FUNDAO DE ASSISTNCIA E EDUCAO FAESA

FACULDADES INTEGRADAS ESPIRITO-SANTENSES

ENGENHARIA AMBIENTAL

AMANDA DOS SANTOS SOARES

ANDR DE OLIVEIRA PEREIRA

ENZIMAS: IMPORTNCIA AMBIENTAL E FATORES QUE AFETAM SUA

ATIVIDADE

VITRIA
2014

1 INTRODUO

A clula pode ser comparada a um minsculo laboratrio no qual ocorre a sntese e

a degradao de grande nmero de substncias. Estes processos so efetuados por
enzimas.
Enzimas so catalisadores biolgicos que entram nas reaes qumicas mas no se
tornam parte delas. So consideradas o crebro da clula, porque ditam e
controlam todas as reaes celulares.
Segundo Michaelis, a definio de enzima (do grego, en, dentro, e zmee, levedura)
cada um dos catalisadores de ao especfica, produzidos pelas clulas, que
atuam nas reaes bioqumicas que nelas se passam.
As enzimas so utilizadas na Biologia Molecular e na Biomedicina,
no desenvolvimento de metodologias analticas, na fabricao de
produtos tecnolgicos e no tratamento de resduos. So bastante
ativas e versteis, no requerem altas temperaturas e valores
extremos de pH e executam uma variedade de transformaes de
modo seletivo e rpido em condies brandas de reao, o que torna
altamente desejvel o seu uso como catalisadores. Geralmente, os
processos industriais que empregam enzimas so relativamente
simples, fceis de controlar, eficientes energeticamente e requerem
investimentos de baixo custo.
Microrganismos ou substncias com essa propriedade j eram
usados por populaes humanas muito antigas para modificar
alimentos fermentar uvas e fabricar o vinho, ou alterar o leite e
produzir queijo, por exemplo. Depois que os cientistas desvendaram
a atuao das enzimas, estas passaram a ser cada vez mais
empregadas, com variadas finalidades. Hoje, essas protenas
especiais so teis inclusive na indstria, no apenas na rea de
alimentos, mas em muitos outros setores.
Essa maior compreenso possibilitou o emprego dessas protenas
especiais em processos industriais de diferentes reas: mdica,
alimentcia, txtil, qumica, de papel e celulose e muitas outras.
vantajoso usar enzimas na indstria, porque elas so naturais, no
txicas e especficas para determinadas aes. Alm disso, so
capazes de alterar as caractersticas de variados tipos de resduos,
contribuindo para reduzir a poluio ambiental. O mercado brasileiro
de enzimas, embora pequeno diante do mundial, apresenta grande
potencial, em funo da enorme disponibilidade de resduos
agroindustriais e do dinamismo dos setores industriais citados acima.

2 OBJETIVOS

2.1 Demonstrar a utilizao das enzimas em variados setores e

seu benefcio para o meio ambiente.
2.2 Demonstrar os fatores que afetam a atividade das enzimas.

3 Aplicaes das enzimas : Seu benefcio para o meio

ambiente e o efeitos que afetam a atividade enzimtica

Uma das caractersticas principais das enzimas que elas tm uma e apenas uma
funo cada (especificidade). Cada funo ou substrato dentro de um organismo
possui apenas sua nica enzima respectiva.
O substrato que ser transformado preenche a enzima como chave-fechadura.
Apenas quando a enzima ideal encontrar o substrato ideal, as reaes bioqumicas
podem ocorrer.
3.1 Aplicaes Gerais das Enzimas:

Como Agem as Enzimas?

As enzimas se conectam s substncias reagentes e enfraquecem certas ligaes
qumicas, de modo que menos energia (de ativao) necessria para que as
reaes ocorram.
Se as enzimas estivessem ausentes, as reaes qumicas seriam lentas demais
para dar suporte vida.

As enzimas so bastante especficas, decompondo ou compondo apenas certas

substncias em certas condies de temperatura, pH e concentrao do substrato
(substncia na qual a enzima atua).
Algumas transformaes envolvem vrias enzimas como a da glicose em gua e
gs carbnico que leva 25 passos, cada passo com a participao de vrias
enzimas.
Quando as enzimas so aquecidas, elas aceleram ainda mais as reaes, mas
apenas at certo ponto a partir do qual elas se modificam e perdem suas
propriedades catalisadoras. Quando a temperatura cai, as enzimas voltam ao seu
estado anterior.
As enzimas tm a capacidade de agir sobre o sangue, gordura, muco, saliva,
protenas em geral, produzindo um substrato mais fcil de ser removido pelos
agentes de limpeza, tornando mais efetiva a ao dos mesmos.

Por que usar enzimas?

As enzimas permitem s indstrias usarem processos mais econmicos, diminuindo
o consumo de energia e recursos; mais confiveis e que poluem menos.
As enzimas so espantosamente eficientes - muito pouco
necessrio para um grande resultado. Elas so muito especficas, o
que evita resultados indesejveis. As altas temperaturas e presses,
fortes cidos ou lcalis e perigosos qumicos necessrios a muitos
processos industriais significam perigo potencial ao ambiente de
trabalho e ao meio ambiente. Atualmente, as enzimas podem
substituir muitos desses qumicos e permitir uma produo segura e
ambientalmente correta.

Enzimas e o Meio Ambiente

A grande preocupao ambiental desencadeou uma procura intensa por outras
alternativas, as chamadas "tecnologias limpas".

As enzimas so uma dessas tecnologias e iro, gradativamente,

substituir muitos componentes qumicos utilizados nos processos
industriais atuais. Isso demonstra a grande capacidade de
minimizao de problemas ambientais oferecida pelas enzimas e que
podem ser resumidas em: trabalham em baixas temperaturas e
condies amenas; podem ser usadas para substituir condies e
componentes qumicos perigosos resultando em economia de
energia e diminuio da poluio; como so altamente especficas,
no produzem efeitos inesperados no processo de produo; podem
ser utilizadas para o tratamento de resduos biolgicos; as enzimas
em si so biodegradveis, ou seja, so facilmente absorvidas pela
natureza. As indstrias esto diante de um grande desafio. Elas
precisam proteger o meio ambiente e, ao mesmo tempo, oferecer os
produtos, os servios e os empregos exigidos pela sociedade.

Com a conservao dos recursos naturais e a proteo ao meio ambiente tornandose cada vez mais importantes, o caminho para novas aplicaes de enzimas est
aberto nos mais variados tipos de indstrias.

3.1.1 Aplicao de Enzimas na Indstria Txtil:

Os processos enzimticos podem ser utilizados para alterar as

propriedades das fibras txteis e tm como principal vantagem, sobre
a utilizao de reagentes qumicos, o fato de no implicarem
qualquer efeito nocivo ao meio ambiente. Fato este, pelo qual nos
ltimos anos, com a crescente conscientizao e preocupao pelo
meio ambiente, muitas pesquisas tm sido desenvolvidas com o
objetivo de aplicar enzimas nas diferentes etapas do beneficiamento
txtil. A utilizao de enzimas no processo txtil, visando remoo
das impurezas no celulsicas denomina-se biopreparao,
biopurga, purga enzimtica ou bioscouring e apresenta inmeras
vantagens, contribuindo para o melhoramento ecolgico do processo,
pois substitui produtos qumicos normalmente utilizados, em alguns
processos txteis, reduzindo consideravelmente o impacto ambiental
assim como os danos s fibras. A enzima utilizada no processo
melhora a qualidade das fibras, pois altamente especfica,
permitindo a produo de produtos acabados de melhor qualidade
com relao ao aspecto visual, toque e propriedades de resistncia.
Reduz o desgaste do equipamento e confere maior flexibilidade na
sua utilizao. Possibilita economia de energia, requer maior controle
do processo e possibilita aumento de produtividade.

3.1.2 Enzimas para degradao da celulose

Ao invs do amido, cuja funo biolgica de armazenamento de
energia facilmente recupervel, a celulose possui uma funo
estrutural e sua principal caracterstica biolgica a resistncia
degradao. Por isso, a hidrlise enzimtica de material
lignocelulsico requer doses de enzima dezenas de vezes maiores
que o amido. Devido a esses elevados consumos, as enzimas para
hidrlise da celulose possuem um grande impacto econmico na
produo de etanol. O desenvolvimento de misturas enzimticas
mais eficazes e econmicas que permitam reduzir a dosagem
representa um interesse estratgico para a competitividade do etanol
de segunda gerao. Os objetivos do programa so por isso o
aumento da eficincia das misturas enzimticas, assim como a
reduo de seu custo e consumo. As linhas de investigao da ABNT
no campo das enzimas para hidrlise de biomassa so as seguintes:
Isolamento e expresso de genes correspondentes a novas
atividades enzimticas lignocelulsicas. Isolamento e melhoria de
microorganismos produtores de celulases. Caracterizao e
otimizao das misturas enzimticas produzidas. Otimizao das
condies de hidrlise da biomassa e posterior fermentao.
Incremento da produo de enzimas, assim como reduo dos
custos de produo. Reduo da dose de enzima, mediante a
aplicao dos avanos obtidos nas linhas anteriores. Alm disso,
dispomos de uma equipe altamente qualificada de engenheiros,
qumicos e bioqumicos que esto trabalhando no desenvolvimento
dessa tecnologia, abordando tanto os aspectos relativos
adequao do organismo produo do coquetel enzimtico timo,
como o processo de fermentao necessrio para sua obteno
industrial. As instalaes piloto de York e de demonstrao da BCyL
so crticas para o desenvolvimento dos enzimas e permitem
Abengoa Bioenerga dispor de uma base de ensaios nica a nvel
mundial. Por ltimo, a Abengoa Bioenerga dispe de uma licena da
Dyadic para o uso e modificao de um organismo que produz as
enzimas necessrias para a converso da celulose em acares e
que, portanto, controlam um passo crtico e necessrio na tecnologia
da hidrlise enzimtica. Com essa tecnologia, se dispe de um
produto necessrio para a tecnologia da hidrlise enzimtica, que
ser utilizada tanto em nossas instalaes como em fbricas de
terceiros que empreguem esse processo para produzir bioetanol.

Processo tpico de bioetanol baseado em enzimas

3.1.3 ENZIMAS EM PRODUTOS DE LIMPEZA

No incio do sculo XX, Rhm(1913), desenvolveu o primeiro mtodo
de lavagem de tecidos com detergentes que continham enzimas,
abricando a primeira formulao desses detergentes. A empresa de
Rhm patenteou o produto em 1913 e a preparao foi
comercializada at os anos sessenta. A formulao do produto
baseava-se na tripsina, uma enzima digestiva produzida no pncreas
de mamferos. O produto no obteve grande sucesso, pois a tripsina
no era suficientemente ativa em lquidos fortemente alcalinos (pH
maior que 9,0), obtidos pela diluio do detergente (Bon, 1995). Em
1959, ocorreu um desenvolvimento marcante na indstria de
detergentes. O qumico suo Jaag, que trabalhou para a companhia
de detergentes Gebrder Schnyder, em Biel, na Sua, desenvolveu
um produto novo denominado Bio 40, que continha uma protease
bacteriana em substituio tripsina. Embora a protease bacteriana
fosse mais adequada ao propsito industrial, esse ainda no era o
produto ideal. Em 1962, a empresa Novo Nordisk lanou no mercado
um produto denominado Alcalase. A ao dessa protease alcalina
obtida de microrganismos no era afetada por outros componentes
do detergente e era eficaz nas temperaturas desejadas (Novozyme,
2000).O primeiro grande sucesso de marketing de um detergente
formulado com enzimas foi o Biotex, que continha Alcalase e foi
produzido pela KORTMAN&SCHULTE (atualmente Kortman Intradal)
em colaborao com Gebrder Schnyder. O sucesso desse produto
marcou uma real inovao na utilizao de enzimas em detergentes
a partir de ento (Novozyme, 2000). O uso de enzimas para
propsitos industriais progrediu rapidamente aps 1965, devido,
principalmente, ao uso crescente de diferentes enzimas em
detergentes. Entretanto, houve um retrocesso temporrio no incio da
dcada de setenta, quando se averiguou que as enzimas poderiam
causar reaes alrgicas (Novozyme, 2000). Por iniciativa do .Food
and Drug Administration. (FDA), a National Academy of
Science. (NAS), efetuou uma ampla investigao sobre esse
assunto. A NAS, em seu relatrio de 1971, concluiu que as enzimas
presentes nas formulaes de detergentes no s so inofensivas
aos consumidores, como tambm proporcionam vantagens
tecnolgicas definidas indstria. Os produtores de detergentes so
hoje os maiores consumidores de enzimas industriais. Por isso,
constantemente, esto sendo desenvolvidos novos produtos
contendo novas enzimas e novas formulaes com tal finalidade. A
principal e mais recente inovao nesse campo foi a introduo, em
1988, de uma formulao com lpase (Novozyme, 2000).

3.1.4 Uso de enzimas em raes

O interesse no uso de enzimas em raes para aves tem aumentado devido ao
custo cada vez maior das matrias primas tradicionais e a busca por outros
ingredientes alternativos como a cevada, aveia, arroz e trigo, entre outros.
As enzimas tambm so consideradas como uma forma de reduzir
a contaminao ambiental com nutrientes nas excretas, tais como
o fsforo, nitrognio, cobre e zinco. Alm disso, existe uma
preocupao cada vez maior com a adio de aditivos
antimicrobianos
nas
raes.
A utilizao de enzimas seria, portanto, uma alternativa para o uso
de promotores antibiticos, com o objetivo de aumentar a
digestibilidade dos alimentos e o desempenho das aves. Quem
afirma o professor Jos Roberto Sartori, do Departamento de
Melhoramento e Nutrio Animal, da Faculdade de Medicina
Veterinria e Zootecnia UNESP - Cmpus de Botucatu. A escolha
do tipo de enzima a ser utilizada vai depender do tipo de substrato
que se deseja trabalhar. (veja tabela 1).

Tabela 1
Resumo das enzimas utilizadas em raes para aves.
Enzima

Substrato

Efeitos

Xilanase

Arabinoxilan
as

Reduo da viscosidade da digesta.

Glucanases

b-glucanos

Reduo da viscosidade da digesta. Menor

umidade na cama.

Pectinases

Pectinas

Reduo da viscosidade da digesta.

Celulases

Celulose

Degradao da celulose e liberao de nutrientes

Proteases

Protenas

Suplementao das enzimas endgenas.

Degradao mais eficiente de protenas.

Amilases

Amido

Suplementao das enzimas endgenas.

Degradao mais eficiente do amido.

Fitase

cido ftico

Melhora a utilizao do fsforo dos vegetais.

Remoo do cido ftico.

Galactosidase Galactosdios Remoo de Galactosdios

s

Lipases

Lipdios e
cidos
graxos

Melhora a utilizao de gorduras animais e

vegetais

Adaptado de CLEOPHAS et al. (1995).

3.2 Fatores que afetam a atividade enzimtica

3.2.1

Grau

de

acidez

da

soluo

(pH)

Alteraes de pH podem mudar a forma da Enzima afetando seu funcionamento.

Cada enzima tem um pH timo para seu Funcionamento, acima ou abaixo desse pH
sua atividade diminui.

3.2.2 Concentrao da enzima

Aumentando a concentrao de molculas da enzima, a velocidade da reao

aumenta desde que haja quantidade de substrato suficiente para receber as
enzimas.

3.2.3 Concentrao do substrato

Aumentando a concentrao do substrato, aumenta-se a velocidade da reao at o

momento em que todas as molculas de enzima se achem ocupada. A partir deste
momento

3.2.4

velocidade

da

reao

mxima

constante.

Inibidores

Os inibidores podem ser de REVERSVEIS ou IRREVERSVEIS e servem como

forma de regulao do metabolismo, inibindo as reaes quando necessrio, mas
nem todas as enzimas so reguladas por inibidores. Os inibidores competitivos so
aqueles que se assemelham ao substrato e, portanto, ocupam o stio ativo. A ligao

do inibidor no permite que o substrato se ligue ao stio ativo da enzima.

Os inibidores no-competitivos so aqueles que no se assemelham ao substrato e,
portanto, ocupam um stio diferente do stio ativo. A ligao do inibidor permite que o
substrato se ligue ao stio ativo da enzima, como mostra o esquema abaixo, mas
no

ocorre

reao

com

formao

de

produto.

Os inibidores irreversveis so aqueles que se ligam s enzimas com alta afinidade e

no apresentam um equilbrio de ligao como observamos com os reversveis.

3.2.5 Efeito da Temperatura na Atividade Enzimtica

A velocidade de uma reao qumica afetada pela temperatura isso pode ser
explicado pela teoria de Arrhenius que se baseia na hiptese de que duas partculas
devem se colidir na orientao correta e com energia cintica suficiente para que os
reagentes sejam transformados em produtos.
Pode-se dizer que o mesmo acontece com as reaes catalisadas por enzimas,
lembrando que a variao de temperatura afeta as constantes cinticas (Km e
Vmx).
Em baixas temperaturas, as reaes so mais lentas devido queda da energia
cintica do sistema. Porm, como as enzimas so protenas, o aumento da
temperatura no causa apenas o aumento da velocidade de reao, mas, sim, dois
efeitos opostos:
at determinada temperatura, ocorre um AUMENTO da velocidade de reao;
a partir de determinada temperatura, h uma DIMINUIO na velocidade de reao.

Figura 1
Diagrama
esquemtico
mostrando
efeito

o
da

temperatura na
atividade

de

uma enzima;

perodo de incubao curto; ----- longo perodo de incubao.

Note que a temperatura em que se observa a mxima atividade enzimtica varia
com o tempo de incubao.
Figura

cedida

pelo Dr.

Martin

Chaplin,

do

site http://www.lsbu.ac.uk/biology/enztech/temperature.html
Isso acontece porque as enzimas so protenas e como tal, podem ser
desnaturadas. Ou seja, a partir de uma determinada temperatura, as enzimas
perdem sua estrutura nativa, o que leva perda de funo.

Figura 2

Diagrama esquemtico mostrando o efeito da temperatura na estabilidade de uma

enzima. As curvas mostram o percentual de atividade remanescente em funo do
tempo de incubao em diferentes temperaturas.
De cima para baixo, h um aumento equivalente de temperatura (50C, 55C, 60C,
65C e 70C).
Figura

cedida

pelo Dr.

Martin

Chaplin,

do

site http://www.lsbu.ac.uk/biology/enztech/temperature.html
Pode-se notar que a atividade de uma enzima diminui com o tempo de incubao
em determinadas temperaturas. No exemplo da figura 2, uma enzima perde 20% de
sua atividade original quando incubada por 40 minutos a 55C. Note que quanto
maior a temperatura de incubao, mais rpido o processo de desnaturao
trmica.
No processo de desnaturao trmica, a estrutura terciria se desfaz, pois a
protena perde interaes NO-COVALENTES. No h quebra de ligaes
peptdicas; com o aumento da temperatura rompem-se ligaes de hidrognio,
interaes eletrostticas e hidrofbicas. Como as ligaes de hidrognio so
estabilizadoras de estruturas secundrias, estas tambm podem ser perdidas
durante o processo de desnaturao trmica.
Para muitas enzimas, o processo de desnaturao trmica irreversvel. O tempo
de incubao da protena numa determinada temperatura pode acelerar o processo
de desnaturao trmica e definir se o mesmo ser reversvel.
Alm disso, a ligao do substrato na enzima causa mudanas estruturais que a
mantm mais estvel. Esse o caso da hexocinase, que sofre uma grande
mudana conformacional quando glicose se liga ao seu stio ativo:

Hexocinase de levedura na ausncia de Hexocinase de levedura na presena de

Glicose

Glicose

(2yhx.pdb)

(2yhx.pdb)

Na ausncia de glicose, a temperatura de desnaturao da enzima de 48,2 C. Na

presena de glicose, a estabilidade da enzima aumenta e a temperatura de
desnaturao sobe para to 53.7 C [1,2], podendo chegar a 62 oC com excesso de
glicose [3].
A ligao de glicose na hexocinase de levedura aumenta, tambm, a estabilidade
trmica da enzima. Isso foi observado em experimentos semelhantes aos ilustrados
na Figura 2, sendo que calculou-se o tempo necessrio para perda de 50% de
atividade enzimtica (t0.5). O t0.5 foi de 34,6 min para a enzima incubada em
tampo, na ausncia de glicose. Quando o meio de incubao continha glicose, o
t0.5 aumentou para 400 min, ou seja, a estabilidade da enzima aumentou mais de
10 vezes [4].
Ateno: Muitas pessoas dizem QUINASE quando se referem s enzimas que
catalisam reaes de fosforilao. Isso porque em ingls se diz KINASE. Mas essa
nomenclatura est equivocada, pois KINE/KINO, de origem grega, o prefixo usado
em ingls para denotar movimento como em kinetic (cintica) ou mesmo em
CINEMA.

A velocidade de uma reao catalisada por enzimas pode aumentar em um fator de

1,2 a 2,5 vezes para cada 10C de aumento de temperatura. Isso se deve aos
valores tpicos de energia de ativao que variam de 15 a 70 kJ.M-1 [5]. Esse
aumento de velocidade quantificado pelo termo Q10, tambm conhecido como
coeficiente de temperatura.

4 CONCLUSO

A produo de enzimas uma rea da Biotecnologia em expanso, que movimenta

bilhes de dlares anualmente. Novas enzimas e usos esto sendo descobertas a
partir do trabalho conjunto de equipes multidisciplinares da Microbiologia,
Bioqumica, Qumica, Engenharia Bioqumica, entre outras reas, complementando
os conhecimentos que cada rea possui sobre as enzimas. E so decrescentes os
custos das enzimas industriais; assim, a utilizao de enzimas tende a aumentar

continuamente.
Por outro lado existem fatores que influenciam negativamente na atividade das
enzimas, e so capazes de alterar sua atividade e, consequentemente, a velocidade
das reaes por elas catalisadas.

REFERNCIAS

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de Janeiro: Readers Digest; So Paulo: Melhoramentos, 2000.

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MUSSATTO, S. I.; FERNANDES, M.; MILAGRES, A. M. F. Enzimas: poderosa
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Oliveira, C.; Muller, F; Segato, M. APLICAES DE ENZIMAS EM

PRODUTOS DE LIMPEZA. Florianpolis. Disponvel em:
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ROBERTIS, E. M. F. D.; HIB, J. De Robertis: Bases da Biologia Celular e Molecular.
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So Paulo: Summus Editorial, 1991.
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<http://www.bichoonline.com.br/artigos/aa0041.htm >. Acesso em: 29 maio 2014.