Comercializadora de Lcteos y

Derivados S.A. de C.V.

DIVISIN TIZAYUCA
METODOS DE ANALISIS

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Ttulo:
Determinacin de Protenas. Micro Kjeldahl
Equipo BUCHI
No. de Rev.
Fecha de revisin:
Primera
Mayo 2008

Departamento:
Aseguramiento de Calidad
Clave:
TZ-ACC-020
Fecha de elaboracin:
Enero 2005

1. FUNDAMENTO.El mtodo micro Kjeldahl para la determinacin de nitrgeno se basa en la oxidacin de la materia
orgnica de la muestra mediante la accin de cido sulfrico concentrado y calor (para realizar la
digestin ).
La velocidad de reaccin se acelera adicionando sulfato de potasio para elevar el punto de
ebullicin u utilizando un catalizador como cobre, mercurio o selenio, en este mtodo se utiliza
una mezcla selnica.
La oxidacin provoca que el nitrgeno de las protenas y algunos otros compuestos nitrogenados
formen sulfato de amonio, posteriormente se adiciona a hidrxido de sodio al 32% que reacciona
con el sulfato de amonio y libera amoniaco. Este se recibe en cido brico al 4% posteriormente el
amoniaco se titula con el cido clorhdrico. Finalmente se determina la cantidad de nitrgeno total
que contena la muestra, la protena cruda se calcula multiplicndose en nitrgeno total por un
factor emprico derivado del promedio de nitrgeno proteico en 100 g de protena, por ejemplo:
Para protena lctea 15.65% N/100g protena factor = 6.38
Debe considerarse que este mtodo cuantifica tambin nitrgeno de sustancias nitrogenadas no
proteicas.
2. ALCANCE.Leche en polvo, doble concentracin, UHT, leche pasteurizada, sueros, crema y leche fresca
(producto terminado).
3. MATERIALES Y EQUIPO.

SCRUBBER ( lavador de gases )

Aparato digestor BUCHI
Aparato destilador BUCHI
Probeta de digestin BUCHI
Matraz Erlenmeyer de 250 mL
Balanza analtica.
Pipeta volumtrica de 25 mL

4. REACTIVOS.

cido sulfrico 93 - 98% (libre de nitrgeno).

Mezcla reactiva de selenito (N de art. Merck 8030).
Indicador deshiro-tashiro

Elabor:

Revis:

Autoriz:

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Determinacin de Protenas. Micro Kjeldahl
Equipo BUCHI
No. de Rev.
Fecha de revisin:
Primera
Mayo 2008

Aseguramiento de Calidad

L. Q. Ma. Concepcin Elizalde

Jefe Aseguramiento de Calidad

Departamento:
Aseguramiento de Calidad
Clave:
TZ-ACC-020
Fecha de elaboracin:
Enero 2005

Ing. Diana Tovar G.

Coordinador HACCP

Disolver 0.2 g. de rojo de metilo en 60 mL de etanol del 96 G.L. y aforar a 100 mL con agua
destilada, disolver 0.2 g de azul de metileno y aforarlos a 100 mL con agua destilada. Mezclar
2 partes de la solucin de rojo de metilo y una de la solucin de azul de metileno.
Solucin 0.1 N de cido clorhdrico
Solucin de cido brico al 4%
Solucin de NaOH al 33%
Carbonato de sodio

5. PROCEDIMIENTO.5.1.

Pesar la muestra y colocarla cuidadosamente en la probeta de digestin BUCHI ( el peso de la

muestra depende el contenido de nitrgeno en la misma ).

5.2.

Adicionar 2.5 g de mezcla reactiva de seleneo y 12.5 mL de cido sulfrico Q.P. colocar la
probeta en el aparato digestor y calentar 10 min en la posicin 10 y 1 hora en la posicin 8 o
hasta que la solucin se aclare.

5.3.

Enfriar y colocar la probeta en el aparato destilador BUCHI, procurando que no haya fugas en
el acoplamiento con el bouchon.

5.4.

Programar el tablero de control 100 mL de agua destilada, 70 mL de NaOH al 32% con 4 o 5

min de destilacin y oprimir START inmediatamente conectar al sistema de destilacin un matraz
Erlenmeyer con 25 mL de cido brico al 4% y 2 gotas de Deshiro-Tashiro, destilar hasta que
todo el amoniaco haya destilado ( min 150 mL ), titular con solucin de HCl 0.1 N hasta un vire
del indicador de color verde agua a color azul claro.

6. CALCULOS.% NITRGENO = V1 * N1 * 0.014 * 100

P
Donde:
V1 = Volumen de cido clorhdrico 0.1 N
N1 = Normalidad del HCl
P = Peso de la muestra

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Equipo BUCHI
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Fecha de revisin:
Primera
Mayo 2008

Departamento:
Aseguramiento de Calidad
Clave:
TZ-ACC-020
Fecha de elaboracin:
Enero 2005

% PROTENA = % NITRGENO * F
Donde:
F = Factor:
6.38
6.25

Leche y suero
Para productos no lcteos.

7. REFERENCIAS.Elaboracin de Mtodos de Anlisis y Calibracin TZ- PCC 007