MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

UNIDAD III
REGULACIN METABLICA
3.1 VAS METABLICAS
Se le llama va metablica a las miles de reacciones catalizadas por enzimas que se llevan a cabo
en las clulas vivas, se pueden agrupar en unidades funcionales. (40)
Estas son secuencias de reacciones en las cuales el producto de una reaccin catalizada por alguna
enzima es el sustrato de la siguiente. (40)
En resumen se define como(40):

Protenas que catalizan reacciones qumicas.

Catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse en una reaccin, aumentan

notablemente su velocidad.

No hacen factibles las reacciones imposibles, sino que slamente aceleran las que
espontneamente podran producirse.

En una reaccin catalizada por un enzima:

1. La sustancia sobre la que acta la enzima se llama sustrato. (40)
2. El sustrato se une a una regin concreta del enzima, llamada centro activo, este comprende
un sitio de unin formado por los aminocidos que estn en contacto directo con el sustrato
y un sitio cataltico, formado por los aminocidos directamente implicados en el mecanismo
de la reaccin (Fig.56). (40)
3. Una vez formados los productos la enzima puede comenzar un nuevo ciclo de reaccin. (40)
1.- La enzima y su sustrato 2.- Unin al centro activo 3.- Formacin de productos

Fig. 56 Mecanismo por el cual acta el complejo enzima-sustrato.

Existen dos tipos de vas metablicas:

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 48

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
El anabolismo o biosntesis es una de las dos partes del metabolismo, encargada de la sntesis o
bioformacin de molculas orgnicas (biomolculas) ms complejas a partir de otras ms sencillas
o de los nutrientes, con requerimiento de energa, al contrario que el catabolismo. (40)
Aunque anabolismo y catabolismo son dos procesos contrarios, los dos funcionan coordinada y
armnicamente, y constituyen una unidad difcil de separar. (40)
El anabolismo es el responsable de (40):

La formacin de los componentes celulares y tejidos corporales y por tanto del crecimiento.

El almacenamiento de energa mediante enlaces qumicos en molculas orgnicas.

Un microorganismo que est creciendo rompe molculas de alto peso molecular (almidn)
introduciendo en la clula estos derivados ms pequeos (glucosa, 6C) donde los degrada a
molculas ms pequeas (piruvato, 3C) convirtindolas en aminocidos, nucletidos, vitaminas,
carbohidratos y cidos grasos para finalmente construir a partir de estos materiales bsicos
protenas, coenzimas, cidos nucleicos, mucopptidos, polisacridos y lpidos. Todo este proceso
implica que cientos de enzimas deben de producirse y actuar de una manera coordinada para evitar
el caos. Alrededor de unas 500 reacciones metablicas comunes se conectan con la va glucoltica y
con el ciclo del cido ctrico. Cada reaccin requiere una enzima determinada, la cual, a su vez, es
el producto de toda una serie de reacciones de transferencia de informacin y de sntesis proteica.
(40)

Para realizar todo esto, las clulas poseen una elaborada red de mecanismos de control que regulan
las reacciones qumicas, permitindoles competir eficientemente con otras formas de vida para
poder sobrevivir en la naturaleza. Por lo tanto, una clula ideal no tiene produccin excesiva de
metabolitos ya que una buena regulacin es una ventaja evolutiva; pero por otra parte las clulas no
pueden renunciar a una cierta adaptabilidad que les permita subsistir en ecosistemas diferentes. Esto
ha permitido que existan microorganismos mal regulados en determinados aspectos y que por lo
tanto produzcan en exceso determinados metabolitos. Estos son los microorganismos que nos
interesan. Pero adems, podemos provocar que un microorganismo bien regulado produzca un
determinado compuesto alterando sus mecanismos reguladores. (40)
Vas catablicas: conducen de una variedad amplia de sustancias a unos pocos productos finales
llegando por ltimo a la oxidacin completa de las biomolculas hasta dixido de carbono y agua.
(40)

Transformacin de molculas orgnicas complejas en molculas sencillas y en el almacenamiento

de la energa qumica en forma de ATP, mediante la destruccin de las molculas que contienen
gran cantidad de energa en los enlaces covalentes que la forman, en reacciones qumicas
exotrmicas. (40)

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 49

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

Fig. 57 Ciclo de Krebs

Tipos de catabolismo

Catabolismo de los hidratos de carbono: Es el proceso de obtener energa a partir

de la glucosa que se realiza por tres mecanismos: gluclisis, respiracin celular y
fermentacin. (40)

Catabolismo de las grasas: Consiste en la rotura de los triglicridos en cidos

grasos y glicerol, mediante la incorporacin de tres molculas de agua y la ayuda de
enzimas llamadas lipasas. (40)

Catabolismo de las protenas: Es la escisin de las cadenas polipeptdicas en sus

aminocidos mediante enzimas llamadas proteasas. Los aminocidos obtenidos
tienen un catabolismo diferente y algunos pueden formar glucosa mediante la
gluconeognesis. (40)

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 50

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

En las clulas vivas, las reacciones catablicas y anablicas son activadas de manera simultanea y
las vas catablicas pueden originar molculas que son precursoras o inmediatos de vas anablicas.

(40)

En las clulas, las vas opuestas operan con frecuencia de modo simultneo dentro de un amplio
contexto para el mantenimiento y desarrollo de la clula. La materia del ambiente es absorbida y la
energa es atrada mediante procesos catablicos. Esta energa se emplea para conducir otras
reacciones que contribuyen al mantenimiento, crecimiento y divisin de la clula. (40)
Cada una de las reacciones del metabolismo implica una transferencia de materia y energa.
Las enzimas son catalizadores bioqumicos de naturaleza proteca que intervienen en todas las
reacciones metablicas energticamente posibles las cuales aceleran las reacciones por activacin
especfica. (40)

Fig.58 Secuencia que sigue una reaccin catalizada por enzimas.

La direccin que tomar una reaccin catalizada por enzimas depender del cambio de energa
libre. (40)
Dentro de las clulas el cambio de energa libre que ocurre durante una reaccin dada depende
sobre todo de las concentraciones de los reactantes y productos. (40)
En la Microbiologa son las enzimas las que catalizan las reacciones metablicas y aseguran su
regulacin. Son ellas las que conducen la Ingeniera Gentica para realizar las modificaciones del
sistema enzimtico de ciertos microorganismos para hacerlos aptos para la biosntesis de
metabolitos de inters. Cuando dos molculas chocan producen energa que puede ser disipada en

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 51

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
forma de calor o ser adsorbida por las mismas molculas. Si este fenmeno se presenta en un
sustrato y la energa es suficiente para traspasar la barrera potencial, o sea, la energa de activacin,
el sustrato se puede transformar en un producto diferente al inicio. (40)
Esta energa generalmente es muy elevada y no es compatible con las condiciones del medio al cual
se deben llevar o desarrollar las reacciones del metabolismo de los organismos vivientes. La
realizacin de esta reaccin necesita de enzimas, cuya accin consiste en bajar la energa de
activacin. (40)
El metabolismo es el acoplamiento de reacciones energnicas y exergnicas mediadas por las
enzimas para promover la vida. Las enzimas (catalizadores biolgicos de naturaleza proteca)
aceleran las reacciones metablicas permaneciendo al final inalteradas. (40)

Si el metabolismo microbiano, slo fuera el rompimiento del sustrato en molculas ms pequeas,

pero no indispensables para la clula, se desperdiciara energa, por lo que debe haber mecanismos
de regulacin metablica, con los cuales se tenga la habilidad de metabolizar los nutrientes y
responder a los cambios del medio ambiente, sintetizando slo lo que se ocupa y evitando la
produccin de molculas no necesarias. (40)
Niveles de regulacin metablica en la clula:
1. El primer nivel de regularizacin establece que la velocidad de una reaccin enzimtica esta
en funcin del pH, la temperatura y las concentraciones intracelulares del sustrato y otros
cofactores. (40)
2. El segundo nivel de regularizacin es a travs de una enzima regulatoria. (40)
3. El tercer nivel de regulacin es a travs de un control gentico de la velocidad de sntesis
enzimtico. Los organismos multicelulares con sistemas endcrinos, presentan un cuarto
nivel de regulacin. Las hormonas elaboradas por una glndula endcrina, estimulan o
inhiben las actividades metablicas. (40)
Entre la enorme cantidad de enzimas que un microorganismo es capaz de producir, existen algunas
que siempre estn presentes. Son los llamados enzimas constitutivos. Pero tambin existen otras
que no estn presentes bien lo estn en cantidades mnimas y que ante la presencia de una
sustancia, que suele ser su sustrato, la clula aumenta enormemente su cantidad. Estas son las
denominadas enzimas inducibles y la sustancia que incrementa la sntesis de nuevo de estas
enzimas, se llama inductor. Muchas enzimas catablicas, son inducibles. A esta forma de
regulacin de la expresin de genes, slo cuando el apropiado sustrato del enzima est presente, se
llama induccin. (40)
Algunas enzimas actan con ayuda de estructuras no protecas:
Cofactor: iones o molculas inorgnicas (fig.59). (40)

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 52

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
Fig. 59

Coenzima: molcula orgnica (vitaminas) funcionan como coenzimas (Fig.60). (40)

Fig. 60

Hay dos modelos sobre la forma en que el sustrato se une al centro activo del enzima:

el modelo llave-cerradura
el modelo del ajuste inducido

Modelo llave-cerradura
La estructura del sustrato y la del centro activo son complementarias, de la misma forma que una
llave encaja en una cerradura. Este modelo es vlido en muchos casos, pero no es siempre correcto
(Fig.61). (40)

Fig. 61 Modelo llave cerradura.

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 53

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

Modelo del ajuste inducido

El centro activo adopta la conformacin idnea slo en presencia del sustrato. La unin del sustrato
al centro activo de la enzima desencadena un cambio conformacional que da lugar a la formacin
del producto. Este es el modelo del ajuste inducido que sera algo as como un cascanueces, que se
adapta al contorno de la nuez (Fig.62). (40)

Fig. 62 Modelo del ajuste inducido.

4. El tercer nivel de regularizacin es a travs del control gentico de la velocidad de sntesis

de enzimas (Fig.63). (40)

Fig. 63 Control gentico de velocidad de sntesis de enzimas.

Los organismos superiores multicelulares, son sistemas endcrinos, presentan un cuarto nivel de
regulacin. Las hormonas elaboradas por una glndula endocrina son mensajeras qumicas que
estimulan o inhiben las actividades metablicas. En la Microbiologa Industrial solo importan los
tres primeros. (40)
3.2 TIPOS DE CONTROL UTILIZADOS POR LA CLULA
Para lograr el crecimiento equilibrado, un microorganismo requiere la integracin de un nmero de
rutas metablicas interconectadas que participan en la generacin de energa y la de biosntesis. Las
rutas del anabolismo y catabolismo se llevan a cabo mediante una serie de enzimas, y es a travs de
ellas que se ejerce el control. (40)
Las vas enzimticas tienen que ver con la descomposicin de sustratos llevada a cabo por los
microorganismos, esta actividad metablica global de la clula en crecimiento representa el
funcionamiento de un gran nmero de rutas enzimticas interconectadas que necesitan un balance

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 54

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
muy bueno para funcionar apropiadamente. El control de estas enzimas puede tomar dos formas
bsicas: alteracin de la actividad enzimtica y alteracin en el nmero de molculas de la enzima.
(40)

El metabolismo microbiano esta controlado por la regulacin tanto de la sntesis como de la

actividad enzimtica. Los niveles de control simple, pueden llevarse a cabo, cambiando el grado de
reaccin de una enzima, por ejemplo, alterando el nivel del sustrato. Si el nivel de sustrato es
prximo por debajo del Km (concentracin de sustrato con la cual tenemos la mitad de los centros
activos de la enzima ocupados), la velocidad estar relacionada con la concentracin del sustrato de
acuerdo a la ecuacin de Michaelis Menten (40):
(VMAX[S])

V =

___________
(Km + [S] )

Tipo de controles bioqumicos.

Alteracin de la actividad enzimtica.(33)
1. Control por sustrato.
2. Control alosterico.
3. Control por retroalimentacin.
a)
b)
c)
d)
e)

Simple.
Secuencial.
Mltiple.
Concertado.
Acumulativo

4. Control integral mediante la carga energtica.

5. Modificacin de la enzima.
a) Modificacin irreversible.
b) Modificacin reversible.
Alteracin en el nmero de molculas de la enzima.(28)
1. Control transcripcional.
2. Control traduccional.
3. Degradacin de la enzima.
Control por sustrato
Es el nivel de control ms simple, se puede ejercer al cambiar la rapidez de reaccin de una
enzima, lo cual se logra al modificar la concentracin del sustrato. Si sta es cercana o menor que

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 55

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
la de la enzima, la rapidez se relaciona con la concentracin del sustrato de acuerdo con la relacin
de Michaelis-Menten. (28)
Las enzimas que catalizan una reaccin reversible y dependen de una cierta concentracin de
sustrato para operar, a menudo no parecen tener sustrato suficiente cuando ste se calcula por
clula. Sin embargo, en las clulas eucariticas, la compartimentalizacin permite a las enzimas
asociarse espacialmente en las estructuras membranosas, que pueden dar concentraciones locales
de sustrato muy altas. La misma puede ser enzimtica, cierto para otros factores necesarios para la
actividad como los iones metlicos, co-enzimas y pH.(28)
Control alosterico
El control metablico, puede ser afectado por ciertos metabolitos reguladores (efectores,
modificadores o moduladores), los cuales pueden inhibir o activar la actividad enzimtica. (28)

Hay enzimas que no siguen la cintica de Michaelis-Menten. Cuando la velocidad de reaccin V se

grafica contra la concentracin de sustrato, estas enzimas son complejos con mltiples
componentes difciles de aislar, se trata de enzimas reguladoras conocidas como enzimas
alostericas. (28)
Fig. 64

Velocidad de la reaccin enzimtica vs

concentracin de sustrato. La naturaleza
sigmoidal de la curva que depende del
sustrato, indica que la unin de las
primeras molculas de sustrato mejora la
unin de las primeras molculas
posteriores.
En
las
enzimas
heterotrpicas
la
inhibicin
o
estimulacin dara como resultado
cambios en la Km o en la Vmax de la
enzima.

Alosterismo: es la propiedad de una

protena de cambiar su orden espacial, bajo la influencia de una unin. En este caso, se refiere ms
bien a un cambio de la actividad enzimtica de la protena, pues el centro activo para la accin
enzimtica es alterada total parcialmente. (28)
Enzimas alostericas: no todas las enzimas son del tipo michaelino, estas generalmente son
oligomricas, o sea que estn constituidas por un pequeo nmero de monmeros, varios sitios
especficos, llamados sitios alostericos, para la fijacin de diferentes ligandos, entre ellos el
sustrato, al fijarse sobre las enzimas. Estos ligandos producen una modificacin de la
configuracin del sitio de fijacin del sustrato; facilitan o estorban la asociacin del sustrato a la
enzima, actuando como reguladores del funcionamiento de la misma. (28)

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 56

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
Si esta modificacin en la configuracin favorece la fijacin del sustrato, se trata de un activador
alosterico, que tiende a dar a la enzima una cintica michaelina, en caso contrario tenemos un
inhibidor alosterico, por lo que dar una curva tipo sigmoide. Cuando se obtiene una grfica de
este tipo, implica que existe un efecto cooperativo, es decir, la afinidad de la enzima por sus
sustratos no es constante, entonces se encuentra una baja concentracin de sustrato, el efecto que
ocasiona es un incremento en la afinidad. (28)
De estas se pueden distinguir tres clases (28):
Heterotrpicas: su actividad se ve modificada por un efector de naturaleza diferente al sustrato.
Homotrpicas: el sustrato puede actuar como efector sobre la rapidez de la reaccin enzimtica,
por lo general incrementndola.
Mixtas: algunas enzimas muestran ambas caractersticas.
Interacciones concertadas: este modelo predice que la unin de una molcula de sustrato cambia
en la enzima (todas las subunidades) a una forma de alta afinidad, lo cual puede unir al sustrato ms
rpidamente. El efecto de los inhibidores o de los activadores en una enzima heterotrpica tambin
se puede explicar con este modelo (Fig.65).(28)

Fig. 65 Modelo concertado para las interacciones alostericas.

Interaccin secuencial: sugiere que hay dos estados conformacionales para las subunidades
enzimticas. La unin del sustrato causa un cambio en la conformacin de la subunidad, pero
aumenta o disminuye la afinidad de las subunidades por el substrato. Nuevamente un inhibidor o un
activador puede encajar en el modelo.(28)
Hasta ahora se han revisado enzimas alostericas donde un slo tipo de molculas, que por lo
general es el producto final de una secuencia metablica, controla el flujo de metabolitos a travs
UNIDAD III REGULACIN METABLICA 57

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
de dicha secuencia. Sin embargo existen sistemas donde no solo esta involucrado un solo efecto
sino que pueden existir dos ms efectores (Fig.66). (2)

Fig. 66 Modelo secuencial para las alteraciones alostericas.

3.3 INHIBICIN POR PRODUCTO FINAL

Control por retroalimentacin

Es la que se produce por un cambio conformacional y por tanto la inactivacin (efecto alosterico),
cuando un efector (producto final), se une a un sitio especfico de la enzima (sitio alosterico). (28)
El mtodo por el cual las enzimas reguladoras con comportamiento alosterico controlan varias vas
en su forma ms simple, es el que se conoce como retroinhibicin o inhibicin por producto final.
Se ha encontrado que estas enzimas alostericas se localizan en, o cerca del comienzo de una va
enzimtica y que son inhibidas o estimuladas por el producto final de esa va. Muchos de estos tipos
de control han sido investigados en la sntesis de aminocidos en E. coli y se pueden identificar en
muchos sistemas.(28)
Control por retroalimentacin simple
Un ejemplo de este tipo de control se encuentra en la sntesis del aminocido isoleucina en la E.
coli. Aqu, si se permite que se forme la isoleucina, inhibir la actividad de la treonina-desaminasa,
la primera enzima en la cadena de la sntesis (Fig.67).(28)

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 58

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

TREONINA

Treonindeaminasa
Acido -cetobutrico

Acido -auto--hidroxibutrico

Acido ,-dihidroxi--metilvalrico

Acido -ceto--matilvalrico

ISOLEUCINA
Fig.67 Retroinhibicin simple, inhibicin de la treonina desaminasa por la isoleucina.

Control por retroalimentacin secuencial

En este caso, los productos de una ruta ramificada slo afectan a la enzima que acta desde el punto
de ramificacin, y el punto de ramificacin intermedio afecta la va comn. Un ejemplo de esta
forma de control es la sntesis de los aminocidos aromticos fenilalanina, tirosina y triptfano en
Bacillus subtilis. La formacin de triptfano, fenilalanina y tirosina, inhibe las enzimas en el punto
de ramificacin, lo cual provoca la formacin de cido corsmico. El exceso de cido corsmico, a
su vez, inhibe las primeras enzimas de la secuencia que conduce a este cido (Fig.68).(28)

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 59

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

PEP + eritrosina 4 PO4

Acido shikmico 5 PO4

Acido 3-enolpiruvilshikmico 5 PO4

Acido corsmico

Acido prefnico

Acido fenilpirvico

Acido anatranlico

TRIPTOFANO

FENILALANINA

TIROSINA
Fig. 68 Retroinhibicin secuencial, control de la biosntesis de tirosina, fenilalanina y triotfano.

Control enzimtico mltiple

La caracterstica de este tipo de control es que la enzima en el comienzo de una ruta ramificada se
presenta en ms de una forma, cada una de las cuales es inhibida por uno de los productos
finales.(28)

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 60

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
Un ejemplo es el control de la lisina, metionina y la isoleucina en la E. coli con la enzima
controlante, asparto-cinasa, que se presenta en tres formas, las cuales son afectadas en forma
separada por la lisina, histionina e isoleucina (Fig.69).(28)

Aspartato
Aspartocinasa
1

Aspartil P

Aspartato semialdehdo

Homoserina P
Dihidropicolinato

LISINA
Homoserina P

TREONINA
Fig. 69 Control enzimtico mltiple.

3.3.1 INHIBICIN CONCERTADA

Control por retroalimentacin concertado
En este caso las enzimas reguladoras en el punto de ramificacin de una va enzimtica, tienen
sitios mltiples para efectores alostericos diferentes, de modo que la inhibicin completa se puede
lograr slo cuando ambos efectores estn presentes. Un ejemplo es el efecto de la fenilalanina y la
tirosina sobre la enzima que forma al cido frnico a partir del cido corsmico (Fig.70).(28)

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 61

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

Acido corsmico

Acido prefnico

Acido fenilpirvico

FENILALANINA

TIROSINA

Fig. 70 Retro control concertado, efecto combinado de la fenilalanina y la tirosina sobre la formacin de
cido prefnico.

3.3.2 INHIBICIN ACUMULATIVA

Control por retroalimentacin acumulativa
Esto ocurre en algunas enzimas regulatorias donde los productos finales de la va son muy
diferentes. La enzima tiene mltiples sitios alostericos en los que los efectores originan
individualmente slo la inhibicin parcial. Se requieren cantidades saturantes de todos los efectores
para completar la inhibicin. Un ejemplo de esta clase de control es la enzima glutamina-sinteasa,
la cual participa en las vas que conducen a varios compuestos como la histidina, el triptfano y la
glucosamina-6-P (Fig.71).(28)

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 62

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

AMP
CTP
HISTIDINA
Glucosamina 6-P
TRIPTOFANO

Alanina

Carbanol 6-P

GLUTAMINA
Glicina
ADP + P
NH4

Glutamina sintetasa
ATP

GLUTAMATO
Fig. 71 Retrocontrol acumulativo de la glutamina sintetasa.

Control integrado mediante la carga energtica

No es razonable esperar que el uso y la produccin de ATP, as como el intermediario de alta
energa, deban encontrarse balanceados dentro de la clula. En perodos cortos, el contenido de la
clula de compuestos adenilados, AMP, ADP y ATO, se puede considerar constante. Por lo tanto,
la cantidad de energa presente en la clula puede considerarse como la proporcin de ATP y ADP
con respecto al total de compuestos adenilados, el ATP es el doble de ADP. Esta suma se conoce
como la carga energtica (28)
:
c arg a energtica =

[ATP ] + 1/ 2[ADP]
[ATP] + [ADP] + [AMP]

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 63

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
la carga energtica tiene efecto sobre algunas enzimas y ste proviene de la funcin enzimtica en
el uso o generacin del ATP, dos de estas enzimas son la fosfofructocinasa y la piruvato deshidrogenasa.(28)
La enzima fosfofructocinasa se sita en una etapa esencialmente irreversible de la gluclisis, la
enzima es estimulada tanto por ADP como por AMP, e inhibida por ATP y nitrato. Por lo tanto, si
la carga energtica dentro de la clula es baja, la fosfofructocinasa se activa y el flujo de carbono a
travs de la gluclisis aumenta para producir ms ATP. La formacin de acetil CoA por la piruvato
-deshidrogenasa a partir de piruvato, el producto final de la gluclisis, tambin es esencialmente
irreversible y, por lo tanto, controla la rapidez con la que funciona el ciclo de Krebs, as como la
produccin de ATP e intermediarios biosintticos. La pruvato-deshidrogenasa es inhibida por
acetil CoA, NADH y ATP y activada AMP. Por lo tanto la enzima puede controlar el flujo de
carbono a travs del ciclo de Krebs dependiendo de los niveles de NADH, ATP y acetil CoA.(28)
Modificacin de la enzima
Las enzimas pueden activarse o desactivarse por modificaciones ya sea reversibles o irreversibles,
que a menudo son efectuadas por otras enzimas.(28)
Modificacin irreversible
Algunas enzimas, en particular las enzimas digestivas, se sintetizan en una forma inactiva conocida
como zimgeno. Esta forma se activa por la accin de una segunda enzima que rompe la molcula
en un punto especfico. Un ejemplo de esta forma de control es el quimiotripsingeno, la forma
inactiva de la quimiotripsina, el quimiotripsingeno se sintetiza en el pncreas y consiste en una
sola cadena polipeptdica, reticulada por cinco enlaces disulfuro. Cuando el enlace peptdico que
une a la arginina 15 y la isoleucina 16 se rompe por la accin de la tripsina, el quimiotripsingeno
se convierte en la quimiotripsina totalmente activa (Fig.72).(28)

Quimiotripsingeno (inactivo)

Tripsina
QUIMIOTRIPSINA (activa)

Quimiotripsina

-QUIMIOTRIPSINA (activa)

Fig. 72 Modificacin irreversible del quimiotripsingeno a quimiotripsina activa.

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 64

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
Modificacin reversible
La modificacin de las enzimas de formas inactivas a formas activas puede ser reversible. Por
ejemplo, una fosforilasa que se encuentra en el msculo existe en dos formas: una activa y otra
inactiva. La forma inactiva pasa a la forma activa por la fosforilacin de un residuo especfico de
serina mediante una enzima fosforilasa-cinasa especfica. Bajo diferentes condiciones, el grupo
fosfato es removido de la enzima activa por una segunda enzima especfica, fosforilasa-fosfatasa,
para producir la enzima inactiva.(28)
Se puede considerar un buen ejemplo, en el metabolismo del glucgeno, una forma de
almacenamiento de glucosa, donde la sntesis y el rompimiento deben ser controlados y
coordinados. En los animales, el metabolismo del glucgeno est bajo el control de hormonas en
una serie compleja de reacciones que incluyen la modificacin reversible de las enzimas.(28)
Otra forma de modificacin reversible de la actividad enzimtica, se encuentra en la enzima
glutamina-sintetasa de E. Coli. La enzima puede ser adenilada (adicin del grupo adenina) por una
enzima adenilil-transferasa, la cual hace a la enzima ms susceptible al
control por
retroalimentacin por parte de la glutamina. Adems, la glutamina inhibe a una enzima
deadenilante, y por lo tanto, un aumento de la glutamina permitir la formacin de ms enzimas
susceptible, reduciendo as la formacin de glutamina (Fig.73).(28)
FOSFORILASA
(b) INACTIVA
+ATP

Pi

Fosforilasa
cinasa

Fosforilasa
fosfatasa
FOSFORILASA (a)
(ACTIVA)

Fig. 73 Activacin e inactivacin de la fosforilasa por fosforilacin reversible de un residuo especfico de

serina.

Alteracin en el nmero de molculas de la enzima

Hay un segundo tipo de control, posiblemente controles aproximados, que determinan el nmero de
molculas de enzima presentes dentro de una clula. Se puede ver que el control es ejercitado tanto
en el estado transcripcional como en el traduccional. Un tercer control posible es un incremento en
la degradacin de la enzima en cuestin sin afectar su rapidez de sntesis, reduciendo as su
concentracin global.(28)
Sistemas procariticos
Los procariotas tienen cromosomas individuales en forma superior arrollada. La expresin
gentica correcta en los procariotas depende de las secuencias de ADN que flanquean las

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 65

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
secuencias de instrucciones. La transcripcin de los genes requiere RNA polimerasas, que pueden
tener asociados los factores polipeptdicos sigma y rho. El factor sigma promueve la unin de la
RNA polimerasa al ADN en sitios especficos ubicados justo antes de las secuencias de
instrucciones de la protena, conocidos como regin del promotor (Fig.74).(28)

Promotor

Gene estructural

RNA
RNA polimerasa
-35
TTGAC
A

-10

0
AUG

TATAAT

Secuencia de Pribnow

secuencia de
unin a los
ribosomas

seal de
iniciacin

Fig. 74 Estructura de las regiones promotoras, en el ADN de los organismos procariotas.

Algo importante en el sitio del promotor, son diez nucletidos ubicados antes de su comienzo,
conocidos como la caja de Pribnow y que contienen la secuencia TATAAT. El segundo sitio est
aproximadamente de 23 a 25 nucletidos cuesta arriba, con la secuencia TTGACA. En los genes
cuya secuencia de bases de la regin del promotor se ha analizado, se ha encontrado poca variacin
entre los promotores que puede tener algn efecto sobre la resistencia del promotor y la longitud de
la copia.(28)
Una vez que se inicia la transcripcin sobre la hebra con sentido del ADN. El factor sigma se
disocia. Una caracterstica adicional de la secuencia de nucletidos ubicada cuesta arriba de la
mayora de los genes, es la presencia de un sitio de unin para los ribosomas o secuencia de Shine
Delgarno. Esto sucede a pocos pares de bases cuesta arriba del codn de iniciacin, que
comnmente es AUG. La terminacin de la transcripcin tambin se realiza en sitios especficos
del ADN, caracterizado por un par de secuencias repetidas invertidas, las cuales, por
emparejamiento interno, originan una estructura de tallo y lazo. En algunos casos es necesario el
polipptido rho para la terminacin de la transcripcin, pero se desconoce su participacin.(28)

3.4 REPRESIN POR PRODUCTO FINAL

Adems de la regin del promotor, existe otra secuencia de bases que es adyacente o traslapa la
regin del promotor conocida como regin del operador. Esta regin es responsable del control de
la unin de la ARN polimerasa al promotor. Las protenas conocidas como represores, se pueden
unir al operador y evitar la transcripcin. Este tipo de control puede funcionar como control
positivo o negativo. (28)

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 66

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
Regulaciones genticas de tipo positivo y negativo:
Control negativo: el opern se transcribe en condiciones normales, pero es detenido por el enlace
de un co-represor con un apo-represor ya presente para formar un represor activo que tiene la
transcripcin. El sistema se expresa a menos que sea desconectado por la accin de una protena
reguladora, a la que se denomina represor. El mecanismo a travs del cual las protenas represoras
de la expresin gnica controlan la transcripcin gnica en los procariotas comienza cuando la
protena represora y el enzima ARN polimerasa se unen fuertemente a diferentes secuencias
especficas de nucletidos del ADN, que reciben el nombre de regin operadora y regin
promotora. Si est presente la protena represora, la ARN polimerasa no puede actuar, no
producindose la transcripcin. Si no est presente la protena represora, la ARN polimerasa se une,
producindose la transcripcin. Esta protena represora reconoce un ligando especfico y esta unin
activa la transcripcin al disminuir la afinidad de la protena represora por su secuencia de ADN
especfica. Este caso de regulacin en el que el gen en condiciones normales est reprimido se
llama induccin negativa (Fig.75).(28)
Dentro de este control podemos distinguir a su vez:
o Control negativo con efectos inductores: el represor es activo, pero se inactiva en
presencia del inductor.
o Control negativo con efectos represores: el represor es inactivo, pero en
presencia del correpresor se activa, y es entonces cuando reprime al opern
estructural.
Control negativo
Promotor

Operador

Gen estructural

Reprime al
operador
Apo-represor
Co-represor
Fig. 75 Controles negativos de la transcripcin del ADN en ARNm.

Control positivo: los genes estructurales no se transcriben (o en todo caso lo hacen a un nivel
basal bajo) a no ser que exista una protena reguladora activa llamado apoinductor o activador que
favorece la combinacin para unir al opern que inicia la transcripcin. En este caso la protena
facilita la unin de la ARN polimerasa. Al igual que las protenas represoras, stas protenas
activadoras se unen a ligandos especficos (inductor) pero en este caso se incrementa la afinidad de
la protena activadora por el ADN con lo que se activa la transcripcin. Si la protena activadora se
halla presente, la ARN polimerasa se une y tiene lugar la transcripcin. Si por el contrario la
protena activadora no se halla presente, la ARN polimerasa no puede unirse no teniendo lugar la
transcripcin. Este tipo de control gnico recibe el nombre de induccin positiva (Fig.76).(28)
Tambin aqu puede haber dos categoras:

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 67

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

Control positivo por induccin: la protena activadora, por s misma es

inactiva, pero queda activada cuando se le une el inductor.

Control positivo con represin: la protena activadora, es activa, pero se

inactiva cuando se le une el correpresor.
Control positivo
Promotor
Operador

Gen estructural

Activa al
operador
Apo-activador
Co-activador
Fig. 76 Controles positivos de la transcripcin del ADN en ARNm.

Represin: desconexin rpida de la ruta biosinttica de un determinado compuesto, cuando ste

aparece en el medio de la bacteria. La represin no siempre tiene que ver con estmulos
nutricionales: se pueden desconectar genes para evitar que su expresin interfiera con otros
procesos que ya estn en curso en la clula.(28)
A modo de ejemplo veamos que ocurre en Escherichia coli en la sntesis de los enzimas que
hidrolizan la lactosa en glucosa y galactosa. Cuando la protena represora est unida a la secuencia
del operador, bloquea el acceso de la ARN polimerasa a su regin de unin (promotor) impidiendo
la transcripcin. Cuando existe lactosa en la clula, sta se une a la protena represora eliminndola
del ADN y con ello permitiendo la unin de la ARN polimerasa, activando la transcripcin. En este
caso la lactosa es un inductor natural del opern Lac de Escherichia coli. Sin embargo, el mejor
inductor del opern Lac es el isopropil -D-galactsido. Por lo tanto, podremos manipular, a nivel
de sntesis, la produccin de un enzima bien sea introduciendo inductores autnticos o anlogos.
Tambin se puede manipular por mutacin del gen regulador (el que codifica para la protena
represora) inactivando la protena represora, o bien por mutacin del operador con lo que la
protena represora no presentar afinidad por l.(28)
Fig. 77 Jean Jacques Monod

3.5 OPERONES, TRIPTOFANO Y LACTOSA

El modelo de la regulacin de los genes de procariotas: el modelo
del opern, fue propuesto en 1961 por Francois Jacob (Fig.78) y
Jacques Monod (Fig.77). El fenmeno que inspiro la idea fue el de
induccin enzimtico. Grupos de genes que codifican para
protenas relacionadas se agrupan en unidades conocidas como
opern, que consiste en: un operador, un promotor, un regulador y

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 68

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
un gen estructural. El regulador codifica para una protena que se pega al operador, obstruyendo al
promotor ( y por lo tanto a la transcripcin) del gen estructural, el regulador no tiene que estar
adyacente a los otros genes del opern. Cuando se mueve la protena represora, puede producirse
la transcripcin. Los operones son inducibles o reprimibles de acuerdo al mecanismo de control.
(40)

Fig. 78 Francois Jacob

Opern: es un grupo de genes estructuralmente relacionados;

los cuales mapean uno muy cerca del otro, en el cromosoma y
ellos pueden ser coordinadamente sintetizados o no, a travs de
un mismo sitio regulatorio. (40)
La formacin de todas las enzimas necesarias para el proceso
sinttico, est controlada a menudo por una secuencia de genes
localizados en serie, uno detrs de otro, formando los mismos
un filamento de DNA cromosmico. Esta rea de filamento de
DNA se llama opern. (40)
En el opern existen diferentes regiones (40):
Sitio promotor: lugar donde se une la RNApolimerasa.
Sitio operador: sitio donde se une la protena presora.
Genes estructurales: genes que codifican protenas requeridas para la clula, ya sea para
funciones enzimticas o estructurales.
La sntesis de un producto bioqumico celular generalmente requiere una serie de reacciones, cada
una de las cuales estn catalizadas por una enzima protica especial. (40)
Cada sntesis tiene su opern, as tenemos el opern de lactosa en donde existe un gen Lac1 que
codifica una protena supresora cuya funcin es controlar la expresin de los genes estructurales.
En el caso que no este presente la lactosa en el medio solo hay una pequea sntesis de enzima
correspondiente a los niveles bsales. (40)
Cuando la fuente de carbono es exclusivamente lactosa, s hay expresin de las enzimas que son
necesarias para el catabolismo. Slo cuando est presente la molcula de lactosa se pueden
expresar los genes del opern. La molcula que incrementa la velocidad de sntesis de enzimas
recibe el nombre de inductor. (40)
Este mecanismo de regulacin se ha clasificado como control negativo ya que los genes del
opern no se transcriben a menos que se encuentre presente el inductor. La presencia del inductor
no es el nico factor que determina la sntesis de enzimas inductibles, se ha demostrado que debe
estar presente AMPc para que la cepa pueda catabolizar los azucares. El AMP tiene la capacidad
de vencer el efecto de represin catablica si se une inicialmente a una protena llamada Cap
alterando su conformacin. A este tipo de control se le llama control positivo, en el que se

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 69

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
requiere forzosamente la activacin de la protena y solo de esta manera incrementa la velocidad
de sntesis del mensajero. (40)
El opern de lactosa corresponde a un opern catablico, pero existen otro tipo de operones que
son los anablicos en los cuales est contenida la informacin relacionada con la sntesis de
enzimas involucradas en la biosntesis de triptfano. (40)
E. coli sintetiza el aminocido triptfano a travs de la accin de la enzima triptfano sintetasa;
pero si aparece triptfano en el medio en el que las bacterias estn creciendo, la produccin de la
enzima es detenida de inmediato, conocindose este efecto como represin. Este hecho permite a
la bacteria evitar dedicar sus recursos a actividades sintticas innecesarias. (40)
Operones
En las bacterias, los genes para funciones relacionadas en un proceso metablico, con frecuencia
se localizan adyacentes entre s y se transcriben como una molcula de ARN mensajero simple
(ARN poliscistrnico). Este ARN mensajero contiene secuencias interpuestas cortas no
codificadoras. Este acomodo de genes se conoce como un opern. Por lo tanto, el ARNm simple
puede producir varias protenas relacionadas rpidamente en la traduccin. (28)
Algunos genes se expresan constantemente y se describen como genes con expresin constitutiva,
mientras que otros pueden inducirse por una seal intracelular. Los genes indecibles presentan
expresin elevada bajo el estmulo apropiado. (28)
El opern lac
El primer opern descubierto fue el opern lac, el cual se compone de tres genes estructurales que
intervienen en la captacin y metabolismo de la lactosa, la -galactosidasa, una permeasa, y
transacetilasa. A contra corriente de los genes estructurales se encuentra un operador, un promotor
y un sitio que es reconocido por una protena que encuentra un operador, un promotor y un sitio que
es reconocido por una protena que acta como activador positivo, conocida como protena
activadora de catabolitos (CAP). Esta protena tiene un sitio de enlace para el AMP cclico AMP
el cual se induce cuando baja la concentracin de glucosa. La unin del AMPc activa a la protena y
le permite unirse al ADN en el sitio cuesta arriba del sitio de reconocimiento de la ARN
polimerasa, lo cual presumiblemente facilita la unin de la ARN polimerasa.(28)
Adems de la regulacin inducible positiva del opern lac, tambin existe un elemento inducible
negativo que reprime al opern en ausencia de lactosa. Una protena represora de lac se une al
operador y evita la transcripcin. La induccin es causada por un ismero de la lactosa llamado
alolactosa que se une a la protena represora dando como resultado la detencin del enlace del
represor lac con el operador e induciendo as la transcripcin.(28)
Sistemas eucariticos
Las clulas eucariticas contienen un ncleo separado del resto de la clula por una membrana, el
cual contiene cromosomas lineales mltiples. Cada cromosoma contiene un ADN individual de
doble hlice, aunque generalmente los cromosomas se encuentran en pares y por lo tanto, contiene
UNIDAD III REGULACIN METABLICA 70

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
informacin homloga. En los mamferos, un par de cromosomas determina el sexo, con dos
cromosas tipo X que determina las caractersticas femeninas y un cromosoma X y uno Y que
determina las caractersticas masculinas.(28)
Genes
-110

-40

-25

-30

estructurales

Secuencia CAAT

Secuencia TATA o de
Goldberg - Hogness

T
T
GC CAA CT
C
A

A A
TATA A
TT

Fig. 79 Estructura de la regin promotora en el ADN de los Organismos eucariotas.

El ADN nuclear se encuentra asociado con protenas, las histonas. Estas protenas son responsables
de mantener la estructura y el metabolismo del ADN, incluyendo la expresin gentica. En las
clulas eucariticas se encuentran tres ARN polimerasas. La ARN polimerasa I es responsable de
la produccin del ARN ribosomal, la polimerasa III de la produccin de ARN de transferencia y la
polimerasa II participa en la produccin del ARNm.(28)
Estos tipos de secuencias que afectan la transcripcin, pueden operar sobre grandes distancias. Las
secuencias mejoradas identificadas en genes virales, pueden actuar sobre distancias de hasta 3 kb.
Estos elementos exhiben homologa secuencial, pero con frecuencia su efecto se restringe a tipos
especficos de tejido. No existe informacin clara sobre seales de terminacin de la transcripcin
en los eucariotas. En la expresin gentica de los eucariotas, se han incluido otras caractersticas
como la capacidad de la hlice para cambiar a la forma Z, as como la presencia de residuos
metilados de citosina como mecanismo para desconectar genes. (28)
Luego de la transcripcin en eucariotas, el ARN mensajero se modifica por adicin de un cap 5, a
partir de un radical 7 metilguanilil, el cual ayuda al ARN mensajero a unirse al ribosoma. Tambin
se adiciona una cola de 100 200 nucletidos de longitud de poli A en el extremo 3 del ARNm y
es sealada por unos 13 20 nucletidos ubicados cuesta debajo de una secuencia AAUAAA.(28)
En conclusin en los sistemas eucariticos se deben tener en cuenta dos cosas:

Existen tres tipos de ARN polimerasa I, II y III.

Los genes estn fragmentados en zonas sin sentido o intrones y zonas con sentido o exones.
Antes han de madurar y eliminar los intrones.

En la trascripcin de eucariontes se distinguen las siguientes fases:

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 71

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
1. Iniciacin: la ARN polimerasa II se une a una zona del ADN llamada promotor (posee
secuencias CAAT y TATA)
2. Elongacin: la sntesis continua en sentido 5-3. Al poco se aade una caperuza (metilguanosn trifosfato) al extremo 5.
3. Finalizacin: parece que est relacionado con la secuencia TTATTT. Ahora interviene
un poli-A polimerasa que aade una cola de poli-A al pre-ARNm (ARNhn).
4. Maduracin: se produce en el ncleo y la hace un enzima llamada RNPpn, que elimina
los nuevos intrones (I) formados.

Posteriormente las ARN ligasas empalman los exones (E) y forman el ARNm.

Intrones
La secuencia de instrucciones de genes eucariticos tambin puede contener secuencias sin
instrucciones llamadas intrones, los cuales se procesan o eliminen del ARNm en el ncleo. Las
secuencias de instrucciones que son interrumpidas por los intrones se llaman exones.(28)
Regulacin por modificacin post traduccional
La secuencia de aminocidos determina las estructuras secundaria y terciaria en las cuales se dobla
la protena. Puede ocurrir tambin otra modificacin que afecte la especificidad, las propiedades y
la actividad de las protenas.(28)
Las protenas destinadas a la exportacin tienen una secuencia principal N-terminal de 15 30
aminocidos, que tiene propiedades hidrofbicas. Esta secuencia tiene alta afinidad por las
membranas y permite la secrecin posterior. En el proceso de secrecin hay tambin remocin de la
secuencia lder por una proteasa. El proceso proteoltico tambin es importante para producir otras
protenas precursoras, por ejemplo, la produccin de insulina a partir de la proinsulina.(28)
Conclusiones

Los procesos enzimticos de los microorganismos estn regulados por ciertos tipos de
controles ya que no se puede llevar a cabo en forma desordenada y aleatoria, de este modo
se evita sntesis inadecuadas y mal funcionamiento del metabolismo.

El control metablico se lleva a cabo por medio de metabolitos que pueden inhibir o activar
la actividad enzimtica y cintica de las bioreacciones.

Existen ciertos tipos de control como son los de retroalimentacin que se realizan por medio
de procesos de inhibicin, por medio de los cuales ciertos compuestos inhiben a las enzimas
en algunos puntos, provocando la formacin, que stos a su vez pueden inhibir a otras
enzimas.

La cantidad de energa presente en una clula tanto en forma de AMP, ADP o ATP tambin
funciona como regulador de ciertos procesos metablicos, ya que la presencia de uno de
stos compuestos activa o cataboliza la formacin de otros compuestos energticos.

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 72

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

Las enzimas pueden activarse o desactivarse por modificaciones reversibles o irreversibles

que son efectuadas por otras enzimas.

Algunas enzimas se sintetizan en forma inactiva por la accin de una segunda enzima que
rompe la molcula en un punto especfico, esta forma inactiva se conoce como zimgeno.

Industrias tradicionales y enzimas asociadas

Las aplicaciones industriales tradicionales se refieren a la produccin de una transformacin til
por alguna enzima, bien sea natural o aadida intencionalmente(25)

Fermentacin.

Curticin.

Fabricacin de queso.

Elaboracin de pan.

Cervecera.

Fabricacin de jugos.

Fabricacin de glucosa y fructosa a partir del maz.
Tabla 2 Industrias tradicionales y enzimas asociadas(25).
Tipo de enzima

Sacarasas e
isomerasas

Actividad econmica
Procesamiento del almidn,
endulzantes y jarabes ricos en
fructosa.

Millones
$/ao

150

Fabricacin de textiles.
Proteinasas

Renninas
(quimosinas)
Lipasas

Celulasas

Detergentes.
Carnes, quesos.
Procesamiento de pescados.
Procesamiento de tejidos.
Coagulacin de la leche para la
produccin de quesos.

400

60

Detergentes.
Procesamiento de pieles.
Saborizantes.
Procesamiento de carne y queso.

20

Produccin de zumos de frutas.

Produccin de olivas.
Modificacin de granos y fibras.
"Envejecimiento" de prendas
vaqueras.

20

UNIDAD III REGULACIN METABLICA 73