Cuestionario enzimologa, NRC 2435, Extraccin, purificacin del inmovilizacin

Cuestionario 1
1. Qu tipo de enlaces se forman en el mtodo de adsorcin para estabilizar la
enzima? Por qu es una ventaja?
En este mtodo no se forman enlaces permanentes entre el soporte y la enzima. La
interaccin entre estos se da mediante la formacin de puentes de hidrgeno, enlaces
dbiles que sin embargo estabilizan la enzima al soporte. Es una ventaja puesto que los
puentes de hidrgeno requieren de poca energa para escindirse, evitando que dicha energa
sea capaz de desnaturalizar a la enzima.
2. Cul es la importancia de la inmovilizacin enzimtica?
Su importancia consiste en mantener la biomolcula unida a un soporte fsico, esto provee a
las enzimas de ciertas ventajas como:
Aumento de la estabilidad de la enzima.
La reutilizacin de la enzima.
Permite el diseo de reactores enzimticos.
3. La lisozima tiene un pI=11, dos unidades de pH superior al resto de las
protenas de la clara del huevo, si en una solucin se regula el pH entre 9,5-10
Qu tipo de intercambiador es necesario para su purificacin?
Se necesita de un intercambiador inico.

4. Qu hay que tomar en cuenta para la seleccin de un mtodo de ruptura

celular?

Naturaleza del producto intracelular

Escala de la operacin

Estabilidad del producto

Pureza del producto

Costo del mtodo

5. Cul es el mtodo
industrialmente?

de

inmovilizacin

enzimtica

ms

utilizada

La inmovilizacin por unin covalente, debido a que estabiliza apropiadamente la

estructura terciaria de la enzima otorgndole una mayor resistencia a la inactivacin, y
relativamente barato.
Cuestionario 2
1. Qu mtodo de purificacin elegira para extraer una protena con varios
aminocidos apolares apolar? Justifique.
Una cromatografa en reversa, debido a que esta consiste en el uso de un soporte apolar,
que capturara a las protenas con aminocidos apolares.
2.- Cules son las ventajas de la inmovilizacin de enzimas?
Las ventajas que posee el uso de enzimas inmovilizadas en comparacin a enzimas en
solucin es el aumento de la estabilidad de la enzima y actividad de la enzima en funcin
del pH y la temperatura, la disminucin de costos al reutilizar el derivado en varios
procesos y diseo de reactores adaptables para cada enzima inmovilizada.
3.- Cul es la ventaja de los mtodos no mecnicos?
Los mtodos no mecnicos se encargan de romper las cubiertas celulares induciendo la lisis
celular por medio de medios qumicos, fsicos o biolgicos. Son procedimientos menos
severos que los mecnicos y no generan grandes daos a las clulas facilitando una
posterior purificacin del producto de inters, su grado de especificidad es alto.
4.- La electroforesis es un mtodo de purificacin? Por qu?
No, es un mtodo de purificacin es un mtodo para comprobar si la protena de inters se
ha separado del resto, es decir si la protena es pura.
5.- De qu se encarga la extraccin enzimtica?
Se encarga de romper las cubiertas celulares induciendo la lisis celular por medio de
medios qumicos, fsicos y biolgicos.
Cuestionario 3
1. Describa tres mtodos de extraccin enzimtica y sus ventajas.
2. Cul es la importancia de la purificacin enzimtica?
3. Explique 3 mtodos de purificacin enzimtica y sus desventajas
Precipitacin por sales: facilidad en separacin diferencial pueden
presentarse dos escenas, en donde la desventaja es que en la primera
escena, la protena presente una solubilidad mayor.

Ultrafiltracin Aspiracin o presin a travs de membranas de

porosidad fina como tamiz molecular. Presenta una alternativa
interesante para separar enzimas, pues no hay cambio de fases, ni altos
gradientes de temperatura. Su desventaja radica en la disminucin de
extracto enzimtico.
4. Determine un ejemplo de purificacin enzimtica usando Sulfato de
amonio (NH4)2SO4
La precipitacin con sulfato amnico (20% peso/volumen) de protenas
no deseadas mejora la actividad especfica cuatro veces, y el aumento
de la concentracin del sulfato amnico hasta un 56% (p/v) para
precipitar la penicilina da lugar a una purificacin global cinco veces
superior, a la vez que reduce el volumen desde unos 60 litros a un peso
de pasta de 2,4 kg
5. Escriba las aplicaciones de la inmovilizacin enzimtica en la industria
La inmovilizacin de levaduras en perlas de alginato y poliacrilamida se ha utilizado
con xito en la fermentacin de vino blanco y en la produccin de etanol; un mejor
control en sistemas continuos y la posible recuperacin de la biomasa para su posterior
reutilizacin.