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Gentica bacteriana

Prof. Adj. Ary Fernandes Junior


Departamento de Microbiologia e Imunologia
Instituto de Biocincias UNESP
Tel. 14 3880.0412
ary@ibb.unesp.br

Viso geral da construo de uma clula recombinante e alguns exemplos de sua aplicao
Genes pertencentes a uma determinada clula de um organismo podem ser inseridos e expressos em clulas
de outro organismo. Clulas geneticamente modificadas podem ser utilizadas para produzir uma grande
variedade de produtos teis.

Replicao do DNA

Replicao bidirecional de uma


molcula circular de DNA bacteriano

Replicao bidirecional de uma molcula circular de DNA


bacteriano

Bactrias: Onde encontramos genes?????????


DNA Bacteriano, Plasmdios, DNA Fgico, Transposons
Replicons

Variaes Temporrias (Sem alteraes no genoma)


(Alteraes Fenotpicas)
Morfolgicas
-Serratia marcescens: 37 C sem pigmento 25 C vermelhas,
-Bacillus sphaericus: 2% peptona (clulas vegetativas)
0,1% peptona (esporos)

-Gram positivos: Culturas novas cels. azuis


Cultura velhas cels. vermelhas,
- Azomonas x sacarose x cpsula

Fisiolgicas
- Produo de beta galactosidase quando tem lactose no meio
(regulao gnica)

Variaes Permanentes Com alteraes no genoma)


(Alteraes genotpicas)

Mutao e Recombinao Gentica

Plasmdeos

Ilhas de patogenicidade

Outras E. coli
-APEC
-NMEC,
-STEC, etc

(ETEC Enterotoxignica E. coli)

E. coli comensal

(EPEC Enteropatognica E. coli)

(UPEC-Uropatognica E. coli)

(EIEC Enteroinvasiva E. coli)


(EHEC Enterohemorrgica E. coli)
(atualmente quando s phage Stx STEC)

Ahmed ety al. Nature Reviews Microbiology 6, 387-394 (May 2008)

A absoro de elementos genticos mveis (fagos, plasmdeos de virulncia, ilhas de patogenicidade), e perda de
pores de DNA-cromossmico em linhagens distintas de E. coli, possibilitou surgimento de clones de diferentes
patotipos de E. coli associados a sintomas de doenas especficas.
LEE - locus of enterocyte effacement; PAIs - pathogenicity island; pEAF - enteropathogenic E. coli adhesion factor
plasmid; pENT- enterotoxin-encoding plasmids; Stx - Shiga-toxin-encoding bacteriophage.

Variao permanente resultante de Mutao


tempo

minutos , horas, dias, meses

1. Populao de uma bactria


em processo de multiplicao

2. Processo de crescimento e diviso


produzem naturalmente clulas
mutantes

5. Os mutantes continuam com o crescimento


na presena do antimicrobiano e iniciam
disperso pelo ambiente

Presso seletiva

4. Clulas so mortas ou impedidas de


multiplicao pela antimicrobiano com exceo
dos mutantes resistentes ao antimicrobiano
especfico.

Clulas so expostas a um
composto antimicrobiano

3. Populao continua multiplicao, e


originando ocasionalmente, mais
clulas mutantes

Variao permanente
resultante de Mutao
Mutao cria variao

Mutao desfavorvel
selecionada contra
Ocorre reproduo e mutao

Com a mutao favorvel


provvel que o mutante
sobreviva...
....e se reproduza

Variao permanente resultante de Recombinao Gentica

1. Duas populaes bacterianas A e B


crescem em um mesmo ambiente. A
espcie B resistente a droga X.

2. Troca de DNA (elementos genticos mveis)


ocorre entre clulas em baixa frequncia.

Presso seletiva

4. Na presena da droga X, as clulas da


espcie A que receberam gen da resistncia
da espcie B so capazes de multiplicar-se
enquanto que as clulas originalmente
sensveis no multiplicam-se.

Bactrias so expostas a
droga X.

3. Clulas da espcie A recebem o gen de


resistncia a droga X, presente no elemento
gentico mvel da espcie B.

MUTAO
Alterao brusca no material gentico
Alterao hereditria em uma seqncia de bases
do DNA Mutante
Natural (10-6 a 10-10 )
Adquirida ou Induzida (Agentes Fsicos e Qumicos)

Variao S (Smooth) R (Rough) em K. pneumoniae


por mutao

Klebsiella pneumoniae
(Aspecto mucide
(molhado)
de colnias)

Variao S R

Resistncia drogas antimicrobianas por mutao


(Tipo Cromossmica)

Modelo de um passo (one step)


Bactria sensvel a estreptomicina (1 g)

Mutao

Resistente a 500 g

Modelo de vrios passos (multi step)


Bactria sensvel a Penicilina (1 g)
Mutao
Resistente a 10 g
Mutao
Resistente a 20 g
Mutao
Resistente a 50 g

Tipos de Resistncia Cromossmica (dois modelos)


Modelo de um passo = one step
Curva tipo estreptomicina

Modelo de vrios passos = multi step


Curva tipo penicilina

RECOMBINAO GENTICA: Doadora Receptora


Molculas distintas de DNA so combinadas numa
mesma molcula, graas a um processo fsico de
quebra e ligao destas molculas

DNA externo = DNA Exogenoto Destinos


possveis (? )

TRANSFORMAO (Griffith-1928)
(Reverso Pneumoccica (RS) (Rough Smooth)

Incorporao de DNA solvel (Lise ou Liberao Espontnea)

(Plasmdeos so passveis de transferncia tambm)

Condies para ocorrer a transformao


DNA homlogo,
Dupla fita e PM elevado (105 a 107),

Meio sem DNAase


Bactria Receptora em Estado de Competncia Fisiolgica
(DNA solvel, Qualquer momento, Determinado estgio
do ciclo celular, Condies Especiais)

Transformao

CONJUGAO (Tatum e Lederberg - 1947 - E.coli)


Transferncia atravs de comunicao entre as duas bactrias ( Unidirecional)

Conjugao bacteriana

Pili (Gram negativa)

Ponte de conjugao
(Gram positiva)

Conjugao de Gram negativa

Conjugao de Gram positiva


Doadora

Receptora

Adaptado de Murray, B.E. (1998)

Enterococcus faecalis pheromone-responsive conjugative system.


Pheromone A released from the potential recipient cell (right) interacts with plasmid A in the potential donor cell (left) to induce synthesis of
aggregation substance. Attachment of aggregation substance to binding substance causes the cells to clump into visible aggregates. Once
the pheromone-responsive plasmid A has transferred from donor to recipient cell, synthesis of pheromone A is shut off.

Processo mediado por Plasmdeos (Ex. Plasmdeo


R=Resistncia drogas, F=Fertilidadede,
Virulncia, Col, Metablico, Crptico, etc)
Obs. DNA cromossmico tambm pode ser
transferido durante a conjugao.

Plasmdeo R

Plasmdeo
conjugativo

TRANSDUO ( Zinder e Lederberg - 1952)


Transferncia (DNA bacteriano e Plasmdios) ocorre por meio de um vrus
(Bacterifago)

Um fago infecta a clula


bacteriana doadora
O DNA e protenas do fago so produzidos, e o DNA
bacteriano quebrado em fragmentos.
Ocasionalmente, durante a montagem do fago, fragmentos
do DNA bacteriano so empacotados no capsdeo do fago.
Ento a clula doadora lisada e as partculas de fago so
liberados.

Um fago carreando o DNA bacteriano


infecta a nova clula hospedeira, a clula
receptora.
A recombinao pode ocorrer, produzindo
uma clula recombinante com um
gentipo diferente da clula doadora e da
clula receptora.

Ciclo Ltico
(vrus virulento)

Ciclo Lisognico
(vrus temperado)

Transposon Genes Saltadores, Elementos Mveis


ou Jumping genes
Codificam Resistncia a
Drogas, Sntese de Toxinas e
Enzimas Degradantes.

Encontrados tanto em DNA


cromossmico como em
Plasmdios
Tem sequncia (de Insero)
que codifica enzima
Transposase (Transposio )
Interfere com sequncia
linear do gene
Mutao, Inativao ou
Quebra;

Regulao da Expresso Gnica


Evitar sntese desnecessria de metablitos,
desperdcio energtico, acmulo intracelular de
metablitos txicos.
Interao entre DNA e Protenas Reguladoras
Regulam sntese de RNAm e Atividade de enzimas
especficas
(Ex. Operon Lac em E.coli ( Operon Indutvel);
Operon Trp de E. coli (Operon repressvel)

Operon Lac de E. coli (Operon indutvel)

Operon Lac de E. coli (Operon indutvel)

Operon Lac de E. coli (Operon indutvel)

Operon Trp de E. coli (Operon repressvel)

Operon Trp de E. coli (Operon repressvel)

Operon Trp de E. coli (Operon repressvel)