Biolixiviación en Bauxita Ula

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE BIOLOGA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGA DE MICROORGANISMOS SIXTO
DAVID ROJO
BIOLIXIVIACIN DE ALUMINIO Y HIERRO PRESENTE

EN BAUXITA GIBBSTICA USANDO CEPAS
HETERTROFAS INDGENAS
Trabajo Especial de Grado presentado por el

Br. David Rolando Quintero Rodrguez como
requisito parcial para optar al Ttulo de
Licenciado en Biologa
Tutor: Msc. Balmore Guerrero
Mrida, Octubre de 2003

DAVID ROJO

Br. David Rolando Quintero Rodrguez
Merida, Octublre de 2003

DAVID ROJO

Br. David Rolando Quintero Rodrguez
Merida, Octublre de 2003
RESUMEN
La biolixiviacin microbiana de metales a partir de minerales es un

proceso de reciente estudio y potencial uso en la extraccin metales
de menas o concentrados minerales de bajo tenor, diversos
microorganismos han sido empleados en experiencias de
biolixiviacin, especialmente con minerales sulfurosos y preciosos,
resaltando el uso de microorganismos indgenas en dichos
procesos. En Venezuela, el Yacimiento de Bauxita Los Pijiguaos,
presenta limitantes en su explotacin relacionadas al bajo contenido
en alumina, que favorecen el planteamiento del uso de mtodos
alternativos como la biolixiviacin que permitan la recuperacin de
aluminio o la beneficiacin del mineral por remocin de impurezas;
en este sentido se aislaron y obtuvieron nueve cepas indgenas
provenientes del yacimiento, que fueron adaptadas y cultivadas en
condiciones selectivas que determinaron el uso de la cepa
denominada N en los ensayos de biolixiviacin, demostrndose
posteriormente su capacidad de biolixiviar hierro y aluminio, en
condiciones variables de concentracin de glucosa y mineral en el
medio de cultivo. Los tratamientos de 60 gGlucosa/L -150 gBauxita/L y 40
gGlucosa/L -100 gBauxita/L mostraron mayores niveles de biolixiviacin,
recuperacin, productividad y rendimiento para hierro y aluminio,
observndose patrones similares de consumo de glucosa y
variacin de pH, relacionados al incremento de los niveles de
biolixiviacin, que descienden hacia el final del cultivo y son
concordantes con las tendencias de variacin de pH, [Al3+] y [Fe3+]
de las experiencias de lixiviacin qumica. Se observ mayor
selectividad en la solubilizacin de aluminio de los agentes
quelantes o cidos orgnicos producidos. Los resultados obtenidos
confirman la potencialidad de uso de microorganismos indgenas en
el proceso de biolixiviacin en bauxita, como mtodo alternativo de
tratamiento, por lo que se sugiere la optimizacin de los medios,
condiciones y sistemas de cultivo para la cepa seleccionada.
Bioleaching of Aluminum and Iron from Gibbsitic

Bauxite using indigenous heterotrophs strains
ABSTRACT
The microbial bioleaching of metals from minerals is a process of
recent study and potential use in the metal extraction of menas and
mineral concentrated of low tenor, diverse microorganisms have
been used in biolixiviacin experiences, specially with sulfurous and
precious minerals, emphasizing the use of indigenous
microorganisms in these processes. In Venezuela, the Los
Pijiguaos Bauxite Deposit, displays difficulties in his operation
related to low content of alumina, that favor the exposition of the use
of alternative methods like the bioleaching which they allow to the
aluminum recovery or the benefitiation of the mineral by removal of
impurities; in this sense they isolated nine indigenous
microorganisms originating of the deposit were isolated and
obtained, that were adapted and cultived in selective conditions that
determined the use of denominated strain N in the bioleaching tests
later, demonstrating themselves their capacity to bioleaching iron
and aluminum, in variable conditions of concentration of glucose and
mineral in culture medium. The treatments of 60 gGlucosa/L -150
gBauxita/L and 40 gGlucosa/L -100 gBauxita/L showed to greater levels of
bioleaching, recovery, productivity and yield for iron and aluminum,
being observed similar patterns of glucose consumption and
variation of pH, related to the increase of the biolixiviacin levels,
that descend towards the end of the culture and are concordant with
the tendencies of variation of pH, [Al3+] and [Fe3+] of the chemical
leaching experiences. Greater selectivity in the solubilizacin of
aluminum of produced organic the quelantes or acid agents was
observed. The obtained results confirm the potentiality of use of
indigenous microorganisms in the process of bioleaching in bauxite,
like alternative method of treatment, reason why it suggests the
optimization of mediums, conditions and systems of culture for the
selected strain.
NDICE GENERAL
Pg.
1. INTRODUCCIN...
2. HIPTESIS.
34
3. OBJETIVOS...
35
4. METODOLOGA
36
4.1.
AISLAMIENTO
CARACTERIZACIN
PRELIMINAR
DE
CEPAS
QUIMIOLITOTROFAS Y HETERTROFAS INDGENAS
36
4.1.1. Muestras de Bauxita, Suelo y Lodos Rojos de las Lagunas de Drenaje de

Mina...
36
4.1.1.1.
Localizacin del rea de Muestreo............
36
4.1.1.2.
Recoleccin y Almacenamiento de Muestras
37
4.1.2. Medio de Cultivo de Enriquecimiento.............
38
4.1.2.1.
Composicin y Preparacin..
38
4.1.2.2.
Condiciones de Cultivo y Ciclos de Cultivo de Enriquecimiento.
39
4.1.3. Medio de Aislamiento de Cepas Quimiolitotrofas y Hetertrofas Indgenas..
40
4.1.3.1.
Composicin y Preparacin..
40
4.1.3.2.
Condiciones de Cultivo y Aislamiento de Cepas...
40
4.1.4. Seleccin de Cepas y Caracterizacin Preliminar.
41
4.1.4.1.
Caracterizacin Macromorfolgica..
41
4.1.5. Adaptacin de las Cepas Seleccionadas
42
4.1.5.1.
Ciclo Primario de Adaptacin
42
4.1.5.1.1. Medio y Condiciones de Cultivo.
43
4.1.5.2.
Ciclo Secundario de Adaptacin..
44
44
4.1.5.3.
4.2.
Ciclo Terciario de Adaptacin...
44
45
SELECCIN DE CEPAS EN BASE A LOS NIVELES DE BIOLIXIVIACIN

DE
HIERRO
EN
MEDIO
COMPLEMENTADO
CON
BAUXITA
GIBBSTICA...
4.2.1. Tratamiento de la Muestra.
10
46
46
4.2.2. Preparacin
de
la
Curva
de
Calibracin
para
la
determinacin
Espectrofotomtrica de Hierro Lixiviado con Tiocianato...
47
4.2.3. Determinacin Espectrofotomtrica de la Concentracin de Hierro Lixiviado

con Tiocianato..
47
4.2.4. Seleccin de las Cepas a emplear en los Ensayos de Biolixiviacin.
48
4.3.
BIOLIXIVIACIN DE ALUMINIO Y HIERRO PRESENTES EN BAUXITA

GIBBSTICA...
49
4.3.1. Obtencin del inculo de la cepa tipo seleccionada..
49
4.3.2. Experimento Multifactorial..
50
4.3.2.1.
Medios y Condiciones de Cultivo.
51
4.3.3. Controles de Lixiviacin Qumica con cidos Inorgnicos y Orgnicos .
52
4.3.4. Determinaciones Analticas de los Niveles de Biolixiviacin..
54
4.3.4.1.
Tratamiento de la Muestra..
4.3.4.2.
Determinacin Espectrofotomtrica de la Concentracin de Hierro con

1,10- Fenantrolina .
4.3.4.3.
54
Determinacin Espectrofotomtrica de la Concentracin de Aluminio con

Eriocromocianina R .
4.3.4.4.
54
56
Determinacin de la Concentracin de Glucosa Residual mediante

Reaccin Acoplada Glucosa Oxidasa Peroxidasa..
58
4.3.5. Determinacin de Parmetros Cinticos del Proceso de Biolixiviacin...
59
5. RESULTADOS.
61
6. DISCUSIONES.
96
7. CONCLUSIONES
105
8. RECOMENDACIONES...
107
9. BIBLIOGRAFA
108
11
INDICE DE TABLAS
Pg.
Tabla 1: Composicin de medios de cultivo base empleados en experimentos de
biolixiviacin..
10
Tabla 2: : Patentes de algunos procesos biohidrometalrgicos en Yacimientos.
24
Tabla 3: Composicin qumica del Medio 9K.
38
Tabla 4 : Experimento Multifactorial de Biolixiviacin de Aluminio y Hierro presente en

bauxita, donde Tx corresponde al tratamiento.
Tabla 5 : Experimento Multifactorial de lixiviacin de Aluminio
51
y Hierro presente en
bauxita, usando cidos orgnicos e inorgnicos para pH inicial de 2,2, donde Tx

corresponde al tratamiento.
53
Tabla 6 : Composicin qumica y mineralgica de la bauxita Los Pijiguaos de tamao de

partcula 250 m...
62
Tabla 7 : Composicin de la bauxita Los Pijiguaos correspondiente, calculada en iones
63
Tabla 8: Caractersticas fenotpicas relevantes de los microorganismos aislados

empleados en los ensayos de biolixiviacin.
65
Tabla 9: Porcentajes mximos de extraccin de aluminio y hierro para los distintos

tratamientos de lixiviacin qumica usando cidos comerciales...
77
Tabla 10: Datos experimentales de los tratamientos de Biolixiviacin de Aluminio y Hierro

en cultivos con agitacin de la Cepa Tipo N, variando la densidad de pulpa para
concentracin inicial de glucosa 40 g/L
12
79
Tabla 11: Datos experimentales de los tratamientos de Biolixiviacin de Aluminio y Hierro

en cultivos con agitacin de la Cepa Tipo N, variando la densidad de pulpa para
concentracin inicial de glucosa 60 g/L
80
Tabla 12: Porcentajes mximos de recuperacin de aluminio y hierro para los distintos
tratamientos de biolixiviacin usando la Cepa N.
86
Tabla 13 : Resumen de datos y parmetros cinticos de los distintos tratamientos de
biolixiviacin de aluminio y hierro presentes en bauxita gibbstica en agitacin, usando la
Cepa N para un Xo = 5,28 gps/L
90
13
INDICE DE FIGURAS
Pg.
Figura 1: Esquema general del proceso de biolixiviacin ..
Figura 2 : Representacin esquemtica de un percolador Air-Lift
20
Figura 3: Diagrama de flujo del proceso de Lixiviacin en Vertederos e In Situ...
25
Figura 4: Curva de Calibracin de Absorbancia (Abs.) a 510 nm contra concentracin de hierro

(Fe3+) (mg/L), determinado espectrofotomtricamente con tiocianato
67
Figura 5: Extraccin de Hierro (Fe3+) a partir de Bauxita Gibbstica de tamao de partcula 250
m en ensayos preliminares de Biolixiviacin en presencia de las distintas cepas tipo
seleccionadas durante el Ciclo Terciario de Adaptacin, para condiciones de cultivo esttico y
con agitacin, donde Ct : Control sin inocular.
70
Figura 6: Curva de Calibracin de Absorbancia (Abs.) a 510 nm contra concentracin de glucosa

(mg/ml), determinado espectrofotomtricamente usando el sistema acoplado de reaccin
enzimtica Glucosa Oxidasa Peroxidasa (GOD-POD)..
72
Figura 7: Curva de Calibracin de Absorbancia (Abs.) a 510 nm contra concentracin de hierro

(Fe2+) (mg/L), determinado espectrofotomtricamente con 1,10-fenantrolina...
73
Figura 8: Curva de Calibracin de Absorbancia (Abs.) a 535 nm contra concentracin de

aluminio (Al3+) (mg/L), determinado espectrofotomtricamente con Eriocromocianina R...
73
Figura 9: Variacin del pH como una funcin del tipo de cido y la densidad de pulpa en los
Controles de Lixiviacin Qumica, para un pH inicial de 2,2.
74
Figura 10: Lixiviacin de Hierro en Bauxita Gibbstica como una funcin del tipo de cido y la
densidad de pulpa para un pH inicial de 2,2...
14
75
Figura 11: Lixiviacin Qumica de Aluminio en Bauxita Gibbstica como una funcin del tipo de
cido y la densidad de pulpa para pH inicial de 2,2...
76
Figura 12: Variacin del pH de los tratamientos de Biolixiviacin de la Cepa Tipo N, como una
funcin de la densidad de pulpa y la concentracin de glucosa, para pH inicial de 6,5..
81
Figura 13: Consumo de Glucosa en los tratamientos de Biolixiviacin de la Cepa Tipo N, como
una funcin de la densidad de pulpa y la concentracin inicial de glucosa...
82
Figura 14: Biolixiviacin de Aluminio en los tratamientos con la Cepa Tipo N, como una funcin
de la densidad de pulpa y la concentracin inicial de glucosa.
84
Figura 15: Biolixiviacin de Hierro en los tratamientos con la Cepa Tipo N, como una funcin de
la densidad de pulpa y la concentracin inicial de glucosa..
85
Figura 16: Relacin Productividad de Al3+ contra Tasa de Dilucin (1/da) para los diferentes
tratamientos de Biolixiviacin con agitacin de la Cepa Tipo N. El tamao de la circunferencia
est referido a la concentracin mxima de aluminio lixiviado
Figura 17: Relacin Productividad de Fe
3+
89
contra Tasa de Dilucin (1/da) para los diferentes
tratamientos de Biolixiviacin con agitacin de la Cepa Tipo N. El tamao de la circunferencia

est referido a la concentracin mxima de aluminio lixiviado
91
Figura 18: Biolixiviacin de Aluminio respecto al consumo de glucosa y pH del medio para el
tratamiento de 60 g/L Glucosa y 15% DP con agitacin de la Cepa Tipo N..
92
Figura 19: Biolixiviacin de Hierro respecto al consumo de glucosa y pH del medio para el
93
Figura 20: Biolixiviacin de Aluminio respecto al consumo de glucosa y pH del medio para el
94
Figura 21: Biolixiviacin de Hierro respecto al consumo de glucosa y pH del medio para el
15
95
I.
1.1.
INTRODUCCIN
Biominera y Biolixiviacin
En la actualidad es conocida la participacin significativa de mltiples

microorganismos en los procesos de extraccin de metales de inters
econmico a partir de yacimientos o concentrados minerales de bajo tenor, as
como sus potenciales aplicaciones (Lundgren, 1980; Bosecker, 1997)
posibles caractersticas ambientalmente benignas (Modak, 1999), no obstante,

es hasta hace cerca de cincuenta aos que se conoce que son bacterias y
hongos los grandes responsables del enriquecimiento de metales en aguas de
yacimientos y minas (Bosecker, 1997). Tales caractersticas y ventajas estn
implcitas en una nueva era de la Minera conocida como Biominera (Moffa,
1994), que contempla la aplicacin de distintas tecnologas y procesos
hidrometalrgicos a travs del uso de microorganismos para la extraccin o
disolucin de metales de inters econmico a partir de minerales o slidos, con
la finalidad de recuperar los elementos deseados (Brierley,1978). El creciente
inters en dichas tecnologas se basa fundamentalmente en la escasa
contaminacin de aguas y tierras producto de la aplicacin tentativa de las
mismas, lo que le da el carcter de Tecnologa Limpia, junto a sus
comparativamente bajos, requerimientos de costos y energa (Krebs, 1997),
ante la necesidad de incrementar el aprovechamiento de la explotacin minera
16
de los yacimientos, concentrados minerales de bajo tenor e incluso de diversos

tipos de desechos industriales o mineros, debido a que estos no pueden ser
econmicamente rentables empleando las operaciones mineras, ni los mtodos
de procesamiento convencionales (Vachon, 1994; Vassan, 2001).
Los
procesos de solubilizacin y extraccin de elementos recuperables a partir de

minerales o slidos mediados por la accin de microorganismos (bacterias u
hongos) son conocidos como Biolixiviacin (Krebs, 1997, Bosecker, 1997) y
ocurren de manera natural siempre que se den las condiciones ambientales
favorables para el crecimiento de los microorganismos en los ecosistemas
subsuperficiales. Asimismo, si la recuperacin de los metales de valor puede
ser usada para el enriquecimiento del mineral por remocin de impurezas o
constituyentes indeseables, a travs de la accin directa o indirecta de
microorganismos se conoce como Biobeneficiacin (Bosecker, 1997, Modak,
2000, Vassan, 2001).
Alibhai (1993) sugiere aspectos fundamentales a definir para plantear la

aplicacin del proceso de biolixiviacin, como son: (i) conocer las relaciones
existentes entre la mineraloga y las caractersticas de lixiviacin; (ii) capacidad
de lixiviacin del mineral con cidos quelantes comercialmente disponibles
respecto a los producidos metablicamente por microorganismos; (iii)
caractersticas de lixiviacin en Erlenmeyers o fiolas y columnas usando cidos
sulfrico y ctrico como control; (iv) aislamiento de microorganismos con
caractersticas deseables para ser empleadas en procesos de biolixiviacin
17
(ejm. Tolerancia a cidos, tolerancia a metales y alta produccin de cido); (v)

comparacin de la lixiviacin con cidos biolgicamente producidos respecto a
los cidos puros o sus mezclas disponibles comercialmente y (vi) comparacin
de la lixiviacin con cidos producidos in situ , por crecimiento de el organismo
en presencia del mineral (Ver Fig. 1).
18
1.2.
Microorganismos involucrados en procesos de Biolixiviacin
Una gran variedad de microorganismos son conocidos por participar en

procesos de biolixiviacin de metales a partir de mltiples yacimientos
minerales y desechos de mina, tales microorganismos se caracterizan
fundamentalmente
por
tolerar
condiciones
ambientales
particularmente
extremas que involucran altas concentraciones de metales, anoxia, tensiones

mecnicas, acidez e incluso temperaturas elevadas, entre otras. Adicionalmente
los procesos de biolixiviacin determinan la existencia de complejas relaciones
interespecficas
incluso
posibles
sucesiones
de
microorganismos,
relacionadas con la composicin del mineral y distintas variables ambientales

(Lundgren, 1980; Torma, 1982).
En estos procesos la contribucin de la actividad microbiana en la

degradacin de minerales sulfurosos ha sido inequvocamente comprobada
(Lundgren, 1980) y es hacia ese tipo de minerales que se enfoc inicialmente la
investigacin en el campo de la biolixiviacin (Brierley, 1978, Torma, 1982,
Bosecker, 1997, Krebs, 1997),
no obstante en los ltimos aos se ha
intensificado el estudio en torno a las potencialidades de recuperacin de

metales de inters a partir de yacimientos no sulfurosos.
19
En el caso de xidos, carbonatos y silicatos esta limitado el uso de

tiobacilos en experiencias de biolixiviacin. Para tales casos, la investigacin se
lleva a cabo usando bacterias hetertrofas y hongos (Bosecker, 1997)
1.2.1.
Microorganismos Quimiolitotrofos
La biolixiviacin de minerales sulfurosos depende predominantemente de

la actividad de bacterias quimiolitotrofas, las cuales usan un substrato inorgnico
como fuente de energa y dixido de carbono para crecer, dichas bacterias
pueden ser facultativas u obligadas (Torma, 1982, Bosecker, 1997).
La bacteria ms activa en los procesos de biolixiviacin pertenece al

gnero Thiobacillus, especficamente Thiobacillus ferrooxidans de la cual se
conocen varios aspectos bsicos y aplicados, relacionados a su fisiologa,
bioenergtica, crecimiento y cintica de biolixiviacin de diversos metales
(Silverman, 1959; Manning, 1975; LaCombe, 1990;
1992; Baldi, 1992;
Okereke, 1991; Pronk,
Nagpal, 1996; Modak, 1999). Muchos tiobacilos son
especies quimiolitotrofas y su energa deriva de la oxidacin de compuestos de

azufre reducidos o parcialmente reducidos, incluidos sulfuros, azufre elemental
y tiosulfato, obtenindose como producto final sulfato (Silverman, 1959).
Asimismo
destacan
otras
especies
como
Thiobacillus
thiooxidans,
Metallogenium spp., Gallionella spp., Leptospirillum ferrooxidans., Acidianus
20
brierley, Sulfolobus spp. y Sulfobacilus estas dos ltimas termoflicas (Brierley,

1978).
1.2.2.
Microorganismos Hetertrofos
Es bien conocida la participacin de microorganismos hetertrofos en la

degradacin de rocas y minerales (Torma, 1982), de esta manera mltiples
investigaciones han determinado que la solubilizacin y extraccin de metales
como oro, cobre, nquel, hierro, manganeso, aluminio, titanio, cromo y uranio,
puede ser mediada por la accin de bacterias hetertrofas y hongos (Bosecker,
1997), que requieren de suplementos orgnicos para crecer y suplir la energa
para contribuir con el proceso de biolixiviacin de metales, a travs de tres vas
fundamentalmente (i) las reacciones redox, (ii) la formacin de cidos orgnicos
e inorgnicos o (iii) la excrecin de agentes acomplejantes o quelantes (Krebs,
1997).
Destacando el hecho que los microoganismos hetertrofos no obtienen

beneficio del proceso de biolixiviacin (Bosecker, 1997), resaltan ciertas
especies de bacterias involucradas en el mismo como Paenibacillus polymyxa,
Bacillus spp., Pseudomonas fluorecens, Serratia marcencence, Agrobacterium
tumefaciens y los gneros de hongos Penicillium y Aspergillus como los ms
importantes (Groudev, 1987; Alibhai, 1993).
21
Debido a que la lixiviacin microbiana de yacimientos no sulfurosos,

parece factible y puede ser empleada en la extraccin de metales en minerales
e incluso desechos de mina, usando organismos hetertrofos, se requiere por
tanto de una fuente de carbono, siendo fundamental enfocar las distintas
alternativas de la misma para propsitos tcnicos, de manera que sea atractiva
econmicamente la aplicacin de un proceso de biolixiviacin (Bosecker, 1997)
1.2.3.
Microorganismos Indgenas
La bsqueda de microorganismos no descritos previamente y capaces de

lixiviar metales a partir de minerales o concentrados minerales lidera los
estudios en biotecnologa minera (Paul, 1988), sobre la base de encontrar
caractersticas deseables en organismos indgenas adaptados a las condiciones
fisicoqumicas y ambientales presentes en el yacimiento o concentrado mineral
lo cual puede ser ms recomendable para los estudios de biolixiviacin y
biobeneficacin (AlibHai, 1993, Vachon, 1994, Natarajan, 1997).
22
1.3.
Factores que afectan el Proceso de Biolixiviacin
La efectividad del proceso de biolixiviacin depende fundamentalmente de la

eficiencia del microorganismo, as como de la composicin qumica y
mineralgica del yacimiento a ser lixiviado (Bosecker, 1997). De esta manera
los mejores rendimientos de extraccin de metales, correspondern a las
condiciones ptimas de crecimiento del microorganismo y caractersticas
fisicoqumicas del mineral .
1.3.1.
Nutrientes
Los microorganismos usados para la extraccin de metales a partir de

yacimientos sulfurosos son generalmente bacterias quimiolitoauttrofas y por lo
tanto solo son requeridos compuestos inorgnicos para su crecimiento, tales
como hierro y compuestos sulfurosos. En general los nutrientes minerales son
obtenidos del ambiente y del material a ser lixiviado, no obstante para obtener
un ptimo crecimiento, estos medios de cultivo deben ser suplementados con
Amonio y sales de fosfato, calcio, potasio, sodio y magnesio (Silverman, 1959,
Brierley, 1978), otros elementos traza son incorporados usualmente por
impurezas presentes en los constituyentes del medio.
23
En el caso de microorganismos hetertrofos es necesaria la adicin de

una fuente de carbono generalmente glucosa o sacarosa, aunque son
sugeridas para una escala industrial tentativa fuentes de carbono complejas
como celulosa o melaza (Vachon, 1994), usndose adems como fuente de
nitrgeno compleja extracto de levadura (Bromfield, 1954) o sulfato de amonio,
as como las sales bsicas (Ver Tabla 1 ), no obstante las modificaciones en la
composicin de dichos medios son frecuentes a fin de adaptarlos a las
condiciones experimentales, caractersticas del microorganismo y mineral a
lixiviar.
Desde un punto de vista econmico es deseable identificar los

componentes esenciales necesarios para el crecimiento del microorganismo en
la solucin de lixiviacin a fin de formular un medio prctico de lixiviacin
(Lundgren, 1980) a ser usado a escalas mayores o de campo.
Por alteracin de los parmetros tales como el balance Nitrgeno/Fsforo

del medio y un ptimo pH, ciertas especies de hongos pueden ser usadas para
producir un amplio rango de cidos orgnicos, para propsitos de biolixiviacin,
asimismo la presencia o ausencia de ciertos iones metlicos como el
manganeso, pueden influenciar fuertemente la produccin de cido ctrico,
generando una alta tasa de flujo glicoltico, que provee los precursores para el
citrato, piruvato y oxalacetato (White, 1997).
24
Tabla 1: Composicin de medios de cultivo base empleados en experimentos

de biolixiviacin (Natajaran, 1997).
Composicin del Medio de Cultivo (g/L) de agua destilada)
Medio
Composicin (g/L)
Shu
(Smith y Pateman, 1977)
Glucosa
(140.0)
KH2PO4
(1.5)
Czapek Dox
(Raper y Fennell, 1965)
Sacarosa NaNO3
(5.5)
(30.0)
Medio 9K
(Silverman y Lundgren, 1959)
FeSO47H2O
(44.8)
Sabauroud
(Bencke, 1958)
Glucosa
(20.0)
Peptona
(1.5)
Medio para produccin de

Acido Oxlico
(Smith y Paleman, 1977)
Sacarosa
(100.0)
NaNO3
(5.5)
Bromfield
(Bromfield, 1954)
Sacarosa
(100.0)
Medio Nutritivo
(Raper y Fennel, 1965)
Peptona
(10.0)
NH4NO3/(NH4)2SO4
(0.87)
(NH4)2SO4
(3.0)
MgSO47H2O
(0.25)
7,0
KH2PO4
(1.0)
KCl
(0.5)
MgSO4
(0.5)
FeSO4
(0.01)
KCl
(0.1)
KH2PO4
(0.5)
MgSO4
(0.5)
Ca(NO3)2 2,2
(0.01)
Ext. Levadura
(0.87)
KH2PO4
(1.0)
KH2PO4 (NH4)2SO4
(0.5)
(1.0)
Ext. Carne
(5.0)
pH
7,0
NaCl
(0.25)
7,2
MgSO4
(0.5)
FeSO4 ZnSO4 7,0-8,0

(0.025) (0.05)
MgSO47H2O
(0.2)
CaCO3
(5.0)
Ext. Levadura
(0.15)
NaCl
(5.0)
7,0
7,0
1.3.2. pH
El pH adecuado es una condicin necesaria para el crecimiento del

microorganismo y su variacin es decisiva para la solubilizacin de ciertos
metales presentes en el mineral, siendo determinante para el rendimiento del
proceso de biolixiviacin. La bacteria T. ferrooxidans tiene un rango ptimo de
crecimiento en condiciones altamente acdicas con valores de pH de 2,0 2,5
25
favorable para la oxidacin de hierro ferroso y sulfuros (Bosecker, 1997). Para

valores de pH cercanos a 2,0 ocurre una considerable inhibicin de T.
ferrooxidans,, pero T. ferrooxidans puede ser adaptado para valores de pH
menores por adicin de cido (Touniven, 1973).
Bacterias hetertrofas y
hongos pueden ser usadas con valores de pH alcalinos, lo cual constituye un

ventaja debido a que se favorece la formacin de complejos entre metales y
metabolitos, as como la precipitacin de metales en condiciones alcalinas
(Schinner, 1989).
1.3.3. Temperatura
Todos los procesos basados en la transformacin de minerales por

microorganismos estn confinados a un rango limitado de temperaturas. Para
bajas temperaturas un descenso en la extraccin de metales puede ocurrir
(Ahonen, 1989), pero su incremento puede resultar no solamente en el usual
aumento de la reactividad qumica, sino tambin, dentro de ciertos lmites en la
aceleracin del metabolismo microbiano. La lixiviacin ptima de metales en
yacimientos sulfurosos ha sido establecida entre 25 45 C, situndose el lmite
de la oxidacin biolgica en 55C (Lundgren, 1980). Para temperaturas
superiores (50 80C) pueden ser usadas bacterias termoflicas para
propsitos de lixiviacin (Bosecker, 1997).
26
1.3.4. Flujo de O2 y CO2
Un adecuado flujo de oxgeno es un requisito fundamental para el

crecimiento del microorganismo, controlando por tanto la extraccin microbiana
de metales (Brierley, 1978). En el laboratorio esto puede ser provisto por
aireacin o agitacin, pero en una escala industrial el suministro de oxgeno
causa dificultades (Bosecker, 1997).
Para
el
crecimiento
de
microorganismos
quimiolitoauttrofos,
la
solubilidad del CO2 es baja en condiciones cidas, por lo tanto puede ser un
factor limitante en el crecimiento, sin embargo en condiciones naturales la
ganga asociada al mineral es comnmente rica en carbonatos y conjuntamente
al crecimiento de hetertrofos pueden proveer el CO2 necesario (Brierley,
1978).
1.3.4. Tamao de Partcula y Mineral Substrato
La composicin mineralgica del material a lixiviar es de fundamental

importancia, para determinar las condiciones experimentales de lixiviacin y el
microorganismo a emplear. La tasa de lixiviacin depende de la superficie total
del substrato, de esta manera grandes rendimientos y tasas de extraccin de
metales en minerales ocurren cuando el rea especfica de superficie del mismo
27
es incrementada por reduccin del tamao de partcula, lo cual involucra un alto

costo energtico. La reduccin del tamao incrementa la disponibilidad del
substrato, y en la prctica el grado de lixiviacin es proporcional al rea de
superficie de las partculas (Torma, 1982). La concentracin del substrato slido
es expresada como la densidad de pulpa o relacin slido:lquido. Las tasas de
extraccin pueden descender cuando la relacin slido:lquido es elevada
debido a la interferencia de los slidos con la transferencia de masa de
nutrientes, especialmente oxgeno y dixido de carbono al organismo (Torma,
1982).
1.3.6. Tolerancia a Metales
El proceso de biolixiviacin de minerales esta acompaado por el

incremento en la concentracin de metales en el medio o lixiviado. En general
estos organismos capaces de lixiviar tienen una elevada tolerancia a metales
pesados, en especial T. ferrooxidans, tolera concentraciones de 0,37 M Al, 0,15
M Zn, 0,17 M Co, 0,17 M Ni, 0,18 M Mg y 0,16 M Cu (Brierley, 1978). Asimismo
diferentes cepas de una misma especie pueden tener distinta sensibilidad,
siendo posible adaptar determinadas cepas a elevadas concentraciones de
metales o a substratos especficos, mediante el incremento gradual de las
concentraciones de metales o substrato (Bosecker, 1997). La tolerancia a
metales implica procesos de movilizacin de metales que puede ser llevado a
28
cabo por un amplio rango de microorganismos y el proceso incluye lixiviacin

autotrfica y heterotrfica, quelacin por metabolitos y siderforos y metilacin
la cual puede resultar en una volatilizacin y eventual contaminacin.
Similarmente
pueden
contribuir
la
inmovilizacin
por
absorcin
componentes celulares o exopolmeros, transporte o secuestro intracelular o

precipitacin como compuestos orgnicos e inorgnicos como oxalatos, sulfuros
o sulfatos (White, 1997).
Experimentalmente es sugerido someter a los microorganismos a un

proceso de adaptacin, mediante ensayos secuenciales con incrementos
progresivos en la concentracin de mineral o ciertos metales presentes en este
(Alibhai, 1993).
1.4.
Mecanismos de Biolixiviacin
Los metales pueden ser disueltos a partir de minerales insolubles

directamente por el metabolismo de microorganismos o indirectamente por los
productos de su metabolismo (Lundgren, 1980). Las transformaciones de
metales pueden ser divididas en dos grandes categoras. La Primera envuelve
la oxidacin o reduccin de formas inorgnicas, lo cual puede servir como
fuente de energa para el crecimiento microbiano, sin embargo la reduccin
29
envuelve al metal como aceptor de electrones, proveyendo adems otra fuente

de energa que est disponible en el ambiente. La segunda categora resulta en
la conversin de metales a formas orgnicas, o el proceso inverso, estas
reacciones son de importancia en la naturaleza para un gran nmero de reas,
que incluyen: (1) formacin de suelo, (2) extraccin de metales, (3) acidificacin
de aguas residuales de minas, (4) contaminacin de fuentes de agua y (5)
produccin de yacimientos metlicos durante el tiempo geolgico (Paul, 1988).
1.4.1. Mecanismo Directo
Algunos microorganismos son capaces del ataque directo oxidativo sobre

minerales
sulfurosos (Lundgren, 1980), mediante el establecimiento de un
ntimo contacto fsico entre la bacteria y la superficie del mineral, teniendo la va

de oxidacin a sulfato mltiples etapas catalizadas enzimticamente (Bosecker,
1997), no obstante los mecanismos de ataque e iniciacin de la solubilizacin
no son completamente entendidos. Obviamente la bacteria no ataca toda la
superficie del mineral, sino prefiere sitios especficos de imperfeccin en el
cristal, y la solubilizacin es debida a interacciones electroqumicas (Bennet,
1978, Lundgren, 1978). De esta manera el mecanismo de accin directa puede
ser generalizado con la siguiente expresin:
30
Microorganismo
MeS + 2O2
MeSO4
Donde Me: es el metal y S: azufre
Asimismo distintas publicaciones resaltan el posible efecto de la

interaccin entre la hifa fangal y la superficie del mineral, particularmente en
cuanto a disolucin de cuarcitas (Feldmann, 1997) y aluminosilicatos (Torma,
1982) y su impacto en los procesos de biolixiviacin y bioremediacin.
1.4.2. Mecanismo Indirecto
En este mecanismo el microorganismo no esta directamente envuelto en

el proceso de biolixiviacin (Vassan, 2001), debido a que no establece un
contacto fsico con la superficie del mineral, sin embargo genera un lixiviante
que moviliza los metales presentes en el mineral (Krebs, 1997).
En minerales sulfurosos Silverman y Ehrlich (1959) han discutido acerca

del rol del sulfato frrico y el oxgeno en la oxidacin de metales sulfurosos, ya
que el primero resalta como el principal agente involucrado en el ataque
indirecto de dichos minerales. Las reacciones generales que envuelven la
accin del hierro frrico son:
(aerbica)
MeS + 2Fe3+ + H2 + 2O2
Microorganismo
Me2+ + 2Fe2+ + SO4= +2H+
31
Microorganismo
(anaerbica)
Fe2(SO4)3 + FeS2
3FeSO4 + 2S
En la presencia de bacterias ferrooxidantes, el hierro ferroso producido

en estas reacciones puede ser oxidado a hierro frrico, establecindose por lo
tanto un proceso cclico. Dicho ataque oxidativo tiene dos etapas: (i) la
interaccin qumica del hierro frrico con el mineral sulfuroso y (ii) la
regeneracin de hierro frrico por la bacteria (Lundgren, 1980).
La biohidrometalurgia de los minerales no sulfurosos ha recibido

relativamente escasa atencin, comparativamente respecto a la biolixiviacin en
minerales sulfurosos por Tiobacilos, que dominan la literatura. Sin embargo,
existen mltiples ejemplos de sistemas mineral microorganismo en los cuales
la degradacin selectiva de los componentes del mineral, se llevan a cabo a
travs de la accin de productos metablicos (Vassan, 2001).
De esta manera existen hongos que pueden soportar amplios rangos de

pH y producir cidos orgnicos y quelantes capaces de solubilizar y acomplejar
cationes metlicos. Burgstaller y Schinner (1993) citan varias especies que
producen grandes cantidades, que incluyen Yarrowia lipolytica (a. ctrico),
Mucor spp. (a. fumrico y glucnico), Rhizopus spp. (a. lctico, fumrico y
glucnico), Aspergillus niger (a. ctrico, oxlico y glucnico), Aspergillus spp. (a.
ctrico, mlico, tartrico, -cetoglutarato, itacnico, acontico), Penicillium spp.
32
(a. ctrico, mlico, tartrico, -cetoglutarato, glucnico) y Schizophylum

commune (a. mlico)
1.5.
Mtodos de Biolixiviacin
El objetivo de las investigaciones a pequea escala es determinar la

extensin y tasa de la alteracin de los minerales en los yacimientos, finalmente
las investigaciones de laboratorio estn dirigidas a determinar las condiciones
de lixiviacin ptimas y la subsecuente simulacin de los mtodos para su
potencial aplicacin comercial.
Los mejores resultados para extraccin de metales pueden
ser
obtenidos con tcnicas que provean altas transferencias de oxgeno y nutrientes

en las soluciones de lixiviacin.
1.5.1. Aplicaciones Experimentales
La biolixiviacin de minerales es una tecnologa simple y efectiva, cuya

efectividad y economa depende de la actividad del microorganismo y la
composicin qumica y mineralgica del mineral, por tanto los procesos
probados en un tipo de mineral no pueden ser transferidos directamente a otros,
33
siendo su aplicacin tcnica posible cuando las condiciones de lixiviacin han

sido optimizadas para este (Bosecker, 1997).
1.5.1.1.
Percoladores Air Lift
Constituyen los primeros y ms usados aparatos en experimentos de

biolixiviacin. En general, consisten en un tubo de vidrio con un plato separador
ubicado en su zona media, donde es depositado el mineral, el cual esta irrigado
permanentemente mediante recirculacin con el medio de cultivo inoculado con
el microorganismo y con bombeo continuo de aire o dixido de carbono
estriles. Para monitorear el curso del proceso de biolixiviacin se toman
muestras lquidas a ciertos intervalos de tiempo, para determinar los valores de
pH, as como realizar anlisis microbiolgicos y qumicos de los metales
presentes en el lixiviado (Ver Fig. 2).
Aunque determina una mejor transferencia de los nutrientes disueltos

para el microorganismo y facilita la remocin de productos solubilizados y
desechos txicos, este mtodo podra no suplir los altos niveles de oxgeno
requeridos (Lundgren, 1980). Este mtodo ha sido modificado para tratar sus
efluentes con la finalidad de remover productos metablicos y regenerar una
solucin de lixiviacin deseable, as como el microorganismo suspendido en
esta, obtenindose as mayores rendimientos.
34
1.5.1.2.
Lixiviacin en Columna
La lixiviacin en columna difiere del percolador en su tamao

nicamente, de acuerdo a esto las columnas pueden ser hechas de vidrio,
plstico, concreto o metal y sus rangos de capacidades de varios kilogramos a
pocas toneladas (Bosecker, 1997). En los sistemas en columna se colocan
diversos sensores de medicin de pH, humedad, temperatura, oxgeno, dixido
35
de carbono y otros parmetros de inters a lo largo de la misma. La lixiviacin

en columna con o sin circulacin es usada en laboratorios para simular y
optimizar el procedimiento comercial para lixiviacin tipo dump o heap.
1.5.1.3.
Lixiviacin Sumergida
Debido a que los niveles de transferencia de oxgeno en los percoladores

y columnas resultan inadecuados y los tiempos de permanencia del mineral
muy prolongados, el proceso de biolixiviacin no es muy eficiente, por tanto el
percolador ha sido progresivamente desplazado por la lixiviacin sumergida
usando material finamente cernido (tamao de partcula < 100 m) el cual es
suspendido en el medio de lixiviacin (Bosecker, 1997).
Distintos mtodos han sido aplicados para favorecer las condiciones de

aireacin de la solucin lixiviante, tales como bombas difusoras de aire,
agitadores magnticos, rotores y agitadores reciprocicantes. En este mtodo el
medio de biolixiviacin es continuamente removido y la transferencia de
oxgeno es por tanto acelerada. Se lleva a cabo en fiolas o Erlenmeyers y
bioreactores ms sofisticados (Bosecker, 1997), que proveen rpidamente
informacin acerca de un gran nmero de parmetros que afectan la actividad
del microorganismo y el proceso de biolixiviacin, permitiendo una evaluacin
36
preliminar del proceso con ciertos minerales y su posterior uso en procesos de

escalamiento.
1.5.2. Aplicaciones Comerciales e Industriales
Durante los ltimos treinta aos la biolixiviacin de minerales ha abierto

nuevas oportunidades para la metalurgia y biohidrometalurgia extractiva, siendo
empleada en la actualidad principalmente en las industrias del cobre, uranio y
oro, en especial para el tratamiento de yacimientos de bajo tenor (Torma, 1982)
o yacimientos refractarios (Natarajan, 1998). Muchos procesos de biolixiviacin
han sido patentados recientemente, estando la mayora enfocadas hacia la
recuperacin de metales preciosos como plata y oro, usando microorganismos
quimiolitoauttrofos tales como Thiobacillus, para la movilizacin de metales
(Krebs, 1997).
La simple va para conducir la lixiviacin microbiana es apilar el material

o mineral en montculos cercanos a una fuente de agua para suministrar la
solucin lixiviante a travs del montculo y colectar los fluidos de percolacin o
lixiviados.
Los mtodos principales aplicados para minerales sulfurosos de bajo

tenor son clasificados como procesos de Lixiviacin en Montculos (heap
37
leaching), Lixiviacin en Vertederos (dump leaching), Lixiviacin in situ

(Lundgren, 1980) y Lixiviacin en Tanques (Bosecker, 1997).
1.5.2.1.
Lixiviacin en Vertederos
Constituye el mtodo ms antiguo y la magnitud de los vertederos y

depsitos de mineral oscila en el rango de varios cientos de toneladas
(Bosecker, 1997), es generalmente empleado para yacimientos sulfurosos. En
este mtodo, grandes cantidades de mineral de bajo tenor, desechos de mina o
rocas son depositados sobre una superficie impermeable que puede constar de
una capa arcillosa o asfltica, para impedir la prdida de los lixiviados por
drenaje (Torma, 1982), la cual se encuentra usualmente ubicada en valles,
donde las soluciones lixiviantes son introducidas de forma natural o fomentada
por riego o inyeccin a travs de pipas verticales, posteriormente los fluidos
percolados son colectados en una cmara para la posterior concentracin de
los metales de valor econmico
38
Tabla 2: : Patentes de algunos procesos biohidrometalrgicos en

yacimientos (Tomado de Krebs, 1997).
Tipo de Yacimiento
Metal
Recuperado Microorganismos
Yacimiento de Hierro
Fe
Pseudomonas sp.
Yacimiento de Oro
Au
Chromobacterium violoceum,
Chlorella vulgaris
Yacimiento de Carbn
conteniendo Oro
Au
Thiobacillus sp., cepas de hongos

y bacterias hetertrofas
Yacimiento de Sulfuro con Oro
Au, Ag, Cu
Thiobacillus ferroxidans
Yacimiento de Plata Manganfera Ag
Bacillus sp., Bacillus polymyxa
Sulfuros
Au, Ag, Cu
Thiobacillus sp., Letospirillim

ferrooxidans
Sulfuros
Au, Ag, Pt
Bacterias Sulfato e Hidrgeno

reductoras
1.5.2.2.
Lixiviacin en Montculos
Este mtodo difiere del anterior fundamentalmente en su magnitud y la

composicin del material a ser lixiviado, predominando los xidos de ciertos
metales (Torma, 1980). El proceso es usado en yacimientos minerales donde el
material es de granulometra fina pero no puede ser separado por flotacin
(Bosecker, 1997).
Puede ser usado para la extraccin de metales valiosos
presentes en las paredes y pilares de las galeras en las minas subterrneas,
39
donde las soluciones de lixiviacin entran en contacto con el yacimiento

explotado por percolacin, alternacin de ciclos de saturacin-desecacin,
rociamiento e inyeccin de la solucin de lixiviacin, la cual es recuperada
posteriormente en sumideros (Lundgren, 1980).
40
1.5.2.3.
Lixiviacin en Tanques
Los mejores rendimientos en ensayos de biolixiviacin sumergida

determinan su aplicacin favorable, debido a el cambio de escala desde
Erlenmeyers a bioreactores ha sido probado y es real, mostrando ser ms
efectivo, aunque resulta ms complejo en cuanto a construccin y operacin
(Bosecker, 1997).
El material a ser lixiviado es colocado en un gran tanque equipado con

una base falsa. La solucin de lixiviacin es colocada por la parte superior del
tanque y acumulada para percolar a travs del material. Los tanques son
usados en un sistema contracorriente, en el cual los nuevos slidos son
colocados en contacto con la solucin de lixiviacin parcialmente reaccionada y
la solucin fresca es agregada a el mineral parcialmente lixiviado (Torma,
1982).
1.6.
Biolixiviacin de Aluminio y Hierro en Bauxita
La Bauxita es el mineral que constituye la fuente de aluminio de mayor

importancia en el mundo, siendo adicionalmente usada para la manufactura de
refractarios y cermicas, como aditivo en cemento, absorbentes, metales,
goma,
cosmticos,
pinturas
vidrio,
entre
otros.
Las
bauxitas
son
41
esencialmente hidrxidos de aluminio que se formaron por la descomposicin e

hidrlisis de aluminosilicatos; como mineral posee un gran nmero de
impurezas como hierro, silicio, titanio, calcio y pequeas cantidades de fsforo,
zinc, magnesio, carbonatos y silicatos, dichas impurezas no solo determinan
problemas de calidad, sino que incrementan los costos de produccin,
causando problemas ambientales de contaminacin, no obstante dos grandes
problemas dificultan la purificacin de la bauxita: la amplia y fcil disponibilidad,
y bajo precio de las bauxitas de tenor elevado o medio, y la fina dispersin de
los xidos de hierro, caoln, calcio y minerales de titanio en los agregados
cristalinos de los yacimientos de bauxita marginal o submarginal.
Dependiendo de la bauxita y el grado de calidad requerido, se emplean

diversos mtodos para su beneficiacin, como seleccin y lavado, separacin
magntica, secado y calcinado, e incluso separacin manual, otros mtodos
incluyen lixiviacin en Lecho Fluidizado, beneficiacin asistida con hidrgeno y
biolixiviacin, sin embargo luego de dcadas de investigacin, no existe una
tecnologa econmica de tratamiento de la bauxita, que pueda ser satisfactoria
para la eliminacin de impurezas (TIFAC, 2002).
Venezuela posee grandes reservas de bauxita, muchas de las cuales

permanecen sin explotar, en el orden de 500 millones de toneladas mtricas
con un contenido mnimo de 48% de almina (Al2O3) como reservas probables
(Quintero, 1990), estando en el Yacimiento Los Pijiguaos, Estado Bolvar, el
42
principal desarrollo minero para explotacin de bauxita del pas, llevado a cabo
por C.V.G. Bauxilum C.A., la cual constituye el eslabn inicial en la estructura
del Sector Aluminio del Estado Venezolano, el cual se perfila para el presente
ao como el octavo productor de aluminio del mundo (C.V.G., 2002 en prensa).
La bauxita Los Pijiguaos es gibbstica y tiene un componente pisoltico,

textura celular y espongiforme, tpicamente cuarzosa, lo cual deriva de un
proceso incongruente de disolucin que se dio a principio del Perodo Terciario,
que determin su configuracin en forma de una costra latertica de aspecto
ferruginoso. Su composicin qumica esta constituida por xidos de aluminio,
slice, calcio, hierro y titanio (Menndez, 1985).
La recuperacin del aluminio presente en bauxita, est limitada en

general desde el punto de vista operativo en la explotacin del Yacimiento Los
Pijiguaos, para el procesamiento de mineral con niveles de almina (Al2O3)
superiores al 45% (w/w), lo que determina un desaprovechamiento potencial
importante de las reservas de mineral. Debido a que la utilizacin del tradicional
Proceso Bayer est limitado a bauxitas de elevado tenor que contengan entre
50 60% de almina y menos de 5% de slice reactiva, por lo que es
generalmente aceptada la necesidad de encontrar otras posibles fuentes de
aluminio o procesos de extraccin (Vachon, 1994). Esto favorece la utilizacin y
bsqueda de mtodos alternativos que permitan optimizar el aprovechamiento
de la bauxita con tenores inferiores a los mencionados anteriormente, la cual
43
predomina en el Yacimiento Los Pijiguaos. Recientemente se ha acrecentado

el inters dirigido a la extraccin de aluminio a partir de bauxita enfocado
principalmente hacia su enriquecimiento mediante el lavado y remocin de los
diversos componentes e impurezas de la misma a travs de procesos
mecnicos, fsicos y qumicos que favorezcan su mejor aprovechamiento, tales
como flotacin, separacin gravimtrica, reduccin del tamao (roasting) y
separacin magntica. Sin embargo, dichos mtodos determinan limitaciones
prcticas, elevados costos y consumos de energa, siendo adems menos
flexibles y ambientalmente dainos (Vasan, 2001).
De esta manera los yacimientos de bauxita deben ser beneficiados para

remover del mineral constituyentes indeseables que permitan su uso para
diversos propsitos, representando el calcio y el hierro en la bauxita, las
mayores impurezas que afectan sus aplicaciones comerciales como abrasivos y
refractarios (Modak, 1999). La necesidad de sustituir mtodos pirometalrgicos
para procesar minerales o concentrados minerales de bajo tenor, determinan el
desarrollo de mtodos alternativos de explotacin (Alibhai, 1993), por lo tanto,
una solucin biotecnolgica al problema promete ser econmica, eficiente y
ambientalmente benigna (Schinner, 1989; Natarajan, 1997).
Diversos estudios muestran que es posible extraer metales de elevado

valor econmico como oro, titanio, aluminio, nquel, cromo, cobre, manganeso y
uranio, dependiendo de la mineralizacin, usando bacterias hetertrofas y
44
hongos sobre yacimientos no sulfurosos como silicatos (Bosecker, 1997), as

como a partir de ciertos desechos industriales o de actividades mineras.
Destacando la biolixiviacin de nquel y hierro de lateritas niquelferas (Alibhai,
1993); aluminio a partir de alumino-silicatos (Groudev, 1982); hierro a partir de
caoln (Mesquita, 1996); manganeso en pirolusita (Toro, 1993); aluminio a partir
de lodos rojos (Vachon, 1994); aluminio, hierro, cromo, cobre, cadmio, nquel y
zinc a partir de desechos industriales (Krebs, 1997); y especficamente en el
caso de bauxita biolixiviacin de aluminio y hierro (Ogurstova, 1990; Natarajan,
1997; Rashid, 2001), slice (Ogurstova, 1990) y calcio (Natarajan, 1997; Modak,
1999; Vasan, 2001).
Resaltando el papel de las silicato-bacterias hetertrofas, capaces de

solubilizar slice presente en silicatos y rocas, algunas pertenecientes a las
especies Bacillus circulans y Bacillus mucilaginosus, capaces de elevar el tenor
de la bauxita por remocin de slice, generando un residuo caracterizado por
una elevada relacin Al2O3 : SiO2 favorable para tratamientos convencionales
(Proceso Bayer) de recuperacin de aluminio (Bosecker, 1997). Asimismo, la
disolucin de silicio en bauxita depende de la especie del microorganismo y la
bauxita usada, debido a que el mecanismo de accin de estos es selectivo, as
por ejemplo B. circulans y B. mucilaginosus, producen exopolisacridos activos
en la desilificacin de bauxitas cuarzo-caolinita-gibbstica y bohemita-caolinitaclorita, sin embargo para bauxita caolinita-hematita-bohemita no presentan
actividad, de esta manera los microorganismos son capaces de extraer slice,
45
aluminio y hierro en solucin con varios niveles de actividad y selectividad,

dependiente directamente del tipo de bauxita y los metabolitos excretados en el
medio (Ogurtsova, 1990).
Estudios recientes muestran que Paenibacillus polymyxa, Aspergillus

spp., Penicillium spp., Pseudomonas spp. y Cladosporium spp. pueden ser
usados en la remocin selectiva de calcio y hierro en bauxita, resultando en su
biobeneficacin (Anand, 1996; Natarajan, 1997; Modak, 1999; Vasan, 2001;
Rashid, 2001), optimizado por un proceso de recirculacin denominado
cascada de lixiviacin, seguido de un proceso de escalamiento a nivel de
bioreactores diseados para flexibilizar las operaciones y favorecer su
adaptabilidad a la industria minera (Modak, 1999).
Anand et al. (1996) reporta que en experiencias de biobeneficacin de

bauxita, usando Bacillus polymyxa pueden ser removidos el calcio y hierro
selectivamente para aplicaciones abrasivas y refractarias respectivamente,
asimismo, mediante la distribucin en fases de la cascada de lixiviacin por
mecanismos indirectos, es posible favorecer la disolucin de calcio y limitar la
de hierro, por cuanto la lixiviacin de este no es ptima en valores de pH no
acdicos, lo que se considera un aspecto crucial para la comercializacin de la
biobeneficacin de bauxita en el futuro (Vasan, 2001). Por lo tanto, para
entender los mecanismos de lixiviacin de los distintos elementos presentes en
la bauxita, es necesario tomar en cuenta no solamente la composicin qumica
46
y mineralgica de la bauxita, sino tambin el carcter de los metabolitos activos

en la extraccin de dichos elementos (Ogurstova, 1990). Asimismo, resalta el
empleo de microorganismos indgenas, presentes en las muestras de mineral
colectadas en los yacimientos fundamentalmente bacterias hetertrofas y
hongos, para comprender la influencia de los mismos en la formacin natural,
conversin y sedimentacin de varias formas minerales (Natarajan, 1997),
como estrategia de aplicacin en procesos de biolixiviacin y biobeneficacin.
En este trabajo se emplearon varias cepas hetertrofas indgenas

aisladas de muestras del yacimiento de bauxita Los Pijiguaos, sometidas
previamente
a un proceso de seleccin y adaptacin, en experiencias de
biolixiviacin sumergida de aluminio y hierro, variando condiciones y parmetros

durante el cultivo de las cepas indgenas, se determinaron los niveles de
remocin de aluminio como estrategia fundamental para evaluar las
potencialidades del proceso de biolixiviacin como mtodo alternativo
para
extraccin de aluminio, as como, la disolucin de hierro como estrategia de

remocin de impurezas, mediante la biobeneficacin de la bauxita Los
Pijiguaos, que permita postular un proceso de tipo preparativo previo, para su
posterior utilizacin en el tratamiento convencional de obtencin de almina
(Proceso Bayer).
Dichas estrategias estn enmarcadas directamente en la bsqueda de

mtodos
alternativos
no
convencionales,
econmicamente
rentables
47
ambientalmente benignos que permitan optimizar el aprovechamiento de las

reservas del yacimiento de bauxita Los Pijiguaos con contenido de almina
inferiores a 46 50 % de almina (Al2O3). De igual manera, se espera estimular
el estudio del proceso de biolixiviacin empleando microorganismos nativos,
debido a las amplias potencialidades que representa su aplicacin en la
extraccin de metales de inters econmico, como mtodo no convencional y
alternativo de explotacin minera, sobre la base de las diversas y amplias
riquezas minerales que posee Venezuela.
48
2.
En
el
yacimiento
de
HIPTESIS
bauxita
Los
Pijiguaos,
deben
existir
microorganismos capaces de solubilizar el aluminio y hierro presente en la

bauxita gibbstica a travs de la produccin cidos orgnicos e inorgnicos y
compuestos quelantes. Dichos microorganismos una vez aislados deberan
presentar capacidad de biolixiviacin en condiciones de laboratorio lo cual se
ver reflejado en los niveles de solubilizacin de aluminio y hierro.
49
3.
1.
OBJETIVOS
Aislar los microorganismos indgenas presentes en las muestras de

mineral colectadas
2.
Realizar ensayos preliminares en cultivos puros de las cepas aisladas para

determinar su potencial de biolixiviacin en medios selectivos y
complementados con bauxita gibbstica
3.
Determinar los niveles de biolixiviacin de aluminio y hierro presentes en la

bauxita gibbstica para las cepas seleccionadas
50
4. MATERIALES Y MTODOS
4.1.
Aislamiento y Caracterizacin de Microorganismos Indgenas
En el Yacimiento de Bauxita Los Pijiguaos, se colectaron muestras de

en las reas de explotacin, lodos de las lagunas de drenaje de mina y suelo de
la zona, con la finalidad de aislar y caracterizar en condiciones de laboratorio a
los organismos presentes y seleccionar un grupo de microorganismos para
emplearlos en los ensayos de adaptacin y biolixiviacin.
4.1.1. Muestras de Bauxita, Suelo y Lodos Rojos de las Lagunas de

Drenaje de Mina
4.1.1.1.
Localizacin del rea de Muestreo
El Yacimiento de Bauxita Los Pijiguaos, est localizado en el extremo

norte de la serrana del mismo nombre, hacia el noroeste del Municipio Cedeo
del Estado Bolvar, entre las coordenadas: Longitudes 66 40 30 W y 66 46
55 W y Latitudes 6 26 30 y 6 32 30 N.
51
4.1.1.2.
Recoleccin y Almacenamiento de Muestras
Se recolectaron 36 muestras de manera aleatoria en las reas

explotadas por C.V.G. BAUXILUM Operadora de Bauxita C.A. en el Yacimiento
Los Pijiguaos, provenientes de tres fuentes: veinticuatro (24) muestras de
mineral de labores de perforacin, cuatro (04) muestras de suelo adyacente a
las reas de explotacin de aproximadamente 25 g y ocho (08) muestras de
lodos rojos de lagunas de drenaje de la mina de 10 ml, almacenndose en
condiciones refrigeradas a 5C, en bolsas plsticas de cierre hermtico y
envases plsticos de tapa de rosca respectivamente, para su posterior
seleccin en el laboratorio.
Se seleccion adicionalmente una muestra de 20 Kg de bauxita Los

Pijiguaos, pulverizada y secada a peso constante para su uso en los ensayos
de biolixiviacin. Dicha muestra fue seleccionada usando una criba y se
seleccion la fraccin de tamao de partcula 250 m, la cual fue analizada en
sus componentes qumicos y mineralgicos en C.V.G. BAUXILUM Operadora
de Bauxita C.A. (ver Tabla 6).
52
4.1.2. Medio de Cultivo de Enriquecimiento
Se emple el Medio 9K lquido (Silverman, 1959) modificado,

agregndose Sacarosa 3,0 g/L como fuente de carbono.
4.1.2.1.
Composicin y Preparacin
El Medio 9K (M9K) modificado, est compuesto por dos partes que

deben ser preparadas y esterilizadas por separado: la Parte A constituida por
las Sales 9K (S9K) y Sacarosa 3,0 g/L, se disuelve hasta 700 ml con agua
destilada y una Parte B constituida por Sulfato de Hierro Heptahidratado se
disuelve hasta un volumen de 300 ml con agua destilada, ambas partes se
acidifican hasta pH 3.0 con H2SO4 20% (v/v), se esterilizan a 121 C durante 25
minutos y se mezclan estrilmente a temperatura ambiente.
Tabla 3: Composicin qumica del Medio 9K (Silverman, 1959).

Parte A: Sales 9K
Compuesto
Frmula
Concentracin (g/L)
Sulfato de Amonio
(NH4)2SO4
3,000
Cloruro de Potasio
KCl
0,100
Fosfato dipotsico
K2HPO4
0,500
MgSO47H2O
0,500
CaCl2
0,006
Sulfato
de
Magnesio
heptahidratado
Cloruro de Calcio
53
Parte B: Solucin de Sulfato Ferroso Heptahidratado

Compuesto
Sulfato Ferroso
Frmula
Concentracin (g/L)
FeSO47H2O
44,22
Heptahidratado
4.1.2.2.
Condiciones de Cultivo y Ciclos de Cultivo de

Enriquecimiento
Para la Etapa de Enriquecimiento se inocul por duplicado en

condiciones aspticas cada muestra en 25 ml contenido en fiolas de 125 ml de
Medio 9K (M9K) modificado estril con 1.0g de muestra de mineral, 1.0 g de
muestra de suelo y 5,0 ml de lodo rojo, usndose como control M9K modificado
sin inocular por duplicado. El cultivo se incub con agitacin constante de 120
rpm usando un agitador orbital, temperatura de 30 C durante 15 das.
Sucesivamente
se realizaron
cuatro
ciclos
adicionales de
cultivo
de
enriquecimiento en M9K modificado con las mismas condiciones, pero usando

como inculo una muestra de 0,5 ml del cultivo anterior para cada caso.
54
4.1.3. Medio de Aislamiento de Cepas Quimiolitotrofas y

Hetertrofas Indgenas
4.1.3.1.
Composicin y Preparacin
Se emple como base el M9K modificado, usando agar como agente

soldificante, compuesto por:
Parte A: Sales 9K + Sacarosa 3,0 g/L

Parte B: Solucin de Sulfato Ferroso 44,22 g/L
Parte C: Agar 20 g/L
Las Partes A y B se acidifican hasta pH 3.0 con H2SO4 20% (v/v) y se
disuelven hasta 350 ml y 300 ml respectivamente con agua destilada; la Parte
C se disuelve hasta 350 ml con agua destilada. Todos los componentes se
esterilizan por separado a 121 C durante 25 minutos y posteriormente se
mezclan estrilmente a 60 C aproximadamente con agitacin constante, para
su posterior vaciado aspticamente en placas de Petri.
4.1.3.2.
Condiciones de Cultivo y Aislamiento de Cepas
En placas de M9K modificado slido (M9Kms), se inocul usando la

tcnica asptica de agotamiento, previo toque con asa del M9K modificado
lquido inoculado, correspondiente al ltimo Ciclo de Enriquecimiento para cada
55
caso, incubndose durante siete das a 25 C en una Cmara Semihermtica

con atmsfera enriquecida en CO2.
Sucesivamente se realizaron cinco Ciclos de Aislamiento de Cepas,

mediante repiques y seleccin constante desde la placa anterior para su
aislamiento, purificacin y posterior caracterizacin preliminar, a fin de
emplearlas en los ensayos de adaptacin y biolixiviacin. En los dos ltimos
ciclos se sustituy la Sacarosa por Glucosa 5,0 g/L en el M9K ms.
Las cepas tipo obtenidas por este procedimiento fueron caracterizadas

preliminarmente y seleccionadas para los posteriores programas o ciclos de
adaptacin y pruebas de tolerancia a niveles variables de acidez, concentracin
de hierro frrico y bauxita, para la posterior seleccin comparativa de la cepa
tipo que mostrara los mejores niveles de biolixiviacin.
4.1.4. Seleccin de Cepas y Caracterizacin Preliminar
4.1.4.1.
Caracterizacin Macromorfolgica
La caracterizacin de los microorganismos aislados se bas en

caracteres fenotpicos macromorfolgicos diferenciales de crecimiento en placa
y medio lquido, los cuales fueron evaluados durante los diversos ciclos de
cultivo de enriquecimiento y aislamiento, para ser usados como carcter de
56
seleccin, con la finalidad de definir nicamente determinados tipos

morfolgicos, denominados cepas tipo, sin llegar a su identificacin taxonmica,
siendo empleados posteriormente en los ensayos de biolixiviacin de hierro y
aluminio.
4.1.5. Adaptacin de las Cepas Seleccionadas
La adaptacin de las cepas se realiz de manera programada, mediante

el cultivo de estas en presencia de dos niveles de acidez y concentracin de
hierro frrico (Fe3+), a fin de evaluar su tolerancia en dichas condiciones
selectivas, para la posterior realizacin de los ensayos preliminares de
biolixiviacin, que permitieron la seleccin de la cepa tipo definitiva.
4.1.5.1.
Ciclo Primario de Adaptacin (C.P.A.)
Las cepas tipo seleccionadas se cultivaron inicialmente en presencia de

sulfato frrico 3,18 g/L (16 mM de Fe3+), para iniciar el proceso de adaptacin y
tolerancia a hierro frrico (Fe3+) y condiciones cidas.
57
4.1.5.1.1. Medio y Condiciones de Cultivo
Para el C.P.A. se emple un medio compuesto como base por las sales
del Medio 9K (Sales 9K), constituido por:
Parte A: Sales 9K + Glucosa 20 g/L

Parte B: Sulfato Frrico, Fe2(SO4)3 3,18 g/L
Las Partes A y B se acidifican hasta pH 1,5 y 3,5 con H2SO4 20% (v/v) en
cada caso y se disuelven hasta 700 ml y 300 ml respectivamente con agua
destilada. Los componentes se esterilizan por separado a 121 C durante 25
minutos y se mezclan estrilmente a temperatura ambiente, vertindose
aspticamente 50 ml de medio por fiola.
Las cepas tipo seleccionadas con su duplicado se cultivaron inoculando

aspticamente con asa de platino desde una Placa de Petri con un cultivo puro
de la misma, en fiolas de 125 ml con 50 ml de medio, durante 15 das, a
temperatura de 30 C, agitacin constante de 120 rpm y pH inicial de 1,5 y 3,5
en cada caso, usndose como control medio sin inocular.
58
4.1.5.2.
Ciclo Secundario de Adaptacin (C.S.A.)
Las cepas tipo seleccionadas provenientes del C.P.A. se cultivaron en

presencia de una concentracin incrementada de sulfato frrico de 31,8 g/L
(160 Mm de Fe3+), para continuar el proceso de adaptacin y tolerancia a hierro
frrico (Fe3+) y condiciones cidas.
Para el C.S.A. se emple el medio compuesto como base por las sales
del Medio 9K (Sales 9K), constituido por:
Parte A: Sales 9K + Glucosa 20 g/L

Parte B: Sulfato Frrico, Fe2(SO4)3 31,8 g/L
La preparacin del medio y condiciones de cultivo para el C.S.A. fueron
similares a las del C.P.A., incluyendo como nica variante el incremento en la
concentracin del sulfato frrico e inoculando aspticamente con asa de platino
para cada cepa tipo desde la respetiva fiola del C.P.A.
4.1.5.3.
Ciclo Terciario de Adaptacin
Las cepas tipo seleccionadas y sometidas a ensayos de tolerancia y

adaptacin a concentraciones de hierro frrico y acidez variables provenientes
59
del C.S.A., fueron cultivadas en presencia de bauxita gibbstica de tamao de

partcula 250 m a densidades de pulpa variable para evaluar su crecimiento
y niveles de biolixiviacin de hierro en presencia del mineral como criterio de
seleccin final.
Para el C.T.A. se emple el medio compuesto como base por las sales
del Medio 9K (Sales 9K), complementado con bauxita gibbstica de tamao de
partcula 250 m.
Componentes:
Sales 9K
Glucosa
20 g/L
Extracto de Levadura
0,5 g/L
Bauxita
50, 100 200 g/L
Los componentes del medio se disuelven en agua destilada y

desmineralizada, para las tres densidades de pulpa en cada caso por duplicado,
se acidifica hasta pH 6,0 con H2SO4 20% (v/v) y se esteriliza a 121 C durante
25 minutos.
Las cepas tipo seleccionadas con su duplicado se cultivaron inoculando

aspticamente con asa de platino para cada cepa desde la respectiva fiola del
60
C.S.A., en fiolas de 125 ml con 50 ml de medio, a temperatura de 30 C, pH

inicial de 6,0, agitacin constante de 120 rpm o esttico, durante 15 das o 40
das respectivamente, usndose como control medio sin inocular.
4.2.
Seleccin de Cepas en Base a los Niveles de Biolixiviacin de

Hierro en Medio Complementado con Bauxita Gibbstica
Finalizado el correspondiente perodo de cultivo del Ciclo Terciario de

Adaptacin (C.T.A.) de las cepas tipo, se tomaron muestras de cada fiola con
su respectivo duplicado para cada tratamiento, a fin de determinar el pH final y
los niveles de hierro solubilizado, presente en el sobrenadante, usando estos
parmetros como criterio de seleccin de cepas para los ensayos de
biolixiviacin.
4.2.1. Tratamiento de la Muestra
Previa medicin del pH final para cada tratamiento, se tomaron muestras

del C.T.A., se decant el sobrenadante de cada fiola, se centrifug a 14.000 g
durante 15 minutos a 4 C, decantndose el sobrenadante y descartndose el
precipitado, almacenando las muestras de 5,0 ml a 20 C, para la posterior
determinacin del hierro solubilizado.
61
4.2.2. Preparacin de la Curva de Calibracin para la Determinacin

Espectrofotomtrica de Hierro con Tiocianato
La
Curva
de
Calibracin
se
prepar
usando
sulfato
ferroso
heptahidratado, soluciones patrn para concentraciones finales de 20, 40, 60,

80, 100 y 120 mg/L de Hierro Ferroso (Fe2+), realizndose en cada caso por
triplicado y aadindose los componentes de la mezcla de reaccin con el
procedimiento y orden siguiente para el respectivo tubo: 500 l de HNO3 50%
(v/v), 50 l de solucin patrn de Fe2+, agitacin vigorosa en vortex, 500 l de
NaSCN 1,0 M, agitacin vigorosa en vortex y
diluir con 2,0 ml de agua
destilada y desmineralizada agitando vigorosamente en vortex para su posterior

medicin de Absorbancia en Espectronic 20 a longitud de onda de 510 nm,
usando como blanco en lugar de muestra patrn y NaSCN 1.0 M agua destilada
y desmineralizada; los valores de Absorbancia obtenidos fueron graficados
contra los valores de concentracin de hierro a fin de definir la curva de
calibracin patrn. El error entre muestras fue de 10% aproximadamente.
4.2.3. Determinacin Espectrofotomtrica de la Concentracin de

Hierro Lixiviado con Tiocianato
Los niveles de hierro solubilizado presente en el sobrenadante para los

distintos
tratamientos
se
determinaron
Espectrofotomtricamente
con
62
Tiocianato usando un Espectronic 20 a una longitud de longitud de onda de 510

nm , comparando estos con una Curva Patrn de Calibracin de DO510 nm vs.
Concentracin de Hierro (mg/L), realizndose en cada caso por triplicado y
aadindose los componentes de la mezcla de reaccin con el procedimiento y
orden siguiente para el respectivo tubo y tratamiento: 500 l de HNO3 50% (v/v),
50 l de sobrenadante o sus diluciones seriadas 1:10, 1:100 1:1000 en caso
de haber saturacin, agitacin vigorosa en vortex, 500 l de NaSCN 1,0 M,
agitacin vigorosa en vortex y
diluir con 2,0 ml de agua destilada y
desmineralizada agitando vigorosamente en vortex para su posterior medicin

de Absorbancia, usando como blanco en lugar de muestra de sobrenadante y
NaSCN 1,0 M agua destilada y desmineralizada.
4.2.4. Seleccin de las Cepas a emplear en los Ensayos de

Biolixiviacin
La seleccin definitiva de la cepa tipo a emplear en los ensayos de

biolixiviacin de aluminio y hierro, se bas en la comparacin de los niveles de
biolixiviacin de hierro como criterio principal y la acidez final, para las cepas
tipo seleccionadas y provenientes del C.T.A. en los distintos tratamientos en
condiciones estticas y de agitacin.
63
4.3.
Biolixiviacin de Aluminio y Hierro presentes en Bauxita

Gibbstica
La cepa tipo seleccionada para los ensayos de biolixiviacin de aluminio

y hierro, se obtuvo a partir de un cultivo puro en M9Kms aislado del Ciclo
Terciario
de
Adaptacin
(C.T.A.),
obtenindose
un
preinculo
que
posteriormente se cultiv para generar el inculo a usar en los cultivos Batch

con agitacin constante, variando las condiciones de densidad de pulpa,
concentracin de glucosa y tiempo. Determinndose para cada caso y
tratamiento en intervalos de tiempo variables el pH del medio y las
concentraciones de glucosa residual, hierro y aluminio lixiviados presentes en el
sobrenadante.
4.3.1. Obtencin del inculo de la cepa tipo seleccionada
A partir de un cultivo puro en M9Kms de la cepa tipo seleccionada

aislado de la fiola correspondiente al C.T.A., se prepar un preinculo de esta
en un Medio Base (MB) compuesto por: Sales 9K, Extracto de Levadura 1,0 g/L,
Peptona 1,0 g/L, Glucosa 20 g/L. Los componentes del medio se disuelven en
agua destilada y desmineralizada, se acidifica hasta pH 6.0 con H2SO4 20%
(v/v) y se esteriliza a 121 C durante 15 minutos. La cepa tipo seleccionada se
cultiv inoculando aspticamente con asa de platino desde la placa con el
64
cultivo puro del C.T.A., en fiolas de 250 ml con 100 ml de medio MB, a
temperatura de 30 C, pH inicial de 6,0, agitacin constante de 120 rpm,
durante 2 das, usndose como control medio sin inocular.
Posteriormente se realiz un proceso de escalamiento a 1 L de medio

MB usando como inculo el preinculo, cultivndose en las mismas condiciones
citadas, durante dos das, procedindose a centrifugar estrilmente el medio de
cultivo inoculado a 12.000 g, durante 20 minutos a 4 C, descartndose el
sobrenadante y resuspendiendo estrilmente la biomasa precipitada, en Buffer
de Lavado estril Na2HPO4/NaH2PO4 100 mM pH 6,5 hasta 1,0 L, agitando
hasta homogeneizar el inculo, para agregar estrilmente 5,0 ml de inculo
fresco a ser usado en los ensayos de biolixiviacin de aluminio y hierro en sus
distintos tratamientos, asimismo se tom una alcuota de 100 a 150 ml para
determinaciones de peso fresco y seco del inculo.
4.3.2. Experimento Multifactorial
Se dise un experimento multifactorial con la finalidad de determinar los

niveles de biolixiviacin de aluminio y hierro presentes en bauxita, as como los
parmetros cinticos asociados al proceso en dichas condiciones, variando dos
componentes del medio, mediante el uso de tres densidades de pulpa y dos
65
concentraciones de glucosa. Usndose como controles el tratamiento

respectivo en ausencia de microorganismos.
Tabla 4 : Experimento Multifactorial de Biolixiviacin de Aluminio
y Hierro
presente en bauxita, donde Tx corresponde al tratamiento.
[Glucosa] (g/L)
Densidad de pulpa, [Bauxita] (g/L)
4.3.2.1.
100
150
200
40
T1
T2
T3
60
T4
T5
T6
Medios y Condiciones de Cultivo
Para los cultivos de biolixiviacin se emple el medio compuesto como

base por las sales del Medio 9K (Sales 9K), constituido por:
Componentes:
Sales 9K
Glucosa
40 60 g/L
66
Extracto de Levadura
Bauxita
0,5 g/L
100, 150 200 g/L de tamao de partcula 250 m
Los componentes del medio se disuelven en agua destilada y

desionizada, para las tres densidades de pulpa y concentraciones de glucosa
en cada caso por duplicado, se acidifica hasta pH 6,5 con H2SO4 20% (v/v) y se
esteriliza a 121 C durante 15 minutos.
La cepa tipo seleccionada con su duplicado se cultiv para los distintos

tratamientos, inoculando aspticamente con 5,0 ml de micelio resuspendido en
buffer estril, en fiolas de 125 ml hasta 50 ml de volumen final de medio
inoculado, a temperatura de 30 C, pH inicial de 6,5 , agitacin constante de
120 rpm, durante 25 a 40 das, usndose como control medio sin inocular, en
cada caso.
Se tomaron muestras a intervalos de 24 a 48 horas para las
determinaciones analticas respectivas.
4.3.3. Controles de Lixiviacin Qumica con cidos Inorgnicos y

Orgnicos
Los ensayos de lixiviacin qumica llevados a cabo tuvieron como

finalidad establecer una base comparativa preliminar de la lixiviacin qumica
respecto al proceso de biolixiviacin, para tal efecto se variaron dos parmetros
fundamentales la densidad de pulpa para 100 y 200 g/L de bauxita y el tipo de
67
cido comercial usado, especficamente oxlico, ctrico y sulfrico.
Los
controles de lixiviacin qumica se prepararon para las densidades de pulpa 100

y 200 g/L disolviendo la cantidad correspondiente del mineral en agua destilada
y desionizada, en cada fiola de 125 ml y agregando el volumen correspondiente
de cido sulfrico (2,0 N), cido oxlico (1,25 N) o cido ctrico (2,0 N) para
obtener un pH inicial de 2,2, ajustndose a volumen final de 50 ml con agua
destilada y desionizada; todos los tratamientos y su duplicado fueron incubados
a 30 C, con agitacin constante de 120 rpm, durante 20 das. Se tomaron
muestras a intervalos de 48 a 72 horas para las determinaciones analticas
respectivas.
Tabla 5 : Experimento Multifactorial de lixiviacin de Aluminio y Hierro

presente en bauxita, usando cidos orgnicos e inorgnicos para pH inicial de
2,2, donde Tx corresponde al tratamiento.
Oxlico
Ctrico
Sulfrico
T1
T2
T3
T4
T5
T6
100
(g/L)
Pulpa [Bauxita]
Densidad de
cido
200
68
4.3.4. Determinaciones Analticas de los Niveles de Biolixiviacin
4.3.4.1.
Tratamiento de la Muestra
Para las determinaciones analticas se emple el contenido total de cada

fiola con su duplicado, llevando con agua destilada y desmineralizada hasta el
volumen inicial de 50 ml, en caso de ser necesario. La frecuencia de muestreo
fue variable en general mayor a 24 horas. Todas las muestras colectadas
fueron tratadas de acuerdo al siguiente procedimiento: Medicin de pH final del
tratamiento; decantacin, recuperacin del sobranadante y descartado del
precipitado; centrifugacin del sobrenadante a 14.000 g durante 10 minutos a 4
C; recuperacin del sobrenadante y en caso de ser necesario su filtrado en
trampa de vaco usando papel Whatman N 40, para su posterior almacenaje de
una alcuota de 25 ml de sobrenadante de cada muestra a 20 C, para las
respectivas determinaciones analticas.
El error en la determinaciones
analticas entre muestras fue de 10% aproximadamente.
4.3.4.2.
Determinacin Espectrofotomtrica con 1,10Fenantrolina de la Concentracin de Hierro
Los niveles de hierro solubilizado fueron determinados por medidas

espectrofotomtricas a 510 nm con 1,10-fenantrolina (Vydra, 1963).
69
4.3.4.2.1. Preparacin de la Curva de Calibracin de Hierro

con 1,10-Fenantrolina
En seis matraces aforados de 25 ml se colocan: 2,0; 4,0; 6,0; 8,0 y 10,0

ml de una solucin 10 ppm (mg/L) de hierro. Agregndose a cada uno en el
orden y procedimiento siguiente: 2,0 ml de HCl 10% (v/v) (36,5%, d = 1,19); 1,0
ml de clorhidrato de hidroxilamina 10 % (p/v); 5,0 ml de acetato de sodio 4,5%
(p/v); agitar y agregar 1,0 ml de 1,10-Fenantrolina 0,1% (p/v), llevando a 25,0 ml
con agua destilada y desionizada, y posteriormente se mide la absorbancia en
Espectronic 20 a 510 nm, usando como blanco la solucin preparada sin hierro.
Los valores de absorbancia obtenidos fueron graficados contra los valores de
concentracin de hierro a fin de definir la curva de calibracin patrn.
4.3.4.2.2. Anlisis de sobrenadantes para la determinacin

espectrofotomtrica de la concentracin de Hierro
con 1,10-Fenantrolina
Para el anlisis de las muestras colectadas, se toma una alcuota de 1,0

ml y se realizan diluciones seriadas de esta, agregndose 1,0 ml por tubo para
cada dilucin hasta 10,0 ml con agua destilada y desionizada, se ajusta su pH
entre 2,0 y 3,0 medido con un potencimetro marca ORION, posteriormente se
transfiere a un matraz aforado de 25 ml, agregndose a cada uno en el orden y
procedimiento siguiente: 2,0 ml de HCl 10% (v/v); 1,0 ml de hidroxilamina 10%
70
(p/v); 5,0 ml de acetato de sodio 4,5% (p/v); agitar y agregar 1,0 ml de 1,10fenantrolina 0,1% (p/v), llevando a 25,0 ml con agua destilada y desionizada, y
posteriormente se mide la absorbancia
a 510 nm, usando como blanco la
solucin preparada sin sobrenadante. La concentracin de hierro en la muestra

de sobrenadante se determina por comparacin con la curva de calibracin.
4.3.4.3.
Determinacin
Espectrofotomtrica
de
la
Concentracin de Aluminio con Eriocromocianina R
Los niveles de aluminio (Al3+) fueron determinados por medidas

espectrofotomtricas a 535 nm con Eriocromocianina R (Bianchi, 2001
comunicacin personal).
4.3.4.3.1. Preparacin de la Curva de Calibracin de Aluminio

con Eriocromocianina R
En siete matraces aforados de 25 ml se colocan: 10 ml de una solucin

de pH comprendido entre 5,5 y 6,5, conteniendo 0,0; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0
y 6,0 g de Aluminio. Agregndose a cada uno en el orden y procedimiento
siguiente: una gota de solucin de cido tiogliclico (cido mercaptoactico)
80% (p/v), se agita vigorosamente, 2,5 ml de solucin de eriocromocianina R
71
0,1% (p/v) y 5,0 ml de Buffer Acetato 27,5% (p/v) pH 6,0 , se agita

vigorosamente y se lleva hasta 25,0 ml con agua destilada y desionizada, y
posteriormente se mide la absorbancia en a 535 nm, usando como blanco la
solucin preparada sin aluminio. Los valores de absorbancia obtenidos fueron
graficados contra los valores de concentracin de aluminio a fin de definir la
curva de calibracin patrn.
4.3.4.3.2. Anlisis de sobrenadantes para la determinacin

espectrofotomtrica de la concentracin de aluminio
con Eriocromocianina R

ml y se realizan diluciones seriadas de esta, agregndose 1,0 ml por tubo para
cada dilucin hasta 10,0 ml con agua destilada y desionizada, se ajusta su pH
entre 5,5 y 6,5 y posteriormente se transfiere a un matraz aforado de 25 ml,
agregndose a cada uno en el orden y procedimiento siguiente: una gota de
solucin de cido tiogliclico (cido mercaptoactico) 80% (p/v), se agita
vigorosamente, 2,5 ml de solucin de eriocromocianina R 0,1% (p/v) y 5,0 ml
de Buffer Acetato 27,5% (p/v) pH 6,0 , se agita vigorosamente y se lleva hasta
25,0 ml con agua destilada y desionizada, y posteriormente se mide la
absorbancia a 535 nm, usando como blanco la solucin preparada sin la
dilucin del sobrenadante. La concentracin de aluminio en la muestra de
sobrenadante se determina por comparacin con la curva de calibracin.
72
4.3.4.4.
Determinacin de la Concentracin de Glucosa
Residual mediante Reaccin Acoplada Glucosa Oxidasa

Peroxidasa
El anlisis cuantitativo de glucosa se llev a cabo usando un kit de

determinacin enzimtica basado en la oxidacin de la glucosa por la reaccin
acoplada Glucosa Oxidasa Peroxidasa (GOD/POD) de Ultralab (Trinder,
1969).
4.3.4.5.
Preparacin de la Curva de Calibracin de
Glucosa Residual
En seis tubos de ensayo se agregan 0,0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 y 1,0 ml de un
patrn de Glucosa 10 mg/ml diluyendo con agua destilada y desmineralizada
hasta 1,0 ml; para la mezcla de reaccin se colocan agregndose a cada uno
en el orden y procedimiento siguiente: 20 l de la respectiva dilucin, 2,5 ml de
Buffer de trabajo, se agita e incuba durante 10 minutos a una temperatura de 35
37 C y posteriormente se mide la absorbancia en Espectronic 20 a 510 nm,
usando como blanco la solucin preparada sin glucosa. Los valores de
absorbancia obtenidos fueron graficados contra los valores de concentracin de
glucosa a fin de definir la curva de calibracin patrn.
73
4.3.4.6.
Anlisis de sobrenadantes para la determinacin

espectrofotomtrica de la concentracin de Glucosa
Residual

ml de sobrenadante y se realizan diluciones seriadas de esta, agregndose 1,0
ml por tubo para cada dilucin hasta 10,0 ml con agua destilada y desionizada
para la mezcla de reaccin se colocan agregndose a cada uno en el orden y
procedimiento siguiente: 20 l de la respectiva dilucin del sobrenadante, 2,5 ml
de Buffer de trabajo, se agita e incuba durante 10 minutos a una temperatura de
35 37 C y posteriormente se mide la absorbancia a 510 nm, usando como
blanco la solucin preparada sin glucosa. Los valores de absorbancia obtenidos
para cada muestra se comparan con la curva patrn a fin de determinar la
concentracin de glucosa residual.
4.3.5. Determinacin de Parmetros Cinticos del Proceso de

Biolixiviacin
Para la evaluacin del proceso de biolixiviacin de aluminio y hierro en

las condiciones determinadas en el experimento multifactorial se determinaron
los distintos parmetros cinticos (Marison, 1997), asociados al proceso de
74
cultivo en condiciones Batch, relacionados a la productividad y rendimiento del

proceso de biolixiviacin para la cepa tipo seleccionada.
75
5.
RESULTADOS
AISLAMIENTO, CARACTERIZACIN PRELIMINAR Y SELECCIN DE

MICROORGANISMOS INDGENAS
Caracterizacin Qumica y Mineralgica
La composicin qumica y mineralgica de la muestra de Bauxita

Gibbstica Los Pijiguaos de tamao de partcula 250 m empleada en los
distintos cultivos y ensayos de lixiviacin qumica y biolgica, es mostrada en la
Tabla 6, representando la Gibbsita (75 80%) el mineral de mayor contenido
de aluminio, presente en mayor proporcin de manera masiva. La hematita se
presenta en finos granos dispersos embebida en caolinita y una matriz
cuarzosa, conformando agregados granulares, siendo escasa la presencia de
anatasa y los componentes considerados traza al igual que la materia orgnica
<2%.
La muestra de Bauxita Los Pijiguaos present una composicin (ver

Tabla 6) de relativo bajo tenor (< 50 % Al2O3), resaltando los tres xidos de
hierro (12,73%), Titanio (1,32%) y Silicio (9,25%), que constituyen los objetivos
fundamentales en los procesos de biolixiviacin, por cuanto su remocin
determina la beneficiacin del mineral, debido a que constituyen ms del 20%
76
de sus impurezas. Asimismo las respectivas concentraciones de los iones Al3+ y

Fe3+, fueron calculadas a fin de relacionar los niveles de metal solubilizados y
su proporcin a partir del proceso de biolixiviacin en cada caso (Ver Tabla 7).
Tabla 6 : Composicin qumica y mineralgica de la bauxita Los Pijiguaos de

tamao de partcula 250 m.
Composicin Qumica
Componentes
Composicin Mineralgica
Concentracin
(% p/p)
Mineral
Contenido
(%)
Almina
(Al2O3)
49,26
Gibbsta (trihidratada)
(Al2O33H2O)
xido de Hierro
(Fe2O3)
12,73
Caolinita
12
Cuarzo
78
xido de Titanio
(TiO2)
1,32
Anatasa
12
Slice Total
(SiO2)
9,25
Hematita
12 13
0.5 1
Humedad
11,20
Barita, Ca, Mg, Mn,

Carbonatos, Circn
P.P.I. (Prdida
por Ignicin)
26,61
Materia Orgnica
trazas
75 80
77
Tabla 7 : Composicin de la bauxita Los Pijiguaos correspondiente, calculada

en iones
Composicin Qumica
Tamao de la
Partcula
250 m
Componentes
Concentracin
(% p/p)
Al 3+
26,08
Fe 3+
8,90
Aislamiento, caracterizacin y seleccin de microorganismos

Indgenas
A partir del procedimiento seguido en las Fases de Enriquecimiento y

Aislamiento se obtuvieron, 144 tipos morfolgicos que sucesivamente fueron
sometidos a un proceso de seleccin y se redujo el nmero de cepas indgenas
a emplear en los diferentes ensayos, obtenindose finalmente 9 cepas, que
para efectos prcticos se denominaron Cepas Tipo, para las cuales luego de la
seleccin, caracterizacin fenotpica y morfolgica basada en observaciones del
crecimiento en las distintas condiciones y medios de cultivo, se determin la
presencia de dos microorganismos levaduriformes y siete hongos filamentosos
(Ver Tabla 8) y junto a la adaptacin progresiva se evidenci la capacidad de
tolerancia de todas las Cepas Tipo a condiciones cidas (1,5 < pH < 3,5) y
78
presencia de hierro frrico y bauxita, para mximos de 160 mM de Fe3+ y 200

g/L de densidad de pulpa (20% Bauxita).
79
Tabla 8: Caractersticas fenotpicas relevantes de los microorganismos aislados empleados en los ensayos de
biolixiviacin
Microorganismos
Cepa B
Cepa BA
Cepa G
Cepa GV
Caractersticas
Crecimiento en medio lquido: formacin de micelio superficial color blanco en condiciones estticas;
formacin de esfrulas blancas grandes y abundantes en agitacin. En medio slido se forman abundantes
colonias filamentosas blanquecinas ampliamente extendidas con crecimiento arborescente. Tolerante a pH
< 2,0, 160 mM de Fe3+, Bauxita 200 g/L
Crecimiento en medio lquido: sedimentado, coloracin blanquecina. Levemente filamentoso con
crecimiento difuso en placa en forma de cuentas o punteado. Tolerante a pH < 2,0, Fe3+, Bauxita 200 g/L
Crecimiento en medio lquido: sedimentado, coloracin crema claro. Levaduriforme, forma colonias de borde
liso, crecimiento abundante en forma de mucosidad en cuentas o punteado. Tolerante a pH < 2.0, 160 mM
de Fe3+, Bauxita 200 g/L
Crecimiento en medio lquido sin formacin de micelio, en condiciones estticas; en agitacin, formacin
escasa de esfrulas de pequeo tamao color pardo. En medio slido, formacin de colonias levemente
filamentosas gris verdoso. Tolerante a pH < 2,0, 160 mM de Fe3+, Bauxita 200 g/L
(Continuacin de la Tabla 8)
Cepa N
Cepa RN
Cepa RO
Cepa V
Cepa VC
Crecimiento en medio lquido: formacin de micelio superficial color verdoso en condiciones estticas;
formacin de esfrulas blancas a verdosas grandes y abundantes en agitacin. En medio slido se forman
abundantes colonias filamentosas levemente anaranjadas, ampliamente extendidas con crecimiento
arborescente. Tolerante a pH < 2,0, 160 mM de Fe3+, Bauxita 200 g/L
Crecimiento en medio lquido, sedimentado color crema; levaduriforme, formacin de abundantes colonias
naranja - rojizo, colonias de borde liso, crecimiento abundante en forma de mucosidad en cuentas o
punteado. Tolerante a pH < 2,0, 160 mM de Fe3+, Bauxita 200 g/L
Crecimiento en medio lquido, sedimentado, con formacin de escasas y pequeas esfrulas, color crema.
En medio slido formacin de escasa colonias filamentosas color rojo a violceo, con los extremos
blanquecinos. Tolerante a pH < 2,0, 160 mM de Fe3+, Bauxita 200 g/L
Crecimiento en medio lquido: formacin de micelio superficial color verde intenso en condiciones estticas;
formacin de esfrulas verdosas grandes y abundantes en condiciones de agitacin. En medio slido se
forman abundantes colonias filamentosas color verde oscuro, ampliamente extendidas con crecimiento
arborescente. Tolerante a pH < 2,0, 160 mM de Fe3+, Bauxita 200 g/L, posiblemente Penicillium sp.
Crecimiento en medio lquido: formacin de micelio superficial color verde oliva en condiciones estticas;
formacin de esfrulas verdosas pequeas y abundantes en condiciones de agitacin. En medio slido se
forman escasas colonias filamentosas color verde oscuro, con crecimiento arborescente. Tolerante a pH <
2,0, 160 mM de Fe3+, Bauxita 200 g/L
81
Figura 4: Curva de Calibracin de Absorbancia (Abs.) a 510 nm contra

concentracin de hierro (Fe3+) (mg/L), determinado espectrofotomtricamente
con tiocianato.
En el Ciclo Terciario de Adaptacin se observ en general para las 9

Cepas Tipo tolerancia a la presencia de elevadas concentraciones de bauxita,
que
implicaban
evidencindose
condiciones
abrasivas
de
creciente
viscosidad,
un aumento de los niveles de biolixiviacin de hierro al
incrementar la densidad de pulpa, reportando los tratamientos esttico y con

agitacin los mayores niveles para 200 g/L de bauxita (Ver Figura 5), que al
igual que los controles en ambos casos presentaron la misma tendencia con
niveles de solubilizacin de hierro menores a 5,89 mg/L Fe3+ (200 g/L Bauxita
66
En Agitacin) y 3,96 mg/L Fe3+ (200 g/L Bauxita Esttico). Para la experiencia
en condiciones estticas destacan para el tratamiento con 200 g/L Bauxita los
mayores niveles de biolixiviacin para las Cepas Tipo: B, V, N, RN y BA con
113,79; 112,21; 60,81; 58,01 y 55,19 mg/L Fe3+ respectivamente para las
condiciones de cultivo, lo que representa 28.7, 28.3, 15.4, 14.7 y 13.9 veces
ms solubilizacin de hierro que el control respectivo.
Para el tratamiento de 100 g/L bauxita el mayor nivel correspondi a la

cepa GV con 45,19 mg/L Fe3+ y 30,63 mg/L Fe3+ para 50 g/L bauxita de esta
manera se estableci una secuencia decreciente en los niveles de biolixiviacin
de hierro para los distintos tratamientos en condiciones estticas: donde
N>GV>RN>V>VC>B>BA>G>RO
GV>VC>B>V>RN>N>RO>G>BA
para
para
50
100
g/L
g/L
de
de
bauxita,
bauxita
B>V>N>RN>BA>G>VC>GV>RO para 200 g/L de bauxita.
Para el tratamiento con agitacin se observ una tendencia similar, no

obstante aunque los niveles de biolixiviacin fueron menores que los
correspondientes al tratamiento esttico su tiempo de incubacin fue menor,
destacando las Cepas Tipo N, VC y BA con 46,77; 38,35 y 26,60 mg/L Fe3+
respectivamente, con 7.94, 6.51 y 4.52 veces ms hierro solubilizado que el
control respectivo, con la secuencia: BA>V>N>GV>VC>RN>RO>V>G para 50
g/L de bauxita, N>BA>GV>VC>B>RN>RO>V>G para 100 g/L de bauxita y
N>VC>BA>RO>RN>B>V>GV>G para 200 g/L de bauxita.
83
La Cepa Tipo N destac para las dos condiciones de cultivo y los

distintos tratamientos, debido a que estuvo presente para los tres mayores
niveles de solubilizacin de Fe3+, por lo que se emple dicha cepa en el
experimento multifactorial de biolixiviacin.
84
85
LIXIVIACIN QUMICA
Los controles de lixiviacin qumica permitieron establecer la relativa

solubilidad del aluminio y hierro contenidos en la bauxita gibbstica, bajo las
condiciones de lixiviacin, usando preliminarmente cidos comerciales as como
la variacin de los parmetros considerados respecto al tiempo (Ver Figuras 9,
10 y 11). De esta manera, se determin que el pH se increment a partir del pH
inicial 2,2, al transcurrir el tiempo de incubacin de manera progresiva en
todos los casos, observndose menor variacin relativa en el pH de los
tratamientos con cido ctrico con pH final de 2,81 y 3,30 para los tratamientos
de 100 g/L y 200 g/L de bauxita respectivamente, asimismo el cido oxlico
mostr la ms rpida variacin para un pH final de 5,55 y 5,13, mientras que la
tendencia del cido sulfrico fue intermedia, mostrando ambos la mayor
variacin ascendente de pH para el primer muestreo a los 5 das, seguido de
una fase de estabilizacin relativa. Como se observa en la Figura 9, no se
evidencian variaciones importantes en el pH en relacin con las distintas
densidades de pulpa.
La lixiviacin de hierro fue sustancialmente mayor en los tratamientos

con cido ctrico (Ver Fig. 10), evidencindose adems para este caso una
marcada variacin respecto a la densidad de pulpa, obtenindose los mayores
niveles de lixiviacin de Fe3+ en el tratamiento con 200 g/L de bauxita para un
mximo de 353,41 mg/L Fe3+ (13.8 das) y una concentracin final de 290,45
86
mg/L Fe3+ (20 das). Dicha tendencia se mantuvo para los tratamientos con
cidos sulfrico y oxlico, pero en menor proporcin, obtenindose apenas 28,4
mg/L Fe3+ para el final de la experiencia en el tratamiento con cido sulfrico y
200 g/L bauxita.

concentracin de glucosa (mg/ml), determinado espectrofotomtricamente
usando el sistema acoplado de reaccin enzimtica Glucosa Oxidasa
Peroxidasa (GOD-POD).
La lixiviacin de aluminio denota una tendencia similar a la presente en el

caso del hierro, pero cuantitativamente superior (Ver Fig. 11), con los mayores
niveles de lixiviacin en el tratamiento de cido ctrico con 200 g/L de bauxita
para un mximo de 1.316,88 mg/L Al3+ (17,04 das) y un nivel final de 1.197,16
mg/L Al3+ (20 das).
87

concentracin de hierro (Fe2+) (mg/L), determinado espectrofotomtricamente
con 1,10-fenantrolina.

concentracin de aluminio (Al3+) (mg/L), determinado espectrofotomtricamente
con Eriocromocianina R.
88
Los tratamientos con cido sulfrico y oxlico presentaron un

comportamiento oscilante pero tendiente a la estabilizacin, para un mximo de
221,0 mg/L Al3+ con cido oxlico y 100 g/L de bauxita.
Figura 9: Variacin del pH como una funcin del tipo de cido y la densidad de
pulpa en los Controles de Lixiviacin Qumica, para un pH inicial de 2,2.
89
Para el caso del cido ctrico, relacionndose el mximo nivel de aluminio

lixiviado con respecto al nivel de hierro para ese periodo, se obtiene una
lixiviacin total de 1.660,3 mg/L (17,04 das) y 961,7 mg/L (20 das) de metal
lixiviado para los tratamientos 200 y 100 g/L de bauxita. Representando 3,1 y
2,5 % de extraccin de aluminio respectivamente. (Ver Tabla 9)
Figura 10: Lixiviacin de Hierro en Bauxita Gibbstica como una funcin del tipo
de cido y la densidad de pulpa para un pH inicial de 2,2.
90
Para las condiciones experimentales el mejor agente lixiviante fue el

cido ctrico, seguido por el cido oxlico y en menor proporcin el cido
sulfrico (Ver Tabla 9), presentando adems velocidades iniciales de lixiviacin
de 52,49 y 116,50 mg Al3+/da para los tratamientos con 200 y 100 g/L de
bauxita. Evidencindose mayor afinidad por el aluminio, lo que determina la
existencia de selectividad en el proceso de lixiviacin.
Figura 11: Lixiviacin Qumica de Aluminio en Bauxita Gibbstica como una

funcin del tipo de cido y la densidad de pulpa para pH inicial de 2,2.
91
Tabla 9: Porcentajes mximos de extraccin de aluminio y hierro para los

distintos tratamientos de lixiviacin qumica usando cidos comerciales.
cido
% Recuperacin
Mxima de
Aluminio
% Recuperacin
Mxima de
Hierro
cido Sulfrico
DP 10 %
DP 20 %
0,7
0,4
0,1
0,1
cido Oxlico
DP 10 %
DP 20 %
0,9
0,4
0,2
0,2
cido Ctrico
DP 10 %
DP 20 %
3,1
2,5
1,8
2,0
92
BIOLIXIVIACIN DE ALUMINIO Y HIERRO PRESENTES EN BAUXITA

GIBBSTICA
Variacin de Parmetros del Proceso de Biolixiviacin
pH:
En la Figura 12 se observa un patrn comn de mayor variacin
del pH que determina un descenso rpido en un periodo menor a seis das para
un rango de 2,43 a 3,09, lo que implica una disminucin mxima de 4,07 a 3,41
unidades de pH respecto al pH inicial de 6,5, indicando la existencia de una
fase de mxima acidificacin del medio denotada por una notable inflexin en la
grfica respectiva para todos los tratamientos, seguida del incremento gradual y
progresivo del pH, hasta una etapa de relativa estabilizacin posterior a los
quince das de cultivo. Resaltando el tratamiento de 40 g/L Glucosa 20% DP,
que experiment la variacin ms brusca al incrementarse el pH a partir de los
23 das por encima del pH inicial hasta obtener un pH final de 7,30 para 40 das
de cultivo (Ver Tabla 10), asimismo se observa una tendencia ms marcada a
valores de pH cidos y menor variabilidad para los tratamientos con 60 g/L
Glucosa y las diferentes densidades de pulpa, a partir de los seis das de
cultivo.
93
Tabla 10: Datos experimentales de los tratamientos de Biolixiviacin de Aluminio y Hierro en cultivos con agitacin
de la Cepa Tipo N, variando la densidad de pulpa para concentracin inicial de glucosa 40 g/L.
So = 40 g/L
t (d)
S (g/L)
PFe (mg/L)
PAl (mg/L)
pH
0
40,0
44,4
37,3
6,45
2,00
16,7
48,6
150,3
3,09
3,08
5,2
107,2
342,0
2,64
4,00
2,2
95,5
976,2
2,56
6,04
0,1
120,6
1351,0
3,49
8,08
0,1
127,0
1298,2
3,52
So = 40 g/L
t (d)
S (g/L)
PFe (mg/L)
PAl (mg/L)
pH
0
40,0
0,0
33,1
6,48
0,95
24,2
0,0
46,0
6,33
2,04
15,6
0,0
38,2
4,78
3,00
11,5
10,5
46,3
3,22
3,65
10,6
64,0
66,3
2,67
4,06
6,2
60,6
65,3
2,62
So = 40 g/L
t (d)
S (g/L)
PFe (mg/L)
PAl (mg/L)
pH
0
40,0
0,0
27,5
6,51
2,13
11,4
25,9
64,2
3,48
4,00
1,9
141,1
84,7
3,1
7,83
1,6
71,9
78,5
3,9
12,99
1,0
8,6
60,3
5,38
16,03
1,0
1,9
51,5
5,91
B = 100 g/L
10,17
0,0
154,0
1249,1
3,52
15,17
0,0
221,0
1141,9
3,86
18,94
0,0
267,0
696,2
3,98
21,17
0,0
290,6
775,4
4,34
22,89
0,0
148,4
701,4
4,25
25,08
0,0
36,5
489,0
4,65
5,96
4,3
147,2
142,7
2,83
7,96
3,6
197,6
214,1
3,62
15,00
1,9
267,9
178,7
3,82
20,12
1,7
219,2
136,1
4,12
25,08
1,7
51,2
97,2
4,64
35,67
0,5
60,7
88,0
4,53
22,95
0,1
5,4
25,5
6,62
25,87
0,0
13,7
30,3
6,66
29,16
0,0
14,2
27,6
7,26
32,96
0,0
10,9
27,6
7,03
34,92
0,0
8,1
23,0
7,33
40,00
0,0
10,2
55,3
7,30
12,04
0,0
190,0
1224,8
3,68
B = 150 g/L
4,77
5,4
78,4
122,5
2,54
B = 200 g/L
20,70
0,4
12,6
33,5
6,06
Tabla 11: Datos experimentales de los tratamientos de Biolixiviacin de Aluminio y Hierro en cultivos con agitacin
de la Cepa Tipo N, variando la densidad de pulpa para concentracin inicial de glucosa 60 g/L.
So = 60 g/L
t (d)
S (g/L)
PFe (mg/L)
PAl (mg/L)
pH
0
60,1
0,0
27,6
6,46
2,00
29,3
30,5
89,9
3,2
3,08
13,3
35,7
247,5
2,62
4,00
6,0
36,0
353,9
2,50
6,04
1,3
30,7
411,2
3,10
8,08
0,9
28,1
696,7
2,85
So = 60 g/L
t (d)
S (g/L)
PFe (mg/L)
PAl (mg/L)
pH
0
60,0
0,0
46,0
6,49
0,95
48,9
0,0
122,2
6,43
2,04
46,6
63,5
221,5
4,59
3,00
43,6
71,4
269,8
3,02
3,65
36,0
173,9
216,4
2,75
4,06
21,0
189,4
416,2
2,47
So = 60 g/L
t (d)
S (g/L)
PFe (mg/L)
PAl (mg/L)
pH
0
60,0
0,1
2,8
6,50
1,79
19,1
9,9
412,6
2,58
4,71
5,8
9,5
818,7
2,49
9,96
4,0
11,8
1466,1
3,60
12,88
2,9
22,5
1662,2
3,44
17,55
2,0
21,9
1381,3
3,74
B = 100 g/L
10,17
0,3
32,5
865,2
3,12
12,04
0,0
95,2
829,1
3,40
15,17
0,0
55,3
823,3
3,50
18,94
0,0
43,1
681,5
3,65
21,17
0,0
42,4
653,8
3,70
22,89
0,0
39,5
565,9
3,72
25,08
0,0
49,2
584,2
4,51
15,00
1,9
62,1
2302,2
3,58
19,83
1,6
79,1
1473,4
3,85
25,08
1,4
120,2
1265,3
3,97
30,46
1,0
118,2
666,0
3,84
40,83
0,0
74,6
298,4
3,92
29,84
0,2
20,2
708,2
4,10
31,80
0,0
19,3
684,5
4,10
33,55
0,0
18,1
653,8
4,38
37,63
0,0
16,7
809,2
4,26
41,84
0,0
16,7
838,9
4,10
B = 150 g/L
5,96
10,7
133,8
781,4
2,43
7,96
1,9
100,3
983,5
2,54
B = 200 g/L
20,80
1,5
22,0
1188,6
3,87
22,76
1,1
21,4
896,2
3,98
95
Figura 12: Variacin del pH de los tratamientos de Biolixiviacin de la Cepa

Tipo N, como una funcin de la densidad de pulpa y la concentracin de
glucosa, para pH inicial de 6,5.
Consumo de Glucosa:
Como se observa en la Figura 13, para todos
los tratamientos cerca del 95% del sustrato fue consumido durante los primeros
ocho das, mostrando una acelerado consumo de glucosa que evidencia una
notable inflexin para el quinto da, que determin una posterior fase estable de
consumo residual.
Figura 13: Consumo de Glucosa en los tratamientos de Biolixiviacin de la

Cepa Tipo N, como una funcin de la densidad de pulpa y la concentracin
inicial de glucosa.
Biolixiviacin de Aluminio: la Figura 14 muestra una marcada

tendencia de incremento progresivo de los niveles de biolixiviacin de aluminio
(Al3+), que se mantuvo durante los primeros diez das, llegando en cada caso a
un mximo de lixiviacin, que disminuye progresivamente, permaneciendo una
fraccin residual para el final del cultivo. Los tratamientos de 60 g/L Glucosa,
para las densidades de pulpa de 20 y 15% de densidad de pulpa, denotaron los
98
mayores niveles de biolixiviacin de aluminio con mximos de 2.302,2 y 1.662,2

mg/L de Al3+, que representan niveles de extraccin de 5,9 y 3,2% (Ver Tabla
12), aunque para el final del cultivo los niveles residuales de aluminio fueron
considerablemente bajos con 298,4 y 838,9 mg/L Al3+ respectivamente es decir
entre 13 y 51% del mximo alcanzado; no obstante el tratamiento 40 g/L
Glucosa 10% de densidad de pulpa, de manera proporcional mostr el
segundo mayor nivel de extraccin de aluminio con un 5,2%, para un mximo
de 1.351,0 mg/L a 6 das de cultivo. Los tratamientos de 40 g/L Glucosa para 15
y 20 % de densidad de pulpa, mostraron poca variacin relativa y los menores
niveles de biolixiviacin con mximos de 214,1 y 84,7 mg/L de Al3+
respectivamente, para 0,6 y 0,2% de extraccin.
Biolixiviacin de Hierro: La Figura 15 muestra una tendencia
de
biolixiviacin similar a la observada en el caso del aluminio, pero

proporcionalmente menor, con un descenso ms pronunciado desde el mximo
de Fe3+ solubilizado, destacando los tratamientos de 40 g/L Glucosa para 10 y
15% de densidad de pulpa, con los mayores niveles de lixiviacin para 290,6 y
267,9 mg/L Fe3+ (Ver Figura 15a), recuperndose solo 3,3 y 2,0%
respectivamente (Ver tabla 12). Solo los tratamientos de 40 g/l Glucosa para 15
y 20% de densidad de pulpa, mostraron mayores niveles de extraccin de hierro
que aluminio con 2,0 y 0,8% respectivamente.
99
Como se muestra en la Figura 15b, el tratamiento de 60 g/L Glucosa

15% de densidad de pulpa, presenta la mayor velocidad de biolixiviacin de
hierro de todos los tratamientos con 189,4 mg/L Fe3+ (4.06 das), mientras que
para 20% de densidad de pulpa los niveles fueron prcticamente residuales
durante el proceso.
Figura 14: Biolixiviacin de Aluminio en los tratamientos con la Cepa Tipo N,

como una funcin de la densidad de pulpa y la concentracin inicial de glucosa
100
Figura 15: Biolixiviacin de Hierro en los tratamientos con la Cepa Tipo N,

como una funcin de la densidad de pulpa y la concentracin inicial de glucosa.
101
Los mximos de lixiviacin de aluminio y hierro indican cronolgicamente

que en la mayora de los tratamientos, se obtuvo inicialmente el mximo nivel
de biolixiviacin de aluminio y secundariamente el de hierro, evidencindose
coincidencias en los mximos para los dos tratamientos de 20% de densidad de
pulpa.
Tabla 12: Porcentajes mximos de recuperacin de aluminio y hierro para los

distintos tratamientos de biolixiviacin usando la Cepa N.
[Bauxita] (g/L)
[Glucosa] (g/L)
% Recuperacin
de Aluminio
% Recuperacin
de Hierro
100
40
100
60
150
40
150
60
200
40
200
60
5,2
3,3
0,6
5,9
0,2
3,2
3,3
1,1
2,0
1,4
0,8
0,1
Cabe resaltar que para los tratamientos de 40 g/L Glucosa 10% DP y

60 g/L Glucosa - 15 y 20% DP en los que se obtuvieron los mximos niveles de
biolixiviacin de aluminio, se solubilizaron 1.471,5; 2.364,3 y 1.684,7 mg/L de
metal respectivamente, solo para el caso del aluminio y hierro, siendo en cada
caso mayor la proporcin del primero. Lo que permite sugerir una mayor
afinidad de los agentes lixiviantes por el aluminio.
102
Parmetros Cinticos del Proceso:
para los mximos niveles de
biolixiviacin de aluminio y hierro en los distintos tratamientos, la determinacin

de estos parmetros permiti relacionar adecuadamente las variables
evaluadas. De esta manera, en la Tabla 13, se observa que las mayores
velocidades de biolixiviacin de aluminio estuvieron presentes en los
tratamientos 40 g/L Glucosa 10% y 60 g/L Glucosa 15% de densidad de
pulpa con 224,0 y 153,0 mg Al3+/Lda respectivamente y en menor medida 60
g/L Glucosa 20% con 129,0 mg Al3+/Lda.
La velocidad de biolixiviacin de hierro esencialmente baja fue mayor

para los tratamientos 60 g/L Glucosa 15% DP con 47,0 mg Fe3+/Lda y
secundariamente de 35,0 y 18,0 mg Fe3+/Lda, para 40 g/L Glucosa 15 y 20%
DP respectivamente. Para los tratamientos de 40 g/L de Glucosa se observa en
la velocidad una tendencia a incrementarse conjuntamente con la densidad de
pulpa.
Los datos de velocidad de consumo de glucosa permiten inferir de

manera general que esta desciende al incrementar la densidad de pulpa siendo
la mxima para 60 g/L Glucosa 10% DP con 9,725 g/Lda y la menor 60 g/L
Glucosa 20% DP con 5,628 g/Lda.
La mayor productividad de aluminio se observ en el tratamiento 40 g/L
Glucosa 10% DP con 5,61 mg Al3+/gGlucosada, lo que representa ms del
103
doble (2,13 veces) del tratamiento ms cercano de 60 g/L Glucosa 15% DP y

10 veces ms que el menos productivo. No se observ relacin directa entre la
productividad de aluminio y la densidad de pulpa.
La productividad de hierro fue notablemente baja con un mximo de 1,20

mgFe3+/gGlucosada, destacando que en el tratamiento 40 g/L Glucosa 20%
DP la productividad de hierro fue mayor que la de aluminio. Los niveles de
productividad de hierro fueron generalmente menores a los de aluminio.
Desde el punto de vista de rendimiento del proceso de biolixiviacin de

aluminio respecto al consumo de glucosa, se obtuvo un mximo de 39,6 mg
Al3+/g Glucosa para 60 g/L Glucosa 15% DP, seguido de 33,9 y 29,1 mg Al3+/g
Glucosa, para 40 g/L Glucosa 10% DP y 60 g/L Glucosa 20% de densidad
de pulpa.
El rendimiento del proceso de biolixiviacin de hierro fue mayor para los

tratamientos 40 g/L Glucosa 10 y 15% de densidad de pulpa con 7,3 y 7,0 mg
Fe3+/g Glucosa, siendo 60 g/L Glucosa 20% DP el de menor rendimiento con
0,4 mg Fe3+/g Glucosa. Los datos indican que el rendimiento de biolixiviacin de
hierro fue menor respecto al aluminio.
La Figura 16 muestra una marcada diferencia en la relativamente
elevada productividad relativamente elevada de aluminio para el tratamiento 40
104
g/L Glucosa 10% DP respecto a los restantes. La zona de aglomeracin

involucra los tratamientos con productividades entre 2,64 y 0,74.
La Figura 17 permite relacionar la productividad de hierro respecto a la

tasa de dilucin (1/da), mostrando de manera evidente a los tratamientos 60
g/L Glucosa 15% y 40 g/L Glucosa 20% de densidad de pulpa como los ms
productivos en el proceso de biolixiviacin de hierro a partir de bauxita
gibbstica.
Figura 16: Relacin Productividad de Al3+ contra Tasa de Dilucin (1/da) para
los diferentes tratamientos de Biolixiviacin con agitacin de la Cepa Tipo N. El
tamao de la circunferencia est referido a la concentracin mxima de
aluminio lixiviado.
105
Tabla 13 : Resumen de datos y parmetros cinticos de los distintos tratamientos de biolixiviacin de aluminio y
hierro presentes en bauxita gibbstica en agitacin, usando la Cepa N para un Xo = 5,28 gps/L.
B (g/L)
So (g/L)
PAl Mx (g/L)
PFe Mx (g/L)
(dPAl/dt)mx (g/Ld)
(dPFe/dt)mx (g/Ld)
- (dS/dt)mx (g/Ld)
Al (mgAl/gGlucosad)
Fe (mgFe/gGlucosad)
YAl/S (mgAl/gGlucosa)
YFe/S (mgFe/gGlucosa)
100
40
100
60
150
40
150
60
200
40
200
60
1,351
0,291
0,224
0,014
-9,448
5,61
0,34
33,9
7,3
0,856
0,095
0,085
0,008
-9,725
1,43
0,13
14,5
1,6
0,214
0,268
0,027
0,018
-7,260
0,74
0,47
5,9
7,0
2,302
0,189
0,153
0,047
-7,299
2,64
1,20
39,6
4,9
0,085
0,142
0,021
0,035
-9,528
0,56
0,93
2,2
3,7
1,662
0,023
0,129
0,002
-5,628
2,26
0,03
29,1
0,4
Nomenclatura:
B : Concentracin de Bauxita / Densidad de Pulpa (g/L)
So : Concentracin inicial de Glucosa (g/L)
Xo : Biomasa inicial (gPESO SECO/L)
PAl : Concentracin de Aluminio (g/L)
PFe : Concentracin de Hierro (g/L)
(dPAl/dt)mx : Velocidad Mxima de Lixiviacin de Aluminio (g/Ld)
(dPFe/dt)mx : Velocidad Mxima de Lixiviacin de Hierro (g/Ld)
- (dS/dt)mx : Velocidad Mxima de Degradacin de Glucosa (g/Ld)
Al : 1/S*(dPAl/dt) Productividad Especfica para Aluminio (gAl/gSd)
Fe : 1/S*(dPFe/dt) Productividad Especfica para Hierro (gFe/gSd)
YAl/S : Rendimiento para Aluminio (gAl/gS)
YFe/S : Rendimiento para Hierro (gFe/gS)
Los parmetros cinticos del proceso de biolixiviacin de aluminio y

hierro a partir de bauxita gibbstica (Ver Tabla 13), permiten postular
fundamentalmente a los tratamientos 60 g/L Glucosa 15% DP y 40 g/L
Glucosa 10% DP, como los ms productivos y de mejor rendimiento, para las
condiciones experimentales y la Cepa Tipo N empleada en el proceso.
Figura 17: Relacin Productividad de Fe3+ contra Tasa de Dilucin (1/da) para
los diferentes tratamientos de Biolixiviacin con agitacin de la Cepa Tipo N. El
tamao de la circunferencia est referido a la concentracin mxima de
aluminio lixiviado.
De esta manera en las Figuras 18 y 19 se relacionan grficamente los

cuatro parmetros estudiados, observndose para el tratamiento de 60 g/L de
Glucosa 15% Bauxita, coincidencias notables entre el descenso brusco del pH
hasta el pH mnimo de 2,43 donde se evidencia la inflexin con su posterior
ascenso y el acelerado consumo de glucosa, antes de los 8 das de cultivo,
seguido de un incremento progresivo de la extraccin de aluminio, que tuvo su
mximo para 2.302,2 mg/L de Al3+ (15 das), asimismo se observa que el
agotamiento de la glucosa seguido del ascenso y estabilizacin sucesiva del
pH, determinan una disminucin acelerada de los niveles de aluminio en
solucin (Ver Figura 18).
Figura 18: Biolixiviacin de Aluminio respecto al consumo de glucosa y pH del

medio para el tratamiento de 60 g/L Glucosa y 15% DP con agitacin de la
Cepa Tipo N.
108
Figura 19: Biolixiviacin de Hierro respecto al consumo de glucosa y pH del

Cepa Tipo N.
La biolixiviacin de hierro para el tratamiento 60 g/L Glucosa 15% DP

(Ver Figura 19), denota una variante, que implica la existencia de los mayores
niveles de solubilizacin de Fe3+ (189,4 mg/L), en conjunto con los mayores
niveles de acidez (pH = 2.47) y alta tasa de consumo de glucosa, para un
periodo menor a ocho das, siguiendo posteriormente desde el mximo un
descenso progresivo de la concentracin de hierro soluble, con fluctuaciones
alternantes.
La Figura 20 muestra similar tendencia, donde se observa claramente

para el tratamiento 40 g/L Glucosa 10% DP, una correlacin entre el proceso
de acidificacin acelerada, la degradacin casi total de la glucosa y la
109
biolixiviacin progresiva de Al3+, hasta su mximo de 1.351,0 mg/L a los 6.04

das, observndose posteriormente un declive en los niveles de aluminio
soluble, paralelo al incremento del pH y agotamiento de la glucosa. Asimismo,
la Figura 21, muestra una tasa de biolixiviacin de Fe3+ menor, con un aumento
gradual para un mximo de 291 mg/L Fe3+ en un periodo de 21.17 das, seguido
de un descenso violento a 36,5 mg/L para el final del cultivo.
Figura 20: Biolixiviacin de Aluminio respecto al consumo de glucosa y pH del

Cepa Tipo N.
110
Figura 21: Biolixiviacin de Hierro respecto al consumo de glucosa y pH del

Cepa Tipo N.
111
6.
DISCUSIONES
Aislamiento, Caracterizacin y Seleccin de Cepas
Las cepas indgenas seleccionadas y denominadas Cepa Tipo (Ver Tabla

8) obtenidas a partir de los Ciclos de Adaptacin, mostraron tolerancia a las
condiciones de acidez (1,5 < pH < 3,5), concentraciones de Fe
3+
(mxima de
160 mM) y presencia de bauxita gibbstica (mxima de 200 g/L de tamao de

partcula 250 m) lo cual determina condiciones de elevada abrasin y
viscosidad en los distintos experimentos, que favorecen el uso potencial de
microorganismos indgenas en experimentos de biolixiviacin, en concordancia
con Torma (1982), por cuanto varias cepas pueden ser adaptadas
a altas
concentraciones de metales mediante incremento sucesivo del contenido del

metal o mineral en el cultivo. Asimismo, los resultados mostraron que las
condiciones selectivas permitieron obtener finalmente siete Cepas Tipo de que
resultaron
ser
hongos
filamentosos,
as
como
dos
microorganismos
levaduriformes, dicho resultado es concordante con el favorable uso de

microorganismos hetertrofos y especficamente hongos, en experimentos de
biolixiviacin de metales en minerales no sulfurosos, a partir de la generacin
de distintos cidos orgnicos y sustancias quelantes o acomplejantes, debido a
las caractersticas mineralgicas de la bauxita compuesta en mayor medida por
xidos de aluminio y hierro (Ver Tabla 6) . Las condiciones de aislamiento y
112
seleccin permitieron obtener cepas tolerantes a las diferentes condiciones

selectivas y con potenciales diferenciales de biolixiviacin de aluminio y hierro,
no obstante se emple como criterio selectivo final los niveles de biolixiviacin
de Fe3+, debido a que este constituye la principal impureza a ser removida en el
proceso de beneficiacin del mineral, resultando la Cepa Tipo N como la mejor
ya que mostr tres de los mayores niveles de remocin de Fe3+, en cinco de
los seis tratamientos del Ciclo Terciario de Adaptacin (Ver Figura 5).
Lixiviacin Qumica
Los distintos cidos usados separadamente en los experimentos de

lixiviacin qumica, presentan un comportamiento diferencial y selectivo, en
cuanto a los niveles de solubilizacin de aluminio y hierro presentes en bauxita
(Ver Figuras 10 y 11). Siendo cido ctrico el agente lixiviante ms eficiente con
353,4 mg/L de Fe3+ y 1.316,9 mg/L de Al3+ para el tratamiento con 20% de
densidad de pulpa, obtenindose en todos los casos niveles mximos de
lixiviacin de ambos metales que descendan hacia el final del perodo de
incubacin, lo cual sugiere una variacin en la selectividad del agente quelante
por los distintos metales presentes en la bauxita, esto se debe mayormente a la
accin quelante de los cidos orgnicos en la solubilizacin del aluminio
(Vachon, 1994), as como la precipitacin progresiva de Al3+ y Fe3+, en distintas
formas insolubles. La variacin del pH desde el valor inicial de 2.2 (Ver Figura
113
9) denot un incremento progresivo, no obstante los tratamientos con cido

ctrico que presentaron menor variacin respecto al pH inicial, mostraron los
mximos niveles de solubilizacin de aluminio y hierro, esto explica la escasa
solubilidad del Al3+ y Fe3+ con cido ctrico y oxlico para valores de pH
menores de 3,0, debido a que la formacin de complejos es menos efectiva
para esos valores de pH, por cuanto los cidos son progresivamente
protonados (Vachon, 1994). La solubilizacin de Al3+ y Fe3+ para los cidos
oxlico y sulfrico fue similar. Las mayores densidades de pulpa presentaron
los mayores niveles de lixiviacin, no obstante las concentraciones de los
cidos pudieron ser limitantes.
El tratamiento con cido ctrico de 20% de densidad de pulpa en su nivel

mximo present una lixiviacin mxima conjunta entre Al3+ y Fe3+ de 1.660,29
mg/L a 17,04 das, lo cual evidencia la potencialidad de uso de este cido
orgnico en ensayos de lixiviacin, as como mayor selectividad por el aluminio
(Ver Tabla 9).
Biolixiviacin de Aluminio y Hierro presentes en Bauxita
La variacin de los parmetros experimentales estudiados indican que

los microorganismos hetertrofos aislados del Yacimiento Los Pijiguaos
especficamente la Cepa Tipo N seleccionada, present altos grados de
adaptacin y produccin de cidos, pero no se observaron niveles elevados de
114
biolixiviacin, sin embargo presenta para las condiciones experimentales

empleadas, capacidad de biolixiviacin selectiva de Aluminio y Hierro a partir de
bauxita gibbstica, derivada probablemente de la produccin extracelular de
metabolitos y la accin de productos del metabolismo secundario (Vachon,
1994), coincidente con una fase previa de acelerada degradacin de glucosa y
acidificacin, que determinan niveles mximos de biolixiviacin, que descienden
hacia el final del tiempo de incubacin para cada tratamiento (Ver tablas 10 y
11).
Variacin de Parmetros del Proceso de Biolixiviacin
pH. El patrn de acidificacin en cada tratamiento determina mximos

descensos de pH a partir del pH inicial (Ver Figura 12), que evidencian en
general una inflexin coincidente a menos de los seis das de incubacin,
seguida de una fase de estabilizacin e incremento de los niveles de pH,
relacionado a los mximos niveles de degradacin de glucosa observados para
ese periodo, lo que implica una aparente neutralizacin progresiva de los cidos
orgnicos generados en dicho proceso, producto de la solubilizacin de
diversas sales presentes en los componentes caolinticos de la bauxita, aunque
no obstante el incremento del pH determina la lixiviacin progresiva de aluminio
y hierro, la cual se ve favorecida por dicho comportamiento y probablemente es
influenciada por las caractersticas fisicoqumicas de los cidos y quelantes
generados. Vachon (1994) reporta una tendencia similar para ensayos de
115
lixiviacin qumica usando cidos orgnicos e inorgnicos como agentes

lixivantes, obteniendo los mayores niveles de lixiviacin de aluminio para
valores de pH menores a 4,0, igualmente cita descensos de pH 7,0 a 3,5, en
cultivos de Aspergillus niger usando solamente1 % de lodo rojo en el medio de
cultivo y Ogurstova (1990) reporta descensos mximos desde pH 6,5 usando
distintas cepas de A. niger hasta 2,85, A. ochraceus 4,00, Cladosporium resinae
4,00, Penicillium chrysogenum, 3,40 en cultivos con bauxita CaoliniticaHemattica-Bohemtica . Asimismo, la tendencia general de variacin del pH en
los tratamientos indican que el mismo aparentemente no es influenciado por la
densidad de pulpa y concentracin de glucosa inicial.
Consumo de Glucosa.
La Figura 13 demuestra una tendencia de acelerado consumo de glucosa

comn a todos los tratamientos y que es complementaria con el descenso
mximo del pH en todos los casos (Ver. Figura 12), pero sin embargo est
parcialmente asociada a la biolixiviacin de aluminio y hierro, lo cual sugiere
que los principales agentes quelantes correspondan posiblemente a metabolitos
secundarios de acuerdo con Burgstaller (1989).
116
Biolixiviacin de Aluminio.
Distintos estudios han demostrado diversos niveles de biolixiviacin de

aluminio y hierro, para distintos microorganismos, Vachon (1994) reporta
experiencias de lixiviacin fungal con hasta 1.880 mg de Al3+/L usando
Penicillium simplicissimun creciendo en presencia de 3 % v/v de lodo rojo y
10.550 mg de Al3+/L usando los exudados cidos extrados de dicho hongo,
asimismo Ogurstova (1990) cita niveles de lixiviacin de Al3+ finales mximos de
240 mg Al2O3/L usando A. niger en presencia de bauxita. De esta manera, la
Cepa Tipo N mostr evidente capacidad de adaptacin a las condiciones
experimentales obtenindose un mximo de biolixiviacin de 2.302,2 mg Al3+/L
para una recuperacin total del 5.9% de Al3+ (15,00 das) para el tratamiento de
60 g/L de glucosa y 15% de DP y 1.351,0 mg Al
3+
/L para 5.2% de Al3+ (6.04
das) en el tratamiento 40 g/l glucosa y 10% de densidad de pulpa (Ver Figura

14), dichos niveles mximos disminuyeron considerablemente hasta el final del
tiempo de incubacin lo cual sugiere la posible prdida de selectividad de los
agentes quelantes o precipitacin de los metales solubilizados, sin embargo son
cuantitativamente mayores a los obtenidos en los ensayos de lixiviacin
qumica.
117
Biolixiviacin de Hierro.
Los niveles de lixiviacin de hierro determinan de manera general mayor

selectividad hacia el aluminio por parte de los agentes lixiviantes producidos, la
tendencia coincidente de disminucin de los niveles de metal a partir de los
mximos de biolixiviacin, sugiere la posible selectividad por otro metal
contenido en la bauxita distinto al Al3+ y Fe3+, posiblemente calcio, sin embargo
tal resultado es discordante con Ogurstova (1990) que reporta mayores niveles
de Biolixiviacin de hierro que aluminio, para mximos de 944 mg de Al2O3/L
usando Aspergillus niger y otras cepas. Los mayores niveles de biolixiviacin
de Fe3+ correspondieron a los tratamientos de 40 g/L Glucosa para 10 y 15% de
densidad de pulpa, con 290,56 y 267,90 mg de Fe3+/L respectivamente (Ver
Figura 15), para 3,3 y 2,0% de recuperacin en cada caso (Ver Tabla 12),
destacando los tratamientos de 40 g/L de Glucosa con 15 y 20% de densidad
de pulpa que mostraron mayores niveles de lixiviacin de hierro que aluminio.
Parmetros Cinticos del Proceso.
La complejidad mineralgica general de la bauxita gibbstica induce

notables variabilidades en el proceso de biolixiviacin y su eficiencia, debido a
que dicha complejidad determina que una parte del aluminio y hierro se
encuentre en fases entrampadas dentro de fases ms abundantes de baja
118
reactividad o porosidad, por lo
que la variacin de algunos parmetros no
puede ser satisfactoriamente explicada.
La mayor variable nutricional la constituy la glucosa que

demostr una tendencia general de degradacin en todos los tratamientos y
cuyas velocidades de degradacin denotaron una disminucin al incrementarse
la densidad de pulpa, lo cual est relacionado probablemente al incremento de
la viscosidad del medio y disminucin de los niveles de oxgeno disponible,
coincidiendo las velocidades mximas con el nivel de descenso acelerado de
pH del medio en cada caso, debido a la produccin de cidos orgnicos y
quelantes, donde Alibhai (1993), cita que usando Aspergillus y Penicillium en
experiencias de lixiviacin de nquel en lateritas niquelferas, que la produccin
de cido oxlico normalmente es precedida por la de cido ctrico, lo cual se
relaciona con los mayores niveles de lixiviacin de Al3+ y Fe3+ obtenidos en las
experiencias de lixiviacin qumica. Para la Cepa Tipo N los tratamientos de 40
g/L de Glucosa 10% DP y 60 g/L de Glucosa 15% DP se destacaron en
cuanto a los parmetros cinticos obtenidos, denotando en general las mayores
velocidades de biolixiviacin, los mximos
Figuras 16 y 17)
de
niveles de productividad (Ver
aluminio (5,61 y 2,64 mg Al3+/gGlucosada
respectivamente) y hierro (0.34 y 1.20 mg Fe3+/gGlucosada respectivamente) y

rendimiento de biolixiviacin de aluminio (33,9 y 39,6 mg Al3+/gGlucosa
respectivamente) y hierro (7,3 y 4,9 mg Fe3+/gGlucosa respectivamente),
evidencindose en casi todos los casos mayor selectividad por la lixiviacin de
119
aluminio (Ver Tabla 13), no obstante tales parmetros representan niveles de

remocin mximos de 5,2% de Al3+ y 3,3% de Fe3+ para el tratamiento de 40 g/L
de glucosa 10% DP, y
5,9% de Al3+ y 1,4% de Fe3+ para el tratamiento de
60 g/L de glucosa 15% DP (Ver Tabla 12), tomando en cuenta que las
concentraciones de aluminio y hierro son elevadas para las condiciones de
cultivo empleadas, probablemente los niveles de cidos o quelantes producidos
son insuficientes, asimismo la tentativa precipitacin de citratos y oxalatos de
aluminio y hierro o su bioabsorcin, determinan la disminucin de incluso ms
del 50% hacia el final del cultivo, respecto a los niveles de lixiviacin mxima
obtenidos en los distintos tratamientos y adems coinciden con la tendencia
observada en las experiencias de lixiviacin qumica. Los tratamientos de 20%
de DP, a excepcin de la elevada productividad (2,26mg Al3+/gSda) y
rendimiento de aluminio (29,1 mg Al3+/gS) con 60 g/L Glucosa, no fueron
resaltantes, lo que determina la necesidad de estandarizar los parmetros de
cultivo, para favorecer su aplicacin, por cuanto Modak (1999), plantea que las
altas densidades de pulpa son preferidas para una posterior escala industrial.
120
7.
CONCLUSIONES
Las siguientes conclusiones se desprenden de los resultados obtenidos

en esta investigacin:
Se aislaron y seleccionaron nueve Cepas Tipo indgenas a partir

de muestras del Yacimiento de Bauxita Los Pijiguaos tolerantes
a las condiciones selectivas y capaces de remover hierro presente
en la bauxita gibbstica, encontrndose que la Cepa Tipo N fue
ms eficiente en los ensayos preliminares de biolixiviacin.
Los resultados sugieren la posibilidad de incorporar cepas

indgenas en el proceso de biolixiviacin de aluminio y hierro.
El cido ctrico constituy el agente lixiviante ms eficiente en los

tratamientos de lixiviacin qumica, observndose variaciones en
los
parmetros
estudiados
que
relacionan
incrementos
progresivos de pH con el aumento en los niveles de lixiviacin de

aluminio y hierro, los cuales descienden progresivamente desde el
nivel mximo, resultando adems limitantes las concentraciones
empleadas.
La Cepa Tipo N produjo agentes lixiviantes capaces de remover

aluminio y hierro presentes en bauxita gibbstica, los cuales actan
con mayor afinidad por el aluminio.
121
Se observ un patrn comn de variacin de pH y degradacin de

glucosa en todos los tratamientos que es relacionable con el
proceso de biolixiviacin de aluminio y hierro para las condiciones
experimentales, obtenindose niveles mximos que descendan
progresivamente hacia el final del cultivo.
Los tratamientos de 60 g/L Glucosa 15% DP y 40 g/L Glucosa

10% DP presentaron los niveles mximos de biolixiviacin, as
como de productividad y rendimiento del proceso.
Los bajos niveles de remocin de aluminio y hierro indican que la

produccin de agentes lixiviantes es insuficiente,
asimismo la
precipitacin, bioabsorcin o prdida de afinidad de dichos

agentes
determinan
probablemente
el
descenso
de
la
concentracin del aluminio y hierro solubilizados.
La biolixiviacin de aluminio y hierro presente en bauxita gibbstica

es
potencialmente
aplicable
como
proceso
alternativo
de
bioprocesamiento o biobeneficiacin.
122
8.
RECOMENDACIONES
A partir del presente trabajo experimental se plantea que se profundice el

mismo en los siguientes aspectos:
Aislamiento y seleccin de nuevas cepas indgenas provenientes de los

yacimientos de inters.
Implementacin de cultivos de biolixiviacin de cepas indgenas
en
cultivos continuos
Estudio de la interaccin de las bacterias u hongos con la matriz

mineralgica en especial la asociacin biomasa/partcula.
Estandarizacin y escalamiento del proceso de biolixiviacin de aluminio

y hierro en bauxita gibbstica para su potencial uso a escala piloto e
industrial.
Estudio
de
las
distintas
relaciones
interespecficas
de
los
microorganismos capaces de biolixiviar metales.
123
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Biolixiviación en Bauxita Ula

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UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

BIOLIXIVIACIN DE ALUMINIO Y HIERRO PRESENTE

Trabajo Especial de Grado presentado por el

Mrida, Octubre de 2003

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

BIOLIXIVIACIN DE ALUMINIO Y HIERRO PRESENTE

Br. David Rolando Quintero Rodrguez

Merida, Octublre de 2003

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

BIOLIXIVIACIN DE ALUMINIO Y HIERRO PRESENTE

Br. David Rolando Quintero Rodrguez

Merida, Octublre de 2003

La biolixiviacin microbiana de metales a partir de minerales es un

Bioleaching of Aluminum and Iron from Gibbsitic

QUIMIOLITOTROFAS Y HETERTROFAS INDGENAS

4.1.1. Muestras de Bauxita, Suelo y Lodos Rojos de las Lagunas de Drenaje de

Localizacin del rea de Muestreo............

Recoleccin y Almacenamiento de Muestras

4.1.2. Medio de Cultivo de Enriquecimiento.............

Condiciones de Cultivo y Ciclos de Cultivo de Enriquecimiento.

4.1.3. Medio de Aislamiento de Cepas Quimiolitotrofas y Hetertrofas Indgenas..

Condiciones de Cultivo y Aislamiento de Cepas...

4.1.4. Seleccin de Cepas y Caracterizacin Preliminar.

4.1.5. Adaptacin de las Cepas Seleccionadas

Ciclo Primario de Adaptacin

4.1.5.1.1. Medio y Condiciones de Cultivo.

Ciclo Secundario de Adaptacin..

4.1.5.2.1. Medio y Condiciones de Cultivo.

Ciclo Terciario de Adaptacin...

4.1.5.3.1. Medio y Condiciones de Cultivo.

SELECCIN DE CEPAS EN BASE A LOS NIVELES DE BIOLIXIVIACIN

Espectrofotomtrica de Hierro Lixiviado con Tiocianato...

4.2.3. Determinacin Espectrofotomtrica de la Concentracin de Hierro Lixiviado

4.2.4. Seleccin de las Cepas a emplear en los Ensayos de Biolixiviacin.

BIOLIXIVIACIN DE ALUMINIO Y HIERRO PRESENTES EN BAUXITA

4.3.1. Obtencin del inculo de la cepa tipo seleccionada..

4.3.2. Experimento Multifactorial..

Medios y Condiciones de Cultivo.

4.3.3. Controles de Lixiviacin Qumica con cidos Inorgnicos y Orgnicos .

4.3.4. Determinaciones Analticas de los Niveles de Biolixiviacin..

Determinacin Espectrofotomtrica de la Concentracin de Hierro con

Determinacin Espectrofotomtrica de la Concentracin de Aluminio con

Determinacin de la Concentracin de Glucosa Residual mediante

4.3.5. Determinacin de Parmetros Cinticos del Proceso de Biolixiviacin...

Tabla 2: : Patentes de algunos procesos biohidrometalrgicos en Yacimientos.

Tabla 3: Composicin qumica del Medio 9K.

Tabla 4 : Experimento Multifactorial de Biolixiviacin de Aluminio y Hierro presente en

bauxita, usando cidos orgnicos e inorgnicos para pH inicial de 2,2, donde Tx

Tabla 6 : Composicin qumica y mineralgica de la bauxita Los Pijiguaos de tamao de

Tabla 7 : Composicin de la bauxita Los Pijiguaos correspondiente, calculada en iones

Tabla 8: Caractersticas fenotpicas relevantes de los microorganismos aislados

Tabla 9: Porcentajes mximos de extraccin de aluminio y hierro para los distintos

Tabla 10: Datos experimentales de los tratamientos de Biolixiviacin de Aluminio y Hierro

Tabla 11: Datos experimentales de los tratamientos de Biolixiviacin de Aluminio y Hierro

Figura 1: Esquema general del proceso de biolixiviacin ..

Figura 2 : Representacin esquemtica de un percolador Air-Lift

Figura 3: Diagrama de flujo del proceso de Lixiviacin en Vertederos e In Situ...

Figura 4: Curva de Calibracin de Absorbancia (Abs.) a 510 nm contra concentracin de hierro

Figura 6: Curva de Calibracin de Absorbancia (Abs.) a 510 nm contra concentracin de glucosa

Figura 7: Curva de Calibracin de Absorbancia (Abs.) a 510 nm contra concentracin de hierro

Figura 8: Curva de Calibracin de Absorbancia (Abs.) a 535 nm contra concentracin de

contra Tasa de Dilucin (1/da) para los diferentes

tratamientos de Biolixiviacin con agitacin de la Cepa Tipo N. El tamao de la circunferencia

En la actualidad es conocida la participacin significativa de mltiples