Retroalimentacin

cuestionario 3
Tema: Mutaciones genticas y reparacin del DNA
Ph.D. Andrea Villota

1. Explique que quiere decir el autor con la siguiente frase Las mutaciones son
protectoras de la vida y causa de gran sufrimiento
Por un lado, las mutaciones son fuente de variabilidad gentica, que es la materia prima
para la evolucin, sin ellas los organismos no podran adaptarse a los cambios en el
medio ambiente lo que generara peligro de extincin de la especie; por esto se refiere
a protectoras de la vida. Mientras que la frase causa de un gran sufrimiento se
refiera a que la mayora de mutaciones poseen efectos perjudiciales y son fuente de
muchas enfermedades y trastornos humanos.

2. En organismo multicelulares cules categoras de mutaciones tenemos?. Explique
en que consiste cada una.
En los organismos multicelulares, podemos distinguir entre dos grandes categoras de
mutaciones:
Mutaciones somticas
Mutaciones de la lnea germinal
Las mutaciones somticas surgen en los tejidos somticos, es decir en tejidos que no
producen gametos. Cuando se divide mediante mitosis una clula somtica que tiene
una mutacin, la mutacin se transmite a las clulas hijas, lo que da lugar a una
poblacin de clulas idnticas desde el punto de visa gentico. Cuanto ms precoz en
el desarrollo se produzca la mutacin en una clula somtica, habr ms clulas en el
organismo del individuo que contiene la mutacin.
Las mutaciones de la lnea germinal surgen en clulas que finalmente producen
gametos. Estas mutaciones pueden transmitirse a generaciones futuras y producir
organismos individuales que portan las mutaciones en todas sus clulas somticas y en
las de la lnea germinal. Cuando se habla de mutaciones en organismos multicelulares,
se habla casi siempre de mutaciones en la lnea germinal.

3. Explique en que consiste la sustitucin de bases y cuantos tipos de esta hay?
Es el tipo ms simple de mutacin gnica consiste en la alteracin de un solo
nucletido en el DNA. Por la naturaleza complementaria de las dos cadenas del DNA,
cuando se altera la base de un nucletido tambin se alterar la base del nucletido
correspondiente en la cadena opuesta, en la siguiente ronda de replicacin. Entonces,
una sustitucin de una base conduce casi siempre a la sustitucin de un par de bases.
Hay dos tipos de sustituciones de bases:
Transicin donde se reemplaza una purina por otra purina diferente o,
alternativamente, una pirimidina se reemplaza por otra pirimidina diferente.
Transversin donde una purina es reemplazada por una pirimidina o una
pirimidina es reemplazada por una purina.

4. Por qu las inserciones y deleciones pueden generar cambios en el marco de
lectura?
Las inserciones y las deleciones dentro de secuencias que codifican protenas pueden
conducir a mutaciones de cambio de marco de lectura de un gen. El codn de iniciacin

del mRNA establece el marco de lectura: despus del codn de iniciacin, se leen otros
codones en forma sucesiva como grupos de tres nucletidos no superpuestos.
La adicin o delecin de un nucletido en general cambia el marco de lectura y altera
todos los aminocidos codificados por los codones que siguen a la mutacin. Pueden
afectarse muchos aminocidos; por ello, las mutaciones de cambio de marco de lectura
suelen tener efectos drsticos sobre el fenotipo.
Sin embargo, no todas las inserciones y las deleciones producen corrimientos en el
marco de lectura. Como los codones estn constituidos por tres nucletidos, el marco
de lectura no se ver afectado por las inserciones y las deleciones que consistan en algn
mltiplo de tres nucletidos, aunque de todos modos, la adicin o escisin de uno o ms
aminocidos puede afectar el fenotipo.

5. Cundo se produce una mutacin neutra?
Se producen mutaciones neutrales cuando se reemplaza un aminocido por otro
qumicamente similar o cuando el aminocido afectado tiene poca influencia en la
funcin de la protena.

6. Cmo se puede ver afectada las tasa de mutacin? Explique cada factor.
Las tasas de mutaciones estn afectadas por tres factores.
1) Dependen de la frecuencia con la cual se producen los cambios primarios en el
DNA. stos pueden surgir por cambios moleculares espontneos o inducirse por
agentes qumicos o fsicos del medio ambiente.
2) La probabilidad de que, una vez que se produzca un cambio, ste sea reparado.
La mayora de las clulas posee numerosos mecanismos para la reparacin del
DNA alterado. Por tanto, la mayora de las alteraciones se corrige antes de que
se replique. Si estos sistemas de reparacin son eficaces, las tasas de mutaciones
van a ser bajas; si son defectuosos, las tasas de mutaciones sern elevadas.
Algunas mutaciones aumentan la tasa global de mutacin en otros genes. Estas
mutaciones suelen producirse en genes que codifican componentes de la
maquinaria de replicacin o enzimas de reparacin del DNA.
3) La probabilidad de reconocer o registrar una mutacin. Cuando se secuencia el
DNA, todas las mutaciones son potencialmente detectables. Sin embargo, en la
prctica, las mutaciones suelen detectarse por sus efectos fenotpicos. Algunas
mutaciones parecen surgir con una tasa mayor solo porque son ms fciles de
detectar.

7. Porqu las tasa de mutaciones en eucariontes suelen ser elevadas en
comparacin a procariontes?
Valores, ms altos en los eucariontes, pueden deberse a que las tasas se calculan por
gameto y se necesitan varias divisiones celulares para producir un gameto, mientras que
las tasas de mutaciones en las clulas procariontes se calculan por divisin celular.

8. Qu es el tambaleo?
Es un proceso por el cual las bases normales, las protonadas y de otras formas pueden
aparearse gracias a la flexibilidad en la estructura helicoidal del DNA. Estas estructuras
se detectaron en las molculas de DNA y hoy se cree que son responsables de muchos
de los errores de apareamientos durante la replicacin.

9. Cmo se produce un error incorporado y como este puede transformarse en un

error replicado?
Cuando se incorpora una base apareada de manera incorrecta en una cadena
nucleotdica recin sintetizada, se dice que ha ocurrido un error incorporado.
Supongamos que durante la replicacin, la timina que se aparea con la adenina se
aparea incorrectamente con la guanina a travs del tambaleo. En la siguiente ronda de
replicacin, se separarn las dos bases apareadas de manera incorrecta y cada una
servir como molde para la sntesis de una nueva cadena nucleotdica. Esta vez, la timina
se aparear con la adenina y producir otra copia de la secuencia de DNA original. Sin
embargo, en la otra cadena la guanina incorporada incorrectamente servir como molde
y se aparear con la citosina, produciendo una molcula de DNA nueva que posee un
error: un par C*G en lugar del par original T*A (una sustitucin de base T*A C*G).
El error incorporado conduce a un error replicado que crea una mutacin permanente,
porque ahora todas las bases se aparean de forma correcta y no hay un mecanismo en
los sistemas de reparacin que permita detectar este error.

10. Cmo hacen los anlogos de bases para generar mutaciones?
Los anlogos de bases tienen estructuras similares a las de los nucletidos y pueden
incorporarse en el DNA en el curso de la replicacin. Muchos de los anlogos tienden a
aparearse en forma incorrecta, lo que puede conducir a mutaciones. Se requiere la
replicacin del DNA para que las mutaciones inducidas por anlogos de bases sean
incorporadas en el DNA.

11. Cmo hacen los agentes alquilantes, el cido nitroso, la hidroxilamina y las
reacciones oxidativas para producir mutaciones?
Agentes alquilantes: son sustancias qumicas que donan: grupos alquilos, grupos metilos
(CH3) y etilos (CH3-CH2) a las bases nucleotdicas.
Por ejemplo:
El etil-metansulfonato (EMS) agrega un grupo etilo a la guanina y produce 6etilguanina, la que luego se aparea con la timina. Por eso, el EMS produce
transiciones C*G T*A.
El EMS tambin es capaz de agregar un grupo etilo a la timina y producir 4etiltimina, la que luego se aparea con la guanina, conduciendo a una transicin
T*A C*G.

Desaminacin: esta puede producirse de manera espontnea o mediante algunas
sustancias qumicas.
Por ejemplo:
El cido nitroso desamina a la citosina y crea un uracilo, el cual se aparear con
la adenina en la siguiente replicacin para producir una mutacin de transicin
C*G T*A.
El cido nitroso transforma la adenina en hipoxantina, la que se aparea con la
citosina y da lugar a una transicin T*A C*G.
El cido nitroso tambin desamina a la guanina y produce la xantina, que se
aparea con la citosina de igual modo que la guanina; sin embargo, la xantina
tambin puede aparearse con la timina y generar una transicin C*G T*A.
El cido nitroso produce exclusivamente mutaciones de transicin y, como se

producen tanto la transicin C*G T*A como la T*A C*G, estas mutaciones
pueden invertirse con cido nitroso.

Hidroxilamina: es un mutgeno modificador de bases muy especfico.
Por ejemplo:
Agrega un grupo hidroxilo a la citosina y la convierte en hidroxilaminacitosina
que se aparea con la adenina en lugar de la guanina y lleva a las transiciones C*G
T*A. Como la hidroxilamina acta slo sobre la citosina, no genera
transiciones T*A C*G y, por tanto, no revierte las mutaciones que produce.

Reacciones oxidativas: las formas reactivas del oxgeno como los radicales superxidos,
el perxido de hidrgeno y los radicales hidroxilos se producen tanto en el curso del
metabolismo aerobio normal, como por la radiacin, el ozono, los perxidos y ciertas
drogas. Estas formas reactivas del oxgeno daan el DNA e inducen mutaciones
provocando cambios qumicos en el DNA.
Por ejemplo:
La oxidacin convierte la guanina en 8-oxi- 7,8-dihidrodesoxiguanina, que suele
aparearse en forma incorrecta con la adenina en lugar de la citosina y causar una
mutacin de transversin G*C T*A.

12. Qu tipos de mutaciones se producen por las radiaciones ionizantes y las UV?
La radiacin ionizante, como los rayos X y los rayos gamma, daan el DNA mediante el
desplazamiento de electrones de los tomos; luego estos electrones rompen uniones
fosfodister y alteran la estructura de las bases. La luz ultravioleta provoca mutaciones
sobre todo mediante la produccin de dmeros de pirimidina que interrumpen la
replicacin y la transcripcin. El sistema SOS permite a las bacterias superar los bloqueos
de la replicacin, pero introduce errores en la sntesis de DNA.

13. Qu es el sistema SOS y cmo conduce a un incremento de las mutaciones?
El sistema SOS es un sistema de reparacin del DNA propenso a los errores que consiste
por lo menos en 25 genes. La induccin del sistema SOS hace que se salteen las regiones
de DNA daado, lo que permite la replicacin del DNA a travs de las regiones daadas.
Sin embargo, la insercin de bases en la nueva cadena de DNA, en ausencia de bases en
la cadena molde, conduce a un proceso de replicacin menos exacto; por lo tanto
ocurren ms mutaciones.

14. Cul es el propsito de la prueba de Ames?
La prueba de Ames se basa en el principio de que tanto el cncer como las mutaciones
son provocados por daos en el DNA y los resultados de los experimentos han
demostrado que el 90% de los carcingenos conocidos tambin son mutgenos. Ames
propuso que la mutagnesis en las bacterias podra servir como un indicador de
crcinognesis en los seres humanos. De esta manera se prueban compuestos qumicos
en bacterias antes de ser usadas por humanos, si en las bacterias el compuesto qumico
produce mutagnesis es muy probable que en humanos el mismo compuesto qumico
produzca cncer; por esto es muy utilizada para investigar el potencial de las sustancias
para causar cncer.

15. Enumere, por lo menos, tres tipos diferentes de reparacin del DNA y explique
brevemente cmo se lleva a cabo cada uno.
Reparacin de los errores de apareamiento
Las bases apareadas en forma incorrecta distorsionan la estructura tridimensional del
DNA y las enzimas de la reparacin de los errores de apareamiento detectan estas
distorsiones. Adems de detectar bases apareadas en forma incorrecta, este sistema de
reparacin corrige bucles pequeos de DNA no apareados, como los producidos por
deslizamiento de las cadenas durante la replicacin.
Algunas repeticiones de trinucletidos pueden formar estructuras secundarias sobre la
cadena no apareada, permitindoles escapar a la deteccin por el sistema de reparacin
de los errores de apareamiento.
El proceso es que una vez reconocido el error incorporado, las enzimas de reparacin
de los errores de apareamiento cortan la seccin distorsionada de la cadena recin
sintetizada y la DNA polimerasa y la DNA ligasa rellenan la brecha con nucletidos
nuevos, utilizando la cadena de DNA original como molde. Para que esta estrategia
funcione, la reparacin de los errores de apareamiento debe tener una manera de
reconocer entre la cadena vieja y la cadena nueva del DNA, de modo que se elimine el
error incorporado y no parte de la cadena original.

Reparacin directa
Repara el dao del DNA al cambiar directamente el nucletido daado nuevamente por
su estructura original.
El proceso es especfico para cada nucletido por ejemplo la reparacin directa tambin
corrige la 06-metil-guanina, un producto de alquilacin de la guanina que se aparea con
la adenina y produce transversiones G*C T*A. La enzima llamada 06-metilguaninaDNA metiltransferasa elimina el grupo metilo de la 06-metil-guanina y restaura la base a
una guanina.

Reparacin por escisin de bases
Es un proceso que consta de bsicamente de 2 pasos: primero seescinden las bases
modificadas y luego se reemplaza el nucletido completo.
El proceso empieza con la escisin de bases modificadas que es catalizada por un grupo
de enzimas denominadas DNA glucosilasas, cada una de las cuales reconoce y extrae un
tipo especfico de base modificada mediante la ruptura de la conexin que une esa base
con el tomo de carbono 1 de la desoxirribosa. Despus de que se ha extrado la base,
una enzima llamada endonucleasa AP (apurnica o apirimidnica) corta el enlace
fosfodister y otras enzimas eliminan a la desoxirribosa. Luego, la DNA polimerasa
agrega nucletidos nuevos al grupo 3-OH expuesto y reemplaza una seccin de
nucletidos en la cadena daada. La DNA ligasa sella la muesca en el esqueleto
fosfodister y de este modo se restaura la secuencia intacta original.

Reparacin por escisin de nucletidos
Elimina lesiones del DNA voluminosas que distorsionan la doble hlice, como los
dmeros de pirimidina o hidrocarburos grandes unidos al DNA. La reparacin por
escisin de nucletidos es bastante verstil y puede reparar muchos tipos de daos
diferentes del DNA. Se encuentra en clulas de todos los organismos, desde bacterias
hasta seres humanos y es uno de los mecanismos de reparacin ms importante.

El proceso de escisin del nucletido es complejo. En los seres humanos, participan gran
nmero de genes. Primero, un complejo de enzimas examina al DNA en busca de
distorsiones de su configuracin tridimensional. Cuando se detecta una distorsin, otras
enzimas separan las dos cadenas nucleotdicas en la regin daada y las protenas de
unin a cadenas simples estabilizan las cadenas separadas. Despus, se corta el
esqueleto de azcar-fosfato de la cadena daada a ambos lados de la lesin. Un corte
se hace 5 nucletidos en direccin proximal (en el lado 3) del dao y el otro, 8
nucletidos (en los procariontes) o desde 21 a 23 nucletidos (en los eucariontes) en
direccin distal (en el lado 5) de la lesin. Se quita una parte de la cadena daada y la
DNA polimerasa rellena la brecha y la ligasa la sella.

Otros tipos de reparacin del DNA
Las vas de reparacin del DNA descritas hasta ahora corresponden al dao limitado a
una de las cadenas de una molcula de DNA, dejando que la otra cadena se utilice como
molde para la sntesis de DNA nuevo durante el proceso de reparacin. Sin embargo,
algunos tipos de dao del DNA afectan ambas cadenas de la molcula y, por tanto,
presentan un desafo mayor para la maquinaria de reparacin del DNA. La radiacin
ionizante produce a menudo la ruptura de la doble cadena de DNA. La reparacin de las
rupturas de las cadenas dobles suele hacerse por recombinacin homologa.

Otro tipo de dao que afecta ambas cadenas es la unin cruzada intercatenaria, que
surge cuando las dos cadenas de un dplex estn conectadas por enlaces covalentes.
Las uniones cruzadas intercatenarias son muy txicas para las clulas porque frenan la
replicacin. Se conoce muy poco acerca de cmo se reparan las uniones cruzadas inter
catenarias. Hay un modelo que propone que se producen rupturas de la cadena doble a
cada lado de la unin cruzada y luego son remediadas por las vas que reparan esas
rupturas.

16.
a. Si se produce una sola transicin en un codn que codifica Phe, qu aminocidos
podran ser codificados por la secuencia mutada?

1. Se ve que codones codifican a Phe est codificada por los siguientes codones
de RNA: UUU UUC
2. Se encuentra la secuencia de DNA correspondiente: AAA AAG
3. Se analiza la mutacin pedida en este caso la sustitucin de bases por
transicin: donde se reemplaza una purina por otra purina diferente o,
alternativamente, una pirimidina se reemplaza por otra pirimidina diferente.
4. Se reemplaza la secuencia de DNA segn la mutacin pedida.
5. Se encuentra el codn de RNA correspondiente a la nueva secuencia de DNA
mutada en este caso por transicin.
6. Se analiza el aminocido que result.
7. Respuesta: Leucina, serina o fenilalanina.



Cuadro de resumen


Codones de
RNA de la
fenilalanina

Secuencia de DNA
correspondiente

UUU

AAA

UUC

AAG

Sustitucin de
base por
transicin
GAA
AGA
AAG
GAG
AGG
AAA

Nuevos
codones
de RNA
CUU
UCU
UUC
CUC
UCC
UUU

Aminocido
que codifica
Leucina
Serina
Fenilalanina
Leucina
Serina
Fenilalanina

b. Si se produce una sola transversin en un codn que codifica Phe, qu aminocidos
podran codificarse por la secuencia mutada?
Respuesta: Isoleucina, tirosina, leucina, valina o cistena

c. Si se produce una sola transicin en un codn que codifica Leu, qu aminocidos
podran codificarse por la secuencia mutada?
Respuesta: Fenilalanina, prolina, leucina o serina

d. Si se produce una sola transversin en un codn que codifica Leu, qu aminocidos
podran codificarse por la secuencia mutada?
Respuesta: Metionina, fenilalanina, valina, arginina, triptfano, leucina, isoleucina,
tirosina, histidina o glutamina (tambin podra aparecer un codn de terminacin).

17. La siguiente secuencia de nucletidos se encuentra en la cadena molde del DNA.
En primer lugar, determine los aminocidos de la protena codificada por esta
secuencia, utilizando el cdigo gentico.
Luego, describa la secuencia de aminocidos alterada de la protena que se encontrar
en cada una de las mutaciones siguientes.
Secuencia de la cadena molde del DNA
3TAC TGG CCG TTA GTT GAT ATA ACT5 '
1 24
Nmero del nucletido

Secuencia de aminocidos; amino -Met-Thr-Gly-Asn-Gln-Leu- Tyr-Stop-

Nucletido Codn Secuencia de DNA Codn de RNA Aminocido

1, 2, 3,
1
TAC
AUG
Metionina

4, 5, 6,
2
TGG
ACC
Treonina

7, 8, 9,
3
CCG
GGC
Glisina


10, 11, 12, 4
TTA
AAU
Asparragina

13, 14, 15, 5
GTT
CAA
Glutamina

16, 17, 18, 6
GAT
CUA
Leucina

19, 20, 21, 7
ATA
UAU
Tirosina

22, 23, 24. 8
ACT
UGA
STOP

a. Mutante 1: una transicin en el nucletido 11.

Nucletido Codn Secuencia de DNA Codn de RNA Aminocido
1, 2, 3,
1
TAC
AUG
Metionina
4, 5, 6,
2
TGG
ACC
Treonina
7, 8, 9,
3
CCG
GGC
Glisina
10, 11, 12, 4
TCA
AGU
Serina
13, 14, 15, 5
GTT
CAA
Glutamina
16, 17, 18, 6
GAT
CUA
Leucina
19, 20, 21, 7
ATA
UAU
Tirosina
22, 23, 24. 8
ACT
UGA
STOP
Respuesta: Met-Thr-Gly-Ser-Gln- Leu-Tyr-Stop

b. Mutante 2: una transicin en el nucletido 13.
Respuesta: Met-Thr-Gly-Asn-Stop

c. Mutante 3: una delecin en el nucletido 7.
Respuesta: Met-Thr-Ala-Ile-Asn-Tyr-Ile

d. Mutante 4: una transversin TA en el nucletido 15.
Respuesta: Met-Thr-Gly-Asn-His-Leu-Tyr-Stop

e. Mutante 5: una adicin de TGG despus del nucletido 6.
Respuesta: Met-Thr-Thr-Gly-Asn-Gln-Leu-Tyr-Stop

f. Mutante 6: una transicin en el nucletido 9.
Respuesta: Met-Thr-Gly-Asn-Gln-Leu-Tyr-Stop

18. Se encuentra la siguiente secuencia nucleotdica en un tramo corto de DNA:
5-ATGT-3
3-TACA-5
Si se trata esta secuencia con hidroxilamina, qu secuencias se generarn despus de
la replicacin?

La hidroxilamina es una sustancia que va a modificar la citosina hacindole
hidroxilamino-citosina est va a poder aparearse con la adenina produciendo una
transicin C*G T*A

Secuencia original Secuencia de transicin Secuencia mutada final
5-ATGT-3
3-TACA-5

5-ATAT-3
3-TACA-5

5-ATAT-3
3-TATA-5