Muestra

Observaciones

Control +/-

Sobrenante
Glicgeno
Fehling (A,B)

No se observa
formacin
de
Cu2O

Negativo
(-)

Precipitado
MonoOligosacridos
(Lugol)

No se observan
cambios
de
coloracin

Negativo
(-)

Sobrenadante
Glicgeno
(Lugol)

No se observan
cambios
de
coloracin

Negativo
(-)

Sobrenadante
Glicgeno
(Molish)

Formacin de un
anillo violeta en la
interface

Positivo
(+)

Foto

Universidad de Bogot Jorge Tadeo Lozano

Informe de laboratorio: Fraccionamiento de tejidos (rin).
Camilo Andrs Ortiz Garzn David Ricardo Olmos Daz
Fecha: 17/02/2013
TABLAS Y DISCUSION DE RESULTADOS
Tabla 1. Pruebas para carbohidratos.
Discusin de resultados Tabla 1.

En la prueba que se realiz con el reactivo de Fehling no se observaba la

formacin de precipitado de Cu 2O que demuestra la presencia de azucares
reductores. Esto explica que no se formara precipitado, porque el glicgeno o
glucgeno carece de sabor dulce y de poder reductor (Gonzlez, 2003)

Fuente (Qumica orgnica: conceptos y aplicaciones, Philip S, et al)

En la prueba que se realiz con el reactivo de Molish para el sobrenadante
que corresponde al glicgeno, dio positivo puesto que el cido sulfrico
deshidrata las glucosas que componen el glicgeno, pasndolas a la forma
furfural para que con el alfa-naftol formen un complejo coloreado (Quesada,

2007).
Fuente: Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica.
(2007). P. 90
En la prueba de Lugol que detectaba monosacridos y oligosacridos, dio
negativa puesto que en la muestra se encontraban en una concentracin muy
baja. Lo mismo ocurri en la prueba hecha al sobrenadant e. El control negativo
de la prueba en el rin se puede explicar por la concentracin de glucgeno
que es muy poca y as el reactivo de Lugol no pudo reaccionar con el
glucgeno contenido.
Tabla 2. Pruebas para reconocimiento de lpidos
Muestra

Observaciones

Control +/-

Foto

Sobrenadante
(Lieberman)

Al
minuto
se
observ un color
marrn rojizo, y a
los 15 min se
observ un color
marrn claro y un
anillo violeta en la
superficie de la
solucin.

Positivo
(+)

Sobrenadante
(Saponificacin)

Formacin
de
espuma propia de
la
prueba
(formacin
de
jabones).

Positivo
(+)

Discusin de resultados Tabla 2.

En la prueba que se realiz con el reactivo de Lieberman para el
sobrenadante, dio una coloracin marrn tenue con un anillo violeta ya que
reacciona con el grupo hidroxilo del tercer carbono del colesterol (lpido)
condensndolo por medio del anhdrido actico, en medio acido (cido
sulfrico). La coloracin est dada ya que en la muestra de rin hay una
pequea cantidad de colesterol, que es aproximadamente de 375mg en cada
100g de rin esta es la razn por la cual tenemos una coloracin tenue.
La liberacin de cationes hidrxido aumenta la conjugacin del anillo fusionado
propio del colesterol, lo cual le brinda estabilidad a la molcula que proporciona
el color a la muestra.

Fuente: qumica de los alimentos. Manual de laboratorio. (2003).

En la prueba de saponificacin que detecta lpidos en general, la muestra

(rion) present formacin de espuma en los tubos. Esto demuestra la
presencia de sales de acido graso (jabn) mediante la reaccin que hace los
lpidos saponificables presentes, con una base (NaOH) en presencia de agua y
calor obteniendo como productos el jabn y el glicerol.

Fuente : Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica.

(2007). P. 62
Tabla 3. Prueba para reconocimiento de protenas
Muestra

Observaciones

Control +/-

Residuo
(Ninhidrina)

Se observ una
solucin caf con
un precipitado de
color violeta

Positivo
(+)

Foto

Discusin de resultados Tabla n3

En la prueba de Ninhidrina se reconocieron aminocidos, pptidos o
protenas libres presentes en la muestra de rin. Estos compuestos poseen un
grupo carboxilo libre (COOH) adyacente al grupo amino que sufre una reaccin
de hidrolisis (por esta razn se adiciono 1 ml de agua destilada en el
procedimiento para que esta hiciera la hidrlisis) cuyo producto, la serina libre,
puede ser desaminada por la Ninhidrina, y posteriormente es reducida a un
producto purpura en el proceso (Ocampo et al, 1997).

Fuente: curso prctico de qumica orgnica. Enfocado a la qumica de

alimentos .p.156

Argumentos para llevar a cabo el fraccionamiento Qumico

El Acido tricloroactico (ATA) se usa para descomponer los tejidos, siempre en
cuando el tejido (rin) se hubiese macerado correctamente, para separar las
sustancias que lo componen (carbohidratos, protenas, lpidos, entre otras) del
tejido (Annimo, 2011). Y se adicion la arena, porque sta facilita la accin
mecnica de la maceracin. Cabe resaltar que el ATA ayuda a solubilizar los
carbohidratos, debido a su afinidad con los grupos hidroxilo de los hidratos de
carbono. Al centrifugar se separaron lpidos, protenas, cidos nucleicos y
arena, de los carbohidratos quedando suspendidos en solucin.
PROCEDIMIENTO PARA LIPIDOS, PROTEINAS, ACIDOS NUCLEICOS Y
ARENA
Se adicion la mezcla ter-etanol-Cloroformo en su debida proporcin y
luego se centrifug. La adicin de la mezcla permiti la solubilizaran de los
lpidos, gracias a que sta mezcla es un solvente no polar, a fin con los lpidos.
La centrifugacin su debida separacin, PROTEINAS ARENA Y ACIDOS
NUCLEICOS DE LOS LIPIDOS. Vale la pena aclarar que los lpidos no se van al
fondo del tubo de centrifugado porque quedan suspendidos en la solucin no
polar, que posteriormente se evapor a bao Mara para aumentar la
capacidad de la mezcla de ter etanol cloroformo, para solubilizar los lpidos.
PROCEDIMIENTO PARA ACIDOS NUCLEICOS, PROTEINA Y ARENA
Al agregar el Cloruro de Sodio (NaCl), se busca disminuir la solubilidad de la
protena (salting-out), y con la adicin del butanol buscamos una modificacin

de la estructura de la protena (desnaturalizarla) para que as se facilite su

identificacin (Voet, 2006). Con el bao mara lo que se busca es aumentar la
accin desnaturalizante. Luego se centrifug (4000 rpm) con el fin de separar
las protenas de los cidos nuclicos por su diferencia de solubilidad.

PROCEDIMIENTO
PARA
LOS
OLIGOSACARIDOS Y GLICOGENO).

CARBOHIDRATOS

(MONO

Para procedimiento para carbohidratos se le adiciono etanol al 95% para la

separacin de los monosacridos compuestos hidrosolubles por precipitacin
con etanol, porque los polisacridos (glucgeno) son menos solubles en este
medio (Padilla, ao no especificado). Se dejo enfriar en el bao de hielo porque
mantiene la solubilidad de los monosacridos y oligosacridos que ayudan a
que estos no sufran cambios qumicos se logro separar por centrifugacin
porque los oligo y monosacridos estn presentes en el sobrenadante mientras
que el glucgeno se precipita por esta razn es por la diferencia de la
solubilidad.
Se puede deducir que la presencia de carbohidratos en el rin es baja. Esto
se puede argumentar porque el hgado es el mayor productor de glucosa en el
sistema del mamfero. Slo en condiciones de inanicin, el rin se encarga de
esta funcin.
Los lpidos estn presentes en la membrana del rin, y tienen una funcin
principal que es la conservacin de energa, para la sntesis de la orina y la
homeostasis en casos de dficit calorfico.
Las protenas en el rin estn presentes ms en carcter estructural, y a nivel
enzimtico para evitar procesos oxidativos, en condiciones de enfermedad
(Camacho, 2011).

DIFERENCIAS EN LAS HIPOTESIS PLANTEADAS EN EL INFORME

Lugol: En la prueba de Lugol se plante en la hiptesis, que no podra
reconocer carbohidratos porque en la muestra de rin, segn las tablas de
valor nutricional consultadas tenia una concentracin muy baja de estas
biomolculas. Esto se ratifico en la prctica, ya que en el tubo no se mostro
coloracin alguna.

Molish: Se infiri que no se podran reconocer carbohidratos en la muestra ya

que los carbohidratos encontrados en baja concentracin. En la practica esta
hiptesis fue rechazada, ya que el reactivo de Molish mostr un control positivo
con lo cual podemos inferir que la prueba de Molish tiene mayor sensibilidad
teniendo en cuenta la concentracin de carbohidratos.
Fehling: Para esta prueba se dedujo que no se podra observar la formacin
del precipitado Cu2O (prueba positiva), porque la baja, casi nula concentracin
de carbohidratos lo impeda esta hiptesis se confirmo en la practica de
laboratorio puesto que no se form el precipitado.
Saponificacin: Segn la tabla nutricional el rin posee una cantidad de
grasa total de 3,75mg / 100g. La hiptesis planteada argumentaba que era
posible la sntesis de sales de cidos grasos con la base (NaOH). Esto se
confirmo ya que hubo presencia de estas sales dando una formacin de
espuma por agitacin.
Lieberman: Esta prueba es propia de la identificacin de esteroles es decir
lpidos en general dando en un patrn positivo puesto que en la muestra hay
una cantidad significativa de estos segn la tabla nutricional (375mg / 100g)
produciendo un cambio de coloracin roja y dando un anillo violeta.
Ninhidrina: Segn la tabla de valor nutricional la protena esta en una
proporcin de 16,9g / 100g esto nos permiti inferir que en la muestra la
prueba seria positiva formando un complejo coloreado. En la prctica de
laboratorio se confirmo esta hiptesis puesto que se obtuvo la coloracin de
este complejo.
(Todas las reacciones para la explicacin de lo anteriormente expuesto, ya se
han mencionado anteriormente).

Conclusiones

En el rin, las concentraciones en carbohidratos son bajas esto evit la

accin de los ensayos correspondientes a identificacin de los mismos, a
excepcin de Molish que posee una mayor sensibilidad.

Los lpidos que tiene el rin son comprendidos como grasas libres
(cidos grasos) y esteroles, cada uno se identific con los ensayos de
saponificacin y Lieberman respectivamente.

Con respecto a las protenas, el rin tiene un alto contenido,

corroborado por el control en la prueba de Ninhidrina.

Bibliografa Consultada

 Philip S. Bailey, Christina A. Bailey, Qumica orgnica: conceptos y

aplicaciones, Ed. Pearson Educacin, 1998. p. 462-463
Gonzlez, Mara P., Prcticas de laboratorio y de aula, Ed. Narcea
Ediciones. Copyright. 2003.
Camacho M. Actividad de las enzimas antioxidantes en el rin. (2011).
Citado:
14
de
febrero
de
2013.
Fuente:
http://redalyc.uaemex.mx/src/inicio/ArtPdfRed.jsp?iCve=55919 726002.
Rodrguez, Manuel. et al,. Tratado de nutricin. (1999). Madrid: Editorial
Daz de Santos.
Voet, Voet. Bioqumica. 3 ed. (2004). Editorial medica panamericana.
Ocampo, Rogelio et al., Curso prctico de qumica orgnica: enfocado a
biologa y alimentos. (2008). Universidad de Caldas.
Quesada, Silvia. Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica.
(2007)
Costa Rica: Editorial universidad estatal a distancia.
Herrera, Carlos et al., Qumica de los alimentos: Manual de laboratorio.
(2003). Costa Rica: editorial de la universidad Rodrigo Facio.
Annimo. Fraccionamiento de tejidos. (2010). Citado: 15 de febrero de
2013.
Fuente:
http://clubensayos.com/Ciencia/Fraccionamiento-DeTejidos/371383.html
Padilla, Carmen et al., .Aislamiento y cuantificacin de glicgeno. (ao no
especificado).
Citado:
15
de
febrero
de
2013.
Fuente:
http://www.uco.es/organiza/d
epartamentos/bioquimica-biolmol/pdfs/22%20AISLAMIENTO%20GLUC%C3%93GENO.pdf