La aparicin del color caracterstico en los ensayos utilizados,
indica la posible presencia de sangre.

2) Telas de color con supuestas manchas de sangre: Se puede realizar de

varias maneras los ensayos. Se repite el mismo ensayo que se utiliz para
telas blancas, pero ac de color son dichas telas.
Tambin se puede raspar la mancha suavemente con el vrtice de un cuadrado
de papel de filtro doblado en cuatro. Se despliega el papel y en el centro de
este qued parte del material raspado, se agrega una gota de etanol y luego se
incorpora una gota de la reaccin de Kastle Meyer. Luego de unos segundos,
si no hay desarrollo de color se aade una gota de agua oxigenada. La
coloracin caracterstica indicar un resultado positivo.
Otra forma es humedeciendo un trozo de papel de filtro con solucin fisiolgica
y se oprime fuertemente sobre la mancha. Se hacen luego los ensayos
preliminares sobre el papel.
Esta variante se har en una pequea zona de la mancha y siempre que la
misma sea extensa.
Si todos los ensayos anteriores dieron negativo, se corta una pequea hebra
de hilo de la mancha y se coloca en el centro de un papel de filtro. Se aplica el
reactivo de Kastle Meyer sobre la hebra, se espera unos segundos y se agrega
una gota de agua oxigenada. Se observar el cambio de color.

3)Aguas de lavado, vertederos, caeras, etc.: Si se sospecha que el agua

puede estar contaminada con una pequea cantidad de sangre, se colocan 5-10
ml de la misma en un tubo de ensayo y se agrega una gota del reactivo de
Kastle Meyer; se espera unos segundos y se adiciona una gota de
3) agua oxigenada. Al agitar la solucin suavemente aparecer el color
caracterstico que nos indica un resultado positivo.

4) Objetos varios (maderas, baldosas, hojas de cuchillos, etc.) con

supuestas manchas de sangre: Se raspan con cuidado pequeos
fragmentos de cada una de las manchas, sobre vidrios de reloj.
Se agregan sobre los trocitos reunidos en la concavidad del vidrio, 2-3 gotas de
solucin fisiolgica y con una varilla se ayuda a la disolucin de estos
fragmentos. Con la solucin obtenida se hacen toques sobre el papel de filtro.
Se agrega sobre los mismos una gota de los reactivos elegidos, se espera
unos segundos y si no hay aparicin del color, se agrega una gota de agua
oxigenada en cada vaso.

5) Superficies amplias como pisos, escaleras, etc.: Se pulveriza la superficie a

investigar con la solucin de luminol y carbonato de sodio.
Se espera unos instantes y se roca con agua oxigenada. La aparicin de
luminiscencia azul, nos dir sobre la posible existencia de sangre en la
muestra.

2.11) Ensayos confirmativos

Son ensayos especficos que certifican la existencia de sangre en la mancha
investigada.
Se dividen en 4 mtodos:
I. Mtodo microscpico
II. Mtodo micro-cristalogrfico
III. Mtodo cromatogrfico
IV. Mtodo microespectroscpico

Mtodo microscpico
Es la observacin de los elementos figurados de la sangre.

La observacin de glbulos rojos (eritrocitos) y glbulos blancos (leucocitos) en

manchas de sangre puede verse afectada por diferentes circunstancias, la naturaleza
del sustrato sobre el cual se encuentra la mancha, la antigedad, el dao originado
por el manipuleo y la putrefaccin que causar la destruccin de los elementos
figurados.

Cuando la sangre se deposita sobre un objeto en una capa fina y se deseca

rpidamente, es cuando mejor se conservan los glbulos rojos y blancos.

Observacin de leucocitos (glbulos blancos)

La tcnica que se emplee depender si la mancha se encuentra sobre un material
absorbente: tela, o un soporte no absorbente: hoja metlica.
Soporte absorbente (tela): Se coloca un pequeo trozo de la tela manchada sobre
un portaobjeto, se agregan unas gotas de alcohol etlico absoluto y se deja en reposo
por 20 minutos. Este procedimiento asegura la adhesin de la sangre, de lo contrario
se disolvera en las siguientes operaciones. Se colorea con Giemsa, por 30 minutos y
se enjuaga con agua destilada. Se deja secar al aire.
Se coloca el portaobjeto en el microscopio y se observa la presencia o no de glbulos
blancos.
Soporte no absorbente (hoja metlica): Se deposita sobre un portaobjeto una capa
de albmina de Mayer, a continuacin se raspa una parte de la mancha y el polvo que
se obtiene se deja caer en forma de lluvia fina sobre la capa de albmina. Se fija el
preparado con solucin de metanol-formol por 3 minutos. Se lava con agua destilada y
se colorea con el colorante Giemsa.
Se lava el preparado, se seca al aire y se observa en el microscopio.
Si la tela es traslcida, pueden verse los mismos sin desintegrar el tejido. Si se trata
de una tela oscura o gruesa, puede requerir luego del teido, el deshilachado de dicho
material sobre el portaobjetos, mediante el empleo de agujas adecuadas.

Observacin de los eritrocitos (glbulos rojos)

Manchas sobre soportes opacos no absorbentes:

Las manchas de sangre sobre hojas metlicas (armas blancas u otros objetos no
absorbentes) pueden ser examinadas directamente al microscopio por el mtodo de
epimicroscopa.
Esta realiza las observaciones iluminando con luz incidente, mientras que la
microscopa convencional utiliza luz por transparencia.
Los mejores resultados se han logrado cuando la capa de sangre que se asienta
sobre la hoja metlica es muy delgada.
Al secarse rpidamente la mancha, es probable que la sangre no sufra alteraciones y
entonces los glbulos rojos se distinguirn bien.
Cuando la capa sangre es gruesa, la observacin es ms difcil y, en ocasiones,
imposible, pues los eritrocitos decantan por su mayor peso especfico, formndose por
encime de los mismos una costra de albmina. Por otra parte, el secado es ms lento
y se incrementa el riesgo de putrefaccin de la sangre.

Mtodo micro-cristalogrfico

Consiste en la preparacin y observacin microscpica de cristales obtenidos por

accin de ciertos reactivos sobre la hemoglobina de la sangre.
Los dos mtodos ms utilizados son el de Teichmann y el de Takayama.

Mtodo de Teichman (1853): Consiste en la cristalizacin caracterstica del

clorhidrato de hematina (hemina), bajo la forma de cristales rombodricos de color
caf, utilizando cido actico glacial con vestigios de cloruro de sodio.

Se prepara un extracto de la mancha, si se encuentra impregnado un tejido, se

macera un trocito del material manchado en la menor cantidad de agua posible.
Si el soporte no es absorbente, el extracto se prepara por disolucin en agua de unas
escamitas de la mancha. Luego se calienta un portaobjeto durante un minuto sobre la
tapa de un bao de agua a 60C.
Con una micro-pipeta se coloca una gota del extracto del portaobjeto, y se evapora
hasta sequedad. Si es necesario se evaporan ms gotas hasta obtener una mancha
visible de color pardo.
Se coloca sobre la mancha un cubreobjetos, interponiendo entre el portaobjetos y el
cubreobjetos, un pequeo rectngulo de papel de filtro, con el fin de dejar una hendija
suficiente para el paso de una gota del reactivo de Teichmann. Por ltimo se apoya el
portaobjetos sobre la placa del bao de agua y se deja hasta la evaporacin total del
cido actico. Se vuelve a agregar una gota de reactivo y se evapora de nuevo.
Se repite el procedimiento una tercera y cuarta vez, se deja enfriar el portaobjeto y se
observa al microscopio.
La aparicin de los cristales caractersticos de Teichmann, indicarn un resultado
positivo.

Mtodo de Takayama: Es especfico y est basado en la obtencin de los cristales de

piridina-hemocromgeno como consecuencia de la accin del reactivo sobre la
hemoglobina de la sangre, presente en la muestra.
El reactivo consiste en una mezcla de piridina, solucin saturada de glucosa y solucin
de hidrxido de sodio. Los cristales obtenidos son de color rosado intenso.

Mtodo cromatogrfico
Se basa en la obtencin del mismo Rh caracterstico para un extracto de la muestra y
un testigo de sangre; ambos sembrados sobre papel para uso cromatogrfico o sobre
placa delgada.
Se disuelven las manchas con solucin fisiolgica. Se hace una prueba preliminar,
sembrando sobre una placa delgada diferentes cantidades del extracto de muestra
(1,2 5 microgotas), luego se pulveriza con el reactivo leucobase del verde de
malaquita y agua oxigenada.

Para el desarrollo cromatogrfico se elige la cantidad que d una reaccin neta, pero
no demasiado intensa, y se siembra en la lnea recta.
Luego se siembran 5 microgotas de sangre testigo diluida, despus de unos minutos
se coloca la placa en la cuba cromatogrfica, previamente saturada con el solvente
mencionado.
Se retira la placa de la cuba y se seca en una estufa a 100C durante 5 minutos, para
evitar la interferencia de las peroxidasas de origen vegetal. Luego se roca con el
reactivo verde de malaquita, se esperan unos minutos, y si no aparece coloracin, le
agrego agua oxigenada.

Mtodo microespectroscpico
Su uso ha sido desplazado por los mtodos cristalogrficos.
Consiste en observar el espectro de absorcin de la oxihemoglobina, con un
microscopio provisto de un ocular micro-espectroscpico, en lugar

del ocular

corriente. El espectro de absorcin de la oxihemoglobina est caracterizado por dos

bandas de absorcin, cuyas longitudes de onda correspondientes son 576-578 nm y
540-542 nm, situadas entre las lneas D y E del espectro visible.
Cuando la muestra de sangre es fresca, el mtodo no ofrece problemas, siempre que
se disponga de la cantidad suficiente: pero si la mancha es antigua, la hemoglobina se
habr transformado parcialmente en metahemoglobina, hematina y hemocromgeno.
La carboxihemoglobina da un espectro similar al de la oxihemoglobina, pero con un
ligero desplazamiento de las bandas hacia el violeta.
Si se agrega un agente reductor, la oxihemoglobina se transforma en hemoglobina
reducida, y presentar una nica banda ubicada entre las dos correspondientes a la
oxihemoglobina y que se llama banda de Stokes.
La carboxihemoglobina mantiene la doble banda aun luego del agregado de un
reductor.

2.12) Tipificacin de las manchas

Si en el anlisis de una mancha se comprueba que es de sangre y que pertenece a la
especie humana, por ltimo queda el examen de la tipificacin de la misma.

Tipificar una mancha de sangre es encontrar su tipo o grupo dentro de la mayor

cantidad posible de sistemas, y es fundamental para llegar a la individualizacin.
Si en la escena del crimen quedan manchas, que son de sangre humana, y se
comprueba que las mismas no pertenecen a la vctima, su estudio es muy importante
para localizar al criminal.
La posibilidad de coincidencia entre los grupos sanguneos de dos individuos se hace
cada vez ms difcil, al ser mayor el nmero de sistemas utilizados en la tipificacin de
la sangre. Los avances producidos en este campo de la ciencia han incrementado la
probabilidad de asignar a un individuo en particular, una mancha de sangre.
Para la tipificacin de las mismas se usan tcnicas inmunolgicas y bioqumicas.
Tcnicas inmunolgicas

Estas sern aplicadas al estudio de los sistemas ABO, MN y Rh.

Se basan en la existencia sobre la superficie de los glbulos rojos de la sangre, de
ciertas estructuras qumicas llamadas antgenos. Estos son los que confieren a la
sangre, el tipo dentro de cada sistema sanguneo.
En sangre fresca, la presencia o ausencia de un antgeno, se determina por la
aglutinacin o no de los glbulos rojos puestos en contacto con un antisuero
especfico, con ciertas condiciones.
En manchas de sangre seca, los glbulos rojos se encuentran destruidos, por lo
general, y por lo tanto las tcnicas de aglutinacin directa no son aplicables.
Sin embargo, los antgenos no se desnaturalizan inmediatamente y retienen la
capacidad de combinarse con anticuerpos especficos.

Sistema ABO
Hubo muchos cientficos que realizaron estudios cientficos respecto de la circulacin
de la sangre, la inyectacin de la misma en los humanos para curarlos, transfusiones
de sangre animal a humanos, etc.
Landsteiner en el ao 1900 seal que el suero humano normal no solo aglutina los
glbulos rojos de animales, sino que en algunos casos, los provenientes de otros
individuos.

Luego de realizar varios experimentos con humanos para ver como se aglutinaban los
glbulos, lleg a la conclusin que existen dos factores en los glbulos rojos, a los que
design como aglutingenos A y B, (conocidos como antgenos) y que el suero
contena anticuerpos normales o aglutininas.
Este cientfico dijo que cada persona poda poseer en los glbulos rojos uno de los
antgenos, ambos o ninguno. Cuando uno de estos aglutingenos est ausente en los
glbulos rojos de una persona, su correspondiente aglutinina est presente en el
suero.
Por otra parte, cualquiera sea el antgeno que una persona tenga en la superficie de
sus glbulos rojos, los correspondientes anticuerpos faltan en su suero.
Aplicacin del sistema ABO en la tipificacin de manchas de sangre
Generalmente no se presentan problemas en la investigacin del grupo sanguneo en
sangre fresca, pero puede presentarse inconvenientes en el agrupamiento de
manchas de sangre secas.
Para tal fin se requiere reconstruir el grupo ABO de la mancha en estudio, o sea,
encontrar los aglutingenos y aglutininas presentes.
Factores que pueden afectar los resultados:
1. La antigedad de la mancha
2. La naturaleza del sustrato sobre el cual se encuentra
3. Las condiciones a las que estuvo expuesta
4. Cantidad de muestra, etc.

La antigedad de la mancha es fundamental, porque las aglutininas son muy poco

estables, se debe realizar la investigacin en el laboratorio lo ms rpido posible.
Los aglutingenos en manchas de sangre seca y bien conservada, son en cambio
muy persistentes.
No se deben manipular las muestras con las manos sin guantes, ya que los antgenos
ABO se encuentran en las secreciones (sudor, semen, saliva, lgrimas, etc.) en los
individuos secretores. Los que no manifiestan esta propiedad son los individuos no
secretores.
Otro factor es la contaminacin bacteriana de la muestra.

Investigacin de aglutininas (anticuerpos anti A y anti B) en manchas de sangre

seca
Existen dos tcnicas para examinar en este tipo de mancha la presencia de
anticuerpos anti A y anti B.
Tcnica de Lattes:
Si se cuenta con una costra delgada de sangre, es mejor utilizar este mtodo. Tales
costras estn usualmente disponibles cuando la sangre est concentrada en un rea
reducida y sobre un material no absorbente.
Consiste en colocar una costra muy pequea de sangre sobre un portaobjetos, y
ponerla en contacto con una suspensin de glbulos rojos conocidos (A, B, 0), en
solucin fisiolgica.
Se cubre la preparacin con un cubreobjetos, y luego de un tiempo, se examina al
microscopio la presencia o ausencia de aglutinacin.
La costra a utilizar debe tener un grosor tal, que no levante el cubreobjeto,
producindose una acumulacin de glbulos, en algunas zonas, produciendo una
falsa apariencia de aglutinacin.
Si la costra es demasiado delgada, la aglutinacin puede ser nfima (dos o tres
glbulos aglutinados) dificultando una lectura certera.
Mtodo extractivo a tubo:
Se aplica cuando no se dispone de costras de sangre. Si la mancha se encuentra
sobre madera, se aplica unas gotas de solucin fisiolgica sobre la misma, para poder
extraerla. La solucin restante se recoge con una pipeta.
Si la mancha se encuentra sobre un tejido, se corta un trozo y se coloca en un tubo de
ensayo. Se agregan unas gotas de solucin fisiolgica para que se disuelva, utilizando
una varilla de vidrio.
El extracto obtenido se somete a una centrifugacin breve. El sobrenadante se separa
en tres pequeos tubos de ensayo. Al primer tubo se agrega una gota de suspensin
de glbulos A, al segundo una gota de glbulos rojos B, y al tercero una gota de
glbulos rojos 0.
Se colocan los tubos en la heladera por 10 minutos aproximadamente, luego se
centrifugan a 1000-1500 rpm durante dos minutos. Se extrae el lquido sobrenadante y

sobre los glbulos rojos sedimentados, se agrega una gota de solucin fisiolgica. Se
agitan ligeramente los tubos y se observa si hay aglutinacin.
Si los glbulos rojos se resuspenden, la prueba es negativa. En cambio, si los glbulos
se han aglutinado, la prueba es positiva.

Investigacin de aglutingenos del sistema AB0 en manchas de sangre secas

Una vez hecha la investigacin de anticuerpos anti A y anti B, se realiza la
determinacin de aglutingenos A y B.
Debe recurrirse a pruebas indirectas para la bsqueda de los antigenos, ya que la
mayora de las veces, en manchas secas los glbulos se deterioran o se destruyen,
perdiendo as la capacidad de aglutinacin. Los aglutingenos A Y B retienen durante
mucho tiempo, su capacidad de absorber o fijar los correspondientes anticuerpos anti
A y anti B.
Los mtodos que se emplean para la investigacin son:
Mtodo de absorcin-inhibicin: Este estudio tambin puede aplicarse en forma
similar, para detectar antgeno en otras manchas biolgicas (semen, saliva, sudor,
etc.) de individuos secretores.
Si un antisuero de ttulo conocido, se l agrega a una mancha de sangre y luego de un
tiempo determinado se titula nuevamente, podremos observar si su ttulo disminuy o
se mantuvo.
En el primer caso, la disminucin del ttulo indicar la presencia en la mancha de
sangre del aglutingeno respectivo. Si el ttulo del anti A disminuy netamente, se
comprobar la existencia del antgeno A en la muestra. Si disminuy el ttulo del anti
B, se encuentra presente el antgeno B. Si e ttulo de los antisueros se mantuvo, no
existen en la mancha los antgenos respectivos (ni A ni B).

Mtodo de absorcin-elucin: Este mtodo es altamente sensible y confiable an en

manchas antiguas.
Por esta tcnica, pequeas muestras del material machado con sangre, se ponen en
contacto con antisueros especficos (anti A, anti B y anti H), durante un tiempo para
que se forme el complejo antgeno-anticuerpo.
En una segunda etapa, el material manchado se lava cuidadosamente con solucin
fisiolgica, para eliminar todos los anticuerpos no fijados a la mancha.

Luego se realiza la disociacin del complejo antgeno-anticuerpo, por calentamiento a

50 C, durante 15 minutos, Este proceso es conocido como elucin, se rompe el
complejo formado inicialmente y se liberan los anticuerpos.
Por ltimo, se agregan glbulos rojos del grupo conocido. Si se produjo elucin de anti
A, se aglutinarn los glbulos rojos A. De la misma manera, se aglutinarn los
glbulos rojos B o glbulos rojos 0, si se eluyeron anti B o anti H, respectivamente.

Sistema MN:
En este sistema se distinguen tres grupos sanguneos. Los mismos son el MN, el M y
el N.
Este sistema es independiente del ABO y del Rh.
En general los antgenos3 M y N no son detectables despus de 4 a 6 semanas de
antigedad de la mancha. El N es el menos estable.
En la prctica es esencial seleccionar cuidadosamente los antisueros adecuados. En
ensayos realizados con sueros4 anti M, en un 50% dieron resultados correctos. En
cambio, de los sueros anti N ensayados, slo resultaron eficaces un 10%.
Los riesgos son mucho ms serios al tratar de detectar el antgeno N en una mancha
MN, dada la mayor efectividad como antisuero del anti M con respecto al anti N, en
una mancha, podra ocurrir que se detectase M pero no N.
Adems se presentan problemas de reacciones cruzadas y es posible encontrar en
individuos pertenecientes al grupo M, una cierta actividad residual N.
Algunos sueros son ms especficos cuando se absorben a temperatura ambiente y
otros requieren 4C.
Es necesario incluir controles con manchas de los tres grupos. En algunas ocasiones,
aun cuando el grupo de la mancha no pueda ser establecido en forma definitiva, se
puede excluir la posibilidad de que provenga de un cierto individuo.
El mtodo empleado para determinar el grupo dentro del sistema MN, es el de
absorcin-elucin, similar en sus diferentes etapas al utilizado para investigar los
antgenos del sistema AB0. Tambin es semejante la cantidad de muestra requerida.
3
4

Sistema Rh
Para este tipo de sistema se realizaron varias investigaciones.
En 1939 Levine, fue un discpulo de Landsteiner, public su hallazgo respecto al
comportamiento del suero de un paciente del grupo 0, que recibi una transfusin de
sangre de su esposo, tambin del grupo 0.
Descubri que en el suero de la mujer se haba producido un anticuerpo 5 especfico
contra un antgeno presente en los glbulos rojos de su esposo. Se preguntaban como
haba ocurrido la inmunizacin de la mujer, y llegaron a la conclusin de que el
antgeno presente en los glbulos rojos del esposo, haba sido transmitido
genticamente al hijo; y que los glbulos rojos fetales, portadores de dicho antgeno,
al introducirse en la circulacin materna, fueron los causantes de la formacin del
anticuerpo especfico.
Esto se confirmara con el descubrimiento del factor Rh. La mujer era Rh negativa y su
esposo Rh positivo. El nio que naci muerto era Rh positivo y su antgeno Rh
provoc la inmunizacin de la madre que elabor anticuerpos anti Rh.
En 1940 Landsteiner y Wiener estudiaron los anticuerpos producidos en conejos
inmunizados con glbulos rojos de monos Macaccus rhesus.
Luego informaron que el suero de los conejos aglutinaba no slo los glbulos del
mono rhesus, sino tambin, los glbulos rojos de casi todos los humanos de raza
blanca.
En ese ao Wiener y Peters vieron una similitud entre la especificidad del anticuerpo
animal y el anticuerpo hallado en el suero de tres pacientes con transfusiones. Ambos
anticuerpos reaccionaron con los mismos glbulos rojos.
Como consecuencia de esa similitud, se llam Rh al antgeno presente en la superficie
de los glbulos rojos, y anti Rh al anticuerpo, siendo Rh el smbolo formado con las
dos primeras letras de Rhesus.

Los individuos que tienen el antgeno Rh se denominan Rh positivos y los que no lo

tienen Rh negativos (tambin llamado anti D).
Luego fueron hallados otros anticuerpos que daban reacciones similares pero no
iguales a anti D. En 1945 haban sido descriptos 5 anticuerpos relacionados: anti D,
5

anti C, anti E, anti c y anti e. Estos constituyen el sistema sanguneo Rh, se hallan
sobre la superficie de los glbulos rojos, siendo todos ellos hereditarios.

Aplicacin del sistema Rh a la tipificacin de manchas de sangre seca

En el caso de sangre fresca la determinacin del grupo dentro del sistema Rh no
ofrece problemas. En cambio, con sangre seca, el anlisis es mucho ms complicado.
Se requiere disponer de suficiente cantidad de sangre, y es fundamental que la
antigedad de la muestra no exceda de un mes. Cuanto ms reciente es la mancha y
mejor conservada se encuentre, es ms probable que se pueda hallar el fenotipo de la
misma dentro del sistema Rh. En este sistema son cinco los aglutingenos que se
ponen en evidencia, empleando antisueros especficos.
De las mltiples combinaciones posibles de estos antgenos para constituir el
genotipo, slo nueve de ellas se presentan con frecuencias significativas.
Esto hace que una mancha pueda corresponder a una de las nueve combinaciones y
aumenta la probabilidad de discriminacin. Es decir, dos manchas de diferente
procedencia, cuyos grupos coinciden dentro del sistema AB0 y quiz tambin dentro
del sistema MN, es manos probable que coincidan dentro del sistema Rh; dadas las
nueve combinaciones diferentes del mismo.
La determinacin de los antgenos del sistema Rh en manchas secas, puede
realizarse con el mismo mtodo de absorcin-elucin, que se utiliza para el sistema
AB0 y MN, pero con algunas variantes.
La cantidad de muestra de sangre requerida es mayor, dada la menor concentracin
de sitios antignicos en la membrana de los glbulos. La temperatura ptima para la
absorcin del antisuero es 37C.
Por otra parte, el lavado para eliminar el antisuero no absorbido, debe ser aun ms
cuidadoso y exhaustivo.
La elucin debe hacerse en ausencia de los glbulos rojos, porque requiere una
temperatura alta durante un tiempo prolongado. En esta exposicin a 60C, los
glbulos rojos pierden su capacidad de aglutinacin frente a antisueros especficos.
Como se utilizan anticuerpos incompletos, es necesario un tratamiento enzimtico
previo de los mismos con papana. Esta modifica la superficie de los glbulos rojos y
contribuye a disminuir su carga elctrica, favoreciendo la aglutinacin.

Factores como el calor, luz solar directa, humedad, embalaje inadecuado y la

antigedad, pueden disminuir la posibilidad de llegar a un resultado correcto en la
investigacin de este sistema.
BIBLIOGRAFIA:

Apuntes de la ctedra "Qumica IV" a cargo de Lic. Cerolini Ral y

Bioq. Gassman Viviana: UADER, Facultad Ciencia y Tecnologa, Lic.
en Criminalstica
CARO, P. (C). (2004). Manual de qumica forense. Buenos Aires: La
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GUZMN, Carlos. (2003). Manual de criminalstica, Buenos Aires:
Ediciones La Rocca.
SIEGEL J., KNUPFER G., SAUKKO P. (Ed.)(2000) Encyclopedia of
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Varios Autores. (1983). Tratado de criminalstica. Tomo II. Buenos
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Bolivar: Manual para la identificacin de campo de rastros hemticos,
ZAGALA, Carlos. (2005).