El reloj de macrfagos regula el tiempo de respuesta a citosinas.

En esta parte del estudio, se realizaron pruebas con macrfagos y la expresin

de sus diferentes genes del reloj circadiano y de citosinas frente a la reaccin
con el LPS. Los resultados fueron plasmados en diferentes grficas que
permiten explicar que el reloj de macrfagos tiene un profundo efecto
modulante en las clulas estudiadas en vivo y en la activacin sistmica de la
inmunidad innata in vivo.
Grficas S2 A y B:

Las grficas A y B demuestran que los ratones mostraron patrones normales

de comportamiento circardiano, en su comportamiento normal y en el ncleo
supraquiasmtico (SCN) esto se debe a que en el experimento se usaron
ratones modificados genticamente, en su reloj de macrfagos y no en general,
es decir las oscilaciones y cambios que se observaran no seran a nivel del
ncleo supraquiasmtico sino a nivel celular, en especial, de macrfagos. A, es
un actograma, compara los ratones que tienen bmal alterado, con wt, los
ratones normales, al comparar ambas grficas, se nota que son iguales. B es
una grfica que evala oscilaciones de bioluminiscencia en el SCN, las
oscilaciones son de alrededor de 24 horas, esto es normal para el ciclo
circadiano. C, es una grfica electrofortica que muestra que bmal ha sido
escindida de los ratones modificados, es decir es una comprobacin de que han
sido alterados los ratones en realidad.

Figuras 2-A, 2-B y 2-C

Resulta que al examinar un exudado de clulas peritoneales (ha sido el mtodo

que se ha llevado a cabo para estudiar la expresin de los distintos
componentes moleculares en estudio dentro de las clulas del sistema inmune)
de los ratones WT, o sea, normales, se evidencia oscilaciones circadianas
pronunciadas, que al compararlas con los ratones con Bmal alterado no las hay.
En la grfica 2-B observamos que los ratones modificados genticamente
carecen de Bmal. Con respecto a las oscilaciones, esto se ve en la grfica 2-A,
se ve una curva de bioluminiscencia por tiempo, numerosas ondas de color
ms oscuro representan WT, en cambio la lnea ms gris, el ratn modificado.
Ahora bien, la eliminacin, alteracin de bmal caus la expresin no rtmica de
per2, cry1 y dbp y suprimi los transcriptos para rev-erb alfa y rev-erb beta,
esto es evidenciado en la grfica 2-C, las curvas son prcticamente lineales si
se les compara con el modelo WT.
Para confirmar que las clulas mostraban este patrn in vivo, se usaron PECs
(exudados de clulas peritoneales) recolectados de ratones vrgenes

modificados genticamente y WT control, los cuales fueron comparados en los

tiempos circardianos 12 y 0, (CT0, CT12). El resultado, evidenciado en la
grfica S2-D fue que los PEC de los ratones control mostraban grandes
oscilaciones en el da de la expresin de mRNA de dbp, cry1, per2, bmal1, reverba, rev-erbb, en contraste, aquellos provenientes de ratones modificados
genticamente no.
Grfica S2-D:

In vivo, le fue suministrado a los ratones modificados y WT, LPS y fue evaluada
la expresin de las citosinas IL-6, CCL5, IL-12 a CT0 y CT12. Una respuesta
circadiana, esperable, con una magnitud acorde al reloj no fue observada en
los ratones modificados, indicando una prdida del mecanismo regulador
circadiano, de igual manera, esto fue observado en PEC de los ratones
estudiados, hay picos y declives notables de expresin de la citosina en el
tiempo, que son normales en los WT pero no aparecen en los ratones
modificados. Abajo figuras 2-D, S2-A, S2-B y la figura 2E corresponden con lo
descrito en este prrafo.