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3.0
Peptona
5.0
Lactosa
5.0
Instrucciones
Suspender 13 g por litro de agua
destilada. Mezclar bien y distribuir en
tubos con campanitas de Durham.
Esterilizar en autoclave durante 15
minutos a 121C.
Crecimiento
Produc. de gas
Bueno
Bueno
Citrobacter freundii
Bueno
Bueno
Bueno
Bueno
8. TSI Agar
Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base
a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido
sulfhdrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes
adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los
hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario
para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de
iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de
hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio
mantiene el balance osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del
indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de
sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro
proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Frmula (en gramos por litro)
Instrucciones
Extracto de carne
3.0
Pluripeptona
20.0
Cloruro de sodio
5.0
Lactosa
10.0
Sacarosa
10.0
Glucosa
1.0
0.2
Tiosulfato de sodio
0.2
Rojo de fenol
0.025
Agar
13.0
Pico/Fondo
A/A
K. pneumoniae ATCC
700603
A/A
S. typhimurium ATCC
14028
K/A
S. enteritidis ATCC
13076
K/A
P. aeruginosa ATCC
27853
K/K
A: cido
K: alcalino
Caractersticas del medio
Medio preparado: rojo
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
9. Simmons Citrato Agar
Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de
usar citrato como nica fuente de carbono y energa.
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el
citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios
para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el
magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico,
y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio
alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos
capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio
como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato
permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato
da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio
alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono,
producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto
es indicativo de la produccin de citrato permeasa.
Frmula (en gramos por litro)
Instrucciones
Citrato de sodio
2.0
Cloruro de sodio
5.0
Fosfato dipotsico
1.0
Fosfato monoamnico
1.0
Sulfato de magnesio
0.2
Azul de bromotimol
0.08
Agar
15.0
Citrato permeasa
Positivo
Azul
Positivo
Azul
Negativo
Verde
Negativo
Verde
Limitaciones
-Si se usa un inculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar el color
del pico del verde al amarillo-amarronado.
Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la
visualizacin azul de un resultado positivo.
-Inculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos.
-Cuando se siembra una serie de pruebas bioqumicas a partir del mismo cultivo, se
debe esterilizar la aguja de inoculacin antes de inocular la prueba del citrato o sino
inocularla primero. Cualquier arrastre de materia orgnica puede originar resultados
falsos positivos.
Caractersticas del medio
Medio preparado: verde.
10. Mitis salivarius Agar
Agar Mitis salviarius se utiliza para diferenciar entre especies de Streptococcus y la
muy estrecha gnero Enterococcus (antes en el gnero Streptococcus) que son flora
de la boca. Estos organismos son muy comunes en la boca, y se han asociado con la
caries dental, as como agentes de endocarditis. Los azcares de este medio son
sascharose y glucosa, as como los colorantes de azul de tripano y el cristal
violeta. Trypan azul es absorbida por los coolonies bacterianas, haciendo que se
vuelvan de color azul. El cristal violeta, junto con el tellurite 1% aadido a este
medio, inhibir gram -. Bacterias, as como muchas otras bacterias Gram + salivarius
Strep utiliza los azcares para producir un levan gomoso similar, produciendo,,
colonias de goma-drop mucoides pegajosas . estreptococo mitis colonias sern
pequeos, plana, de color azul claro. mutans estreptococo sern colonias en forma
de Undule, con una apariencia de vidrio esmerilado granular (haciendo dextrano a
partir de azcar) Enterococcusproducir, colonias de color azul-negro oscuro.
Frmulas agar Mitis Salivarius (Formula Aproximada Por Litro)
Casena (6.0 g)
Proteosa Peptona el No 3 (9.0 g)
Proteosa Peptona (5.0 g)
Dextrosa (1.0 g)
Sacarosa (50.0 g)
DipotasioFosfato (4.0 g)
Trypan Azul (75.0 mg)
Cristal Violeta (0.8 mg)
Agar (15.0 g) BBL Tellurite Solucin solucin Estril del 1 % del 1%
de Potasio Tellurite
11. Tripteina Soya Agar
Medio utilizado para propsitos generales,favorece el desarrollo y aislamiento de
una gran variedad de microorganismos aerobios, y anaerobios facultativos y
estrictos.
El agregado de sangre, permite el aislamiento y cultivo de microorganismos
aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes y la observacin de reacciones de
hemlisis.
Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el
medio agar chocolate.
Fundamento
La triptena y la peptona de soya aportan nutrientes ricos en pptidos, aminocidos
libres, bases pricas y pirimdicas, minerales y vitaminas. La peptona de soya
aporta tambin carbohidratos que estimulan el crecimiento de muchos
microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
Adicionado con 5-10 % sangre , se logra un medio enriquecido y adecuado para
observar reacciones de hemlisis.
Cuando se prepara como agar chocolate, es til para el cultivo de Neisseria spp.,
Haemophilus influenzae y microorganismos exigentes similares. Incubado en forma
anaerobia, permite el crecimiento de Clostridium spp. y anaerobios NO esporulados.
Es un medio adecuado para cultivar y mantener cepas de Aeromonas, y
aumentando el porcentaje de cloruro de sodio, para mantener cepas de algunos
Vibrios (excepto V. cholerae).
Frmula (en gramos por litro)
Triptena
15.0
Peptona de soya
5.0
Cloruro de sodio
5.0
Agar
15.0
Crecimiento
Hemlisis
Abundante
--
Abundante
Beta
Abundante
Beta
Abundante
Alfa
Abundante
Alfa
pH azul de timol y azul de bromotimol, del color azul al amarillo en medio cido. Es
importante tener en cuenta, que la proporcin de sacarosa en el medio est
equilibrada de forma tal que no inhiba el crecimiento bacteriano por exceso de
cido.
El cloruro de sodio favorece el crecimiento de microorganismos. El tiosulfato de
sodio aporta azufre y junto con el citrato frrico permiten la deteccin de
produccin de cido sulfhdrico.
Aumentando la concentracin de cloruro de sodio y disminuyendo la temperatura
de incubacin, pueden aislarse especies marinas sin importancia sanitaria.
Frmula (en gramos por litro)
Extracto de levadura
5.0
Peptona de carne
5.0
Triptena
5.0
Citrato de sodio
10.0
Tiosulfato de sodio
10.0
Bilis de buey
8.0
Sacarosa
20.0
Cloruro de sodio
10.0
Citrato frrico
1.0
Azul de bromotimol
0.04
Azul de timol
0.04
Agar
15.0
Instrucciones
Resultados
Microorganismo
Crecimiento
Caractersticas de las
colonias
Vibrio cholerae
Bueno
Amarillas de 2-3 mm de
dimetro, de borde
traslcido
V. parahaemolyticus
Bueno
V. alginolyticus
Bueno
Amarillas grandes
Aeromonas spp.
Inhibido
--
E. coli
Inhibido
--
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes
para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la
lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas
decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio,
son los indicadores de la produccin de cido sulfhdrico. El purpura de bromocresol,
es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de
color violeta a pH igual o mayor a 6.8.
Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el
medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La decarboxilacin de la
lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario que la glucosa sea
previamente fermentada.
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son
fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo
al amarillo, pero a las 24 hs de incubacin se observa el pico de color violeta debido
al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.
La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del
medio debido a la formacin de sulfuro de hierro.
Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella,
desaminan la lisina, esto produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual, con la sal de
hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color rojizo en la superficie del
medio.
Frmula (en gramos por litro)
Peptona de gelatina
5.0
Extracto de levadura
3.0
Glucosa
1.0
Instrucciones
Suspender 35 g del medio
deshidratado en un litro de agua
destilada. Dejar embeber unos 15
minutos. Calentar cuidadosamente,
agitando con frecuencia y hervir
Lisina
10.0
0.04
Prpura de bromocresol
0.02
Agar
15.0
Siembra
Por puncin profunda con aguja de inoculacin.
Incubacin
En aerobiosis, durante 24 horas a 35-37 C.
Resultados
1- Decarboxilacin de la lisina:
-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.
-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.
2-Desaminacin de la lisina:
Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y
alguna cepas de Morganella spp.
3-Produccin de cido sulfhdrico:
-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el lmite del pico y
fondo)
Microorganismos
Color en el pico de
flauta
Rojo
Amarillo
Negativo
Prpura
Prpura
Positivo
Prpura
Prpura
Positivo
Providencia spp.
Rojo
Amarillo
Negativo
Citrobacter freundii
Prpura
Amarillo
Positivo
Morganella spp.*
Rojo
Amarillo
Negativo
Edwarsiella spp.
Prpura
Prpura
Positivo
Prpura
Prpura
Negativo
Prpura
Prpura
Negativo
Instrucciones
Infusin de carne
300.0
17.5
Almidn
1.5
Agar
15.0
zonas de inhibicin mas pequeas y por lo tanto informes de falsa resistencia. Para
evaluar el contenido de timidina del lote de agar Mueller Hinton, se prueba la cepa
de control de calidad: Enterococcus faecalis ATCC 29212 frente a discos de TMS. En
un medio satisfactorio, se produce una zona clara de inhibicin de 20 mm o ms.
3-Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar Mueller Hinton es que
las variaciones en cationes divalentes principalmente calcio y magnesio pueden
afectar los resultados con tetraciclina, polimixina y aminoglucsidos cuando se
ensayan cepas de Pseudomonas spp. Por tal motivo, se deben cumplir los lmites de
control de calidad publicados por el NCCLS.
4-Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los organismos
de control para evitar datos aberrantes debido al medio de cultivo. Para aquellas
cepas que fallan de crecer satisfactoriamente sobre Agar Mueller Hinton no
suplementado, se agrega sangre desfibrinada de carnero al agar fundido y enfriado,
a una concentracin final al 5% (v/v).
Para el control de precisin y exactitud del agar de Mueller Hinton se usan las
siguientes cepas control:
S. aureus
E. coli
P. aeruginosa
E. faecalis
ATCC 25923
ATCC 25922
ATCC 27853
ATCC 29212
ATCC 35218