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CAMPUS RIO DE JANEIRO

APOSTILA DE CROMATOGRAFIA GASOSA

ORGANIZAO: ADEMRIO IRIS DA SILVA JUNIOR

REVISO: GABRIEL DO NASCIMENTO FREITAS

COLABORADORES:

ADEMRIO IRIS DA SILVA JUNIOR


ANA LETCIA ALMEIDA DANTAS
HIRAM DA COSTA ARAJO FILHO
MARIA ELISA GONALVES LACERDA
MONICA COSTA PADILHA
SONIA MARIA DE ALMEIDA

2011

Instituto Federal do Rio de Janeiro, Campus Maracan, verso 2011

CURSO DE CROMATOGRAFIA A GS
Cromatografia um mtodo fsico de separao, em que os componentes da amostra a serem separados
so distribudos entre duas fases, uma estacionria e a outra que se move em uma direo definida. Na
cromatografia gasosa, a fase mvel sempre um gs inerte, pois o processo feito em temperatura
acima do ponto de ebulio do soluto, e o uso de um gs inerte previne a ocorrncia de reaes
indesejveis entre o soluto e a fase mvel.
O PROCESSO DA SEPARAO CROMATOGRFICA
O processo de separao cromatogrfica resultado de repetidos processos de adsoro e dessoro
durante o movimento dos analitos. A separao ocorre devido s diferenas na distribuio de cada
componente entre as duas fases. H duas teorias para explicar o fenmeno cromatogrfico: a formao
de pratos tericos e a separao dinmica (Equao de Van Deemter).
A TEORIA DOS PRATOS TERICOS
uma analogia com o fenmeno de destilao. O prato terico a altura equivalente de um processo de
equilbrio do soluto distribuindo-se entre cada fase e que depende fundamentalmente do processo de
partio. No equilbrio:

Ki =
Ki =

concentra o na fase estacionr ia do composto i


concentra o na fase mvel do composto i
mi (fe ) / Vfe

(1)

mi (fm) / Vfm

Onde (Ki) o coeficiente de partio do analito (i), (m) e (V) so massa e volume e (fe) e (fm) indicam
fase estacionria e fase mvel, respectivamente. Logo:

Ki

m i (fe )
Vfe
=
= ki
Vfm
m i (fm )

(2)

A razo entre as massas dita fator de capacidade do analito i (ki), pois expressa o quanto de massa de
cada analito se acomoda na fase estacionria, em relao massa que fica na fase mvel. Quanto maior
o ki, mais massa a coluna acomoda, o que significa maior espessura de fase estacionria ou mais
afinidade do soluto pela fase estacionria. A razo entre os volumes das fases chamada de (), logo:
ki = Ki x

(3)

Frao do soluto na fase mvel: 1/(1+ki)

(4)

Frao do soluto na fase estacionria: k/(1+ki)

(5)

A frao do soluto na fase mvel tem a velocidade da fase mvel. A frao na fase estacionria tem
velocidade zero. A velocidade mdia a velocidade de cada frao, multiplicada pelo valor da frao:
u(mdia) = f1u1+...+fnun

(6)

Como s h duas fraes e uma delas tem velocidade zero, a velocidade mdia do soluto ser:
u(mdia) =

1
u(mvel )
1+ ki

(7)

Se no houvesse a partio, o soluto teria a velocidade da fase mvel. Logo, a frao do soluto na fase
mvel, [1/(1+ki)] a frao que expressa a diminuio na velocidade do composto em relao
velocidade do gs de arraste, sempre menor ou igual a 1.

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Convm notar que, quando k aumenta, o tempo de reteno tambm aumenta e a velocidade diminui. k
diretamente proporcional ao tempo e inversamente proporcional velocidade.
Deve-se enfatizar que molculas de mesma espcie no se separam ao longo da coluna. O processo de
troca dinmico: a molcula na fase estacionria vai para a fase mvel e a molcula na fase mvel vai
para a fase estacionria a todo o momento. Logo, o conjunto de mesma espcie move-se na velocidade
mdia caracterstica da espcie, que depende da fase estacionria, da presso e da temperatura.
O espalhamento ocorre, no entanto, por causa do processo de troca
com a fase estacionria e pelo fato de que as molculas de um gs
tm uma distribuio de velocidades, como visto na teoria cintica
dos gases. Esse espalhamento d origem a um formato gaussiano na
distribuio espacial das molculas, o pico cromatogrfico.
Volume de reteno (VR) o volume de fase mvel requerido para eluir um soluto at o mximo do pico.
O tempo de reteno (tR) o tempo para se chegar a esse mximo, contado desde a injeo. Logo:
VR = fluxo x tR

(8)

O tempo de reteno de um composto que no ficasse retido na fase estacionria (k = 0) seria igual ao
tempo que a fase mvel gasta para percorrer a coluna. O volume associado a esse tempo o prprio
volume da fase mvel na coluna (VM).
VM = fluxo x tM

(9)

A velocidade mdia do soluto no-retido (uM) o comprimento da coluna (L) sobre o tempo desse soluto:
uM (mdia) = L/tM

(10)

A velocidade mdia de outro soluto :


us (mdia) = L/tR

(11)

No confunda fluxo com velocidade linear, pois o fluxo depende do dimetro da coluna e dimetros
maiores permitem fluxos maiores, mesmo que a velocidade linear seja igual. Por (7), deduzimos:

us
t
V
1
=
= M = M
uM 1 + k i
tR
VR

(12)

Logo, o fator de capacidade (ki) de uma substncia pode ser calculado experimentalmente a partir do
tempo de reteno da fase mvel (ou do composto no-retido) e do tempo de reteno do composto em
estudo naquela coluna, nas condies em que ele est sendo analisado. Por ltimo, podemos estabelecer
que o aumento do tempo de reteno (tR) em relao ao tempo da fase mvel (tM) tambm
influenciado pelo fator de capacidade:
tR = tM (1 + ki)

(13)

Veremos mais adiante que, no caso da cromatografia gasosa, as presses utilizadas na entrada e na
sada da coluna e a temperatura tambm influenciam no processo cromatogrfico.
O MECANISMO DE SEPARAO
Se 2 solutos tm diferentes coeficientes de partio, logo tm diferentes fatores de capacidade (k1 e k2),
os tempos de reteno so distintos e pode-se deduzir a diferena entre eles usando (14):
tR1 tR2 = tM (1 + k1) tM (1 + k2)
tR1 tR2 = tM (k1 k2)

(14)

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tM cresce quando a coluna aumenta, e tambm


aumenta a separao entre os mximos dos
picos. Mas os picos alargam ao longo da
coluna, o que diminui a separao entre o
corpo dos picos. Ou seja, dois picos que
tenham a mesma separao, mas estejam em
um tempo maior, estaro menos separados por
causa do espalhamento.
As duplas mostradas tm mesma diferena de
tR, mas a 2 dupla mais mal separada, pois os
picos alargaram ao longo da coluna. Ou seja,
h um limite para aumentar o tamanho da
coluna e obter melhor separao. Outros
fatores que alargam os picos so explicados
mais adiante, mas mostramos ao lado o
alargamento
cromatogrfico,

natural
que

de

todo

chamaremos

pico
de

espalhamento entrpico.
Convm ressaltar que, uma vez separados, os
picos no voltam a se mesclar. A 2 dupla do
cromatograma mostrado NO o que vai
acontecer com a 1 dupla no decorrer do
tempo, pois os picos da 1 dupla podero
alargar, mas estaro ainda mais separados
quando chegarem na posio da 2 dupla.
Todos esses processos se do em sucessivos estgios de equilbrio, de acordo com a teoria dos pratos
tericos. Vistos os principais parmetros cromatogrficos, vamos estabelecer a relao entre esses
parmetros e os tais pratos tericos.
Nos pratos, tericos ou no, de uma coluna de destilao, a separao
ocorre em sucessivas etapas de destilao. Mas existem colunas em que
os pratos no so aparentes. Essas colunas podem, no entanto, ser
comparadas com colunas de destilao de pratos, como na figura ao
lado, e podemos, desse modo, estabelecer seus pratos tericos: se
observarmos que determinada coluna de destilao tem o dobro de
poder de separao de outra coluna com 5 pratos, podemos dizer que ela
tem 10 pratos tericos.

Se a coluna cromatogrfica, por efetuar processos de separao, pode ser comparada com colunas de
destilao, o n de pratos tericos d o poder de separao da coluna. Mais ainda, a altura equivalente
de cada prato terico diz muito sobre o poder de separao de cada fase estacionria. Fases com altura
equivalente pequena tm grande poder de separao, pois tm mais pratos por metro de coluna.

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A matemtica que deduz a equao que calcula o nmero de pratos tericos para cada soluto est alm
do escopo do nosso curso, de forma que a equao no ser deduzida, mas apenas apresentada:
t
N = 16 R
W

t
N = 2,354 R

W
1/2

(16)
2

= 5,54 t R
W1 / 2

(17)

W a largura do pico e W1/2 a largura do pico na meia-altura em segundos, que mais fcil de medir,
pois difcil precisar onde comea e termina o pico na distribuio gaussiana. A altura equivalente de
cada prato (H) ento:
H = L/N

(18)

A seletividade () de uma fase estacionria em relao a dois solutos A e B dada pela razo entre os
coeficientes de partio dos dois solutos A e B, ou seja: = KA/KB, onde KA KB e 1.
RESOLUO CROMATOGRFICA
A resoluo cromatogrfica entre dois compostos (Rs) no
pode ser dada apenas pela separao entre os mximos dos
picos, como j visto, mas tem de levar em conta tambm o
alargamento que eles sofrem. A equao que expressa a
resoluo leva em conta esses dois parmetros (separao e
alargamento):

t R 2 t R1

R s = 1,18
W1 / 2 (2) + W1 / 2 (1)

(19)

CAPACIDADE DE PICO
Estima quantos picos de mesma concentrao cabem dentro de uma coluna, todos com resoluo 1.
Leva em conta o fato de que os picos alargam ao longo do cromatograma, ainda mais que baseia-se em
condies isotrmicas, quando a corrida leva mais tempo do que na programao de temperatura. uma
medida grosseira de quantas substncias podem ser separadas em uma nica corrida em determinada
coluna, sob condies pr-determinadas.
OS PROBLEMAS DA TEORIA DOS PRATOS TERICOS
A teoria dos pratos tericos no oferece boa descrio dos fenmenos de difuso ou da influncia de
irregularidades na distribuio da fase estacionria que ocasionam caminhos preferenciais dentro da
coluna. A equao de Van Deemter, na teoria da separao dinmica, permite incluir as propriedades da
fase em relao s afinidades com os solutos, as difusividades dos solutos, as diferenas nos coeficientes
de partio, a velocidade de deslocamento da fase mvel, a espessura de fase, a porosidade da fase e o
fluxo do gs de arraste, fatores essenciais para entender a capacidade de separao das colunas
cromatogrficas, e que no so todos contemplados pela formulao dos pratos tericos.
A EQUAO DE VAN DEEMTER
O propsito da teoria da separao dinmica ajudar a entender os processos que causam disperso na
coluna cromatogrfica e identificar as propriedades do sistema cromatogrfico que ajudam a controlar a
disperso. Essa informao facilita a escolha da melhor coluna para executar uma dada separao no
modo mais eficiente.

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Na equao de Van Deemter, a altura equivalente do prato terico pode ser calculada pela expresso:

H = 2dp +

2 D g
u

kd2f

2 (1 + k ) 2 D e

(20)

H altura equivalente do prato terico para um

u velocidade linear da fase mvel

determinado soluto

k fator de capacidade do soluto

fator de empacotamento

df espessura da fase estacionria

dp dimetro de partcula

De coeficiente de difuso do soluto na fase

- fator de irregularidade no fluxo

estacionria

Dg coeficiente de difuso do soluto na fase mvel


O primeiro termo da equao devido ao empacotamento. O segundo termo devido fase mvel. O
terceiro termo d a contribuio da fase estacionria.
Agrupando cada termo em um nico fator, podemos expressar (H) em funo de (u):

H=A+

B
+ Cu
u

Onde:

A = 2 d p

(21)

B = 2 D g

C=

kd 2f

2 (1 + k ) 2 D e

FATORES IMPLCITOS NA TEORIA DA SEPARAO DINMICA


A presso e o fator de compressibilidade do gs so fatores implcitos, pois (u) depende da
compressibilidade do gs de arraste e da diferena de presso que existe entre entrada e sada da
coluna. A compressibilidade afeta a distribuio de velocidades, alterando a velocidade em cada ponto e
tambm a velocidade mdia final. O gs sempre fica mais comprimido no incio da coluna (mais lento) e
mais expandido ao final (mais rpido), pois ele acomoda a diferena de presso ao longo do
comprimento da coluna (pense no gs como uma mola). Usualmente a equao de Van Deemter
calculada com velocidade linear mdia (), e esta velocidade afetada por esses dois fatores. Ou seja,
() aumenta com a diferena de presso e aumenta com o fator de compressibilidade, que permite maior
compresso no incio da coluna.
Outro fator no-explcito a temperatura. O aumento da temperatura aumenta a viscosidade do gs,
alterando os coeficientes de difuso na fase mvel, o fator de compressibilidade e, por conseguinte, a
velocidade linear do gs. O aumento da viscosidade com a temperatura o oposto do que ocorre no
estado lquido. No estado lquido, o aumento da temperatura aumenta a energia cintica, fazendo crescer
as foras de desagregao em relao s foras de agregao no lquido, tornando o lquido mais fluido.
No estado gasoso, as molculas j esto desagregadas, e o aumento de temperatura torna o movimento
das molculas mais catico, dificultando cada vez mais o escoamento em uma nica direo. Deve-se
lembrar que viscosidade o mesmo que dificuldade de escoamento.
A temperatura tambm afeta o coeficiente de partio, pois aumenta a presso de vapor e diminui a
tendncia de adsoro na fase estacionria, aumentando o tempo de residncia na fase mvel, ao
diminuir o fator de capacidade e o tempo de reteno. Ou seja, apesar de diminuir a velocidade linear do
gs de arraste, a temperatura, no somatrio de efeitos, diminui o tempo de reteno, por
diminuir a interao dos solutos com a fase estacionria. Desse modo, a velocidade dos solutos
se aproxima mais da velocidade da fase mvel e eles saem mais rpido, mesmo que a prpria velocidade
da fase mvel diminua um pouco. Alm disso, na maioria dos sistemas cromatogrficos, o equipamento
tambm compensa a diminuio da velocidade da fase mvel, aumentado a presso de entrada do gs,
para manter o fluxo constante, o que torna a corrida ainda mais rpida.

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Viscosidade e fator de compressibilidade dependem tambm da natureza do gs de arraste, outro fator


implcito. Desse modo, a escolha do gs de arraste, alm do fato dele ter de ser inerte, guiada pela sua
viscosidade e fator de compressibilidade, que afetam o coeficiente de difuso (e a troca com a fase
estacionria) e a velocidade linear ao longo da coluna (alterando a velocidade linear mdia).
ANLISE DA EQUAO DE VAN DEEMTER
O 1 termo da equao (A) d conta de empacotamentos
irregulares. Ou seja, esse termo zero para colunas capilares

H=

B
+ Cu
u

(22)

(que no tm empacotamento), cuja equao se reduz a:


O 2 termo da equao (B/u) leva em conta difuso molecular. medida que aumenta a velocidade
linear u, esse fenmeno fica menos importante.
O 3 termo (Cu) leva em conta as transferncias de massa entre fase mvel e fase estacionria, que se
torna mais importante quando a velocidade linear aumenta.
Diminuir o valor de (H) aumenta a resoluo da coluna
cromatogrfica. Ou seja, diminuir o valor de (H) faz com que
existam mais pratos por coluna, e as melhores condies
cromatogrficas buscam o mnimo da equao de Van
Deemter. O grfico de (H x u) em isoterma e demais
condies constantes, exceto (u), pode ser visto ao lado:
O termo (A) pode reaparecer em colunas capilares, se as conexes tm espaos vazios significativos, o
que equivale a um empacotamento irregular.
O termo (B/u) provoca alargamento de pico em velocidade baixa, pois existe tempo para que as
molculas se difundam. Para diminuir (B/u), deve-se empregar u alto (maior fluxo ou menor dimetro de
coluna).
A difuso aps o pico maior, pois o equilbrio entre as fases no
totalmente atingido. Na figura, o caso A seria a difuso ideal, e o
caso B a difuso que acontece na realidade, com um efeito de
cauda. Nos cromatogramas, como a varivel independente tempo,
a figura aparecer invertida (cauda para frente).
O temo (Cu) inclui o tempo necessrio para que se atinja o equilbrio entre fases. Quanto maior esse
tempo, ocorrem menos processos de transferncia entre fases, fazendo com que a coluna diferencie
menos entre substncias. Fases estacionrias mais espessas aumentam (Cu), aumentam (H) e diminuem
a capacidade de separao. Menor velocidade linear melhora a interao entre as fases e diminui o efeito
de (Cu), pois h mais tempo para as trocas ocorrerem. Mas isso limitado pelo termo (B/u).
A (u) que se considera tima um pouco acima do mnimo,
para reduzir um pouco o tempo de anlise. Alm disso, o efeito
deletrio de (B/u) antes do timo mais pronunciado do que o
efeito deletrio de (Cu), que altera (H) de modo mais suave,
fazendo com que a regio aps o mnimo da curva seja o
melhor lugar de trabalhar.

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A escolha dos gases em cromatografia gasosa


acaba ficando limitada a 3 gases apenas: He,
N2 e H2. H2 o preferido, exceto quando se
utiliza espectrometria de massas, pois a fonte
de ons do espectrmetro faz com que o H2
possa reagir com as molculas orgnicas,
alterando a resposta do instrumento, alm do
H2 ser mais problemtico em sistemas de alto
vcuo. Nesse caso, He o preferido.

BIBLIOGRAFIA
http://ull.chemistry.uakron.edu/chemsep/chrom_theory/
http://www.chem.agilent.com/cag/cabu/carriergas.htm
http://www.chem.uoa.gr/applets/appletchrom/appl_chrom2.html
http://www.chemkeys.com/bra/md/mds_11/cagced_2/cagced_2.htm
HTTP://WWW.CHROMATOGRAPHY-ONLINE.ORG/3/contents.html
Acessos entre 7 e 15 de agosto de 2008. Por simplicidade, inclu somente a pgina principal dos sites.
Introduction to Open Tubular Column Gas Chromatography, J. V. Hinshaw & L. S. Ettre, 1994, Advanstar
Communications, Cleveland, OH, USA.
Basic Relationships of Gas Chromatography, L. S. Ettre & J. V. Hinshaw, 1993, Advanstar
Communications, Cleveland, OH, USA.

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INSTRUMENTAO O CROMATGRAFO A GS
GS DE ARRASTE: REGULADORES DE PRESSO E FLUXO
A funo do gs usado como fase mvel apenas a de carrear os componentes da amostra atravs da
coluna, sem participar dos processos de interao. Por este motivo chamado gs de arraste. Exemplos
de gases mais utilizados em CG so He, H2 e N2, os mais indicados, de acordo com a teoria da separao
dinmica (equao de Van Deemter).
O cilindro de gs normalmente possui uma vlvula que serve apenas para abrir e fechar a sada de gs.
Na sada do cilindro acopla-se um manmetro para (i) medir a presso no interior do cilindro
geralmente ao redor de 2000 psi quando cheio e (ii) reduzir a presso de sada para o sistema
cromatogrfico (entre 20 e 100 psi). Antes do cromatgrafo, podem ser interpostos filtros, que podem
servir para reter umidade, impurezas do gs de arraste etc., filtros esses que devem ser trocados
periodicamente. Alm disso, o cromatgrafo per se possui um outro estgio de regulao, que estabelece
as presses e fluxos do gs de arraste que entraro na coluna. Para calibrar todo esse sistema, utiliza-se
um bolhmetro acoplado ao final da coluna, sistema simples e eficiente de medir vazo de gs, ao
cronometrar o arraste de bolhas dentro de um tubo de vidro graduado.

A eficincia da coluna altamente dependente da escolha apropriada da velocidade linear do gs de


arraste. O fluxo medido conectando-se o bolhmetro (ou fluxmetro), contendo soluo aquosa de
detergente, na sada da coluna. Comprimindo-se uma pra de borracha presente na parte inferior do
dispositivo, vrias bolhas tendem a se formar e a se elevar atravs do cilindro de vidro graduado.

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Escolhe-se uma dessas bolhas e, com um cronmetro, mede-se o tempo gasto para que ela percorra
certo volume. Dividindo-se o volume percorrido pelo tempo marcado no cronmetro, obtm-se o valor do
fluxo do gs de arraste. O fluxo dividido pela rea que corresponde ao dimetro interno da coluna (seo
reta) dar a velocidade linear mdia ao longo da coluna.
Pode-se tambm medir a velocidade linear mdia atravs da injeo de um composto que tenha
baixssima interao com a coluna, de preferncia numa temperatura que negligencie mais ainda os
efeitos de interao, ou ainda variar a temperatura, mantendo o fluxo, para verificar se a interao pode
ser realmente negligenciada. Um dos compostos mais comuns para esse fim o metano.
De acordo com o manual do Agilent 6890, o cromatgrafo mais vendido da histria, os gases para
cromatografia devem estar entre 99,995 e 99,9995% de pureza. Os nveis de oxignio e hidrocarbonetos
devem ser menores que 0,5 ppm.
A INJEO DE AMOSTRA

Amostras Gasosas
Quando a amostra a ser analisada um gs temperatura ambiente, o injetor no necessita ser
aquecido, uma vez que a amostra j se encontra vaporizada. Dependendo do propsito do experimento o
volume injetado varia, em geral, de 0,1 L (colunas capilares) at um litro (colunas preparativas).
importante lembrar que, para conseguir a forma ideal dos picos e a maximizao da resoluo, empregase um volume de amostra que seja compatvel com a coluna.
Existem dois sistemas para a injeo de amostras gasosas: seringas e vlvulas.
As seringas so em sua maioria de vidro graduado com um mbolo de ao inoxidvel. A agulha, tambm
de ao inoxidvel, encontra-se colada ao vidro com epxido. Apesar de no possibilitarem a mesma
preciso apresentada pelas vlvulas de injeo, as seringas so teis para a maioria dos propsitos, alm
de baratas e altamente versteis, isto , permitem grande flexibilidade quanto ao volume a ser injetado.
Para a injeo de amostras gasosas, a seringa utilizada deve ser do tipo denominada gas tight,
apresentando vedao especial para gases, permitindo grande reprodutibilidade nas reas dos picos. Esta
vedao evita vazamentos, fato freqente na injeo de gases com seringas comuns.
As vlvulas so mais caras, mas permitem maior reprodutibilidade nas injees. Adicionalmente, so de
fcil manipulao e tambm admitem automao do sistema. Na parte (A) da figura, a amostra
empurrada at que a ala (loop), de volume fixo, seja preenchida (este volume pode ser modificado
simplesmente trocando-se a espira por outra, do volume desejado). Girando-se ento o rotor da vlvula,
o volume contido na espira injetado na coluna (parte B).

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Amostras Lquidas
A grande maioria das amostras lquidas requer, para sua rpida volatilizao, que a temperatura do
injetor esteja de 20 a 30C acima da temperatura de ebulio do componente menos voltil. Os lquidos
tm elevado coeficiente de expanso quando se tornam gases, isto , a relao entre volume no estado
gasoso (VG) por volume no estado lquido (VL), ou seja, VG/VL, alta para a mesma substncia em
diferentes temperaturas. Este coeficiente elevado permite que sejam injetados pequenos volumes, o que
maximiza a resoluo do sistema, pois diminui a saturao da fase estacionria e confere uma forma
ideal aos picos eludos. O dispositivo comumente empregado para amostras lquidas a micro-seringa
com agulha hipodrmica, cujos volumes so, como j dito, altamente flexveis.

O uso de solvente + ar + amostra + ar permite que toda a amostra seja introduzida no sistema durante
a injeo e que nenhuma parte da amostra comece a correr a coluna antes do restante e que nada da
amostra fique residualmente dentro da seringa aps a injeo. A explicao para isso fica como exerccio.
O gs de arraste entra no injetor e arrasta a amostra
vaporizada por aquecimento para dentro da coluna. A amostra
introduzida atravs de um septo de material polimrico um
tampo de borracha de silicone, que veda a entrada do injetor
que perfurado por uma seringa de microlitros de
capacidade. A seringa expele a amostra dentro do liner de
vidro, desativado por silanizao e aquecido por um bloco
metlico. Aps o mbolo empurrar a amostra e a seringa ser
retirada do injetor, o septo se fecha naturalmente, impedindo a
sada do gs. O injetor possui, para diviso de fluxo, uma outra
sada, com uma vlvula que controla o quanto de amostra ser
desprezado e o quanto de amostra entrar realmente na
coluna. Junto ao septo h outra sada, para purgar vapores de
resduos de amostra, que fiquem retidos junto ao septo na
retirada da agulha.

Amostras Slidas
Apesar de existirem alternativas, a maneira mais prtica de manipular uma amostra slida em
Cromatografia Gasosa dissolv-la em um solvente apropriado e injet-la com uma seringa usada para
injeo de lquidos.
Uma das alternativas para amostras lquidas e slidas o uso de micro-extrao em fase slida (solid
phase micro-extraction, SPME), em que os vapores da amostra so adsorvidos em uma fibra apropriada e
depois dessorvidos por aquecimento dentro do injetor.
A COLUNA CROMATOGRFICA
A separao efetiva dos componentes da amostra efetuada na coluna cromatogrfica, onde a natureza
do tubo, do suporte slido, o tipo e a quantidade da fase, o mtodo de recheio, o comprimento e a
temperatura so fatores importantes para obter a resoluo desejada. Foram desenvolvidos muitos tipos
de colunas para cromatografia gasosa, porm possvel dividi-las em dois grupos principais: colunas
recheadas e colunas tubulares abertas.

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Colunas recheadas (tambm conhecidas como empacotadas)


O material dos tubos geralmente ao inoxidvel (o mais comum), cobre, alumnio e vidro borossilicato.
O suporte inerte da fase estacionria deve ter granulometria uniforme, boas caractersticas operacionais
(resistncia suficiente para no quebrar durante a operao) e constituir um leito uniforme na coluna. O
suporte tem por fim sustentar a fase estacionria e o que chamamos de recheio , na verdade, suporte +
fase estacionria. A rea especfica do material deve ser elevada, com distribuio pelicular uniforme da
fase lquida ou da fase ligada, para assegurar o rpido equilbrio entre as fases estacionria e mvel. Em
alguns casos, no entanto, o suporte pode ser a prpria fase estacionria, como nas fases de excluso
(ver adiante), onde a fase estacionria tem poros de tamanhos determinados.
As colunas de cobre so ideais para fins educativos devido facilidade de manipulao, baixo custo e
flexibilidade, mas pouco utulizadas em pesquisa devido sua reatividade (por exemplo, com aminas,
terpenos e esterides). As colunas de vidro so baratas, relativamente fceis de serem preparadas, e
inertes maioria dos compostos; sua maior limitao a fragilidade. As colunas de ao inoxidvel so de
largo uso, especialmente na forma espiralada, o que permite obter colunas de extenso razovel,
compactadas em volume pequeno.
Na verso mais comum, as colunas so preenchidas integralmente com partculas da fase estacionria.

A figura da direita mostra um corte transversal de um coluna recheada (empacotada).

Colunas Tubulares Abertas (Colunas Capilares)


Nas colunas capilares, a fase estacionria depositada na forma de um filme fino e uniforme na parede
interna do tubo, deixando a parte central oca (ver figura abaixo). So oficialmente denominadas colunas
tubulares abertas. As colunas capilares atuais so de slica fundida, com dimetro interno menor do que
0,3 mm, expessura de filme de fase estacionria (df) menor do que 0,5 mm e parede de slica desativada
com agentes silanizantes ou similares, que permitem a compatibilizao do filme da fase estacionria
com o suporte.

O desenho do corte transversal da coluna direita omite que a parte externa coberta com uma
poliimida, que confere maior resistncia mecnica e flexibilidade coluna de slica fundida. E por isso
que as colunas capilares tm essa cor marrom caracterstica, que pode ser vista na foto esquerda.

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A Fase Estacionria
A caracterstica qumica da fase estacionria (FE) influencia na qualidade de separao das substncias
que compem uma dada amostra. Pode-se escolher a fase baseando-se na polaridade da amostra que
ser eluda na coluna. Os tipos de interao que ocorrem com mais freqncia entre a substncia e a FE
so: foras de Van der Walls , interaes dipolo-dipolo e pontes de hidrognio.
Supondo uma FE lquida, onde ocorre partio, em geral os solutos polares so retidos em maior
extenso conforme a polaridade aumenta. Por outro lado, solutos no-polares so retidos em maior
extenso conforme a polaridade diminui. Tratando-se de fase apolar, os solutos apolares iro interagir de
forma semelhante, sem nenhuma seletividade especial, sendo ento separados na ordem dos seus
pontos de ebulio. Nesse ltimo caso, a presso de vapor do composto altera a partio entre fase
mvel e fase estacionria, fazendo com que os compostos de maior presso de vapor (menor ponto de
ebulio) eluam mais rapidamente.
Existe um grande nmero de lquidos que foram usados como fase estacionria, na cromatografia gslquido, e tinham especificaes determinadas, a saber:

Serem termicamente estveis;

No deviam reagir com as substncias presentes na amostra;

Deviam ser seletivos para as substncias que compem a amostra.

No caso da cromatografia gs-slido, onde ocorre adsoro, substncias que so adsorvidas de forma
semelhante podem ser separadas, se apresentarem volatilidades diferentes.
Para gases fixos (O2, CO2, N2, etc.), utiliza-se separao por tamanho, em colunas de peneira molecular,
aonde as molculas que so capazes de entrar nos poros da fase estacionria slida so mais retidas do
que as molculas maiores, que no conseguem penetrar na fase estacionria (passam "por fora"). Por
essa razo, esse tipo de separao tambm chamado de cromatografia de excluso.
Na coluna capilar, a fase pode ser depositada sobre a parede interna do "tubo capilar". Para aumentar a
superfcie de contato com o soluto, trabalha-se com colunas longas (10 a 100 m). O dimetro interno
varia de 0,1 a 1 mm e a espessura do filme lquido depositado na superfcie interna do tubo capilar de
0,1 a 2,0 m.
As colunas capilares mais modernas, no entanto, trabalham com fases ligadas parede da coluna por
reaes de silanizao e que podem ainda ter reaes cruzadas entre as cadeias, ligando as cadeias
entre si. Essas fases ligadas (e entrelaadas) no so solveis, tm maior resistncia mecnica e trmica,
sendo mais resistentes ao uso. As mais comuns so as polisiloxanas (ver tabela abaixo).

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POLISILOXANAS
CH3
H 3C

Si

R
O

CH3

C H3

Si
R

Si

C H3

C H3

R1, R2 Qualquer radical orgnico

Substituintes

Nomes Comerciais

Observaes

SE-30 OV-1 OV-101 SP-2100

mais apolares da srie, pouco seletivas

carborano

Dexsil 300GC

similar a PDMS, estvel at > 400oC

fenil 5 %

SE-52 SE-54 OV-3 OV-5 OV-73 pouco polar

cianopropil 7%, fenil 7%

OV-1701 SPB-7 CP-Sil 19CB

fenil 50 %

OV-17 SP-2250 HP-50+ SPB-50 moderadamente polar, retm aromticos

trifluoropropil 50%

OV-210 QF-1

moderadamente polar
moderadamente polar, retm compostos
carbonlicos

cianopropil 50%, fenil 50% OV-225 SP-2300 CP-Sil 43CB

polar, retm doadores de eltrons

cianopropil 100%

altamente polar

SP-2340 SP-2330 Silar-9 CP

Quando no mencionado, R1 e R2 so grupos metila.

O Controle de Temperatura
de extrema importncia o controle da temperatura da cmara de vaporizao (injetor), do forno da
coluna cromatogrfica e do detector na Cromatografia Gasosa. Cabe enfatizar que cada um dos trs
componentes exerce funo diferente no sistema cromatogrfico e desejvel que o instrumento possua
controles independentes de temperatura para cada mdulo.
A cmara de vaporizao deve ser suficientemente quente para vaporizar rapidamente a amostra e evitar
perda de eficincia na injeo, mas no decompor termicamente ou rearranjar a amostra. Um teste
rpido aumentar a temperatura da cmara de vaporizao para determinar sua adequao. Se a
eficincia da coluna ou a forma dos picos melhorarem, ser indicao de que a temperatura do injetor
estava baixa, no estava vaporizando corretamente e a entrada dos analitos estava longe de ser
instantnea. Por outro lado, uma mudana drstica na rea, forma dos picos ou tempo de reteno
indica que a temperatura ficou muito elevada e a amostra pode estar decompondo ou rearranjando.
desejvel que a temperatura da coluna enseje tempos de anlise curtos, mas seja suficientemente
baixa para que a eficincia desejada seja atingida. Para algumas amostras, quanto menor a temperatura
da coluna maior sero os coeficientes de partio na fase estacionria e uma melhor separao ser

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atingida. Mas preciso enfatizar que em muitos casos no se obtm separao alguma com a coluna em
baixas temperaturas, pois isso tambm depende da natureza da fase estacionria, e uma fase
inapropriada no melhora suficientemente a separao dos componentes em qualquer temperatura.
A influncia da temperatura no detector depende consideravelmente do tipo de detector empregado.
Mas, de forma geral, o detector e sua conexo com a sada da coluna devero estar suficientemente
quentes, para evitar a condensao da amostra e/ou da matriz. Um dos efeitos que a condensao
provoca alargamento dos picos e surgimento de caudas.

A Programao de Temperatura do Forno da Coluna


Diferentemente do injetor e do detector, o forno da coluna pode variar a temperatura ao longo da corrida
cromatogrfica. Esse recurso visa diminuir o tempo de corrida, pois quanto mais os compostos so
retidos, mais eles interagem com a fase estacionria e separam melhor; mas o tempo de anlise pode
estender-se demais, e os picos separarem mais do que o necessrio e alargarem demasiadamente.
Baseando-se nessa premissa, comum que a temperatura seja aumentada ao longo da corrida, para
diminuir o tempo dos mais retidos, que tambm saem com picos mais finos e melhor relao sinal/rudo.
A velocidade da rampa de aquecimento (C/min) determina a reduo de tempo imposta s molculas.
A

figura

mostra

dois

cromatogramas: um em isoterma
e

outro

com

temperatura

programada. A programao no
precisa ser em toda corrida, mas
no

tempo

necessrio

para

diminuir a separao exagerada.


O

ideal

compostos

que

todos

os

grau

de

tenham

resoluo 1,5. Pergunta: poderse-ia aumentar mais ainda a


velocidade da rampa neste caso?
TCNICAS DE INJEO DE AMOSTRA
A seleo da tcnica de injeo mais adequada para o trabalho com colunas capilares (Cromatografia
Gasosa de Alta Resoluo) funo exclusivamente da natureza e concentrao da amostra. A principais
tcnicas de introduo de amostras em colunas capilares so (i) a injeo a quente em vaporizadores
(com ou sem diviso de fluxo) e (ii) a injeo da amostra a frio diretamente no interior da coluna.

Tcnicas de Injeo a quente


Envolvem duas etapas:
a) Injeo da amostra no liner por meio de uma seringa com agulha hipodrmica.
b) Transferncia da amostra vaporizada para o interior da coluna pelo fluxo de gs carreador.
As amostras a serem analisadas devem ser estveis na temperatura de vaporizao.
- Injeo com diviso de fluxo (split)
A diviso de fluxo a mais antiga forma de introduo de amostra em coluna capilar. A coluna capilar
possui quantidade de fase estacionria de 100 a 1000 vezes menor do que a coluna empacotada e se

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torna rapidamente sobrecarregada com a amostra, o que compromete o formato dos picos e a resoluo
cromatogrfica, por que as seringas no conseguem injetar volumes adequadamente pequenos.
Isto levou ao desenvolvimento de um sistema, reprodutvel e regulvel, que descarta a maior parte da
amostra injetada aps a vaporizao (divisor de fluxo), antes de sua entrada na coluna. Desse modo, os
usurios podem trabalhar com solues de mesma concentrao que as empregadas em colunas
empacotadas. a tcnica de escolha para a anlise de solues concentradas.
No acarreta, tambm, qualquer necessidade de interveno operacional (ou conhecimento adicional)
quanto ao processo de injeo e suas variveis (temperatura do injetor e da coluna, volume injetado,
velocidade de injeo, natureza do solvente, etc.) maior do que a experincia j acumulada no trabalho
com colunas empacotadas. a mais simples das tcnicas de injeo a quente.
A variao da taxa de diviso de fluxo, da quantidade efetiva de amostra introduzida na coluna, a
temperatura do injetor e a presso no injetor so as variveis de injeo ajustadas pelo operador quando
se faz a otimizao dessa parte da anlise cromatogrfica.
- Injeo sem diviso de fluxo (splitless)
A injeo de amostras em vaporizadores com a sada do divisor de fluxo temporariamente fechada se
constitui na tcnica de injeo sem diviso de fluxo (splitless) e resulta, obviamente, na transferncia da
maior parte da amostra vaporizada no injetor para o interior da coluna. a tcnica de escolha para
anlise de amostras diludas. Infelizmente, com a sada do divisor fechada, o fluxo de gs dentro do
injetor diminui1 e os tempos de transferncia do vapor das amostras para o interior da coluna se tornam
demasiadamente longos, o que obriga a utilizao de mecanismo de reconcentrao (focalizao).
O mecanismo de reconcentrao consiste na condensao (focalizao) da amostra e do solvente no
incio da coluna, com o forno ainda frio. O subseqente aquecimento do forno cromatogrfico volatiliza
este material condensado, que eludo pelo gs carreador na coluna capilar da forma convencional, isto
, a ordem de eluio fica de acordo com a afinidade individual de cada soluto pela fase estacionria.
Neste tipo de tcnica de injeo, h necessidade de assegurar, durante a transferncia de amostra do
injetor para a coluna, condies para que ocorra a condensao do material a ser analisado, o que ocorre
por dois mecanismos distintos: pelo efeito solvente e pela captura a frio.

Efeito solvente: Trabalha-se com o forno cromatogrfico em temperaturas baixas que permitam a

condensao do solvente utilizado (e, em conseqncia, a reteno da amostra). Normalmente,


temperaturas de 10 - 40C abaixo do ponto de ebulio do solvente mostram-se adequadas.

Captura a frio: Neste caso no se promove a condensao do solvente, mas apenas da amostra. Isto

requer uma grande diferena de volatilidade entre solvente e soluto para efetivo funcionamento (cerca
de 80 a 100C), mas permite, em muitos casos, economizar tempo, evitando resfriar o forno
cromatogrfico a temperaturas prximas ao ambiente a cada anlise.

Tcnica de injeo a frio


Neste caso o que se pretende evitar a discriminao de componentes pesados, observada durante uma
injeo com agulha quente em vaporizador aquecido. Os componentes mais pesados podem no
volatilizar, o que leva a uma transferncia incompleta, geralmente no-reprodutvel, da amostra para o
interior da coluna. Alm disso, o choque trmico produzido por vaporizadores convencionais quentes
1

Se no h diviso de fluxo, todo gs tem de entrar na coluna, que capilar e tem abertura estreita. Quando h diviso, o fluxo que
entra no injetor bem maior, pois a vlvula de split estar aberta, ventilando uma parte do gs de arraste e da amostra, e
tornando o tempo de injeo mais curto.

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pode causar degradao de substratos termolbeis, o que s pode ser evitado pela deposio da amostra
dentro de superfcies frias, especialmente desativadas, como o interior das prprias colunas capilares.
O sistema de injeo na coluna a frio (cold on-column) atende os requisitos de reprodutibilidade: simples
(no tem controlador de temperatura), sem componentes eltricos ou eletrnicos, sem septo e de alta
inrcia qumica, pois a amostra depositada diretamente na coluna capilar, em seu segmento inicial, j
dentro do forno cromatogrfico, que passa, assim, a comandar tambm a temperatura da injeo.
Este mtodo exige resfriamento do forno cromatogrfico em temperaturas relativamente baixas, para
evitar efeitos de discriminao na agulha e a vaporizao sbita, com conseqente ejeo de amostra
para fora da coluna. Torna-se necessrio o uso de seringas especiais, providas de agulhas extremamente
finas, que penetram dentro do exguo dimetro interno das colunas capilares.
Tabela: Caractersticas das tcnicas de injeo de amostras em colunas capilares.
Tcnica

Amostra tpica

Com diviso de
fluxo (split)
Sem diviso de
fluxo (splitless)
Coluna a frio
(cold on-column)

Soluo
conc.
termo-estvel
Soluo diluda
termo-estvel
Soluo diluda
termo-sensvel

Reprodutibilidade
Razovel

Substrato
pouco voltil
Discriminado

Efeito
matriz2
Pequeno

de

Boa

Discriminado

Muito boa

NoDiscriminado

Deteriorao
progressiva
Deteriorao
rpida

Uso de
septo
Sim
Sim
No

Substrato
termolbil
No
Recomendado
No
Recomendado
Recomendado

Quando as tcnicas com e sem diviso de fluxo so feitas com injetor automtico, a reprodutibilidade
melhora. As tcnicas on-column j tem opo de injeo automtica desde 1987.
BIBLIOGRAFIA
Preparation

and

Installation

Manual,

Agilent

6890

Series

Gas

Chromatograph,

http://www.ov.ingv.it/geochemistry/images/a15283.pdf, em 06/08/2009
Konrad Grob, Injection Techniques in Capillary GC, Analytical Chemistry, Vol. 66, No. 20, pg 1009A1019A, 1994.
J. V. Hinshaw e L. S. Ettre, Introduction to Open-Tubular Column Gas Chromatography (Advanstar,
Cleveland, 1994. 189 pp.). ISBN 0-929870-25-5
http://chemkeys.com/br/2000/07/18/cromatografia-a-gas-curso-em-diapositivos/, em 07/08/2009
J. V. Hinshaw & L. S. Ettre, Introduction to Open Tubular Column Gas Chromatography, 1994, Advanstar
Communications, Cleveland, OH, USA.
C. A. Saravalle, F. Munari, S. Trestianu; Multipurpose cold injector for high resolution gas
chromatography; Journal of High Resolution Chromatography, Volume 10, pg 288296, 1987.
Manual do cromatgrafo Agilent 6890. Disponvel em http://mmrc.caltech.edu/GCMS/6890-operatingmanual.pdf . Acesso em 05/11/2010.

2
A coluna deteriora mais rpido quando introduzimos quantidades crescentes de amostra, pois quanto mais amostra injetada, mais
substncias que atacam quimicamente a fase estacionria podero estar presentes.

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OS DETECTORES
Quando um eluente diferente do gs de arraste passa pelo detector,
este envia sinais eltricos ao registrador, que imprime o cromatograma.
Para 3 componentes (A, B e C) o aspecto do cromatograma ideal (mas
no o obtido na prtica) mostrado ao lado. O detector no responde
passagem do gs de arraste e observa-se uma linha reta, constante
entre cada sinal, a Linha de Base. Quando o eluente (A) alcana o
detector, este sensibilizado, envia um sinal ao registrador e o registro
grfico observado. A funo do detector em sistemas cromatogrficos
acusar a presena e medir a quantidade de componentes no eluente.
Mas um cromatograma no formato anterior s possvel se
todas as molculas alcanam o detector simultaneamente. O
fenmeno da difuso longitudinal no interior da coluna,
contudo, faz com que molculas da mesma substncia
percorram a coluna ao mesmo tempo em que se difundem,
como qualquer outro gs. A linha de base tambm no
completamente estvel, pois h rudo eletrnico natural,
causado por flutuaes da rede eltrica e do equipamento,
por melhor que o sistema tenha sido projetado. Assim, o
aspecto de um cromatograma contendo trs substncias (A,
B e C) mais parecido com o que se v ao lado.
Com respeito seletividade, os detectores podem ser universais, seletivos ou especficos. Os detectores
universais respondem a todos os compostos presentes no eluente da coluna, com exceo da fase mvel;
os seletivos respondem a um determinado grupo de componentes presentes na fase mvel, enquanto
que os especficos respondem a um nico componente ou a um nmero limitado de componentes de
caractersticas qumicas similares. As principais caractersticas para um bom detector so:

Sensibilidade Elevada
A sensibilidade de um detector (S) igual sada de sinal por unidade de concentrao ou por unidade
de massa de uma substncia que entra no detector com a fase mvel. Assim sendo, um detector mais
sensvel ir gerar um sinal eltrico maior para uma mesma quantidade de amostra.

Baixo Nvel de Rudo


O rudo do detector a amplitude das variaes aleatrias
do sinal do detector, geralmente expressa em milivolts ou
amperes, no entorno da linha de base. Ampliando-se
bastante a escala prxima linha de base, quando no h
eluio de composto, sempre se enxerga o rudo. O
detector ideal apresenta baixo nvel de rudo e pode
trabalhar em condies operacionais mais extremas,
detectando quantidades muito pequenas do analito.
Quando o rudo muito grande e o sinal do analito pequeno, o sinal do analito no pode ser identificado
em meio selva de sinais eletrnicos aleatrios. Ou seja, o nvel de rudo estabelece a mnima
quantidade de analito que pode ser detectada acima do rudo.

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Resposta
A resposta de um detector o valor do sinal eltrico gerado a partir de uma certa quantidade de amostra
que chega at ele. Dependendo da resposta que o detector consiga gerar, ele ser classificado como
universal ou seletivo. Um detector apresenta resposta UNIVERSAL quando responde a todos os
componentes presentes na amostra; o detector de condutividade trmica um exemplo desta classe. A
resposta de um detector SELETIVA quando responde apenas a determinadas classes de compostos; o
detector de ionizao de chama, por exemplo, seletivo aos compostos combustveis.

Ampla Faixa de Linearidade


Linearidade a faixa (regio) na qual o tamanho do sinal produzido pelo detector e o valor da
concentrao do analito guardam sempre a mesma proporo entre si.

Quantidade mnima detectada


A quantidade mnima detectvel (D) a concentrao
ou o fluxo de massa de soluto na fase mvel que
produz um sinal de 3 vezes o nvel do rudo. (D)
expressa como a concentrao ou o fluxo de massa
do soluto na fase mvel e que atinge o detector. O
detector que apresente baixo (D), permitir a anlise
de solutos em baixas concentraes.
desejvel tambm que o detector tenha baixo custo, simplicidade, fcil disponibilidade e durabilidade
elevada. Na prtica isto no fcil de ser conseguido. Os 2 detectores que melhor se aproximam do
conjunto de caractersticas so condutividade trmica (universal) e ionizao por chama (seletivo).
DETECTOR DE CONDUTIVIDADE TRMICA (DCT)
Quando uma corrente eltrica passa por um filamento (resistncia), a resistncia gera calor e faz o
filamento aquecer. ET = R i2, onde ET a energia trmica gerada, no que conhecido como efeito
Joule. Em temperaturas maiores, a resistividade dos materiais aumenta, a resistncia aumenta e a
corrente cai, se o potencial constante (V = R i), diminuindo a quantidade de calor gerada. medida
que temperatura continua subindo, o calor gerado diminui, at o ponto em que o calor dissipado seja
igual ao calor gerado e a temperatura se estabilize.
Deixando o filamento em contato com o fluxo de gs de arraste, mais calor ser dissipado pelo fluxo
gasoso e a temperatura e a resistividade do filamento diminuem. Com a resistncia diminuda, a corrente
no filamento aumenta. A corrente no filamento depende do potencial usado, do fluxo do gs e do tipo de
gs utilizado, j que h gases com maior condutividade trmica que outros, isto , h gases com maior
capacidade de transportar calor que outros. Quando passa um gs diferente do gs de arraste, h uma
variao de corrente, causada pela diferena de condutividade trmica dos gases. Quando volta a passar
gs de arraste, a corrente volta ao nvel anterior. Isso ser assinalado pelo registrador.

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Analisando um circuito mais sofisticado:


Conforme a figura, haver resistncias ou termistores em
2 pontos do fluxo gasoso, um antes do ponto de
introduo da amostra e outro na passagem do efluente
da coluna. Como no incio somente o gs de arraste
passa

pelos filamentos associados a uma ponte de

Wheatstone, estes daro uma condio de equilbrio, ou


seja: R1 R3 = R2 R4
Quando o soluto eluir da coluna, haver uma condio de
desequilbrio (R1 x R3 R2 x R4), porque a condutividade

trmica da substncia juntamente com o gs de arraste


ser diferente da condutividade trmica do gs de
arraste puro. Gera-se, portanto, um sinal que
amplificado

no

registrador

forma-se

pico

correspondente substncia que foi detectada.


Outro sistema pode ser montado, trabalhando com duas colunas (referncia e indicao), acopladas,
cada uma, a dois termistores em ramos opostos da ponte de Wheatstone. A figura a seguir ilustra a
montagem, que d um sinal de maior intensidade e com linha de base mais constante.
1- Fonte
2- Ajuste de corrente
3- Miliampermetro
4- Filamento de deteco
5- Filamento de referncia
6- Ajuste do zero grosso
7- Ajuste do zero fino
8- Sistema de atenuao
9- Registrador
FA - Fluxo de gs coluna de anlise
FR - fluxo de gs coluna de referncia
Observando os dados de condutividade trmica da tabela, pode-se notar a acentuada diferena entre os
valores dos gases normalmente utilizados como fase mvel e os valores da maioria das substncias. A
condutividade trmica do nitrognio aproxima-se mais das condutividades dos compostos orgnicos,
levando a uma menor sensibilidade de deteco, quando o mesmo utilizado como gs de arraste, pois,
quanto menor a diferena de condutividade trmica, menor a sensibilidade.
Substncia
He
H2
N2
Ar
CH4
CO2

Valores de condutividade trmica de compostos


Cond. Trm. (cal.s-1.cm-1.F-1)
Substncia
Cond. Trm.a (cal.s-1.cm-1.F-1)
36,0
Cl2
2,11
44,5
Br2
1,16
6,24
C6H6
2,56
4,25
CH3OH
3,68
8,18
C2H5OH
3,47
3,96
H2O
4,25

O DCT responde a todos os tipos de compostos orgnicos e inorgnicos que possam ser analisados por
CG e no destrutivo, tornando-se muito til para trabalhos em escala preparativa.

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DETECTOR DE IONIZAO POR CHAMA (DIC)


Baseia-se na condutividade eltrica dos ons formados na chama do detector. A condutividade eltrica de
um gs proporcional concentrao das partculas com carga dentro do volume de gs.
Neste detector h inicialmente passagem de gs de arraste
misturado com H2 e ar, que so inflamados por um dispositivo
dentro do tubo coletor. A quantidade de ons produzidos
pequena, pois a molcula de H2 forma poucos on ao queimar,
comparada a outras molculas combustveis. Uma voltagem
imposta entre tubo coletor e ponteira de queima e o ampermetro
mede a corrente que passa entre eles pela chama, da ordem de
10-14 amperes.
Quando um composto orgnico queima, h maior produo de
cargas devido formao de maior nmero de ons e eltrons
livres

na

chama,

elevando

corrente

pelo

aumento

de

condutividade do meio. Desse modo, o DIC s responde aos


tomos de carbono oxidveis. A intensidade da resposta decresce
medida que aumenta a substituio por halognios, grupos
amina ou grupos hidroxila. Como se comporta o DIC quando
passam pela chama substncias tais como H2O, CO2 ou CS2?
Colunas recheadas trabalham somente com o gs que passa pela coluna. Mas em colunas capilares,
como o fluxo pequeno, h necessidade de complementar o fluxo de gs para melhorar a sensibilidade.
Para cada tipo de detector e de gs carreador, h uma escolha preferida para o gs complementar
(makeup gas, em ingls). A tabela 4 lista recomendaes de gases para colunas capilares extrada do
manual do cromatgrafo 6890.
Tabela 4 Gases Recomendados para Colunas Capilares
Detector
Gs Carreador
Gs Complementar (1 Gs Complementar (2 Detector, purga do anodo
opo)
opo)
ou gs de referncia
Captura de
H2
Argnio/CH4
N2
Gs da purga do anodo o
Eltrons
mesmo gs complementar
He
Argnio/CH4
N2
N2
Argnio/CH4
Argnio/CH4
Argnio/CH4
N2
Ionizao de
H2
N2
He
H2 e ar para o detector
Chama
He
N2
He
N2
N2
He
Fotometria de H2
N2
H2 e ar para o detector
Chama
He
N2
N2
N2
Argnio
N2
Nitrognio/
He
N2
He*
H2 e ar para o detector
Fsforo
N2
N2
He*
Condutividade H2**
Carreador, referncia e
Trmica
complementar iguais
He
N2
*He no recomendado como gs complementar em fluxos maiores que 5 mL/min.
**Utilize capela ou exaustor para retirar H2 do ambiente, quando us-lo com o detector de condutividade trmica.

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Existem outros tipos de detectores mais seletivos como, por exemplo, o detector de captura de eltrons e
o detector fotomtrico. O primeiro utilizado para anlise de compostos halogenados, anidridos,
perxidos, nitrilas e organo-metlicos, dentre outros. O segundo utilizado normalmente para anlise de
compostos sulfurados e fosforados.
Tabela 3 - Comparao entre os dois detectores
Tipo de Detector
D.C.T.
Faixa de linearidade
105
Quantidade mnima detectvel
10 ng
Sensibilidade do detector
menor
Universo de substncias detectveis
universal
Conservao das amostras
no-destrutivo
Controle da temperatura
rigoroso

D.I.C.
107
10 pg
maior
seletivo
destrutivo
no rigoroso

DETECTOR POR ESPECTROMETRIA DE MASSAS (ESPECTRMETRO DE MASSAS)


A espectrometria de massas uma tcnica utilizada para separar e detectar fragmentos ionizados de
molculas, ou molculas e tomos inteiros tambm ionizados, de acordo com a sua relao massa/carga
(m/z). Existem diferentes tcnicas de ionizao e a abundncia relativa dos ons formados depende da
estabilidade da estrutura destes ons. O registro obtido, ordenado de acordo com essa relao m/z,
chamado espectro de massas.
A ionizao, com ou sem fragmentao, segue padres, definidos pelo mtodo de ionizao empregado e
pela estrutura do tomo ou molcula alvo. Desse modo, a principal utilizao da espectrometria de
massas na identificao de compostos qumicos, mas tambm utilizada em anlises isotpicas,
estudos sobre estrutura molecular, potenciais de ionizao etc. A tcnica pode ser empregada como um
detector e identificador de estruturas em cromatografia em fase gasosa, o que facilita em muito a anlise
de misturas cromatogrficas, pois pode, alm de quantificar, determinar a identidade da molcula, ou
seja, faz anlise qualitativa. Tambm utilizada para o mesmo fim na HPLC. Apesar do preo e da
complexidade operacional para sua utilizao, considerado o melhor detector para cromatografia, pela
capacidade de identificar substncias, por ter sensibilidade elevada e boa relao sinal/rudo.
Historicamente, podemos dizer que a espectrometria de massas se originou com as primeiras
experincias que visavam a determinao da relao carga/massa do eltron, ou a separao de
diferentes partculas ionizadas (prtons, partculas ) por Ernest Rutherford. Em 1898, Wien alterou a
trajetria de ons positivos usando campos eltricos e magnticos. O primeiro aparelho que pode ser
chamado de um espectrmetro de massas foi inventado por J. J. Thomson em 1910 e serviu para a
determinao da massa dos tomos de diferentes gases nobres. Isso ensejou a observao dos dois
istopos mais abundantes do nenio.
Para a obteno de um espectro de massas podemos separar as seguintes fases: fragmentao,
focalizao, separao, deteco e registro. Todo esse processo tem de ser feito em alto-vcuo (menor
que 10-5 Torr, ou 10-8 atm).

A fragmentao a produo das partculas ionizadas. O processo mais comum por impacto de
eltrons.

A focalizao um termo derivado da tica. As partculas ionizadas originadas na fragmentao so


"focalizadas", por meio de campos eltricos, na entrada da regio de separao e aceleradas para
que adquiram velocidade e sejam capazes de atingir o detector.

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A separao o corao da tcnica. O analisador de massas dito analisador pois "analisa" os


fragmentos, isto , separa-os de acordo com a sua relao massa/carga (m/z).

Na deteco dos ons, o impacto dos ons no transdutor adequado, faz com que este impacto seja
traduzido num sinal eltrico. Este sinal ento registrado em papel ou armazenado em computador.

As colunas capilares so mais adequadas ao uso do espectrmetro de massas, pois trabalham com
menor quantidade de gs e amostra, facilitando o trabalho das bombas de vcuo, que so
imprescindveis ao funcionamento do espectrmetro.
i) ionizao por impacto de eltrons.
Neste mtodo, eltrons emitidos por um filamento aquecido so acelerados por meio de campos
eltricos, na direo da regio de ionizao, normalmente visando a sada da coluna capilar na cmara de
alto-vcuo. Os eltrons iro colidir com a amostra, transferindo energia suficiente para ioniz-la.
Dependendo da quantidade de energia absorvida pela amostra, esta poder fragmentar ou no. Mas esta
uma fonte de alta fragmentao, pois a energia do canho de eltrons alta.

F o filamento por onde os


eltrons sero emitidos, E1, E2 e
E3 so as lentes eletrostticas,
e V1, V2 e V3 so as fontes de
potencial que ajustam o foco
das lentes.
Canho de eltrons
Tipicamente, utiliza-se 70 V na acelerao dos eltrons,
conferindo uma energia de 70 eV (eltron-volts, pois carga
vezes campo energia). Essa energia d o maior rendimento

CH3OH + e- CH3OH+ + 2eCH3OH+ CH2OH+ + H

para a produo de ons de carga +1 em impacto de eltrons, e

CH3OH+ CH3+ + OH

adequada para substncias at 1000 daltons. O exemplo ao

CH3OH+ CHO+ + H2

lado mostra alguns ons que podem ocorrer na fragmentao


do metanol.
ii) ionizao qumica
CH4 + e- CH4+ + 2e-

Na ionizao qumica, molculas de um gs (He, CH4, NH3 etc.) so

CH4 + e- CH2+ + H2 + 2e-

introduzidos em alta presso (1 torr) na regio de ionizao,

CH4 + e- CH3++ H+ + 2e-

juntamente com a amostra. As molculas desse gs so ionizadas


preferencialmente pelos eltrons, devido ao grande excesso. Ao se
utilizar metano, este ionizado, originando uma srie de ons.

CH4+ + CH4 CH5+ + CH3.

Estes ons primrios reagem rapidamente com o excesso de metano,

CH3+ + CH4 C2H5+ + H2

dando origem a ons secundrios mais estveis.

Os ons secundrios reagem com a amostra dando origem a ons

CH5+ + RH RH2+ + CH4

M+1 e M-1. Neste processo de coliso a transferncia de energia

C2H5+ + RH RH2+ + C2H4

mnima, de modo que o on M+1 formado ser bastante estvel.

RH2+ R+ + H2

Esta uma fonte de baixa fragmentao.

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iii) O analisador de setor magntico


Historicamente, foi o primeiro espectrmetro de massas comercial e ainda utilizado em aparelhos de
alta resoluo em massa, acoplados a cromatgrafos a gs. Mas, definitivamente, no o aparelho mais
comum, devido ao seu custo e tamanho.
A separao de ons com relaes m/z
diferentes baseada na fora magntica,
que surge quando partculas carregadas
atravessam

uma

regio com

campo

magntico perpendicular sua trajetria.


Essa fora faz os ons descreverem
trajetria curva, na qual o raio de
curvatura depende da relao m/z.
Para varrer o espectro, varia-se o campo
magntico, de modo que s ons com

a-fonte de ons b-grade de acelerao c,e-fendas

determinada relao m/z atinjam a fenda

d-feixe de ons f-detetor H-campo magntico

na sada do analisador a cada instante.


iv) analisador quadrupolar

a- detetor b- cilindros c- fenda d,e- lente de focalizao f- grades g- injetor


Este analisador emprega campos eltricos oscilantes como fator
de separao das diferentes relaes massa/carga. O esquema
mostra 4 cilindros em vista de topo, com o esquema de ligaes
eltricas e a expresso dos potenciais eltricos impostos aos
cilindros. U um potencial constante V um potencial que
oscila de acordo com a funo cos t.
Os

ons

produzidos

na

fragmentao

ionizao,

so

focalizados na direo do analisador, que possui fenda de


entrada e blindagem externa ("carcaa") que impedem que
campos eltricos gerados nos plos afetem a cmara de
ionizao. Ao entrar no analisador, os ons sofrem a influncia
dos campos eltricos oscilantes e "entram em ressonncia", isto
, passam tambm a oscilar, movidos por foras eltricas.

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A trajetria de cada on depende


da relao m/z, pois a fora
exercida em cada um depende da
quantidade de carga, e a trajetria
resultante depende da massa. O
on

que

tiver

relao

m/z

adequada atingir o detector. Os


ons restantes tero trajetrias que
os faro colidir com os plos ou
sairo para fora do analisador e
colidiro com a carcaa externa.
A largura da faixa de massa selecionada para ser detectada diretamente proporcional razo entre os
potenciais U e V empregados. Se mantivermos a relao U/V constante mas formos aumentando esses
potenciais, manteremos a resoluo do aparelho, mas selecionaremos massas cada vez maiores, ou seja,
estaremos efetuando a varredura da relao m/z. Conforme seja a molcula que estiver sendo analisada,
obteremos seu espectro de massas.
v) analisador de tempo-de-vo
No espectrmetro de massa do tipo Tempo-de-Vo, os fragmentos ionizados so separados devido
diferena de tempo que os ons levam do momento em que so gerados e impulsionados para fora da
regio de ionizao, at o momento em que atingem o detector. O feixe de eltrons pulsado e
defasado do pulso das grades de extrao na fonte de ons. Ou seja, quando o canho est ligado, as
grades de extrao esto desligadas e vice-versa.
Tambm h lentes como no espectrmetro magntico ou no quadrupolar, porm o foco agora
temporal, pois deve-se garantir que os ons de mesma m/z tenham o mesmo tempo-de-vo,
independentemente da trajetria. Este tipo de foco conseguido atravs de lentes eletrostticas tais, que
os ons de mesma m/z que descrevem uma trajetria maior sejam mais acelerados. Desse modo, haver
um ponto em que os ons de mesma razo m/z se encontraro. Este ponto de "encontro" calculado e
ajustado de modo que coincida com a posio do detector.
Um espectrmetro de Tempo-de-Vo, composto de lentes de focalizao, tubo de "drift" (tubo livre de
campos eletromagnticos) e detector. Apesar da simplicidade mecnica, a parte eletrnica mais
complexa, devido medida temporal. O processo de aquisio se inicia quando se aciona o feixe de
eltrons, que fica ativo o menor tempo possvel ( ns). Logo aps, o campo de extrao de ons e um
"cronmetro" so ligados, e os ons so contados medida que atingem o detector. O processo
repetido vrias vezes, pois em cada experincia existe a chance de determinado on no ser gerado.

a- grades de extrao de ons b- injetor c- tubo de "drift d- detetor

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Nos TdVs utilizados em cromatografia gasosa existe ainda um outro elemento, o reflectron. Os primeiros
TdVs apresentavam baixa resoluo em massa e foram pouco usados acoplados em cromatografia. Esta
situao mudou completamente nos anos 90, com o desenvolvimento do reflectron e do acelerador
ortogonal, e teve maior mpeto com os avanos em microeletrnica e computadores.
O

reflectron

resoluo,

aumentou

pois

dobrou

a
a

trajetria e aumentou o tempo


de

vo,

sem

comprimento
aumentasse,

que
do

o
tubo

diminuiu

espalhamento de fragmentos
de mesma m/z.
ons de mesma m/z podem ter pequenas diferenas de velocidades, o que faz com eles se distanciem
uns dos outros ao longo do tubo de vo. Quanto maior o tubo, os ons ficam mais espalhados. No
reflectron, os ons mais velozes demoram mais do que ons mais lentos para serem freados pelo campo
repulsor e serem refletidos de volta numa trajetria parablica. Assim, aps passar pelo reflectron, os
ons menos velozes de mesma m/z saem na frente (ver figura). Como os que ficam para trs depois de
passar pelo reflectron so os mais velozes, todos esses ons se encontraro em um ponto no futuro. Ou
seja, h um ponto de foco, que convenientemente e exatamente ajustado na posio do detector.
O tempo de vo tem aquisio de dados muito mais rpida do que o quadrupolo, o que faz com que o
TdV seja muito melhor para colunas ultracapilares, que tm velocidade linear muito maior e produzem
picos muito mais finos. O quadrupolo no produz o nmero de varreduras por pico necessrio para uma
descrio quantitativa eficiente dos picos de colunas ultracapilares, alm de deformar o espectro de
massas obtido, por coletar os ons em regies do pico cromatogrfico que tm diferentes concentraes
(ver adiante).
vi)Detectores para Espectrmetros de Massas
Os ons, depois de separados, ou seja, os
que conseguem passar pelo analisador,
vo de encontro ao detector. O detector
pode ser eletromultiplicadora, channeltron
ou microchannelplate, que pr-amplificam
o sinal por processo de avalanche de
eltrons,

gerando

corrente

eltrica

Esquema da eletromultiplicadora

suficientemente intensa para que um


amplificador possa ser utilizado.
Os dinodos da eletromultiplicadora so folhas curvas de uma liga de Cu-Be que, ao ser atingida no vcuo
por eltrons ou fragmentos, emite mais eltrons. O 1 dinodo aterrado (potencial zero) para ser
atingido por fragmentos positivos. Os dinodos subseqentes so cada vez mais positivos, atraindo
eltrons produzidos no dinodo anterior e multiplicando-os (figura acima). Esse efeito cascata produz uma
corrente aprecivel ao final, dependendo das voltagens utilizadas e do nmero de dinodos do detector.

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No channeltron, estgios e voltagem so


contnuos, pois o material semicondutor e
distribui a diferena de potencial ao longo
do corpo interno do detector. Mas o efeito
cascata o mesmo, s que agora h muito
mais estgios de multiplicao possveis.
Channeltrons e eletromultiplicadoras so
utilizados em quadrupolos.

Esquema do channeltron

No caso do tempo-de-vo o detetor deve ser bastante sensvel e rpido, por isso utiliza-se um detetor do
tipo microchannelplate, que consiste de placas com milhares de microtubos em que cada um deles pramplifica o sinal de maneira semelhante a um channeltron. Os eltrons emitidos podem ser novamente
amplificados em outro microchannelplate, gerando uma corrente suficiente para ser medida.

estrutura

em

duplo

microchannelplate

chamada de Chevron.

vii) Os Espectros de Massas


Com finalidade didtica, estabeleceremos regras simples e iniciais, antes de falarmos dos mecanismos
comuns - no entanto mais complexos - de fragmentao. Assim, analisaremos como algumas molculas
simples e gases nobres podem fragmentar e/ou ionizar, sem levar em conta nada mais que sua
estrutura, e depois veremos alguns espectros reais de fragmentao para compararmos.
O tomo de He pode ionizar com carga +1 e +2. O espectro de
massas apresentaria os picos ao lado.
No esquema no foi levada em conta a intensidade de cada pico. Se por acaso existisse um processo de
captura eletrnica, poder-se-ia tambm ter ons negativos (He- e He=), mas no usual selecionar e
identificar os fragmentos negativos, nem esses ons so muito comuns, exceto em halognios.
O gs H2 pode se ionizar com carga +1 e +2. Alm do on molecular, a molcula
pode se partir em dois fragmentos de massa 1. Veja ao lado.
Neste caso, poderiam aparecer os primeiros fragmentos metaestveis, isto , a fragmentao do on H2+
poderia ocorrer durante a separao e a identificao, formando, por exemplo, um fragmento neutro H e
o on H+. Este on metaestvel seria identificado entre m/z = 1 e m/z = 2 como um pico largo, pois o
processo teria ocorrido durante a separao dos fragmentos e a refragmentao de todos os

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metaestveis no ocorreria ao mesmo tempo. Poderamos ter ainda mais fragmentos se a molcula de
hidrognio fosse HD ou D2 (onde D deutrio).
m/z
Frag.

1
H+

6
C+2

6.5
(CH)+2

7
(CH2)+2

7.5
(CH3)+2

m/z
Fragm.

12
C+

13
(CH)+

14
(CH)+

15
(CH3)+

16
(CH4)+

8
(CH4)+2

A molcula CH4 tem massa 16 e 10


eltrons. Analisando somente os
ons de carga +1 e +2, podem
ocorrer fragmentos de massa 1, 6,
6,5, 7, 7,5, 8, 12, 13, 14, 15 e 16
(on molecular).

O que resultaria num espectro possvel:

Compare agora com um espectro real de


metano, obtido com baixa resoluo. Quais
seriam as causas das diferenas que se
podem notar?

Como exerccio, construa uma tabela com o on


molecular e os fragmentos possveis com carga +1 e
+2 da molcula de SF6 e compare com o espectro ao
lado. Tente explicar as diferenas.

viii) Mecanismos de Fragmentao


A probabilidade de formao de um tipo de fragmento est relacionada com a probabilidade da molcula
conseguir absorver a energia necessria para quebrar a ligao que vai originar o fragmento. Alm disso,
h de se levar em conta outros processos passveis de acontecer naquela energia absorvida. Mais ainda,
o fragmento pode se originar a partir de diferentes energias absorvidas ou a partir de um processo
mltiplo, em que ocorram vrias etapas at se chegar ao on final. Na coliso com ftons (tcnica
utilizada em pesquisa), o processo mais seletivo, pois o fton absorvido com toda a sua energia. No
caso de eltrons, a molcula pode absorver as mais diferentes quantidades de energia a partir da coliso
com o eltron. Quais energias ela vai absorver e com qual probabilidade, depende da estrutura molecular
e da energia total do eltron antes da coliso.
Todos esses fatores tornam a anlise terica extremamente difcil e objeto de estudo de setores de
ponta. Existem, no entanto, algumas concluses empricas para a anlise de compostos orgnicos que
permitem previso grosseira, mas muito til, dos picos mais intensos de espectros de molculas mais
simples, ou da existncia de determinados grupos funcionais (consulte literatura especializada).

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ix) Identificao de Compostos por Bibliotecas de Espectros


Seja por bibliotecas comerciais, seja por bibliotecas montadas pelos prprios usurios, h hoje
mecanismos automticos para identificao de compostos a partir de seus espectros de massas. Numa
lgica bastante simples, as bibliotecas so ordenadas pelos picos mais intensos: se o composto em
estudo tem como pico mais intenso m/z = xy, o computador procura na biblioteca por todos os
compostos que tm xy como pico mais intenso. Na 2 etapa, o 2 pico mais intenso obtido no composto
em estudo procurado dentro do conjunto separado pela 1 busca. A busca prossegue nos picos cada
vez menos intensos, at que se chegue a um conjunto reduzido de compostos (ou at um nico
composto) com as respectivas probabilidades de coincidncia de estrutura. Com isso, a estrutura do
composto pode ser elucidada muito mais rapidamente, pois, mesmo que o composto em estudo no seja
aquele fornecido pela biblioteca, sua estrutura tem de ser semelhante em alguns aspectos, para que o
espectro de massas possa ser to parecido.
REGISTRADOR
A funo do registrador imprimir o sinal eltrico proveniente do detector, o qual dever ser
proporcional quantidade de amostra injetada no sistema cromatogrfico. Desta forma, o cromatograma
obtido no registrador permitir uma anlise qualitativa e/ou quantitativa da amostra em estudo.
O aparecimento dos integradores eletrnicos modernos na dcada de 70 fez com que os registradores
potenciomtricos perdessem terreno no registro de cromatogramas. Os integradores, alm de
representarem o cromatograma, permitem o registro de tempos de reteno, altura de picos e rea de
picos. A partir destes dados, torna-se fcil o clculo de concentraes e reas relativas.
Na dcada de 80 surgiram novas opes, atravs do uso de computadores. A interface analgica-digital
(A/D) permite a converso do sinal analgico do detector para digital, em formato adequado para
processar dados no computador. Assim, a aquisio dos dados feita diretamente pelo computador, sem
necessidade de integradores. Adicionalmente, a interface D/A, permite que o computador controle as
funes do cromatgrafo, tornando o computador mais verstil que um registrador ou integrador.
BIBLIOGRAFIA
J. V. Hinshaw e L. S. Ettre, Introduction to Open-Tubular Column Gas Chromatography (Advanstar,
Cleveland, 1994. 189 pp.). ISBN 0-929870-25-5.
Douglas A. Skoog, F. James Holler, Stanley R. Crouch, Principles of Instrumental Analysis, Brooks Cole 6
edio, 2006.
Ademrio Iris da Silva Junior, Excitao Eletrnica da Molcula de SF6, dissertao de mestrado, IQ-UFRJ,
1992.
Joselito Barbosa Maciel, Fragmentao de molculas atravs do emprego da luz sncrotron e de um novo
espectrmetro de massas por tempo de vo, tese de doutorado, IQ-UFRJ, 2000.
Joseph Ladislas Wiza, Microchannel Plate Detectors, Nuclear Instruments and Methods, Vol. 162, 1979,
pg 587-601.
B.A. Mamyrin, Time-of-flight mass spectrometry (concepts, achievements, and prospects), International
Journal of Mass Spectrometry 206 (2001) 251266.
M.M. van Deursen, J. Beens, H.-G. Janssen, P.A. Leclercq, C.A. Cramers, Evaluation of time-of-flight mass
spectrometric detection for fast gas chromatography, Journal of Chromatography A, 878 (2000) 205213.
Manual do cromatgrafo Agilent 6890. Disponvel em http://mmrc.caltech.edu/GCMS/6890-operatingmanual.pdf . Acesso em 05/11/2010.

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ANLISE QUANTITATIVA
A cromatografia gasosa permite realizar anlises qualitativas e quantitativas. A qualitativa baseada na
velocidade com que cada componente da mistura atravessa a coluna, utilizando-se o parmetro Tempo
de Reteno (tR). O tempo de reteno de uma substncia o tempo gasto do momento em que a
amostra injetada, at o momento em que o mximo do pico sai da coluna e detectado.
O tempo de reteno caracterstico de uma dada substncia, em condies determinadas de anlise.
Dessa forma, para uma dada coluna, um dado gs de arraste e condies de temperatura e presso
estabelecidas, cada substncia tem um tempo de reteno prprio, que permite sua identificao atravs
da comparao com a anlise de padres, realizada sob as mesmas condies.
Compostos diferentes, no entanto, podem ter os mesmos tempos de reteno. Para uma anlise
qualitativa mais acurada, necessrio o uso de detectores como os espectrmetros de massas, que
fornecem espectros especficos para cada substncia (somente ismeros ticos so praticamente
indistinguveis em cromatografia gasosa). Outra possibilidade a injeo em mais de uma coluna, onde
ento o conjunto dos sucessivos tempos de reteno para cada composto seria cada vez mais especfico.
A anlise quantitativa, por outro lado, est relacionada com a rea formada sob os picos, pois a
intensidade do sinal do detector proporcional quantidade de substncia presente na mistura injetada.
Para se realizar uma anlise cromatogrfica necessrio que o cromatograma obtido esteja bem
"resolvido". Este termo, "resolvido", significa boa separao entre os picos e picos de boa simetria, de tal
forma que se possa determinar com preciso, tanto os tRs como as reas dos picos.
Na prtica, com os parmetros cromatogrficos adequados e dependendo de amostra, tcnica de injeo,
equipamento, volume injetado e coluna utilizada, pode-se obter o registro cromatogrfico com picos bem
separados e simtricos, isto , com boa resoluo, pelo menos para os analitos de interesse.
Quando isso impossvel, a espectrometria de massas oferece a opo do monitoramento seletivo de
ons, onde o espectrmetro de massas monitora os ons que, no tempo de reteno do analito de
interesse, so exclusivos desse analito e no existem nos compostos que por acaso estejam co-eluindo
no mesmo tempo de reteno e que tambm pertencem matriz em que o analito se encontra. Desse
modo, o detector de espectrometria de massas torna-se especfico, e pode-se medir a rea do pico
cromatogrfico em relao queles ons, sem que haja interferncia de outros compostos. Desvantagem:
a intensidade de sinal bem menor do que com o total de ons, a relao sinal/rudo piora, e, se os ons
especficos forem de baixa intensidade a quantificao pode ficar muito prejudicada.
A REA DO PICO CROMATOGRFICO
A rea do pico cromatogrfico, que se origina a partir da passagem de determinada substncia pelo
detector, proporcional quantidade de substncia presente na amostra e a determinao dessa rea
servir para quantificar o constituinte da amostra. O clculo da rea pode ser feito por algumas tcnicas
de integrao. Mas, para que o valor de rea expresse concentrao, so necessrias algumas condies:
1. A existncia de padres com pureza confivel, que possam ser utilizados nos clculos.
2. Os compostos de interesse no podem sofrer decomposio trmica ou decomposio cataltica no
sistema cromatogrfico e nem ficar retidos permanentemente.
3. O pico de interesse deve corresponder somente a uma substncia, ou seja, no tenha ocorrido
coeluio, a no ser que o detector seja um espectrmetro de massas e exista a possibilidade de se
fazer o monitoramento seletivo de ons.

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4. A quantidade de massa analisada deve estar na faixa linear de resposta do detector, do amplificador
e do sistema de integrao.
5. Dependendo do mtodo de clculo, o operador deve ter conhecimento da existncia ou no de
substncias no detectveis e/ou no eludas.
6. Deve haver repetibilidade na operao do cromatgrafo, isto , nas temperaturas, vazes e
programaes utilizadas, para que se possa reproduzir corretamente dados de reteno e resoluo.
7. Deve haver amostragem correta do sistema a ser analisado.
8. Preciso e exatido devem estar altura das exigncias do mtodo analtico na determinao das
reas dos picos.
9. A anlise das fontes de erro ao longo do processo deve expressar o resultado final com a preciso e
a exatido corretas1.
DETERMINAO DAS REAS DOS PICOS
A escolha do mtodo a ser utilizado na determinao das reas depender da preciso e da exatido
desejadas, do tempo e dos recursos humanos, tcnicos e financeiros disponveis. Como exemplo, a tabela
mostra os resultados da determinao das reas do cromatograma de uma mesma amostra feitos por
diferentes tcnicas de integrao.
Tabela 4 - Comparao das tcnicas de integrao de reas
planmetro triangulao HL (1/2 H)
rea D.R. rea D.R. rea D.R.
mdia
mdia
mdia
Propano
0,04
20
0,05
14
0,04
12
Isobutano
4,8
1,7
4,8
8,7
4,5
3,8
n-Butano
14,0 5,6 13.7 4,5 13,6 1,6
1-Buteno
18,5 3,3 18,5 4,8 18,6 3,1
trans-2-Buteno 20,2 6,5 20,3 3,3 20,1 2,0
cis-2-Buteno
16,1 3,7 15,8 1,6 16,4 3,7
Butadieno
18,2 2,0 18,3 1,8 18,2 1,7
Isobuteno
8,1
5,7
8,6
3,7
8,6
2,2
Tempo de
45/60
45/60
50/60
clculo (min)
D.R.R.
4,1
4,1
2,6
D.R.= desvio relativo

cortar e pesar
rea
D.R.
mdia
0,01
14
5,0
2,0
15,0
2,8
18,4
1,2
20,1
1,4
15,9
1,5
17,6
1,2
8,0
2,1
100/120

disco de bola
digital
rea
D.R. rea D.R.
mdia
mdia
0,04
18
0,03
10
4,6
0,4
4,6
0,9
14,1
1,0 14,1 0,4
18,7
2,5 18,7 0,3
20,2
1,1 20,2 0,2
16,1
0,7 16,0 0,4
18,3
0,7 18,3 0,5
8,1
2,6
8,2
0,5
15/30
5/10

1,7
1,3
0,4
D.R.R.= desvio relativo ao valor real

A escolha do mtodo de anlise quantitativa depende da preciso desejada, do tempo necessrio, do


custo e do equipamento disponvel no laboratrio para efetuar as medies e tambm do aspecto dos
picos. Pela disponibilidade cada vez maior de computadores, o mtodo digital hoje o mais
universalmente adotado.
CLCULOS QUANTITATIVOS
Quatro mtodos so geralmente utilizados na determinao quantitativa dos componentes da amostra2:
normalizao interna, normalizao de reas, padronizao externa e padronizao interna.

Numa anlise quantitativa, sempre que possvel, deve-se expressar o resultado final no s com o nmero de significativos
correto, mas tambm com a margem de erro devidamente determinada e expressa em algum parmetro conhecido (desvio padro,
coeficiente de variao, intervalo de confiana etc.).
2
A tcnica de adio-padro no ser discutida neste texto.

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NORMALIZAO INTERNA
A rea de um sinal cromatogrfico dada pela equao a seguir e proporcional concentrao da
substncia que passa pelo detector: S = K C Vinj
Onde S rea de pico, determinada no cromatograma, K a cte. de proporcionalidade que depende da
interao do eluente e do sistema de deteco, C a concentrao da substncia eluda e Vinj o
volume injetado. Se K a mesma para todos os componentes da amostra e todos eles esto
devidamente registrados no cromatograma, pode-se considerar que o percentual de rea corresponde ao
percentual de massa. Por exemplo, observe uma amostra que contm somente as substncias A, B e C.

Se K igual para todos os compostos, a determinao quantitativa da


substncia (B) no cromatograma simplesmente a porcentagem de sua
rea em relao rea total:


S = K  V = K m

%B = 



%B =

  

Vantagens:

SB

(S A + S B + S C )

Limitaes:

simples e prtica, sendo ideal para anlises de essa tcnica no serve para amostras mais
rotina em que a exatido no um fator
importante.
independe do volume injetado.

complexas.
exige o registro de todos os componentes da
amostra.

independe da estabilidade do aparelho.

no adequada para a anlise de traos.

no necessria a utilizao de padres.

normalmente a exatido baixa, pois raramente


os Ks so iguais.

EXERCCIOS
1)Uma amostra de trs substncias A, B e C foi analisada cromatograficamente e foram obtidos 3 picos
distintos. O papel que registrou estes picos foi recortado no formato de cada um deles, de modo que
cada pico foi pesado numa balana analtica e se obteve 0,5710 g, 0,2230 g e 0,1240 g para A, B e C,
respectivamente. Supondo que o papel tenha peso uniforme, calcule a % de B na amostra, levando em
conta que o fator de resposta do detector igual para as trs substncias.
2)H possibilidade de se fazer uma anlise por cromatografia gasosa se a constante K for diferente para
cada componente da amostra? Justifique, descrevendo o procedimento a ser efetuado.
NORMALIZAO DE REAS
Na normalizao interna levou-se em considerao que a resposta do detector sempre a mesma para
qualquer substncia, ou seja, K o mesmo para todos os componentes da amostra. Se isso fosse
verdade, a substncia B teria a mesma rea das substncias A e C se essas trs substncias estivessem
na mesma concentrao. Isso acontece somente se o detector tem a mesma sensibilidade para todos os
componentes dessa amostra.
O que normalmente ocorre que o detector responde de maneira diferente para cada substncia e, para
uma mesma quantidade em massa de substncias diferentes, fornece, como resultado, reas

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completamente dspares. Neste caso, a rea obtida precisa ser corrigida. Essa correo feita pela
determinao do valor da constante de proporcionalidade K para cada um dos componentes da amostra,
que conhecida como fator de correo ou fator de resposta (f), a partir do cromatograma obtido de
padres das substncias que compem a amostra.
O procedimento adotado para determinar os fatores de resposta :

Preparar uma soluo padro contendo todos os componentes da amostra em concentraes


conhecidas.

Injetar essa soluo e determinar as reas dos picos.

Determinar a constante K para cada composto.

Considerar uma das substncias como referncia no cromatograma.

Determinar os demais fatores a partir da relao entre o K da substncia desejada e o K da


substncia escolhida como referncia no cromatograma do padro.

Por exemplo, para calcular os fatores de resposta das substncias A, B e C de uma amostra contendo
somente essas trs substncias podemos, a partir das reas dos picos no cromatograma da soluo
padro, empregar as seguintes expresses:
SA = KA x CA x Vinj

SB = KB x CB x Vinj

SC = KC x CC x Vinj

Onde se segue a mesma notao da nomalizao interna. Nesse caso, se a substncia B for escolhida
como referncia, o seu fator (fB = KB/KB) ser 1. J as reas dos compostos A e C teriam de ser
convertidos no equivalente em rea do composto B , ou seja:

KA
K
K B C A Vinj S A B = K B C A Vinj
KB
KA
K
K
C K B C C Vinj S C B = K B C C Vinj
KC
KB

S A = K A C A Vinj
S C = K C C C Vinj

Dessa forma, os fatores de converso das reas sero:


fA = KB / KA ;

fB = 1 ;

f C = KB / K C

Esses fatores convertem as reas de A e C para o equivalente em rea do composto B. Isto , todas as
reas agora, depois de corrigidas, esto relacionadas mesma resposta de detector e podem ser
somadas como se fosse uma normalizao interna.
Depois de determinar os fatores de resposta das substncias a partir dos padres, deve-se corrigir cada
rea no cromatograma da amostra, e o clculo da concentrao similar ao clculo percentual da
normalizao interna, s que neste caso utiliza-se as reas corrigidas3. Assim, o clculo percentual de
uma amostra contendo as substncias A, B e C fica:

%A =

S A fA
SB fB
S C fC
%B =
%C =
(S A fA + SB fB + SC fC )
(S A fA + SB fB + SC fC
(S A fA + SB fB + SC fC )

As vantagens e limitaes da tcnica de normalizao de reas so praticamente as mesmas da


normalizao interna, exceto que o resultado obtido mais exato, devido correo das reas (o que
depende fundamentalmente da pureza dos padres). uma tcnica muito mais laboriosa e necessita
vrios padres, por isso, normalmente s utilizada para amostras com poucos componentes.

rea corrigida = rea calculada fator de resposta relativo.

Instituto Federal do Rio de Janeiro, Campus Maracan, verso 2011

EXERCCIOS
1)O cromatograma A corresponde a uma alquota de 1,5 L de uma amostra contendo somente as
substncias A, B, C, D e E, e o cromatograma B a uma alquota de 1,0 L de uma mistura padro (em
%p/p) de A (32%), B (38%) e C (30%). Considerando que B tem o mesmo fator de resposta que E e
que C tem o mesmo que D, determine os valores de rea por triangulao e o teor de A na amostra.

2)Uma amostra de 3 substncias A, B e C foi analisada cromatograficamente, obtendo-se trs picos


distintos. Estes picos apresentaram reas iguais a 57,10 mm2, 22,30 mm2 e 12,40 mm2 respectivamente.
Calcule a porcentagem de B na amostra, levando em conta que A, B e C tm fatores de resposta iguais a
1,0; 1,5 e 2,0 respectivamente.
PADRONIZAO EXTERNA4
Como foi visto anteriormente, ambas as tcnicas de normalizao no servem para amostras mais
complexas. Observe a figura:
Cromatograma 1

Cromatograma 2

tR (min)
Cromatograma 1 - injeo de amostra

tR (min)
Cromatograma 2 - injeo de padro

No cromatograma 1, relativo a uma amostra complexa, so registrados doze sinais. O cromatograma 2


corresponde a uma soluo padro da substncia que gerou o pico no 11.
Supondo que o problema em questo fosse quantificar nessa amostra um determinado componente X,
que gerou o pico no 11, voc seria capaz de listar os motivos pelos quais no possvel lanar mo da
tcnica de normalizao nesse caso?
Uma soluo plausvel para casos como esse padronizao externa, onde preparada soluo-padro
contendo somente a(s) substncia(s) de interesse na amostra. A comparao com um padro externo
possvel, baseando-se no pressuposto de que uma substncia X ter o mesmo fator de resposta quando
presente na amostra ou em uma soluo padro. Pode-se considerar as relaes matemticas a seguir:

S x = f x C x V inj

no cromatograma 1

S 'x = f x C

'
x

'
V inj

no cromatograma 2

Onde Sx e Sx so, respectivamente, as reas que a substncia X gerou nos cromatogramas de amostra
e de padro; Cx e Cx referem-se s concentraes de X nas solues amostra e padro, fx o fator de
resposta da substncia X frente ao detector utilizado e Vinj e V'inj os volumes injetados de amostra e de
padro. fX e Cx so as incgnitas que podem ser determinadas pelas duas equaes.

Tambm conhecida como calibrao absoluta.

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Para melhorar a preciso do mtodo e tambm verificar a faixa de linearidade, pode-se construir uma
curva de calibrao (rea concentrao). Os volumes injetados e a atenuao a diferentes
concentraes dos padres da substncia de interesse devero ser os mesmos5.
O procedimento adotado para fazer a curva de calibrao simples:

Prepara-se padres da substncia a ser analisada.

Injeta-se os padres, um a um, e determina-se as reas pertinentes substncia de interesse.

Observando-se o exemplo da figura e considerando C1< C2< C3< C4< Cn temos que:
Curva de calibrao - Padronizao Externa

rea

Concentrao

Para determinar a concentrao desconhecida na soluo injetada a partir da curva de calibrao,


interpola-se a rea do pico da amostra na reta ou usa-se a equao da reta determinada por regresso
linear. Mas h incerteza quanto ao volume injetado, principalmente pelo uso de microsseringas6.
Vantagens :

Limitaes :

basta determinar a(s) rea(s) do(s) pico(s) de depende do volume injetado.


interesse.
independe da deteco de todos os picos e
serve para amostras mais complexas.
possvel usar essa tcnica quantitativa na
anlise de traos.
pode-se trabalhar com curva de calibrao.

depende da estabilidade do cromatgrafo e


do detector.
Amostras

que

demandem

preparaes

complexas para poder injetar no cromatgrafo


podem sofrer perdas de analito que no so
reprodutveis na preparao dos padres.

EXERCCIO
1)1,0 L de uma mistura de 0,537 g de n-butanol e 0,497 g de dioxano foi injetada em uma coluna
carbowax em um cromatgrafo gs, obtendo-se reas de 520 mm2 para o n-butanol e 635 mm2 para o
dioxano. 1,0 L de uma mistura desconhecida das mesmas substncias forneceu as reas de 400 mm2 e
228 mm2, respectivamente.
Determine a concentrao % p/p de cada solvente na mistura desconhecida.

5
Obviamente, alguns outros parmetros que podem alterar a rea ou a sensibilidade analtica como a temperatura do forno do
detector, corrente de alimentao para o DCT, vazo do gs de arraste, etc. devero ser constantes. A atenuao de trabalho e o
volume injetado fazem parte da constante no grfico.
6
A utilizao de vlvulas de injeo com volumes fixos acarreta menor erro de injeo.

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PADRONIZAO INTERNA
Na tcnica de padronizao externa corre-se o risco de no analisar a amostra exatamente nas mesmas
condies dos padres. Isso pode acarretar concentraes inexatas, principalmente pelos erros no
volume injetado e na preparao da amostra. Por outro lado, isso no problema na normalizao, j
que os clculos (percentual em rea e fator de resposta relativo) so feitos a partir da relao entre as
constantes de dois analitos que esto em um mesmo cromatograma, e alteraes que ocorram na
sensibilidade do detector, no volume injetado e perdas na preparao da amostra afetaro os dois picos
de modo igual, no interferindo dessa forma no clculo quantitativo final.
A padronizao interna a tcnica na qual o padro injetado conjuntamente amostra desconhecida,
isto , ele dissolvido na amostra bruta, ainda antes da preparao para injeo, e servir de base para
os clculos quantitativos da substncia a ser analisada a partir de uma relao de reas. A tcnica
similar padronizao externa, porm, como veremos adiante, o volume injetado e as perdas na
preparao agora so parmetros que pouco afetam a anlise. O grande problema escolher um padro
interno7 adequado para a amostra a ser analisada, pois este deve atender aos seguintes requisitos:
No pode estar presente na amostra.
Deve ter comportamento cromatogrfico similar ao da substncia a ser analisada.
Estar numa concentrao conhecida.
Ser estvel termicamente.
No ficar adsorvido permanentemente na fase estacionria.
No co-eluir com ningum ou ele e o analito terem ons distintos dos compostos que co-eluam, para
poder monitorar ons seletivamente no espectrmetro de massas.
Observe o exemplo a seguir:

Crom. 1 - Amostra complexa contendo o


componente de interesse X, com concentrao
desconhecida.
Crom. 2 - Soluo padro do componente X.
Crom. 3 - Soluo padro de uma substncia PI.
Crom. 4 - Amostra complexa + PI.
Crom. 5 - Soluo padro de X + PI.

Essa tcnica restrita a solues lquidas e slidas, dada a dificuldade em adicionar, com preciso, padres internos gasosos em
amostras gasosas.

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bvio, pelos cromatogramas da figura, que a substncia escolhida bom padro interno (PI) para essa
amostra, pois no est originalmente no cromatograma 1 (no h pico da amostra com o tempo de
reteno do PI), e o PI tem comportamento cromatogrfico similar ao do componente X. Fazendo a
relao da rea do componente X (SX) com a rea do padro interno (SPI), pode-se calcular a
concentrao do componente X na amostra, utilizando a equao final de desenvolvimento a seguir:

Sx
K C x Vinj
= x
S PI K PI C PI Vinj

Como:

Kx
= fX/PI
K PI

A equao fica:

Sx
C
= fx /PI x
SPI
CPI

Num mesmo cromatograma, os volumes injetados so iguais para X e para PI e a equao simplificada
vlida para o cromatograma dos padres com X e PI e para o cromatograma com amostra e PI.
No cromatograma do padro (Crom. 5), determina-se o fator de resposta relativo entre X e PI (fX/PI),
pois ambos tm concentraes e reas conhecidas. Esse fator relativo (fX/PI ) igual nos cromatogramas
da amostra e dos padres e, ao relacionar as reas do analito com a rea de PI na amostra (crom. 4),
como se conhece a concentrao do padro, calcula-se a concentrao de X na amostra.
Assim como na padronizao externa, essa anlise pode ser realizada mediante a construo de uma
curva de calibrao. Essa curva de calibrao feita da seguinte forma:
Preparam-se vrios padres com vrias concentraes conhecidas da substncia a ser analisada.
Em cada padro adicionada uma quantidade tal de padro interno que a rea de X no fica muito
maior que a rea do PI ou vice-versa9.
Cada um dos padres injetado e so medidas as reas do analito e do padro interno.
No grfico, a abcissa (x) a razo da concentrao (ou massa) do analito pela concentrao (ou
massa) do padro interno e a ordenada (y) a relao entre as reas do analito e do padro interno.
Para a anlise da amostra desconhecida introduz-se, de preferncia, a mesma quantidade de padro
interno utilizada no preparo dos padres.
Injeta-se a amostra com padro interno, calculam-se as reas de X e de PI e as relaes entre elas e
interpola-se no grfico obtido anteriormente, para obter a relao de concentrao. A partir do
resultado obtido, calcula-se a concentrao de X na amostra desconhecida.
Pode-se expressar o eixo X somente como Cx , se a concentrao do PI for mantida constante para
todos os padres e amostra.
Vantagens :

Curva de calibrao Padronizao Interna

As mesmas da padronizao externa. Porm,

Sx/Spi

volume injetado e estabilidade do cromatgrafo


deixam de ser fator limitante.

40

No

30

so

necessrios

vrios

padres,

acontece na normalizao de reas.

20

Perdas no processo de preparao de amostra

10

afetam igualmente analito e padro interno,


melhorando a exatido (mas no a preciso).

0
0

0,1

0,2

0,3
Cx/Cpi

0,4

Limitaes :
Dificuldade na escolha de um padro interno que
atenda todos os requisitos necessrios.

como

Se possvel, interessante manter a concentrao do padro interno fixa enquanto a de X varia.