1.

EQUIPO DE CENTRIFUGACIN
El equipo de centrifugacin se clasifica de acuerdo a su estructura
interna. La centrifuga de cesta tubular presenta la configuracin ms
simple y se utiliza ampliamente en la industria farmacutica y de
alimentacin. La alimentacin entra a presin a travs de una
boquilla por la parte inferior, se acelera debido a la velocidad del
motor y asciende a travs de la cesta cilndrica. Cuando gira la cesta,
las partculas que ascienden son lanzadas y colisionan con las
paredes de la cesta, tal como se muestra de manera esquemtica en
la figura 10.5. Los slidos se separan del liquido si se mueven a
suficiente velocidad como para alcanzar la pared de la cesta durante
el tiempo de residencia del liquido en la maquina. Cuando se
aumenta la velocidad de alimentacin, la capa del liquido que
asciende por la pared de la centrifuga se vuelve ms espesa,
reduciendo el rendimiento de la centrifuga al aumentar la distancia
debe recorrer una partcula hasta alcanzar la pared. El lquido de la
alimentacin se recoge por la pared superior de la cesta, mientras
que los slidos colisionados en la pared se recogen por separado.
Cuando el espesor del sedimento recogido en la cesta alcanza la
posicin del lquido sobrenadante, la eficacia de la separacin
disminuye rpidamente. Esto limita la capacidad de la centrifuga. Las
centrifugas tubulares se utilizan principalmente para separaciones
difciles que requieren elevadas fuerzas centrifugas. Los slidos en la
centrifuga tubulares se aceleran entre 13000 y 16000 veces la fuerza
de la gravedad.

FIGURA 1

Un tipo de cesta tubular estrecha es la ultracentrfuga. Este aparato

se utiliza para la recuperacin de precipitados finos de soluciones de
alta densidad, para romper emulsiones y en la separacin de
partculas coloidales como los ribosomas y las mitocondrias. La
ultracentrfuga produce fuerzas 105-106 veces la de la gravedad. La
cesta es accionada generalmente mediante una turbina de aire y
opera a baja presin o en una atmosfera de nitrgeno para reducir la
generacin de calor debido al rozamiento. La principal aplicacin
comercial de la ultracentrfuga ha sido en la produccin de vacunas
para separar las partculas del virus de los desechos celulares. La
ultracentrifugacion se ha probado tambin para la eliminacin de
desechos celulares muy finos en el aislamiento de enzimas y en la
separacin de ribosomas en la purificacin de ARN polimerasa. Una
ultracentrfuga tpica opera de manera discontinua por lo que la
capacidad de procesado est restringida a la necesidad de variar la
cesta manualmente. En el mercado existen ultracentrfugas
continuas, aunque en ellas la velocidad de seguridad no es tan alta
como en el equipo que opera de forma discontinua.
Una alternativa a la centrifuga tubular es la centrifuga de discos. Las
centrifugas de disco son muy comunes en bioprocesado. Existen
muchos tipos de centrifugas de discos, diferencindose entre ellas en
el mtodo de empleado para descargar el material acumulado. En las
centrifugas de disco simple, los slidos deben ser extrados
peridicamente de forma manual. Tambin es posible la descarga
continua o intermitente de slidos en muchas centrifugas de disco
sin necesidad de reducir la velocidad de la cesta. Algunas centrifugas
estn equipadas con boquillas en la periferia para la descarga
continua de slidos, mientras que otras poseen vlvulas para la
descarga intermitente .otro mtodo consiste en concentrar los
slidos en la periferia de la cesta y entonces descargarlos por la
parte superior de la centrifuga mediante un dispositivo de salida, tal
como se muestra en la figura 1. Un inconveniente de las centrifugas
con descarga automtica de slidos es que los slidos deben
permanecer sufrientemente hmedos como para fluir a travs de la
maquina. Adems debe dispone de boquillas extra para la limpieza
de la cesta y evitar el taponamiento de la misma.
Las centrifugas de disco contienen laminas cnicas de metal,
denominadas discos, que se encuentran apiladas una encima de otra
con separaciones entre ellas tan pequeas como 0.3 mm. Los discos

giran con la cesta y su funcin consiste en decidir el lquido en finas

capas. Como se muestra en la figura 1, la alimentacin se deposita
cerca del fondo de la centrifuga y asciende a lo largo de los agujeros
existentes a los disco. Entre los discos, los componentes pesados de
la alimentacin son lanzados hacia afuera bajo la influencia de las
fuerzas centrifugas mientras que el liquido ms ligero se deposita en
el centro de la cesta. Al mismo tiempo, el lquido ms ligero fluye
hacia dentro por la superficie superior de los discos y es descargado
por la parte superior de la cesta. El liquido ms pesado que contiene
los slidos puede descargarse bien por la parte superior de la
centrifuga o a travs de boquillas situadas alrededor de la cesta. Las
centrifugas de discos utilizadas en bioprocesados desarrollan entre
5000 y 15000 veces la fuerza de la gravedad. Como la referencia, la
diferencia de densidad mnima entre el slido y el liquido
recomendada para una separacin satisfactoria en una centrifuga de
cesta es aproximadamente 0.001 0.003 kgm -3. En operaciones
reales, con caudales normales de operacin, el dimetro de partcula
mnimo de separacin alrededor de 0.5 un.
2. TEORA DE LA CENTRIFUGACIN
La efectividad de la centrifugacin depende de la velocidad que
alcanzan las partculas en una determinada centrifuga en
comparacin con la velocidad que debera ocurrir bajo la influencia de
la fuerza de la gravedad. La velocidad terminal que alcanza una
pequea partcula esfrica en una suspensin diluida bajo los efectos
de la gravedad viene dada por la ley de Stoke:

us =

p l
D2p g
18

Donde us es la velocidad de sedimentacin bajo gravedad, p la

densidad de la partcula, l la densidad del liquido, Dp el dimetro
de partcula y g la aceleracin de la gravedad. En una centrifuga,
la velocidad terminal correspondiente es:

uc =

p l
D2p 2 r
18

Donde uc es la velocidad terminal en una centrifuga, la velocidad

angular de la cesta en unidades de rad -1 y r el radio del tambor de
la centrifuga. La relacin de velocidad en las centrifugas y la
velocidad bajo la gravedad se denomina efecto centrifugo o
numero g, y se expresa normalmente como Z. Entonces:
2

Z=

r
g

La fuerza desarrollada centrifuga es Z veces la fuerza de la

gravedad y se expresa a menudo como muchas fuerzas g. las
centrifugas industriales tienen factores Z desde 300 hasta 16000,
mientras que centrifugas de laboratorio pequeas pueden alcanzar
valores de Z de 500000.
En una centrifuga, la sedimentacin se produce cuando las
partculas que se alejan del centro de rotacin colisionan con las
paredes de la cesta. Aumentando la velocidad del movimiento se
mejorara la velocidad de sedimentacin. De la ecuacin u c se
deduce que la velocidad de la partcula puede aumentarse en una
determinada centrifuga:
I.- Aumentando la velocidad angular .
II.- aumentado el tamao de partcula Dp.
III.- aumentando la diferencia de densidad entre la partcula y el
lquido l y p.
IV.- disminuyendo la viscosidad de la suspensin .
Sin embargo, el que las partculas alcancen las paredes de la cesta
tambin depende del tiempo de exposicin a la fuerza centrifuga.
En las centrifugas discontinuas, como la centrifuga de discos, el
tiempo de residencia se aumenta disminuyendo el caudal de
alimentacin.

El rendimiento de centrifugas de diferente tamao puede

compararse mediante un parmetro denominado factor sigma .
Fsicamente representa el rea de la seccin transversal de un
dispositivo que opera bajo gravedad con las mismas
caractersticas de sedimentacin que una centrifuga. Para
centrifugas continuas, est relacionado con la velocidad de
alimentacin del material de la siguiente manera:
=

Q
2u g
Donde Q es el caudal volumtrico de alimentacin y u g la velocidad
terminal de las partculas en un campo gravitacional. Si dos
centrifugas cumplen con la misma efectividad:
Q 1 Q2
=
1 2
Donde los subndices 1 y 2 expresan las dos centrifugas. Esta
ecuacin puede utilizarse para el cambio de escala de los equipos
de centrifugacin. Las ecuaciones necesarias para el clculo de
dependen del diseo de la centrifuga.
Para una centrifuga de discos.

2
2 ( N1 ) 3 3
(r 2r 1)
3 g tan

Donde es la velocidad angular en rad -1, N el numero de discos

en la pila, r2 el radio exterior del disco r1 el radio interior del disco
g la aceleracin de la gravedad y el Angulo del cono mitad del
disco. Para una centrifuga de cesta tubular, la siguiente de
ecuacin posee una precisin del 4%.

2 b
(3 r 22 r 21)
2g

Donde b es la longitud de la cesta, r1 el radio de la superficie del

liquido y r2 el radio de la pared interior de la cesta. Dado que r 1 y r2

son aproximadamente iguales en una centrifuga de cesta tubular,

la ecuacin anterior puede aproximarse a:
2

2 br
=
g

Donde r es el radio medio, aproximadamente igual a r1 o a r2.

Las ecuaciones utilizadas anteriormente para calcular se basan
en condiciones ideales de operacin. Teniendo en cuenta que los
diferentes tipos de centrifugas se desvan en diferente grado de la
operacin ideal, la ecuacin del caudal no puede utilizarse
generalmente para comparar diferentes configuraciones de
centrifugas.
El rendimiento de cualquier centrifuga puede desviarse de las
predicciones tericas por varios motivos como pueden ser la forma
y distribucin de tamao de las partculas, la distribucin no
uniforme del flujo en la centrifuga y la interaccin entre partculas
durante la sedimentacin. Los ensayos experimentales deben
realizarse teniendo en cuenta todos estos factores.
3. DISPERSIN DE CLULAS
El proceso de recuperacin del producto de los caldos de
fermentacin empieza generalmente con la separacin de las
clulas por filtracin y centrifugacin. La siguiente etapa depende
de la localizacin del producto deseado. Para sustancias como el
etanol, el acido ctrico y los antibiticos que son excretados por las
clulas, el producto se recupera del caldo libre de clulas mediante
operaciones bsicas que se describiran posteriormente en este
captulo. La biomasa separada del lquido se descarga o se vende
como subproducto.
Para productos, como enzimas y protenas recombinantes, que
permanecen en la biomasa debe realizarse la dispersin de las
clulas para que se desprenda el material deseado. Existen
diferentes mtodos para lograr la dispersin de las clulas. Las
opciones mecnicas incluyen la molienda con abrasivos, la
agitacin a elevada velocidad, el bombeo a alta presin y los
ultrasonidos. Tambin pueden aplicarse mtodos no mecnicos
como el choque osmtico, la congelacin y descongelacin, la

digestin enzimtica de las paredes de las clulas y el tratamiento

con disolventes y detergentes.
Una tcnica muy utilizada para la dispersin de las clulas es la
homogenizacin a alta presin. Las fuerzas de cizalla generadas en
este tratamiento son suficientemente altas como para dispersar
completamente muchos tipos de clulas. Mantn-Gaulin. Como se
muestra en la figura 10.8, esta bomba de alta presin incorpora
una vlvula ajustable con una restriccin a travs de la cual las
clulas son forzadas a pasar a presiones hasta de 550 atm. El
homogeneizador es de aplicacin general para todo tipo de
clulas, aunque con organismos altamente filamentosos pueden
producirse el taponamiento de vlvula. La siguiente ecuacin
relaciona la dispersin de las clulas con las condiciones de
operacin en el homogeneizador Mantn- Gaulin.
ln

Rm
=kN p
Rm R

En esta ecuacin Rm es la cantidad mxima de protenas

disponibles para la separacin, R la cantidad de protena obtenida
despus de N pasos a travs del homogenizador, k una constante
de velocidad que depende de la temperatura y p la presin de
operacin. El exponente es una medida de la resistencia de las
clulas a la dispersin. Para la levadura saccharomyces cerevisiae
se ha determinado un valor de
de 2.9. Sin embargo, el
exponente para un determinado organismo depende de las
condiciones de crecimiento La fuerte dependencia existente entre
el desprendimiento de la protena y la presin sugieren que es
recomendable la operacin a elevadas presiones. De esta manera
puede lograse la dispersin completa en un simple paso si la
presin es suficientemente alta. Es conveniente reducir al mnimo
el nmero de pasos a travs del homogeneizador, ya que si se
realizan numerosos pasos se producen desechos celulares finos
que causan problemas en etapas posteriores de clarificacin.
La separacin de protenas depende fuertemente de la
temperatura. La recuperacin de protenas aumenta a elevadas
temperaturas, pudiendo alcanzarse incluso los 50 C. Sin embargo,
es recomendable el enfriamiento a 0-4 C durante la operacin del
homogeneizador para minimizar la desnaturalizacin de la

protena. Los procedimientos necesarios para el cambio de escala

de los homogeneizadores no estn suficientemente desarrollados.
Mtodos que se comportan relativamente bien en el laboratorio
pueden dar resultados variables cuando se utilizan a gran escala.
4. CONCEPTO DE ETAPA IDEAL
Hasta ahora se haban considerado nicamente las etapas iniciales
del proceso de recuperacin del producto: aislamiento y dispersin
de las clulas. Un grupo importante de operaciones bsicas
utilizadas para la separacin primaria de productos de
fermentacin se basa en la transferencia de materia para alcanzar
la separacin de componentes en diferentes fases. El equipo para
estas separaciones consiste a veces en una serie de etapas en las
que las fases se ponen en contacto con el fin de que el material
pueda transferirse entre ellas. Incluso si el equipo no est
construido en etapas separadas fsicamente, la transferencia de
materia puede considerarse que ocurre en etapas. La efectividad
de cada etapa depende de muchos factores incluyendo el diseo
del equipo y las propiedades fsicas de las fases y las relaciones de
equilibrio.
Considrese el dispositivo simple de mezclador- sedimentado de
la figura 10.9 para la extraccin del componente A de una fase
liquida a otra. En el captulo 9 se han descrito los principios de
transferencia de materia aplicadas a la extraccin lquido- lquido.
Las operaciones bsicas para la extraccin se mostraran
posteriormente en este apartado. Aqu se utilizara el mezclador
sedimentador para explicar el concepto general de etapas ideales.
Dos lquidos inmiscibles entran al recipiente de mezcla con unos
caudales volumtricos Lt1 Y Lt2. Estas corrientes A se transfiere de
una fase a la otra. La mezclan vigorosamente y A se transfiere de
una fase a la otra. La mezcla pasa entonces a un sedimentador
donde se produce la separacin entre fases debido al efecto de la
gravedad. El caudal del lquido ligero que sale del separador es L o1
y el lquido pesado L02. Las concentraciones de A en estas
corrientes son CA01 y CA02, respectivamente.
La operacin del mezclador sedimentador se basa en que el
lquido que entra no se encuentra en equilibrio en lo que respecta
a la concentracin de A : es decir C Ai1y CAi2 no son ecuaciones en
equilibrio. Esto significa que existe una fuerza impulsora en el

mezclador para cambiar la concentracin a medida que A se

transfiere de un liquido a otro. Dependiendo de la capacidad del
mezclador para promover la transferencia de materia entre los
lquidos y de la efectividad del sedimentador para permitir la
separacin de las fases, cuando el lquido abandone el sistema se
encontrara en condiciones cercanas a las del equilibrio. Si el
mezclador sedimentador fuera una etapa ideal, las dos corrientes
de salida estaran en equilibrio y no se producira mas
transferencia de materia de A aunque se pusieran de nuevo en
contacto las dos fases , es decir CAi1y CAi2 serian concentraciones de
equilibrio y el dispositivo funcionaria con la mxima eficacia, en
realidad, las etapas no son ideales, de manera que el cambio de
concentracin que se alcanza en una etapa real es siempre inferior
al de la etapa ideal, siendo necesarias ms etapas para alcanzar la
separacin deseada. El rendimiento relativo de la etapa real en
comparacin con el de una etapa ideal se denomina eficacia de
una etapa.
El concepto de etapas ideales se utiliza en los clculos de diseo
de numerosas operaciones bsicas. Los elementos ms
importantes en el anlisis de estas operaciones son los balances
de materia, los balances de energa sin son aplicables y las
relaciones de equilibrio entre fase. La aplicacin de estos
principios s muestra en el siguiente apartado.
5. EXTRACCIN LIQUIDA EN DOS FASES ACUOSAS:
La extraccin liquida se utiliza para aislar muchos productos
farmacuticos procedentes de fuentes animales o vegetales. En la
extraccin liquida de productos de fermentacin, los componentes
disueltos en el lquido se recuperan por transferencia a un
disolvente apropiado. Algunos ejemplos son la extraccin de
penicilina de un caldo acuoso mediante disolventes como el buril
acetato, el amil acetato o la metil isobutil cetona. Tambin se
aplican tcnica de extraccin mediante disolventes para la
recuperacin de esteroides, la purificacin de la vitamina B12
procedentes de fuentes microbianas y en el aislamiento de
alcaloides como la morfina y la codena de origen vegetal. El
equipo de extraccin mas simple es el embudo de separacin
utilizado para la recuperacin de productos a escala de laboratorio.
Los lquidos, que forman dos fases diferentes, son agitados junto

con el embudo de separacin de manera que el soluto diluido en

un disolvente se transfiere al otro disolvente para formar una
solucin ms concentrada. Posteriormente, se interrumpe la
agitacin de las dos fases de manera que la fase pesada se
deposita en el fondo del embudo. La fase que contiene el soluto en
forma concentrada se procesa posteriormente para purificar el
producto. Cualquiera que sea el aparato utilizado para la
extraccin, es importante que el contacto entre las dos fases
liquida sea el mximo posible, lo cual se favorece mediante una
buena agitacin y turbulencia que facilite la transferencia del
soluto.
La extraccin con disolventes orgnicos es una tcnica de
separacin muy utilizada en bioprocesado, especialmente en la
recuperacin de antibiticos. Sin embargo, los disolventes
orgnicos, son inviables para el aislamiento de protenas y otros
biopolimeros sensibles, para lo cual se han desarrollado nuevas
tcnicas. Los disolventes acuosos que forman dos fases diferentes
proporcionan condiciones favorables para la separacin de
protenas, fragmentos y rganos celulares, protegiendo su
actividad biolgica. Los sistemas acuosos de dos fases se
producen cuando determinados polmeros, o un polmero y una sal,
se disuelven juntos en agua por encima de determinadas
concentraciones. El liquido se distribuye entre las dos fases, cada
una de las cuales contiene 35 a 99% de agua, en la siguiente tabla
se muestran algunos componentes utilizados para formar sistemas
acuosos de dos fases, es decir en condiciones adecuadas, los
fragmentos de clulas se confinan en una fase mientras que las
protenas de inters se obtienen en la otra. Las separaciones en
dos fases acuosas son de especial inters para la extraccin de
enzimas y protenas recombinantes procedentes de los desechos
celulares producidos por la dispersin de clulas. Despus de la
distribucin, el producto se recupera de la fase en la que se ha
extrado mediante otras operaciones bsicas como la precipitacin
o la cristalizacin.
EJEMPLOS DE SISTEMAS ACUOSOS DE DOS FASES
Componente 1
Polietilenglicol

Componente 2
Dextrano
Alcohol de polivinilo

Polipropilenglicol

Ficoll
Metilcelulosa

Polivinilpirrolidona
Ficoll
Fosfato de potasio
Sulfato amnico
sulfato de magnesio
sulfato sdico
Alcohol de polivinilo
Polivinilpirrolidona
Dextrano
Metoxipolietinelglicol
Fosfato de potasio
Dextrano
Dextrano
Hidroxipropildextrano
Polivinilpirrolidona

La extensin de la distribucin entre fases depende de la relacin

de equilibrio del sistema. El coeficiente de reparto K se define
como:
K=

CA 0
C A1
Donde CA0 es la concentracin de equilibrio del componente A en
la fase superior y CA1 la concentracin de equilibrio de A en la
fase inferior. Si K> 1, el componente A se concentra en la fase
inferior. En muchos sistemas acuosos, K es constante en un amplio
intervalo de concentraciones lo que propicia que no varen las
propiedades moleculares de las fases. La distribucin se ve
afectada por el tamao, carga elctrica e hidrofobicidad de las
partculas o de las molculas de soluto.
La afinidad bioespecifica por uno de los polmeros puede jugar un
papel importante en algunos sistemas. La energa libre superficita
de los componentes de la fase y la composicin inica de los
lquidos son de capital importancia en la separacin, por lo que K
es directamente relacionado con ambos parmetros. La
distribucin se ve tambin afectada por otros factores, algunas
veces independientes, que hacen imposible predecir los
coeficientes de reparto a partir de las propiedades moleculares,

para la extraccin de enzimas en una etapa, se necesitan

normalmente de reparto > 3.
Incluso cuando el coeficiente de reparto es bajo, puede alcanzar
una buena recuperacin del producto o rendimiento mediante la
utilizacin de grandes volmenes de la base preferida por el
soluto. El rendimiento de A en la fase superior Y0, se define como:

Y 0=

V 0 CA 0
V O C A0
=
V O C A 0 V 0 C A 0 +V 1 C A 1

Donde V0 es el volumen de la fase superior y V 1 el volumen de la

fase inferior, V0 el volumen inicial de la solucin que contiene el
producto y CA0 la concentracin inicial del producto en el liquido.
En la fase inferior, el rendimiento Y1 se define como:

Y 1=

V 1C A1
V 1 CA 1
=
V O C A 0 V 0 C A 0+ V 1 C A 1

El rendimiento mximo posible para una etapa de extraccin ideal

puede calcularse mediante las ecuaciones antes mencionadas y el
coeficiente de reparto de equilibrio, K, dividiendo tanto el
numerador como el denominador de la ecuacin de Y0 por CAO y
reconociendo que en equilibrio

C A1 1
=
C A0 K

Y 0=

V0
V
V 0+ 1
K

Otro parmetro utilizado para caracterizar la distribucin en dos fases es

el factor de concentracin o factor de purificacin, definido como la
relacin entre la concentracin de producto en la fase preferida y la
concentracin inicial del producto:
=

C A1
C AO

La separacin de las fases es algunas veces un problema debido a la

baja tensin interfacial existente entre las fases acuosas. En muchos
casos, la recuperacin y concentracin del producto, pueden alcanzarse
en una sola etapa de extraccin, con rendimientos superiores al 90 %.