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Gentica

de
Microrganismos:
Estrutura dos cidos nuclicos replicao, transcrio, traduo.

Prof. Leandro N. S. Rodrigues


Msc. Biologia Celular e Molecular
Doutorando: Medicina Tropical e Sade Pblica

Cromossomo
Nucleotdeos

Genoma
DNA

Gentica
Estudo das semelhanas e diferenas, a
herana e a variabilidade.

Estuda os mecanismos pelos quais as


caractersticas so transmitidas de um
organismo para o outro e como so
expressas.
Associada a biologia molecular, a gentica
permite
entender
os
mecanismos
celulares.

GENE
definio clssica: gene todo o segmento
de DNA que contm informao para a sntese
de uma cadeia polipeptdica
as regies do DNA que originam diferentes
tipos de RNA. Nesse caso, considera-se como
gene todas as regies do DNA que so
transcritas e tambm fazem parte dos genes
as regies regulatrias para o processo de
transcrio.
Gene toda regio do DNA que codifica a
sequncia primria de algum produto gnico,
que pode ser tanto um polipeptdeo quanto
um RNA com funes catalticas ou
estruturais.

Linha do Tempo

Mendel (1856 1868)

Frederick Griffith (1928): Princpio Transformante

Avery, MacLeod & McCarty (1944): Princpio Transformante = DNA

Erwin Chargaff et al. (1947): composio de A +T e C+G varia em


diferentes organismos mas A = T e C = G , T + C = G +A

Rosalind Franklin & Maurice Wilkins (1950): Difrao de raios X revelou


uma padro de periodicidade e largura uniforme para o DNA

Hershey-Chase (1952): DNA o material gentico do fago T2

Watson & Crick (1953): modelo para estrutura do DNA que explica
todos os resultados anteriores assim como propem modelo para a
replicao da molcula.

Frederick Griffith (1928): PrincpioTransformante

Avery, MacLeod & McCarty (1944):


Princpio Transformante = DNA

Fim da dcada de 40:

1947 - Erwin Chargaff


A composio de bases do DNA geralmente

varia de uma espcie para outra


Espcimes de DNA isolados de diferentes
tecidos da mesma espcie possuem a mesma
composio de bases
A composio de bases do DNA no altera com

a idade do organismo, idade nutricional ou


modificao ambiental
A soma dos resduos das purinas iguala-se
soma dos resduos de pirimidina

1950: Rosalind Franklin e Maurice Wilkins


Mostraram que o DNA produzia um padro de difrao de raio X
caracterstico, deduzindo que os polmeros de DNA so helicoidais

1952: Hershey e Chase


Evidncia de que o DNA transportava a informao gentica

1953: Watson e Crick - estrutura tridimensional do DNA

O DNA composto de duas cadeias


polinucleotdicas helicoidais com giro
para a direita, formando uma dupla
hlice em torno de um eixo central.

FLUXO INFORMACIONAL
REPLICAO: cpia das seqncias de nucleotdeos de uma
molcula de DNA parental de fita dupla em duas molculas
de DNA-filhas de fita dupla semiconservativo.

TRANSCRIO: transferncia da informao para o RNA


(mRNA).
TRADUO: a seqncia especfica de aminocidos em
cada protena determinada por uma seqncia especfica
de bases do mRNA.
Dogma central da biologia molecular

Dogma central da biologia molecular


Replicao do DNA
Reparo de DNA
5

Recombinao gentica

DNA
3
5

Sntese de RNA
Transcrio

5
3

RNA

Sntese protica

Traduo
H2N

COOH

Protena

Dogma Central da
Biologia Molecular

cidos Nuclicos
So macromolculas intracelulares de dois tipos:
cido Desoxirribonuclico (DNA)
cido Ribonuclico (RNA)

Apresentam constituio qumica e funo


biolgica diferente

cidos Nuclicos

cidos Nuclicos

Nucleotdeos
H
H

-O

P
O-

O-

Fosfato

P
O-

N
H

NH2

CH

H H
O
H

H H
H

Deoxiribose

Adenina

Nucleotdeos
O
-O

P
O

O
O

Adenina

O
O

Fosfato

P
O

CH

Base
nitrogenada

H H
O
H

H H
H

Deoxiribose

Nucleotdeos

O
-O

P
O

O
O

Guanina

O
O

Fosfato

P
O

CH

Base
nitrogenada

H H
O
H

H H
H

Deoxiribose

Nucleotdeos

O
-O

P
O

O
O

Timina

O
O

Fosfato

P
O

CH

Base
nitrogenada

H H
O
H

H H
H

Deoxiribose

Nucleotdeos

O
-O

P
O

O
O

Citosina

O
O

Fosfato

P
O

CH

Base
nitrogenada

H H
O
H

H H
H

Deoxiribose

DNA
Constitui o genoma dos seres vivos onde esto contidas todas as
informaes genticas fundamentais para sua existncia.
A partir dele, essas informaes se expressam nas clulas e se
perpetuam na prognie.

DNA tem funo de armazenar e manter a informao gentica


(cdigo gentico).
Conter a informao gentica significa no somente armazenar e
transmitir ao longo das geraes, mas expressar, ou seja, servir de molde
para a sntese de RNAs e alguns desses serem traduzidos nas protenas
correspondentes.

As bases associam-se pentose por uma ligao no


carbono 1 da pentose, e o fosfato associa-se ao
carbono 5 da mesma pentose e ao carbono 3 da
pentose do nucleotdeo adjacente. Esta ultima ligao
chama de fosfodister e constitui a cadeia de
nucletdeos confere uma polaridade a molcula de
DNA que tem funo na replicao e transcrio
chamada de sentido 5 3

Ligao entre as bases:


Pontes de hidrognio

DESNATURAO e RENATURAO do DNA


1961 Marmur e Doty descobriram a renaturao do DNA as duas fitas da
dupla hlice podem ser reversivelmente separadas quando as pontes de
.
hidrognio
so rompidas
Aumento de temperatura ou Extremos de pH ( Aqui pH alcalino para
separar as fitas)

Tipos de RNAs
mRNA: contm a informao gentica para a sequncia de
aminocidos.
tRNA: identifica e transporta as molculas de aminocidos at o
ribossomo
rRNA: representa 50% da massa dos ribossomos
Os ribossomos
rRNA + protenas.
hnRNA: RNAs heterogneos nucleares, precursores dos mRNAs
snRNA: pequenos RNAs nucleares que se ligam a protenas formando
ribonucleoprotenas que tem funo importante na sntese de mRNAs
funcionais.
miRNA: MicroRNA regulao da expresso gnica
siRNA: Pequeros RNAs de interferncia defesa do genoma

Replicao do DNA

Replicao do DNA
Processo que permite a perpetuao da molcula de DNA
Origem de Replicao sequncias ricas em AT
DNA de clulas procariticas, plasmdeos e vrus somente uma
origem de replicao

DNA de eucariotos vrias origens de replicao

Durante o ciclo celular a origem de replicao pode ser ativada mais de


uma vez em organismos procariticos, mas somente uma vez em clulas
eucariticas

No escapou nossa percepo que o


pareamento especfico que postulamos
sugere imediatamente um possvel
mecanismo de cpia para o material
gentico
Watson e Crick, 1953

1957: O experimento
Meselson e Stahl

de

Cada fita do DNA funciona


como molde para a sntese de
uma nova fita, produzindo 2
novas molculas de DNA, cada
uma com uma fita nova e uma
fita velha

Replicao - semiconservativa

Enzimas envolvidas na replicao


Sistema da DNA-replicase ou replissomo: conjunto de
enzimas e protenas envolvidas no processo de
replicao

Helicases: separao das fitas


Topoisomerases: alivia o estresse topolgico
Protenas de ligao ao DNA (SSBs): estabilizam as fitas
Primases: sintese de primers
DNA ligases: promovem a ligao fosfodister

DNA Polimerase em E. coli (procariotos)


Tipo

Funo

DNA Polimerase I

Catalisa o crescimento da cadeia no


sentido 53
Atividade de exonuclease 35 e 53
Preenche pedaos pequenos de DNA
durante a replicao e processo de
reparo

DNA Polimerase II

Polimerase alternativa de reparo, mas


tambm pode replicar DNA quando o
filamento molde danificado

DNA Polimerase III

Catalisa o crescimento da cadeia no


sentido 53. a polimerase primria
durante a replicao normal do DNA

Nos eucariotos existem outras DNA polimerase


anlogas s dos procariotos
DNA Polimerase em eucariotos

Funo

DNA Polimerase

Replicao do cromossomo
nuclear (fita lagging)

DNA Polimerase

Reparo de DNA no preenchimento


de espaos do cromossomo
nuclear. Anloga a Polimerase I

DNA Polimerase

Replicao de DNA mitocondrial

DNA Polimerase

Replicao do filamento leader e


lagging do cromossomo nuclear

DNA Polimerase

Reparo do DNA do cromossomo


nuclear

DNA Polimerase

Aparentemente reparo de DNA

A replicao ocorre em 3 estgios


Iniciao
Elongao ou alongamento:
- sintese da fita contnua
- sintese da fita descontnua
Terminao

Replissomo e protenas
acessrias

As caractersticas essenciais da replicao do DNA so as


mesmas em eucariotos e em bactrias e muitos dos
complexos protecos so funcional e estruturalmente
conservados.

A replicao do DNA em eucariotos regulada e


coordenada com o ciclo celular, introduzindo algumas
complexidades adicionais.

Replicao em leveduras
A replicao ocorre na fase S;
3 Ptns so necessrias para
montagem do replissomo
ORC; Cdc6 e Cdt1

Replicao Procriotos x Eucariotos


PROCARIOTOS

EUCARIOTOS

1 ORI e Ter

Mltiplos ORI e Ter

Polimerases III e I

Polimerases e

Fragmentos de Okazaki de ~ 1000 nt

Fragmentos de okazaki ~ 100 a 250 nt

superenrolamento

histonas

Protenas necessrias para iniciar a replicao na origem


em E. coli
Protena

Funo

Protena DnaA

Reconhece a sequncia ori; abre a dupla hlice em


stios especficos na origem

Protena DnaB (helicase)

Derenrola o DNA

Protena DnaC

Necessria para a ligao da DnaB na origem

HU

Protena semelhante a histona; protena de ligao ao


DNA; estimula a iniciao

FIS

Protena de ligao ao DNA; estimula a iniciao

IHF

Protena de ligao ao DNA; estimula a iniciao

Primase (protena DnaG)

Sintetiza iniciadores de RNA

Protena de ligao ao
Liga-se ao DNA de fita simples
DNA de fita simples(SSB)
DNA-girase (DNA
topoisomerase II)

Alivia as tenses de tores geradas pelo


desenrroladmento do DNA

Replicao
3'
3'

5'

5'
3'
5'

3'
5'

Helicase liga-se s sequencias de DNA (O.R) e abre as cadeis de DNA


Protenas (SSB) evitam que o DNA se reagrupe.

A primase fabrica um pequeno segmento de RNA complementar ao


DNA (primer)

Replicao
Sentido da replicao
53

3'
3'

5'

5'

3'
5'

3'
5'

A enzima DNA polimerase adiciona nucleotdeos ao


primer

Replicao
Sentido da replicao
53

3'
3'

5'

5'
3'
5'

3'
5'

A sntese da leading strand continua no sentido 5' para 3'.

Replicao
Sentido da replicao
53

3'
3'

5'

5'
3'
5'

3' 5'

3'
5'

A sntese da leading strand continua no sentido 5 para 3


A sntese da lagging strand produz seguimentos de DNA no sentido
5 para 3 (fragmentos de Okazaki)

Replicao
Sentido da replicao
53

3'
3'

5'

5'
Fragmento de Okazaki

3'
5'

3' 5'

3'
5'

A sntese da leading strand continua no sentido 5 para 3


A sntese da lagging strand produz seguimentos de DNA no sentido
5 para 3 (fragmentos de Okazaki)

Replicao
3'
5'

3'
5'
3'
5'

3' 5'

3' 5'

3'

5'

A sntese da leading strand continua no sentido 5 para 3


A sntese da lagging strand produz seguimentos de DNA no sentido
5 para 3 (fragmentos de Okazaki)

Replicao
3'
5'

3'
5'
3'
5'

3' 5'

3' 5'

3'

5'

A sntese da leading strand continua no sentido 5 para 3


A sntese da lagging strand produz seguimentos de DNA no sentido
5 para 3 (fragmentos de Okazaki)

Replicao
3'
5'

3'
5'
3'
5'

3' 5'

3' 5'

3'

5'

A atividade de exonuclease da DNA polimerase I remove os

primers de RNA

Replicao
3'
3'
5'
3'
5'

3' 5'

3'

5'

A atividade de polimerase da DNA polimerase I preenche os espaos


A ligase estabelece as ligaes

A Replicao do DNA bidirecional

Caractersticas da Replicao
Bidirecional:
Duas forquilhas de replicao movendo-se em direo
oposta
Semiconservativa:
- Uma fita conservada e uma nova formada
Semidescontnua:
A cadeia leading copia-se continuamente
A cadeia lagging copia-se em segmentos (fragmentos de
Okazaki) que so unidos

Transcrio

Filamentos opostos de DNA podem


servir como moldes para o RNA

Estgios da Transcrio
1.INICIAO
- Reconhecimento de sequncias especficas no DNA

2. ALONGAMENTO
- Incorporao dos ribonucleotdeos
3. TERMINAO
- Sequencias no DNA so reconhecidas e a sntese
interrompida

INCIO DA TRANSCRIO

O DNA apresenta sequncias especficas, denominadas


PROMOTORES, que sinalizam exatamente onde a sntese do
RNA deve ser iniciada.
Os promotores so, primeiramente, reconhecidos por
fatores de transcrio que, ligados ao DNA, interagem com
outros fatores, formando um complexo ao qual a RNA
polimerase se associa.

Sequncia Transcrita

RNA polimerase
Reconhece e liga-se a sequncias especficas de
DNA;
Denatura o DNA expondo
nucleotdeos a ser copiada;

sequncia

de

Mantm as fitas de DNA separadas na regio de


sntese;
Renatura o DNA na
posterior da sntese;

regio

imediatamente

Sozinha, ou com o auxlio de


especficas, termina a sntese do RNA.

protenas

RNA polimerase
Em eucariotos existem vrios subtipos de RNA
polimerases envolvidas na sntese de RNAs
especficos:
. RNA polimerase I localizada no nuclolo e
responsvel pela sntese do RNA ribossmico
. RNA polimerase II localizada no nucleoplasma
e responsvel pela sntese do RNA mensageiro
. RNA polimerase III tambm localizada no
nucleoplasma e responsvel pela sntese do RNA
transportador

Viso Geral da Transcrio

Procariotos x Eucariotos

Iniciao em Procariotos
Ligao da holoenzima RNA
polimerase a regio promotora
Subunidade formao da
enzima, interao com ptns
reguladoras
Subunidade - catlise
Subunidade - liga-se ao DNA
Subunidade liga-se s
regies -10 e -35, posicionando
a enzima

Iniciao em Eucariotos
GTF (fatores gerais de transcrio)
liga-se ao promotor e atra o cerne
da RNA polimerase
PIC (complexo de pr-iniciao)
GTF + RNA polimerase II

TBP (protena de ligao TATA)

Alongamento e Terminao

TRMINO DA TRANSCRIO

Quando a RNA polimerase encontra o stio de


terminao na fita molde, ela se desliga do DNA
juntamente com a nova cadeia de RNA sintetizada
devido uma desestabilizao do complexo de
transcrio
O desligamento do RNA do sistema provoca a
ruptura do complexo de transcrio e as fitas do
DNA so renaturadas

Stio de terminao em bactrias

Transcrio Eucariontes
Tamanho do genma
Atuao de 3 polimerases:
-RNA polimerase I: rRNA (exceto 5S)
-RNA polimerase II: mRNA e alguns snRNA
-RNA polimerase III: tRNA, snRNA, rRNA (5s)

Processamento do RNA

CAP - Proteo do RNA contra degradao e importante para


traduo
Calda poli-A
Recomposio (Splicing)
Recomposio alternativa: modo pelo qual um gene pode codificar
vrias pretenas

Traduo

Ncleo
RNA polimerase

Gene

Transcrio
hnRNA

Processamento
mRNA

Traduo
Citoplasma

protena

Processo que se baseia na sequncia do mRNA para determinar


e unir os aminocidos formando, assim, uma protena.
Cada aminocido codificado na sequncia de DNA como um
cdon contendo uma sequncia de trs nucleotdeos.
3nt AA cdon
Molculas de RNA transportador transferem a informao
contida no genoma uma sequncia de aminocidos nas
protenas.

A sequncia linear dos nucleotdeos em um gene


determina a sequncia linear de aminocidos em
uma protena.

RNA TRANSPORTADOR

Liga-se quimicamente um aminocido


especfico, atravs da enzima aminoacil tRNA
sintetase, sendo chamado, desta forma, de
aminoacil-tRNA;
Pareia com a sequncia do codon do mRNA
adicionando o aminocido que carrega uma
cadeia de peptdeos crescente.

Ribossomos
unem tRNA (anticdon) e mRNA (cdon) para sntese
proteica.
apresenta 3 stios de ligao
Stio A (aminoacil)
Stio P (peptidil)
Stio E (exit, sada)
Centro decodificador (subunidade 30 S) garante que
apenas o tRNA levando anticdons que se ajustam aos
cdons sejam aceitos no stio A
Centro peptidiltransferase (subunidade 50 S) onde a
ligao peptdica catalizada

Ribossomos

Iniciao em Procariotos
Sequncia Shine-Delgarno

Iniciao: Procariotos
IF1: garantir que apenas o tRNA
iniciador se ligue ao stio P

IF2:garantir que apenas o tRNA


iniciador se ligue ao stio P
IF3:manter a subunidade 30 S
dissociada da 50 S

Iniciao: Eucariotos
Fatores de iniciao (elF4A, B e
G) promovem a ligao da
subunidade 40s ao CAP do mRNA.

Etapas da Elongao

Terminao
Cdon de terminao:
UGA
UAA
UAG
Fatores de liberao:
RF1
RF2
RF3

Traduo
aa livre
Ribossomo

Phe

Gly

His

Glu

Protena

Asp
Met
Ala

Cys

tRNA

AU G G CAU G C GAC GAAU U C G GACACAUA


Molcula de mRNA

Direo do avano do ribossomo

codon

Phe

Gly

His

Glu
Asp
Met
Ala

Cys

AU G G CAU G C GAC GAAU U C G GACACAUA

Phe

Gly

His

Glu
Met
Ala
Cys

Asp

AU G G CAU G C GAC GAAU U C G GACACAUA

His
Gly
Met
Ala
Cys
Asp

Phe

Glu

AU G G CAU G C GAC GAAU U C G GACACAUA

Ile
Met
Ala
Cys
Asp
Glu

His
Gly

Phe

AU GG CAU GC GAC GAAU U C G GACACAUA

Lys
Met
Ala
Cys
Asp
Glu
Phe

Ile
His

Gly

AU G G CAU G C GAC GAAU U C G GACACAUA

Met
Ala
Cys
Asp
Glu
Phe
Gly

Lys
Ile

His

AU GG CAU GC GAC GAAU U C G GACACAUA

Met
Ala
Cys
Asp
Glu
Phe
Gly
His

Lys

Ile

AU G G CAU G C GAC GAAU U C G GACACAUA

Met
Ala
Cys
Asp
Glu
Phe
Gly
His
Ile

Leu

Lys

G CAU G C GAC GAAU U C G GACACAUAAAA

Met
Ala
Cys
Asp
Glu
Phe
Gly
His
Ile
Lys

Met

Leu

U G C GAC GAAU U C G GACACAUAAAAU UA

Met
Ala
Cys
Asp
Glu
Phe
Gly
His
Ile
Lys
Leu

Asn

Met

GAC GAAU U C G GACACAUAAAAU UAAU G

Met Ala
Cys
Asp
Glu
Phe
Gly
His
Ile
Lys
Leu
Met

Pro

Asn

GAAU U C G GACACAUAAAAU UAAU GAAC

Met Ala Cys


Asp
Glu
Phe
Gly
His
Ile
Lys
Leu
Met
Asn

Gln

Pro

U U C G GACACAUAAAAU UAAU GAAC C CA

Met Ala Cys Asp


Glu
Phe
Gly
His
Ile
Lys
Leu
Met
Asn
Pro

Gln

G GACACAUAAAAU UAAU GAAC C CACAA

Met Ala Cys Asp Glu


Phe
Gly
His
Ile
Lys
Leu
Met
Asn
Pro
Gln

STOP 3

CACAUAAAAU UAAU GAAC C CACAAUAA

Ala Cys Asp Glu Phe


Met
Gly
His
Ile
Lys
Leu
Met
Asn
Pro
Gln

STOP

AUAAAAU UAAU GAAC C CACAAUAAAAA

Ala Cys Asp Glu Phe


Met
Gly
His
Ile
Lys
Leu
Met
Asn
Pro
Gln

STOP

AUAAAAU UAAU GAAC C CACAAUAATAC

Ala Cys Asp Glu Phe


Met
Gly
His
Ile
Gln
Lys
Pro
Leu
Asn Met

AUAAAAU UAAU GAAC C CACAAUAATAC

Referncias:
GRIFFITHS, Antony J. F. et al. Introduo gentica. 9. ed. Rio de
Janeiro: Guanabara Koogan, 2009
NELSON, David L.; COX, Michal M. Princpios de bioqumica de
Lehninger. 5. ed. Porto Alegre : Artmed, 2011.
ZAHA, Arnaldo; FERREIRA, Henrique B.; PASSAGLIA, Luciane Maria
Pereira. Biologia molecular bsica. 4. ed. Porto Alegre : ArtMed, 2012