Animale transgenice

Sunt necesare multe generaii de mperecherii selecionate pentru a mbuntii

animalele domestice din punct de vedere genetic,lund n considerare
caracteristici ca volumul de lapte,anumite caliti ale lnii,rata de cretere n
greutate i frecvena de producere a oulor.La fiecare generaie
succesiv,animalele cu perfomane superioare sunt folosite pentru
nmulire.Aceast combinaie de mperechere i selecie,desi costisitoare i de
lung durat,a fost de un succes excepional.
Din punct de vedere conceptual strategia folosit este destul de
simpl.
1.O gen clonat este injectat n nucleul ovulului fertilizat.
2.Ovulul inoculat i fertilizat este implantat ntr-un primitor de
sex feminin pentru c dezvoltarea embrional reuit la
mamifere nu este posibil n afara uterului.
3.Unii dintre produii de concepie derivai din ovulul implantat
vor avea gena clonat n toate celulele.
4.Animalele cu gena clonat integrat n ADN-ul lor sunt folosite
pentru a frealiza o nou linie genetic.
n timpul anilor 1980,cu efort considerabil ideea animalelor
manipulate genetic prin introducerea genelor n ovule fertilizate
a devenit realitate.Odat cu apariia numeroaselor nouti
tiinifice,a fost creat un set de termeni pentru a mbuntii
comunicarea.De exemplu un animal al crei compoziie
genetic a fost modificat prin intoducerea de ADN strin este
numit transgenic.ADN-ul introdus este numit transgen i
ntregul proces este numit tehnologie genetic sau
transgenez.

oarecii Transgenici:metodologie

Tehnologia transgenic a fost dezvoltat i

perfecionat la oarecii de laborator.De la nceputul anilor 1980
sute de gene diferite au fost introduce n
ADN-ul diferiilor

oareci.Aceste studii au contribuit la nelegerea reglrii

genelor,a
dezvoltrii
tumorii,a
specificitii
imunologice,genetica molecular a dezvoltrii i multe alte
procese bilogice fundamentale.

oarecii transgenici au jucat de asemenea un rol n

examinarea fezabilitii produciei industriale a medicamentelor
pentru uz uman.Pentru transgenez ADN-ul poate fi:1.introdus
la oarece prin vectori retrovirali ce infecteaz celula
embrionilor n stadiu incipient naintea implantrii n primitorul
femel;
2.microinjecie pronucleului masculin n ovulul fertilizat;
3.introducerea de celule stem modificate genetic ntr-un
embrion
n stadiu incipient nainte de implantare ntr-un
primitor femel.

oarecii Transgenici:aplicaii

oarecii transgenici pot fi folosii ca sistem model

pentru a determina baza biologic pentru bolile umane i
divizarea tratamentelor pentru diferite condiii.n plus
transgeneza oarecilor este un sistem exemplar pentru a
determina fizabilitatea unui anumit agent terapeutic.n acest

context,oarecii
mblnite.

de

laborator

au

fost

numii

eprubetele

Modele ce folosesc ntregul animal mimeaz att

cauza ct i evoluia bolilor
umane.Totui oarecii nu sunt
oameni cu toate c oarecii sunt mamifere dar, informaia
obinut de la anumite modele transgenice s-ar putea s nu fie
relevant din punct de vedere medical.n alte instane pot fi
obinute informaii vitale cu privire la etiologia unor boli
complexe.

Modele Transgenice pentru Metoda Alzheimer

Boala Alzheimer este un proces degenerativ al

creierului,ce este caracterizat att prin pierderea progresiv a
abilitii de a gndi abstract ct i a memoriei i este
acompaniat de schimbri de personalitate,tulburri de limbaj
i ncetinirea capacitilor psihice.Prognosticul bolii Alzheimer
este sumbru,dei 1% din populaia ntre 60-65ani i 30% din
populaia peste 80 ani o pot avea.

Principala protein a corpurilor amiloide din boala

Alzheimer este o protein de 4 kilodaltoni numit A. Proteina
A are o lungime ntre 39 pn la 42 de resturi de

aminoacizi,iar formele A40 i A42

sunt principalele
variante.Toate proteinele A sunt derivate dintr-o clivare
proteolitic intern a precursorului -amiloid (APP).O clivare
defecioas a APP duce la producerea de A40 i A42 i o
ndepartare ineficient a acestor variante duce la acumularea
lor.Un numr mic de familii cu inciden crescut a bolii
Alzheimer prezint mutaii la nivelul genei APP,acest
descoperire implic aceast gen n producerea bolii.Din
nefericire,la marea majoritate,studiul patogeniei bolii Alzheimer
la oamenii este imposibil.Deci,un model animal ce mimeaz
boala Alzheimer este o unealt de cercetare indispensabil.
Au fost creai un numr de oareci transgenici cu versiuni
complete sau pariale de gen APP
normal conduse de
promotori neurospecifici.n majoritatea cazurilor plcile de
amiloid,amestecurile de neurofibrin,moartea neuronilor sau
comportamentul celular anormal nu a fost observat.Totui
neurodereglarea i alte caracteristici similare bolii Alzheimer sau petrecut n anumite situaii.De exemplu o transgen,ce este
produs din zona ce codific ultimii 100 de aminoacizii ai APP i
care conine secvena A proteinei produce caracteristicile
histologice reprezentative pentru boala Alzheimer.
Modele animale
mai convingatoare pentru boala Alzheimer au fost create cu
transgene ce conin mutaii ale genei APP ce se petrec n
anumite familii cu o inciden crescut a bolii Alzheimer cu
debut precoce.(50 ani).ntr-un sit din aceste familii,situl 717 al
APP(APP-717) conine fenilalanin n loc de valin.n alt grup de
familii cu boala Alzheimer,siturile 670 i 671 ale APP conin
asparagin i levalin,n loc de lisin i metionin.
Alte 3 gene (Apo-E4,gena presenilina 1 i gena
presenilina 2 [PS1 i PS2] ) au fost implicate n boala Alzheimer
la oameni.Prezena alelelor Apo E 4 a locusului Apo E4 ,ce joac
un rol n transportul lipidelor crete posibilitatea ca indivizii ce
au cel puin 60 de ani s dezvolte boala Alzheimer.Mutaii ale
genelor presenilinelor au fost gsite la familii cu debut foarte

precoce a bolii Alzheimer.Diferite studii indic faptul c genele

presenilinelor mutante cresc acumularea de A42.
Cu toate c mai exist multe informaii de cunoscut cu
privire la boala Alzheimer disponibilitatea modelelor animale va
ajuta la gsirea rspunsurilor unor ntrebri cruciale referitoare
la cauza molecular a bolii ce afecteaz aproximativ 4 milioane
de oameni in USA i care cost anual aproximativ 100 milioane
de dolari anual.
.

Vite,Oi,Capre i Porci Transgenici

Dac glanda mamar este folosit ca bioreactor,vacile pentru lapte ce
produc anual aproximativ 10.000 litri de lapte coninnd aproximativ 35g de
proteine/litru sunt candidate profitabile pentru transgenez.
Un protocol pentru microinjecia de ADN pentru transgeneza oarecilor a
fost elaborat pentru vite.Pe scurt,paii eseniali presupun:
1.prelevarea oocitelor de la vaci sacrificate la abator;
2.maturarea n vitro a oocitelor;
3.fertilizarea n vitro cu sperm de taur;
4.centrifugarea oulor
fertilizate pentru o concentraie ,care mpiedic
vizualizarea pronucleilor masculini la microscop;
5.microinjectarea de ADN n pronucleii masculini;
6.dezvoltarea n vitro a embrionilor;
7.implantarea nechirurgical a unui embrion ntr-o mam vitreg prin ci
naturale;
8.screening AND a progeniturii pentru determinarea prezenei genei.
Unul dintre scopurile transgenezei vacilor de lapte este de a schimba
compoziia laptelui.Cantitatea de brnz produs din lapte este direct
proporional cu coninutul de k-casein.Creterea produciei de k-casein cu
supraexpresia unei transgene pentru k-casein este un scenariu realizabil.Pentru
un scop final diferit expresia transgenei pentru lactoz n glanda mamar ar
putea scade coninutul n lactoz a laptelui cu toate c este nevoie de o anumit
cantitate de lactoz pentru secreia de lapte.
Cu toate c transgeneza vitelor pare promitoare,progresia spre a produce
numere mari de animale modificate genetic va fi destul de nceat,deoarece
dureaz 2 ani producerea unui viel dintru-un ovul fertilizat.
n prezent,bolile infecioase ale animalelor domestice sunt controlate prin
vaccinare,medicamente,izolare fizic i monitorizare atent.n cazul animalelor
se pot face ncercri de a crea animale ce motenesc rezistena la boli
virale,bacteriene sau parazitare.De exemplu,rezistena genetic la boli bacteriene
cum ar fi:mastita la vacile de lapte ,dizenteria neonatal la porci i holera ar fi

putea fi utile.Dac cauza rezistenei n fiecare caz este datorat unei singure
gene este posibil creearea unor animale transgenice cu protecie specific
mpotriva unor boli bacterine dup izolarea i caracterizarea acestor gene.

Psri Transgenice

Anumite caracteristici,care sunt proprii reproducerii

aviare,dar i dezvoltrii aviare fac producerea liniilor trangenice
prin microinjectare de ADN n ovule specializate extrem de
ineficient.De exemplu,n timpul fertilizrii la psri ovulul este
penetrat de mai muli spermatozoizi.Prin urmare este imposibil
identificarea pronucleului masculin ce va fuziona cu pronucleul
feminin.De asemenea ADN-ul injectat n citoplasma ovulului
fertilizat nu se integreaz n ADN-ul genomic.n final,chiar dac
microinjectarea nucleului cu ADN ar fi practicabil tehnica ar fi
dificil de implementat deoarece ovulul aviar dup fertilizare
devine acoperit de o membran dur,nconjurat de cantiti
mari de albumin i nchis ntr-o membran intern i extern
extrem de rezistent.Lund n calcul aceste dezavantaje este
posibil injectarea unei transgene n regiunea glbenuului(disc
germinativ),
care este format din pronucleii feminin i masculin.Discul
germinativ este prezent naintea formrii cojii oului.Dup
administrarea ADN-ului discului germinativ fiecare ou este
cultivat n vitro i cnd se formeaz embrionul acesta este
plasat ntr-un ou surogat pentru a produce un pui de gin.n
ciuda dificultilor tehnice anumite linii transgenice ale puilor au
fost stabilite prin aceast metod.
Pn cnd membrana extern a oulor se ntrete
embrionul n curs de dezvoltare are 2 straturi,ce conin ntre
30.000 i 60.000 de celule.n cadrul stadiilor experimentale
inocularea n stadiul de blastoderm cu vectori retrovirali
defectivi de replicare cu gene bacteriene markeri au rezultat n
caiva pui ce aveau aceste secvene ADN n genomul lor.Dei
unele organisme transgenice nu au produs virui folosirea
vectorilor retrovirali pentru a inocula gene ntr-un produs

destinat consumului ca hran a acestuia va ridica ntrebri cu

privire la sigurana acestora cu toate c riscurile sunt reale sau
imaginare.
Vehicolul ideal pentru transgenez ar fi celulele
pluripotente ce pot fi obinute continuu n cultur i pot fi
modificate prin metode standard.Pn n prezent doar celule din
stadiul de blastoderm i celule primordiale germinative ce au o
cretere limitat n vitro i celule stem embrionare de pui n
stadiul X ,ce supravieuiesc 21 de zile n cultur,sunt disponibile
acestui scop.Deci,aceste celule sunt extrase de la puiul donator
transfectate cu constructul transgenic
i implantate n spaiul subgerminal al embrionilor primitori din
ou proaspt clocite.La eclozare o parte din progenituri prezint
o mixtur de celule.
Un organism cu celule diferite provenite de la 2 sau
mai muli indivizi este numit himer.La anumite himere de pui
de gin celulele provenite din celule transfectate devin parte a
liniei esutului germinativ i formeaz celule germinative.Liniile
transgenice pot fi astfel stabilite pornind de la aceste himere
prin mperechere.n general celulele primitoare sunt mult mai
multe dect celulele donatoare ce conin transgena.Totui
proporia celulelor donatorului poate fi crescut cu scopul de a
mrii posibilitatea obinerii liniilor himerice.n ciuda ineficienei
sale aceast procedur a fost adesea folosit pentru a produce
pui de gin transgenici.
Pui de gin transgenici pot fi folosii pentru a
mbuntii genotipurile existente prin dobandirea rezistenei la
virui i bacterii,a unei luri n greutate mai eficiente,a unui
nivel de grsimi i colesterol mai sczut n ou i a unei caliti
mai bune a crnii.
n prezent experimental pui de gin ce sintetizeaz
anticorpi monoclonali,hormoni de cretere,insulin,albumin
seric uman i -interferon au fost creai.

Peti Transgenici

Cum pescriile naturale devin insuficiente producerea

acestei hrane rspandite pe ntreg mapamondul va depinde din
ce n ce mai mult de aquacultur.n acest context,raii de
cretere mari,tolerana la stresul ambiental i rezistena la
boal sunt unele caracteristici ce pot fi create prin
transgenez.Pn n prezent,transgenele au fost introduse prin
microinjecie n ovulele fertilizate a unui numr de specii de
pete incluzandu-le pe cele de:crap,somon,pstrv,pisic de
mare,etc.Pronuclei de pete nu pot fi vizualizai la microscop
dup fertilizare prin urmare ADN-ul transgenic este injectat n
citoplasma ovulelor fertilizate sau a embrionilor ce au ajuns la
un stadiu de dezvoltare de 4 celule.Spre deosebire de
embriogeneza mamiferelor,dezvoltarea oulor de pete este
extern prin urmare nu este nevoie de procedur de
implantare.Dezvoltarea de peti transgenici se realizeaz n
acvarii cu temperatur reglabil.Prezena transgenei este
evident prin PCR sau printr-o scal AND pentru eritrocitele
nucleate.Vor mai fi efectuate mperecheri pentru a obine linii
transgenice pure.

O multitudine dintre studiile iniiale pe peti transgenici au

fost realizate pe examinarea efectelor transgenei pentru

hormonul de cretere.ntr-un studiu o transgen ce era format

din promotorul genei pentru proteina antinghe a petelui
renumit ocean pout,AND-ul pentru hormonal de cretere de la
somon i semnalele poliadenilrii a captului 3 a genei
proteinei antinghe din petele ocean pout au fost injectate
n oule somonului Atlantic.n general somonii transgenici au
fost mai mari i au
crescut mai repede dect petii
netransgenici.Acest sistem de exprimare a fost ales pentru a
mbuntii transcripia hormonului de cretere n apele reci.Un
construct exclusiv din pete a fost asamblat pentru a evita
posibilele incompatibiliti biologice ce ar fi putut aprea la
folosirea de hormon de cretere din surse nepiscicole.
Pentru o specificitate i mai mare un construct pentru
hormonul de cretere format doar din somon a fost formulat i
microinjectat n ou de somon.Dup aprox.1 an somonii
transgenici au fost de aprox.11 ori mai grei decat somonii
normali.Totui la adult nu exist diferene de mrime.
Teoretic,creterea mai rapid a somonilor tineri ar scdea
costul pentru hran i ar diminua poluarea apelor de coast din
vecintatea locului
unde sunt inui petii.Vor exista i
alte posibiliti printre care petii transgenici n aquacultur pot
fi dezvoltai n locaii ngrdite.ns pn atunci eliberarea
accidental a populaiilor de peti transgenici printre populaii
naturale trebuie luate n considerare dac petii sunt crescui n
arcuri transgenice.
n plus pentru a mbuntii trsturi ce folosesc la
producerea petilor pentru hran transgeneza poate fi folosit
pentru a genera un sistem model pentru monitoizarea riscurilor
de sntate i de screening a chimicalelor pentru a determina
dac acestea provoac mutaii.Un numr de sisteme biologice
au fost proiectate pentru detectarea mutaiilor induse la microbi
i roztoare.
Dintre cerinele majore pentru determinarea mutaiilor n
vivo,acestea nu trebuie s afecteze viabilitatea dect dac sunt
urmrite efectele genelor letale,de asemenea mutaiile induse

trebuie s produc un fenotip identificabil,gena intit s poat

fi extras i o nou mutaie s fie uor de determinat prin
secvenializarea ADN-ului.
Un alt tip de mutaie a petilor transgenici la care se
folosete o transgen plasmidic cu o gen sensibil la
antibiotice ca int pentru mutaie a fost dezvoltat.n acest caz
Escherichia coli este transformat cu ADN plasmidic recuperat
de la petii transgenici tratai, creterea incidenei coloniilor
rezistente la antibiotice provenite din monstre tratate n
comparaie cu monstre netratate denot mutagenez.n
general petii transgenici vor oferii o metod eficient din punct
de vedere al costurilor pentru determinarea mutagenilor chimici
n apa de la surse poluante.
Petele Fluorescent

Este primul oraganism transgenic,care a fost acceptat

ca animal de companie.A fost obinut prin ncruciarea unor
gene strine cu cromozomi cunoscutului pete Zebra, nainte de
eclozarea icrei.Genele aparin unor vieti marine care eman
lumin.S-au obinut astfel zebre roii i verzi care n timpul zilei
absorb lumina,iar noaptea devin fosforescente.Au fost create
iniial pentru a fi folosite drept sistem de avertizare n cazul
polurii,dar cu timpul au ptruns pe piaa petilor de acvariu.

oprla Umbuku

Acest organism este singurul din list care nu a fost

proiectat cu scop practic,ci pentru a demostra c este
posibil.oprlei Umbuku i-au crescut aripi n urma modificrii
ADN-ului de ctre geneticienii din Zimbabwe.Se pare c
Umbuku este urmaa speciei Prerodactile,care i-a pierdut
capacitatea de a zbura cu cteva milioane de ani n urm.Pn
acum nu au fost produse dect ase astfel de oprle
zburtoare.

Dolion-ul

Acesta este probabil cel mai elocvent exemplu al

evoluiei tiinei.Dolion-ul este rezultatul combinrii genelor
unui cine cu cele ale unui leu.Este similar tigrului (ncruciarea
dintre leu i tigru), excepie fcnd faptul c cel din urm se
poate produce i n mediul natural,fr a intervenii asupra ADNului.

Pianjenul ferig

Este singurul organism din lista,care a rezultat n

urma combinrii dintre plant i animal.A fost creat pentru a se
studia ce anse de supraviuire are un pianjen ce se poate
camufla fa de unul obinuit.Rezultatele studiului nu au fost
fcute publice nc.

Lemurat-ul

Este un animal de companie pentru oamenii foarte

bogai din China.Aa cum i sugerez i numele este rezultatul
ncrucirii genelor dintre un lemur i o pisic.Este mai agresiv
dect o felin domestic obinuit,dar nu mai mult dect un
cine Chihuahua.Numele tiinific al acestei vieti este Prolos
Fira.